JP2011528559A5

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Publication number: JP2011528559A5
Application number: JP2011519076A
Authority: JP
Filing date: 2009-07-20
Publication date: 2012-08-30
Anticipated expiration: 2029-07-20

Claims

血液中を循環するグッドパスチャー抗原結合タンパク質（ＧＰＢＰ）を検出する方法であって、
（ａ）ＧＰＢＰ結合分子のＧＰＢＰに対する選択的結合を促進する条件下で、前記ＧＰＢＰと結合する前記ＧＰＢＰ結合分子と血漿試料を接触させること、
（ｂ）非結合ＧＰＢＰ結合分子、血漿、またはそれら両方を除去すること、および
（ｃ）前記ＧＰＢＰ結合分子と前記血漿試料中の前記ＧＰＢＰとの間の複合体形成を検出すること、を含む方法。
前記方法は、循環する７７ｋＤＧＰＢＰを検出する、請求項１記載の方法。
前記７７ｋＤＧＰＢＰは、配列番号４によるアミノ酸配列を有する、請求項２記載の方法。
前記ＧＰＢＰ結合分子が抗体を含む、請求項１−３のいずれか一項に記載の方法。
前記方法は、ヒト血漿からの天然の循環する７７ｋＤＧＰＢＰを検出することを含む、請求項１−４のいずれか一項に記載の方法。
前記検出することは、ＥＬＩＳＡ、免疫蛍光法、フローサイトメトリー、およびクロマトグラフィからなる群から選択される技術を含む、請求項１−５のいずれか一項に記載の方法。
前記血漿試料は、自己免疫疾患を有すると疑われるヒト対象から得られる、請求項１−６のいずれか一項に記載の方法。
前記自己免疫疾患は、グッドパスチャー症候群および免疫複合体型糸球体腎炎からなる群から選択される、請求項７に記載の方法。
前記方法は、自己免疫疾患を有すると疑われるヒト対象の診断に使用される、請求項７または８に記載の方法。
配列番号２のアミノ酸配列からなる９０％又はそれより高い純度のポリペプチド（９１ｋＤＧＰＢＰ）。
一般式Ｘ−配列番号２（Ｘは検出可能なポリペプチドである）を有する、実質的に精製された組換え型ポリペプチド。
実質的に精製された核酸であって、下記（ａ）および（ｂ）からなる群から選択されるポリペプチドをコードする、核酸。
（ａ）配列番号２のアミノ酸配列からなるポリペプチド、
（ｂ）請求項１１記載のポリペプチド。
プロモータ配列と機能的に連結された、請求項１２記載の実質的に精製された核酸を含む組換え型発現ベクター。
請求項１３記載の前記組換え型発現ベクターでトランスフェクトされた宿主細胞。
配列番号２（９１ｋＤＧＰＢＰ）又は配列番号４（７７ｋＤＧＰＢＰ）のアミノ酸配列を有する実質的に精製されたポリペプチドであって、前記ポリペプチドが、３０５−３４４番目のアミノ酸残基（ＧＧＰＤＹＥＥＧＰＮＳＬＩＮＥＥＥＦＦＤＡＶＥＡＡＬＤＲＱＤＫＩＥＥＱＳＱＳＥＫ）（配列番号１０）に直接的に、間接的に、または直接的かつ間接的に関与する１以上の翻訳後修飾（ＰＴＭ）を有する、ポリペプチド。
前記ポリペプチドは、下記（ａ）−（ｅ）からなる群から選択される１以上の特徴により特徴付けられる、請求項１５記載のポリペプチド。
（ａ）前記１以上のＰＴＭが共有結合ＰＴＭを含む、
（ｂ）前記１以上のＰＴＭが３２０−３２７番目の残基（ＥＥＦＦＤＡＶＥ、配列番号５）内にある、
（ｃ）前記１以上のＰＴＭの少なくとも１つが３２０、３２１、又は３２７番目の残基に存在する、
（ｄ）前記ポリペプチドが配列番号４（７７ｋＤ）からなるアミノ酸配列を有する、
（ｅ）前記ポリペプチドが配列番号２（９１ｋＤ）からなるアミノ酸配列を有する。
配列番号２（９１ｋＤＧＰＢＰ）又は配列番号４（７７ｋＤＧＰＢＰ）のアミノ酸配列を有する実質的に精製されたポリペプチドであって、配列番号２又は配列番号４の前記ポリペプチドが、３７１−３９６番目の残基であるＰＹＳＲＳＳＳＭＳＳＩＤＬＶＳＡＳＤＤＶＨＲＦＳＳＱ（配列番号９）に直接的に、間接的に、または直接的かつ間接的に関与する１以上のＰＴＭを含む、ポリペプチド。
前記ポリペプチドは、下記（ａ）−（ｆ）からなる群から選択される１以上の特徴により特徴付けられる、請求項１７記載の実質的に精製されたポリペプチド。
（ａ）前記１以上のＰＴＭが共有結合ＰＴＭを含む、
（ｂ）前記１以上のＰＴＭが３８８−３９２番目の残基（ＤＤＶＨＲ、配列番号６）内にある、
（ｃ）前記ポリペプチドが、３０５−３４４番目の残基（ＧＧＰＤＹＥＥＧＰＮＳＬＩＮＥＥＥＦＦＤＡＶＥＡＡＬＤＲＱＤＫＩＥＥＱＳＱＳＥＫ）（配列番号１０）に１以上のＰＴＭをさらに含む、
（ｄ）前記１以上のＰＴＭが３２０−３２７番目の残基（ＥＥＦＦＤＡＶＥ、配列番号５）内にある、
（ｅ）前記ポリペプチドが、配列番号２（９１ｋＤＧＰＢＰ）からなるアミノ酸配列を
有する、
（ｆ）前記ポリペプチドが、配列番号４（７７ｋＤＧＰＢＰ）からなるアミノ酸配列を有する。
実質的に精製されたモノクローナル抗体であって、下記（ａ）および（ｂ）からなる群から選択される、モノクローナル抗体。
（ａ）請求項１５−１８のいずれか一項に記載の実質的に精製されたポリペプチドと選択的に結合するモノクローナル抗体、
（ｂ）配列番号２のポリペプチドと特異的に結合し、配列番号４のポリペプチドと結合しないモノクローナル抗体。
尿グッドパスチャー抗原結合タンパク質（ＧＰＢＰ）を検出する方法であって、
（ａ）ＧＰＢＰ結合分子のＧＰＢＰに対する選択的結合を促進する条件下で、前記ＧＰＢＰと結合する前記ＧＰＢＰ結合分子と尿試料を接触させること、
（ｂ）非結合ＧＰＢＰ結合分子を除去すること、および
（ｃ）前記尿試料における前記ＧＰＢＰ結合分子と前記ＧＰＢＰとの間の複合体形成を検出すること、
を含む方法。
天然のＧＰＢＰアイソフォームを単離する方法であって、下記（Ｉ）−（ＩＩＩ）からなる群から選択される方法を含む、方法。
（Ｉ）（ａ）血漿試料を硫酸アンモニウム沈殿させること、
（ｂ）硫酸アンモニウム沈殿した血清試料に対してイオン交換クロマトグラフィ（ＩＥＣ）を実施すること、
（ｃ）天然のＧＰＢＰアイソフォームを含むＩＥＣ画分を同定すること、
（ｄ）天然のＧＰＢＰアイソフォームを含むＩＥＣ画分をゲル濾過クロマトグラフィ（ＧＦＣ）すること、および
（ｅ）天然のＧＰＢＰアイソフォームを含むＧＦＣ画分を同定すること、
を含む方法、
（ＩＩ）（ａ）尿試料を塩析すること、
（ｂ）塩析したタンパク質試料に対してダブルイオン交換クロマトグラフィ（ＩＥＣ）を実施すること、および
（ｃ）天然のＧＰＢＰアイソフォームを含むＩＥＣ画分を同定すること、
を含む方法、
（ＩＩＩ）（ａ）血漿試料又は尿試料を、天然のＧＰＢＰと選択的に結合するＧＰＢＰ結合分子を含むアフィニティーカラムに通すこと、
（ｂ）血漿又は尿試料からの非結合タンパク質をアフィニティーカラムから洗い流すこと、および
（ｃ）前記カラムから天然のＧＰＢＰアイソフォームを溶出させること、
を含む方法。