JP2010529422A - 標的検体の検出用のナノ粒子を用いた生体表面弾性波(saw)共振器増幅 - Google Patents
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Abstract
【選択図】 図1
Description
該方法は、以下の工程を含む:第一の分子認識コンポーネント、及び、少なくとも1つのナノ粒子と結合された第二の分子認識コンポーネントと、サンプル中の検体を反応させる工程;及び、銀イオン及び/又は金イオンを含む増強液、及び、還元剤を添加することで、銀イオン及び/又は金イオンが、金属の銀及び/又は金に還元され、少なくとも1つのナノ粒子の表面上に析出される工程。そして、少なくとも1つのナノ粒子の増加質量を、SAWセンサによって検出する。
特に、従来の生体分析的方法には、いくつかの欠点がある。例えば、核酸分子のハイブリダイゼーションは、一般的に、ハイブリダイゼーション用のプローブが放射性標識を含む場合にはオートラジオグラフィー又はリン光体イメージ分析器によって検出され、あるいは、ハイブリダイゼーション用のプローブがビオチン又はジゴキシンなどの標識を含む場合には濃度計によって検出される。次に、該標識は、酵素複合抗体又はリガンドによって認識されうる。最も新しい生体分子検出法は、分子、例えばDNA又はRNA又はタンパク質の修飾を必要とし、結果として、従来の検出法を経費のかかる、しかも労力を要する方法にしている。
弾性波センサ技術は、物質を検出することにおいて、広範囲の用途があることが明らかにされている。弾性波センサは、弾性波を生じさせ、該波を観察することで物質を検出する。弾性波は、物質の表面を介して、又はその表面上を伝播するときに、伝播経路の特性のあらゆる変化が、波の速度及び/又は振幅に影響を与える。センサの振幅、振動数、及び/又は、位相特性を測定し、それを対応する物理量と相互に関連付けることができる。
液体センシング用の弾性センサとして知られているものの中で、ラヴ波(love wave)センサは、せん断水平SAWの特別な種類であり、最も高い感度を有する。ラヴ波センサを作製するために、誘電体導波路被膜を、せん断水平波のエネルギーがその被膜に集中するようにSH-SAWデバイス上に配置する。次いで、生体認識被膜を導波路被膜上に配置し、完全な生体センサを形成する。ポリマーのラヴ波誘導被膜を備える110MHz YZ-断面(cut) SH-SAWを用いることで、ng/mlの濃度範囲での抗-ヤギIgGの検出に成功している[E. Gizeliら 1997. "Antibody Binding to a Functionalized Supported Lipid Layer: A Direct Acoustic Immunosensor," Anal Chem, Vol. 69:4808-4813.]。
伝播波の垂直方向成分が液体-気体のバリアによって抑制されるために、従来のSAWデバイスでは、液体検出においてはあまり選択されなかった。液体中で機能する一つの弾性波センサは、せん断水平SAWセンサである。圧電性結晶材料の切断部が適切に回転する場合に、波は液体表面に水平に、かつ、平行に伝播する。このことは、液体が、伝播媒体と接触している場合に、劇的に損失を減らすことができ、SH-SAWセンサを生体センサとして動作することを可能にする。液体溶液検体(生体分子など)を検出するために、弾性波と固体/液体境界の特性との間の相互作用を明らかにすること、並びに、GHz範囲において動作する、より高周波数のSAWデバイスを設計することに焦点が当てられ、多くの力が注がれている。
免疫アッセイでSAWデバイスを使用することは、以前から報告されている。これらのデバイスは、2つの電極の間に挟まれた単結晶ウエハからなる。電極は、その共鳴振動数で水晶振動子を動かす外付けの発振回路とこれらのデバイスとを接続する手段が備わっている。この振動数は、結晶の質量、並びに、結晶の電極領域に限られたいずれかの層の質量に依存する。従って、振動数は、電極の表面上の質量の変化、又は、それらの電極上のいずれかの層の変化によって変動する。一般的に、これらのデバイスの共鳴振動数の変化は、質量の変化と相関しうる。
Ngeh-Ngwainbiらは、気相におけるパラチオンのアッセイに使用されるパラチオンに対する抗体で被覆された圧電水晶振動子の利用について報告している。被覆抗体が気相における直接反応によってパラチオンと結合した場合に、結晶において生じた質量変化が、この殺虫剤の濃度に比例する振動数変動を引き起こす[J. Mat. Chem. Soc., Vol. 108, pp. 5444-5447 (1986)]。
一般的に、質量変化が抗原と抗体との免疫学的反応に起因する圧電ベースの免疫アッセイは、二次元センサ表面を使用する環境において、感度不足であり、検出に制限がありうる。その結果として、さらに高感度なアッセイを提供するために、分子認識コンポーネントとその標的検体との反応を増幅できる圧電ベース特異的結合アッセイが、本分野で必要とされている。
本発明者は、圧電基板上のIDTE構造体又はリフレクタ構造体の間の三次元マイクロチャンネル構造体における液体/固体の体積比を変化させることで、著しくシステムの振動数及び位相を変えられることを発見した。該マイクロチャンネルの間の液体/固体の体積比の変化を、テストサンプル中の検体濃度に相関させて検出することができる。
本発明は、テストサンプル溶液中の標的検体の存在を検出するためのマイクロセンサに関する。該マイクロセンサが、少なくとも1つ、しかし好ましくは2つ以上の表面弾性波(SAW)共振器ユニットを含み、それぞれが、圧電基板と、該基板表面上の多数のインターデジタルのトランスデューサ電極(IDTE)及びリフレクタを含み、そこで三次元マイクロチャネルが、該電極及びリフレクタの間に形成されている。ここで、該SAW共振器ユニットは、該IDTE構造体及びリフレクタ構造体の間に形成されたマイクロチャンネルに固定された少なくとも1つの分子認識コンポーネントを有し、テストサンプル中の標的検体を、少なくとも1つの分子認識コンポーネントと反応させ、更に、第二の酵素結合-分子認識コンポーネント、又は、酵素結合-検体と反応させ、更に、該電極及びリフレクタ構造体の間に形成されたマイクロチャンネル中に蓄積する不溶性沈殿物に転化される基質と反応させ、それによって該マイクロチャンネルにおける固体/液体の体積比を減少させ、該マイクロチャンネル中の該固体/液体の体積比の変化が、シグナルの振動数又は位相の変化をもたらす。
本発明は、サンプル中の標的検体を検出する方法であって、
(a)第一の分子認識コンポーネント、及び、少なくとも1つのナノ粒子と結合された第二の分子認識コンポーネントと、サンプル中の検体を反応させる工程、
(b) 銀イオン及び/又は金イオンを含む増強液、及び、還元剤を添加することで
銀イオン及び/又は金イオンが、金属の銀及び/又は金に還元され、少なくとも1つのナノ粒子の表面上に析出される工程、及び、
(c) 析出された銀イオン及び/又は金イオンを含む少なくとも1つのナノ粒子を、SAWセンサによって検出する工程を含む方法に関する。
本発明は、サンプル中の検体を検出するためのマイクロセンサを含む製品のキットであって、
(a) SAWセンサの表面に固定された少なくとも1つの第一の分子認識コンポーネントを含む表面弾性波センサ、
(b) 少なくとも1つのナノ粒子と結合された少なくとも1つの第二の分子認識コンポーネント、
(c) 銀イオン及び/又は金イオンを含む増強液、及び、
(d) 還元剤
を含むキットに関する。
マイクロセンサは、参照用の表面弾性波共振器マイクロチャンネル構造体も含むことができる。例えば、参照用のマイクロチャンネルは、分子認識コンポーネントを含まない。また、コントロールとは、標的検体を含まないサンプル溶液の測定にすることができる。マイクロ参照チャンネル及びセンサマイクロチャンネルの間の差異から、標的検体の存在を測定する。
標的検体の非制限的な例としては、核酸、タンパク質、ペプチド、抗体、酵素、炭水化物、化学化合物、及び気体が挙げられる。ほかの例示的な標的検体は、トロポニン1、トロポニンT、アレルゲン、又はIgEのような免疫グロブリンが挙げられる。特定の用途において、標的検体は、複数の分子認識コンポーネントに結合することができる。
SAW共振器ユニットの振幅をテストサンプル中の標的検体と反応させるための少なくとも1つの分子認識コンポーネントのための最適条件に調整するべきであることに注意する。該振幅が高すぎる場合には、分子認識コンポーネント/検体相互作用のための非最適条件に起因して一貫した結果が得られない。
標的検体をサンプル中で検出できる。例示的なサンプルは、血液、血清、血漿、腹水、糞便、骨髄液(spinal core fluids)、尿、塗沫標本(smears)、唾液を含む。この方法は、診断目的に使用されうる。
本発明を以下に図面を参照して詳述する。
<定義>
本明細書で使用される「結合事象」は、SAWセンサの三次元マイクロチャンネル構造体表面に固定された分子認識コンポーネントへの標的検体の結合を意味する。
「ナノ粒子」は、好ましくは球体で、直径が0.02〜50nmである固体の不溶性粒子である。
本発明は、同じ参照番号が同じ構成要素を示すよう用いられた図面を参照することで理解することができる。
以下、図1を参照して、参照番号1及び2により一般的に示される2つのSAW共振器ユニットからなるマイクロセンサについて確認する。各SAW共振器ユニットは、1つのIDTE部(7,8)及び2つのリフレクタ部(9,10)からなる。IDTE(3,6)の間に、マイクロチャンネル(4,5)が位置する。同様のマイクロチャンネルが、リフレクタ構造体(15,16)の間にも位置している。SAW共振器ユニット(1)三次元表面全体に、分子認識コンポーネント(3,17)が固定されており、一方でSAW共振器ユニット(2)には、分子認識コンポーネントは存在しない。反応層(11)は、検体と、第二の酵素結合-分子認識コンポーネントと、基質とを表す。基質が不溶性沈殿物に転化した場合、リフレクタ構造体(12,13)の間のマイクロチャンネルスペース(16)が、マイクロチャネル(16)における固体/液体の体積比の変化に応じて減少する。また、SAW共振器ユニット(1)におけるIDTE間のマイクロチャンネルが同じ理由で減少する。SAW共振器ユニット(2)における構造体(14,18)の間で、マイクロチャンネル(15)固体/液体の体積比の変化は見られない。
他の酵素/基質システムには、ペルオキシダーゼ酵素、例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ(HRP)、又は、ミエロペルオキシダーゼ、及び、以下に示すものの1つを含む:ベンジデン、ベンジデン ジヒドロクロリド、ジアミノベンジデン、o-トリデン、o-ジアニシジン、及び、テトラメチルベンジデン、カルバゾール、特に、3-アミノ-9-エチルカルバゾール。これらの全てが、ペルオキシダーゼとの反応で沈殿物を形成することが報告されている。また、アルファヒドロキシ酸 オキシダーゼ、アルデヒド オキシダーゼ、グルコース オキシダーゼ、L-アミノ酸 オキシダーゼ、及び、キサンチン オキシダーゼのようなオキシダーゼをフェナジン メトサルフェート-ニトロブルー テトラゾリウム混合物のような酸化可能基質システムと使用することができる。
ここで、図3を参照すると、この図3は実施例1において詳述する。
図4は、図1(9)において示されたリフレクタ構造体のAFM写真を示す。番号(1)は基板を表す。番号2はリフレクタ構造体を表す。番号3,4はリフレクタ構造体の間のマイクロチャンネルの寸法を表す。
図5は、図4で示されたAFM写真からの計算スキームを示す。これは、リフレクタ及びIDTE構造体の例示的な寸法を示す。
ここに記載するマイクロセンサは、少なくとも1つの表面弾性波センサを含む。表面弾性波センサは、圧電層、または圧電基板、および入力および出力トランスデューサを含む。表面弾性波は、該圧電層内で発生し、かつインターデジタル電極によって検出される。以下でより詳細に説明するように、該表面弾性波センサの表面を変更する結合事象が、該伝播する表面弾性波の特性における変化として検出できる。表面弾性波センサは、米国特許第5,130,257号、同第5,283,037号および同第5,306,644号;F. Josseら, Guided Shear Horizontal Surface Acoustic Wave Sensors for Chemical and Biochemical Detection in Liquids, Anal. Chem. 2001, 73:5937;およびW. Welschら, Development of a Surface Acoustic Wave Immunosensor, Anal. Chem. 1996, 68:2000-2004に記載されている。これら各文献全体を、参照によってここに特別に組み入れる。
該入力及び出力トランスデューサは、インターデジタルトランスデューサであることが好ましい。一般に、2つのインターデジタルトランスデューサがある。該入力及び出力トランスデューサのそれぞれが、インターデジタルパターンに配列された2つの電極を含む。入力トランスデューサの2つの電極の間に与えられる電圧差が、圧電基板における表面弾性波の発生をもたらす。電極は、一般に任意の導電性材料を含むことができ、アルミニウムまたは金が好ましい。
いくつかの態様においては、該電極の高さは、その幅と同一である。他の態様では、該電極の高さは、例えば10nm、20nm、30nm、40nm、50nm、75nm、100nm、200nm、300nm、400nm、500nm、600nm、700nm、800nm、または900nmよりも大きいか、あるいはこれに等しい。他の態様では、該電極間の間隔の深さは、1μm、900nm、800nm、700nm、600nm、500nm、400nm、300nm、200nm、100nm、75nm、50nm、40nm、30nm、または20nmよりも小さいか、それに等しくてもよい。
本発明の更なる態様は、以下の通りである:
(2) 上記(1)のような方法及び/又は後述の態様のいずれかにおいて、第一の認識コンポーネントが検体を、反応容器の表面に固定させる。
(3) 上記(1)のような方法及び/又は後述の態様のいずれかにおいて、表面とは、反応容器内側、又は、容器内部に含まれる材料の表面、又はそれらの組合せとすることができる。
(4) 上記(1)のような方法及び/又は後述の態様のいずれかにおいて、認識コンポーネントが、以下の群から選択される:タンパク質、タンパク質類似体、修飾タンパク質、核酸、核酸類似体、及び、修飾核酸。
(5) 上記(1)のような方法及び/又は後述の態様のいずれかにおいて、タンパク質が、以下の群から選択される:抗体、抗体フラグメント、修飾抗体、レセプター分子、及び、リガンド分子。
(7) 上記(1)のような方法及び/又は後述の態様のいずれかにおいて、基板が、以下の群から選択される:ジアミノベンジジン(DAP)、アミノエチルカルバゾール(AEC)、テトラメチルベンジジン(TMB)、又は、5-ブロモ,4-クロロ,3-インドリルホスフェート(BCIP)/ニトロブルー テトラゾリウム(NBT)。
更に、本発明は、(8) 上記(1)のような方法及び/又は後述の態様のいずれかにおけるサンプル中の検体を検出するデバイスに関する。該デバイスは、検体特異的沈殿物を酵素変換によって生じさせる、注入口及び排出口を備える反応容器を含み、これは、SAWセンサを含む、注入口及び排出口を備える測定チャンバと接続されている。ここで、液体フローによって、反応容器から、該沈殿物がSAWセンサ表面に接触して検体特異的シグナルを引き起こす測定チャンバに、該沈殿物を、能動的に輸送する。
(9) 上記(8)のようなデバイス及び/又は後述の態様のいずれかにおいて、該デバイスが、更にフローレギュレータと接続されており、レギュレータは、反応容器の前に設置されたポンプシステム、測定チャンバの後方に設置された吸気システム、又はその双方である。
(10) 上記(8)のようなデバイス及び/又は後述の態様のいずれかにおいて、反応容器が、以下の群から選択される:チューブ、チューブシステム、チャンバ、及び、接続チャンバのシステム。
(12) 上記(8)のようなデバイス及び/又は後述の態様のいずれかにおいて、反応容器システムが、更に以下の群から選択される1つ以上の材料を含む:フィルタ、グリッド。
(13) 上記(8)のようなデバイス及び/又は後述の態様のいずれかにおいて、SAWセンサが、SAWフィルタユニット型である。
シグナル振幅の改善方法については、アトノミックスが最近発明した。今まで、アルカリホスファターゼ(ALP)複合抗体が、発振SAWセンサにおいてシグナルを発生するために用いられてきた。このALPを用いた方法を利用することによって、例えば以下のような様々な改善すべき点が確認されている:
ALP複合抗体は、センサの内壁部及び基板の表面上における金及び樹脂の壁に、非特異的に結合する。このような結合は、非特異的なBCIP/NBT沈殿物を形成し、最終的にはCV値の増加を生じさせる。
アルカリホスファターゼの方法は、酵素過程であるため、温度及び処理の問題に起因して、徐々にその活性を緩やかにしなければならない。このこともCV値の増加に寄与しうる。
このような改善すべき点を克服するために、アトノミックスは、アルカリホスファターゼ複合抗体の代わりに、ナノ金複合抗体の試験を開始した。
図2及び図3から判断して、金を用いた方法は、ALPを用いた方法に比べて、感度の観点から300倍シグナルが増加しているようである。
コロイドの(Collodal)金(Au)及び銀(Ag)粒子及び/又はクラスター複合体は、標的分子の標識用に、電子顕微鏡で用いられる。例えば、高い密度で結合した該クラスター複合体を有する細胞は、顕微鏡で暗赤紫色を示すことができる。
本発明のいくらかの態様において、溶液中の金イオンが触媒的に金属の金として析出される場合に、粒子を被覆する析出物を必要とする金染色技術を利用できる。
析出物に起因する粒子質量の増加は、本発明のいくらかの態様において表面弾性波(SAW)デバイスで検出することができる。
本発明におけるナノ粒子の直径は、0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19又は20 nmである。ナノ粒子の直径(サイズ)、従って、質量は、特定の分析の設定、及び、必要とされる感度に応じ、変えることができる。ナノ粒子の直径(サイズ)及びその質量(重量)の間には相関があり、例えば、直径1nmの金粒子の分子量は、15.000 g/molである。
例えば、10nmのサイズのナノ粒子は、5分間以内に300nmに直径が増大することができる。反応時間に応じて、直径を500nm以上に増大することができる。
銀又は金のような好適な物質で形成される析出物に起因して、表面弾性波(SAW)デバイスによって検出可能なナノ粒子の質量の増加が生じる。金属の析出物の発生、つまり、粒子の直径及び質量を増大させることは、例えば純水で洗浄して増強液を除去することにより、簡単に中断することができる。
該方法において、銀イオン及び/又は金イオンを、金属の銀及び/又は金に還元して、銀及び/又は金を少なくとも1つのナノ粒子の表面上に析出させる。そして、少なくとも1つのナノ粒子の質量増加をSAWセンサで検出する。
実施例1:抗-マウスIgG/抗-HFABP mAb-ALPのアッセイ
この手順は、図1に示したモードに従って行った。
2つのSAW共振器ユニット(図1の1,2)から構成されたマイクロセンサを使用した。SAW共振器ユニットの三次元表面(図1-1)を厚み20nmの金で被覆した。同様のSAW共振器ユニットの三次元表面(図1の2)をSiO2で被覆した。SAW共振器(図1の1)の金の表面に100μg/mlのヤギ抗-マウスIgGを置き一緒にインキュベートし、一方、SAW共振器(図1の2)のSiO2表面にも100μg/mlのヤギ抗-マウスIgGを置き一緒にインキュベートした。
コントロール(実験VIII)−ヤギIgGを双方のSAW共振器ユニット(図1の1,2)上でインキュベートした。
次いで、2つのSAW共振器ユニット(図1の1,2)を、15分間、アルカリホスファターゼ酵素(ALP)を含むPBSバッファーを含む100 ng/mlのマウス抗体(抗-HFABP mAb-ALP)標識に暴露した。TBS/0.05% tweenで3回洗浄した後に、BCIP/NBT (SIGMA)を添加し、SAW共振器(図1の1)及びSAW共振器ユニット(図2-2)の間でデルタ(△)振動数を、10分後に測定した(実験VIII)。
実施例1と同様のアッセイの手順(但し、さらに感度を向上させた)で、抗-マウス IgG/抗-HFABP mAb-2ALP(抗体につき2ALP酵素で標識されている)を検体として使用した。
表2
感度試験のプロトコールは、3つの工程からなる:A. センサ洗浄工程(ヘルマネックス(Hellmanex)-II処理)、B. 複合抗体をSAWセンサに配置する(coding)工程、及び、C. 測定手続
(A. ヘルマネックス-II処理プロトコール)
1. 2%ヘルマネックス-II溶液を調製する:
2. 490mlの再蒸留水に10 mlのヘルマネックス-IIを添加する
3. SAWセンサ表面の張力を、ヘルマネックス-II(2%)を用いて30分間37℃で緩やかに75(rpm)で攪拌することで、除去する
4. 2つの大口ガラス容器の中に、200〜250 mlの2 % ヘルマネックス溶液を添加する
5. 各ガラス容器に、15〜20個のSAWセンサを置く
6. 30分間37℃で緩やかに75(rpm)で攪拌しながら、インキュベートする
7. 100mlの再蒸留水で3回洗浄する
8. 37℃のインキュベータの中で15分間、センサを乾燥させる
9. 室温(RT)(乾燥)でペトリ皿の中で使用するまでセンサを保存する
1. 1μlの400 ng/ml 抗-マウス 金複合抗体(Sigma G7652)をホールF2に添加し、F1は液体が存在しないまま維持する
2. 湿潤環境で2時間インキュベートする
3. 37℃で15分間センサをインキュベートする
4. 乾燥環境の冷蔵庫中で保存する
(C. 測定手続)
1. フローしていないカートリッジ及びG3センサを組立てて、ジグに配置する
2. 測定プログラムを開始させる
3. 5分間、センサ安定試験を行う
4. 双方のセンサホール(f1及びf2)の中に、2μlの銀増強液(SPI 4180, LM銀増強キット)を添加する
5. 測定プログラムをリセットする
6. 7分間測定する
アルカリホスファターゼ(ALP)複合抗体及び基質溶液:BCIP/NBTを用いた同一実験を行った。
(A. ヘルマネックス-II処理プロトコール)
上記の実施例3と同様
(B. 複合抗体をSAWセンサに配置する)
変更点: 1μlの400 ng/mlのマウスアルカリホスファターゼ複合抗体をホールF2に添加し、F1は液体が存在しないまま維持する
(C. 測定手続)
1. フローしていないカートリッジ及びG3センサを組立てて、ジグに配置する
2. 測定プログラムを開始させる
3. 5分間、センサ安定試験を行う
4. 双方のセンサホール(f1及びf2)の中に、2μlのBCIP/NBT溶液(Sigma B3679)を添加する
5. 測定プログラムをリセットする
6. 15分間測定する
図7(金を用いた方法)及び図8(アルカリホスファターゼを用いた方法)から判断して、金を用いた方法は、ALPを用いた方法に比べて、感度の観点から300倍シグナルが増加することが分かった。
シグナル振幅の改善方法については、アトノミックスが最近発明した。今まで、アルカリホスファターゼ(ALP)複合抗体が、発振SAWセンサにおいてシグナルを発生するために用いられてきた。このALPを用いた方法を利用することによって、例えば以下のような様々な改善すべき点が確認されている:
ALP複合抗体は、センサの内壁部及び基板の表面上における金及び樹脂の壁に、非特異的に結合する。このような結合は、非特異的なBCIP/NBT沈殿物を形成し、最終的にはCV値の増加を生じさせる。
アルカリホスファターゼの方法は、酵素過程であるため、温度及び処理の問題に起因して、徐々にその活性を緩やかにしなければならない。このこともCV値の増加に寄与しうる。
このような改善すべき点を克服するために、アトノミックスは、アルカリホスファターゼ複合抗体の代わりに、ナノ金複合抗体の試験を開始した。
図2及び図3から判断して、金を用いた方法は、ALPを用いた方法に比べて、感度の観点から300倍シグナルが増加しているようである。
Claims (6)
- サンプル中の標的検体を検出する方法であって、
(a)第一の分子認識コンポーネント、及び、少なくとも1つのナノ粒子と結合された第二の分子認識コンポーネントと、サンプル中の検体を、反応させる工程、
(b) 銀イオン及び/又は金イオンを含む増強液、及び、還元剤を添加することで、
銀イオン及び/又は金イオンが、金属の銀及び/又は金に還元され、少なくとも1つのナノ粒子の表面上に析出される工程、及び、
(c) 析出された銀イオン及び/又は金イオンを含む少なくとも1つのナノ粒子を、SAWセンサによって検出する工程
を含む方法。 - ナノ粒子が、金の粒子である請求項1に記載の方法。
- ナノ粒子の直径が、0.05 nm〜20 nmである請求項1又は2に記載の方法。
- ナノ粒子の直径が、0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、又は、20 nmである請求項3に記載の方法。
- 約10 nmのサイズのナノ粒子が、5分間以内に、約300 nmに直径が増大する請求項1〜4のいずれかに記載の方法。
- サンプル中の検体を検出するためのマイクロセンサを含む製品のキットであって、
(a) 表面弾性波(SAW)センサの表面に固定された少なくとも1つの第一の分子認識コンポーネントを含む表面弾性波センサ、
(b) 少なくとも1つのナノ粒子と結合された少なくとも1つの第二の分子認識コンポーネント、
(c) 銀イオン及び/又は金イオンを含む増強液、及び、
(d) 還元剤
を含むキット。
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