JP2012509075A - サルモネラマーカーワクチン - Google Patents
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Abstract
Description
マーカーワクチンは、ポジティブマーカーまたはネガティブマーカーとしてのいずれかで調製できる。ポジティブマーカーワクチンは、ワクチン化動物では特異的な抗体を誘導するが感染動物では誘導しないさらなる抗原を含む。後の感染を有するワクチン化動物を単なるワクチン化動物から識別できないため、ポジティブマーカーワクチンは明らかに不利である。
(i)化学的なミュータジェネシス及び/または遺伝的な操作によって調製されたワクチン株;
(ii)少なくとも一つの同種サルモネラ抗原、及び/または少なくとも一つの異種抗原、たとえば異種病原体の抗原を任意に組換え発現する組換えワクチン株;または
(iii)DNAを送達するための組換え担体株。
National Center for Biotechnology Information(NCBI)のインターネットポータルを介したデータベース「nr」を使用するBLAST2.2.18によって各種のSalmonella enterica enterica血清型内のタンパク質PhoNの相同性を評価した。Salmonella Enteritidis株CLAB_SE360のタンパク質PhoNのアミノ酸配列を、クエリー配列(配列番号1)として使用した。CLAB_SE360は、ワクチン株Salmovac SEの変異体である(Springer等, 2000, Berl. Munch. Tierarztl, Wschr. 113, 246-252)。各種のPhoNタンパク質の一次構造内の非同一アミノ酸が、着色によって強調されている。前記データは、各種のサルモネラ血清型内でPhoNタンパク質の一次構造が>96%で同一性を有していることを明らかにする。
T. Shigaki及びK.D. Hirschi (Anal. Biochem. 2001, 298:118-120)またはK.A. Datsenko及びB.L. Wanner(PNAS 2000, 97:6640-6645)によって記載されたような遺伝学的操作による、ΔphoNサルモネラミュータントの調製に関連するphoN遺伝子と隣接領域を含む各種のSalmonella enterica enterica血清型のphoNゲノム領域が記載される。
図2A:S. Enteritidis str. P125109(RefSeq NC011294.1から引用)
S. Dublin str. CT_02021853(RefSeq NC011205.1から引用)
S. Gallinarum str. 287/91(RefSeq NC011274.1から引用)
図2B:S. Typhimurium str. LT2(RefSeq NC003197.1から引用)
図2C:S. Choleraesuis str. SC-B67(RefSeq NC006905.1から引用)
本実施例では、phoN遺伝子が、生存減弱化Salmonella Enteritidisワクチン株Salmovac SEの変異体から元々由来したSalmonella Enteritidis株のゲノムから遺伝学的操作により除去された。驚くべきことにより詳細な分析により、ΔphoNSalmonella Enteritidisワクチン株変異体の集団において差異が示された。いくつかの限られたΔphoNワクチン株変異体は、先祖株及び他のΔphoNワクチン株変異体の少なくとも30%である自動性活性を有する。更に、この減少した自動性のΔphoNワクチン株変異体は、バイオフィルムを形成する能力も減少しており、このことは更に先祖株及び他のΔphoN変異体とは異なる。
PhoN−DIVA抗体試験のための組換えPhoNタンパク質の調製
PhoN−DIVA抗体試験は、組換えPhoNに基づいて好ましくは調製される。精製組換えPhoNでの以前のイムノブロット分析により、生存減弱化サルモネラphoN−DIVAワクチン株でワクチン化された動物は、この全体タンパク質に結合する抗体を生成しないことが明らかである。PhoNタンパク質の複雑性と、体液性免疫応答の広範囲の反応性にも関わらず、phoN−DIVAサルモネラワクチン株で免疫化された動物の血清内で、交差反応する抗体が存在しないことは驚くべきことであった。
チキンが生存減弱化サルモネラphoN−DIVAワクチン株でワクチン化された際はいつでも、PhoN−DIVA抗体試験を適用する。本実施例では、血清学的PhoN−DIVA試験システムは、組換えタンパク質PhoN、例えばPhoNFP101またはPhoNFP201、及び別のサルモネラ特異的抗原を含む。好ましくは、サルモネラ特異的抗原は、例えばIdexx Laboratories Inc. (Flockchek)、またはLabor Diagnostik GmbH Leipzig (Flocktype Salmonella)、またはBiochek及び他の会社によって提供される、チキンにおけるサルモネラ特異的抗体を検出する市販の試験キットによって提供される。この試験セットアップは、ワクチン化の後にサルモネラ特異的免疫応答が出現するかどうかを明らかにする。更に、野生型サルモネラが関与していないことを明らかにし、それはPhoN−DIVA抗体試験における組換えタンパク質PhoNでネガティブな反応によって指摘される。
Claims (12)
- Salmonella enterica ssp. enterica血清型Enteritidis株DSM21972またはそれから由来するいずれかの株。
- 医薬、例えば獣医薬における使用のための、請求項1に記載の株。
- ワクチンとしての使用のための、請求項2に記載の株。
- 生ワクチンとしての使用のための、請求項3に記載の株。
- サルモネラ感染に対して保護するためのワクチンとしての使用のための、請求項3または4に記載の株。
- 哺乳類、例えばブタ、または鳥類、例えばチキンのような家禽における使用のための、請求項1から5のいずれか一項に記載の株。
- 血清学的マーカー抗原としての、サルモネラphoNポリペプチドまたは/及びその免疫原性部分を含むポリペプチドの使用であって、前記phoNポリペプチドは、配列番号1の配列、または配列番号1に少なくとも70%同一である配列を含み、前記免疫原性部分は、好ましくは少なくとも10、より好ましくは少なくとも20、更により好ましくは少なくとも30アミノ酸の長さを有する、使用。
- 請求項1から6のいずれか一項に記載の株でのワクチン化後の、ワクチン化動物からの感染動物の識別(DIVA)のための、請求項7に記載の使用。
- phoN抗原が、特に大腸菌のような組換え宿主細胞における、phoN核酸の組換え発現によって調製される、請求項7または8に記載の使用。
- phoN抗原が、配列番号1の全長phoNポリペプチドを含む、請求項7から9のいずれか一項に記載の使用。
- 少なくとも一つの組換えサルモネラphoN抗原、またはその免疫原性部分、及び任意に更なる試験成分を含む、サルモネラphoN抗原に対して向けられた抗体の検出のための血清学的試験システムであって、前記phoN抗原が、配列番号1の配列、または配列番号1に少なくとも70%同一である配列を含む、システム。
- 組換えサルモネラphoN抗原またはその免疫原性断片の製造のための、サルモネラphoN核酸の使用であって、前記phoN抗原が、配列番号1の配列、または配列番号1に少なくとも70%同一である配列を含む、使用。
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