JP2012183067A - Wt−1とgata−1のエピトープを用いた免疫治療方法 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】完全なヒトWT−1ポリペプチドではないという条件で、アミノ酸配列RMFPNAPYLを含むペプチドまたはその部分または異型、完全なヒトWT−1ポリペプチドではないという条件で、アミノ酸配列CMTWNQMNLを含むペプチドまたはその部分または異型、または、完全なヒトgata−1ポリペプチドではないという条件で、アミノ酸配列HLMPFPGPLLを含むペプチドまたはその部分または異型、並びに、これらのペプチドをコードするポリヌクレオチド。これらのペプチドおよびポリヌクレオチドは、ガンのワクチンとして使用できる。
【選択図】なし
Description
リフルオロ酢酸は、真空で蒸発させることによって除去され、その後のジエチルエーテルを用いた摩砕が粗製ペプチドを与える。存在する全てのスカベンジャーを単純な抽出方法で除去する。水相の凍結乾燥により、スカベンジャーを含まない粗製ペプチドを与える。ペプチド合成のための試薬は、一般的にCalbiochem-Novabiochem(UK)Ltd,Nottingham NG7 2QJ, UKから入手できる。精製は、ゲルろ過クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィーおよび、(主に)逆相高速液体クロマトグラフィーのような技術のいずれか一つまたは組み合わせにより行うことができる。ペプチドの分析は、薄相クロマトグラフィー、逆相高速液体クロマトグラフィー、酸加水分解後のアミノ酸分析および高速原子衝撃(FAB)質量分析を用いて行うことができる。
たは核酸によってコードされるペプチドは、例えば、CD4T細胞を刺激する破傷風トキソイドのエピトープとの融合タンパクであってもよい。
前記刺激細胞の表面に発現された実質的に全てのMHCクラスI分子が、同じタイプであることが特に好ましい。
CD8+T細胞の集団は、腫瘍患者の養子免疫療法に使用できる。患者は、108〜1011(好ましくは109−1010)の間の自己の、形質導入されたCTLで治療されうる。
特に、本発明の方法によって治療される患者が、HLA−A0201ハプロタイプを有することが好ましい。かくして、好ましい実施態様では、患者のHLAハプロタイプが、治療前に調べられる。HLAハプロタイプは、適切な方法を用いて行われ、かかる方法は当該技術分野において周知である。
WT−1タンパクにおいて、WT−1発現腫瘍細胞において発現された二つのCTL認識ペプチドエピトープが同定された:WT126−34:RMFPNAPYLWT235−43:CMTWNQMNL
WT−1およびgata−1のCTL認識ペプチドエピトープが同定された。これらのエピトープは、これらのタンパクを異常に発現する腫瘍細胞に提示される。WT−1およびgata−1の生理学的発現は、比較的少数の正常細胞に制限されている。かくして、自己のCTLがこれらのタンパクに対して制限された寛容を示すことができ、かつ、同定されたCTLエピトープが、異常なWT−1およびgata−1発現を有する腫瘍に対してワクチン接種、および別の免疫治療法に使用することができる。
WT1ペプチドCMTWNQMNLの精製された調製物と結合し、かつ、養子免疫療法として再注入された、再発性乳ガン患者由来のex vivo拡大自己樹状細胞を用いる実現性は、以下のように確立される。
(1)転移性再発、標準治療後、養子免疫療法;
(2)転移性再発、養子免疫療法後、標準治療。
細胞毒性化学療法またはホルモン治療を用いて以前に処置。
評価可能な疾患(UICC基準)。
>12週であると予想される生存。
自己血液献血の基準を満たす(HgB>120g/Iを含む)。
告知に基づく同意。
年齢が18歳〜70歳。
CNS転移。
以前または共同性転移。
告知に基づく同意が得られない。
同意拒否。
年齢が<18歳または>70歳。
合成ペプチド:ヒトウィルムス主要抗原1P126から由来するペプチド(RMFPNAPYL)及びヒトパピローマウイルスタイプ16のE7タンパク質から由来するコントロールHLA−A0201結合ペプチドを、フルオレニルメトキシカルボニル化学を使用して、Imperial College Medical Schoolの中央ペプチド合成研究室によって合成した。ペプチドの質をHPLC分析によって評価し、予想される分子量をマトリックスアシストレーザー放出マススペクトロメトリーを使用して観察した。ペプチドをPBS(pH7.4)に溶解し、2mMの濃度を得て−20℃で貯蔵した。
Claims (42)
- ペプチドが完全なヒトWT−1ポリペプチドではないという条件で、アミノ酸配列RMFPNAPYLを含むペプチドまたはその部分または異型。
- ペプチドが完全なヒトWT−1ポリペプチドではないという条件で、アミノ酸配列CMTWNQMNLを含むペプチドまたはその部分または異型。
- ペプチドが完全なヒトgata−1ポリペプチドではないという条件で、アミノ酸配列HLMPFPGPLLを含むペプチドまたはその部分または異型。
- ペプチドがHLA−A0201に結合できる、請求項1ないし3のいずれか一項に記載のペプチド。
- HLA−A0201に結合した際に、ペプチド結合HLA−A0201が、前記アミノ酸配列を含むポリペプチドを異常に発現する細胞を認識する細胞傷害性Tリンパ球(CTL)の産生を導くことができる、請求項4記載のペプチド。
- ペプチドが非ペプチド結合を含む、請求項1ないし5のいずれか一項に記載のペプチド。
- アミノ酸配列RMFPNAPYLからなるペプチド。
- アミノ酸配列CMTWNQMNLからなるペプチド。
- アミノ酸配列HLMPFPGPLLからなるペプチド。
- 請求項1ないし5および7ないし9のいずれか一項に記載のペプチドをコードするポリヌクレオチド。
- DNAである請求項10記載のポリヌクレオチド。
- 請求項1ないし5および7ないし9のいずれか一項に記載のポリペプチドを発現することができる発現ベクター。
- 請求項10または11記載のポリヌクレオチドまたは請求項12記載の発現ベクターを含む宿主細胞。
- 請求項1ないし5および7ないし9のいずれか一項に記載のペプチドを産生する方法であって、請求項13記載の宿主細胞を培養し、かつ、宿主細胞またはその培養培地からペプチドを得ることを含む方法。
- 請求項1ないし9のいずれか一項に記載のペプチドおよび薬学的に許容できるキャリアーを含む薬学的組成物。
- 請求項10または11に記載のポリヌクレオチドまたは請求項12に記載の発現ベクター、および薬学的に許容できるキャリアーを含む薬学的組成物。
- 薬剤に用いる請求項1ないし9のいずれか一項に記載のペプチド。
- 薬剤に用いる請求項10または11に記載のポリヌクレオチドまたは請求項12に記載の発現ベクター。
- 請求項1ないし9のいずれか一項に記載のペプチドまたは請求項10または11に記載のポリヌクレオチドまたは請求項12に記載の発現ベクターを含むガンワクチン。
- 請求項1ないし3のいずれか一項に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチドを異常に発現するターゲット細胞を患者において殺傷する方法であって、請求項1ないし9のいずれか一項に記載のペプチドまたは請求項10または11に記載のポリヌクレオチドまたは請求項12に記載の発現ベクターの有効量を患者に投与することを含み、前記ペプチドまたはポリヌクレオチドまたは発現ベクターの量は、患者において抗ターゲット細胞免疫応答を誘発するのに十分な量とされる方法。
- 請求項1ないし9のいずれか一項に記載のペプチドまたは請求項10または11に記載のポリヌクレオチドまたは請求項12に記載の発現ベクターの、請求項1ないし3のいずれか一項に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチドを異常に発現するターゲット細胞を患者において殺傷するための薬剤の製造における使用。
- in vitroにおいて活性化細胞傷害性Tリンパ球(CTL)を産生する方法であって、抗原特異的に前記CTLを活性するのに十分な時間、適切な抗原提示細胞の表面に発現された抗原結合ヒトクラスI MHC分子とCTLとをin vitroで接触させることを含み、前記抗原が請求項1ないし9のいずれか一項に記載のペプチドである方法。
- CTLと抗原提示細胞が、クラスI MHC分子に関して同種異系(アロ制限)である、請求項22記載の方法。
- CTLと抗原提示細胞が、クラスI MHC分子に関して同系(自己制限)である、請求項22記載の方法。
- 抗原提示細胞と十分量の抗原とを接触させることにより適切な抗原提示細胞の表面に発現されたクラスI MHC分子に抗原が結合される、請求項22ないし24のいずれか一項に記載の方法であって、接触前には、抗原提示細胞のクラスI MHC分子が実質的に占有されてなく、かつ、接触後には、クラスI MHC分子が実質的に十分に占有される方法。
- 抗原提示細胞が、請求項12記載の発現ベクターを含む、請求項22ないし24のいずれか一項に記載の方法。
- クラスI MHC分子がHLA−A0201である、請求項22ないし26のいずれか一項に記載の方法。
- 請求項22ないし27のいずれか一項に記載の方法により得られた活性化細胞傷害性Tリンパ球(CTL)。
- 請求項1ないし3のいずれか一項に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチドを異常に発現する細胞を選択的に認識する活性化細胞傷害性Tリンパ球(CTL)。
- 請求項1ないし3のいずれか一項に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチドを異常に発現する細胞を認識するT細胞レセプター(TCR)であって、請求項28または29記載の細胞傷害性Tリンパ球(CTL)から得られるか、あるいは、TCRに機能的に等価な分子であるTCR。
- 請求項30に記載されたT細胞レセプター(TCR)をコードするポリヌクレオチド。
- 請求項30に記載されたT細胞レセプター(TCR)を発現することができる発現ベクター。
- 請求項1ないし3のいずれか一項に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチドを異常に発現するターゲット細胞を患者において殺傷する方法であって、患者に、請求項28または29に記載された細胞傷害性Tリンパ球(CTL)の有効数を投与することを含む方法。
- 請求項1ないし3のいずれか一項に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチドを異常に発現するターゲット細胞を患者において殺傷する方法であって、(1)患者から細胞傷害性Tリンパ球(CTL)を得る工程;(2)請求項30に記載した、T細胞レセプター(TCR)、または機能的に等価な分子をコードするポリヌクレオチドを、前記細胞に導入する工程;および(3)患者において工程(2)で産生された細胞を導入する工程を含む方法。
- 請求項1ないし3のいずれか一項に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチドを異常に発現するターゲット細胞を患者において殺傷する方法であって、(1)患者から樹状細胞を得る工程;(2)前記樹状細胞を、請求項1ないし9のいずれか一項に記載されたペプチドまたは請求項10ないし12記載のポリヌクレオチドまたは発現ベクターとex vivoで接触させる工程;および(3)このように処理された樹状細胞を患者に再導入する工程を含む方法。
- ターゲット細胞がガン細胞である請求項20または33ないし35のいずれか一項に記載の、患者におけるターゲット細胞を殺す方法。
- ガンが、アミノ酸配列RMFPNAPYLおよびCMTWNQMNLを含むWT1ポリペプチドを異常に発現する、白血病、乳ガン、メラノーマおよび卵巣ガンのいずれか一つである請求項36記載の方法。
- ガンが、アミノ酸配列HLMPFPGPLLを含むgata−1ポリペプチドを異常に発現する白血病である、請求項36記載の方法。
- 請求項1ないし3のいずれか一項に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチドを異常に発現するターゲット細胞を患者において殺傷するための薬剤の製造における、請求項28または29に記載の細胞傷害性Tリンパ球の使用。
- 請求項1ないし3のいずれか一項に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチドを異常に発現するターゲット細胞を患者において殺傷するための薬剤の製造における、請求項34の工程(2)で産生される細胞傷害性Tリンパ球の使用。
- 請求項1ないし3のいずれか一項に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチドを異常に発現するターゲット細胞を患者において殺傷するための薬剤の製造における、請求項35の工程(2)において産生される樹状細胞の使用。
- ここに記載されるガンを治療するための新規方法。
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