JP2011001326A - ENDOTHELIN-1 mRNA EXPRESSION INHIBITOR - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、エンドセリン−１ｍＲＮＡ発現抑制剤に関するものである。 The present invention relates to an endothelin-1 mRNA expression inhibitor.
シミ、ソバカス、日焼け後の皮膚色素沈着症等は、皮膚内に存在する色素細胞（メラノサイト）が活性化することにより、メラニンの産生が著しく亢進した結果として生じるものであり、中高年齢層における肌の悩みの一つになっている。 Spots, buckwheat, skin pigmentation after sunburn, etc. occur as a result of markedly increased production of melanin due to activation of pigment cells (melanocytes) present in the skin. It has become one of the troubles.
従来の美白剤開発は、メラニン生成の律速酵素であるチロシナーゼに注力して進められてきたが、近年、紫外線ＵＶ−Ｂ照射後に表皮ケラチノサイトから産生され、メラノサイトを活性化するサイトカインとして、α−メラノサイト刺激ホルモン（α−ＭＳＨ）、エンドセリン−１（ＥＴ−１）、一酸化窒素（ＮＯ）等が知られており、これらが関与する情報伝達系を遮断することによりメラニンの産生を抑制して美白効果を導く各種作用剤の開発が盛んに行われてきている。 Conventional whitening agent development has been focused on tyrosinase, which is the rate-limiting enzyme for melanin production. Stimulating hormone (α-MSH), endothelin-1 (ET-1), nitric oxide (NO), and the like are known, and the production of melanin is suppressed by blocking the information transmission system in which these are involved. Various agents that lead to the effect have been actively developed.
また、循環器系疾患（例えば、心筋梗塞、高血圧、虚血性心疾患等）や腎疾患（例えば、急性腎不全等）の患者において、血中エンドセリン−１濃度が上昇していることが知られているため、エンドセリン−１の過剰分泌を抑制すること、すなわちエンドセリン−１ｍＲＮＡの発現上昇を抑制することによって、これらの疾患の予防・治療効果が期待できると考えられる。 It is also known that blood endothelin-1 levels are elevated in patients with cardiovascular diseases (eg, myocardial infarction, hypertension, ischemic heart disease, etc.) and renal diseases (eg, acute renal failure). Therefore, it is considered that the prevention / treatment effect of these diseases can be expected by suppressing the excessive secretion of endothelin-1, that is, suppressing the increase in the expression of endothelin-1 mRNA.
このような考えに基づき、エンドセリン−１のメラノサイトへの作用を阻害する生薬としては、カミツレ抽出物、アルテア抽出物（非特許文献１参照）等が知られており、表皮ケラチノサイトからのエンドセリン−１産生を抑制する生薬としては、ジユ抽出物（非特許文献１参照）、β−グリチルレチン酸ステアリル（特許文献１参照）等が知られている。 Based on this idea, chamomile extract, artea extract (see Non-Patent Document 1) and the like are known as herbal medicines that inhibit the action of endothelin-1 on melanocytes, and endothelin-1 from epidermal keratinocytes is known. Known herbal medicines that suppress the production include citrus extract (see Non-patent Document 1), β-glycyrrhetinic acid stearyl (see Patent Document 1), and the like.
本発明は、安全性の高い天然物の中からエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現抑制作用剤を提供することを目的とする。 An object of the present invention is to provide an endothelin-1 mRNA expression inhibitor from among highly safe natural products.
上記課題を解決するため、本発明のエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現抑制剤は、エイジツ抽出物、ワイルドタイム抽出物及びオランダガラシ抽出物からなる群より選ばれる１種又は２種以上を有効成分として含有することを特徴とする。 In order to solve the above problems, the endothelin-1 mRNA expression inhibitor of the present invention contains one or more selected from the group consisting of Agetsu extract, Wildtime extract and Dutch pepper extract as an active ingredient. It is characterized by.
本発明によれば、エイジツ抽出物、ワイルドタイム抽出物及びオランダガラシ抽出物からなる群より選ばれる１種又は２種以上を有効成分として含有することを特徴とするエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現抑制剤を提供することができる。 According to the present invention, there is provided an endothelin-1 mRNA expression inhibitor comprising, as an active ingredient, one or more selected from the group consisting of Agetsu extract, Wildtime extract and Dutch pepper extract. can do.
以下、本発明について説明する。本発明のエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現抑制剤は、エイジツ抽出物、ワイルドタイム抽出物及びオランダガラシ抽出物からなる群より選ばれる１種又は２種以上を有効成分として含有する。 The present invention will be described below. The endothelin-1 mRNA expression inhibitor of the present invention contains, as an active ingredient, one or more selected from the group consisting of Agetsu extract, Wildtime extract and Dutch pepper extract.
ここで、本発明において「抽出物」には、上記植物を抽出原料として得られる抽出液、当該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、当該抽出液を乾燥して得られる乾燥物、又はこれらの粗精製物若しくは精製物のいずれもが含まれる。 Here, in the present invention, “extract” refers to an extract obtained from the above plant as an extraction raw material, a diluted or concentrated solution of the extract, a dried product obtained by drying the extract, or a crude product thereof. Both purified products and purified products are included.
本発明において使用する抽出原料は、エイジツ、ワイルドタイム及びオランダガラシである。２種以上の植物を抽出原料として用いる場合、上記植物を任意に組み合わせて使用することができる。 The extraction raw materials used in the present invention are Ages, Wild Time and Dutch Pepper. When using two or more kinds of plants as an extraction raw material, the above plants can be used in any combination.
エイジツ（学名：Ｒｏｓａ ｍｕｌｔｉｆｌｏｒａ）は、バラ科植物のノイバラの成熟果実を乾燥させたもののことをいう。ノイバラは、北海道西南部から九州、朝鮮半島に分布する落葉の低木であって、ノイバラの成熟果実の乾燥物であるエイジツは、これらの地域から容易に入手することができる。 Ages (scientific name: Rosa multiflora) refers to a dried dried fruit of a rose of a rose family plant. Neubara is a deciduous shrub distributed from southwestern Hokkaido to Kyushu and the Korean peninsula, and Ages, which is a dried product of mature roses, can be easily obtained from these regions.
ワイルドタイム（学名：Ｔｈｙｍｕｓ ｓｅｒｐｈｙｌｌｕｍ 別名：ヨウシュイブキジャコウソウ）は、シソ科に属する植物でヨーロッパから北西アジアを原産とし、広い地域で生育しており、これらの地域から容易に入手することができる。抽出原料として使用し得る部位としては、例えば、葉、茎、花、地上部又はこれらの混合物等が挙げられるが、好ましくは葉部である。 Wild thyme (scientific name: Thymus serphyllum, also known as: Thymus serphyllum) is a plant belonging to the family Lamiaceae, is native to Europe and Northwest Asia, grows in a wide area, and can be easily obtained from these areas. Examples of the part that can be used as the raw material for extraction include leaves, stems, flowers, above-ground parts, or a mixture thereof, and the like is preferable.
オランダガラシ（学名：Ｎａｓｔｕｒｔｉｕｍ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅ）は、アブラナ科に属し、サラダ等に利用されている。オランダガラシはヨーロッパから中央アジア原産で、日本でも広く自生しており、これらの地域から容易に入手することができる。抽出原料として使用し得る部位としては、例えば、葉、茎、花、根、地上部又はこれらの部位の混合物等が挙げられるが、好ましくは葉及び地上部である。 Dutch pepper (scientific name: Nasturium officinale) belongs to the Brassicaceae family and is used for salads and the like. Dutch glass is native to Central Asia from Europe and is also widely grown in Japan and is readily available from these regions. Examples of the part that can be used as the raw material for extraction include leaves, stems, flowers, roots, above-ground parts, or a mixture of these parts, with the leaves and above-ground parts being preferred.
上記抽出原料からの抽出物に含有されるエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現抑制作用を有する物質の詳細は不明であるが、天然物の抽出に一般に使用されている抽出方法によって、上記抽出原料からこれらの作用を有する抽出物を得ることができる。 The details of the substance having an endothelin-1 mRNA expression-suppressing action contained in the extract from the extraction raw material are unknown, but these actions are removed from the extraction raw material by an extraction method generally used for extraction of natural products. The extract which has can be obtained.
例えば、上記抽出原料を必要に応じて乾燥した後、そのまま又は粗砕機を使用して粉砕し、抽出溶媒による抽出に供することにより、エンドセリン−１ｍＲＮＡ発現抑制作用を有する抽出物を得ることができる。乾燥は天日で行ってもよいし、通常使用される乾燥機を使用して行ってもよい。また、ヘキサン等の非極性溶媒によって脱脂等の前処理を施してから抽出原料として使用してもよい。脱脂等の前処理を行うことにより、上記抽出原料の極性溶媒による抽出処理を効率よく行うことができる。 For example, after drying the said extraction raw material as needed, it grind | pulverizes as it is or using a crusher, and uses for the extraction by an extraction solvent, The extract which has an endothelin-1 mRNA expression inhibitory effect can be obtained. Drying may be performed in the sun or using a commonly used dryer. Moreover, after performing pretreatment, such as degreasing, with a nonpolar solvent such as hexane, it may be used as an extraction raw material. By performing a pretreatment such as degreasing, the extraction material can be efficiently extracted with a polar solvent.
抽出溶媒としては、極性溶媒を使用するのが好ましく、例えば、水、親水性有機溶媒等が挙げられ、これらを単独で又は２種以上を組み合わせて、室温又は溶媒の沸点以下の温度で使用することが好ましい。 As the extraction solvent, it is preferable to use a polar solvent, and examples thereof include water and hydrophilic organic solvents. These are used alone or in combination of two or more at room temperature or a temperature below the boiling point of the solvent. It is preferable.
抽出溶媒として使用し得る水としては、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水等のほか、これらに各種処理を施したものが含まれる。水に施す処理としては、例えば、精製、加熱、殺菌、濾過、イオン交換、浸透圧調整、緩衝化等が含まれる。したがって、本発明において抽出溶媒として使用し得る水には、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等も含まれる。 Examples of water that can be used as the extraction solvent include pure water, tap water, well water, mineral spring water, mineral water, hot spring water, spring water, fresh water, and the like, and those subjected to various treatments. Examples of the treatment applied to water include purification, heating, sterilization, filtration, ion exchange, osmotic pressure adjustment, buffering, and the like. Therefore, the water that can be used as the extraction solvent in the present invention includes purified water, hot water, ion-exchanged water, physiological saline, phosphate buffer, phosphate buffered saline, and the like.
抽出溶媒として使用し得る親水性有機溶媒としては、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の炭素数１〜５の低級脂肪族アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等の低級脂肪族ケトン；１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等の炭素数２〜５の多価アルコール等が挙げられる。 Examples of hydrophilic organic solvents that can be used as extraction solvents include lower aliphatic alcohols having 1 to 5 carbon atoms such as methanol, ethanol, propyl alcohol, and isopropyl alcohol; lower aliphatic ketones such as acetone and methyl ethyl ketone; 1,3-butylene. Examples thereof include polyhydric alcohols having 2 to 5 carbon atoms such as glycol, propylene glycol and glycerin.
２種以上の極性溶媒の混合液を抽出溶媒として使用する場合、その混合比は適宜調整することができる。例えば、水と低級脂肪族アルコールとの混合液を使用する場合には、水１０容量部に対して低級脂肪族アルコール１〜９０容量部を混合することが好ましく、水と低級脂肪族ケトンとの混合液を使用する場合には、水１０容量部に対して低級脂肪族ケトン１〜４０容量部を混合することが好ましく、水と多価アルコールとの混合液を使用する場合には、水１０容量部に対して多価アルコール１０〜９０容量部を混合することが好ましい。 When using the liquid mixture of 2 or more types of polar solvents as an extraction solvent, the mixing ratio can be adjusted suitably. For example, when using a mixed solution of water and a lower aliphatic alcohol, it is preferable to mix 1 to 90 parts by volume of a lower aliphatic alcohol with respect to 10 parts by volume of water. When using a mixed solution, it is preferable to mix 1 to 40 parts by volume of a lower aliphatic ketone with 10 parts by volume of water, and when using a mixed solution of water and a polyhydric alcohol, water 10 It is preferable to mix 10 to 90 parts by volume of a polyhydric alcohol with respect to the volume part.
抽出処理は、抽出原料に含まれる可溶性成分を抽出溶媒に溶出させ得る限り特に限定はされず、常法に従って行うことができる。例えば、抽出原料の５〜１５倍量（質量比）の抽出溶媒に、抽出原料を浸漬し、常温又は還流加熱下で可溶性成分を抽出させた後、濾過して抽出残渣を除去することにより抽出液を得ることができる。得られた抽出液は、該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、該抽出液の乾燥物、又はこれらの粗精製物若しくは精製物を得るために、常法に従って希釈、濃縮、乾燥、精製等の処理を施してもよい。 The extraction treatment is not particularly limited as long as the soluble component contained in the extraction raw material can be eluted in the extraction solvent, and can be performed according to a conventional method. For example, the extraction raw material is immersed in an extraction solvent 5 to 15 times (mass ratio) of the extraction raw material, the soluble components are extracted at room temperature or under reflux, and then filtered to remove the extraction residue. A liquid can be obtained. The obtained extract is diluted, concentrated, dried, purified, etc. according to a conventional method in order to obtain a diluted or concentrated solution of the extract, a dried product of the extract, or a crude purified product or a purified product thereof. Processing may be performed.
精製は、例えば、活性炭処理、吸着樹脂処理、イオン交換樹脂処理等により行うことができる。得られた抽出液はそのままでもグルタチオン産生促進剤の有効成分として使用することができるが、濃縮液又は乾燥物としたものの方が使用しやすい。 Purification can be performed by, for example, activated carbon treatment, adsorption resin treatment, ion exchange resin treatment, or the like. The obtained extract can be used as it is as an active ingredient of a glutathione production promoter, but a concentrate or a dried product is easier to use.
エイジツ抽出物、ワイルドタイム抽出物及びオランダガラシ抽出物は特有の匂いを有しているため、その生理活性の低下を招かない範囲で脱色、脱臭等を目的とする精製を行うことも可能であるが、皮膚化粧料等に配合する場合には大量に使用するものではないから、未精製のままでも実用上支障はない。 Ages extract, wild thyme extract and Dutch pepper extract have unique odors, so it is possible to carry out purification aimed at decolorization, deodorization, etc. within a range that does not cause a decrease in their physiological activity. However, since it is not used in a large amount when blended into skin cosmetics, there is no practical problem even if it is not purified.
以上のようにして得られるエイジツ抽出物、ワイルドタイム抽出物及びオランダガラシ抽出物は、エンドセリン−１ｍＲＮＡ発現抑制作用を有しているため、これらの作用を利用してエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現抑制剤の有効成分として使用することができる。 Since the age extract, wild time extract and Dutch pepper extract obtained as described above have an endothelin-1 mRNA expression-suppressing action, the endothelin-1 mRNA expression-suppressing agent is effectively used by utilizing these actions. Can be used as an ingredient.
また、エイジツ抽出物、ワイルドタイム抽出物及びオランダガラシ抽出物は、そのエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現抑制作用を利用して、エンドセリン−１ｍＲＮＡの発現上昇に起因する疾患の予防・治療剤（例えば、心筋梗塞、高血圧等の循環器系疾患の予防・治療剤等）の有効成分として用いることもできる。 Further, Agez extract, Wildtime extract and Dutch pepper extract use their endothelin-1 mRNA expression inhibitory action to prevent or treat diseases caused by increased expression of endothelin-1 mRNA (for example, myocardial infarction, It can also be used as an active ingredient in a prophylactic / therapeutic agent for cardiovascular diseases such as hypertension.
本発明のエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現抑制剤は、エイジツ抽出物、ワイルドタイム抽出物及びオランダガラシ抽出物からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物抽出物のみからなるものでもよいし、エイジツ抽出物、ワイルドタイム抽出物及びオランダガラシ抽出物からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物抽出物を製剤化したものでもよい。 The endothelin-1 mRNA expression inhibitor of the present invention may be composed of only one or two or more plant extracts selected from the group consisting of Ages extract, Wild Time extract and Dutch pepper extract, or Ages extraction One or two or more kinds of plant extracts selected from the group consisting of an extract, a wild time extract and a Dutch pepper extract may be formulated.
エイジツ抽出物、ワイルドタイム抽出物及びオランダガラシ抽出物からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物抽出物は、デキストリン、シクロデキストリン等の薬学的に許容し得るキャリアーその他任意の助剤を使用して、常法に従い、粉末状、顆粒状、錠剤状、液状等の任意の剤形に製剤化することができる。この際、助剤としては、例えば、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、安定剤、矯味・矯臭剤等を使用することができる。また、エイジツ抽出物、ワイルドタイム抽出物及びオランダガラシ抽出物からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物抽出物は、他の組成物（例えば、皮膚化粧料等）に配合して使用することができるほか、軟膏剤、外用液剤、貼付剤等として使用することができる。 One or two or more kinds of plant extracts selected from the group consisting of ages extract, wild thyme extract and Dutch pepper extract are pharmaceutically acceptable carriers such as dextrin and cyclodextrin and other optional auxiliaries. Using it, it can be formulated into an arbitrary dosage form such as powder, granule, tablet, and liquid according to a conventional method. In this case, as an auxiliary agent, for example, an excipient, a binder, a disintegrant, a lubricant, a stabilizer, a flavoring / flavoring agent, and the like can be used. In addition, one or more plant extracts selected from the group consisting of Ages extract, Wild thyme extract and Dutch pepper extract are used in combination with other compositions (for example, skin cosmetics). In addition, it can be used as an ointment, a solution for external use, a patch and the like.
なお、本発明のエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現抑制剤は、必要に応じて、エンドセリン−１ｍＲＮＡ発現抑制作用を有する他の植物抽出物を配合して有効成分として使用することができる。 In addition, the endothelin-1 mRNA expression inhibitor of this invention can mix | blend the other plant extract which has an endothelin-1 mRNA expression inhibitory effect as needed, and can use it.
本発明のエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現抑制剤の投与方法としては、一般に経皮投与、経口投与等が挙げられるが、疾患の種類に応じて、その予防・治療等に好適な方法を適宜選択すればよい。また、本発明のエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現抑制剤の投与量も、疾患の種類、重症度、患者の個人差、投与方法、投与期間等によって適宜増減すればよい。 The administration method of the endothelin-1 mRNA expression inhibitor of the present invention generally includes transdermal administration, oral administration, and the like, but a suitable method for its prevention / treatment may be appropriately selected depending on the type of disease. . In addition, the dosage of the endothelin-1 mRNA expression inhibitor of the present invention may be appropriately increased or decreased depending on the type of disease, severity, individual differences among patients, administration method, administration period, and the like.
本発明のエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現抑制剤は、エイジツ抽出物、ワイルドタイム抽出物及びオランダガラシ抽出物からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物抽出物が有するエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現抑制作用を通じて、エンドセリン−１の産生を抑制し、シミ、ソバカス、皮膚の色黒（皮膚色素沈着症）等を予防・改善することができる。また、本発明のエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現抑制剤は、エイジツ抽出物、ワイルドタイム抽出物及びオランダガラシ抽出物からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物抽出物が有するエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現抑制作用を通じて、心筋梗塞、高血圧等の循環器系疾患を予防、治療又は改善することができる。ただし、本発明のエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現抑制剤は、これらの用途以外にも、エンドセリン−１ｍＲＮＡ発現抑制作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。 The endothelin-1 mRNA expression inhibitor of the present invention is an endothelin-1 mRNA expression inhibitory action possessed by one or more plant extracts selected from the group consisting of Ages extract, Wildtime extract and Dutch pepper extract, Production of endothelin-1 can be suppressed, and spots, buckwheat, skin darkness (skin pigmentation) and the like can be prevented / improved. Moreover, the endothelin-1 mRNA expression inhibitor of this invention has the endothelin-1 mRNA expression inhibitory action which the 1 type, or 2 or more types of plant extract chosen from the group which consists of an age extract, a wild time extract, and a Dutch pepper extract has. Through this, cardiovascular diseases such as myocardial infarction and hypertension can be prevented, treated or ameliorated. However, the endothelin-1 mRNA expression inhibitor of the present invention can be used for all uses other than these uses, which are meaningful for exerting an endothelin-1 mRNA expression inhibitory action.
なお、本発明のエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現抑制剤は、ヒトに対して好適に適用されるものであるが、それぞれの作用効果が奏される限り、ヒト以外の動物に対して適用することもできる。 In addition, although the endothelin-1 mRNA expression inhibitor of the present invention is suitably applied to humans, it can also be applied to animals other than humans as long as each effect is exhibited.
以下、試験例を示し、本発明を具体的に説明するが、本発明は下記の試験例に何ら制限
されるものではない。なお、本試験例において、エイジツ抽出物、ワイルドタイム抽出物及びオランダガラシ抽出物は、エイジツ抽出液、ワイルドタイム抽出液及びオランダガラシ抽出液（全て丸善製薬社製）の凍結乾燥品を各植物の抽出物（試料）として用いた。
Hereinafter, although a test example is shown and this invention is demonstrated concretely, this invention is not restrict | limited to the following test example at all. In this test example, the ages extract, the wild thyme extract and the Dutch pepper extract are the lyophilized products of the ages extract, the wild thyme extract and the Dutch pepper extract (all manufactured by Maruzen Pharmaceutical Co., Ltd.). Used as an extract (sample).
〔試験例１〕エンドセリン−１ｍＲＮＡ発現抑制作用試験
各植物抽出物について、以下のようにしてエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現抑制作用を試験した。
[Test Example 1] Endothelin-1 mRNA expression inhibitory action test Each plant extract was tested for endothelin-1 mRNA expression inhibitory action as follows.
正常ヒト新生児包皮表皮角化細胞（Ｎｏｒｍａｌ Ｈｕｍａｎ Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ Ｋｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅ，ＮＨＥＫ）を８０ｃｍ２フラスコで正常ヒト表皮角化細胞長期培養用増殖培地（ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２）において、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの条件下で前培養し、トリプシン処理により細胞を集めた。 Normal human neonatal foreskin keratinocytes (Normal Human Epidermal keratinocytes, NHEK) in a growth medium (EpiLife-KG2) for long-term culture of normal human epidermal keratinocytes in an 80 cm 2 flask at 37 ° C., 5% CO 2 -95% air The cells were precultured under the above conditions and cells were collected by trypsin treatment.
ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２を用いて３５ｍｍシャーレ（ＦＡＬＣＯＮ）に４０×１０４ｃｅｌｌｓ／２ｍＬ／シャーレずつ播き、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの条件下で一晩培養した。２４時間後に培養液を捨て、ＨＥＰＥＳ緩衝液１ｍＬを加えてＵＶ−Ｂ照射（５０ｍＪ／ｃｍ２）を行い、その後ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２で必要濃度に溶解した試験試料（試料１，試料濃度は下記表を参照）を各シャーレに２ｍＬずつ添加し、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの条件下で２４時間培養した。培養後、培養液を捨て、ＩＳＯＧＥＮ（ニッポンジーン社製，Ｃａｔ．ｎｏ．３１１−０２５０１）にて総ＲＮＡを抽出し、それぞれのＲＮＡ量を分光光度計にて測定し、２００ｎｇ／μＬになるように総ＲＮＡを調製した。 Epilife-KG2 was used to seed 40 × 10 4 cells / 2 mL / dish in 35 mm dishes (FALCON) and cultured overnight at 37 ° C. and 5% CO 2 -95% air. After 24 hours, the culture solution was discarded, 1 mL of HEPES buffer was added, UV-B irradiation (50 mJ / cm 2 ) was performed, and then the test sample dissolved in EpiLife-KG2 to the required concentration (sample 1, sample concentration is shown in the table below). 2 mL was added to each petri dish, and cultured for 24 hours under conditions of 37 ° C., 5% CO 2 -95% air. After culturing, the culture solution is discarded, and total RNA is extracted with ISOGEN (Nippon Gene, Cat. No. 311-02501), and the amount of each RNA is measured with a spectrophotometer so that it becomes 200 ng / μL. Total RNA was prepared.
この総ＲＮＡを鋳型とし、エンドセリン−１及び内部標準であるＧＡＰＤＨのｍＲＮＡの発現量を測定した。検出はリアルタイムＰＣＲ装置Ｓｍａｒｔ Ｃｙｃｌｅｒ（Ｃｅｐｈｅｉｄ社製）を用いて、ＴａＫａＲａ ＳＹＢＲ ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔ ＲＴ−ＰＣＲ Ｋｉｔ（Ｐｅｒｆｅｃｔ Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅ，ｃｏｄｅ Ｎｏ． ＲＲ０６３Ａ）によるリアルタイム２Ｓｔｅｐ ＲＴ−ＰＣＲ反応により行った。エンドセリン−１のｍＲＮＡの発現量は、紫外線未照射・試料無添加、紫外線照射・試料無添加及び紫外線照射・試料添加でそれぞれ培養した細胞から調製した総ＲＮＡ標品を基にして、ＧＡＰＤＨの値で補正値を求め、さらに紫外線未照射・試料無添加の補正値を１００とした時の紫外線照射・試料無添加及び紫外線照射・試料添加の補正値を算出した。得られた結果から、下記式によりエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現抑制率（％）を算出した。 Using this total RNA as a template, the expression levels of mRNA for endothelin-1 and GAPDH as an internal standard were measured. The detection was performed by real-time 2 Step RT-PCR reaction using TaKaRa SYBR PrimeScript RT-PCR Kit (Perfect Real Time, code No. RR063A) using a real-time PCR apparatus Smart Cycler (manufactured by Cepheid). The expression level of endothelin-1 mRNA is the value of GAPDH based on the total RNA preparations prepared from cells cultured without UV irradiation / sample addition, UV irradiation / sample addition and UV irradiation / sample addition, respectively. Then, the correction value was calculated, and the correction values for UV irradiation / no sample addition and UV irradiation / sample addition when the correction value for UV non-irradiation / no sample addition was 100 were calculated. From the obtained results, the endothelin-1 mRNA expression inhibition rate (%) was calculated by the following formula.
ｍＲＮＡ発現抑制率(％)＝{(Ａ−Ｂ)−(Ａ−Ｃ)}／(Ａ−Ｂ)×１００
式中Ａは「紫外線未照射・試料無添加時の補正値」を表し、Ｂは「紫外線照射・試料無添加時の補正値」を表し、Ｃは「紫外線照射・試料添加時の補正値」を表す。結果を表１に示す。
mRNA expression suppression rate (%) = {(A−B) − (A−C)} / (A−B) × 100
In the formula, A represents “correction value when UV irradiation is not performed and no sample is added”, B is “correction value when UV irradiation is performed and no sample is added”, and C is “correction value when UV irradiation is performed and sample is not added”. Represents. The results are shown in Table 1.
〔表１〕
試料名 試料添加濃度 エンドセリン−１mRNA発現上昇抑制率
エイジツ抽出物 １μｇ／ｍＬ ２６．１％
ワイルドタイム抽出物 １μｇ／ｍＬ ５３．１％
１０μｇ／ｍＬ ２６．１％
オランダガラシ抽出物 １μｇ／ｍＬ １３．０％
１０μｇ／ｍＬ ２５．３％
[Table 1]
Sample name Sample addition concentration Endothelin-1 mRNA expression increase inhibition rate Ages extract 1 μg / mL 26.1%
Wild time extract 1 μg / mL 53.1%
10 μg / mL 26.1%
Dutch pepper extract 1μg / mL 13.0%
10 μg / mL 25.3%
表１に示すように、エイジツ抽出物、ワイルドタイム抽出物及びオランダガラシ抽出物は、優れたエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現抑制作用をすることが確認された。 As shown in Table 1, it was confirmed that the Ages extract, the Wild Time extract, and the Dutch pepper extract have an excellent endothelin-1 mRNA expression inhibitory action.
〔配合例１〕
下記組成の乳液を常法により製造した。
エイジツ抽出物 ０．０１ｇ
ホホバオイル ４．０ｇ
プラセンタエキス ０．１ｇ
オリーブオイル ２．０ｇ
スクワラン ２．０ｇ
セタノール ２．０ｇ
モノステアリン酸グリセリル ２．０ｇ
ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．０） ２．５ｇ
オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．０） ２．０ｇ
グリチルレチン酸ステアリル ０．１ｇ
１，３−ブチレングリコール ３．０ｇ
ヒノキチオール ０．１５ｇ
香料 ０．０５ｇ
精製水 残部（全量を１００ｇとする）
[Formulation Example 1]
An emulsion having the following composition was produced by a conventional method.
Ages extract 0.01g
Jojoba oil 4.0g
Placenta extract 0.1g
Olive oil 2.0g
Squalane 2.0g
Cetanol 2.0g
Glyceryl monostearate 2.0g
2.5 g of polyoxyethylene cetyl ether (20E.0)
Oleic acid polyoxyethylene sorbitan (20E.0) 2.0 g
Stearyl glycyrrhetinate 0.1g
1,3-butylene glycol 3.0 g
Hinokitiol 0.15g
Fragrance 0.05g
Purified water remainder (total amount is 100 g)
〔配合例２〕
下記組成の化粧水を常法により製造した。
ワイルドタイム抽出物 ２ｇ
グリセリン ３ｇ
１，３−ブチレングリコール ３ｇ
オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．０） ０．５ｇ
パラオキシ安息香酸メチル ０．１５ｇ
クエン酸 ０．１ｇ
クエン酸ソーダ ０．１ｇ
香料 ０．０５ｇ
精製水 残部（全量を１００ｇとする）
[Formulation Example 2]
A lotion having the following composition was produced by a conventional method.
Wild time extract 2g
Glycerin 3g
1,3-butylene glycol 3g
Oleic acid polyoxyethylene sorbitan (20E.0) 0.5g
Methyl paraoxybenzoate 0.15g
Citric acid 0.1g
Sodium citrate 0.1g
Fragrance 0.05g
Purified water remainder (total amount is 100 g)
〔配合例３〕
下記組成のクリームを常法により製造した。
オランダガラシ抽出物 ０．０５ｇ
アロエエキス ０．１ｇ
流動パラフィン ５．０ｇ
サラシミツロウ ４．０ｇ
スクワラン １０．０ｇ
セタノール ３．０ｇ
ラノリン ２．０ｇ
ステアリン酸 １．０ｇ
オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．０） １．５ｇ
モノステアリン酸グリセリル ３．０ｇ
油溶性甘草エキス ０．１ｇ
１，３−ブチレングリコール ６．０ｇ
パラオキシ安息香酸メチル １．５ｇ
香料 ０．１ｇ
精製水 残部（全量を１００ｇとする）
[Composition Example 3]
A cream having the following composition was produced by a conventional method.
Dutch pepper extract 0.05g
Aloe extract 0.1g
Liquid paraffin 5.0g
Salami beeswax 4.0g
Squalane 10.0g
Cetanol 3.0g
Lanolin 2.0g
Stearic acid 1.0g
Oleic acid polyoxyethylene sorbitan (20E.0) 1.5g
3.0 g glyceryl monostearate
Oil soluble licorice extract 0.1g
1,3-butylene glycol 6.0 g
1.5 g of methyl paraoxybenzoate
Fragrance 0.1g
Purified water remainder (total amount is 100 g)
〔配合例４〕
下記組成のパックを常法により製造した。
エイジツ抽出物 ０．０５ｇ
ヨクイニンエキス ０．１ｇ
ポリビニルアルコール １５ｇ
ポリエチレングリコール ３ｇ
プロピレングリコール ７ｇ
エタノール １０ｇ
パラオキシ安息香酸メチル ０．０５ｇ
グリチルリチン酸ジカリウム ０．１ｇ
香料 ０．０５ｇ
精製水 残部（全量を１００ｇとする）
[Formulation Example 4]
A pack having the following composition was produced by a conventional method.
Ages extract 0.05g
Yokuinin extract 0.1g
Polyvinyl alcohol 15g
Polyethylene glycol 3g
7g of propylene glycol
Ethanol 10g
0.05 g of methyl paraoxybenzoate
0.1g dipotassium glycyrrhizinate
Fragrance 0.05g
Purified water remainder (total amount is 100 g)
本発明のエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現抑制剤は、皮膚の老化、乾燥肌、しわ、肌
荒れ等の予防又は改善に大きく貢献できる。
The endothelin-1 mRNA expression inhibitor of the present invention can greatly contribute to the prevention or improvement of skin aging, dry skin, wrinkles, rough skin and the like.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2009147221A JP2011001326A (en) | 2009-06-22 | 2009-06-22 | ENDOTHELIN-1 mRNA EXPRESSION INHIBITOR |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2009147221A JP2011001326A (en) | 2009-06-22 | 2009-06-22 | ENDOTHELIN-1 mRNA EXPRESSION INHIBITOR |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2011001326A true JP2011001326A (en) | 2011-01-06 |
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ID=43559606
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2009147221A Pending JP2011001326A (en) | 2009-06-22 | 2009-06-22 | ENDOTHELIN-1 mRNA EXPRESSION INHIBITOR |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2011001326A (en) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2012219092A (en) * | 2011-04-14 | 2012-11-12 | Ichimaru Pharcos Co Ltd | Kinesin inhibitor |
| JP2012219093A (en) * | 2011-04-14 | 2012-11-12 | Ichimaru Pharcos Co Ltd | Kinesin inhibitor |
| JP2014112073A (en) * | 2012-11-02 | 2014-06-19 | Nagoya Univ | Evaluation method of drug effect and toxicity using stem cell as target |
| US9227956B2 (en) | 2013-04-17 | 2016-01-05 | Pfizer Inc. | Substituted amide compounds |
-
2009
- 2009-06-22 JP JP2009147221A patent/JP2011001326A/en active Pending
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2012219092A (en) * | 2011-04-14 | 2012-11-12 | Ichimaru Pharcos Co Ltd | Kinesin inhibitor |
| JP2012219093A (en) * | 2011-04-14 | 2012-11-12 | Ichimaru Pharcos Co Ltd | Kinesin inhibitor |
| JP2014112073A (en) * | 2012-11-02 | 2014-06-19 | Nagoya Univ | Evaluation method of drug effect and toxicity using stem cell as target |
| US9227956B2 (en) | 2013-04-17 | 2016-01-05 | Pfizer Inc. | Substituted amide compounds |
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