JP2010538623A5

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Publication number: JP2010538623A5
Application number: JP2010524397A
Authority: JP
Filing date: 2008-09-11
Publication date: 2011-10-27
Anticipated expiration: 2028-09-11

Claims

ＩｇＧ含有試料からＩｇＧを単離する方法であって、
（ａ）前記ＩｇＧ含有試料を、ＩｇＧエンドグリコシダーゼ活性を欠如したＥｎｄｏＳポリペプチドと接触させ、それによってＩｇＧ−ＥｎｄｏＳポリペプチド複合体の形成を可能にするステップと、
（ｂ）接触試料から前記ＥｎｄｏＳを分離するステップと
を含み、それによって単離ＩｇＧを得る方法。
試料中のＩｇＧの有無を決定する方法であって、
（ａ）前記試料を、ＩｇＧエンドグリコシダーゼ活性を欠如したＥｎｄｏＳポリペプチドと接触させ、それによってＩｇＧ−ＥｎｄｏＳポリペプチド複合体の形成を可能にするステップと、
（ｂ）所望により、前記ＥｎｄｏＳを接触試料から分離するステップと、
（ｃ）前記分離したＥｎｄｏＳがＩｇＧに結合しているかどうかを決定するステップと
を含み、それによって前記試料中のＩｇＧの有無を決定する方法。
前記ＥｎｄｏＳポリペプチドが、
（ａ）配列番号：２のアミノ酸配列、
（ｂ）配列番号：２のアミノ酸配列と少なくとも５０％の同一性を有し、ＩｇＧ結合活性を有するその変異体、または
（ｃ）ＩｇＧ結合活性を有するそのいずれかの断片
を含む、請求項１または２に記載の方法。
単離された、または検出されたＩｇＧが天然の機能的に活性のある形態である、請求項１から３のいずれか一項に記載の方法。
単離された、または検出されたＩｇＧが、ＩｇＧサブクラスＩｇＧ_１、ＩｇＧ_２、ＩｇＧ_３およびＩｇＧ_４の少なくとも１種、好ましくは２種、３種または４種全てを含む、請求項１から４のいずれか一項に記載の方法。
ステップ（ａ）がさらに、試料を、ＥｎｄｏＳポリペプチドに結合できる磁性ナノ粒子の集団と接触させることを含み、ステップ（ｂ）が、接触試料上で磁場分離を実施することを含む、請求項１から５のいずれか一項に記載の方法。
ＩｇＧ含有試料のグリコシル化状態または機能的品質を評価する方法であって、ＩｇＧ含有試料の第１および第２の部分試料を採取することを含み、請求項１または３から５のいずれか一項に記載のステップ（ａ）および（ｂ）を第１の部分試料に適用し、ＥｎｄｏＳポリペプチドが、グリコシル化されておらず、かつ／または変性した不活性なＩｇＧに結合できる代替のＩｇＧ結合試薬で置換されていることを除いて、請求項１または３から５のいずれか一項に記載のステップ（ａ）および（ｂ）を第２の部分試料に適用し、さらに、
（ｃ）第１の部分試料におけるＥｎｄｏＳポリペプチドに結合したＩｇＧの量および第２の部分試料における代替のＩｇＧ結合試薬に結合したＩｇＧの量を定量するステップと、
（ｄ）（ｃ）において決定した結合ＩｇＧの量の両方を比較するステップと
を含み、それによってＩｇＧ含有試料のグリコシル化状態または機能的品質を評価する方法。
代替のＩｇＧ結合試薬がプロテインＧおよび／またはプロテインＡを含む、請求項７に記載の方法。
ＩｇＧ含有試料からＦａｂ断片を単離するための方法であって、
（ａ）前記ＩｇＧ含有試料をＩｄｅＳおよびＦｃ結合タンパク質と接触させるステップと、
（ｂ）前記ＩｄｅＳおよび前記Ｆｃ結合タンパク質を接触試料から分離するステップと
を含み、それによってＦａｂ断片を単離する方法。
ステップ（ａ）がさらに、試料を、ＩｄｅＳポリペプチドおよびＦｃ結合タンパク質に結合できる磁性ナノ粒子の集団と接触させることを含み、ステップ（ｂ）が、接触試料上で磁場分離を実施することを含み、かつ／または前記Ｆｃ結合タンパク質がプロテインＨまたは請求項３に記載のＥｎｄｏＳポリペプチドである、請求項９に記載の方法。
ＩｇＧ含有試料からＦｃ断片を単離する方法であって、
（ａ）前記ＩｇＧ含有試料をＩｄｅＳと接触させるステップと、
（ｂ）ステップ（ａ）で得られた混合物からＩｄｅＳを分離し、それによってＦａｂおよびＦｃ断片を単離するステップと、
（ｃ）前記ＦａｂおよびＦｃ断片をＦｃ結合タンパク質と接触させ、それによってＦｃ断片−Ｆｃ結合タンパク質複合体の形成を可能にするステップと、
（ｄ）ステップ（ｃ）で得られた混合物からＦｃ断片−Ｆｃ結合タンパク質複合体を分離するステップと、
（ｅ）ステップ（ｄ）で得られたＦｃ断片−Ｆｃ結合タンパク質複合体からＦｃ断片を単離するステップと
を含む方法。
ステップ（ａ）がさらに、試料を、ＩｄｅＳに結合できる磁性ナノ粒子の集団と接触させることを含み、ステップ（ｃ）がさらに、ステップ（ｂ）で得られた単離ＦａｂおよびＦｃ断片を、前記Ｆｃ結合タンパク質に結合できる磁性ナノ粒子の集団と接触させることを含み、ステップ（ｂ）および（ｄ）が、それぞれ接触試料または単離されたＦａｂおよびＦｃ断片上で磁場分離を実施することを含み、かつ／またはＦｃ結合タンパク質がプロテインＨまたは請求項３に記載のＥｎｄｏＳポリペプチドである、請求項１１に記載の方法。
ステップ（ａ）の前に、
（ｉ）前記ＩｇＧ含有試料を請求項３に記載のＥｎｄｏＳポリペプチドと接触させ、それによってＩｇＧ−ＥｎｄｏＳポリペプチド複合体の形成を可能にするステップと、
（ｉｉ）前記ＩｇＧ−ＥｎｄｏＳポリペプチド複合体を接触試料から分離するステップと、
（ｉｉｉ）ＩｇＧ−ＥｎｄｏＳポリペプチド複合体からＩｇＧを溶出し、それによってＩｇＧ含有試料を得るステップと
を含み、ステップ（ａ）および（ｂ）がステップ（ｉｉｉ）で得られたＩｇＧ含有試料で実施される、請求項９から１２のいずれか一項に記載の方法。
ＩｇＧ含有試料からＩｇＧを単離するためのキットであって、
（ａ）請求項３に記載のＥｎｄｏＳポリペプチドと、所望により
（ｂ）試料から前記ＥｎｄｏＳポリペプチドを分離するための手段と
を含むキット。
ＩｇＧ含有試料のグリコシル状態または機能的品質を評価するためのキットであって、
（ａ）請求項３に記載のＥｎｄｏＳポリペプチドと、
（ｂ）変性し、かつ／または脱グリコシル化されたＩｇＧに結合できる代替のＩｇＧ結合試薬と、
（ｃ）前記ＥｎｄｏＳポリペプチドおよび前記代替のＩｇＧ結合試薬を試料から分離するための手段と
を含むキット。
Ｆｃγ受容体−ＩｇＧ複合体を解離するインビトロの方法であって、前記複合体をＥｎｄｏＳポリペプチドと接触させ、それによってＩｇＧが結合していないＦｃγ受容体を得ることを含み、所望によりＦｃγ受容体−ＩｇＧ複合体が細胞含有試料中に存在する方法。
Ｆｃγ受容体結合ＩｇＧ分子を含まない細胞集団を単離または調製するために実施する請求項１６に記載の方法であって、
（ａ）細胞含有試料をＥｎｄｏＳポリペプチドと接触させるステップと、
（ｂ）所望により、細胞を接触試料から分離するステップと
を含み、それによって前記細胞集団を得る方法。
前記ＥｎｄｏＳポリペプチドがＩｇＧエンドグリコシダーゼ活性を有し、
（ａ）配列番号：１のアミノ酸配列、または
（ｂ）配列番号：１のアミノ酸と少なくとも５０％の同一性を有するその変異体、または
（ｃ）そのいずれかの断片
を含む、請求項１６または１７に記載の方法。
前記Ｆｃγ受容体−ＩｇＧ複合体が血液、血清または細胞培養培地中に存在するか、又は、
前記Ｆｃγ受容体−ＩｇＧ複合体が単球上に存在し、かつ／若しくは前記細胞集団がＩｇＧサブクラスＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４の少なくとも１種、好ましくは２種、３種または４種全てを実質的に含まないものである、
請求項１６から１８のいずれか一項に記載の方法。