JP2012255697A - 電子顕微鏡観察用染色剤および電子顕微鏡観察用試料の染色方法 - Google Patents
電子顕微鏡観察用染色剤および電子顕微鏡観察用試料の染色方法 Download PDFInfo
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Abstract
【解決手段】電子顕微鏡観察用染色剤は、シスプラチンを含有する。
【選択図】図1
Description
本発明に係る電子顕微鏡観察用染色剤に試料を接触させる工程を含む。
前記電子顕微鏡観察用染色剤に接触した試料を、鉛化合物を含有する染色液に接触させる工程をさらに含んでいてもよい。
1.1. 電子顕微鏡観察用染色剤
まず、第1実施形態に係る電子顕微鏡観察用染色剤について説明する。
次に、第1実施形態に係る電子顕微鏡観察用試料の作製方法について説明する。本実施形態に係る電子顕微鏡観察用試料の作製方法は、本発明に係る電子顕微鏡観察用試料の染色方法を含む。以下、本実施形態に係る電子顕微鏡観察用試料の作製方法の一例として、本実施形態に係る電子顕微鏡観察用試料の作製方法を、生体試料に適用した場合について説明する。
以下、実施例を挙げて本実施形態をさらに詳細に説明するが、本発明はこれによって制限されるものではない。
本実施例では、シスプラチン水溶液で染色された腎臓糸球体の(透過)電子顕微鏡観察用試料を作製した。具体的には、まず、灌流固定した腎臓糸球体を切り出し、カコジル酸緩衝2%パラホルムアルデヒドと2%グルタールアルデヒドとの混合液に浸漬し、前固定した。次に、前固定された腎臓糸球体を、カコジル酸緩衝液で洗浄し、2%四酸化オスミウムで後固定した。そして、上昇エタノール系列で脱水し、エポキシ樹脂に包埋した。
このようにして作製された電子顕微鏡観察用試料を、透過電子顕微鏡で観察した。
2.1. 電子顕微鏡観察用試料の作製方法
次に、第2実施形態に係る電子顕微鏡観察用試料の作製方法について説明する。
以下、実施例を挙げて本実施形態をさらに詳細に説明するが、本発明はこれによって制限されるものではない。
本実施例では、シスプラチン水溶液とクエン酸鉛染色液とで二重染色された腎臓糸球体の電子顕微鏡観察用試料を作製した。具体的には、上述した実施例1と同様の工程で、腎臓糸球体をシスプラチン水溶液で染色し、このシスプラチン水溶液で染色された腎臓糸球体をレイノルドのクエン酸鉛染色液に室温で10分間浸漬し、その後、純水で洗浄した。
このようにして作製された電子顕微鏡観察用試料を、透過電子顕微鏡で観察した。図4は、シスプラチン水溶液とクエン酸鉛染色液とで二重染色された腎臓糸球体の透過電子顕微鏡像である。図5は、白金ブルーとクエン酸鉛染色液とで二重染色された腎臓糸球体の透過電子顕微鏡像である。図6は、酢酸ウラニルとクエン酸鉛染色液とで二重染色された腎臓糸球体の透過電子顕微鏡像である。
3.1. 電子顕微鏡観察用染色剤
次に、第3実施形態に係る電子顕微鏡観察用染色剤について説明する。
次に、第3実施形態に係る電子顕微鏡観察用試料の作製方法について説明する。第3実施形態に係る電子顕微鏡観察用試料の作製方法は、上述した第1実施形態に係る電子顕微鏡観察用試料の作製方法と、シスプラチン水溶液にかえてトランスプラチン水溶液を用いる点を除いて、同じである。そのため、その詳細な説明を省略する。
以下、実施例を挙げて本実施形態をさらに詳細に説明するが、本発明はこれによって制限されるものではない。
本実施例では、トランスプラチン水溶液で染色された腎臓糸球体の電子顕微鏡観察用試料を作製した。具体的には、シスプラチン水溶液にかえてトランスプラチン水溶液を用いる点を除いて、上述した実施例1に記載した試料作製工程と同様の工程で作製した。なお、トランスプラチン水溶液は、トランスプラチン(SIGMA社製)を、蒸留水で溶解させることによって作製した。また、トランスプラチン水溶液の濃度は、0.02質量%(飽和水溶液濃度)とした。
このようにして作製された電子顕微鏡観察用試料を、透過電子顕微鏡で観察した。図7は、トランスプラチン水溶液で染色された腎臓糸球体の透過電子顕微鏡像である。
4.1. 電子顕微鏡観察用試料の作製方法
次に、第4実施形態に係る電子顕微鏡観察用試料の作製方法について説明する。
以下、実施例を挙げて本実施形態をさらに詳細に説明するが、本発明はこれによって制限されるものではない。
本実施例では、トランスプラチン水溶液とクエン酸鉛染色液とで二重染色された腎臓糸球体の電子顕微鏡観察用試料を作製した。具体的には、シスプラチン水溶液にかえてトランスプラチン水溶液を用いる点を除いて、上述した実施例2に記載した試料作製工程と同様の工程で作製した。
このようにして作製された電子顕微鏡観察用試料を、透過電子顕微鏡で観察した。図8は、トランスプラチン水溶液とクエン酸鉛染色液とで二重染色された腎臓糸球体の透過電子顕微鏡像である。
Claims (4)
- シスプラチンを含有する、電子顕微鏡観察用染色剤。
- トランスプラチンを含有する、電子顕微鏡観察用染色剤。
- 請求項1または2に記載の電子顕微鏡観察用染色剤に試料を接触させる工程を含む、電子顕微鏡観察用試料の染色方法。
- 請求項3において、
前記電子顕微鏡観察用染色剤に接触した試料を、鉛化合物を含有する染色液に接触させる工程をさらに含む、電子顕微鏡観察用試料の染色方法。
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