JP2011519038A - 分解能の向上したルミネセンス顕微鏡 - Google Patents
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Abstract
Description
a)試料中に存在するマーキング分子のうちある部分量だけが活性化されるように、試料に切替信号を導入する工程であって、試料中に、活性化された分子がこれにすぐ隣接する活性化されたマーキング分子に対して、ルミネセンス放射の検出の光学的分解能以上の間隔を有する部分領域が生じる工程、
b)活性化された分子を、ルミネセンス放射を放出させるために励起する工程、
c)ルミネセンス放射を制限された分解能で検出する工程、および
d)工程c)で記録されたルミネセンス放射から像データを生成する工程であって、ルミネセンス放射の幾何的位置を提供するマーキング分子が、分解能限界より高い位置分解能で示される工程。
さらに、試料検査のために、レーザ走査顕微鏡(LSMと略称もされる)を使用することも知られている。このレーザ走査顕微鏡は、3次元照明された像から、共焦点検出機構(この場合、共焦点LSMと呼ぶ)により、または非線形試料相互作用(いわゆる多光子顕微鏡)により対物レンズの焦点面にある平面だけを結像する。光学的切片が得られ、複数の光学的切片を試料の様々な深さで記録することにより、続いて適切なデータ処理装置を用いて、様々な光学的切片から統合された試料の3次元像を生成することができる。したがってレーザ走査顕微鏡は、厚い試料の検査に適する。
結局の所、マーキング分子は、活性化放射の強度を適切に選択することによって統計的に部分量で活性化される。したがって、すべてのマーキング分子の位置が、計算により、例えば回折限界を上回る分解能で決定できる、試料の全体像を生成するには、多数の個別像を評価しなければならない。個別像は最高で10000個になることがある。その結果、大きなデータ量が処理され、それに対応して測定に長時間かかる。全体像を記録するのにすでに数分が必要であり、これは実質的に使用するカメラの読み出し速度によって決まる。個別像における分子の位置決定は、コストのかかる計算手続によって行われる。これは例えば非特許文献1に記載されている。すべての個別像を処理し、高分解能の全体像、すなわちマーキング分子の位置が回折限界を上回る分解能で示される1つの像に統合するには、典型的には4時間かかる。
非線形増幅によってより高い強度を優先することは、すでに述べたように様々な個所で行うことができる。例えば、光学的または光学/電子的経路上で検出器の前方で非線形増幅することができる。例えば、光放射を電気信号に変換し、これを非線形に増幅し、再び光放射に変換する、いわゆるインテンシファイアを使用することができる。あるいは、非線形増幅を検出器自体で行うこともできる。したがって検出器が放射を位置分解して記録し、その際に非線形に増幅する。最後に非線形増幅を、検出の終了後に検出信号に対して行うこともできる。したがって複数の個別像を重ね合わせて1つの全体像にする場合、各個別像が非線形に増幅される。
以下に、本発明を例により、本発明の重要な特徴をやはり開示する添付図面に基づいてさらに詳細に説明する。
第1の工程S1で、切替信号によって、マーキング分子のある部分量が活性化される。すなわちこれらの分子が、特定の蛍光放射を放出させるために励起可能ではない第1の状態から、特定の蛍光放射を放出させるために励起可能である第2の状態に切り替えられる。もちろん活性化信号は選択的な非活性化をもたらすこともでき、つまり工程S1で反対の措置を使用することもできる。重要なのは、工程S1の後に、マーキング分子の部分量だけが、特定の蛍光放射を放出させるために励起できることである。活性化または非活性化(以下、簡単にするため活性化の場合だけ説明する)が、使用されるマーキング分子に応じて行われる。例えばDRONPA、PA−GFPのような色素、または可逆的に切替可能な合成色素(例えばAlexa/シアン・コンジュゲート)では、活性化が光放射により行われ、したがって切替信号は切替放射である。
非線形増幅の他に、すでに述べたように非線形減衰を使用することもできる。この場合、振幅または強度の小さい蛍光信号は減衰されるが、強い信号は少なくとも十分には減衰されずに留まる。もちろん非線形増幅と非線形減衰を組み合わせて使用することもできる。オプションとしての第5の工程S5では、増幅された蛍光信号の強度またはレベルが閾値以下であれば、それらの信号の正規化または丸めが行われる。
図9は、マトリクス検出器5が反復工程ごとに、記録された蛍光放射の光子を積分し、そのつど像としてコンピュータ9に供給する、第2の変形形態を示す。コンピュータ9は表示装置10、例えばモニタと、入力機構11、例えばキーボード等を有する。
さらに各実行の個別像を、焦点面に依存して記録し、非線形増幅された個別像から1つの3D全体像に統合することができる。この場合は、付加的に正規化も可能である。これにより、3つの空間方向のすべてで分解能の向上が得られる。
Claims (16)
- 切替信号によって活性化可能なマーキング分子でマーキングされた試料を、空間的に高分解能でルミネセンス顕微鏡検査する方法であって、前記マーキング分子が、活性化によって初めて、特定のルミネセンス放射を放出させるために励起可能となり、
a)試料中に存在するマーキング分子のうちある部分量だけが活性化されるように、試料に切替信号を導入する工程であって、試料中に、活性化されたマーキング分子がこれにすぐ隣接する活性化されたマーキング分子に対して、ルミネセンス放射の検出の光学的分解能以上の間隔を有する部分領域が生じる工程と、
b)活性化された分子を、ルミネセンス放射を放出させるために励起する工程と、
c)ルミネセンス放射を光学的分解能で検出する工程と、
d)工程c)で記録されたルミネセンス放射から像データを生成する工程であって、ルミネセンス放射の幾何的位置を提供するマーキング分子が、光学的分解能より高い位置分解能で示される工程と
を含む方法において、
e)工程c)におけるルミネセンス放射の検出工程、または工程d)における像データの生成工程が、位置分解能を光学的分解能よりも鮮鋭にするために、記録されたルミネセンス放射を、より高い強度を優先して非線形に増幅する工程を含むことを特徴とする方法。 - 前記工程c)で、ルミネセンス放射を位置分解して積分し、前記工程e)で、積分結果を非線形に増幅することを特徴とする請求項1に記載の方法。
- 非線形増幅の増幅特性曲線が調整可能であることを特徴とする請求項1または2に記載の方法。
- 非線形に増幅する工程が、閾値より低い強度を抑圧する工程を含むことを特徴とする請求項1乃至3のいずれか一項に記載の方法。
- 試料の全体像を生成するために、前記工程a)からe)を繰り返し実行し、その際に工程e)の後に得られた像データが、そのつど先行する実行からの像データと重ね合わされて1つの全体像にされ、最後の実行の後に全体像が完成されることを特徴とする請求項1乃至4のいずれか一項に記載の方法。
- もはやルミネセンス放射を放出させるために励起できないようにするために、マーキング分子を非活性化することができ、さらなる各実行の前にマーキング分子全体が非活性化されることを特徴とする請求項5に記載の方法。
- 生成された全体像が、実行中に中間像として表示されることを特徴とする請求項5または6に記載の方法。
- 実行中に生じた信号、例えばユーザーにより入力された中断信号に応じて中間像が記憶され、新たな全体像を生成するために実行が最初から新たに開始されることを特徴とする請求項7に記載の方法。
- 部分量の大きさを最大にするために、切替信号の導入の強度および活性化された分子の励起の強度の少なくとも一方が、実行の間で変更されることを特徴とする請求項7に記載の方法。
- 切替信号によって活性化可能なマーキング分子でマーキングされた試料を、空間的に高分解能で蛍光顕微鏡検査するための装置であって、マーキング分子が活性化によって初めて、特定のルミネセンス放射を放出させるために励起可能となり、前記装置が、
試料中に存在するマーキング分子の部分量だけが活性化されるように、試料に切替信号を導入する手段であって、試料中に、活性化されたマーキング分子がこれにすぐ隣接する活性化されたマーキング分子に対して、ルミネセンス放射の検出の光学的分解能以上の間隔を有する部分領域が生じる、前記導入する手段と、
活性化された分子を、ルミネセンス放射を放出させるために励起する手段と、
ルミネセンス放射を光学的分解能で記録し、位置分解された検出信号を出力する検出機構と、
ルミネセンス放射の幾何的位置を提供するマーキング分子を、光学的分解能より高い位置分解能で示す像データを検出信号から生成する像データ生成機構とを備える装置において、
位置分解能を光学的分解能よりも鮮鋭にするために、記録されたルミネセンス放射または検出信号を、より高い強度を優先して非線形に増幅する非線形増幅器が設けられていることを特徴とする装置。 - 前記検出機構がルミネセンス放射を位置分解して積分し、前記増幅器が積分結果を非線形に増幅することを特徴とする請求項10に記載の装置。
- 前記非線形増幅器が、調整可能な増幅特性曲線を有することを特徴とする請求項10または11に記載の装置。
- 前記非線形増幅器が、閾値より低い強度を抑圧することを特徴とする請求項10乃至12のいずれか一項に記載の装置。
- 制御装置が、切替信号を導入する前記手段の動作、活性化された分子を励起する前記手段の動作、前記検出機構の動作、前記像データ生成機構の動作、および前記増幅器の動作を制御し、その際に請求項1乃至9のいずれか1項に記載の方法が行われることを特徴とする請求項10乃至13のいずれか一項に記載の装置。
- 表示機構が中間像を表示することを特徴とする請求項7、8または9と組み合わせた請求項14に記載の装置。
- 検出器に前置された、非線形の光学式または電子光学式増幅器、特にインテンシファイアを特徴とする請求項10乃至14のいずれか一項に記載の装置。
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Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2012103691A (ja) * | 2010-10-19 | 2012-05-31 | Leica Microsystems Cms Gmbh | サンプル構造の顕微鏡結像用の方法および装置 |
JP2013519868A (ja) * | 2010-02-12 | 2013-05-30 | ライカ マイクロシステムス ツェーエムエス ゲーエムベーハー | 蛍光顕微鏡の適切な評価パラメータを設定する方法およびその装置 |
JP2015187745A (ja) * | 2009-12-22 | 2015-10-29 | カール ツァイス マイクロスコピー ゲーエムベーハーCarl Zeiss Microscopy Gmbh | 物体の2次元または3次元の位置調整のための高解像度顕微鏡および方法 |
US9651493B2 (en) | 2011-01-12 | 2017-05-16 | Ge Healthcare Bio-Sciences Corp. | Systems and methods for camera-based image processing in microscopy instruments |
Families Citing this family (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE102009031231A1 (de) * | 2009-06-26 | 2010-12-30 | Carl Zeiss Microlmaging Gmbh | Verfahren und Anordnungen für die Fluoreszenzmikroskopie |
US8237786B2 (en) * | 2009-12-23 | 2012-08-07 | Applied Precision, Inc. | System and method for dense-stochastic-sampling imaging |
DE102010044013A1 (de) * | 2010-11-16 | 2012-05-16 | Carl Zeiss Microimaging Gmbh | Tiefenauflösungsgesteigerte Mikroskopie |
DE102012224306A1 (de) | 2012-12-21 | 2014-06-26 | Carl Zeiss Microscopy Gmbh | Verfahren zur hochauflösenden 3D-Lokalisierungsmikroskopie |
DE102013208926A1 (de) * | 2013-05-14 | 2014-11-20 | Carl Zeiss Microscopy Gmbh | Verfahren zur 3D-hochauflösenden Lokalisierungsmikroskopie |
JP6408796B2 (ja) | 2014-06-11 | 2018-10-17 | オリンパス株式会社 | レーザ顕微鏡装置 |
JP6375239B2 (ja) * | 2015-02-05 | 2018-08-15 | オリンパス株式会社 | レーザ顕微鏡装置 |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2006127692A2 (en) * | 2005-05-23 | 2006-11-30 | Hess Harald F | Optical microscopy with phototransformable optical labels |
Family Cites Families (17)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4625106A (en) * | 1984-06-29 | 1986-11-25 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Army | Nonlinear gain microchannel plate image intensifier tube |
DE4416558C2 (de) | 1994-02-01 | 1997-09-04 | Hell Stefan | Verfahren zum optischen Messen eines Probenpunkts einer Probe und Vorrichtung zur Durchführung des Verfahrens |
US5866911A (en) | 1994-07-15 | 1999-02-02 | Baer; Stephen C. | Method and apparatus for improving resolution in scanned optical system |
JP2001511247A (ja) * | 1996-12-23 | 2001-08-07 | ルプレヒト−カールス−ウニヴェルジテート ハイデルベルク | 対象物構造間の間隔測定方法および間隔測定装置 |
DE19908883A1 (de) | 1999-03-02 | 2000-09-07 | Rainer Heintzmann | Verfahren zur Erhöhung der Auflösung optischer Abbildung |
JP4397993B2 (ja) * | 1999-03-24 | 2010-01-13 | オリンパス株式会社 | 顕微鏡写真撮影装置 |
JP2002062261A (ja) | 2000-08-21 | 2002-02-28 | Olympus Optical Co Ltd | 光学装置および顕微鏡 |
GB2399971B (en) * | 2003-01-22 | 2006-07-12 | Proneta Ltd | Imaging sensor optical system |
DE10325460A1 (de) | 2003-04-13 | 2004-11-11 | MAX-PLANCK-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. | Räumlich hochauflösendes Abbilden |
DE102004024810A1 (de) * | 2004-05-17 | 2005-12-08 | Soft Imaging System Gmbh | Verfahren und Vorrichtung zur optischen Abtastung einer Probe |
JP4673000B2 (ja) * | 2004-05-21 | 2011-04-20 | 株式会社キーエンス | 蛍光顕微鏡、蛍光顕微鏡装置を使用した表示方法、蛍光顕微鏡画像表示プログラム及びコンピュータで読み取り可能な記録媒体並びに記憶した機器 |
EP1944600B1 (de) | 2005-07-22 | 2016-01-27 | Carl Zeiss Microscopy GmbH | Laser-Scanning-Mikroskop |
US7619732B2 (en) * | 2006-03-01 | 2009-11-17 | Leica Microsystems Cms Gmbh | Method and microscope for high spatial resolution examination of samples |
DE102006021317B3 (de) | 2006-05-06 | 2007-10-11 | MAX-PLANCK-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. | Verfahren und Fluoreszenzlichtmikroskop zum räumlich hochauflösenden Abbilden einer Struktur einer Probe |
DE102006026203A1 (de) * | 2006-05-31 | 2007-12-06 | Carl Zeiss Microimaging Gmbh | Verfahren zum räumlich hochauflösenden Abbilden |
WO2008021834A2 (en) * | 2006-08-11 | 2008-02-21 | The Regents Of The University Of California | High-resolution microscope using optical amplification |
DE102008059328A1 (de) * | 2008-11-27 | 2010-06-02 | Carl Zeiss Microimaging Gmbh | Auflösungsgesteigerte Mikroskopie |
-
2008
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Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2006127692A2 (en) * | 2005-05-23 | 2006-11-30 | Hess Harald F | Optical microscopy with phototransformable optical labels |
JP2008542826A (ja) * | 2005-05-23 | 2008-11-27 | エフ. ヘスス ハラルド | 光変換可能な光学標識を用いる光学顕微鏡法 |
Non-Patent Citations (4)
Title |
---|
JPN5011002742; HESS S T: 'ULTRA-HIGH RESOLUTION IMAGING BY FLUORESCENCE PHOTOACTIVATION LOCALIZATION MICROSCOPY' BIOPHYSICAL JOURNAL V91 N11, 20061201, P4258-4272 * |
JPN5011002743; HESS S T: 'DYNAMIC CLUSTERED DISTRIBUTION OF HEMAGGLUTININ RESOLVED AT 40 NM 以下備考' PROCEEDINGS OF THE NATIONAL ACADEMY OF SCIENCES OF THE UNITED STATES OF AMERICA V104 N44, 20071030, P17370-17375, NATIONAL ACADEMY OF SCIENCES * |
JPN5011002744; SHROFF H: 'DUAL-COLOR SUPERRESOLUTION IMAGING OF GENETICALLY EXPRESSED PROBES 以下備考' PROCEEDINGS OF THE NATIONAL ACADEMY OF SCIENCES OF THE UNITED STATES OF AMERICA V104 N51, 20071218, P20308-20313, NATIONAL ACADEMY OF SCIENCES * |
JPN5011002746; BETZIG E: 'IMAGING INTRACELLULAR FLUORESCENT PROTEINS AT NANOMETER RESOLUTION' SCIENCE V313 N5793, 20060915, P1642-1645, AMERICAN ASSOC. ADV.SCI. * |
Cited By (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2015187745A (ja) * | 2009-12-22 | 2015-10-29 | カール ツァイス マイクロスコピー ゲーエムベーハーCarl Zeiss Microscopy Gmbh | 物体の2次元または3次元の位置調整のための高解像度顕微鏡および方法 |
JP2017004024A (ja) * | 2009-12-22 | 2017-01-05 | カール ツァイス マイクロスコピー ゲーエムベーハーCarl Zeiss Microscopy Gmbh | 物体の2次元または3次元の位置調整のための高解像度顕微鏡および方法 |
JP2013519868A (ja) * | 2010-02-12 | 2013-05-30 | ライカ マイクロシステムス ツェーエムエス ゲーエムベーハー | 蛍光顕微鏡の適切な評価パラメータを設定する方法およびその装置 |
JP2012103691A (ja) * | 2010-10-19 | 2012-05-31 | Leica Microsystems Cms Gmbh | サンプル構造の顕微鏡結像用の方法および装置 |
US9651493B2 (en) | 2011-01-12 | 2017-05-16 | Ge Healthcare Bio-Sciences Corp. | Systems and methods for camera-based image processing in microscopy instruments |
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