JP2011509650A - ヒト化抗−α9インテグリン抗体及びその使用 - Google Patents
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Abstract
【選択図】なし
Description
本明細書において、用語「抗体」は、α9インテグリンなどの、所望の抗原に免疫特異的に結合することができる抗体分子を意味し、抗体分子全体又はその抗原結合フラグメントなどのフラグメントを包含する。
ヒトα9インテグリン又はそのエピトープを免疫特異的に認識する抗体は、本技術分野で公知のいかなる適切な方法によって作製してもよい。
抗体のヌクレオチド配列が決定されたならば、抗体のヌクレオチド配列を、ヌクレオチド配列を操作する本技術分野において周知の方法、例えば、組換えDNA技術、部位突然変異導入法、PCRなどにより操作し(例えば、上記Sambrookら、及びAusubelら編, 1998, Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, NYに記載の方法を参照。両者は全体を参照することにより本明細書に組み入れられる)、例えば、抗体のエピトープ結合ドメイン領域又は抗体の生物学的活性を高める若しくは下げるような抗体の部位へ置換、欠失及び/又は挿入によりアミノ酸を導入することによって、異なるアミノ酸配列を有する抗体を作製してもよい。
キメラ抗体は、マウスモノクローナル抗体由来の可変領域とヒトイムノグロブリン由来の定常領域を有する抗体など、抗体の異なる部位が異なる動物種に由来する分子である。キメラ抗体の作製方法は本技術分野において公知である。例えば、Morrison, 1985, Science, 229:1202;Oiら, 1986, BioTechniques, 4:214; Gilliesら, 1989, J. Immunol. Methods, 125:191−202;米国特許第5,807,715号、第4,816,567号及び第4,816,397号で参照された。これらの文献は、参照によりその全文が本明細書に組み込まれる。
(マウスV遺伝子のクローニング及びシークエンシング)
目的マウスモノクローナル抗体のVH及びVL領域をコードするcDNAは種々の方法によりクローニングすることができる。例えば、SMART RACE cDNA増幅キット(BD Biosciences, カリフォルニア州)又はGeneRacerキット(Invitrogen, カリフォルニア州)を使用する5’RACE(rapid amplification of cDNA ends:cDNA末端の迅速増幅)法が通常使用されている。5’RACEのための遺伝子特異的プライマは、目的モノクローナル抗体のH鎖及びL鎖のアイソタイプに基づいて、H鎖及びL鎖のそれぞれの可変領域の直後の下流に結合できるように調製することができる。5’RACEをγ1、γ2a、γ2b又はγ3などのマウスの各サブタイプに特異的であるように設計してもよい。あるいは、全てのサブタイプに共通のプライマを、サブタイプに共通し又は相同性の高い領域に基づいて設計してもよい。Tsurushitaでは、以下の5’RACEプライマを例示している。
(i)5’−GCCAGTGGATAGACTGATGG−(配列番号129)(マウスγl、γ2a、γ2b及びγ3H鎖のクローニング用)
(ii)5’−GATGGATACAGTTGGTGCAGC−(配列番号130)(マウスκ軽鎖のクローニング用)。
VH及びVL領域の配列に基づいて、CDRの立体配座構造を保持する上で重要となる可能性のある、目的抗体のフレームワーク残基を、例えば、R. Levyら, 1989, Biochemistry 28:7168−7175又はB. Zilberら, 1990, Biochemistry 29:10032−10041に記載されている方法に特定する。典型的には、VH及びVL領域のそれぞれを、β鎖とイムノグロブリンスーパーファミリのドメイン構造を有するループ様構造である、14の構造的に意味のあるセグメントに分割する。目的抗体から得られた各セグメントのアミノ酸配列を、PDBデータベース(H.M. Bermanら, 2000, Nucleic Acids Res. 28:235−342参照)で公知構造の抗体の対応セグメントと並べて比較する。複数の配列を並べて比較することにより、目的セグメントのそれぞれに最も相同性の高い対応セグメントを選択し、V領域の三次元モデルを構築する。構造を最適化するために、モデルの共役勾配エネルギ最小化を複数回行う(例えば、Pressら, 1990, Numerical Recipes, Cambridge University Press, Cambridgeに記載されているENCAD;Weinerら, 1981, J. Comp. Chem. 2:287−303に記載されているAMBER;BioMolecular Modelling又はCancer Research UKによって運営されているBMMウェブサイトより入手可能な3D−JIG−SAW;又はSwiss Institute of Bioinformatics, Genevaによって運営されているExPASyプロテオミクスサーバーにおいて入手可能なSWISS−MODELを使用する)。
V領域の構造のモデリングと並行して、マウスVH及びVL領域のcDNAクローニングから推定されたアミノ酸配列のそれぞれを、例えば、Kabatデータベース(Johnsonら, 2000, Nucleic Acids Res. 28:214−218参照)、GenBankなどのデータベースのヒトV領域配列と比較する。配列全体として、マウス配列と少なくとも約65%、少なくとも約70%、少なくとも約75%、少なくとも約80%、少なくとも約85%、少なくとも約90%又は少なくとも約95%の相同性を有するヒトフレームワーク領域は、例えば、Smith−Watermanアルゴリズム(Gusfield, 1997, Algorithms on Strings, Trees, and Sequences, Cambridge University Press, Cambridge)又はBLAST(Karlinら, 1990, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:2264−2268)などを使用して検索することができる。これらのヒト配列は、cDNAに基づきタンパク質に由来する配列に基づいていてもよいが、大抵の場合、cDNAに基づくタンパク質由来の配列における体細胞超変異に関連する免疫原性の可能性を排除するために生殖細胞系列を使用することが好ましい。あるいは、Queenら(前記1989)に記載されているように、共通フレームワーク配列を使用して、cDNAに基づくタンパク質由来の配列から得られるフレームワークにおける超変異残基を同定し、除去することもできる。生殖細胞系列VHセグメントをアクセプタフレームワークとして使用する場合、第14染色体上のVHセグメントのみが機能性VH領域を産生するため、第15及び16染色体ではなく、第14染色体上にコードされているVHセグメントを使用する必要がある。
Queenら(前記1989)に従えば、CDRの約4〜6Å以内のフレームワークアミノ酸は正しいCDR構造を支える主要なフレームワーク残基である可能性が考えられるため、これらのアミノ酸を同定する必要がある。該同定は、原子座標からの原子間距離を計算する、National Science Foundation(NSF)が支援する分子可視化無料ソフトウェブサイトにおいて利用可能なRASMOLなどのコンピュータプログラムを使用して、又はコンピュータモデルを手動で調べることにより行うことができる。主要フレームワーク位置のアミノ酸がマウスドナ配列とヒトアクセプタ配列で異なる場合、通常、マウスドナの残基でヒト残基を置換する。しかし、そのような残基がCDR構造を支持する上で貢献度が低い場合には、対応するヒト配列を使用するのが一般的である。また、選択したヒトアクセプタが、V領域配列の約10−20%未満で起こる「異常」アミノ酸を含有する場合には、それらは親和性成熟中の体細胞超変異の結果であることがあり、ヒトの免疫原性の可能性を回避するためにそれらをドナ残基で置換する必要がある。
医薬としてヒト化抗体を提供するためには、その効率的かつ安定な製造システムを用意する必要がある。例えば、H及びL鎖配列を挿入してヒト化抗体用の適切な発現ベクタを調製し、発現ベクタでトランスフェクトされた高生産性細胞株を、ワーキングセルバンク(WCB)の安定及び半永久的な細胞源であるマスターセルバンク(MCB)の種細胞として取得できる。ヒト化抗体は、WCBからの機能する細胞を培養し、培養液を回収することによって調製することができる。
本発明は、ヒトα9インテグリンを免疫特異的に認識する、上述のヒト化抗体又はその抗原結合フラグメントを含有する医薬組成物を提供する。有効成分として本発明のヒト化抗体を含有する医薬組成物は、α9インテグリンに関連する障害又は疾患、例えば、これに限定されないが、癌、例えば、癌細胞の成長又は転移、及び関節リウマチ、骨関節炎、肝炎、気管支喘息、線維症、糖尿病、動脈硬化、多発性硬化症、肉芽種、炎症性腸疾患(潰瘍性大腸炎及びクローン病)、自己免疫疾患などの炎症性疾患を予防及び/又は治療するための薬剤として使用することができる。
本発明のヒト化抗体を含有する医薬組成物は、癌、例えば、癌細胞の増殖や転移、及び関節リウマチ、骨関節炎、肝炎、気管支喘息、線維症、糖尿病、癌転移、動脈硬化、多発性硬化症、肉芽種などの炎症性疾患の診断薬、あるいは臓器移植後の慢性拒絶反応、又は全身性自己免疫疾患、エリテマトーデス、ブドウ膜炎、ベーチェット病、多発性筋炎、糸球体増殖性腎炎、サルコイドーシスなどの自己免疫疾患などの診断薬として使用することができる。本発明のヒト化抗体は、α9インテグリンを特異的に認識することができるため、試験体液中のα9インテグリンの定量、特にサンドイッチイムノアッセイ、競合アッセイ、イムノメトリ、ネフロメトリなどの定量法、免疫染色などに使用することができる。これらの免疫学的方法を本発明のアッセイ方法に適用する際に、特別な条件、手段などの説明は必要なく、通常の条件及び手段に本技術分野で普通の技術的検討を加えて、アッセイ系を構築すればよい。これらの一般的な技術的手段の詳細については、総論や教科書などを参照できる。
ヒトα9インテグリンに対するマウスモノクローナル抗体をサブトラクティブ免疫化法(Williams C. V.ら, 1992, Biotechniques 12:842−847)に従って調製した。簡単には、Balb/cマウス3匹に、マウス1匹当たり4×106個のCHO−K1細胞を腹腔内注射した。2日後、4mg/マウスのシクロホスファミドを該マウスの腹腔内に投与した。シクロホスファミド注射の2週間後に、マウス1匹当たり2×106個のヒトα9インテグリンを発現しているCHO−K1細胞(ヒトα9/CHO−K1細胞)を該マウスの腹腔内に注射し、2週間後に更にマウス1匹当たり3×106個の同細胞を腹腔内に注射した。ハイブリドーマを本技術分野で周知の方法により調製した(例えば、Harlowら, 1988, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 第2版;Hammerlingら, 1981, Monoclonal Antibodies and T−CeIl Hybridomas, pp.563−681, Elsevier, N. Y参照)。ヒトα9/CHO−K1細胞とは免疫特異的に反応するが、ヒトα4インテグリンを発現するCHO−K1細胞とは反応しないモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマクローンを樹立し、ヒトα9インテグリンを免疫特異的に認識するモノクローナル抗体を産生する5つのハイブリドーマクローン(すなわち、1K11、21C5、24I11、25B6及び28Sl)を単離した。
ヒトα9インテグリンのN残基及びその後3残基毎に後ろにずれる位置から始まる12残基のポリペプチド(すなわち、アミノ酸残基1〜12、4〜15、7〜18など)を調製し、5nmol/スポットとなるようにC6スペーサー及び2βAla残基を介してセルロース膜に結合させた。この膜をブロッキング緩衝液(ミルク/0.05%Tween20含有PBS)でブロックし、過酸化酵素で標識した各抗ヒトα9インテグリンモノクローナル抗体(すなわち、それぞれ1K11、21C5、24I11、及び25B6)1.0μg/mLを含有する溶液10mLと3時間、室温で反応させた。T−TBSで洗浄後、上記膜を増強化学発光(enhanced chemiluminescence:ECL)検出試薬と1分間、室温で反応させた。酵素反応の結果として放出された発光を測定し、抗体のエピトープを発光強度に基づいて決定した。対照例として、市販のヒトα9インテグリンに対するモノクローナル抗体であるY9A2(Wangら, 1996, Am J Respir Cell Mol Biol 15, 664−672参照)を使用した。
モノクローナル抗体(すなわち、1K11、21C5、24I11、25B6及び28Sl)のCDRのアミノ酸配列を、それぞれのハイブリドーマから抽出したmRNAの逆転写により決定し、cDNAを調製した。これらのcDNAを鋳型として、H鎖及びL鎖の可変領域を、ScFvクローニングプライマ(軽鎖ミックス及び重鎖ミックス:Amersham Biosciences Corp., イリノイ州)を使用してPCRにより伸長、増幅した。PCR産物をpCRIITOPOベクタにクローニングし、シークエンシングしてアミノ酸配列を決定した。この工程を各抗体について3回繰り返した。結果を表2に示す。
(1)細胞接着にはα9インテグリンのそのリガンド、すなわち、OPN、フィブロネクチン、テネイシンC、VCAM−1などの種々のECM、への結合が関与していることが知られており、よって単離した抗ヒトα9インテグリン抗体の細胞接着抑制作用を試験した。
抗ヒトα9インテグリン抗体がFACSに使用できるかどうかを、ヒトα9/CHO−K1細胞、CHO−K1細胞及びα9インテグリンを内因的に発現するヒト好中球を使用して試験した。ヒト好中球では、FACS分析は、細胞数1.0×105で行い、抗体は氷上で反応させた。Fc受容体との非特異的反応を50%ヤギ血清でブロックした。FITC標識抗マウスIgG抗体を二次抗体として使用した。その結果、全ての抗ヒトα9インテグリン抗体が、ヒトα9/CHO−K1及びヒト好中球上のα9インテグリンを検出でき、全ての抗体がヒトα4/CHO−K1細胞と反応しなかった(図20a、20b、20c参照)。これらの結果は、全ての抗ヒトα9インテグリン抗体が、FACSを使用して細胞上に発現されたヒトα9インテグリンタンパク質を検出できることを示している。
抗α9インテグリン抗体の治療的効果を、マウスを用いて調べた。
国際公開WO 02/081522は、肝炎がOPN機能の抑制によって治療できることを開示している。従って、抗α9インテグリン抗体の治療的効果を、ハムスター抗マウスα9インテグリン抗体11L2B及びラット抗マウスα4インテグリン抗体R1−2(Pharmingen)を使用して、マウス肝炎モデルで検討した。200μgのコンカナバリンA(ConA)(Vector)の静脈内注射の12時間後にマウスの血中AST及びALT値を、GPT/ALT−PIII及びGOT/AST−PIII(富士フィルム)を使用して測定した。ConA注射の3時間前に、200μgの抗体を投与した。図18に示すように、AST及びALT値は、抗α9インテグリン抗体により低下することが確認され、治療効果が認められた。更に、この治療効果は抗α4インテグリン抗体との併用により高められた。この結果は、肝炎は、抗α9インテグリン抗体により治療できることを明らかにした。
マウスメラノーマ細胞株B16−BL6は、α9インテグリンを多く発現する。従って、樹立した抗マウスα9インテグリン抗体の癌細胞に対する細胞成長抑制活性を調査した。
7週齢メスマウス(Balb/c)(各群3匹)に、400μg/マウスのハムスター抗マウスα9インテグリン抗体(55A2C)又は正常ハムスターIgG(NHG)を腹腔内注射した。24時間後、2mg/マウスのII型コラーゲン特異性モノクローナル抗体の関節炎誘起カクテル(Chondrex Inc.)を静脈内注射した。72時間後、400μg/マウスの55A2C又はNHGを50μg/マウスのLPSとともに腹腔内注射した。マウスをLPSの投与3日前からLPSの投与後6日まで観察し、関節炎の程度をWoodら(1969, Int. Arch. Allergy Appl. Immunol. 35:456)の方法に従って得点化した。結果を図22に示す。コントロールNHGを注射されたマウスは得点が高く、関節リウマチを発症したが、抗マウスα9インテグリン抗体を注射したマウスでは、関節リウマチの発症は完全に阻止された。従って、抗α9インテグリン抗体は関節リウマチに対する予防及び治療効果を有することが示された。
7.1.マウス24I11V遺伝子のクローニングとシークエンシング
マウス24I11ハイブリドーマ細胞は、10%ウシ胎児血清(FBS:HyClone, Logan, ユタ州)を含有するTIL培地I(免疫生物研究所、群馬、日本)中で、7.5%CO2インキュベーターを用いて、37℃で培養した。TRIzol試薬(Invitrogen, Carlsbad, カリフォルニア州)を添付プロトコールに従って使用して、約3×106個のハイブリドーマ細胞から全RNAを抽出した。GeneRacerキット(Invitrogen)を添付プロトコールに従って使用して、オリゴdT−プライムドcDNAを合成した。24I11重鎖及び軽鎖の可変領域cDNAを、マウスγ−1及びκ鎖定常領域にそれぞれアニールするプライマと、GeneRacerキットに添付されているGeneRacer5’プライマ(5’−CGACTGGAGCACGAGGACACTGA−)(配列番号94)とを使用して、PhusionDNAポリメラーゼ(New England Biolabs, Beverly, マサチューセッツ州)によるポリメラーゼチェインリアクション(PCR)により増幅した。重鎖可変領域(VH)のPCR増幅には、配列5’−GCCAGTGGATAGACAGATGG−(配列番号95)を有するプライマを使用し、軽鎖可変領域(VL)のPCR増幅には、配列5’−GATGGATACAGTTGGTGCAGC−(配列番号96)を有するプライマを使用した。増幅されたVH及びVLcDNAは、配列決定のためにpCR4Blunt−TOPOベクタ(Invitrogen)にサブクローンした。可変領域のDNAシークエンシングはTocore(Menlo Park, カリフォルニア州)で行った。数個の重鎖及び軽鎖クローンの配列を決定したところ、典型的なマウス重鎖及び軽鎖可変領域に相同である、特有な配列が同定された。24I11のVH及びVLのコンセンサスcDNA配列とその推定アミノ酸配列を、それぞれ図1及び2に示す。
24I11VHcDNAを鋳型とし、5’−GGGACTAGTACCACCATGAAATGCAGCTGGGTTATCTTC−(配列番号97)(下線はSpeI部位)を5’プライマとして、5’−GGGAAGCTTAGAGGCCATTCTTACCTGAGGAGACGGTGACTGAGGTTCC−(配列番号98)(下線はHindIII部位)をプライマ(図3)として使用して、PCRを行い、24I11VHをコードする遺伝子を、スプライスドナシグナル及び適当なフランキング制限酵素部位を有するエクソンとして作製した。同様に、24I11VLcDNAを鋳型とし、5’−GGGGCTAGCACCACCATGAGTGTGCCCACTCAACTCCTG−(配列番号99)(下線はNheI部位)を5’プライマとして、5’−GGGGAATTCTGAGAAGACTACTTACGTTTTATTTCCAGCTTGGTCCCCCC−(配列番号:100)(下線はEcoRI部位)をプライマ(図4)として使用して、PCRを行い、24I11VLをコードする遺伝子を、スプライスドナシグナル及び適当なフランキング制限酵素部位を有するエクソンとして作製した。24I11VH及びVLエクソンのスプライスドナシグナルは、それぞれマウス生殖細胞系列JH4及びJκ2配列由来のものを用いた。PCR増幅フラグメントは、QIAquickゲル抽出キット(Qiagen, Valencia, カリフォルニア州)を用いてゲル精製し、SpeI及びHindIII(VH用)又はNheI及びEcoRI(VL用)で消化し、ヒトγ1及びκ定常領域を含む哺乳類発現ベクタにクローン化してキメラ24I11IgG1/κ抗体を作製した。得られた発現ベクタpCh24I11の構造を模式的に図5に示す。
24I11可変領域のヒト化は、Queenら(Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86: 10029−10033, 1989)に概説されているように行った。まず、24I11可変領域の分子モデルを、コンピュータプログラムを用いて構築した。次いで、ヒト可変領域配列のホモロジ検索に基づいて、24I11VHに高ホモロジ(FRHで72.4%(63/87)のアミノ酸相同性)を有する、GenBankアクセッション番号X65891のヌクレオチド配列によりコードされるヒトアミノ酸配列を、ヒト化24I11VHのフレームワークを提供するアクセプタとして選択した。同様に、GenBankアクセッション番号X72441(FRLで77.5%(62/80)のアミノ酸相同性)のヌクレオチド配列によりコードされるヒトアミノ酸配列を、24I11VLのヒト化用のアクセプタとして選択した。
Durocherら(Nucl. Acids Res. 30:e9, 2002)に従って、それぞれpCh24I11及びpHu24I11プラスミドDNAを、ポリエチレンイミンを使用してHEK293細胞にトランスフェクトし、キメラ及びヒト化24I11IgG1/κ抗体を、一過性に発現させた。一過性にトランスフェクトしたHEK293細胞を、10%FBSを含有するDMEM中、37℃で7.5%CO2インキュベーター内に4日間保持した。培養上清中のCh24I11及びHu24I11IgG1/κ抗体のそれぞれの発現量を、サンドイッチELISAにより測定した。ELISAプレートに、PBSで2000倍希釈したヤギ抗ヒトIgGFcγ鎖特異的ポリクローナル抗体(SouthernBiotech, Birmingham, アラバマ州)を100μg/ウェルで添加して4℃、一晩コートし、洗浄緩衝液(0.05%Tween20を含有するPBS)で洗浄し、300μL/ウェルのブロッキング緩衝液(2%スキムミルク及び0.05%Tween20を含有するPBS)で1時間、室温でブロックした。洗浄緩衝液で洗浄後、ELISA緩衝液(1%スキムミルク及び0.025%Tween20を含有するPBS)で適切に希釈した検体を、100μL/ウェルでELISAプレートに添加した。標準として、ヒトミエローマ血清(SouthernBiotech)から精製したヒトIgG1/κ抗体を使用した。ELISAプレートを室温で2時間静置し、洗浄緩衝液で洗浄した後、2000倍希釈した西洋ワサビペルオキシダーゼ(HRP)結合ヤギ抗ヒトκ鎖ポリクローナル抗体(SouthernBiotech)を100μL/ウェルを使用して結合した抗体を検出した。室温で1時間静置し、洗浄緩衝液で洗浄した後、100μL/ウェルのABTS基質(bioWORLD, Dublin, オハイオ州)を添加して発色させた。100μL/ウェルの2%シュウ酸を添加して発色を停止させ、405nmで吸光度を測定した。
キメラ及びヒト化24I11抗体のヒトα9インテグリンへの結合を細胞ELISAにより調べた。組換えヒトα9インテグリンをその表面に発現するCHO−K1安定形質転換体(CHO/huα9:Gene Techno Scienceから入手)を2×105個/ウェルで、50μLの10%FBS含有F12/DMEM(HyClone)を有する96ウェル組織培養プレートの各ウェルに播種し、37℃、7.5%CO2インキュベーター内で一晩培養した。ヒトα9インテグリンへの結合を調べるために、50μLのキメラ24I11、ヒト化24I11又は無関係なIgG1/κミエローマ抗体(SouthernBiotech)を有する10%FBS含有F12/DMEMを各ウェルに添加した。4℃で1時間静置した後、細胞を氷冷PBSで2回洗浄し、100μLの1000倍希釈HRP結合ヤギ抗ヒトIgGポリクローナル抗体(SouthernBiotech)を各ウェルに添加した。4℃で1時間静置した後、細胞を氷冷PBSで3回洗浄し、発色させるために、100μLのABTS基質を添加した。100μLの2%シュウ酸を添加して発色を停止させ、405nmで吸光度を測定した。ヒトα9インテグリンへのキメラ24I11抗体の結合は、0.5及び1μg/mLの両方で、ヒト化24I11抗体の結合とほとんど同程度である結果を得た(図14)。
Claims (23)
- (i)ヒト抗体のVH領域由来の少なくとも1つのFRH、及びヒトα9インテグリンを免疫特異的に認識する非ヒト抗体のCDRHの少なくとも1つに由来する少なくとも1つのCDRHとを有するH鎖;
(ii)ヒト抗体のVL領域由来の少なくとも1つのFRL、及びヒトα9インテグリンを免疫特異的に認識する非ヒト抗体のCDRLの少なくとも1つに由来する少なくとも1つのCDRLとを有するL鎖;又は
(iii)前記(i)と(ii)の両方
を有する、ヒトα9インテグリンを免疫特異的に認識するヒト化抗体又はその抗原結合フラグメント。 - 前記非ヒト抗体が、受託番号FERM BP−10510、FERM BP−10511、FERM BP−10512、FERM BP−10513及びFERM BP−10832からなる群から選択されるハイブリドーマが産生するマウスモノクローナル抗体である、請求項1に記載のヒト化抗体又はその抗原結合フラグメント。
- 前記ヒト化抗体の少なくとも1つのCDRHが配列番号4、5及び6のアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を有し、かつ、該ヒト化抗体の少なくとも1つのCDRLが配列番号11、12及び13のアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する、請求項1に記載のヒト化抗体又はその抗原結合フラグメント。
- 前記ヒト抗体のVH領域がGenBankアクセッション番号X65891(配列番号18)のヌクレオチド配列によりコードされるアミノ酸配列由来であるアミノ酸配列を有し、かつ、前記ヒト抗体のVL領域がGenBankアクセッション番号X72441(配列番号23)のヌクレオチド配列によりコードされるアミノ酸配列由来であるアミノ酸配列を有する、請求項2又は3に記載のヒト化抗体又はその抗原結合フラグメント。
- 前記H鎖が配列番号29のアミノ酸配列を有し、かつ、前記L鎖が配列番号31のアミノ酸配列を有する、請求項4に記載のヒト化抗体又はその抗原結合フラグメント。
- 配列番号29のアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を有する、単離された核酸分子。
- 前記ヌクレオチド配列が配列番号28のヌクレオチド配列を有する、請求項6に記載の核酸分子。
- シグナルペプチドをコードするヌクレオチド配列を更に有する、請求項6に記載の核酸分子。
- 前記シグナルペプチドが配列番号10のアミノ酸配列を有する、請求項8に記載の核酸分子。
- 配列番号31のアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を有する、単離された核酸分子。
- 前記ヌクレオチド配列が配列番号30のヌクレオチド配列を有する、請求項10に記載の核酸分子。
- シグナルペプチドをコードするヌクレオチド配列を更に有する、請求項10に記載の核酸分子。
- 前記シグナルペプチドが配列番号17のアミノ酸配列を有する、請求項12に記載の核酸分子。
- 前記核酸分子が1つ以上の調節因子に作動可能となるように結合されている、請求項6若しくは10又は両方に記載の核酸分子を有するベクタ。
- 請求項14に記載のベクタを有する、単離された宿主細胞。
- 請求項15に記載の宿主細胞をヒト化抗体又はその抗原結合フラグメントが発現される条件下で培養し、発現されたヒト化抗体を回収することを含む、ヒト化抗体又はその抗原結合フラグメントを調製する方法。
- 請求項1、2又は5のいずれか1項に記載のヒト化抗体又はその抗原結合フラグメントと、医薬的に許容されるキャリアとを有する医薬組成物。
- 請求項5に記載のヒト化抗体又はその抗原結合フラグメントの有効量を、それを必要とする被験者に投与することを含む、α9インテグリンが関与する障害又は疾患を予防又は治療する方法。
- 請求項1又は2に記載のヒト化抗体又はその抗原結合フラグメントの有効量を検査対象に投与することを含む、α9インテグリンが関与する障害又は疾患を診断する方法。
- (i)ヒト抗体のVH領域由来の少なくとも1つのFRHと、配列番号32、33及び34のアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する少なくとも1つのCDRHとを有するH鎖;
(ii)ヒト抗体のVL領域由来の少なくとも1つのFRLと、配列番号37、38及び39のアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する少なくとも1つのCDRLとを有するL鎖;又は
(iii)前記(i)と(ii)の両者
を有するる、ヒトα9インテグリンを免疫特異的に認識するヒト化抗体又はその抗原結合フラグメント。 - (i)ヒト抗体のVH領域由来の少なくとも1つのFRHと、配列番号42、43及び44のアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する少なくとも1つのCDRHとを有するH鎖;
(ii)ヒト抗体のVL領域由来の少なくとも1つのFRLと、配列番号47、48及び49のアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する少なくとも1つのCDRLとを有するL鎖;又は
(iii)前記(i)と(ii)の両方
を有する、ヒトα9インテグリンを免疫特異的に認識するヒト化抗体又はその抗原結合フラグメント。 - (i)ヒト抗体のVH領域由来の少なくとも1つのFRHと、配列番号52、53及び54のアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する少なくとも1つのCDRHとを有するH鎖;
(ii)ヒト抗体のVL領域由来の少なくとも1つのFRLと、配列番号57、58及び59のアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する少なくとも1つのCDRLとを有するL鎖;又は
(iii)前記(i)と(ii)の両方
を有する、ヒトα9インテグリンを免疫特異的に認識するヒト化抗体又はその抗原結合フラグメント。 - (i)ヒト抗体のVH領域由来の少なくとも1つのFRHと、配列番号62、63及び64のアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する少なくとも1つのCDRHとを有するH鎖;
(ii)ヒト抗体のVL領域由来の少なくとも1つのFRLと、配列番号67、68及び69のアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する少なくとも1つのCDRLとを有するL鎖;又は
(iii)前記(i)と(ii)の両方
を有する、ヒトα9インテグリンを免疫特異的に認識するヒト化抗体又はその抗原結合フラグメント。
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