¦ AISLADO NOVEDOSO DE PROTEÍNA DE CAÑOLA
REFERENCIA A SOLICITUD RELACIONADA
solicitud es una continuación en parte de la S Patente Norteamericana No. 12/213,499 presenta junio de 2009.
CAMPO DE LA INVENCIÓN
resente invención se refiere a la producción de novedoso de proteina de cañóla y a su uso en acuosas, incluyendo refrescos y bebidas deporti
ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN
aislados de proteina de semilla de aceite de tienen contenidos de proteina de por lo men ciento en peso {N . x 6.25) pueden formarse a harina de semilla de aceite a través de descrito en la Solicitud de Patente Nor copendiente No. 10/137,391 presentada el 3 de m solución de sal acuosa, separar la solución acuosa resultante de la harina de semilla residual, incrementar la concentración de prot solución acuosa a por lo menos aproximadamen mientras se mantiene la fuerza iónica sust constante mediante la utilización de una membrana selectiva, diluir la solución d concentrada resultante en agua enfriada para formación de micelas de proteina, asentar las proteina para formar una masa micelar de protei tipo gluten, gelatinosa, pegajosa, amorfa, y r masa micelar de proteina del sobrenadante qu contenido de proteina de por lo menos aproxima por ciento en peso (N x 6.25) . Como se utiliz contenido de proteina es determinado en base a La masa micelar de proteina (PMM) recuperada aproximadamente 90 por ciento en peso, preferen lo menos aproximadamente 100 por ciento en 6.25)..
procedimientos descritos en las Solicitudes d Norteamericanas Nos. 10/137,391 y 10/47 esencialmente procedimientos en lotes. En la S patente norteamericana copendiente No.
presentada el 19 de noviembre de 2002 (Publ Solicitud de Patente Norteamericana No. 2004-00 03/043439), asignada al cesionario de presen divulgaciones se incorporan aquí por refe describe un proceso continuo para preparar a proteina de cañóla. De conformidad con esto, l semilla de aceite de cañóla es mezclada contin una solución de sal acuosa, la mezcla es tra través de una tubería mientras se extrae prot la formación de micelas de proteína, y se de continuamente las micelas de proteina mi sobrenadante es continuamente desbordado hasta acumulado en el recipiente de asentamiento 1 deseada de PMM. La PMM es recuperada a recipiente de asentamiento y puede ser seca tiene un contenido de proteina de por aproximadamente 90 por ciento en peso (N preferentemente por lo menos aproximadament ciento en peso. El sobrenadante desbordado procesado para recuperar aislado de proteina d ahí, de conformidad con lo descrito arriba, abe que la semilla de cañóla contiene de aproxim por ciento en peso hasta aproximadamente 30 po peso de proteínas y varios componentes de diferentes han sido identificados. Estas No. 2005-0249828), asignadas al cesionario del cuyas divulgaciones se incorporan aquí por refe procedimientos descritos arriba, que incluyen de una solución de proteina acuosa concentrada PMM y el procesamiento del sobrenadante para proteina adicional, llevan a la recuperación de diferentes perfiles de proteina.
relación a este aspecto, el aislado de proteina derivado de PMM tiene un contenido de com proteina de aproximadamente 60 por ciento aproximadamente 98 por ciento en peso de prote aproximadamente 1 por ciento en peso a aproxim por ciento en peso de proteina 12S y aproximadamente 25 por ciento en peso de prote aislado de proteina de cañóla derivado del s tiene un contenido de componente de pr antes mencionadas Nos. 10/413,371 y 10/5 proteina 2S tiene un peso molecular de apro 14,000 daltons, la proteina 7S tiene una masa m aproximadamente 145,000 daltons y la proteina 1 tamaño molecular de aproximadamente 290,000 dalt rzyzaniak et al en Nahrung (42) 1998, Num. 3/ 201-204 se describió la purificación hasta homo la proteina de almacenamiento 2S napina a semilla de colza y la, caracterización de la secundaria y estabilidad de conformación de l La napina fue aislada mediante la extracción de colza con un amortiguador A (NaH2P0 50 mM, p 1 mM) , seguido por precipitación utilizando disolución de la pella resultante en amort diálisis contra el mismo amortiguador y desalin cromatografía en gel utilizando una columna Sep intercambio de cationes utilizando gradientes h M a pH 5.0. Las fracciones con - 280 recogidas, concentradas y analizadas,
solicitantes están concientes de la exis referencias de literatura adicionales que de preparación en laboratorio de muestras de p cañóla 23, purificadas hasta homogeneidad, de con lo siguiente:
t, S., Compoint, J.P., Larre, C, Malabat, C. a J. 2005. Large scale purification of rapesee {Brassica napus L) . J. Chromatography B, 818: 35 ty, R.S., McKenzie, S.L. and Finlayson, AJ. proteins of rapeseed (Brassica napus L.) solub solutions. Can. J. Biochem., 46:11 1-1197.
ig, P.M., Krzyzaniak, A., Barciszewski , J. and 1996. Mass spectrometric amino acid sequen the 2S storage protein in Brassica napus. Biochem., 242: 214-219.
aislados novedosos de proteina de cañóla pro aqui se distinguen de tales divulgaciones e aislados de proteina de cañóla predomi proporcionados aqui comprenden siempre un cantidad de proteina 7S.
añóla se conoce también como semilla de colza semilla de colza.
COMPENDIO DE LA INVENCIÓN
a encontrado ahora de manera sorprendente que novedoso de proteina de cañóla que tiene una incrementada de proteina 2S, preferentemente q por lo menos aproximadamente 85 por ciento proteina 2S, y que tiene una proporción r proteina 7S, presenta propiedades superiores
proporcionando bebidas fortificadas con protei Además, el aislado novedoso de proteina de cano una mayor solubilidad que el aislado de protein derivado de sobrenadante a un pH de aproximadam aproximadamente una solución de cloruro de s aproximadamente .
aspecto de la presente invención, se prop aislado de proteina de cañóla que predominantemente de proteina de cañóla 2S qu contenido de proteina de por lo menos aproxim por ciento en peso (N x 6.25), preferenteme menos aproximadamente 100 por ciento en peso, peso seco (d.b.) y que tiene una proporción i de proteina de cañóla 2S y una proporción r proteina de cañóla 7S en comparación con a proteina de cañóla que consisten predominan
claridad, estabilidad térmica, absorbancia hidrofobicidad superficial y perfil de aminoác propiedades se describen a continuación y los apoyan esa discusión aparecen en los ejemplos a bilidad:
islado de proteina de cañóla novedoso present solubilidad o mayor solubilidad en agua y carbonatadas y no carbonatadas y bebidas dep comparación con el aislado de proteina de cano de sobrenadante en un amplio rango de concentración de proteina de aproximad peso/volumen .
ás, los aislados de proteina de cañóla novedoso la misma solubilidad o mayor solubilidad en amplio rango de pH y a una concentración de aproximadamente 1% peso/volumen, en donde, des en varias bebidas, incluyendo refrescos carbon carbonatados asi como jugos, ponches y coct proporcionar fortificación de proteina a tale Tales bebidas tienen un amplio rango de valo desde aproximadamente 2.5 hasta aproximadam frecuentemente son envasadas en cantidades de onzas fluidas) . El aislado novedoso de protein puede ser agregado en cualquier cantidad conve proporcionar fortificación de proteina a la ejemplo, por lo menos aproximadamente 5 g del proteina de cañóla novedoso por una cantidad de onzas fluidas) .
islado de proteina de cañóla novedoso agregado en la bebida y no afecta la claridad de la beb bebida clara a una concentración de proteina ciento en peso, la claridad es inferior a apro ?
12
una estabilidad térmica mejorada tanto a pH 6 en comparación con el aislado de proteina derivado de sobrenadante. Después de la pr isoeléctrica de proteina 7S del sobrena conformidad con lo descrito con detalles sobrenadante tratado térmicamente es resistente adicional de proteina al aplicarse calor.
rbancia a 280 nm:
roteina de cañóla novedosa de la presente inve una absorbancia a 280 nm menor que el aislado de cañóla derivado de sobrenadante. Este resul que el aislado novedoso de proteina de can presente invención contiene menos tirosina y que absorben fuertemente a 280 nm, que la p cañóla derivada de sobrenadante.
ofobicidad Superficial:
preferentemente menor que aproximadamente 20.
aislado de proteina de cañóla novedoso de l invención se prepara mediante la pr isoeléctrica de proteina 7S a partir del s concentrado del procedimiento de las Soli Patentes Norteamericanas Nos. 10/137,391 y 10/ el objeto de reducir la proporción de protein sobrenadante concentrado y por consiguiente inc proporción de proteina 2S. Alternativan tratamiento puede efectuarse en el sobrenadant la concentración o después de la concentración sobrenadante. Por consiguiente, en otro aspe presente invención, se proporciona un proces preparación de un aislado de proteina de cañól una proporción incrementada de proteina de can comprende (a) proporcionar una solución
BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS
igura 1 es una representación esquemática de un recuperación de aislado de proteína; y
igura 2 es una representación esquemática del pr que se utiliza para producir el aislado de p cañóla novedoso de la presente invención a sobrenadante del proceso de formación de PMM i la Figura 1.
DESCRIPCIÓN GENERAL DE LA INVENCIÓN
islado novedoso de proteína de cañóla proporci tiene un contenido de proteína de por aproximadamente 90 por ciento en peso (N preferentemente por lo menos aproximadament ciento en peso, y puede ser aislado de harina de aceite de cañóla mediante un proceso en lot mediante un proceso continuo, o bien mediante
experimentales de preparación. Como se estable los aislados novedosos de proteina de can presente invención, mientras tienen una reducida de proteina 7S y una proporción incr proteina 2S, presentan siempre una pequeñ residual de proteina 7S. El aislado de protein es derivado por precipitación isoeléctrica de del sobrenadante.
aislados novedosos de proteina de cañóla contie menos aproximadamente 85 por ciento en peso de cañóla 2S y menos que aproximadamente 15 por peso de proteina de cañóla 7S, preferenteme menos aproximadamente 90 por ciento en peso de cañóla 2S y menos que aproximadamente 10 por peso de proteina de cañóla 7S y con mayor pre mayor proporción posible de proteina 2S. Como centrifugación o filtración. La proteina 2S no por el tratamiento y por consiguiente el incrementa la proporción de proteina 2S presen la reducción de la proporción de proteina 7S.
aislado novedoso de proteina de cañóla es solución acuosa en un amplio rango de valor generalmente de aproximadamente pH 2 a aproxim 7.5, preferentemente de aproximadamente aproximadamente pH 4, tiene generalmente una igual o mayor que el aislado de proteina de consiste predominantemente de proteina 2S y d sobrenadante de formación de micelas de protein y precipitación en las mismas condiciones exp de preparación. Además, las soluciones acuosas novedoso de proteina de cañóla en refrescos, refrescos carbonatados y refrescos no carbon solución acuosa, incluyendo solución en r bebidas deportivas, puede variar según el uso de la solución. En general, la concentración puede variar de aproximadamente 0.1 en aproximadamente 30 por ciento en peso, prefere aproximadamente 1 en peso a aproximadamente 5 en peso.
consiguiente, la presente invención incluye acuosas del aislado novedoso de proteina proporcionado aquí, incluyendo no sola mencionadas arriba sino también otras bebidas, jugos, bebidas alcohólicas, bebidas basadas bebidas basadas en productos lácteos,
paso inicial del proceso de proporcionar a proteina de cañóla incluye la solubilización proteináceo proveniente de harina de semilla d no desnaturalizada, que resulte, por ejemplo de con hexano caliente o métodos de extrusión de frío. La remoción de aceite de cañóla de la aceite de cañóla se efectúa habitualmente operación separada del procedimiento de recup aislado de proteína descrito aquí,
solubilización de proteína se efectúa más efi mediante la utilización de una solución de sal alimento puesto que la presencia de sal inc remoción de proteína soluble de la harina de aceite. Cuando el aislado de proteína de contempla para usos no alimenticios, se puede químicos de grado no alimenticio. La sal habit cloruro de sodio, aun cuando otras sales ejemplo, cloruro de potasio, pueden utili solución de sal tiene una fuerza iónica de po que causa la solubilización máxima de la prot según la sal en cuestión y la harina de semill elegida .
ndo en cuenta el mayor grado de dilución requerí precipitación de proteína con fuerzas iónicas se prefiere habitualmente utilizar un valor iónica inferior a aproximadamente 0.8, y más preferencia un valor de aproximadamente aproximadamente 0.15.
n proceso en lotes, la solubilización por sa proteína se efectúa a una temperatura de apro 5°C hasta aproximadamente 75°C, preferentemente por agitación^ para reducir el tiempo de solu que es habitualmente de aproximadamente 10 min aproximadamente 60 minutos. Se prefiere e solubilización para extraer sustancialmente
proceso continuo, la extracción de la protein de la harina de semilla de aceite de cañóla se una manera consistente con la realizació extracción continua de proteina a partir de la semilla de aceite de cañóla. En una modalidad, de semilla de aceite de cañóla es mezclada co con la solución de grado de alimento y la transportada a través de una tubería o conducto una longitud y un caudal apropiados para lograr de residencia suficiente para efectuar la deseada de conformidad con los parámetros descr presente. En dicho procedimiento continuo, e solubilización por salado se efectúa rápidame lapso de hasta aproximadamente 10 minutos, pref para efectuar la solubilización para sustancialmente la mayor cantidad posible de p ajustado a cualquier valor deseado dentro de
aproximadamente 5 a aproximadamente 6.8 para
* paso de extracción mediante la utilización de
ácido conveniente, habitualmente ácido clor
álcali, habitualmente hidróxido de sodio,
requerido .
oncentración de harina de semilla de aceite en
de sal de grado de alimento durante el
solubilización puede variar ampliamente. Valor
de concentración son de aproximadamente 5% p
hasta aproximadamente 15% peso/volumen.
aso de extracción de proteina con la solución de
tiene el efecto adicional de solubilizar grasas
estar presentes en la harina de cañóla, qu
resulta en grasas presentes en la fase acuosa.
olución de proteina que resulta del paso de 1 por ciento en peso de la solución, pref aproximadamente 0.05 por ciento en peso. El a sirve para inhibir la oxidación de fenóli solución de proteina.
fase acuosa que resulta del paso de extrac entonces ser separada de la harina de cañóla r cualquier manera conveniente como, por ejemplo el empleo de una decantadora centrifuga, s centrifugación de disco y/o filtración para harina residual. La harina residual separada secada para ser desechada.
olor del aislado final de proteina de cañóla mejorado en términos de color claro y amar intenso mediante el hecho de mezclar carbón a polvo u otro agente de adsorción de pigmen solución de proteina acuosa separada y emplea una cantidad de aproximadamente aproximadamente 5% peso/volumen, preferent aproximadamente 0.05% a aproximadamente 2% peso/ o la harina de semilla de cañóla contiene significativas de grasa, de conformidad con lo las Patentes Norteamericanas Nos. 5,844,086 y asignadas al cesionario del presente y cuyas di se incorporan aquí por referencia, entonces lo remoción de grasa descritos ahi pueden efectuar solución de proteina acuosa separada y sobre 1 de proteina acuosa concentrada comentadas abajo, paso de mejora de color se efectúa, dicho paso efectuado después del primer paso de remoción de alternativa a la extracción de la harina de aceite con una solución de sal acuosa, dicha puede efectuarse utilizando agua solamente, aún agregada después de terminar dichas operaciones. procedimiento alternativo es extraer la harina de aceite con la solución de sal de grado de al valor de pH relativamente elevado a aproximadamente 6.8, generalmente hasta apro 9.9. El pH de la solución de sal de grado d puede ser ajustado al valor alcalino deseado utilización de cualquier álcali de grado d conveniente como, por ejemplo, una solución hidróxido de sodio. Alternativamente, la harina de aceite puede ser extraída con la solución d pH relativamente bajo inferior a aproximadame generalmente hasta aproximadamente pH 3. Cuando dicha alternativa, la fase acuosa que resulta d extracción de harina de semilla de aceite e después de la harina de cañóla residual, de 5.3 a aproximadamente 6.2, como se comentó arr de un procesamiento adicional como se comenta a ajuste de pH puede ser efectuado utilizando ácido conveniente, como, por ejemplo, ácido clo álcali, por ejemplo hidróxido de sodio, apropiado .
olución de proteina acuosa es concentrada con el incrementar su concentración de proteina m mantiene la fuerza iónica sustancialmente const concentración se efectúa generalmente para p una solución de proteina concentrada que concentración de proteina de por lo menos apro 50 g/L, preferentemente por lo menos aproximad g/L, con mayor preferencia por lo menos apro 250 g/L.
so de concentración puede ser efectuado de cual daltons, con relación a diferentes materiales d y configuraciones, y, para operación dimensionadas para permitir el grado d concentración conforme la solución de proteina a través de las membranas.
se sabe, la ultrafiltración y técnicas si membrana selectiva permiten que especies de b moleculares pasen a través de la membrana mi especies de pesos moleculares más altos no pued través de la membrana. Las especies de b moleculares incluyen no solamente las especies la sal de grado de alimento sino también mat bajos pesos moleculares extraídos del mater como, por ejemplo, carbohidratos, pigmentos anti-nutricionales , asi como formas de ba moleculares de la proteina. El corte de peso m utilizando de aproximadamente 2 a aproxima volúmenes de solución de diafiltración, prefere aproximadamente 5 a aproximadamente 10 vol solución de diafiltración . En la ope diafiltración, cantidades adicionales de contam removidas de la solución de proteina acuos pasaje a través de la membrana con el pe operación de diafiltración puede ser efectuada ninguna cantidad adicionalmente signific contaminantes y color visible esté presen permeado. Dicha diafiltración puede ser utilizando la misma membrana que en el caso d concentración. Sin embargo, si se desea, e diafiltración puede ser efectuado utilizando un separada con un corte de peso molecular dife ejemplo una membrana que tiene un corte de pes sodio o ácido ascórbico. La cantidad de a empleado en el medio de diafiltración depen materiales empleados y puede variar de apro 0.01 por ciento en peso a aproximadamente 1 por peso, preferentemente de aproximadamente 0.05 en peso. El antioxidante sirve para inhibir la de fenólicos presentes en la solución conc aislado de proteina de cañóla,
so de concentración y el paso de diafiltración efectuados a cualquier temperatura c generalmente de aproximadamente 20 °C a apro 60°C, preferentemente de aproximadamente aproximadamente 30 °C, y durante el periodo de t efectuar el grado deseado de concentración. La y otras condiciones utilizadas dependen hasta c de equipo de membrana utilizado para ef como alternativa a la operación de remoción descrita arriba. Se puede utilizar aqui carbón polvo asi como carbón activado en gránulos ( material que puede ser usado como agente de ad color es polivinilpirrolidona .
so de tratamiento con agente de adsorción de c efectuarse en cualquier condición c generalmente a temperatura ambiente de la s proteina de cañóla. Para carbón activado en cantidad de aproximadamente 0.025% a aproxima peso/volumen, preferentemente de aproximadamen aproximadamente 2% peso/volumen, puede utilizar se utiliza polivinilpirrolidona como agente de de color, una cantidad de aproximadament aproximadamente 5% peso/volumen, preferent aproximadamente 2% a aproximadamente 3% pe y extraída de la harina en la solución de p cañóla en el paso de extracción. Dicha pas puede ser efectuada en cualquier con pasteurización deseada. En general, la so proteína concentrada y opcionalmente diafi calentada a una temperatura de aproximadamente aproximadamente 70°C, preferentemente de apro 60°C hasta aproximadamente 65°C, durante apro 10 minutos a aproximadamente 15 minutos, pref aproximadamente 10 minutos. La solución de concentrada pasteurizada puede ser entonces enf procesamiento adicional de conformidad con l abajo, preferentemente a una temper aproximadamente 25 °C hasta aproximadamente 40°C. la temperatura empleada en la paso de conce paso opcional de diafiltración y qué se efect temperatura arriba de la cual la formación de ocurre durante la dilución por agua enfriada, olución de proteina concentrada que resulta d concentración, y paso opcional de diafiltra opcional de remoción de color, paso op pasteurización y paso opcional de remoción d entonces diluida para lograr la formación mediante el hecho de mezclar la solución d concentrada con agua enfriada que tiene e requerido para lograr el grado de dilución dese la proporción de proteina de cañóla que se des por la vía de micelas y según la propo sobrenadante, se puede variar el grado de dilu solución de proteina concentrada. Con niveles d menores, en general, una mayor proporción de l de cañóla permanece en la fase acuosa.
preferentemente inferior a aproximadamente 10 que se logran rendimientos mejorados de a proteina en forma de masa micelar de proteina temperaturas más frías como los factores d utilizados .
na operación en lotes, el lote de solución d concentrada se agrega a un cuerpo estátic enfriada que tiene el volumen deseado, de conf lo comentado arriba. La dilución de la s proteína concentrada y la reducción consecuen fuerza iónica provoca la formación de una ma nube de moléculas de proteína altamente asociad de pequeñas gotas de proteína discretas en forr En el procedimiento en lotes, se permite que 1 de proteínas se asienten en el cuerpo de agu para formar una masa micelar de proteína (P de humedad de la masa micelar de esta man también el contenido de sal ocluida de la masa por consiguiente el contenido de sal del aislado rnativamente, la operación de dilución puede continuamente mediante el pasaje continuo de 1 de proteina concentrada hacia una entrada de u en forma de T, mientras que el agua de d alimentada a la otra entrada de la tubería en f permitiendo el mezclado en la tubería. El agua es alimentada a la tubería en forma de T a suficiente para lograr el grado deseado de dilu solución de proteína concentrada.
ezclado de la solución de proteína concentrada y dilución en la tubería inicia la formación de proteína y la mezcla es alimentada continuament salida de la tubería en forma de T en un rec procedimiento prosigue hasta la acumulació cantidad deseada de la PMM en el' fondo del rec asentamiento, cuando la PMM acumulada es re recipiente de asentamiento. En lugar de asenta sedimentación, la PMM puede ser separada contin centrifugación .
ombinación de parámetros de proceso de concentra solución de proteina a un contenido de proteina de por lo menos aproximadamente 200 g/L y el factor de dilución de aproximadamente 10 a apro 20, resultan en rendimientos más elevados, fre a rendimientos significativamente más ele términos de recuperación de proteina en form micelar de proteina a partir del extracto original, y aislados mucho más puros en t contenido de proteina que lo que se logra m de extracción de proteina y se pueden emplear t significativamente más elevadas en el paso de Además, en la operación continua, hay menos pro de contaminación que en el caso de un proced lotes, lo que lleva a una mayor calidad de pro proceso puede ser efectuado en un equipo más com islado asentado es separado de la fase acuosa sobrenadante, por ejemplo mediante decantación acuosa residual de la masa asentada o centrifugación. La PMM puede ser utilizada en f o bien puede ser secada, a través de cualqui conveniente, como por ejemplo secado por roci liofilización, a una forma seca. La PMM seca ti contenido de proteina, superior a aproximadame ciento en peso de proteina, preferentemente po aproximadamente 100 por ciento en peso de Norteamericanas mencionadas arriba Nos. 10 10/510,766, la PMM consiste predominantemen proteina de cañóla 7S que tiene una con componente de proteina de aproximadamente 60 ciento en peso de proteina 7S, de aproximada aproximadamente 15 por ciento en peso de proteí 0 a aproximadamente 25 por ciento en peso de pro obrenadante del paso de formación de PMM y a contiene cantidades significativas de proteina no precipitadas en el paso de dilución, y es para recuperar el aislado de proteina de cano Como se describe en las Solicitudes de Norteamericanas antes mencionadas Nos. 10/ 10/510,766, el aislado de proteina de cañóla de sobrenadante consiste predominantemente de p cañóla 2S que tienen un contenido de com por ejemplo ultrafiltración, utilizando membra corte de pesos moleculares adecuado que p especies de bajos pesos moleculares, incluyend otros materiales de bajos pesos molec proteináceos extraídos de material de fuente pasen a través de la membrana, mientras la p cañóla es retenida en la solución. Se puede membranas de ultrafiltración que tienen un cort moleculares de aproximadamente 3,000 daltons daltons, preferentemente de aproximadamente 5,0 a aproximadamente 10,000 daltons, con r diferentes materiales de membrana y configu concentración del sobrenadante de esta man también el volumen de líquido que debe se recuperar la proteína. El sobrenadante es g concentrado a una concentración de proteína
acidificada. Tal diafiltración puede ser utilizando de aproximadamente 2 a aproxima volúmenes de solución de diafiltración, prefere aproximadamente 5 a aproximadamente 10 vol solución de diafiltración . En la oper diafiltración, cantidades adicionales de contam removidas del sobrenadante acuoso mediante pasaj de la membrana con el permeado. La ope diafiltración puede ser efectuada hasta qu cantidad adicional significativa de contaminant visible estés presente en el permeado. Dicha di puede ser efectuada utilizando la misma membran paso de concentración. Sin embargo, si se diafiltración puede ser efectuada utilizando un separada, como por ejemplo una membrana que tie de pesos moleculares dentro de un rango de apro se emplea en el medio de diafiltración depe materiales empleados y puede variar de apro 0.01 por ciento en peso a aproximadamente 1 por peso, preferentemente aproximadamente 0.05 por peso. El antioxidante sirve para inhibir la ox fenólicos presentes en la solución concentrada de proteina de cañóla.
olución de proteina concentrada y opcionalmente puede ser sometida a una operación de remoció como alternativa a la operación de remoción descrita arriba. Se puede utilizar en este, c activado en polvo así como carbón activado e (GAC) . Otro material que puede ser utilizado c de adsorción de color es polivinil pirrolidona. aso de tratamiento con el agente de adsorció puede ser efectuado en cualquier condición c preferentemente de aproximadamente 2% peso/vol aproximadamente 3% peso/volumen. El agente de a color puede ser removido de la solución de p cañóla a través de cualquier medio conven ejemplo mediante filtración.
conformidad con la presente invención, el s concentrado y opcionalmente diafiltrado, desp operación opcional de remoción de color, es tr reducir la cantidad de la proteina 7S prese solución por medio de precipitación isoel remoción de la proteina 7S incrementando por c la proporción de proteina 2S en la proteina presente en el sobrenadante concentrado.
o tratamiento puede ser efectuado en condicion sal suficientes para .reducir la proporción de 7 en el sobrenadante concentrado, preférentem
el procedimiento de tratamiento isoeléctrico, habitualmente cloruro de sodio, aun cuando o tales como cloruro de potasio pueden también em agrega primero al sobrenadante, sobrenadante p concentrado o sobrenadante concentrado con el proporcionar una solución salinada que conductividad de por lo menos aproximadament preferentemente de aproximadamente 10 a aproxim mS.
H del sobrenadante salinado es ajustado a un provocar la precipitación isoeléctrica de la pr generalmente a un pH de aproximadament aproximadamente 4.0, preferentemente de apro 3.0 a aproximadamente 3.5. La precipitación i de la proteina 7S puede ser efectuada en un a de temperaturas, generalmente de aproximadament
ciiafiltración para remover la sal, antes de sobrenadante concentrado y diafiltrado para aislado de proteína de cañóla de la presente in sobrenadante concentrado, diafiltrado e isoelé precipitado puede ser filtrado para remover residuales y es sometido a un paso opcional de cloro, de conformidad con lo comentado arriba, secado a través de cualquier técnica convenie por ejemplo, secado por rociado, o bien liofili el objeto de alcanzar una forma seca para propo aislado de proteína de cañóla de conformid presente invención. Dicho aislado de proteína tiene un alto contenido de proteína, aproximadamente 90 por ciento en peso, preferen lo menos aproximadamente 100 por ciento e proteína (N x 6.25).
aproximadamente 95 por ciento en peso de la p cañóla en el aislado. Existe también una pro proteina 7S en el aislado.
rnativamente, el tratamiento isoeléctrico del s para precipitar la proteina 7S puede efectúa sobrenadante antes de los pasos de concen diafiltración mencionados arriba. Después de l de la proteina 7S depositada, el sobrenadante e concentrado, opcionalmente diafiltrado, op sometido a una operación de remoción de color para proporcionar el aislado de proteina de conformidad con la invención.
alternativa adicional, el sobrenadante puede s parcialmente concentrado a cualquier nivel conv sobrenadante parcialmente concentrado es entonce a un tratamiento isoeléctrico para precipitar l proteina 7S precipitada es removida del so sobrenadante parcialmente concentrado o s concentrado a través de cualquier medio conveni por ejemplo centrif gación o filtración o comb ellas .
ués de la remoción de la proteina 7S preci sobrenadante isoeléctricamente tratado o el s parcialmente concentrado, isoeléctricamente tra ser ajustado en cuanto a pH en cualquier punto después de la concentración o diafiltración, comentó arriba.
DESCRIPCIÓN DE MODALIDADES PREFERIDAS
referencia a la Figura 1, se muestra un proc membranas en comparación con la formación de a proteina de cañóla (CPI) por la via de micelas. se puede observar, la fracción retenida de u dilución en donde aislado de proteina de precipitado como masa micelar de proteina. La m de proteina es secada por rociado con el proporcionar un aislado de proteina de cañóla q predominantemente de proteina de cañóla 7S.
a modalidad de dos membranas, el permeado del p de ultrafiltración es sometido a un segund ultrafiltración (Ultrafiltración #2-A) , que pue ultrafiltración y diafiltración . La fracción re segundo paso de ultrafiltración es secada por r proporcionar un aislado de proteina de cañóla q predominantemente de proteina 2S.
el procedimiento de US 10/137, 321 y US 10/4 sobrenadante de la precipitación de la masa proteina es sometido a un paso de ultr (Ultrafiltración #2-B) , que puede incluir ultr sobrenadante se efectúa, ya sea despué concentración (Ultrafiltración #2) (flujo de la antes de la concentración (flujo de la izquierda
EJEMPLOS
pio 1:
ejemplo describe un procedimiento para la produ aislado novedoso de proteina de cañóla.
gregó "a" kg de harina de cañóla a "b" L de una NaCl 0.1 M a temperatura ambiente y se agitó minutos para proporcionar una solución de prote La harina de cañóla residual fue removida y la proteina resultante fue clarificada centrifugación y filtración para producir solución de proteina filtrada que tiene un co proteina de "d" % en peso.
alícuota de "e" L de la solución de extracto d purificada por osmosis reversa (RO) fria a una de k" °C. Se formó inmediatamente una nube b dejó asentar. El agua de dilución superior fue la masa (PM ) pegajosa, viscosa, precip recuperada del fondo de recipiente en un rend "I" % en peso de la solución de proteina fi encontró que la proteina derivada de PMM secad contenido de proteina de "m" % (N x 6.25) en b seco (d.b.). Se dio al producto la designaci C300.
parámetros "a" a "n" para dos experimentos se pr la siguiente Tabla I :
TABLA I
n BW-SA034-J12-04A BW-SA035-J1 a 15 15 b 150 150 sobrenadante removido fue reducido en volumen mediante ultrafiltración utilizando una me polietersulfona (PES) que tiene un corte de pes de 10,000 daltons y después el concentrado fue en la misma membrana con "p" L de agua. El diafiltrado fue después pasteurizado a 60°C minutos. El concentrado pasteurizado contenia proteina en peso. Con la proteina adicional rec sobrenadante, la recuperación global de prote solución de proteina filtrada fue "r" por cient El concentrado pasteurizado fue dividido en dos iguales. Una porción fue secada por rociado par producto final que recibió la designación "n" presentaba un contenido de proteina de s"% (N base a peso seco.
parámetros "n" a "s" para dos experimentos se pr después sometida a centrifugación para remover precipitada. El concentrado resultante fue des por rociado para formar un producto final que designación "n" C200H y que tenia un contenido de "t" % {N x 6.25). Los parámetros "n" y "t experimentos se presentan a continuación en la Tabla III:
TABLA III
n BW-SA034-J12-04A BW-SA035-J1 t 91.32 92.11
io 2:
Ejemplo describe un procedimiento alternativ producción de un aislado novedoso de proteina de arina de cañóla fue agregada a una solución de sodio a temperatura ambiente y agitada durante para proporcionar una solución de proteina
minutos .
olución concentrada fue diluida en agua puri osmosis reversa (RO) fria. Se formó inmediat nube blanca que se dejó asentar. El agua d superior fue removida y la masa pegajosa, precipitada (PMM) fue recuperada ya sea decantación o bien mediante centrifugación. L secada por rociado para formar un producto final fectúo un tratamiento térmico del agua de diluci (que se conoce como el sobrenadante) , s parcialmente concentrado o bien sobrenadante con l caso en el cual el tratamiento térmico fue sobre el sobrenadante concentrado, "a" L del s fue reducido en volumen a "b" L por ultr mediante la utilización de una membrana de poli (PES) que tiene un corte de peso molecular de " producto final que recibió la designación "h" presentaba un contenido de proteina de i" % (N, base a peso seco,
parámetros "a" a "i" para seis experimentos se p la Tabla IV siguiente:
TABLA IV
h BW- BW- B - BW- BW- SA033- MS034- SD061- SD062- SD061
E10-04a E04-05A K07-05A L1-05A 126-06 a 755 36 33 451 n/a b 38 2.9 4.5 45 n/a c 100, 000 10, 000 10, 000 10, 000 n/a d 0 7 23.5 225 n/a e 15.2 5.7 6.18 8.73 n/a f 53.7 51.8 66.7 58.4 n/a
38 1.45 0 0 n a experimentos se presentan en la siguiente Tabla
TABLA V
l caso en el cual el tratamiento térmico fue sobre el sobrenadante o sobre el sobrenadante p concentrado, "1" L de sobrenadante fue reducido a "m" L por ultrafiltración utilizando una m polietersulfona (PES) que tiene un corte de pes de "n" Daltons. El sobrenadante o bien el s parcialmente concentrado fue entonces calent temperatura de 85 °C durante 10 minutos y despu a centrifugación para remover la proteina prec rociado para formar un producto final que designación "h" C200HS y que tenia un co proteina de "s" % (N x 6.25) en base a peso parámetros h" y "1" a s" para seis exper presentan en la siguiente Tabla VI:
TABLA VI
BW-SA033- BW-MS034- BW-SD061- BW-SD062- B -SD061- E10-04A E04-05A K07-05A L1-05A I26-06A n/a n/a n/a n/a 670 n/a n/a n/a n/a 670 n/a n/a n/a n/a n/a n/a n/a n/a n/a 26.4 n/a n/a n/a n/a 10, 000 n/a n/a n/a n/a 11.6 n/a n/a n/a n/a 59.3 I filtración .
alícuota de la solución de extracto de pr reducida en volumen mediante concentración en u de polietersulfona (PES) . La fracción ret entonces pasteurizada a una temperatura de 60°C minuto .
solución concentrada fue diluida en agua puri osmosis reversa (RO) fría. Se formó inmediat nube blanca. La masa pegajosa, viscosa, precip fue separada del sobrenadante por centrifugaci fue secada por rociado para formar un producto f
L de sobrenadante fue combinado con "b" kg de sodio para ajustar la concentración d aproximadamente 0.1 M. Después de la adición de fue ajustado a 3.5 mediante la adición clorhídrico diluido. La conductividad de la m a aproximadamente "d" L por ultrafiltración úti membrana de polietersulfona (PES) que tiene u peso molecular de "e" Daltons y después el conc diafiltrado en la misma membrana con f" acidificada. El concentrado diafiltrado fue fi remover cualquier proteína precipitada resi alícuota de "g" kg fue secada por rociado para producto final que recibió la designación "h" tenía un contenido de proteína de "i" por cien (N x 6.25) en base a peso seco,
parámetros "a" a "i" se presentan en la sigui
VIII:
TABLA VIII
producidos en los Ejemplos 2 y 3.
olubilidad del sobrenadante concentrado secado
(C200) y de los productos modificados (C200H
producidos a través de los procedimientos del E
el sobrenadante isoeléctricamente precipitad
I
producido por los procedimientos del Ejemp
determinada utilizando una versión modif
procedimiento de Morr et al., J. Food. Sci. 50:1
esó una cantidad suficiente de polvo de pro
suministrar 0.5 g de proteina en un rec
laboratorio y después se agregó una pequeña C
agua purificada por osmosis reversa (RO) y la
agitada hasta la formación de una pasta lisa,
entonces agua adicional para llevar el
aproximadamente 45 mi. El contenido del rec
laboratorio fue entonces agitado lentamente
dispersión de proteina de 1% peso/volumen. Una la dispersión de proteina fue rese determinación de contenido de proteina por an utilizando un Leco FA28 Nitrogen Determina porción de la muestra fue sometida a centrifuga g durante 10 minutos. Esto sedimentó el m disuelto y proporcionó un sobrenadante contenido de proteina del sobrenadante ¦ fue determinado por análisis Leco.
bilidad {%) = {Conc. de proteina de sobrenadante proteina de dispersión original) x 100
resultados obtenidos se presentan a continuac siguiente Tabla IX:
TABLA IX
Solubilidad i [%)
Producto pH 2 pH 3 pH 4 pH pH 6 se puede observar a partir de los resultados d IX, los aislados secados del sobrenadante modificado (C200H) , sobrenadante tratado térm después concentrado (C200HS) y s isoeléctricamente precipitado (C200IS) , notablemente más solubles en agua en varios val que el aislado secado del sobrenadante concent producido de conformidad con el Ejemplo 1.
pio 5:
ejemplo contiene una evaluación de la solubili aislados de proteina de cañóla secados po producidos en los Ejemplos 2 y 3 en un refr bebida deportiva.
solubilidad en un refresco (Sprite) o bebida (Orange Gatorade [Gatorade con sabor a nar sobrenadante concentrado secado por rociado resultados obtenidos se presentan en la siguiente
Tabla X
ote Producto Solubilidad (%) en Solu refresco beb carbonatado no 3-E 10- Sobrenadante concentrado (C200) 91.5
4A
43-E04- Sobrenadante concentrado (C200) 94.2
5A
43-EO4- Sobrenadante concentrado 92.0
5A modificado (C200H)
1 -K07- Sobrenadante concentrado 99.3
54A modificado (C200H)
2-L 18- Sobrenadante concentrado 100
5A modificado (C200H)
61 -126- Sobrenadante tratados térmicamente y 100
6A después concentrado (C200HS)
2- 20- Sobrenadante parcialmente 97.3
6A concentrado, después tratado
térmicamente, después concentrado
(C200HS)
io 6:
ejemplo contiene una evaluación de la claridad de los aislados de proteina de cañóla secados p producidos en los Ejemplos 2 y 3 disueltos varios valores de pH.
só una cantidad suficiente de polvo de pro proporcionar 0.5 g de proteina en un vaso de la después se agregó una pequeña cantidad de agua por osmosis reversa (RO) y la mezcla fue agitad formación de una pasta lisa. Se agregó ent adicional para llevar el volumen a aproximadame Los contenidos del vaso de laboratorio fuero agitados lentamente durante 60 minutos me utilización de un agitador magnético. El determinado inmediatamente después de la disper proteina y fue ajuste al nivel apropiado (2, 3, el espectrofotómetro . Entre menor es la lect absorbancia, mayor es la claridad,
resultados obtenidos se presentan en la siguiente
TABLA XI
A600
Lote Producto pH 2 pH 3 pH 4 pH 5 pH 6
-? 10-04? Sobrenadante concentrado 2.1 17 2.167 2.221 2.244 2.267
(C200)
-E04-05A Sobrenadante concentrado 1 .748 1.902 1.937 2.010 1.688
(C200)
-E04-05A Sobrenadante concentrado 0.185 0.210 0.237 0.493 0.518 modificado
(C200H)
-K07-05A Sobrenadante concentrado 0.080 0.085 0.079 0.212 0.432 modificado
(C200H)
-L 18-05A Sobrenadante concentrado 0.047 0.049 0.046 0.050 0.306 modificado
(C200H)
-I26-06A Sobrenadante tratado 0.043 0.050 0.052 0.367 0.649 concentrado modificado (C200H) , sobrenadant térmicamente y después concentrado (C200HS) y s isoeléctricamente precipitado (C200IS) produjo con una claridad notablemente mayor en agua valores de pH que el aislado secado prove sobrenadante concentrado (C200) . La diferenci notable en valores bajos de pH.
io 7 :
ejemplo contiene una evaluación de la cl soluciones de aislados secados por rociado pro los Ejemplos 2 y 3 disueltos en un refresco o deportiva .
laridad fue evaluada mediante la medición de la de luz visible a 600 nm por una solución de pro peso/volumen en un refresco carbonatado incoloro, transparente (Sprite) o una bebida de TABLA XII
puede observarse a partir de los resultados d XII, la claridad de las soluciones preparadas a aislado secado por rociado proveniente del s concentrado modificado (C200H) , sobrenadant térmicamente y después concentrado (C200HS) y s
plo 9:
ejemplo contiene una evaluación adiciona solubilidad de sobrenadante concentrado secado (C200), productos modificados (C200H y sobrenadante isoeléctricamente precipitado
laboratorio fue entonces lentamente agitado minutos mediante la utilización de un agitador El pH fue determinado inmediatamente despu dispersión de la proteina y se ajustó al nivel
(2, 3, 4, 5, 6 Ó 7) con NaOH o HC.l . Se preparó muestra a pH nativo. Para las muestras con pH aj pH fue medido y corregido dos veces durante la de 60 minutos. Después de 60 minutos de agit muestras fueron llevadas a un volumen total de agua purificada por osmosis reversa (RO) , pro una dispersión de proteina al 1% peso/volumen
(20 mi) de las dispersiones fueron entonces tra tubos de centrifugación previamente pesados sido secados en un horno a 105°C durante 30 después enfriados en un desecador y los tu tapados. Las muestras fueron sometidas a centri por un factor de ((100 - contenido de humedad (%))/100). Se calculó entonces la solubilidad d de la manera siguiente:
bilidad (%) = (1 - (peso del material en pellas seco/ (2/5 x peso inicial de polvo de proteina 100
resultados obtenidos se presentan en la sigui XIV:
TABLA XIV
Solubilidad (%)
Lote Producto pH 2 pH 3 pH 4 pH 5 pH 6
-J 12-04A Sobrenadante concentrado 99.0 97.7 96.0 97.2 87.5 modificado (C200H)
-J 14-04A Sobrenadante concentrado 96.2 95.7 96.0 93.3 86.2
(C200)
-J 14-04A Sobrenadante concentrado 97.1 97.3 96.6 97.2 87.9 modificado (C200H)
K07-07A Sobrenadante 99.4 100 99.3 97.8 96.3 isoeléctricamente precipitado
(C200IS)
se puede observar a partir de los resultados d XIV, el aislado secado del sobrenadante modificado (C200H) , sobrenadante tratado térm después concentrado (C200HS) y s isoeléctricamente precipitado (C200IS) fueron n más solubles en agua en varios valores de aislado secado del sobrenadante concentrado (C20 io 10:
Ejemplo contiene una evaluación de la estabili a pH 7 del sobrenadante concentrado secado p (C200), producto modificado (C200H) y s isoeléctricamente precipitado (C200IS) produci procedimientos de Ejemplos 1, 2 y 3.
esó una cantidad suficiente de polvo de pro o HC1 según lo necesario. La muestra fue enton durante 30 minutos adicionales. Después de 60 agitación, el pH fue revisado y reajustado a necesario y después la muestra fue llevada a un de 20 g con agua purificada por osmosis rev proporcionando una dispersión de proteina al 8% Las dispersiones fueron transferidas a centrifugación previamente pesados que habían i en un horno a una temperatura de 105 °C durante y después enfriados en un desecador. El p dispersión en los tubos fue registrado y d muestras fueron tapadas y tratadas térmicament su colocación en un baño maría a una temperatu durante 30 minutos. El nivel del agua fue man alto que el nivel líquido de la muestra duran proceso de calentamiento. Después del tratamien
los tubos. El material en pellas fue secad la colocación de los tubos abiertos en un una temperatura de 55°C durante la noche, siguiente, las muestras fueron transfe desecador y se dejaron enfriar. Se midió del material en pellas secado. El peso polvo de proteina inicial se calculó me multiplicación del peso en polvo utilizado por de ( (100 - contenido de humedad del polvo (%) efecto del tratamiento térmico sobre la solub producto fue calculado entonces de la manera sig polvo insoluble después de tratamiento térmico material de pella insoluble seco/dispersión e tubo de centrifugación/20) x peso inicial de proteina seco) ) x 100
resultados obtenidos se presentan en la siguiente estabilidades térmicas de las soluciones pr partir de los aislados secados por ro sobrenadante concentrado modificado (C200H sobrenadante isoeléctricamente precipitado (C20 superiores a los valores obtenidos a part soluciones preparadas a partir del s concentrado secado por rociado (C200) .
io 11:
Ejemplo contiene una evaluación de la estabili a pH 6 del sobrenadante concentrado secado p (C200), productos modificados (C200H y sobrenadante isoeléctricamente precipitado producidos por los procedimientos de los Ejemp
3.
só una cantidad suficiente de polvo de pro suministrar 0.3 g de proteína en un vaso de la necesario y después la muestra fue llevada a un de 30 g con agua purificada por osmosis rev proporcionando una dispersión de proteina al 1% Las dispersiones fueron transferidas a centrifugación previamente pesados que habían s en un horno a una temperatura de 105 °C durante y después enfriadas en un desecador. El p dispersión en los tubos fue registrado y d muestras fueron tapadas y tratadas térmicament su colocación en un baño maria a una temperatu durante 10 minutos. El nivel de agua fue man alto que el nivel de liquido de muestra durante de tratamiento térmico. Después de tratamient las muestras fueron inmediatamente enfriadas colocación en un baño de agua helada. Las mues entonces centrifu adas a 7800 durante 10 mi contenido de humedad del polvo (%))/100). entonces el efecto del tratamiento térmico solubilidad del producto de la manera siguiente: polvo insoluble después de tratamiento térmico material en pellas insoluble seco/ ( (peso de di tubo de centrifugación/30) x peso seco inicial proteina) ) x 100
resultados obtenidos se presentan en la sigui XVI :
TABLA XVI
Muestra % de polvo inicial insoluble tratamiento térmico -J 12-04A C200 19.6
-J 12-04A C200H 9.0
-J14-04A C200 27.5
-J14-04A C200H 13.7
-El 0-04 A C200 30.4
por rociado (C200) .
plo 12:
Ejemplo contiene una evaluación de la solubilid y una salinidad de NaCl 0.10M de sobrenadante secado por rociado (C200) , producto modificado sobrenadante isoeléctricamente precipitado producido por los procedimientos de los Ejemp 3.
esó una cantidad suficiente de polvo de pro suministrar 0.5 g de proteina en un vaso de la después se agregaron aproximadamente 45 g de N El contenido del vaso de laboratorio fue agita 30 minutos mediante utilización de un agitador Se ajustó entonces el pH a 3.5 mediante adición muestra fue entonces agitada durante 3 adicionales. En este momento, el pH fue registrado y los tubos fueron tapados. Las mues centrifugadas a 7800 g durante 10 minutos sedimentó el material insoluble. Los sobrenada decantados de los tubos (obsérvese que se ciertas pérdidas menores de material de pella p muestras en donde no se obtuvieron pellas compactas) y las tapas de los tubos fueron dés material en pellas fue secado durante la noc horno ajustado a 55°C. La mañana sigu tubos fueron transferidos a un desecador que enfriaran. Se registró el peso del ma en pellas. El peso seco del polvo de inicia fue calculado mediante la multíplic peso de polvo utilizado por un factor d contenido de humedad del polvo (%))/100). entonces el efecto del pH y la concent Muestra % de polvo inicial insoluble en N
3.5
-J 12-04A C200 4.1
-J12-04A C200H 1.4
-J 14-04A C200 9.4
-J 14-04A C200H 2.6
- 10-04A C200 19.1
-K07-05A-C200H 1.6
- 07-07A C200IS 0.8
se puede observar a partir de los resultados d XVII, los aislados secados provenientes del s concentrado modificado (C200H) y s isoeléctricamente precipitado (C200IS) fueron n más solubles en solución salina a pH 3.5 que secado del sobrenadante concentrado (C200) .
io 13:
Ejemplo contiene una evaluación de la hid superficial del sobrenadante concentrado s espectrofluorimetro con la hidrofobicidad (So) proteínas determinándose mediante el cálcu pendiente de intensidad de fluorescencia rela neta. Entre más elevada es la So, más hidrofó proteína, puesto que el colorante es atraído a hidrofóbicos en la molécula de proteína.
o que la proteína derivada de sobrenadante (C200) contiene un porcentaje mayor de globuli encontró que este aislado contenía u hidrofobicidad según la prueba de ANS. Las gl cañóla se consideran bastante hidrofóbicas y se era el caso. Los productos modificados produje más bajos como se esperaba con los niveles re proteínas globulina. El componente principal aislados es la albúmina napina. Esta proteína e lo que resulta en una hidrofobicidad superficial
se puede observar a partir de los resultados d XVIII, los aislados secados del sobrenadante modificado (C200H) , sobrenadante tratado térm después concentrado (C200HS) y s isoeléctricamente precipitado (C200IS) fueron n menos hidrofóbicos que el aislado secado del s concentrado (C200) . Además, los resultados mues hidrofobicidad superficial se relaciona linealm contenido de globulinas.
io 14 :
Ejemplo contiene una evaluación de la absorbanc de soluciones de proteína 1 mg/ml de s concentrado secado por rociado (C200) , modificados (C200H y C200HS) y s isoeléctricamente precipitado (C200IS) producid procedimientos de los Ejemplos 1, 2 y 3.
clarificadas por centrifugación a 7800 g minutos y después los sobrenadantes fueron tra una cubeta de cuarzo y la absorbancia a 280 nm mediante la utilización del amortiguador de fo blanco .
resultados obtenidos se presentan en la sigui XIX:
Tabla XIX
Muestra Absorbancia a 280 n -J 1 2-04A C200 0.694
-J 12-04A C200H 0.656
-J 14-04A C200 0.710
-J 14-04A C200H 0.654
-E10-04A C200 0.700
-I26-06A-C200HS 0.668
-K07-07A C2001S 0.61 1
se puede observar a partir de los resultados de XIX, las soluciones preparados a partir del s proteina 7S, que es útil para la producción acuosas claras, particularmente en bebidas marco de la presente invención se modificaciones .