JP2012090633A5 - - Google Patents
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- 以下を特徴とする齧歯動物細胞：
a）エプスタイン-バーウイルス核抗原1（EBNA-1）を発現する；
b）以下を含むエピソームを含む：
（i）原核生物複製起点；
（ii）選択マーカー；
（iii）エプスタイン-バーウイルス（EBV）複製起点（oriP）；
（iv）該齧歯動物細胞における異種ポリペプチドの発現のために適した発現カセットであって、プロモーター配列、5'非翻訳領域、該異種ポリペプチドをコードする核酸配列、およびポリアデニル化シグナルを含む3'非翻訳領域を含む、発現カセット。 - 以下の段階を含むことを特徴とする、齧歯動物細胞を入手するための方法：
a）齧歯動物細胞を提供する段階；
b）以下を含むプラスミドを提供する段階：
（i）原核生物複製起点；
（ii）選択マーカー；
（iii）エプスタイン-バーウイルス核抗原1（EBNA-1）用の機能性発現カセットであって、プロモーター配列、5'非翻訳領域、EBNA-1をコードする核酸配列、およびポリアデニル化シグナルを含む3'非翻訳配列を含む、発現カセット；
c）プラスミドb）を齧歯動物細胞a）に導入する段階、および安定に形質転換された齧歯動物細胞を選択する段階；
d）以下を含む、1つから4つまでのさらなるプラスミドを提供する段階：
（i）原核生物複製起点；
（ii）選択マーカー；
（iii）エプスタイン-バーウイルス（EBV）複製起点（oriP）；
（iv）該形質転換された齧歯動物細胞における異種ポリペプチドの発現のために適した発現カセットであって、プロモーター配列、5'非翻訳領域、異種ポリペプチドをコードする核酸配列、およびポリアデニル化シグナルを伴う3'非翻訳領域を含む、発現カセット；
e）さらなるプラスミドd）を、該安定に形質転換された齧歯動物細胞に導入する段階。 - 以下の段階を含むことを特徴とする、異種ポリペプチドの産生のための方法：
a）請求項1記載の齧歯動物細胞を提供する段階；
b）該齧歯動物細胞を、該異種ポリペプチドの発現のために適した条件下で培養する段階；
c）該ポリペプチドを培養物から回収する段階。 - 以下を含むことを特徴とする、請求項1記載の齧歯動物細胞の産生のためのキット：
a）齧歯動物細胞；
b）以下を含む、第1のプラスミド：
（i）原核生物複製起点；
（ii）選択マーカー；
（iii）エプスタイン-バーウイルス核抗原1（EBNA-1）用の機能性発現カセットであって、プロモーター配列、5'非翻訳領域、EBNA-1をコードする核酸配列、およびポリアデニル化シグナルを含む3'非翻訳領域を含む、発現カセット；
c）以下を含む、第2のプラスミド：
（i）原核生物複製起点；
（ii）選択マーカー；
（iii）エプスタイン-バーウイルス（EBV）複製起点（oriP）；
（iv）該齧歯動物細胞における異種ポリペプチドの発現のために適した発現カセットであって、プロモーター配列、5'非翻訳領域、核酸配列の導入のためのクローニング部位、およびポリアデニル化シグナルを含む3'非翻訳領域を含む、発現カセット。 - 異種ポリペプチドが、プロドラッグ、酵素、酵素断片、酵素阻害物質、酵素活性化物質、生物活性ポリペプチド、ヘッジホッグ（hedgehog）タンパク質、骨形成タンパク質（bone morphogenetic protein）、増殖因子、エリスロポエチン、トロンボポエチン、G-CSF、インターロイキン、インターフェロン、免疫グロブリンまたは免疫グロブリン断片を含む群から選択されることを特徴とする、請求項2〜3のいずれか一項記載の方法。
- 以下の段階を含むことを特徴とする、齧歯動物細胞における異種ポリペプチドの発現のための方法：
a）EBNA-1タンパク質をコードする構造遺伝子で安定にトランスフェクトされた齧歯動物細胞を提供する段階、
b）該齧歯動物細胞に、エプスタイン-バーウイルス（EBV）複製起点（oriP）を含む発現プラスミドをトランスフェクトする段階；
c）該トランスフェクトされた細胞を、該異種ポリペプチドの発現のために適した条件下で培養する段階、
d）該異種ポリペプチドを培養物から回収する段階。 - 異種ポリペプチドが、分泌性の異種ポリペプチドであることを特徴とする、請求項2〜3および5〜6のいずれか一項記載の方法。
- 発現プラスミドが、EBNA-1タンパク質をコードする構造遺伝子を全く含まないことを特徴とする、請求項2〜3および5〜7のいずれか一項記載の方法。
- 培養する段階が一過性トランスフェクション下で行われることを特徴とする、請求項2〜3および5〜8のいずれか一項記載の方法。
- 齧歯動物細胞がCHO細胞であることを特徴とする、請求項2〜3および5〜9のいずれか一項記載の方法。
- CHO細胞が、CHO-DBX11細胞、CHO-K1細胞、CHO-DG44細胞、およびEBNA-1を発現するCHO細胞を含む群から選択される、請求項10記載の方法。
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