JP2011213600A - Bleaching agent - Google Patents

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Nami Adachi
奈美 足立
Masahito Tsubata
仁人 鍔田
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Toyo Shinyaku Co Ltd
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Toyo Shinyaku Co Ltd
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Abstract

PROBLEM TO BE SOLVED: To provide a new bleaching agent containing an extract of a flower of Pueraria lobata.SOLUTION: The bleaching agent and the cosmetic for bleaching contain the extract of the flower of the Pueraria lobata. The extract of the flower of the Pueraria lobata has tyrosinase activity-inhibiting activities and melanin formation-inhibiting activities, and the cosmetic containing the extract becomes the cosmetic for the bleaching, exhibiting excellent bleaching effects. The extract can be added to a food. The extract of the Pueraria lobata includes the extracts obtained by subjecting the flower of the Pueraria lobata, a pulverized product of the flower of the Pueraria lobata, a dried product of the flower of the Pueraria lobata and the powder of the flower of the Pueraria lobata to extraction treatment. The shapes of the extract of the flower of the Pueraria lobata can be any of liquid, paste and powder (sometimes, a case of powder of the essence of the flower of the Pueraria lobata is present) irrespective of the shape of the extract of the flower of the Pueraria lobata. Squeezed juice of the flower of the Pueraria lobata, the extract of the flower of the Pueraria lobata and the dried powder thereof (squeezed juice powder, extracted extract powder or the like) are preferable.

Description

本発明は、葛花抽出物を含有することを特徴とする、美白剤に関するものである。   The present invention relates to a whitening agent characterized by containing a kuzu flower extract.

皮膚の色は主にメラニン等の着色成分の表皮および真皮内における種類や量によって決まるが、様々な外的・内的因子によって制御されている。これらの因子によってメラニンの過剰生成が行われると、局所的な色素沈着、シミ、ソバカス等を引き起こし、美容上の大きな問題となる。このメラニンの生成はメラノサイトによるものと考えられている。すなわち、紫外線やホルモン分泌、周囲の角化細胞から放出される刺激因子によってメラノサイトが活性化されてメラニンの生成が促される。 The skin color is mainly determined by the type and amount of coloring components such as melanin in the epidermis and dermis, but is controlled by various external and internal factors. If melanin is excessively produced by these factors, it causes local pigmentation, spots, freckles and the like, which is a major cosmetic problem. This melanin production is thought to be due to melanocytes. That is, melanocytes are activated by ultraviolet light, hormone secretion, and stimulating factors released from surrounding keratinocytes, and melanin production is promoted.

また、紫外線や睡眠不足、疲労などによってチロシナーゼが活性化され、チロシナーゼによって、必須アミノ酸であるチロシンがドーパキノンとなり、ドーパキノンの酵素的または非酵素的酸化作用によりメラニンの合成を促すものと考えられている。 In addition, tyrosinase is activated by ultraviolet rays, lack of sleep, fatigue, etc., and tyrosinase turns tyrosine, an essential amino acid, into dopaquinone, and is thought to promote the synthesis of melanin by enzymatic or non-enzymatic oxidation of dopaquinone. .

そのため、シミやソバカス等の美容上の問題を解決する美白剤は、「メラニンの生成を抑制すること」および「チロシナーゼ活性を阻害すること」が重要である。このような中、美白剤としての新素材が種々開発されている。(例えば特許文献1〜4)。 Therefore, for whitening agents that solve cosmetic problems such as spots and buckwheat, it is important to “suppress the production of melanin” and “inhibit tyrosinase activity”. Under such circumstances, various new materials as whitening agents have been developed. (For example, Patent Documents 1 to 4).

特開2008−50292号公報JP 2008-50292 A 特開2005−289880号公報JP 2005-289880 A 特開2005−120051号公報JP 2005-120051 A 特許第3747053号公報Japanese Patent No. 3747053 WO2006/038721号公報WO2006 / 038721

ここで、美白剤の多様化が進む背景においては、従来美白剤として知られている素材以外にも「メラニンの生成抑制」および「チロシナーゼ活性阻害」を実現する、新たな素材を含有した美白剤の提供が望まれていた。 Here, in the background of the diversification of whitening agents, whitening agents containing new materials that realize “inhibition of melanin production” and “inhibition of tyrosinase activity” in addition to materials conventionally known as whitening agents The offer of was desired.

この期待に答え、本発明は「メラニンの生成抑制」および「チロシナーゼ活性阻害」を実現する新たな素材を含有した美白剤を提供する。すなわち、本発明は、葛花抽出物を含有することを特徴とする美白剤である。また、本発明は好ましくは前記葛花抽出物が、メラニン生成抑制作用およびチロシナーゼ活性阻害作用を有することを特徴とする美白剤である。さらには、前記美白剤を含有することを特徴とする美白用化粧品である。 In response to this expectation, the present invention provides a whitening agent containing a new material that realizes “suppression of melanin production” and “inhibition of tyrosinase activity”. That is, this invention is a whitening agent characterized by containing the Kuzuka extract. Further, the present invention is preferably a whitening agent, wherein the Kuzuka extract has a melanin production inhibitory action and a tyrosinase activity inhibitory action. Furthermore, it is a cosmetic for whitening characterized by containing the said whitening agent.

本発明によれば、メラニン生成抑制作用およびチロシナーゼ活性阻害作用を有する新たな素材を含有した美白剤、すなわち、葛花抽出物を含有した美白剤を得ることができる。なお、本発明の形態に関しては特に限定されるものではなく、葛花抽出物をそのまま、または種々の成分を加えて、化粧品、食品などとして用いることができる。   ADVANTAGE OF THE INVENTION According to this invention, the whitening agent containing the new raw material which has a melanin production inhibitory effect and a tyrosinase activity inhibitory effect, ie, the whitening agent containing the kuzu flower extract, can be obtained. In addition, it does not specifically limit regarding the form of this invention, Kuzuka extract can be used as cosmetics, foodstuffs, etc. as it is or with various components added.

以下、本発明の実施形態について説明する。なお、本発明は、下記の実施形態に限定して解釈すべきではなく、特許請求の範囲における記載の範囲内で種々の変更が可能である。   Hereinafter, embodiments of the present invention will be described. The present invention should not be construed as being limited to the following embodiments, and various modifications can be made within the scope of the claims.

本発明で使用する葛花とは、マメ科の植物である葛の花部であり、花弁の他、雌しべ、雄しべ、がく片、花軸、苞葉、つぼみ等を含んでもよい。葛の産地は特段に制限されるものではない。   The kuzu flower used in the present invention is a flower portion of the kuzu, which is a leguminous plant, and may include pistils, stamens, sepals, flower axes, bud leaves, buds and the like in addition to petals. The production area of Kuzu is not particularly limited.

本発明で使用する葛花抽出物は、葛花、葛花破砕物、葛花乾燥物、または葛花粉末から抽出処理を行って得られる抽出物が含まれる。葛花抽出物の形状は問わず、液状、ペースト状、および粉状(葛花エキス末という場合がある)のいずれであってもよい。好ましくは、葛花の搾汁、葛花抽出物、またはこれらの乾燥粉末(搾汁粉末、抽出エキス末など)である。本発明で用いられる葛花は、イソフラボン類などのフラボノイド、サポニン、トリプトファン配糖体などを含有し、好ましくは、イソフラボン類を5重量%以上含有し得る。葛花抽出物のうち、葛花の搾汁または抽出物の乾燥粉末などのように、予め不溶性固形分(残渣)を除いた葛花処理物は、イソフラボン類およびサポニンを高含有する葛花処理物として好適に用いられる。また、株式会社東洋新薬製の『葛の花エキス』が好ましく用いられ得る。   The kuzu flower extract used in the present invention includes an extract obtained by performing an extraction process from kuzu flower, kuzu flower crushed product, kuzu flower dry product, or kuzu flower powder. The shape of the kuzuhana extract is not limited and may be any of liquid, paste, and powder (sometimes referred to as kuzuka extract powder). Preferably, it is squeezed kuzuka juice, kuzuka extract, or a dry powder thereof (squeezed powder, extract extract powder, etc.). Kuzuka used in the present invention contains flavonoids such as isoflavones, saponins, tryptophan glycosides and the like, and preferably may contain 5% by weight or more of isoflavones. Among the kuzu flower extracts, the kuzu flower processed product from which insoluble solids (residues) have been removed in advance, such as the kuzu flower juice or the dried powder of the extract, It is suitably used as a product. Further, “Kuzu no Hana Extract” manufactured by Toyo Shinyaku Co., Ltd. can be preferably used.

本発明の美白剤はそのまま、または通常用いられる種々の成分を加えて、化粧品、食品などとして用いることができる。必要に応じて、当業者が通常用いる原料および添加剤などを添加することができる。   The whitening agent of the present invention can be used as it is or as a cosmetic or food with various commonly used components added. If necessary, raw materials and additives that are commonly used by those skilled in the art can be added.

化粧品類として本発明で使用する美白剤は、ローション剤、乳剤、ゲル剤、クリーム剤、軟膏剤などの種々の形態に加工され得る。また、化粧品、医薬品、医薬部外品などとして利用される。具体的には、化粧水、化粧クリーム、乳液、クリーム、パック、ヘアトニック、ヘアクリーム、シャンプー、ヘアリンス、トリートメント、ボディシャンプー、洗顔剤、石鹸、ファンデーション、育毛剤、水性軟膏、スプレーなどとして利用できる(特許文献5)。   The whitening agent used in the present invention as cosmetics can be processed into various forms such as lotions, emulsions, gels, creams, ointments and the like. It is also used as cosmetics, pharmaceuticals, quasi drugs and the like. Specifically, it can be used as lotion, cosmetic cream, milky lotion, cream, pack, hair tonic, hair cream, shampoo, hair rinse, treatment, body shampoo, facial cleanser, soap, foundation, hair restorer, aqueous ointment, spray, etc. (Patent Document 5).

食品として本発明で使用する美白剤は、種々の成分(例えば賦形剤、増量剤、結合剤、増粘剤、乳化剤、着色料、香料、食品添加物、調味料)と混合して利用できる。具体的には、栄養補助剤として、ローヤルゼリー、ビタミン類、プロテイン、キトサン、レシチンなどが配合され、さらに糖液や調味料を加え、味を整えることができる。そしてこれらは、必要に応じて、ハードカプセル、ソフトカプセルのようなカプセル剤、錠剤、もしくは丸剤、または粉末状、顆粒状、飴状などの形状に成形され得る。そしてこれらは、その形状または好みに応じて、そのまま食されても良いし、水、湯、牛乳、豆乳、茶、ジュースなどに溶いて飲んでも良い。 The whitening agent used in the present invention as a food can be used by mixing with various components (for example, excipients, extenders, binders, thickeners, emulsifiers, colorants, fragrances, food additives, seasonings). . Specifically, as a nutritional supplement, royal jelly, vitamins, protein, chitosan, lecithin and the like are blended, and a sugar solution and seasoning can be added to adjust the taste. These may be formed into a capsule such as a hard capsule or a soft capsule, a tablet, or a pill, or a powder, granule, bowl, or the like as necessary. These may be eaten as they are, or may be drunk in water, hot water, milk, soy milk, tea, juice or the like according to the shape or preference.

本発明の美白剤に含まれる葛花抽出物の配合量としては、美白効果を有する限り、用いる剤型、使用対象等の様々の条件に応じて、広範囲でその配合量を適宜設定できる。好ましくは、外用剤中に葛花抽出物が乾燥質量換算で0.00001質量%〜20質量%、より好ましくは0.001質量%〜10質量%の割合で含有される。   As long as it has a whitening effect, the blending amount of the kuzu flower extract contained in the whitening agent of the present invention can be appropriately set in a wide range depending on various conditions such as the dosage form used and the object to be used. Preferably, the Kuzuka extract is contained in the external preparation in a proportion of 0.00001% by mass to 20% by mass, more preferably 0.001% by mass to 10% by mass in terms of dry mass.

本発明の葛花抽出物を含有することを特徴とする美白剤は、例えば同量のイソフラボン類またはサポニン、あるいは同量のイソフラボン類またはサポニンを含有する植物抽出物に比べて美白効果が優れている。   The whitening agent characterized by containing the kuzuhana extract of the present invention has a whitening effect superior to, for example, the same amount of isoflavones or saponins, or a plant extract containing the same amount of isoflavones or saponins. Yes.

本発明の美白用化粧品は、葛花抽出物の有する美白作用を増強する目的あるいは化粧品の使用目的に応じて、種々の薬効成分、保湿剤、界面活性剤などの助剤を含有してもよい。これらの助剤は、単独で用いても、2種以上を組み合わせて用いてもよい。   The whitening cosmetic of the present invention may contain various medicinal ingredients, humectants, surfactants and other auxiliaries depending on the purpose of enhancing the whitening action of the kuzuhana extract or the purpose of use of the cosmetic. . These auxiliaries may be used alone or in combination of two or more.

上記助剤の1種である薬効成分としては、例えば、ビタミン類、ポリフェノール類、細胞賦活剤およびリン脂質などが挙げられる。ビタミン類としては、レチノール、レチナール、レチノイン酸、3−デヒドロレチノール、3−デヒドロレチナール、3−デヒドロレチノイン酸などのビタミンA類;α−カロテン、β−カロテン、γ−カロテン、クリプトキサンチンなどのプロビタミンA類、チアミン(ビタミンB1)、リボフラビン(ビタミンB2)、ピリドキシン、ピリドキサール、ピリドキサミン(以上ビタミンB6)、コバラミン(ビタミンB12)、ニコチン酸、ニコチンアミド、パントテン酸、ビオチン(ビタミンH)、葉酸(ビタミンM)などのビタミンB群類、アスコルビン酸(ビタミンC);エルゴカルシフェロール(ビタミンD2)、コレカルシフェロール(ビタミンD3)などのビタミンD類、7−デヒドロコレステロール、エルゴステロールなどのプロビタミンD類、α−トコフェロール、β−トコフェロール、γ−トコフェロール、δ−トコフェロール、α−トコトリエノール、β−トコトリエノール、γ−トコトリエノール、δ−トコトリエノールなどのビタミンE類、フィロキノン(ビタミンK1)、メナキノン(ビタミンK2)、メナジオン(ビタミンK3)などのビタミンK類などが挙げられる。上記ビタミン類は、動植物、藻類、微生物などの天然物由来のもの、および化学反応または酵素反応を利用した合成物のいずれも用いることができる。さらに、これらを含有する天然物の抽出物を、そのまま用いてもよい。 Examples of the medicinal component that is one of the auxiliary agents include vitamins, polyphenols, cell activators and phospholipids. Vitamins include vitamins A such as retinol, retinal, retinoic acid, 3-dehydroretinol, 3-dehydroretinal, 3-dehydroretinoic acid; pros such as α-carotene, β-carotene, γ-carotene and cryptoxanthine. Vitamin A, thiamine (vitamin B1), riboflavin (vitamin B2), pyridoxine, pyridoxal, pyridoxamine (above vitamin B6), cobalamin (vitamin B12), nicotinic acid, nicotinamide, pantothenic acid, biotin (vitamin H), folic acid ( Vitamin B) such as vitamin M), ascorbic acid (vitamin C); vitamin D such as ergocalciferol (vitamin D2), cholecalciferol (vitamin D3), 7-dehydrocholesterol, ergosterol, etc. Vitamin E such as rovitamin D, α-tocopherol, β-tocopherol, γ-tocopherol, δ-tocopherol, α-tocotrienol, β-tocotrienol, γ-tocotrienol, δ-tocotrienol, phylloquinone (vitamin K1), menaquinone ( Vitamin Ks such as vitamin K2) and menadione (vitamin K3). As the vitamins, any of those derived from natural products such as animals, plants, algae and microorganisms, and synthetic products utilizing chemical reactions or enzymatic reactions can be used. Furthermore, you may use the extract of the natural product containing these as it is.

ポリフェノール類としては、カテコール、カテキン、エピカテキン、ガロカテキン、エピガロカテキン、ガロカテキンガラート、エピガロカテキンガラート、タンニン酸、ハマメリタンニン(1,5−ジガロイルハマメロース)、プロアントシアニジン、カフェー酸誘導体、没食子酸、ピロガロールタンニン、カテコールタンニンなどが挙げられる。これらのポリフェノールを含有する茶抽出物、ブドウ種子抽出物、松樹皮抽出物、甘藷茎葉抽出物なども、ポリフェノールとして用いることができる。   Examples of polyphenols include catechol, catechin, epicatechin, gallocatechin, epigallocatechin, gallocatechin gallate, epigallocatechin gallate, tannic acid, hammelitannin (1,5-digalloyl hamamelose), proanthocyanidins, Examples include caffeic acid derivatives, gallic acid, pyrogallol tannin, catechol tannin and the like. Tea extract, grape seed extract, pine bark extract, sweet potato stem and leaf extract and the like containing these polyphenols can also be used as polyphenols.

細胞賦活剤としては、酵母抽出物、アスパラガス(Asparagus)属植物、アボカド(Persea americana Mill.)、アロエ(Aloe)属植物、アンズ(Prunus armeniaca L.var.ansu Maxim.)、イチョウ(Ginkgo biloba L.)、イヌブナ(Fagus japonica Maxim.)、オオニンニク(Allium sativum L.f.pekinense Makino)、オタネニンジン(Panax ginseng C.A.Meyer)、カミツレ(Matricaria chamomilla L.)、キハダ(Phellodendron amurense Rupr.)およびPhellodendron属植物、キュウリ(Cucumis sativus L.)、キンセンカ(Calendula arvensis L.)、シイタケ(Lentinus edodes Sing.)、シナサルナシ(キウイ)(Actinidia chinensis Planch.)、スギナ(Equisetum arvense L.)、セイヨウトチノキ(Aesculus hippocastanum L.)、セイヨウニンニク(Allium sativum L.)、センブリ(Swertia japonica Makino)、タマサキツヅラフジ(Stephania cepharantha Hayata)、チシャ(レタス)(Lactuca sativa L.)、トウガラシ(Capsicum annuum L.)、トウキンセンカ(Calendula officinalis L.)、トチノキ(Aesculus turbinata Blume)、ニンジン(Daucus carota L.)、ブクリョウ(マツホド)(Poria cocos Wolf)、ブドウ(Vitis vinifera L.)、ブナ(Fagus crenata Blume)、ヘチマ(Luffa cylindrica M.Roemen)、ベニバナ(Carthamus tinctorius L.)、マンネンロウ(Rosmarinus officinalis L.)、ミカン(Citrus)属植物、ムクロジ(Sapindus mukurossi Gaertn.)、ムラサキ(Lithospermum officinale L.var.erythrorhizon Maxim.)、ユーカリノキ(Eucalyptus)属植物、ユリ(Lilium)属植物の各抽出物などが挙げられる。   Cell activators include yeast extract, Asparagus plant, Avocado (Persea americana Mill.), Aloe plant, Apricot (Prunus armenica L. var. Ansu Maxim.), Ginkgo (Ginkgo). L.), Japanese beech (Fagus japonica Maxim.), Onion garlic (Allium sativum L. f. Pekinense Makino), Panax ginseng C. A. Meyer, Camisole (Mat. ) And Phellodendron plants, cucumber (Cuc) mis sativas L., calendula arvensis L., Lentinus edodes Sing., Actinidia chinensis Pran., Eguisetum p. Garlic (Allium sativum L.), Sembria (Swartia japonica Makino), Tamazaki cephalantha Hayata, Lisa (Lactuca sativa um), L ndula officinalis L., Carcinus (Aesculus turbinata Blume), carrot (Daucus carata L.), pine phoenix (Poria cos wolf L), grape (Vitis vinifera L M. Roemen, safflower (Carthamus tinctorius L.), mannenro (Rosmarinus officinalis L.), Citrus genus plant, Sapindus mukurossi Gaertn. ), Murasaki (Lithosperum officinalale L. var. Erythrorohizon Maxim.), Eucalyptus genus plants, Lilyum genus plants, and the like.

リン脂質としては、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルグリセロール、ジホスファチジルグリセロール(カルジオリピン)、ホスファチジン酸などのグリセロリン脂質、リゾホスファチジルコリン(リゾレシチン)、リゾホスファチジルエタノールアミン、リゾホスファチジルセリン、リゾホスファチジルイノシトール、リゾホスファチジルグリセロール、リゾホスファチジン酸などのリゾグリセロリン脂質、スフィンゴミエリンなどのスフィンゴリン脂質;およびこれらの水素添加物などが挙げられる。これらのリン脂質は、大豆、卵黄などの動植物由来のものでもよく、化学的もしくは酵素的方法により合成されたものでもよい。   Phospholipids include phosphatidylcholine, phosphatidylethanolamine, phosphatidylserine, phosphatidylinositol, phosphatidylglycerol, diphosphatidylglycerol (cardiolipin), glycerophospholipids such as phosphatidic acid, lysophosphatidylcholine (lysolecithin), lysophosphatidylethanolamine, lysophosphatidylserine, Phosphatidylinositol, lysophosphatidylglycerol, lysoglycerophospholipids such as lysophosphatidic acid, sphingophospholipids such as sphingomyelin; and hydrogenated products thereof. These phospholipids may be derived from animals and plants such as soybeans and egg yolks, or may be synthesized by a chemical or enzymatic method.

保湿剤としては、例えば、コラーゲンまたはその分解物、大豆ペプチド、アミノ酸、ヒアルロン酸などのムコ多糖類、コンドロイチンなどのアミノ糖、トレハロースなどの糖類、および海藻類、アルギン酸、グルコマンナン、ペクチンなどの水溶性食物繊維が挙げられる。界面活性剤としては、例えば、レシチン、脂肪酸エステル、およびアミノ酸誘導体が挙げられる。 Examples of humectants include collagen or its degradation products, soy peptides, amino acids, mucopolysaccharides such as hyaluronic acid, amino sugars such as chondroitin, saccharides such as trehalose, and water-soluble substances such as seaweed, alginic acid, glucomannan, and pectin. Dietary fiber. Examples of the surfactant include lecithin, fatty acid ester, and amino acid derivative.

本発明の美白用化粧品は、例えば同量のイソフラボン類またはサポニン、あるいは同量のイソフラボン類またはサポニンを含有する植物抽出物を含有する美白用化粧品に比べて美白効果が優れている。   The whitening cosmetic product of the present invention has a whitening effect superior to a whitening cosmetic product containing, for example, the same amount of isoflavones or saponins, or a plant extract containing the same amount of isoflavones or saponins.

以下に実施例を挙げて本発明を説明するが、本発明がこの実施例により限定されないことは言うまでもない。 The present invention will be described below with reference to examples, but it goes without saying that the present invention is not limited to these examples.

葛花抽出物は、株式会社東洋新薬製の葛花抽出物(イソフラボンを20重量%含有)を用いた。また、大豆抽出物は不二製油株式会社製の大豆抽出物(イソフラボンを40重量%含有)を用いた。 As the Kuzuhana extract, Kuzuka extract (containing 20% by weight of isoflavone) manufactured by Toyo Shinyaku Co., Ltd. was used. As the soybean extract, a soybean extract (containing 40% by weight of isoflavone) manufactured by Fuji Oil Co., Ltd. was used.

(実施例1)
実施例1では、本発明のメラニン生成抑制効果について説明する。実施例1ではメラニン生成阻害率の測定により、本発明がメラニン生成を抑制することを確認する。以下、測定の具体的方法について説明する。
Example 1
Example 1 demonstrates the melanin production inhibitory effect of this invention. In Example 1, it is confirmed by the measurement of melanin production inhibition rate that the present invention suppresses melanin production. Hereinafter, a specific method of measurement will be described.

テオフィリン(シグマ社製)を133.4mMとなるようにDMSO(和光純薬工業株式会社製)で溶解した。さらに、通常培地(10%ウシ胎児血清含有D−MEM:シグマ製)で200倍に希釈し試験培地とした。 Theophylline (manufactured by Sigma) was dissolved in DMSO (manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) to a concentration of 133.4 mM. Further, it was diluted 200 times with a normal medium (D-MEM containing 10% fetal bovine serum: Sigma) to obtain a test medium.

葛花抽出物を通常培地で濃度調整し、0.2μmのフィルターで濾過滅菌したものを用いた。陽性コントロールは、コウジ酸を蒸留水で溶解後、試験培地にて濃度調製後、0.2μmのフィルターで濾過滅菌したものを用いた。陰性コントロールは試験培地のみを0.2μmのフィルターで濾過滅菌したものを用いた。 The concentration of Kuzuhana extract was adjusted with a normal medium and filtered and sterilized with a 0.2 μm filter. A positive control was prepared by dissolving kojic acid in distilled water, adjusting the concentration in a test medium, and then sterilizing by filtration with a 0.2 μm filter. As a negative control, a test medium alone was sterilized by filtration with a 0.2 μm filter.

メラニン生成抑制作用の評価に用いたB16メラノーマ細胞の調製は、以下のように行った。マウス由来の凍結B16メラノーマ細胞(RCB1283:独立行政法人理化学研究所)を通常培地を用いて融解し、6ウェルプレートに播種後、炭酸ガスインキュベーター内で培養した。さらに6ウェルプレートから75cmフラスコへ継代して、炭酸ガスインキュベーターで培養を継続した。その後、75cmフラスコから細胞を回収して6ウェルプレートに播種し、炭酸ガスインキュベーター内で24時間培養を行った。上記プレートより培地を除去後、被験物質を含んだ培地を1.5ml/wellで添加し、更に試験培地を1.5ml/wellで添加し3日間培養を行った。 Preparation of B16 melanoma cells used for evaluation of the melanin production inhibitory effect was performed as follows. Mouse-derived frozen B16 melanoma cells (RCB1283: RIKEN) were thawed using a normal medium, seeded in a 6-well plate, and then cultured in a carbon dioxide incubator. Further, the cells were subcultured from a 6-well plate to a 75 cm 2 flask, and the culture was continued in a carbon dioxide incubator. Thereafter, the cells were collected from the 75 cm 2 flask, seeded in a 6-well plate, and cultured for 24 hours in a carbon dioxide incubator. After removing the medium from the plate, a medium containing a test substance was added at 1.5 ml / well, and a test medium was further added at 1.5 ml / well, followed by culturing for 3 days.

培養後、各ウェルから細胞培養上清を除去し、2mlのリン酸緩衝液(PBS(−))で細胞を1回洗浄後、PBS(−)にて希釈したTrypsin−EDTA(シグマ製)を500μl/well添加した。室温で4〜5分間処理後、10%ウシ胎児血清含有PBS(−)を500μl/well添加してトリプシンの中和をした。その後、ピペッティングにて細胞の剥離を行い、細胞を回収した。2,000rpmで5分間遠心分離を行い、上清を除去した後、1mlのPBS(−)を添加し懸濁後に、懸濁液60μlをサンプリングし、細胞数を計測した。残りの細胞は遠心分離を行い、上清を完全に除去した。細胞に1%TritonX−100/1N水酸化ナトリウム水溶液を250μl添加し、65℃〜75℃の恒温槽で60分間加温後、振盪し完全に溶解した。 After culturing, the cell culture supernatant is removed from each well, the cells are washed once with 2 ml of phosphate buffer (PBS (−)), and Trypsin-EDTA (manufactured by Sigma) diluted with PBS (−) is added. 500 μl / well was added. After treatment at room temperature for 4 to 5 minutes, PBS (-) containing 10% fetal bovine serum was added at 500 μl / well to neutralize trypsin. Thereafter, the cells were detached by pipetting, and the cells were collected. After centrifuging at 2,000 rpm for 5 minutes and removing the supernatant, 1 ml of PBS (−) was added and suspended, and then 60 μl of the suspension was sampled to count the number of cells. The remaining cells were centrifuged and the supernatant was completely removed. 250 μl of 1% Triton X-100 / 1N sodium hydroxide aqueous solution was added to the cells, heated in a thermostatic bath at 65 ° C. to 75 ° C. for 60 minutes, and then shaken to completely dissolve.

メラニン生成抑制作用は、以下のように評価した。得られたマウス由来のB16メラノーマ細胞溶解液を96ウェルプレートへ200μl/wellで移し、各物質の合成メラニン量を490nmの波長で測定し、次の式から求められる阻害率で表した。
阻害率(%)=100−(被験物質の吸光度/陰性コントールの吸光度)×100
The melanin production inhibitory action was evaluated as follows. The obtained B16 melanoma cell lysate derived from a mouse was transferred to a 96-well plate at 200 μl / well, the amount of synthetic melanin of each substance was measured at a wavelength of 490 nm, and the inhibition rate obtained from the following formula was expressed.
Inhibition rate (%) = 100− (absorbance of test substance / absorbance of negative control) × 100

結果を表1に示す
The results are shown in Table 1.

表1の結果から、葛花抽出物は、優れたメラニン生成抑制効果を有することがわかる。すなわち、葛花抽出物から得られるメラニン生成抑制効果は、同量のイソフラボン類を含有する大豆抽出物の抑制効果に比べて非常に優れている。これらは、本発明に用いられる葛花抽出物が、従来メラニン生成抑制剤として知られるイソフラボン類、あるいはイソフラボン類を含有する植物抽出物に比べて、優れた効果を有することを示す。したがって、葛花抽出物は優れた美白効果を発揮し、美白剤として有用である。   From the results in Table 1, it can be seen that the Kuzuka extract has an excellent melanin production inhibitory effect. That is, the melanin production inhibitory effect obtained from the Kuzuhana extract is very superior to the inhibitory effect of the soybean extract containing the same amount of isoflavones. These show that the Kuzuka extract used in the present invention has an excellent effect as compared with isoflavones conventionally known as melanin production inhibitors or plant extracts containing isoflavones. Therefore, the Kuzuhana extract exhibits an excellent whitening effect and is useful as a whitening agent.

(実施例2)
実施例2では、本発明のチロシナーゼ活性阻害について説明する。実施例1ではチロシナーゼ活性阻害の測定により、本発明がチロシナーゼ活性阻害を有することを確認する。以下、測定の具体的方法について説明する。
(Example 2)
Example 2 describes tyrosinase activity inhibition according to the present invention. In Example 1, it is confirmed by measurement of tyrosinase activity inhibition that the present invention has tyrosinase activity inhibition. Hereinafter, a specific method of measurement will be described.

まず1/15Mリン酸緩衝液(pH7.2)を用いて葛花抽出物の濃度を調製し、サンプル溶液とした。また、同様にコウジ酸の濃度を調製し、陽性コントロールとした。 First, the concentration of Kuzuka extract was prepared using 1/15 M phosphate buffer (pH 7.2) to obtain a sample solution. Similarly, the concentration of kojic acid was prepared and used as a positive control.

酵素溶液の調製は以下のように行った。チロシナーゼ(マッシュルーム由来、CALZYME製)を1/15Mリン酸緩衝液(pH7.2)を用いて550units/mlとなるように調製し、酵素溶液とした。   The enzyme solution was prepared as follows. Tyrosinase (derived from mushrooms, manufactured by CALZYME) was prepared using a 1/15 M phosphate buffer (pH 7.2) to 550 units / ml to obtain an enzyme solution.

基質溶液の調製は以下のように行った。L−DOPA溶液(和光純薬工業株式会社製)を1/15Mリン酸緩衝液(pH7.2)を用いて0.3mg/mlとなるように調製し、基質溶液とした。   The substrate solution was prepared as follows. An L-DOPA solution (manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) was prepared to be 0.3 mg / ml using a 1/15 M phosphate buffer (pH 7.2), and used as a substrate solution.

被験溶液の調製は以下のように行った。96ウェルプレートにサンプル溶液を100μl/wellで添加した後、酵素溶液を100μl/wellで添加し、37℃で10分間インキュベートを行った。さらに、基質溶液を100μl/wellで添加し、37℃で5分間インキュベートを行った後、475nmにおける吸光度を測定した。   The test solution was prepared as follows. After adding the sample solution to the 96-well plate at 100 μl / well, the enzyme solution was added at 100 μl / well and incubated at 37 ° C. for 10 minutes. Furthermore, the substrate solution was added at 100 μl / well and incubated at 37 ° C. for 5 minutes, and then the absorbance at 475 nm was measured.

被験溶液blankの調製は以下のように行った。96ウェルプレートにサンプル溶液を100μl/wellで添加した後、酵素溶液を100μl/wellで添加し、37℃で10分間インキュベートを行った。さらに、基質溶液に変えて1/15Mリン酸緩衝液(pH7.2)を100μl/wellで添加し、37℃で5分間インキュベートを行った後、475nmにおける吸光度を測定した。   The test solution blank was prepared as follows. After adding the sample solution to the 96-well plate at 100 μl / well, the enzyme solution was added at 100 μl / well and incubated at 37 ° C. for 10 minutes. Furthermore, instead of the substrate solution, 1/15 M phosphate buffer (pH 7.2) was added at 100 μl / well, incubated at 37 ° C. for 5 minutes, and then the absorbance at 475 nm was measured.

対照溶液の調製は以下のように行った。96ウェルプレートに1/15Mリン酸緩衝液(pH7.2)を100μl/wellで添加した後、酵素溶液を100μl/wellで添加し、37℃で10分間インキュベートを行った。さらに、基質溶液を100μl/wellで添加し、37℃で5分間インキュベートを行った後、475nmにおける吸光度を測定した。   The control solution was prepared as follows. After adding 1 / 15M phosphate buffer (pH 7.2) to a 96-well plate at 100 μl / well, an enzyme solution was added at 100 μl / well and incubated at 37 ° C. for 10 minutes. Furthermore, the substrate solution was added at 100 μl / well and incubated at 37 ° C. for 5 minutes, and then the absorbance at 475 nm was measured.

対照溶液blankの調製は以下のように行った。96ウェルプレートに1/15Mリン酸緩衝液(pH7.2)を100μl/wellで添加した後、酵素溶液を100μl/wellで添加し、37℃で10分間インキュベートを行った。さらに、1/15Mリン酸緩衝液(pH7.2)を100μl/wellで添加し、37℃で5分間インキュベートを行った後、475nmにおける吸光度を測定した。   The control solution blank was prepared as follows. After adding 1 / 15M phosphate buffer (pH 7.2) to a 96-well plate at 100 μl / well, an enzyme solution was added at 100 μl / well and incubated at 37 ° C. for 10 minutes. Further, 1/15 M phosphate buffer (pH 7.2) was added at 100 μl / well, and incubated at 37 ° C. for 5 minutes, and then the absorbance at 475 nm was measured.

チロシナーゼ活性阻害は次の式から求められる阻害率で表した。
阻害率(%)=[100−[(A−B)/(C−D)]×100]
A:被験溶液の475nmにおける吸光度。
B:被験溶液blankの475nmにおける吸光度。
C:対照溶液の475nmにおける吸光度。
D:対照溶液blankの475nmにおける吸光度。
Tyrosinase activity inhibition was expressed as an inhibition rate obtained from the following formula.
Inhibition rate (%) = [100 − [(AB) / (CD)] × 100]
A: Absorbance at 475 nm of the test solution.
B: Absorbance at 475 nm of the test solution blank.
C: Absorbance at 475 nm of the control solution.
D: Absorbance at 475 nm of the control solution blank.

結果を表2に示す。
The results are shown in Table 2.

表2の結果から、葛花抽出物は、優れたチロシナーゼ活性阻害効果を有することがわかる。すなわち、葛花抽出物から得られるチロシナーゼ阻害効果は、同量のイソフラボン類を含有する大豆抽出物の阻害効果に比べて非常に優れている。これらは、本発明に用いられる葛花抽出物が、従来チロシナーゼ阻害剤として知られるイソフラボン類、あるいはイソフラボン類を含有する植物抽出物に比べて、優れたチロシナーゼ阻害効果を有することを示す。したがって、葛花抽出物は優れた美白効果を発揮し、美白剤として有用である。   From the results in Table 2, it can be seen that the Kuzuka extract has an excellent tyrosinase activity inhibitory effect. That is, the tyrosinase inhibitory effect obtained from the Kuzuhana extract is very superior to the inhibitory effect of the soybean extract containing the same amount of isoflavones. These indicate that the Kuzuka extract used in the present invention has an excellent tyrosinase inhibitory effect as compared to isoflavones conventionally known as tyrosinase inhibitors or plant extracts containing isoflavones. Therefore, the Kuzuhana extract exhibits an excellent whitening effect and is useful as a whitening agent.

以上の通り、本発明に関する葛花抽出物を含有することを特徴とする美白剤は、チロシナーゼ活性阻害作用およびメラニン生成抑制作用を有する。よって、この美白剤を化粧品や食品に含有することで、優れた美白効果を発揮する化粧品、食品を得ることができる。本発明に記載の美白剤は、葛花抽出物をそのまま、または種々の成分を加えて、化粧品、食品などとして用いることができる。 As described above, the whitening agent characterized by containing the Kuzuka extract relating to the present invention has a tyrosinase activity inhibitory action and a melanin production inhibitory action. Therefore, cosmetics and foods exhibiting an excellent whitening effect can be obtained by including this whitening agent in cosmetics and foods. The whitening agent described in the present invention can be used as cosmetics, foods, and the like by using the Kuzuka extract as it is or by adding various components.

本発明に関する葛花抽出物を含有することを特徴とする美白剤は、チロシナーゼ活性阻害作用およびメラニン生成抑制作用を有する。よって、この美白剤を化粧品や食品に含有することで、優れた美白効果を発揮する化粧品、食品を得ることができる。本発明に記載の美白剤は、葛花抽出物をそのまま、または種々の成分を加えて、化粧品、食品などとして用いることができる。   The whitening agent characterized by containing the Kuzuka extract relating to the present invention has a tyrosinase activity inhibitory action and a melanin production inhibitory action. Therefore, cosmetics and foods exhibiting an excellent whitening effect can be obtained by including this whitening agent in cosmetics and foods. The whitening agent described in the present invention can be used as cosmetics, foods, and the like by using the Kuzuka extract as it is or by adding various components.

Claims (4)

葛花抽出物を含有することを特徴とする、美白剤。 Whitening agent characterized by containing Kuzuhana extract. 前記葛花抽出物が、メラニン生成抑制作用を有することを特徴とする、請求項1記載の美白剤。 The whitening agent according to claim 1, wherein the Kuzuhana extract has a melanin production inhibitory action. 前記葛花抽出物が、チロシナーゼ活性阻害作用を有することを特徴とする、請求項1記載の美白剤。 The whitening agent according to claim 1, wherein the Kuzuhana extract has a tyrosinase activity inhibitory action. 請求項1から3に記載の美白剤を含有することを特徴とする美白用化粧品。
A whitening cosmetic comprising the whitening agent according to claim 1.
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