JP2012228256A5 - - Google Patents

Claims (47)

1. 目的配列に対応する２本鎖ＲＮＡの生成のためのＤＮＡ構築物の使用であって、
   ＤＮＡ構築物が、
   ａ）第一のプロモータと、
   ｂ）第二のプロモータと、
   第一のプロモータ及び第二のプロモータは互いに対立して配位しており、第一のプロモータの３´末端下流及び第二のプロモータの３´末端下流に位置する、インタープロモータ領域を定義し、
   ｃ）インタープロモータ領域に位置する、少なくとも１つのクローニング部位と、
   ｄ）少なくとも１つのクローニング部位に挿入された、目的配列に対応するヌクレオチド配列と、
   ｅ）第一のプロモータの３´末端側から見て、第一のプロモータの下流及び目的配列に対応するヌクレオチド配列の下流に位置する、第一の転写ターミネータと
   を含み、
   第一の転写ターミネータは、第一のプロモータに操作的に連結されている、前記使用。
2. ＤＮＡ構築物が、
   ｆ）第二のプロモータの３´末端側から見て、第二のプロモータの下流及び目的配列に対応するヌクレオチド配列の下流に位置する、第二の転写ターミネータを更に含み、
   前記第二の転写ターミネータが第二のプロモータに操作的に連結されている、請求項１に記載の使用。
3. 第一の転写ターミネータが、インタープロモータ領域に位置している、請求項１又は２に記載の使用。
4. 第一の転写ターミネータが、第一のプロモータの３´末端側から見て第一のプロモータの下流、目的配列に対応するヌクレオチド配列の下流、及び第二のプロモータの５´末端下流に位置している、請求項１又は２に記載の使用。
5. 第二の転写ターミネータ−が、インタープロモータ領域に位置している、請求項２〜４のいずれか一項に記載の使用。
6. 第二の転写ターミネータが、第二のプロモータの３´末端側から見て第二のプロモータの下流、目的配列に対応するヌクレオチド配列の下流、及び第一のプロモータの５´末端下流に位置している、請求項２〜４のいずれか一項に記載の使用。
7. 第一の転写ターミネータの３´末端が、第二のプロモータの５´末端から、２０００以下のヌクレオチド隔てられた、請求項４〜６のいずれか一項に記載の使用。
8. 第一の転写ターミネータの３´末端が、第二のプロモータの５´末端から、１０００以下のヌクレオチド隔てられた、請求項７に記載の使用。
9. 第一の転写ターミネータの３´末端が、第二のプロモータの５´末端から、５００以下のヌクレオチド隔てられた、請求項８に記載の使用。
10. 第一の転写ターミネータの３´末端が、第二のプロモータの５´末端から、２００以下のヌクレオチド隔てられた、請求項９に記載の使用。
11. 第一の転写ターミネータの３´末端が、第二のプロモータの５´末端から、１００以下のヌクレオチド隔てられた、請求項１０に記載の使用。
12. 第一の転写ターミネータの３´末端が、第二のプロモータの５´末端から、５０以下のヌクレオチド隔てられた、請求項１１に記載の使用。
13. 第一の転写ターミネータの３´末端が、第二のプロモータの５´末端から、２０以下のヌクレオチド隔てられた、請求項１２に記載の使用。
14. 第一の転写ターミネータの３´末端が、第二のプロモータの５´末端から、１０以下のヌクレオチド隔てられた、請求項１３に記載の使用。
15. 第一の転写ターミネータの３´末端が、第二のプロモータの５´末端から、６以下のヌクレオチド隔てられた、請求項７に記載の使用。
16. 第二の転写ターミネータの３´末端が、第一のプロモータの５´末端から、２０００以下のヌクレオチド隔てられた、請求項６又は７に記載の使用。
17. 第二の転写ターミネータの３´末端が、第一のプロモータの５´末端から、１０００以下のヌクレオチド隔てられた、請求項１６に記載の使用。
18. 第二の転写ターミネータの３´末端が、第一のプロモータの５´末端から、５００以下のヌクレオチド隔てられた、請求項１７に記載の使用。
19. 第二の転写ターミネータの３´末端が、第一のプロモータの５´末端から、２００以下のヌクレオチド隔てられた、請求項１８に記載の使用。
20. 第二の転写ターミネータの３´末端が、第一のプロモータの５´末端から、１００以下のヌクレオチド隔てられた、請求項１９に記載の使用。
21. 第二の転写ターミネータの３´末端が、第一のプロモータの５´末端から、５０以下のヌクレオチド隔てられた、請求項２０に記載の使用。
22. 第二の転写ターミネータの３´末端が、第一のプロモータの５´末端から、２０以下のヌクレオチド隔てられた、請求項２１に記載の使用。
23. 第二の転写ターミネータの３´末端が、第一のプロモータの５´末端から、１０以下のヌクレオチド隔てられた、請求項２２に記載の使用。
24. 第二の転写ターミネータの３´末端が、第一のプロモータの５´末端から、６以下のヌクレオチド隔てられた、請求項２３に記載の使用。
25. 第一のプロモータと第二のプロモータが同一である、請求項１〜２４のいずれか一項に記載の使用。
26. 第一のプロモータと第二のプロモータが同一でない、請求項１〜７のいずれか一項に記載の使用。
27. 第一のプロモータと第二のプロモータが、Ｔ７プロモータ、Ｔ３プロモータ、ＳＰ６プロモータから独立して選択される、請求項２５又は２６に記載の使用。
28. クローニング部位が、少なくとも１つの制限部位を含む、請求項１〜２７のいずれか一項に記載の使用。
29. クローニング部位が、スタッファーＤＮＡ配列の側面に位置している少なくとも２つの制限部位を含む、請求項２８に記載の使用。
30. 少なくとも２つの制限部位が同一である、請求項２９に記載の使用。
31. 少なくとも１つの制限部位又は少なくとも２つの制限部位が、ＢｓｔＸＩ部位である、請求項２８〜３０のいずれか一項に記載の使用。
32. 制限部位がＸｃｍＩ部位である、請求項２８〜３０のいずれか一項に記載の使用。
33. クローニング部位が、ａｔｔＲ１及びａｔｔＲ２組換え配列を含む、請求項１〜３２のいずれか一項に記載の使用。
34. クローニング部位が、ｃｃｄＢヌクレオチド配列を更に含む、請求項３３に記載の使用。
35. ｃｃｄＢヌクレオチド配列が、少なくとも１つのユニークな制限部位を更に含む、請求項３４に記載の使用。
36. 少なくとも１つのユニークな制限部位が、平滑末端制限部位である、請求項３５に記載の使用。
37. 平滑末端制限部位がＳｒｆＩ部位である、請求項３６に記載の使用。
38. ＤＮＡ構築物がプラスミド又はベクターの形態にある、請求項１〜３７のいずれか一項に記載の使用。
39. 少なくとも１つのクローニング部位に挿入された、目的配列に対応するヌクレオチド配列を有しないプラスミド又はベクターが、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２又は配列番号１３に例示されたヌクレオチド配列を有する、請求項３８に記載の使用。
40. ２本鎖ＲＮＡの生成のためのＤＮＡ構築物が菌株に宿している請求項１〜３９のいずれか一項に記載の使用。
41. 前記菌株が大腸菌株である、請求項４０に記載の使用。
42. 菌株が線虫に与えられる、請求項４０又は４１に記載の使用。
43. 菌株がＣ． ｅｌｅｇａｎｓに与えられる、請求項４２に記載の使用。
44. 菌株がＣ． ｅｌｅｇａｎｓ ｎｕｃ−ｌ変異体に与えられる、請求項４３に記載の使用。
45. 生成された２本鎖ＲＮＡがＲＮＡ阻害に使用される、請求項１〜４４のいずれか一項に記載の使用。
46. 生成された２本鎖ＲＮＡが、線虫におけるＲＮＡ阻害に使用される、請求項４５に記載の使用。
47. 生成された２本鎖ＲＮＡが、Ｃ． ｅｌｅｇａｎｓにおけるＲＮＡ阻害に使用される、請求項４６に記載の使用。