JP2012122868A - 抗原抗体複合体を分離する方法 - Google Patents
抗原抗体複合体を分離する方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2012122868A JP2012122868A JP2010274292A JP2010274292A JP2012122868A JP 2012122868 A JP2012122868 A JP 2012122868A JP 2010274292 A JP2010274292 A JP 2010274292A JP 2010274292 A JP2010274292 A JP 2010274292A JP 2012122868 A JP2012122868 A JP 2012122868A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- antigen
- protein
- antibody complex
- antibody
- mutant gene
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Images
Abstract
【解決手段】以下の配列番号:5の一次構造を有する抗原抗体複合体認識蛋白質を用いて抗原抗体複合体を分離する。配列番号5:AQHEVTQQNAFYQVLNMPNLNADQRNAFIQSLKDDPSQSANVLGEAQKLNDSQAPK
【選択図】図9
Description
前記溶液により前記抗体を溶出させ前記抗原と反応させる工程Yと、前記溶液が流れる下流に位置する前記基板部位bにおいて前記抗原抗体複合体と前記抗原抗体複合体認識蛋白質を反応させる工程Zから構成され、抗体単体と抗原抗体複合体を分離する。
テンプレート遺伝子としてプロテインAのEドメインを使用した。
蛋白質発現を行う遺伝子の選択
上記PCRにより獲得したプロテインAのEドメイン変異遺伝子群が導入されたpBluescript II SK (+)ベクター群から、蛋白質発現する遺伝子を選択するために、遺伝子配列を解読した。
SOC培地を含む形質導入後の大腸菌株DH10bを塗布したLBアガー培地を、37度下にて一晩インキュベートした。
T7 original:5’−taatacgactcactataggg−3’(配列番号:1)
および、
T3:5’−aattaaccctcactaaaggg−3’(配列番号:2)
を用いた。
抗原抗体複合体結合蛋白質の作製
上記シークエンスにより選択したプロテインAのEドメイン変異遺伝子クローン#24を大腸菌蛋白質発現に用いられるpET15bベクター(ノヴァジェン社)へ導入した。
5’−tatGGCCCAGCCGGCCtttttttttGCGGCCGCaagcttcaaccgtaacgaatgctaag−3’
および、
5’−gatccttagcattcgttacggttgaagcttGCGGCCGCaaaaaaaaaGGCCGGCTGGGCCa−3’
を用いた。
SPR測定法による測定感度の評価
得られたプロテインAのEドメイン変異遺伝子クローン#24の蛋白質と抗原抗体複合体との相互作用を評価するために、SPR測定を行った。
抗原抗体複合体を分離する方法
抗原抗体複合体を分離する方法について、図6から図9を用いて説明する。
103 lacZ
104 f1(+) origin
105 Amp
106 pUC ori
201 制限酵素サイトEcoRV
202 プロテインAのEドメイン変異遺伝子群
401 抗体と抗原抗体複合体認識蛋白質の相互作用を示すセンサーグラム
402 抗原抗体複合体と抗原抗体複合体認識蛋白質の相互作用を示すセンサーグラム
501 ネイティブのプロテインAのEドメインと抗原抗体複合体の結合量を示すグラフ
502 プロテインAのEドメイン変異体遺伝子クローン#24の蛋白質と抗原抗体複合体の結合量を示すグラフ
601 基板
602 抗原
603 抗体
604 抗原抗体複合体認識蛋白質
607 流路
801 抗原抗体複合体
Claims (1)
- 複数のエピトープを有する抗原と、
前記抗原を認識するマウス由来の抗体と、
前記抗原と前記抗体が反応することにより形成される抗原抗体複合体と結合する抗原抗体複合体認識蛋白質と、
前記抗体が液体により溶出するよう塗布された基板部位aと前記抗原抗体複合体認識蛋白質が固定化された基板部位bを含む基板と、
前記基板部位aおよび前記基板部位bを繋ぐように覆う流路を有し、
前記抗原を含む溶液を前記基板部位aへ流し込む工程Xと、
前記溶液により前記抗体を溶出させ前記抗原と反応させる工程Yと、
前記溶液が流れる下流に位置する前記基板部位bにおいて前記抗原抗体複合体と前記抗原抗体複合体認識蛋白質を反応させる工程Zから構成され、
前記抗原抗体複合体認識蛋白質の配列が以下の配列番号:5の一次構造を有する蛋白質であることを特徴とする抗原抗体複合体を分離する方法。
配列番号5:AQHEVTQQNAFYQVLNMPNLNADQRNAFIQSLKDDPSQSANVLGEAQKLNDSQAPK
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2010274292A JP5467365B2 (ja) | 2010-12-09 | 2010-12-09 | 抗原抗体複合体を分離する方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2010274292A JP5467365B2 (ja) | 2010-12-09 | 2010-12-09 | 抗原抗体複合体を分離する方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2012122868A true JP2012122868A (ja) | 2012-06-28 |
JP5467365B2 JP5467365B2 (ja) | 2014-04-09 |
Family
ID=46504449
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2010274292A Active JP5467365B2 (ja) | 2010-12-09 | 2010-12-09 | 抗原抗体複合体を分離する方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP5467365B2 (ja) |
Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS6022662A (ja) * | 1974-05-20 | 1985-02-05 | テクニコン、インストルメンツ、コ−ポレ−シヨン | 抗体、抗原または抗体:抗原複合体分析用試薬 |
JPS6460388A (en) * | 1987-05-08 | 1989-03-07 | Sekisui Chemical Co Ltd | Gene coding linked material of protein a-like substance fc bond region, recombinant plasmid containing said gene and transformant produced by using said recombinant plasmid |
JP2002014098A (ja) * | 2000-06-28 | 2002-01-18 | Fujirebio Inc | 免疫測定方法及びそのためのキット |
WO2004061452A1 (ja) * | 2003-01-07 | 2004-07-22 | Medical And Biological Laboratories Co., Ltd. | 抗体の測定方法 |
JP2005337960A (ja) * | 2004-05-28 | 2005-12-08 | Matsushita Electric Ind Co Ltd | 免疫反応測定方法、免疫反応測定キット及び免疫反応測定装置 |
JP2008255046A (ja) * | 2007-04-04 | 2008-10-23 | Toray Ind Inc | 融合タンパク質、これを用いた抗体捕捉担体および抗原検出法 |
WO2011118699A1 (ja) * | 2010-03-24 | 2011-09-29 | 株式会社カネカ | 免疫グロブリンに特異的に結合するタンパク質および免疫グロブリン結合性アフィニティーリガンド |
-
2010
- 2010-12-09 JP JP2010274292A patent/JP5467365B2/ja active Active
Patent Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS6022662A (ja) * | 1974-05-20 | 1985-02-05 | テクニコン、インストルメンツ、コ−ポレ−シヨン | 抗体、抗原または抗体:抗原複合体分析用試薬 |
JPS6460388A (en) * | 1987-05-08 | 1989-03-07 | Sekisui Chemical Co Ltd | Gene coding linked material of protein a-like substance fc bond region, recombinant plasmid containing said gene and transformant produced by using said recombinant plasmid |
JP2002014098A (ja) * | 2000-06-28 | 2002-01-18 | Fujirebio Inc | 免疫測定方法及びそのためのキット |
WO2004061452A1 (ja) * | 2003-01-07 | 2004-07-22 | Medical And Biological Laboratories Co., Ltd. | 抗体の測定方法 |
JP2005337960A (ja) * | 2004-05-28 | 2005-12-08 | Matsushita Electric Ind Co Ltd | 免疫反応測定方法、免疫反応測定キット及び免疫反応測定装置 |
JP2008255046A (ja) * | 2007-04-04 | 2008-10-23 | Toray Ind Inc | 融合タンパク質、これを用いた抗体捕捉担体および抗原検出法 |
WO2011118699A1 (ja) * | 2010-03-24 | 2011-09-29 | 株式会社カネカ | 免疫グロブリンに特異的に結合するタンパク質および免疫グロブリン結合性アフィニティーリガンド |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP5467365B2 (ja) | 2014-04-09 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6475630B2 (ja) | ストレプトアビジン突然変異タンパク質およびそれらを使用する方法 | |
AU2016293063B2 (en) | Novel immunoglobulin-binding proteins and their use in affinity purification | |
JP2011524740A5 (ja) | ||
JP2008167756A (ja) | 金結合性タンパク質 | |
CN111748032B (zh) | 抗新型冠状病毒的抗体和使用该抗体的免疫检测 | |
CN111518203A (zh) | 用于新型冠状病毒检测的试剂盒 | |
JPWO2009101807A1 (ja) | ペプチド、当該ペプチドの用途及び生産方法並びに当該ペプチドが固定化された固相及びその生産方法 | |
Järviluoma et al. | High-affinity target binding engineered via fusion of a single-domain antibody fragment with a ligand-tailored SH3 domain | |
WO2014021240A1 (ja) | プロテインgの細胞膜外ドメイン変異体のタンデム型多量体から成るタンパク質を含む捕捉剤 | |
JP2016535061A (ja) | 変異した骨格を有する結合ポリペプチド | |
Okazaki et al. | Efficient heterologous expression and secretion in Aspergillus oryzae of a llama variable heavy-chain antibody fragment V HH against EGFR | |
FR2974816A1 (fr) | Methode de generation de proteines | |
Kim et al. | Highly efficient antibody purification with controlled orientation of protein A on magnetic nanoparticles | |
JP5467365B2 (ja) | 抗原抗体複合体を分離する方法 | |
CN113024672B (zh) | 一种抗Dig的抗体及其在测序中的应用 | |
JP2011528559A5 (ja) | ||
JP2008255046A (ja) | 融合タンパク質、これを用いた抗体捕捉担体および抗原検出法 | |
CN108456252B (zh) | 高特异性的抗兔IgG天然构象单克隆抗体 | |
Grönwall et al. | Generation of Affibody® ligands binding interleukin‐2 receptor α/CD25 | |
CN116120440A (zh) | 抗SARS-CoV-2刺突蛋白S1的单克隆抗体及其应用 | |
US10294306B2 (en) | Affinity ligands and methods relating thereto | |
JP2011520101A (ja) | 磁性標識セット | |
KR100965480B1 (ko) | 재조합 융합단백질, 및 이를 이용한 바이오센서 및 이를이용한 목적물질의 면역검출법 | |
KR101300187B1 (ko) | 융합 단백질 및 이를 포함하는 바이오센서 | |
JP5560608B2 (ja) | オートタキシンの精製方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20130708 |
|
RD01 | Notification of change of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7421 Effective date: 20130807 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20131218 |
|
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20131224 |
|
RD01 | Notification of change of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7421 Effective date: 20140108 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20140106 |
|
R151 | Written notification of patent or utility model registration |
Ref document number: 5467365 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R151 |