JP2011520975A

JP2011520975A - ピリミジンの非古典的カンナビノイド化合物及び関連する使用方法

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Publication number: JP2011520975A
Application number: JP2011510660A
Authority: JP
Inventors: セカンドムーア，ボブ，エム．，ザ; ガーリー，スティーブン; ムスタファ，スニ; アリソン，パトリック
Original assignee: ユニヴァーシティオブテネシーリサーチファウンデーション，ザ
Priority date: 2008-05-19
Filing date: 2009-05-19
Publication date: 2011-07-21
Also published as: US20090286810A1; CA2724737A1; WO2009143183A1; US8541431B2; EP2299823A1

Abstract

式（I）の化合物を開示する。式Iにおいて、R₁、R₂、Ｖ、Ｗ、Ｘ、Ｙ及びＺは、明細書中にて定義される通りであってもよい。化合物は、カンナビノイド受容体によって仲介される疾患の治療に用いられてもよい。
【化１】

【選択図】なし

Description

本願は、２００８年５月１９日に出願された出願番号61/128,127の優先権の利益を主張するものであり、その出願の全てを併合するものである。

古典的カンナビノイドであるデルタ‐９‐テトラヒドロカンナビノール（Δ^９-THC）は、カンナビスサティバ（Cannabis sativa）から抽出される主要な有効成分である。カンナビノイドの効果は、特異的高親和性受容体との相互作用による。現在、２つのカンナビノイド受容体が特定されている。すなわち、CB-１、つまり哺乳類の脳及び末梢組織における他の多くの部分で見出される中枢受容体、及びCB-2、つまり主に免疫システムに関連する細胞において見出される末梢受容体である。さらに、近年、GPR35及びGPR55というオーファン受容体が、カンナビノイド型リガンドと結合することが報告され、三つ目の受容体の亜型として紹介された。CB-１受容体は、古典的カンナビノイドと関連する精神活性を仲介すると考えられている。これらの受容体の特性評価は、アゴニストWIN 55212-2等の特異的合成リガンドの開発によって可能となった（D'Ambra et al, J. Med Chem. 35:124 (1992)) 及び CP 55,940 (Melvin et al, Med Chem. 27:67 (1984))。

薬理学的に、カンナビノイドは、中枢神経系、心臓血管、免疫システム及び／又は内分泌系等の様々な標的に影響を与えるために使用可能である。特に、CB-1又はCB-2受容体及び潜在的にGPR35及びGPR55受容体に親和性を持つ化合物は、抗がん剤、抗肥満薬、鎮痛剤、筋弛緩剤及び抗緑内障薬として有用である。これらの化合物は、同様に、胸腺の疾患、嘔吐、様々な神経障害、記憶障害、運動障害、片頭痛治療、多発性硬化症、ぜんそく、てんかん、虚血、苦痛、起立性低血圧、骨粗しょう症、肝線維症、炎症及び過敏性大腸症、並びに心不全の治療に使用可能である。

しかしながら、Δ⁹-THC等のカンナビノイドは、同様に細胞膜に作用して、眠気、物アミンオキシダーゼ機能の障害、及び非受容体介在性の脳機能の障害等の望ましくない副作用を引き起こす。カンナビノイドには、依存性及び向精神性を有するものもあり、これらはその治療価値を制限する傾向がある。

構造が同定された多くの非古典的ビアリル及びトリアリルカンナビノイドが、Makriyannis らのUS特許番号7,057,076に記載されている。Makriyannisは、２個以上の化合物に対する様々な結合親和性を同定しているが、ＣＢ−１及びＣＢ−２受容体の両方における個々の化合物の結合データを示すサポートデータを何も示していない。よって、それらの化合物が、他の受容体に対するよりも、ある受容体に対して選択性が高いかどうかを評価することは難しい。

本技術分野においては、古典的又は非古典的カンナビノイドのアナログが、現在継続して求められている。アナログは、CB-1 受容体及び／又はCB-2受容体により仲介される疾患及び障害の処置という治療上の目的に使用可能である。

前述の課題に鑑みて、本発明は、様々な複素環カンナビノイドアナログ化合物、組成物、及び／又は関連する方法を提供することを目的とし、それによって、上記に外接した技術を含む従来技術の様々な欠如及び欠陥を克服する。当業者は、本発明の１つ又は複数の側面がある目的を達成でき、その一方で他の１つ又は複数の側面が他の目的を達成できることを理解するであろう。それぞれの目的は、その全ての点において、本発明の全ての側面に等しく当てはまるものではない。下記の目的は、本発明のいずれの側面に対しても適用されると考えられる。

カンナビノイド及びヒト細胞及び組織に存在する関連受容体に対する親和性を示す１又は複数種類のカンナビノイド化合物を特定することも、本発明の目的となり得る。

Ｂ環ピリミジン系を備える１又は複数の新たなピリミジン非古典的カンナビノイド受容体リガンドを提供することも本発明の目的となり得る。このような化合物は、ビアリル又はトリアリル環系を備えることができる。

治療での使用用のカンナビノイド受容体選択性を示すこれらの化合物の同定も、本発明の他の目的となり得る。

本発明の他の目的、特徴、利益及び利点は、本概要及び下記の実施形態の説明によって明白であり、種々のカンナビノイド化合物及び関連する治療法方の知識を有する当業者にとって、容易に理解できるであろう。このような目的、特徴、利益及び利点は、以下に示される付随の例、データ、図及び全ての妥当な推論単独で又は本明細書に取り込まれる文献の考慮を伴って、結合されることは、明白であろう。

１つに、本発明は、下記式（Ｉ）で表される化合物から選択あれるカンナビノイドアナログ化合物を対象としてもよい。

式Ｉにおいて、Xは、H、置換された及び置換されていないアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アリル、アリルアルキル、ヘテロアリル、ヘテロアリルアルキル、ヘテロシクロアルキル、及びヘテロシクロアルキルアルキルから選択されてもよく、各アルキル部分は任意に３回以下で置換されていてもよく、それぞれの環部分は、１、２、３、４、又は５個の置換基によって任意に置換されていてもよく；ＹはＳ，Ｏ，ＣＨ_２，CH(CH₃)，CH(OH), C(CH₃)(OH), C(CH₃)₂, C(-U(CH₂)_nU-), C(O), NH, S(O),及びS(O)₂から選択されてもよく；ｎは１以上の整数であり、好ましくは１〜６であり；UはCH₂, S及びOから選択されてもよく；ＺはＨ、置換された及び置換されていないアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アリル、アリルアルキル、ヘテロアリル、ヘテロアリルアルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキルから選択されてもよく、それぞれのアルキル部分は任意に３回以下で置換されていてもよく、それぞれの環部分は、１、２、３、４、又は５個の置換基によって任意に置換されていてもよく；R₁及びR₂は、独立して、H、並びに置換された及び置換されていないアルキルから選択されてもよい。

また、本発明は、本書に示すように、化合物の塩を対象とすることができる。

また、本発明は、本書に示すように、化合物のプロドラッグを対象とすることができる。

本発明はまた、以下に説明される化合物、その塩及び／又はプロドラッグ、並びに医薬的に許容されるキャリア成分を含有する医薬組成物を対象とすることができる。

本発明は、カンナビノイド受容体の活性を修飾する方法を対象としてもよい。このような方法は、カンナビノイド又は関連レセプター、その塩及び／又は化合物における活性を有する、本発明の若しくは本書に説明する他の化合物、塩及び又はプロドラッグを提供すること；並びに、細胞及び／又は細胞のカンナビノイド受容体とこのような化合物とを接触させること、を備えてもよい。下記に示すように、このような接触は、カンナビノイドの活性を少なくとも部分的に修飾する少なくとも部分的な効果を奏することができる。

本発明はまた、カンナビノイド受容体介在疾患の治療方法を対象としてもよい。このような方法は、カンナビノイド受容体における活性を有する、本書に示す化合物又は本書に示す他の化合物、その塩及び／又はプロドラッグを提供すること；並びに、患者に、カンナビノイド受容体介在疾患を治療する少なくとも部分的な効果を有する、化合物、塩及び／又はプロドラッグを所定量投与すること；を備えてもよい。本発明のこの側面は、CB-1 及び／若しくは CB-2（又は関連する）受容体の過活性又はCB-1 及び／若しくは CB-2（又は関連する）受容体の非活性又は低活性が介在する病状を治療又は抑制するための、CB-1若しくは関連受容体のアゴニスト、CB-1若しくは関連受容体のアンタゴニスト、CB-2若しくは関連受容体のアゴニスト、並びに／又はCB-2若しくは関連受容体のアンタゴニストの使用に関連してもよい。

本発明はまた、下記式の化合物から選択される化合物を対象としてもよい。

式Iにおいて、Ｘは、アルキルであってもよく、フェニル、ベンジル、シクロヘキシル、チオフェニル及びピリジニルから選択されてもよく、それぞれの環部分は、ハロ、アルキル、及びアルコキシ部分から独立して選択される１〜５個の置換基によって任意に置換されていてもよく；Ｒ_１及びＲ_２は、独立して、Ｈ又はアルキルから選択されてもよく；Ｙは、カルボニル、ジメチルメチレン及びヒドロキシメチレン部分から選択されてもよく；Ｚは、アルキルであってもよく、シクロアルキル、フェニル及びチオフェニルから選択されてもよく、これらはそれぞれ、任意に、１〜５個の置換基で置換されていてもよく、置換基は本発明を知った当業者により理解され、本書のどこかに記載されたものを包含するが、それに限定されない。ある実施形態において、Ｘは、クロロ、メチル及びメトキシ置換基から独立して選択される１〜５個の基で任意に置換されたフェニルから選択されてもよい。このような実施形態において、Ｚは、アルキル、シクロアルキル又はフェニル部分であってもよく、任意に、Ｘは、ベンジル又はジクロロフェニル部分であってもよい。このような化合物は、いずれも、このような化合物の塩及び／又はプロドラッグから選択されてもよい。単独の又は複数のこれらの化合物は、ある量で、成長細胞の死を引き起こす効果を少なくとも部分的に奏する。

本発明は、限定されることなく、同様に、がんの治療方法を対象とすることができる。このような方法は、がん細胞の成長細胞等のカンナビノイド受容体を有するがん細胞を準備することと；このような成長を式Ｉに示す化合物から選択されるカンナビノイド化合物と接触させることとを備えていてもよい。

式Ｉにおいて、Ｒ_２、Ｘ、Ｙ及びＺは、上述した通りであってもよい。実施形態において、Ｘは、アルキルであってもよく、フェニル、シクロヘキシル、チオフェニル及びピリジニルから選択されてもよく、これらはそれぞれ、任意に、ハロ、アルキル及びアルコキシ部分から選択される１〜５個の置換基で置換されていてもよく；Ｒ_１及びＲ_２は、独立して、Ｈ又はアルキルから選択されてもよく；Ｙは、カルボニル、ジメチルメチレン及びヒドロキシメチレンから選択されてもよく；Ｚは、アルキルであるか、又はシクロヘキシル、フェニル及びチオフェニルから選択されてもよく、これらはそれぞれ、任意に、１〜５個の置換基で置換されていてもよく、置換基は本発明を知った当業者により理解され、本書のどこかに記載されたものを包含するが、それに限定されず；単独の又は複数の化合物について、これらの化合物の塩及びプロドラッグ及びそれらの組み合わせは、ある量で、成長細胞の死を引き起こす効果を少なくとも部分的に奏する。ある実施形態で、X及びZは、クロロ、ヒドロキシ及びメトキシから独立して選択される１〜５個の基で、任意に置換されたフェニルであってもよい。このような実施形態において、R₁及びR₂は、独立して、H及びメチル部分から選択されてもよい。このような実施形態において、R₁及びR₂の少なくとも一方は、メチル以外の基であってもよい。本書で説明されるように、かつ限定されることなく、Yはいずれも、カルボニル又はジメチルメチレンであってもよい。

CB-1受容体における化合物６ｈの機能活性を示す。 CB-２受容体における化合物６ｈの機能活性を示す。 TNF-αの存在下及び非存在下におけるEC1及びEC10での化合物６ｇに暴露されたA549細胞による４時間及び１８時間後のG-CSFの分泌結果を示す。 TNF-αの存在下及び非存在下におけるEC1及びEC10での化合物６ｇに暴露されたA549細胞による４時間後及び１８時間後のIL-１βの分泌結果を示す。 TNF-αの存在下及び非存在下におけるEC1及びEC10での化合物６ｇに暴露されたA549細胞による１８時間後のIL-6の分泌結果を示す。 TNF-αの存在下及び非存在下におけるEC1及びEC10での化合物６ｇに暴露されたA549細胞による４時間後のIL-6の分泌結果を示す。 TNF-αの存在下及び非存在下におけるEC1及びEC10での化合物６ｇに暴露されたA549細胞による１８時間後のIL-8の分泌結果を示す。 TNF-αの存在下及び非存在下におけるEC1及びEC10での化合物６ｇに暴露されたA549細胞による４時間後のIL-8の分泌結果を示す。 TNF-αの存在下及び非存在下におけるEC1及びEC10での化合物６ｇに暴露されたA549細胞による４時間後及び１８時間後のMCP-Iの分泌結果を示す。 TNF-αの存在下及び非存在下におけるEC1及びEC10での化合物６ｇに暴露されたA549細胞による４時間後のMIFの分泌結果を示す。 TNF-αの存在下及び非存在下におけるEC1及びEC10での化合物６ｇに暴露されたA549細胞による１８時間後のMIFの分泌結果を示す。 TNF-αの存在下及び非存在下におけるEC1及びEC10での化合物６ｇに暴露されたA549細胞による１８時間後のRANTESの分泌結果を示す。 TNF-αの存在下及び非存在下におけるEC1及びEC10での化合物６ｇに暴露されたA549細胞による４時間後のRANTESの分泌結果を示す。

本発明に包含される新規の化合物は、上述の一般式Iで表される化合物、塩及びプロドラッグ並びに／又はその医薬組成物である。

本発明において、「アルキル」とは、１〜２０個の炭素原子を有する直鎖又は分岐鎖アルキル基を意味する。任意に、本発明におけるアルキル基は、１又は複数の二重結合及び／又は１又は複数の三重結合を含有していてもよい。

「シクロアルキル」は、３〜１２個の炭素原子を有する炭素環基を意味する。シクロアルキルは、単環でもよく、多数の環が融合した系であってもよい。任意に、本発明のシクロアルキル基は、１又は複数の二重結合及び／又は１又は複数の三重結合を含有していてもよい。

「複素環」とは、縮合環系を包含し、窒素、酸素又は硫黄及びその組み合わせから選択される少なくとも１個かつ４個までのヘテロ原子を含有する、４、５、６又は７員環の１又は複数の複素環系を意味する。

「アリル」は、少なくとも１つの環が芳香環である、単環、多環、又は縮合環を有する芳香族炭素環系を意味する。

「ヘテロアリル」は、縮合環系を包含し、窒素、酸素、又は硫黄及びそれらの組み合わせから選択される少なくとも１個かつ４個までのヘテロ原子を含有する、３〜１２個の原子を有する１又は複数の芳香族環系である。

「アリルアルキル」は、アリル基によって置換されたアルキル基であり、結合部分がアルキル鎖の炭素である。

本書において、「置換された」は、当業者にとって理解されるような置換を意図する。少なくとも１個の、及び５個程度の置換基が、１個の基に存在してもよい。置換基の例として、ハロ、アルキル、アルコキシ、ヒドロキシ、アリル、ヘテロアリル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、シアノ、ニトロ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、チオール、アルキルチオール、ハロアルキル（例えばトリフルオロメチル）、カルボキシ、アルキルカルボキシ、カルバモイル等が挙げられるが、これらに限定されるものではない。

１つの観点からは、代表として、非限定的なピリジンピリミジンアナログが、下記スキーム１に示す逆合成式に基づいて、中間化合物の反応から調製されてもよい。

スキーム１において、R₃及びR₄は、メチル、エチル及びトリクロロフェニルから選択される。IIに関連する化合物は、スキーム２に描かれ、参照することで本書に組み込まれるYip, et al. See, Org. Lett 9:3469に記載されるように、ナトリウムエトキシド等の塩用いたマロン酸エステルの直接アルキル化又は銅触媒カップリングをを含む標準的な手法によって、適切なジアルキル又はジアリルマロン酸から予め調製される。

スキーム３に示すように、中間体IIIは、芳香族及び脂肪族ニトリル類から、メタノール／ＨＣｌ、次いでＮＨ_３を含む公知の化学反応により、又はアミノ‐クロロ‐メチル‐アルミニウムを用いた直接変換によって、予め調製される(参照することで本書にその全体が組み込まれるSee, e.g., Moss, Tet. Lett. 36:8761を参照のこと)。

マロン酸エステル中間体は、通常、スキーム４に示す合成プロトコルに沿って、調製可能である。

中間アミジンは、市販のニトリルから、スキーム５に示すように、調製可能である。

このように調製されたアミジン及びマロン酸エステルをナトリウムエトキシド等の塩基の存在下で結晶化することで、目的の化合物Ｉが得られる（スキーム６）。

Ｙにgem−ジアルキル、複素環式、又は炭素環式置換基を含有する誘導体は、その化合物は市販されていないが、メチレンニトリルの直接アルキル化（Makriyannisの米国特許番号7,057,76及び公開番号2004/087590を参照のこと。これらの文献の全体は、参照されることで、本書に組み込まれる）又は適切に置換されたアリル、ヘテロアリルハロゲン及びイソプロピルニトリルから調製される（参照されることで全体が本書に組み込まれる、2003年8月21日出願の米国公開番号2005/0065033を参照のこと)。スキーム７及び８は、この化学反応の典型であるが、この化学反応の範囲に限定されるものではない。

Ｙにケト、ヒドロキシ、アルキルヒドロキシ置換基を含有する誘導体は、Ｙ＝ＣＨ_２を有する化合物の直接酸化によって、又はＣ２アルデヒドピリジンから調製され、既に報告されている化学反応を用いて、２，２−ビス−エチルスルファニル−アセトアミジン及び適切に置換されたマロン酸エステルから調製される（スキーム９）（参照されることで本書にその全体が組み込まれる米国特許番号 7,169,942を参照のこと）。

いくつかの代表的な、しかし非限定的な化合物の合成が本書で述べられるが、他の種々の化合物が同様の手法及び／又はその単純な変更を用いることで調製され得ることを、当業者は理解するであろう。すなわち、Ｘ、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｙ及びＺ部分の特性は、それぞれの試薬、出発物質、中間体及びそれらの化学的性質によってのみ限定される。様々な他の部分及び/又は置換基は、上述の同時係属出願に記載されたものを含むがこれらに限定されない。

上述した同時に継続する出願に記載されたように、本発明は、より広くは、種々の他のこのような化合物、その塩及び／又はプロドラッグを、それらに対応する医薬組成物と共に、検討する。このような化合物、塩、プロドラッグ、及び／又は医薬組成物は、本書に記載するように使われてもよい。例えば、本発明は、CB-1受容体及びCB-2受容体の一方又は両方の活性を修飾するために使われてもよい。このような方法は、細胞及び／又はそのカンナビノイド受容体と、本発明の化合物とを接触させることによって実行されてもよく、このような接触は、ｅｘｖｉｖｏかｉｎｖｉｖｏかに関わらず、このようなカンナビノイド受容体の活性を少なくとも部分的に修飾する少なくとも部分的な効果を有する。

より一般的には、本発明の化合物及び／又は組成物の種々の薬理学的及び／又は治療上の利点は、同時継続する前述の出願で述べられた情報を考慮して理解可能である。本発明のアナログは、本書に記載するように、幅広い症状の治療に薬理学的に効果のある量で投与され得る。限定されることなく、種々の症状及び／又は病状は、発明の名称が「トリ−アリル／ヘテロ芳香族カンナビノイド及びその使用（Tri-Aryl/Hetero aromatic Cannabinoids and Use Thereof）」で、２００８年３月３日に出願された、同時継続する出願番号12/074,342の段落００６７に記載され、その全体は、本書に組み込まれる。

従って、本発明は、本書に記載される化合物を提供すること（このような化合物は、カンナビノイド受容体での活性を示す）；並びに、そのような化合物にカンナビノイド受容体を有する細胞を接触させること、及び／又は患者にそのような化合物を投与すること（このような化合物は、カンナビノイド受容体／仲介疾患を治療するために少なくとも部分的に効果的な量で用いられる）を備える方法を対象としてもよい。このようなカンナビノイド受容体は、本書に記載される受容体であってもよく、本発明を知った当業者によって理解され、実現されてもよい。

医薬組成物若しくは治療の一部に若しくは一部として示されるように、受容体が効果的な量の１つ若しくは複数の本発明の化合物と接触することによって、又は、効果的な量の１つ又は複数の化合物とそのような受容体を有する細胞を接触させることにより、化合物が細胞内で受容体と接触し、カンナビノイド及び関連受容体の活性は、影響を受け、仲介され、及び／又は修飾され得る。接触は、ｉｎｖｉｔｒｏであっても、ｉｎｖｉｖｏであってもよい。すなわち、当業者によって理解されるように、「接触」とは、カンナビノイド及び／又は関連受容体と、１又は複数の化合物と、このような化合物が、受容体の活性に結合、影響、又は修飾するように、引き合わされることを意味する。受容体の活性を修飾する及び／又はそれに影響を与える１又は複数の化合物の効果的な量は、実験的に決定され、このような決定を行うことは、当該技術分野の技術の範囲である。

限定されることなく、本発明のアナログ化合物は、同時継続している前述の‘３４２出願の実施例２に記載されている受容体結合アッセイにおいてｅｘｖｉｖｏで使用され得る。本発明のアナログ化合物のｉｎｖｉｔｒｏ活性は、その同時継続出願の実施例３に記載されているものと同じ方法によって実証され得る。また、ｉｎｖｉｖｏ活性は、その実施例４及び６に記載されたプロトコルを用いても実証され得る。より具体的には、ヒト肺, 前立腺, 結腸直腸及び膵癌の細胞株に対する、本発明の種々の代表的な化合物の抗がん活性は、上述の同時継続の’３４２出願の実施例９に記載された方法を用いることで確認可能である。このような方法を拡大して、本発明は、同様に中枢神経系のがん成長を治療すること、及び／又はそのような成長における細胞死を誘導することに用いられてもよい。本発明によると、本書に記載される多様なカンナビノイド化合物は、上述されたものを含むがそれらに限定されず、ヒトの緑内障及び／又は脳腫瘍の治療方法と関連して用いられてもよい。このような実施形態を描く上で、同時継続出願で記載されたように、ヒト脳腫瘍に接触させ及び／又は治療することに本発明の１又は複数の化合物が提供され使用され得、このような接触及び／又は治療は、細胞死及び／又は関連する効果によって証明される。

下記の非限定的な実施例及びデータは、本書に示す手法を通じて利用可能である通り、ピリミジンの非古典的カンナビノイド受容体リガンド及び／又は化合物の合成を含む、本発明の化合物、組成物及び／又は方法に関連する種々の側面及び特徴を説明する。従来技術と比べて、本発明の化合物及び方法は、驚くべき、予想外かつ従来技術に反する結果及びデータを提供する。本発明の利用可能性がいくつかの化合物、部位及び／又はそれらの置換物の調製及び使用を通じて説明されるが、当業者は、同程度の結果が、本発明の範囲に応じて、他の種々の化合物、部位及び／又は置換物によって得られることを理解する。全ての化合物は、ChemBioDraw Ultra Version 11.0.01を用いて命名された。

2-メチル-2-（チオフェン−2-イル）プロパンニトリル（１ａ）
2-（チオフェン-2-イル）アセトニトリル（１ｇ、８．１３ｍｍｏｌ）の４ｍｌの無水ＴＨＦの溶液に、ＫＨＭＤＳ（２４．４ｍｍｏｌ、４８．９ｍｌ、０．５Ｍトルエン溶液）を０℃で添加した。混合物を３分間撹拌し、１６．２６ｍｍｏｌヨードメタン（１．１３ｍｌを無水ＴＨＦ２６ｍｌに添加したもの）を１０分かけて添加した。混合物を５分間撹拌し、ＴＬＣによってモニターした。完了次第、含水塩化アンモニウムによって反応を停止した。有機相を、酢酸エチルによって分離し、硫酸ナトリウムによって乾燥させた。生成物を、真空蒸留によって精製した（１トールにおける沸点は４２℃）。収率：８９％。 ^１ＨＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ（ｐｐｍ）７．４ｐｐｍ（ｄ，１Ｈ）、７．２ｐｐｍ（ｔ，１Ｈ）、７．０ｐｐｍ（ｄ，１Ｈ）、１．９ｐｐｍ（ｓ，６Ｈ）。

実施例１ｂ
同様に、下記化合物を合成した。

２，2-ジメチルオクタンニトリル（１ｂ）
真空蒸留によって精製（１．１トールでの沸点が５０〜５５℃）。収率：８４％Ｉ．Ｒ．（ｎｅａｔ）ニトリル２２３０ｃｍ^−１，^１ＨＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ（ｐｐｍ）１．５ｐｐｍ（ｍ，４Ｈ）。１．４〜１．３ｐｐｍ（ｍ，１２Ｈ）、０．９ｐｐｍ（ｓ，３Ｈ）。

実施例２ａ

2-メチル-2‐フェニルプロピオンニトリル（２ａ）
フルオロベンゼン（５．８５ｍＬ，６２．４ｍｍｏｌ）の１００ｍＬの無水トルエン溶液にイソブチロニトリル（２２．５ｍＬ，２５０ｍｍｏｌ）を添加し、次いで２００ｍＬの０．５ＭＫＨＭＤＳのトルエン溶液（１００ｍｍｏｌ）を添加した。反応液を８０℃で２４時間撹拌した。反応液を室温で冷却し、ジエチルエーテルで希釈し、水及び食塩水で洗浄した。有機分画を硫酸ナトリウムで乾燥させて、減圧下で濃縮した。生成物を酢酸エチル/ヘキサン勾配を用いたフラッシュクロマトグラフィーで精製し、茶色い油状の目的の化合物を４．５７ｇ（５０％）の収量で得た。ＭＳ：（ＥＳＩ，Ｐｏｓ）ｍ／ｚ１６８．０（Ｍ+２３） ^１ＨＮＭＲ（５００ＭＨｚ，CDCｌ_３）：δ（ｐｐｍ）７．４８（ｄ，２Ｈ），７．３９（ｔ，２Ｈ），７．３１（ｔ，１Ｈ），１．７３（ｓ，６Ｈ）。

実施例２ｂ
同様に、下記化合物を合成した。

２-メチル-２-ピリジン-２-イル-プロパンニトリル（２ｂ）
２-メチル-２−フェニル-プロパンニトリルと同様の方法で、２-ブロモピリジンを出発物質として、茶色い油状の生成物を得た。ＭＳ：（ＥＳＩ，Ｐｏｓ）ｍ／ｚ１６８．９（Ｍ+２３）。

実施例２ｃ

２‐シクロヘキシル‐２‐メチルプロパンニトリル（２ｃ）
無色の油、収率：89% MS:(ESI,Pos.) 174.0 (M+1) ¹HNMR(500MHz,CDCl₃):∂(ppm) 1.81-1.89(m,4H), 1.7(m,1H), 1.19-1.34(m,7H), 1.07-1.28(m,5H)。

実施例３ａ

2-フェニルアセトアミジン (３ａ)
塩化アンモニウム(2.9 g, 54 mmol)を20 mLの無水トルエンに懸濁し、アルゴン下で撹拌し、０℃まで冷却した。この懸濁液に25 ml (50 mmol) の 2Mのトリメチルアルミニウムのトルエン溶液を添加した。反応液を室温に温め、メタンの発生が停止するまで、撹拌した（〜１時間）。そして、3.46 mL (30 mmol) のシアン化ベンジルの10 mLの無水トルエン溶液を添加し、反応液を８０℃で１８時間熱した。反応液を室温に冷却し、１５ｇのシリカゲルの５０ｍLクロロホルムスラリーに静かに注ぎ、５分間撹拌した。シリカをろ過し、メタノールで洗浄した。ろ液及び洗浄液を集めて、１５ｍL以下に減らし、再度ろ過した。次いで、18 mL (54 mmol) の3NのＨＣｌメタノール溶液、さらに４００ｍＬのジエチルエーテルを、ろ液に加えた。16時間室温で撹拌した後、形成された白色の沈殿物をろ過した。この粗生成物である固体を、150 mL のイソプロパノール‐アセトンの4:1混合物に添加し、さらに１６時間室温で撹拌した。溶解しなかった塩化アンモニウムをろ過で除去し、ろ液を１５ｍＬ以下に減らした。300 mL のジエチルエーテルを加えた後、混合物を１時間撹拌した。白色の沈殿物をろ過し、乾燥することで、３．７ｇ（７２％）の目的の化合物を、塩酸塩として得た。MS: (ESI, Pos) m/z 157.9 (M+23) ¹H NMR (500 MHz, DMSO-d₆):δ(ppm) 9.06 (br.d, 3H), 7.49 (d, 2H), 7.36 (t, 2H), 7.31 (t, 1H), 3.74 (s, 2H)。

実施例３ｂ
同様にして、下記アミジンを合成した。

2-メチル-2-フェニルプロパンイミドアミド塩酸塩（３ｂ）
収率: 29% MS: (ESI, Pos) m/z 163.0 (M+l) ¹H NMR (500 MHz, DMSO-d₆):δ(ppm) 9.27 (br.s, 2H), 8.71 (br.s, 2H), 7.41 (m, 2H), 7.36 (m, 2H), 7.32 (m, 1H), 1.60 (s, 6H) ¹³C NMR (500 MHz, DMSO-d₆): δ(ppm) 175.91 , 143.27, 128.71, 127.42, 125.65, 44.06, 26.31。

実施例３ｃ

2-メチル-2-(チオフェン-2-イル)プロパンイミドアミド
- 収率: 36% MS: (ESI, Pos) m/z 169.0 (M+ 1) ¹H NMR (500 MHz, DMSO-d₆): δ(ppm) 8.8 (br.d, 3H), 7.53 (dd, 1H), 7.13 (dd, 1H), 7.04 (dd, 1H), 1.70 (s, 1H) ¹³C NMR (500 MHz, DMSO-d₆): δ(ppm) 174.75, 147.04, 127.18, 125.72, 125.48, 41.92, 27.20。

実施例３ｄ

2-メチル-2-ピリジン-2-イル-プロパンニトリル（３ｄ）
出発物質である2-ブロモピリジンから調製し、茶色の油を得た。MS: (ESI, Pos) m/z 168.9 (M+23).
実施例３ｅ

ヘキサンアミジン（３ｅ）
収率:84 MS: (ESI, Pos) m/z 115.1 (M+l) ¹H NMR (500 MHz, DMSO-d₆): δ(ppm) 9.11 (s, 2H), 8.78 (s, 2H), 2.37 (t, 2H), 1.60 (p, 2H), 1.27 (m, 4H), 0.86 (t, 3H) ¹³C NMR (500 MHz, DMSO-d₆): δ(ppm) 171.15, 31.58, 30.33, 25.96, 21.59, 13.77。

実施例４

2,2-ビス(エチルチオ)アセトイミドアミド（４）
5.16 mmolのトリメチルアルミニウム(2.6 ml, トルエンを溶媒とする2M溶液)を、2mlの無水トルエンにおける塩化アンモニウム(5.58 mmol, 300 mg)の懸濁液に５℃で静かに添加した。混合物を室温にして、メタンガスの発生が停止するまで撹拌した。3.1 mmol (500 mg) の2,2-ビス(エチルチオ) アセトイミドアミドを1 ml の無水トルエンに加えたものを添加した。混合物を８０℃で１８時間還流し、TLCはニトリルが消費されたことを示した。混合物を1.55 g シリカゲルと 5 ml クロロホルムとの混合物に注ぎ、５分間撹拌した。シリカをろ過で除き、メタノールで洗浄した。ろ液を2 mlになるまで揮散させ、ろ過にてNH₄Clを除いた。2 ml の 3N HClメタノール溶液(6 mmol)を、次いで31 ml のエチルエーテルを添加し、混合物を一晩撹拌した。得られた粗生成物である白色沈殿をろ過し、体積比率で４：１のイソプロパノール‐アセトンと混合し、室温で一晩撹拌した。不溶な塩化アンモニウムをろ過で除き、ろ液を蓋タブ２ｍｌになるように揮散させ、31 ml のエーテルと混合した。白色沈殿をろ過し、目的の生成物であることを確認した。生成物を、マススペクトロスコピー及びDMSOを用いたNMRで確認した。+MS=179m/z, ¹H NMR (500 MHz, DMSO-d₆): 9.35 ppm (d 3H, split). 5.1 ppm(s, 1H). 2.77 ppm (q, 4H). 1.27 ppm (t, 6H)。

実施例５ａ

ジエチル２-フェニルマロン酸
二口丸底フラスコに、固体であれば、ＣｕＩ（0.114 g, 0.6 mmol）、２-ピコリン酸（0.148 g, 1.2 mmol）、ＣｓＣＯ_３（5.89 g, 18 mmol）及びヨウ化アリル（6 mmol）を順次入れた。容器を真空にして、窒素で３回満たした。無水１，４-ジオキサン（10 ml）を加え、次いで蒸留マロン酸エステル(1.9 ml, 12 mmol)及びヨウ化フェニル(12 mmol)を容積的に添加した。容器を密封して７０℃に加熱した。進行をＴＬＣでモニターした後、反応液を室温まで冷却し、酢酸エチルで分離し、塩化アンモニウムで洗浄した。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、１０％EtOAc/ヘキサン混合物を用いたカラムクロマトグラフィーで精製した。収率92％、R_f= 0.41（酢酸エチル／ヘキサン＝１：９）。¹H NMR (CDCl₃,500MHz:δ7.41-7.31,m,5H),4.62(s,1H),4.25-4.15(m, 4H),1.26(t,6H), MS259(M+23)。

実施例５ｂ
同様に、下記マロン酸エステルを合成した。

ジエチル２-ｍ-トリルマロン酸エステル
収率：９２％, R_f= 0.55(酢酸エチル/ヘキサン=l:9)。¹H NMR (CDCl₃, 500 MHz:δδ7.12-7.3 (m, 4H),4.62(s,1H), 4.20-4.28(m,4H), 2.27(s,3H), 1.22-1.25 (m, 6H)。 MS 273 (M+23)。

実施例５ｃ

ジエチル２-（ピリジン-２-イル）マロン酸
収率：８８％, R_f=0.29 (酢酸エチル/ヘキサン=3:7)。¹H NMR(CDCl₃, 500MHz: δ8.5(d, 1H), 7.7(d,1H), 7.62-7.58(m,1H), 7.18-7.12(m,1H), 4.80(s,1H), 4.21-4.15(m,4H), 1.21(t,6H). MS 260(M+23)。

実施例５ｄ

ジエチル２−（チオフェン‐２‐イル）マロン酸
収率：63%, R_f=0.29(酢酸エチル/ヘキサン=l:9)。^１H NMR (CDCl₃,300 MHz:δ7.28 (d,1H), 7.1-7.0 (m,2H), 4.8 (s,1H), 4.26-4.2 (m,4H), 1.2(t,6H). MS 265(M+23)。

実施例５ｅ

ジエチル２‐シクロヘキシルマロン酸
収率：９４％, R_f=0.59(酢酸エチル/ヘキサン=1:9)。¹H NMR (CDCl₃, 500MHz : δ4.22-4.14(m,4H), 3.12(d,1H), 2.14-2.05(m,1H), 1.75-1.63(m,5H), 1.34-1.24 (m,8H), 1.20-1.20 (m,3H). MS 265 (M+23)。

実施例５ｆ

ジエチル２-ヘキシルマロン酸
収率：91%, R_f= 0.44(酢酸エチル/ヘキサン=l:9)。¹H NMR (CDCl₃, 300 MHz : δ4.11-4.40(m,4H), 331(t,1H), 1.80(m,2H), 1.38(m,2H), 1.1-1.4(m,12H), 0.8(t,3H). MS 267(M+23)。

実施例５ｇ

ジエチル２-（３-メトキシフェニル）マロン酸
MS 289 (M+23), ¹H NMR (CDCl₃, 500 MHz) δ (ppm) 7.27 (t, 1H) 6.99 (m, 3H), 4.60 (s, 1H), 4.27 (m, 4H), 3.82 (s, 3H), 1.30 (t, 6H)。

実施例５ｈ

ジエチル２-（３，５-ジクロロフェニル）マロン酸
MS 302 (M-1), ¹H NMR (CDCl3, 500 MHz) δ (ppm) 7.34 (m, 3H), 4.54 (s, 1H), 4.25 (m, 4H), 1.28 (t, 6H)。

実施例５ｉ

ジエチル２-（２，４-ジクロロフェニル）マロン酸
生成物をMS327(M+23)で同定した。

実施例５ｊ

ジエチル 2-(4-(トリフルオロメチル)フェニル)マロン酸
生成物を、MS 327 (M+23)によって同定した。

実施例５ｋ

ジエチル２-（ピラジン‐２‐イル）マロン酸
生成物をMS 261(M+23)で同定した。

実施例５ｌ

ジエチル２-（ピリミジン-２-イル）マロン酸
生成物を、MS261(M+23)で同定した。

実施例５ｍ

ジエチル２-（ナフタレン-１-イル）マロン酸
生成物をMS309(M+23)で同定した。

実施例５ｎ

ジエチル２-（１Ｈ-ピロール-３-イル）マロン酸
生成物をMS 249(M+23)で同定した。

実施例５ｏ

ジエチル２-シクロペンチルマロン酸
生成物をMS251(M+23)で同定した。

実施例６ａ

2-ベンジル-5-フェニルピリミジン-4,6-ジオール（６ａ）
金属ナトリウム (168 mg, 7.3 mmol) を8 mLの無水エタノールに溶解させた。これに、 500 mg (2.93 mmol) の2-フェニルアセトイミドアミド塩酸塩 3a を添加し、反応液を室温で５分間撹拌した。2-フェニルジエチルマロン酸５ａ (440 μL, 2.9 mmol)を加え、反応液を加熱して、一晩還流した。反応液を室温に冷却し、ろ過した。固体を数回無水エタノールで洗浄した。ろ液及び洗浄液を合わせて、体積で２倍の水で薄め5N HClでpHを〜2に調整してすることで、生成物を沈殿させた。混合物を冷却して、ろ過した。固体を数回ジエチルエーテルで洗浄し、ろ過した。収率: 14%; MP: 336.6℃ MS: (ESI, Pos) m/z 301.0 (M+23) ¹H NMR (500 MHz, DMSO-d₆): δ (ppm) 12.07 (br.s, 2H), 7.48 (d, 2H), 7.37 (m, 4H), 7.27 (m, 3H), 7.16 (t, 1H), 3.85 (s, 2H)。

実施例６ｂ
同様に、下記トリ−アリル-ヘテロアリルアナログを合成した。

5-シクロヘキシル-2-(2-フェニルプロパン-2-イル)ピリミジン-4,6-ジオール（６ｂ）
収率：39% MS: (ESI, Neg) m/z 310.9 (M-1) ¹H NMR (500 MHz, DMSO-d₆): δ (ppm) 12.59 (br.s, 2H), 7.32 (m, 3H), 7.21 (m, 2H), 2.96 (d, 1H), 1.85 (m, 1H), 1.66 (d, 6H), 1.42 (s, 2H), 1.10 (m, 7H)．
実施例６ｃ

5-シクロヘキシル-2-(2-(チオフェン-2-イル)プロパン-2-イル)ピリミジン-4,6-ジオール（６ｃ）
収率 8%, MS: (ESI, Neg) m/z 316.9 (M-1) ¹H NMR (500 MHz, DMSO-d₆): δ (ppm) 11.36 (br.s, 1H), 10.88 (br.s, 1H) 7.39 (d, 1H), 7.01 (t, 1H), 6.96 (t, 1H), 2.72 (t, 1H), 1.91 (dd, 2H), 1.72 (s, 6H), 1.61 (d, 1H), 1.36 (d, 2H), 1.18 (m, 3H)。

実施例６ｄ

5-シクロヘキシル-2-(2-シクロヘキシルプロパン-2-イル)ピリミジン-4,6-ジオール（６ｄ）
収率 1.3%, MS: (ESI, Neg) m/z 316.9 (M-1) ¹R NMR (500 MHz, DMSO-d₆): δ (ppm) 11.43 (br.s, 1H), 10.64 (br.s, 1H) 2.72 (m, 1H), 1.91 (m, 2H), 1.81 (t, 1H), 1.71 (d, 4H), 1.61 (t, 2H), 1.37 (ds, 2H), 1.23 〜 0.90 (m, 16H)。

実施例６ｅ

5-シクロヘキシル-2-(2-メチルオクタン-2-イル)ピリミジン-4,6-ジオール（６ｅ）
収率 4.5%, MS: (ESI, Neg) m/z 319 (M-1) ¹H NMR (500 MHz, DMSO-d₆): 2.72 (m, 1H), 1.92 (m, 2H), 1.70 (d, 2H), 1.61 (t, 4H), 1.37 (d, 2H), 1.23〜1.16 (m, 16H), 1.04 (m, 2H), 0.83 (m, 4H)。

実施例６f

5-(3,5-ジクロロフェニル)-2-(2-メチルオクタン-2-イル)ピリミジン-4,6-ジオール（６ｆ）
収率: 14%; MS: (ESI, Neg) 380.9 m/z (M-1) ¹H NMR (500 MHz, メタノール- d₄): δ (ppm) 7.57 (s, 2H), 7.24 (s, 1H), 1.71 (m, 2H), 1.34 (m, 5H), 1.28 (s, 6H), 1.20 (m, 3H), 0.88 (t, 3H)。

実施例６ｇ

2-(2-シクロヘキシルプロパン-2-イル)-5-(3,5-ジクロロフェニル)ピリミジン-4,6- ジオール (６ｇ）
収率:7%; MS: (ESI, Neg) m/z 379.0 (M-1) ¹H NMR (500 MHz, DMSO- d₆): δ (ppm) 7.69 (s, 2H), 7.38 (s, 1H), 1.87 (m, 1H), 1.68 (m, 3H), 1.44 (d, 2H), 1.21 (s, 6H), 1.12 (m, 3H), 0.98 (m, 2H)。

実施例６ｈ

5-(3,5-ジクロロフェニル)-2-(2-フェニルプロパン-2-イル)ピリミジン-4,6-ジオール (６ｈ)
収率: 27%; MS: (ESI, Neg) m/z 372.9 (M-1) ¹H NMR (500 MHz, DMSO- d₆): δ (ppm) 12.48 (br.s, 2H), 7.61 (d, 2H), 7.49 (s, 1H), 7.31 (m, 2H), 7.27 (m, 3H), 1.68 (s, 6H)。

実施例６ｉ

5-(3,5-ジクロロフェニル)-2-(2-(チオフェン-2-イル)プロパン-2-イル)ピリミジン- 4,6-ジオール（６ｉ）
収率: 32%; MS: (ESI, Neg) m/z 378.8 (M-1) ¹H NMR (500 MHz,DMSO-d₆): δ (ppm) 7.62 (s, 2H), 7.48 (s, 1H), 7.43 (d, 1H), 7.06 (d, 1H), 6.99 (t, 1H), 1.77 (s, 6H)。

実施例６ｊ

2-(2-メチルオクタン-2-イル)-5-m-トリルピリミジン-4,6-ジオール（６ｊ）
収率 11.2%, MS: (ESI, Neg) m/z 327 (M-1) ¹H NMR (500 MHz, DMSO-d₆): δ (ppm) 11.58(br.s, 2H), 7.26 (s, 1H) 7.22 (d, 1H), 7.19 (t, 1H), 7.01 (d, 1H), 2.91 (s, 3H), 1.68 (m, 2H), 1.28 (s, 6H), 1.24-1.07 (m, 16H), 0.853 (m, 3H)。

実施例６ｋ

2-(2-シクロヘキシルプロパン-2-イル)-5-m-トリルピリミジン-4,6-ジオール（６k)
収率 21%, MS: (ESI, Neg) m/z 325 (M-1) ¹H NMR (500 MHz, DMSO-d₆): δ (ppm) 11.55(br.s), 7.26 (s, 1H) 7.23 (d, 1H), 7.17 (t, 1H), 6.99 (d, 1H), 2.28 (s, 3H), 1.87 (t, 1H), 1.72(d, 2H), 1.44 (d, 2H), 1.20 (s, 6H), 1.18-1.06 (m, 4H), 0.99 (m, 2H)。

実施例６ｌ

2-(2-フェニルプロパン-2-イル)-5-m-トリルピリミジン-4,6-ジオール（６ｌ）
収率: 39% MS: (ESI, Neg) m/z 319.0 (M-1) ¹H NMR (500 MHz, DMSO-d₆): δ (ppm) 11.50 (br.s, 2H), 7.36 (t, 2H), 7.30 (d, 2H), 7.25 (m, 3H), 7.19 (t, 1H), 7.01 (d, 1H), 2.29 (s, 3H), 1.68 (s, 6H)。

実施例６ｍ

2-(2-(チオフェン-2-イル)プロパン-2-イル)-5-m-トリルピリミジン-4,6-ジオール（６ｍ）
収率4.3%, MS: (ESI, Neg) m/z 324.9 (M-1) ¹H NMR (500 MHz, DMSO-d₆): δ (ppm) 11.51 (br.s, 2H), 7.54 (dd, 1H) 7.23 (s, 1H), 7.20 (q, 2H), 7.06 (dd, 1H), 7.00 (m, 2H), 2.28 (s, 3H), 1.70 (s, 6H)。

実施例６ｎ

5-ベンジル-2-(2-メチルオクタン-2-イル)ピリミジン-4,6-ジオール（６ｎ）
収率 21% MS: (ESI, Neg) m/z 327 (M-1) ¹H NMR (500 MHz, DMSO-d₆): δ (ppm) 11.34 (br.s), 7.21 (m, 4H) 7.11 (m, 1H), 3.57 (s, 2H), 1.63 (dt, 2H), 1.22 (s, 6H), 1.21- 1.19 (m, 6H), 1.04 (m, 2H), 0.82 (t, 3H)。

実施例６ｏ

5-ピリジン-2-イル)-2-(2-(チオフェン-2-イル)プロパン-2-イル)ピリミジン-4,6-ジオール（６ｏ）
収率 1%, MS: (ESI, Pos) m/z 336 (M+23) ¹H NMR (500 MHz, DMSO-d₆): δ (ppm) 9.13 (d, 1H) 8.57 (t, 1H), 8.12 (t, 1H), 7.41 (q, 2H), 7.59 (dd, 1H), 6.98 (t, 1H), 1.73 (s, 6H)。

実施例６ｐ

5-ヘキシル-2-(2-メチルオクタン-2-イル)ピリミジン-4,6-ジオール（６ｐ）
収率 9%, MS: (ESI, Neg) m/z 321(M-1) ¹R NMR (500 MHz, DMSO-d₆): δ (ppm) 11.47 (br.s), 4.10 (q, 1H) 3.29 (t, 1H), 2.23 (t, 2H), 1.62 (q, 2H), 1.36 (t, 2H), 1.24 (s, 6H), 1.21-1.16 (m, 14H), 1.02 (m, 2H), 0.83 (m, 6H)。

実施例７
Ｂ‐環ピリミジン構造を有するいくつかの化合物について述べるが、他のこのような化合物は、様々なＸ，Ｙ及び／又はＺ部分を提供するために調製可能であり、このような化合物は、市販され又は合成されることで入手可能な、対応するアミジン及び／又はマロン酸エステル中間体によってのみ限定される。同様に、Ｒ_１及びＲ_２は、出発物質の選択、又は結果物であるカンナビノイド化合物における二次化学反応によって、様々である。

実施例８

2-(ビス(エチルチオ)メチル)ピリミジン-4,6-ジオール（８）
2,2-ビス(エチルチオ)アセトアミジン塩酸塩４及びジエチルマロン酸を出発物質として用いて2-ベンジルピリミジン-4,6-ジオールと同様の方法で調整することで、暗黄色のろう状の固体を得た。MS: (ESI, Neg) m/z 245.3 (M-1)。 H1 NMR: 11.7 ppm (d) 2H. 5.2 ppm (s) .69H. 4.8 ppm (s) 1H. 2.65 ppm (m) 4H. 1.17 ppm (t) 6H。続くスルファニルの酸化は、上述したように、様々なＹ部分、C(O)等を生成するために用いることができる。

受容体結合アッセイ
ヒトＣＢ-１受容体でトランスフェクトされたＨＥＫ２９３細胞由来の細胞膜と、ヒトＣＢ−２受容体でトランスフェクトされたＣＨＯ-Ｋ１細胞由来の細胞膜を調整した。１２０Ｃｉ／ｍｍｏｌの特異的活性を有する［^３Ｈ］ＣＰ５５，９４０をＰｅｒｋｉｎ-ＥｌｍｅｒＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅ社から入手した。全ての他の化合物及び試薬は、シグマアルドリッチ社から入手した。アッセイは、１．２μの孔径を持つグラスファイバーフィルター（親水性、ＧＦＣフィルター）を装着したミリポア社の９６穴プレートで行った。アッセイの前に、フィルターを０．０５％ポリエチレンイミン溶液に浸し、脱イオン水で５回洗浄した。ろ過は、９６穴吸引多岐管（ミリポア社）にて行い、実験の最後にフィルターをピペットチップでシンチレーションバイアル中に直接打ち抜き、バイアルを５ｍｌのシンチレーションカクテルエコライト（＋）（フィッシャーサイエンティフィック社）で満たした。測定は、ベックマン社のシンチレーションカウンターＬＳ６５００モデルで行った。薬物溶液は、ＤＭＳＯ中で調製し、放射性リガンドをエタノール中に溶解させた。

インキュベーションバッファー：５０ｍＭＴＲＩＳ-ＨＣｌ，５ｍＭＭｇＣｌ_２，２．５ｍＭＥＤＴＡ，０．５ｍｇ／ｍｌ脂肪酸フリーの牛血清アルブミン，ｐＨ７．４。

CB-1 受容体への結合プロトコル：８μｇの細胞膜（インキュベーションバッファーでの１：８希釈液２０μｌ）を、５μｌの薬物溶液（１０^−４Ｍ〜１０^−１２Ｍ）及び５μｌの５．４ｎＭ［^３Ｈ］ＣＰ５５，９４０と共に、合計体積を２００μｌとして、３０℃で９０分インキュベートした。非特異的結合を１０μＭのＷＩＮ５５，２１２-２（Ｋ_ｉ＝４．４ｎＭ）を用いて決定した。細胞膜をろ過紙、フィルターを０．２ｍｌの氷冷インキュベーションバッファーで７回洗浄し、減圧下で空気乾燥した。

ＣＢ−２受容体への結合プロトコル：１５．３μｇの細胞膜（インキュベーションバッファーでの１：２０希釈液２０μｌ）を、５μｌの薬物溶液（１０^−４Ｍ〜１０^−１２Ｍ）及び５μｌの１０ｎＭ［^３Ｈ］ＣＰ５５，９４０と共に、合計体積を２００μｌとして、３０℃で９０分インキュベートした。非特異的結合を１０μＭのＷＩＮ５５，２１２-２（Ｋ_ｉ＝４．４ｎＭ）を用いて決定した。細胞膜をろ過紙、フィルターを０．２ｍｌの氷冷インキュベーションバッファーで７回洗浄し、減圧下で空気乾燥した。

データの蓄積及び統計分析：１０^−４Ｍから１０^−１２Ｍまでの様々な濃度の薬物を添加した試料を各実験について３点ずつ用意し、個々のモル濃度におけるＩＣ５０値をＧｒａｐｈＰａｄＰｒｉｓｍを用いて決定した。各薬物の対応するＫ_ｉ値をチェン-プルソフ式を用いて決定し、最終データは２点以上の実験のＫ_ｉ±Ｓ．Ｅ．Ｍ．で表される。

機能アッセイ：環状ヌクレオチド感受性カチオンチャネル及びヒトＣＢ‐１又はＣＢ‐２受容体でステイブルトランスフェクトされたＨＥＫ-293細胞株（ＢＤバイオサイエンス社、サンノゼ、ＣＡＵＳＡ）を、ポリ‐D‐リジンでコートされた９６穴プレートに、細胞７００００個／穴の密度で蒔いた。アッセイの前に、プレートを５％CO₂中３７℃で一晩インキュベートした。プレートをインキュベータから取り出し、完全成長培地（ＤＭＥＭ，１０％ＦＢＳ，２５０μｇ／ｍｌＧ４１８及び１μｇピューロマイシン）を０．２５％ＢＳＡ含有１００μＬのＤＭＥＭに置換した。次に、１００μＬのメンブランポテンシャルダイローディングバッファー（membrane potential dye loading buffer）（モレキュラーデバイス社、サニーベイル、ＣＡＵＳＡ）を使用書にのっとって調製した。プレートをインキュベータに３０分間戻し、薬物添加の前に、基準線蛍光をバイオテックシナジー２マルチモードマイクロプレートリーダー（バイオテックインストゥルメンツ社、ウィノースキ、ＶＴＵＳＡ）で、５４０ｎｍ励起光及び５９０ｎｍ発光フィルターを用いて、読み取った。２．５％ＤＭＳＯ、１．２５μＭの５’-（Ｎ-エチルカルボキシアミド）アデノシン及び１２５μＭのＲｏ２０-１７２４を含有する５０μＬのＤＰＢＳに薬物を添加した。プレートを室温で２５分インキュベートし、５４０ｎｍ励起光及び５９０ｎｍ発光にて再度蛍光を測定した。

図１は、ＣＢ−１受容体における化合物６ｈの機能活性を示す。図２は、CB-2受容体における化合物６ｈの機能活性を示す。

細胞毒性アッセイ：９６穴ポリスチレンプレートに、完全血清培地にて細胞を細胞７５０００個／ｍＬ，１００μＬ／穴の密度で蒔いた。細胞が接着するように、プレートを３７℃かつ５％ＣＯ_２下で２４時間インキュベートした。１００倍濃度の薬物溶液をＤＭＳＯにて調製し、１％ＦＢＳ培地に１：１００で混合し、望ましい濃度を得た。薬物−培地混合物を細胞に投与する直前にボルテックスにかけた。完全血清培地を除いて、薬物‐培地混合物で置換し、１８時間インキュベートした。１０μLのCounting Kit 8（ＣＣＫ８，Ｄｏｊｉｎｄｏ♯ＣＫ０４−１１）を各ウェルに添加し、生細胞測定を行った。ＣＣＫ８ダイを添加したインキュベーションを２〜４時間行った後、４５０ｎｍの吸光度をバイオテックシナジー２プレートリーダーによって測定した。

グリア芽腫脳腫瘍細胞株であるＬＮ‐２２９に対する選択された化合物の細胞毒性を表１に示す。

炎症についての調査
単球の分化：ＴＨＰ-１ヒト単核白血球（ATCC＃TIB-202）の懸濁液に、ホルボール１２‐ミリスチン酸塩13-酢酸塩（PMA Aldrich #P1585）及びイオノマイシン（Aldrich #10634）をそれぞれ１０及び５００ｎｇ／ｍｌ添加し、マクロファージ様細胞への分化を誘導した。細胞を３０，０００個／穴で蒔き、３７℃かつ５％ＣＯ_２／９５％大気で３〜１０日インキュベートして、形質転換を完了させた。アッセイまで、必要に応じて培地を交換した。

サイトカインアッセイ：A549 (ATCC #CCL-185)、HUV-EC-C (ATCC #CRL- 1730)、又は分化したTHP-１細胞を、９６穴ポリスチレンプレートに、３００，０００個／ｍｌ（１００μＬ／穴）の密度で蒔き、細胞が接着するように、３７℃で５％ＣＯ_２／９５％大気で２４時間インキュベートした。１００倍濃度の薬物溶液をＤＭＳＯにて調製し、１％ＦＢＳ培地に１：１００で混合し、望ましい濃度を得た。

プレートをインキュベートから取り出し、完全成長培地を、１％ＦＢＳ及び１μｇ／ｍｌのリポ多糖体又はペプチドグリカン（分化したＴＨＰ−１用）、又はＡ５４９及びＨＵＶＥＣの場合のＴＮＦ‐α（１０ｎｇ／ｍｌ）又はＩＬ‐１β（１ｎｇ／ｍｌ）、コントロールウェルの場合の刺激剤なし、を含有する５０μＬの培地に交換した。薬物処理の前に１時間、細胞をインキュベータに戻した。１％ＦＢＳ及び適切な刺激剤を上述の濃度で含有する培地で、所望の終濃度の２倍濃度で薬物‐培地溶液を調製した。薬物を含有しないコントロール培地を同様に調製した。５０μＬの薬物含有培地又はコントロール培地を、適切なウェルに添加し、プレートをインキュベータに１８時間戻した。培地の上清をウェルから除き、アッセイまで−８０℃で冷凍した。

図３〜図１３は、ＴＮＦ‐αの存在又は非存在下で、ＥＣ１及びＥＣ１０での化合物６ｈに暴露されたＡ５４９による様々なモジュレータの分泌特性を示す。グラフの凡例は、pymT 1-4 =26.8μＭの化合物6hで4時間；pymT 2-4= 37.2μMの化合物6hで４時間；pymT 1-18=26.8μMの化合物6hで１８時間；pymT 2-18=37.2 μMの化合物6hで18 時間；TNF =１０ｎｇ／ｍｌのTNF-αである。

これで、本発明及びそれを製造する及び使用する方法及び工程について、完全、明確に、簡潔に、かつ正確な用語にて、すべての当業者が製造できて使えるように、説明した。本発明の望ましい実施形態が説明され、請求の範囲に記載された発明の精神又は範囲から逸脱しない範囲での変更が可能であることが理解される。本発明とみなされる対象物を特定し、明確にクレームするために、下記の請求の範囲は本明細書を含む。

Claims

下記式で表され、

上記式において、
Ｘは、Ｈ、置換された及び置換されていないアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アリル、アリルアルキル、ヘテロアリル、ヘテロアリルアルキル、ヘテロシクロアルキル,及びヘテロシクロアルキルアルキルから選択され、それぞれのアルキル部分は、３回以下で任意に置換され、それぞれの環部分は、任意に、１、２、３、４、又は５個の置換基で置換され；
Ｙは、S，O，CH₂,CH(CH₃), CH(OH)，C(CH₃)(OH)，C(CH₃)₂，C(-U(CH₂)_ｎU-)，C(O)，NH，S(O), 及びS(O)_２から選択され；
ｎは１以上の整数であり;
Ｕは、CH₂，S，及びOから選択され；
Ｚは、Ｈ,置換された及び置換されていないアルキル, シクロアルキル,シクロアルキルアルキル, アリル, アリルアルキル, ヘテロアリル, ヘテロアリルアルキル, ヘテロシクロアルキル,及びヘテロシクロアルキルアルキルから選択され、それぞれのアルキル部分は、３回以下で任意に置換され、それぞれの環部分は、１、２、３、４又は５個の置換基で任意に置換され；
Ｒ_１及びＲ_２は、独立して、Ｈ並びに置換された及び置換されていないアルキルから選択される、
化合物。
Ｘは、アルキル、シクロアルキル, フェニル, ベンジル, チオフェニル及びピリジニルから選択され、それぞれの環部分は、ハロ, アルキル及びアルコキシから独立して選択される１〜５個の基で任意に置換され；
Ｒ_１及びＲ_２は、独立してＨ及びアルキルから選択され；
Ｙは、カルボニル, ジメチルメチレン及びヒドロキシメチレンから選択され；
Ｚは、アルキル, シクロアルキル, 置換されたシクロアルキル, フェニル, 置換されたフェニル, チオフェニル及び置換されたチオフェニルから選択される、
請求項１に記載の化合物。
Ｘは、アルキル、ベンジル又はフェニルであり、環部分は、クロロ、メチル及びメトキシから独立して選択される１、２、又は３個の基で任意に置換される、
請求項２に記載の化合物。
Ｘは、ベンジル, 3-メチルフェニル又はジクロロフェニルである、
請求項３に記載の化合物。
Ｙはジメチルメチレンである、
請求項２に記載の化合物。
Ｚは、アルキル、フェニル又はシクロアルキルである、
請求項２に記載の化合物。
下記式で表される請求項１に記載の化合物。
Ｘは、アルキル、フェニル、ベンジル、チオフェニル、及びピリジニルから選択され、それぞれの環部分は、ハロ、アルキル及びアルコキシから独立して選択される１〜５個の基で任意に置換され；
Ｙは、カルボニル、ジメチルメチレン及びヒドロキシメチレンから選択され；
Ｚは、アルキル、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、フェニル、置換されたフェニル、チオフェニル及び置換されたチオフェニルから選択される、
請求項７に記載の化合物。
Ｘは、アルキル、ベンジル又はフェニルであり、環部分は、クロロ、メチル及びメトキシから独立して選択される１、２、又は３個の基で任意に置換される、
請求項８に記載の化合物。
Ｘは、ヘキシル, ベンジル, 3-メトキシフェニル, 3-メチルフェニル又は3,5-ジクロロフェニルである
請求項９に記載の化合物。
Ｙは、ジメチルメチレンである、
請求項８に記載の化合物。
Ｚは、アルキル、フェニル又はシクロアルキルである、
請求項８に記載の化合物。
a) 2-ベンジル-5-フェニルピリミジン-4,6-ジオール;
b) 5-シクロヘキシル-2-(2-フェニルプロパン-2-イル)ピリミジン-4,6-ジオール;
c) 5-シクロヘキシル-2-(2-(チオフェン-2-イル)プロパン-2-イル)ピリミジン-4,6-ジオール;
d) 5-シクロヘキシル-2-(2-シクロヘキシルプロパン-2-イル)ピリミジン-4,6-ジオール;
e) 5-シクロヘキシル-2-(2-メチルオクタン-2-イル)ピリミジン-4,6-ジオール;
f) 5-(3,5-ジクロロフェニル)-2-(2-メチルオクタン-2-イル)ピリミジン-4,6-ジオール;
g) 2-(2-シクロヘキシルプロパン-2-イル)-5-(3,5-ジクロロフェニル)ピリミジン-4,6-ジオール;
h) 5-(3,5-ジクロロフェニル)-2-(2-フェニルプロパン-2-イル)ピリミジン-4,6-ジオール;
i) 5-(3,5-ジクロロフェニル)-2-(2-(チオフェン-2-イル)プロパン-2-イル)ピリミジン-4,6-ジオール;
j) 2-(2-メチルオクタン-2-イル)-5-m-トリルピリミジン-4,6-ジオール;
k) 2-(2-シクロヘキシルプロパン-2-イル)-5-m-トリルピリミジン-4,6-ジオール;
1) 2-(2-フェニルプロパン-2-イル)-5-m-トリルピリミジン-4,6-ジオール;
m) 2-(2-(チオフェン-2-イル)プロパン-2-イル)-5-m-トリルピリミジン-4,6-ジオール;
n) 5-ベンジル-2-(2-メチルオクタン-2-イル)ピリミジン-4,6-ジオール;
o) 5-(ピリジン-2-イル)-2-(2-(チオフェン-2-イル)プロパン-2-イル)ピリミジン-4,6-ジオール;及び
p) 5-ヘキシル-2-(2-メチルオクタン-2-イル)ピリミジン-4,6-ジオール
から選択される、
請求項１に記載の化合物。
カンナビノイド受容体によって仲介される疾患の治療方法であって、
前記受容体と前記カンナビノイド受容体／仲介疾患を治療できる量の化合物とを接触させることを備え、
前記化合物は、下記式で表され、

上記式において、
Ｘは、Ｈ, 置換された及び置換されていないアルキル, シクロアルキル, シクロアルキルアルキル, アリル, アリルアルキル, ヘテロアリル, ヘテロアリルアルキル, ヘテロシクロアルキル, 及びヘテロシクロアルキルアルキルから選択され, それぞれのアルキル部分は、３回以下で任意に置換され、それぞれの環部分は、１、２、３、４又は５個の置換基で任意に置換され;
Ｙは、S、O、CH₂、CH(CH₃)、CH(OH)、C(CH₃)(OH)、C(CH₃)₂、C(-Ｕ(CH_２)_ｎＵ-)、C(O)、NH、S(O)、及びS(O)₂から選択され；
ｎは、１以上の整数であってもよく；
Ｕは、CH₂、S及びOから選択され；
Ｚは、Ｈ、置換された及び置換されていないアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アリル、アリルアルキル、ヘテロアリル、ヘテロアリルアルキル、ヘテロシクロアルキル、及びヘテロシクロアルキルアルキルから選択され、それぞれのアルキル部分は、任意に３回以下で置換され、それぞれの環部分は、任意に１、２、３、４、又は５個の置換基で置換され；
Ｒ_１及びＲ_２は、Ｈ並びに置換された及び置換されていないアルキルから独立して選択される、
方法。
カンナビノイド受容体は、CB-1及びＣＢ−２から選択される、
請求項１４に記載の方法。
前記疾患は、ヒト肺がん、前立腺がん、結腸直腸がん、膵がん、CNSがん、脳腫瘍、及びヒト緑内障から選択される、
請求項１５に記載の方法。
Ｘは、アルキル、フェニル, ベンジル, チオフェニル及びピリジニルから選択され,それぞれの環部分は、ハロ, アルキル及びアルコキシから独立して選択される１〜５個の基で任意に置換され;
Ｙは、カルボニル, ジメチルメチレン及びヒドロキシメチレンから選択され;
Ｚは、アルキル, シクロアルキル, 置換されたシクロアルキル, フェニル, 置換されフェニル, チオフェニル及び置換されたチオフェニルから選択される、
請求項１４に記載の方法。
Ｘは、アルキル, ベンジル又はフェニルであり、環部分は、クロロ, メチル及びメトキシから独立して選択される１、２又は３個の基で任意に置換される、
請求項１７に記載の方法。
Ｘは、ヘキシル, ベンジル, 3- メトキシフェニル, 3-メチルフェニル又は3,5-ジクロロフェニルである、
請求項１７に記載の方法。
Ｙはジメチルメチレンである、
請求項１７に記載の化合物。
Ｚは、アルキル, フェニル又はシクロアルキルである、
請求項１７に記載の化合物。
前記化合物は、
a) 2-ベンジル-5-フェニルピリミジン-4,6-ジオール;
b) 5-シクロヘキシル-2-(2-フェニルプロパン-2-イル)ピリミジン-4,6-ジオール;
c) 5-シクロヘキシル-2-(2-(チオフェン-2-イル)プロパン-2-イル)ピリミジン-4,6-ジオール;
d) 5-シクロヘキシル-2-(2-シクロヘキシルプロパン-2-イル)ピリミジン-4,6-ジオール;
e) 5-シクロヘキシル-2-(2-メチルオクタン-2-イル)ピリミジン-4,6-ジオール;
f) 5-(3,5-ジクロロフェニル)-2-(2-メチルオクタン-2-イル)ピリミジン-4,6-ジオール;
g) 2-(2-シクロヘキシルプロパン-2-イル)-5-(3,5-ジクロロフェニル)ピリミジン-4,6-ジオール;
h) 5-(3,5-ジクロロフェニル)-2-(2-フェニルプロパン-2-イル)ピリミジン-4,6-ジオール;
i) 5-(3,5-ジクロロフェニル)-2-(2-(チオフェン-2-イル)プロパン-2-イル)ピリミジン-4,6-ジオール;
j) 2-(2-メチルオクタン-2-イル)-5-m-トリルピリミジン-4,6-ジオール;
k) 2-(2-シクロヘキシルプロパン-2-イル)-5-m-トリルピリミジン-4,6-ジオール;
1) 2-(2-フェニルプロパン-2-イル)-5-m-トリルピリミジン-4,6-ジオール;
m) 2-(2-(チオフェン-2-イル)プロパン-2-イル)-5-m-トリルピリミジン-4,6-ジオール;
n) 5-ベンジル-2-(2-メチルオクタン-2-イル)ピリミジン-4,6-ジオール;
o) 5-(ピリジン-2-イル)-2-(2-(チオフェン-2-イル)プロパン-2-イル)ピリミジン-4,6-ジオール; 及び
p) 5-ヘキシル-2-(2-メチルオクタン-2-イル)ピリミジン-4,6-ジオール.
請求項１４に記載の方法。