JP2010538240A - 高圧フラッシュクロマトグラフィー - Google Patents
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Abstract
Description
本出願は、2006年9月1日出願の米国仮特許出願第60/841823号明細書の優先権を主張し、その教示内容は参照により本明細書に組み込まれる。
i)吸着材料を含んだ加圧容器を提供するステップと、
ii)移動相を作り出すために、任意選択で共溶媒(cosolvent)を含んだ圧縮性流体を加圧するステップと、
iii)分離された試料を得るために、加圧容器を通して移動相と試料を溶離するステップと、
iv)圧縮性流体の分離を容易にするために、移動相が加圧容器から出た後、分離された試料を含んだ移動相を加熱するステップと、
v)分離された試料を収集するステップとを備え、
加圧容器は10から100μmの粒子サイズを有した吸着材料を含み、吸着容器の圧力は溶離中、50から350バールに保たれる、方法を提供する。
a)10から100μmの粒子サイズを有した吸着材料を含んだ加圧容器と、
b)圧縮性流体を備えた移動相を加圧し、加圧容器へと送出するポンピング手段と、
c)試料を加圧容器の中に、また吸着材料上に装填する装填手段と、
d)加圧容器から出る移動相の圧力を制御する圧力制御手段と、
e)上記圧力制御手段から出る移動相の温度を制御する熱交換器と、
f)試料の画分を収集する収集手段と、
g)熱交換器から出る移動相を収集手段に向けて送る手段と
を備えた装置を提供する。
以下の実施例を目的として、以下の実験設定を用いた。シリカが充填されたフラッシュカートリッジ(Biotage社製、60A Kp−Silica、43から60ミクロンと75×300mmの吸着床を備える)を加圧容器(Thar社製5L容器)内に配置し、容器アセンブリのキャップ2を閉鎖する。分離するべき試料を適切な共溶媒内に溶解した。圧縮性流体ポンプ38(Thar社製P−200)と共溶媒ポンプ(Thar社製P−50)とを始動し、所望の流速に到達させた。圧力を弁30によって所望圧力に維持した。移動相は検出器(Gilson社製UV検出器)を通過し、フラッシュカートリッジに対する背圧力を制御する弁(Thar社製ABPR200)上に至る。検出器を通過する際、望ましい画分への収集をいつ始めるかについて、信号が収集弁に中継される。分離試料を備えた移動相は、圧縮性流体を気体状態に蒸発させて液体が画分としてより簡単に収集されることを可能にする他の熱交換器を通過する。画分を収集手段(Thar社製CS−1L)内に収集した。Chiral Technologies社のAD−Hカラムを使用して、Thar社製SFC Method Station上で画分に対する全ての分析を行った。画分を溶解して10mLの溶液を作り出した。圧縮流体(二酸化炭素)の流速は共溶媒(メタノール)で3.4mL/分および0.6mL/分であった。共溶媒の量を常に15%に保った。背圧は100バールに維持した。Waters Corporation社のフォトダイオードアレイ検出器を、245ナノメートルから300ナノメートルの信号周波数を備えた検出手段として使用した。温度は40℃に維持した。
アセトアミノフェン−安息香酸6.5gの試料溶液をメタノール100mlに標準温度および標準気圧(STP)で溶解した。主な圧縮性流体を二酸化炭素として、総流速を150g/分に設定し、10分にわたってメタノール5%から35%の濃度勾配を付け、その後は35%に維持した。動作条件は以下の通りである。1)フラッシュカートリッジに対する背圧を100バールに維持した。2)移動相(二酸化炭素およびメタノール)の温度を35℃に維持した。3)熱交換器を35℃に維持した。技術的には、容器内の圧力は、カートリッジに対する背圧+カートリッジにわたるデルタ圧力である。デルタ圧力は小さいことから、容器内の圧力は背圧とほぼ同じである。注入ループを使用して試料をシステム内に導入し、試料230mgを装填した。これらの注入からの2つの画分を収集した。Thar社製Superchromソフトウェアを使用して、画分1は純度98%のアセトアミノフェンであることを、画分2は純度99.9%の安息香酸であることを見出した。以下は分離を示したクロマトグラムである。
アセトアミノフェン1.3052gおよび安息香酸2.1947gを含んだ試料3.5gをSTPでメタノール50mlに溶解し、フラッシュカートリッジの上部の試料装填室上に直接装填した。次いで加圧容器を閉鎖し、二酸化炭素を移動相としてシステム内に導入し、均衡化させた。二酸化炭素を、150g/分で、10分にわたってメタノール5%から35%の濃度勾配を付けてポンピングし、その後は35%に維持した。動作条件は以下の通りである。1)背圧を100バールに維持した。2)混合移動相(二酸化炭素およびメタノール)の温度を35℃に維持した。3)熱交換器を35℃に維持した。試料画分を収集した。Thar社製Superchromソフトウェアを使用して、画分1は純度99%のアセトアミノフェンであることを、画分2は純度99.9%の安息香酸であることを見出した。以下は分離を示したクロマトグラムである。
アセトアミノフェン2.85839gおよび安息香酸4.3303gを含んだ試料7.18869gをメタノールにSTPで溶解した。二酸化炭素が圧縮性流体であり、これを150g/分でポンピングした。10分にわたるメタノール5%から35%の濃度勾配で移動相を作り出し、その後これを35%に維持した。動作条件は以下の通りである。1)背圧を100バールに維持した。2)移動相(二酸化炭素およびメタノール)の温度を35℃に維持した。3)熱交換器を35℃に維持した。注入ポンプを使用して、カラムの直前のT字管を通して試料を移動相の中に装填した。試料718mgをカラム上に装填した。これらの注入からの画分を収集した。Thar社製Superchromソフトウェアを使用して、画分1は純度86%のアセトアミノフェンであることを、画分2は純度99.9%の安息香酸であることを見出した。以下は分離を示したクロマトグラムである。
ケトプロフェン0.32197gを含んだ試料2.90041gをメタノールにSTPで溶解した。二酸化炭素が圧縮性流体であり、これを150g/分でポンピングした。10分にわたるメタノール5%から35%の濃度勾配で移動相を作り出し、その後これを35%に維持した。動作条件は以下の通りである。1)背圧を100バールに維持した。2)混合移動相(二酸化炭素およびメタノール)の温度を35℃に維持した。3)熱交換器を35℃に維持した。注入ループを使用して試料を装填した。試料101mgを注入ループによってフラッシュカートリッジ上に注入した。これらの注入の画分を収集した。Thar社製Superchromソフトウェアを使用して、ケトプロフェンの濃度が純度30%に増大したことを見出した。以下は分離を示したクロマトグラムである。
Claims (32)
- 高圧のフラッシュクロマトグラフ装置であって、
a)10から100ミクロンの粒子サイズを有した吸着材料を含んだ加圧容器と、
b)圧縮性流体を備えた移動相を加圧し、加圧容器へと送出するポンピング手段と、
c)試料を加圧容器の中に、また吸着材料上に装填する装填手段と、
d)加圧容器から出る移動相の圧力を制御する圧力制御手段と、
e)前記圧力制御手段から出る移動相の温度を制御する熱交換器と、
f)試料の画分を収集する収集手段と、
g)熱交換器から出る移動相を収集手段に向けて送る手段とを備える、装置。 - 共溶媒を加圧容器に送出する第2のポンピング手段をさらに備える、請求項1に記載の装置。
- 加圧容器に送出された移動相が10℃と150℃の間である、請求項2に記載の装置。
- 共溶媒の加圧容器への流れを制御する手段をさらに備える、請求項2に記載の装置。
- 加圧容器の後ろかつ収集手段の前にポンピング手段をさらに備える、請求項2に記載の装置。
- 試料内の興味の対象となっている化合物を検出する検出手段をさらに含む、請求項2に記載の装置。
- 吸着材料が加圧容器内に乾燥充填される、請求項2に記載の装置。
- 前記吸着材料がピストン充填される、請求項2に記載の装置。
- 加圧容器が、吸着材料を含んだ個別のカートリッジを含む、請求項2に記載の装置。
- 吸着材料がシリカ系材料である、請求項2に記載の装置。
- シリカ系材料が約20から約70ミクロンの間の粒子サイズを有する、請求項10に記載の装置。
- 移動相が共溶媒をさらに備える、請求項2に記載の装置。
- 前記収集手段が、1つまたは複数の画分収集器、サイクロン分離器、捕獲デバイス、固相カートリッジ、クライオフォーカシングシステム、およびこれらの任意の組み合わせからなる一群から選択される、請求項2に記載の装置。
- 前記装填手段が注入弁である、請求項2に記載の装置。
- 装填手段が注入弁と組み合わせた注入ポンプである、請求項2に記載の装置。
- 装填手段が手動で試料を加圧容器の中に注ぐことである、請求項2に記載の装置。
- 1つまたは複数のフリッツを加圧容器内にさらに備える、請求項1または2に記載の装置。
- 前記装填手段が加圧容器内、または任意選択でカートリッジ内の装填室である、請求項1または7に記載の装置。
- 圧縮性流体を再循環させる、前記収集手段の後に配置された再循環システムをさらに備える、請求項2に記載の装置。
- 高圧のフラッシュクロマトグラフを使用して試料を分離する方法であって、
i)吸着材料を含んだ加圧容器を提供するステップと、
ii)移動相を作り出すために、任意選択で共溶媒を含んだ圧縮性流体を加圧するステップと、
iii)分離された試料を得るために、加圧容器を通して移動相と試料を溶離するステップと、
iv)圧縮性流体の分離を容易にするために、移動相が加圧容器から出た後、分離された試料を含んだ移動相を加熱するステップと、
v)分離された試料を収集するステップとを備え、
加圧容器が10から100ミクロンの粒子サイズを有した吸着材料を含み、吸着容器の圧力が溶離中、50から350バールに保たれる、方法。 - 移動相が加圧容器に進入する前に加熱される、請求項20に記載の方法。
- 吸着材料が加圧容器の中に乾燥充填される、請求項20に記載の方法。
- 吸着材料が加圧容器の中にピストン充填される、請求項20に記載の方法。
- 吸着材料が加圧容器の中のカートリッジ内に存在する、請求項20に記載の方法。
- 試料が加圧された容器内のカートリッジの中に直接装填される、請求項20に記載の方法。
- 試料が溶離前に加圧容器を通して移動相と予備混合される、請求項20に記載の方法。
- 移動相が分離された試料を収集した後再循環される、請求項20に記載の方法。
- 圧縮性流体が二酸化炭素である、請求項20に記載の方法。
- 共溶媒が有機溶媒である、請求項20に記載の方法。
- 前記吸着材料がシリカ系材料である、請求項20に記載の方法。
- 移動相が圧縮性流体および共溶媒を備える、請求項20に記載の方法。
- 試料が共溶媒の中に装填された後圧縮性流体と混合される、請求項20に記載の方法。
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