JP2011524377A - 新規なキャノーラタンパク質単離物 - Google Patents
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Abstract
Description
本出願は、2009年6月20日出願の米国特許出願第12/213,499号の一部継続出願である。
Berot, S, Compoint, J.P., Larre, C., Malabat, C. 及び Gueguen, J. 2005. 菜種タンパク質(Brassica napus L)の大きなスケールでの精製、J. Chromatography B, 818: 35−42
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発明の概要
驚くべきことに、2Sタンパク質の割合が増加しており、好ましくは少なくとも約85重量%の2Sタンパク質を含み、7Sタンパク質の割合が減少している新規なキャノーラタンパク質単離物は、上記米国特許出願第10/137,391号および第10/476,230号の手順に従って調製した上澄み液由来のキャノーラタンパク質単離物よりも水溶液中で優れた特性を示すことが今や分かった。
溶解度:
新規なキャノーラタンパク質単離物は、上澄み液由来のキャノーラタンパク質単離物と比較して、広範囲のpHにわたって、約1%w/vタンパク質濃度で、水、ならびに炭酸および非炭酸のソフトドリンクおよびスポーツドリンク中で等しいまたは増加した溶解度を示す。
透明度:
新規なキャノーラタンパク質単離物は、炭酸および非炭酸ソフトドリンク、ならびにジュース、パンチ(punch)およびカクテルを含む種々の飲料に組み込んで、このような飲料にタンパク質強化をもたらすことができる。このような飲料は、約2.5〜約5にわたる広範囲のpH値を有し、12液量オンスの量で詰められることが多い。新規なキャノーラタンパク質単離物は、例えば12液量オンスの量当たり少なくとも約5gの新規なキャノーラタンパク質単離物など、任意の好都合な量で添加して、飲料にタンパク質強化をもたらすことができる。
熱安定性:
本発明の新規なキャノーラタンパク質単離物は、上澄み液由来のキャノーラタンパク質単離物と比較して、pH6およびpH7の両方で、熱安定性が向上している。以下に詳細に説明するように、上澄み液からの7Sタンパク質の等電点沈殿(isoelectric precipitation)の後、加熱処理した上澄み液は、加熱の際にさらなるタンパク質の沈殿に耐える。
280nmでの吸光度:
本発明の新規なキャノーラタンパク質は、上澄み液由来のキャノーラタンパク質単離物よりも280nmで弱い吸光度を有する。この結果は、本発明の新規なキャノーラタンパク質単離物が、上澄み液由来のキャノーラタンパク質ほどには、280nmで強く吸収するチロシンおよびトリプトファンを含まないことを示す。
表面疎水性:
本発明の新規なキャノーラタンパク質単離物は、上澄み液由来のキャノーラタンパク質単離物よりも低い表面疎水性を有し、それはおそらく、上澄み液由来のキャノーラタンパク質単離物と比較して、新規なキャノーラタンパク質単離物のグロブリン含量が低いことに起因する。
本明細書で提供する新規なキャノーラタンパク質単離物は、少なくとも約90重量%(N×6.25)、好ましくは少なくとも約100重量%のタンパク質含量を有し、回分プロセスまたは連続プロセスまたは半連続プロセスによって、キャノーラ油糧種子粗粉から単離することができる。
好ましい実施形態の説明
図1を参照すると、ミセル経路によるキャノーラタンパク質単離物(CPI)の形成と比較して、二膜プロセスが示されている。
この例は、新規なキャノーラタンパク質単離物の製造のための一手順を説明する。
この例は、新規なキャノーラタンパク質単離物の製造のための代替手順を説明する。
この例は、本発明の一実施形態による新規なキャノーラタンパク質単離物の製造を説明する。
この例は、例2および例3で製造した噴霧乾燥したキャノーラタンパク質単離物の溶解度の評価を含む。
得られた結果を以下の表IXに示す。
例5:
この例は、例2および例3で製造した噴霧乾燥したキャノーラタンパク質単離物のソフトドリンクおよびスポーツドリンク中の溶解度の評価を含む。
例6:
この例は、種々のpH値で水中に溶解した、例2および例3で製造した噴霧乾燥したキャノーラタンパク質単離物の溶液中の透明度の評価を含む。
例7:
この例は、ソフトドリンクまたはスポーツドリンク中に溶解した、例2および例3で製造した噴霧乾燥した単離物の溶液中の透明度の評価を含む。
例8:
この例は、一般的な飲料のpH値を含む。
この例は、例1、2および3の手順により製造した、噴霧乾燥した濃縮上澄み液(C200)、改変された生成物(C200HおよびC200HS)および等電点沈殿させた上澄み液(C200IS)の溶解度のさらなる評価を含む。
溶解度(%)=(1−(乾燥不溶性ペレット物質重量/(2/5×最初の乾燥タンパク質粉末重量)))×100
得られた結果を以下の表XIVに示す。
例10:
この例は、例1、2および3の手順により製造した、噴霧乾燥した濃縮上澄み液(C200)、改変された生成物(C200H)および等電点沈殿させた上澄み液(C200IS)のpH7での熱安定性の評価を含む。
加熱処理後の不溶性粉末の%=(乾燥不溶性ペレット物質重量/遠心管中の分散液重量/20)×最初の乾燥タンパク質粉末重量))×100
得られた結果を以下の表XVに示す。
例11:
この例は、例1、2および3の手順により製造した、噴霧乾燥した濃縮上澄み液(C200)、改変された生成物(C200HおよびC200HS)および等電点沈殿させた上澄み液(C200IS)のpH6での熱安定性の評価を含む。
加熱処理後の不溶性粉末の%=(乾燥不溶性ペレット物質重量/遠心管中の分散液重量/30)×最初の乾燥タンパク質粉末重量))×100
得られた結果を以下の表XVIに示す。
例12:
この例は、例1、2および3の手順により製造した、噴霧乾燥した濃縮上澄み液(C200)、改変された生成物(C200H)および等電点沈殿させた上澄み液(C200IS)のpH3.5、0.10M NaClの塩分濃度での溶解度の評価を含む。
試験条件下での不溶性粉末の%=(乾燥不溶性ペレット物質重量/((遠心管中の最初のサンプルの重量/50)×最初の乾燥タンパク質粉末重量))×100
得られた結果を以下の表XVIIに示す。
例13:
この例は、例1、2および3の手順により製造した、噴霧乾燥した濃縮上澄み液(C200)、改変された生成物(C200HおよびC200HS)および等電点沈殿させた上澄み液(C200IS)の表面疎水性の評価を含む。
例14:
この例は、例1、2および3の手順により製造した、噴霧乾燥した濃縮上澄み液(C200)、改変された生成物(C200HおよびC200HS)および等電点沈殿させた上澄み液(C200IS)の1mg/mlタンパク質溶液の280nmでの吸光度の評価を含む。
開示の概要
本開示を要約すると、特に飲料において透明な水溶液の製造に有用な、2Sタンパク質の含量が増加しており、7Sタンパク質の量が減少している新規なキャノーラタンパク質単離物を提供する。本発明の範囲内で、改変が可能である。
Claims (20)
- 乾燥重量基準(d.b.)で少なくとも約90重量%(N×6.25)のタンパク質含量を有する2Sキャノーラタンパク質から主としてなり、
かつ主として2Sキャノーラタンパク質からなりキャノーラタンパク質のミセル形成および沈殿による上澄み水溶液から得られるキャノーラタンパク質単離物と比較して、2Sキャノーラタンパク質の割合が増加し、7Sキャノーラタンパク質の割合が減少しており、
前記上澄み液からの7Sタンパク質の等電点沈殿(isoelectric precipitation)によって得られる、キャノーラタンパク質単離物。 - 少なくとも約100重量%(N×6.25)d.b.のタンパク質含量を有する、請求項1に記載のキャノーラタンパク質単離物。
- 単離物中に存在するキャノーラタンパク質のうち、少なくとも約85重量%の2Sキャノーラタンパク質および約15重量%未満の7Sキャノーラタンパク質を含む、請求項1に記載のキャノーラタンパク質単離物。
- 単離物中に存在するキャノーラタンパク質のうち、少なくとも約90重量%の2Sキャノーラタンパク質および約10重量%未満の7Sキャノーラタンパク質を含む、請求項3に記載のキャノーラタンパク質単離物。
- 少なくとも約100重量%(N×6.25)d.b.のタンパク質含量を有する、請求項3に記載のキャノーラタンパク質単離物。
- 2Sキャノーラタンパク質の割合が増加しているキャノーラタンパク質単離物の調製方法であって、
(a)主として2Sタンパク質からなる2Sおよび7Sタンパク質の水溶液を用意するステップと、
(b)前記水溶液から7Sタンパク質を等電点沈殿させるステップと、
(c)前記水溶液から沈殿した7Sタンパク質を除去するステップと、
(d)少なくとも約90重量%(N×6.25)d.b.のタンパク質含量を有し、かつ前記2Sおよび7Sタンパク質の水溶液と比較して、2Sキャノーラタンパク質の割合が増加しているキャノーラタンパク質単離物を回収するステップと
を含む方法。 - 前記等電点沈殿を、前記水溶液中に存在する7Sキャノーラタンパク質の少なくとも約50重量%を沈殿させるのに十分なpHおよび塩条件下で行う、請求項6に記載の方法。
- 前記等電点沈殿を、前記水溶液中に存在する7Sキャノーラタンパク質の少なくとも約75重量%を沈殿させるのに十分なpHおよび塩条件下で行う、請求項7に記載の方法。
- 前記等電点沈殿を、
(i)前記水溶液に塩を加えて(salinating)少なくとも約0.3mSの導電率にするステップと、
(ii)前記塩を加えた水溶液(salinated aqueous solution)のpHを約2.0〜約4.0の値に調整するステップと
により行う、請求項6に記載の方法。 - 前記導電率が約10〜約20mSであり、前記pHが約3.0〜約3.5である、請求項9に記載の方法。
- 2Sおよび7Sキャノーラタンパク質の前記水溶液が、キャノーラタンパク質のミセル形成および沈殿による上澄み液、部分濃縮上澄み液または濃縮上澄み液である、請求項6に記載の方法。
- 前記キャノーラタンパク質のミセル形成を、
(a)少なくとも約5℃の温度でキャノーラ油糧種子粗粉を抽出して、前記キャノーラ油糧種子粗粉中のタンパク質を可溶化し、タンパク質水溶液を形成するステップと、
(b)前記タンパク質水溶液を残留油糧種子粗粉から分離するステップと、
(c)選択的膜技術によってイオン強度を実質的に一定に維持しながら、前記タンパク質水溶液の濃度を少なくとも約200g/Lに増加させて、濃縮タンパク質溶液を得るステップと、
(d)前記濃縮タンパク質溶液を、約15℃未満の温度の冷水中に希釈して、前記タンパク質のミセルを形成させるステップと、
(e)沈降したタンパク質ミセル塊から上澄み液を分離するステップと
によって行う、請求項11に記載の方法。 - 前記等電点沈殿の前に、前記上澄み液を約100〜約300g/Lのタンパク質濃度に濃縮する、請求項12に記載の方法。
- 前記上澄み液を約200〜約300g/Lのタンパク質濃度に濃縮する、請求項13に記載の方法。
- 前記濃縮ステップを、約3000〜約100000ダルトンの分画分子量(molecular weight cut−off)を有する少なくとも1つの膜を使用した限外濾過によって行う、請求項13に記載の方法。
- 前記等電点沈殿の前に、限外濾過によって得られた前記濃縮上澄み液を透析濾過に供する、請求項15に記載の方法。
- 前記透析濾過ステップを、約3000〜約100000ダルトンの分画分子量(molecular weight cut−off)を有する少なくとも1つの膜を使用して、約2〜約20倍容、好ましくは約5〜約10倍容の水、食塩水または酸性水を使用して行う、請求項16に記載の方法。
- (e)前記キャノーラタンパク質単離物を、水性飲料組成物として処方する(formulating)ステップをさらに含む、請求項6に記載の方法。
- 請求項1に記載のキャノーラタンパク質単離物の水溶液。
- キャノーラタンパク質単離物で強化した飲料である、請求項19に記載の水溶液。
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