JPH07260782A - ヒト血清アルブミンの測定方法 - Google Patents
ヒト血清アルブミンの測定方法Info
- Publication number
- JPH07260782A JPH07260782A JP7424094A JP7424094A JPH07260782A JP H07260782 A JPH07260782 A JP H07260782A JP 7424094 A JP7424094 A JP 7424094A JP 7424094 A JP7424094 A JP 7424094A JP H07260782 A JPH07260782 A JP H07260782A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- hsa
- antibody
- serum albumin
- human serum
- immobilized
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【構成】金属電極付きのＡＴカット素子を水晶振動子と
し、この電極に抗ヒト血清アルブミン抗体（抗ＨＳＡ抗
体）を吸着固定化させた水晶振動式センサーを用いて被
検液中のヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）を該固定化抗体
に結合させ、結合したＨＳＡにさらに他の抗ＨＳＡ抗体
を結合させ、次いで振動数を測定することを特徴とする
ヒト血清アルブミンの測定方法。 【効果】本発明の測定方法により、微量のＨＳＡ、特に
尿中の微量のＨＳＡを簡易かつ迅速に測定することが可
能となる。したがって、尿中に排泄される微量のヒト血
清アルブミン（ＨＳＡ）をマーカーとして検出する糖尿
病性腎症の早期診断のための有用な手段を提供すること
ができる。
し、この電極に抗ヒト血清アルブミン抗体（抗ＨＳＡ抗
体）を吸着固定化させた水晶振動式センサーを用いて被
検液中のヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）を該固定化抗体
に結合させ、結合したＨＳＡにさらに他の抗ＨＳＡ抗体
を結合させ、次いで振動数を測定することを特徴とする
ヒト血清アルブミンの測定方法。 【効果】本発明の測定方法により、微量のＨＳＡ、特に
尿中の微量のＨＳＡを簡易かつ迅速に測定することが可
能となる。したがって、尿中に排泄される微量のヒト血
清アルブミン（ＨＳＡ）をマーカーとして検出する糖尿
病性腎症の早期診断のための有用な手段を提供すること
ができる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、微量のヒト血清アルブ
ミンの高感度測定方法に関する。さらに詳しくは、水晶
振動式ヒト血清アルブミンセンサーを用いる微量アルブ
ミンの高感度測定方法に関する。
ミンの高感度測定方法に関する。さらに詳しくは、水晶
振動式ヒト血清アルブミンセンサーを用いる微量アルブ
ミンの高感度測定方法に関する。
【０００２】
【従来の技術および発明が解決しようとする課題】水晶
振動子は、近年、その表面質量変化に対する発振周波数
変化が注目され、多くの溶液中の物質の分析に応用され
てきている。最近では、その表面に抗体を固定化して各
種抗原物質の検出に利用する試みがなされている（Mura
matsu et al., Anal.Chimi.Acta, vol.188, 257(1986)
、Davis et al., Anal. Chem.,vol.61, 1227 (198
9))。
振動子は、近年、その表面質量変化に対する発振周波数
変化が注目され、多くの溶液中の物質の分析に応用され
てきている。最近では、その表面に抗体を固定化して各
種抗原物質の検出に利用する試みがなされている（Mura
matsu et al., Anal.Chimi.Acta, vol.188, 257(1986)
、Davis et al., Anal. Chem.,vol.61, 1227 (198
9))。
【０００３】糖尿病性腎症の早期診断には、尿中に排泄
される微量のヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）をマーカー
として検出することが有効とされている。従来、ＨＳＡ
濃度の測定は、放射免疫測定法（ＲＩＡ）や酵素免疫測
定法（ＥＩＡ）等により行われているが、これらの方法
では、ラベル化した抗体や抗原を用いる必要があり、操
作が煩雑であり、さらに測定時間が長いなどの難点があ
る。
される微量のヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）をマーカー
として検出することが有効とされている。従来、ＨＳＡ
濃度の測定は、放射免疫測定法（ＲＩＡ）や酵素免疫測
定法（ＥＩＡ）等により行われているが、これらの方法
では、ラベル化した抗体や抗原を用いる必要があり、操
作が煩雑であり、さらに測定時間が長いなどの難点があ
る。
【０００４】一方、水晶振動子を用いるＨＳＡの検出に
ついては、これまでに数例の報告がある（Prusak-Socha
czewski およびJ.H.T.Luong, Anal.Lett., vol.23, 401
(1990) 、M.Muratsugu et al., Anal. Chem.,vol.65,
2933 (1993））が、未だ感度や繰り返し応答性の改善が
望まれているのが実情である。
ついては、これまでに数例の報告がある（Prusak-Socha
czewski およびJ.H.T.Luong, Anal.Lett., vol.23, 401
(1990) 、M.Muratsugu et al., Anal. Chem.,vol.65,
2933 (1993））が、未だ感度や繰り返し応答性の改善が
望まれているのが実情である。
【０００５】そこで、本発明者らは、水晶振動子を用い
る微量ＨＳＡの検出法において、表面質量変化をさらに
増大させることにより、発振周波数変化を増幅し、検出
感度の向上を図る方法を鋭意検討したところ、水晶振動
子として金属電極付きのＡＴカット素子を用い、この電
極に抗ＨＳＡ抗体を吸着固定化させた水晶振動式センサ
ーを用いるＨＳＡ測定方法において、ＨＳＡを含む溶液
を流してＨＳＡを選択的に該固定化抗体に結合させた後
に直ちに振動数の変化を測定するのではなく、ＨＳＡを
結合させた後さらに抗ＨＳＡ抗体を含む溶液を流してこ
のＨＳＡをサンドイッチ状に挟んで抗ＨＳＡ抗体を結合
させた後に振動数の変化を測定すると、ＨＳＡ結合後に
測定する場合に比べて検出感度が顕著に向上することを
発見した。本発明は、この発見に基づきさらに研究を進
めて完成させたものである。
る微量ＨＳＡの検出法において、表面質量変化をさらに
増大させることにより、発振周波数変化を増幅し、検出
感度の向上を図る方法を鋭意検討したところ、水晶振動
子として金属電極付きのＡＴカット素子を用い、この電
極に抗ＨＳＡ抗体を吸着固定化させた水晶振動式センサ
ーを用いるＨＳＡ測定方法において、ＨＳＡを含む溶液
を流してＨＳＡを選択的に該固定化抗体に結合させた後
に直ちに振動数の変化を測定するのではなく、ＨＳＡを
結合させた後さらに抗ＨＳＡ抗体を含む溶液を流してこ
のＨＳＡをサンドイッチ状に挟んで抗ＨＳＡ抗体を結合
させた後に振動数の変化を測定すると、ＨＳＡ結合後に
測定する場合に比べて検出感度が顕著に向上することを
発見した。本発明は、この発見に基づきさらに研究を進
めて完成させたものである。
【０００６】すなわち、本発明の目的は、水晶振動子と
して金属電極付きのＡＴカット素子を用い、この電極に
抗ＨＳＡ抗体を吸着固定化させた水晶振動式センサーを
用いる、ＨＳＡの高感度測定方法を提供することにあ
る。
して金属電極付きのＡＴカット素子を用い、この電極に
抗ＨＳＡ抗体を吸着固定化させた水晶振動式センサーを
用いる、ＨＳＡの高感度測定方法を提供することにあ
る。
【０００７】
【課題を解決するための手段】すなわち、本発明の要旨
は、（１） 金属電極付きのＡＴカット素子を水晶振動
子とし、この電極に抗ヒト血清アルブミン抗体（抗ＨＳ
Ａ抗体）を吸着固定化させた水晶振動式センサーを用い
て被検液中のヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）を該固定化
抗体に結合させ、結合したＨＳＡにさらに他の抗ＨＳＡ
抗体を結合させ、次いで振動数を測定することを特徴と
するヒト血清アルブミンの測定方法、（２） 金属電極
に吸着固定化される抗ＨＳＡ抗体がＨＳＡに対するモノ
クローナル抗体である前記（１）記載の方法、（３）
ＨＳＡにさらに結合させる他の抗ＨＳＡ抗体が、ＨＳＡ
に対するポリクローナル抗体である前記（１）または
（２）に記載の方法、（４） モノクローナル抗体を５
０〜８０℃に加熱処理することを特徴とする前記（２）
または（３）に記載の方法、（５） 金属電極が金電極
である前記（１）〜（４）のいずれか１項に記載の方
法、に関する。
は、（１） 金属電極付きのＡＴカット素子を水晶振動
子とし、この電極に抗ヒト血清アルブミン抗体（抗ＨＳ
Ａ抗体）を吸着固定化させた水晶振動式センサーを用い
て被検液中のヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）を該固定化
抗体に結合させ、結合したＨＳＡにさらに他の抗ＨＳＡ
抗体を結合させ、次いで振動数を測定することを特徴と
するヒト血清アルブミンの測定方法、（２） 金属電極
に吸着固定化される抗ＨＳＡ抗体がＨＳＡに対するモノ
クローナル抗体である前記（１）記載の方法、（３）
ＨＳＡにさらに結合させる他の抗ＨＳＡ抗体が、ＨＳＡ
に対するポリクローナル抗体である前記（１）または
（２）に記載の方法、（４） モノクローナル抗体を５
０〜８０℃に加熱処理することを特徴とする前記（２）
または（３）に記載の方法、（５） 金属電極が金電極
である前記（１）〜（４）のいずれか１項に記載の方
法、に関する。
【０００８】本発明に用いられる金属電極付きのＡＴカ
ット素子を水晶振動子とする水晶振動式センサーを用い
る振動数測定装置としては、公知のもの、例えば特開平
３−１１５９４７号公報に開示されているものが挙げら
れる。しかし、図１に示すような、フローセルタイプの
ものがより好適に使用し得る。即ち、水晶振動子の片面
（抗体を固定化した側）のみが流通する溶液に接触する
ように水晶振動子をフローセルに組み込んだタイプであ
り、溶液を流通させた状態で発振させる。
ット素子を水晶振動子とする水晶振動式センサーを用い
る振動数測定装置としては、公知のもの、例えば特開平
３−１１５９４７号公報に開示されているものが挙げら
れる。しかし、図１に示すような、フローセルタイプの
ものがより好適に使用し得る。即ち、水晶振動子の片面
（抗体を固定化した側）のみが流通する溶液に接触する
ように水晶振動子をフローセルに組み込んだタイプであ
り、溶液を流通させた状態で発振させる。
【０００９】水晶振動子としては、ＡＴカット、振動周
波数５〜１０ＭＨZ のものが好ましい。電極としては、
金電極、銀電極、白金黒電極等各種のものが挙げられる
が、抗ＨＳＡ抗体を吸着固定化させる本発明の方法にお
いては、測定精度の再現性等の観点から金電極が好まし
い。
波数５〜１０ＭＨZ のものが好ましい。電極としては、
金電極、銀電極、白金黒電極等各種のものが挙げられる
が、抗ＨＳＡ抗体を吸着固定化させる本発明の方法にお
いては、測定精度の再現性等の観点から金電極が好まし
い。
【００１０】金電極への抗ＨＳＡ抗体の固定化法として
は、プロテインＡを介する方法、２−メルカプトエチル
アミンを介する方法、γ−アミノプロピルトリエトキシ
シランを介する方法等が挙げられるが、いずれも固定化
量、周波数における応答感度、固定化された抗ＨＳＡ抗
体の安定性、繰り返し使用等のいずれかの観点で十分満
足すべきものではなく、直接吸着固定化させる方法が最
も優れている。
は、プロテインＡを介する方法、２−メルカプトエチル
アミンを介する方法、γ−アミノプロピルトリエトキシ
シランを介する方法等が挙げられるが、いずれも固定化
量、周波数における応答感度、固定化された抗ＨＳＡ抗
体の安定性、繰り返し使用等のいずれかの観点で十分満
足すべきものではなく、直接吸着固定化させる方法が最
も優れている。
【００１１】直接吸着固定化法は、金属電極へ抗ＨＳＡ
抗体の溶液を滴下し乾燥させる方法である。具体的に
は、例えば、金電極（８０ｍｍ2 ）へ、５０〜３０００
ｐｐｍの抗ＨＳＡ抗体のＰＢＳ（＋０．１％ＮａＮ3 、
ｐＨ７．２）溶液１０μｌを滴下し、乾燥させることに
より行なわれる。この方法により、抗ＨＳＡ抗体の疎水
性に富むＦｃ部分が金表面と疎水結合することにより、
吸着固定化されるものと思われる。
抗体の溶液を滴下し乾燥させる方法である。具体的に
は、例えば、金電極（８０ｍｍ2 ）へ、５０〜３０００
ｐｐｍの抗ＨＳＡ抗体のＰＢＳ（＋０．１％ＮａＮ3 、
ｐＨ７．２）溶液１０μｌを滴下し、乾燥させることに
より行なわれる。この方法により、抗ＨＳＡ抗体の疎水
性に富むＦｃ部分が金表面と疎水結合することにより、
吸着固定化されるものと思われる。
【００１２】この乾燥は室温で行なってもよいが、５０
〜８０℃に約５〜６０分間加熱すると、抗ＨＳＡ抗体の
比較的変性し易いＦｃ部分のみが変性して疎水結合し易
くなり、一方、抗原認識部位であるＦｖ部分は変性を受
けないため、ＨＳＡに対する感度が向上する場合もあ
る。
〜８０℃に約５〜６０分間加熱すると、抗ＨＳＡ抗体の
比較的変性し易いＦｃ部分のみが変性して疎水結合し易
くなり、一方、抗原認識部位であるＦｖ部分は変性を受
けないため、ＨＳＡに対する感度が向上する場合もあ
る。
【００１３】本発明に用いられる固定化用の抗ＨＳＡ抗
体としては、ＨＳＡに対するマウス、ウサギ、ヤギ等の
ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体が挙げられる
が、中でも、感度、応答再現性等の点から、例えば、マ
ウスのＨＳＡモノクローナル抗体（シグマ社、ザイメッ
ト社製、日本バイオテスト研究所製、セダレーン社製
等）が特に好ましい。これは、ＨＳＡモノクローナル抗
体が均一であるため、金電極への結合強度にばらつきが
小さく、またＨＳＡとの結合が強固かつ均一であること
による。
体としては、ＨＳＡに対するマウス、ウサギ、ヤギ等の
ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体が挙げられる
が、中でも、感度、応答再現性等の点から、例えば、マ
ウスのＨＳＡモノクローナル抗体（シグマ社、ザイメッ
ト社製、日本バイオテスト研究所製、セダレーン社製
等）が特に好ましい。これは、ＨＳＡモノクローナル抗
体が均一であるため、金電極への結合強度にばらつきが
小さく、またＨＳＡとの結合が強固かつ均一であること
による。
【００１４】水晶振動子の表面質量を増大させるため
に、トラップされたＨＳＡにさらに他の抗ＨＳＡ抗体を
結合させるが、このような抗ＨＳＡ抗体としては、ポリ
クローナル抗体（例えば、シグマ社、コスモバイオ社）
が好ましい。これは、トラップされたＨＳＡの未反応サ
イトと結合することが要求されるため、モノクローナル
抗体よりも多様な抗体を含むポリクローナル抗体のほう
が対応し易く、結合の効率が高いためと思われる。
に、トラップされたＨＳＡにさらに他の抗ＨＳＡ抗体を
結合させるが、このような抗ＨＳＡ抗体としては、ポリ
クローナル抗体（例えば、シグマ社、コスモバイオ社）
が好ましい。これは、トラップされたＨＳＡの未反応サ
イトと結合することが要求されるため、モノクローナル
抗体よりも多様な抗体を含むポリクローナル抗体のほう
が対応し易く、結合の効率が高いためと思われる。
【００１５】水晶振動式ＨＳＡセンサを用いて微量のＨ
ＳＡを測定するには、図１に示すようなフローセルに、
上記のようにして抗ＨＳＡ抗体を固定化した水晶振動子
を組み込み、水晶振動子の片面だけにＨＳＡを含む被検
液を流通させた状態で発振させる。セルの内容積は、微
量測定の場合は通常０．０１〜０．５ｃｍ3 、溶液の流
速は０．１〜１．０ｍｌ・ｍｉｎ-1程度が好ましい。セ
ンサ信号としては、抗原抗体反応に伴う水晶振動子の重
量変化による共振周波数の変化量を周波数カウンターに
より室温で測定する。循環流通させるサンプル溶液（Ｈ
ＳＡを含む溶液）、ポリクローナル抗体溶液は通常１ｍ
ｌである。ＨＳＡやポリクローナル抗体はリン酸緩衝生
理食塩水（ｐＨ７．２）（ＰＢＳ）を用いる。また、測
定後にＨＳＡとモノクローナル抗体との結合を解離する
には、ｐＨ３．０のリン酸水素二ナトリウム−クエン酸
緩衝液を用いる。
ＳＡを測定するには、図１に示すようなフローセルに、
上記のようにして抗ＨＳＡ抗体を固定化した水晶振動子
を組み込み、水晶振動子の片面だけにＨＳＡを含む被検
液を流通させた状態で発振させる。セルの内容積は、微
量測定の場合は通常０．０１〜０．５ｃｍ3 、溶液の流
速は０．１〜１．０ｍｌ・ｍｉｎ-1程度が好ましい。セ
ンサ信号としては、抗原抗体反応に伴う水晶振動子の重
量変化による共振周波数の変化量を周波数カウンターに
より室温で測定する。循環流通させるサンプル溶液（Ｈ
ＳＡを含む溶液）、ポリクローナル抗体溶液は通常１ｍ
ｌである。ＨＳＡやポリクローナル抗体はリン酸緩衝生
理食塩水（ｐＨ７．２）（ＰＢＳ）を用いる。また、測
定後にＨＳＡとモノクローナル抗体との結合を解離する
には、ｐＨ３．０のリン酸水素二ナトリウム−クエン酸
緩衝液を用いる。
【００１６】本発明の測定法の原理は、次のとおりであ
る。まず、モノクローナル抗体を固定化した水晶振動子
にＰＢＳを流通し、得られる安定した周波数をＦ0 とす
る。これに、ＨＳＡ溶液を流通すると、固定化されたモ
ノクローナル抗体とＨＳＡとの間で抗原抗体反応が起こ
り、水晶振動子表面の重量が増加するため周波数がＦ1
まで減少する。この際の周波数減少量をΔＦ1 ＝（Ｆ0
−Ｆ1 ）とする。その後、ポリクローナル抗体溶液を流
通すると、モノクローナル抗体と結合したＨＳＡの未反
応サイトにさらにポリクローナル抗体が結合することに
より、周波数がＦ2 にまで減少する。従って、本発明の
測定方法の感度は、ΔＦ1 ＝（Ｆ0 −Ｆ1 ）と ΔＦ2
＝（Ｆ0 −Ｆ2 ）の２種類で表され、Ｆ1 −Ｆ2 がポリ
クローナル抗体によって増幅された感度となる。２段階
目の応答（Ｆ1 −Ｆ2 ）は、固定化した抗体に結合した
ＨＳＡの量に比例すると考えられるので、ＨＳＡの測定
感度を増加させることができる。
る。まず、モノクローナル抗体を固定化した水晶振動子
にＰＢＳを流通し、得られる安定した周波数をＦ0 とす
る。これに、ＨＳＡ溶液を流通すると、固定化されたモ
ノクローナル抗体とＨＳＡとの間で抗原抗体反応が起こ
り、水晶振動子表面の重量が増加するため周波数がＦ1
まで減少する。この際の周波数減少量をΔＦ1 ＝（Ｆ0
−Ｆ1 ）とする。その後、ポリクローナル抗体溶液を流
通すると、モノクローナル抗体と結合したＨＳＡの未反
応サイトにさらにポリクローナル抗体が結合することに
より、周波数がＦ2 にまで減少する。従って、本発明の
測定方法の感度は、ΔＦ1 ＝（Ｆ0 −Ｆ1 ）と ΔＦ2
＝（Ｆ0 −Ｆ2 ）の２種類で表され、Ｆ1 −Ｆ2 がポリ
クローナル抗体によって増幅された感度となる。２段階
目の応答（Ｆ1 −Ｆ2 ）は、固定化した抗体に結合した
ＨＳＡの量に比例すると考えられるので、ＨＳＡの測定
感度を増加させることができる。
【００１７】
【実施例】以下、実施例および比較例により本発明をさ
らに詳しく説明するが、本発明はこれらの実施例等によ
りなんら限定されるものではない。 実施例１ 水晶振動子として、基本振動数６ＭＨZ の金電極付きの
ＡＴカット素子を用いた。抗体の固定化は、金電極上に
抗ＨＳＡモノクローナル抗体溶液（５００ｐｐｍ）を１
０μｌ滴下し、５０℃において乾燥させることにより行
った。この素子を図１に示すフローセルに組み込み、素
子の片面だけにキャリア溶液を流通させた状態で発振さ
せた。セルの内容積は０．０５ｃｍ3 、溶液の流速は、
０．４４ｍｌ・ｍｉｎ-1とした。まず、ＰＢＳ溶液１ｍ
ｌを循環流通させ安定したところで共振周波数（Ｆ0 ）
を測定した。次いで、１５ｐｐｍのＨＳＡを含むＰＢＳ
溶液１ｍｌを循環流通させ、安定したところで共振周波
数（Ｆ1 ）を測定した。さらに、１０００ｐｐｍのＨＳ
Ａに対するポリクローナル抗体溶液１ｍｌを循環流通さ
せ、安定したところで共振周波数（Ｆ2 ）を測定した。
その結果を図２に示す。まず、１５ｐｐｍのＨＳＡの流
通により１００ＨZ程度の周波数の減少という応答が見
られ、次に１０００ｐｐｍのポリクローナル抗体を流通
させることにより周波数がさらに減少し、全体で約３０
０ＨZ 以上の感度が得られた。
らに詳しく説明するが、本発明はこれらの実施例等によ
りなんら限定されるものではない。 実施例１ 水晶振動子として、基本振動数６ＭＨZ の金電極付きの
ＡＴカット素子を用いた。抗体の固定化は、金電極上に
抗ＨＳＡモノクローナル抗体溶液（５００ｐｐｍ）を１
０μｌ滴下し、５０℃において乾燥させることにより行
った。この素子を図１に示すフローセルに組み込み、素
子の片面だけにキャリア溶液を流通させた状態で発振さ
せた。セルの内容積は０．０５ｃｍ3 、溶液の流速は、
０．４４ｍｌ・ｍｉｎ-1とした。まず、ＰＢＳ溶液１ｍ
ｌを循環流通させ安定したところで共振周波数（Ｆ0 ）
を測定した。次いで、１５ｐｐｍのＨＳＡを含むＰＢＳ
溶液１ｍｌを循環流通させ、安定したところで共振周波
数（Ｆ1 ）を測定した。さらに、１０００ｐｐｍのＨＳ
Ａに対するポリクローナル抗体溶液１ｍｌを循環流通さ
せ、安定したところで共振周波数（Ｆ2 ）を測定した。
その結果を図２に示す。まず、１５ｐｐｍのＨＳＡの流
通により１００ＨZ程度の周波数の減少という応答が見
られ、次に１０００ｐｐｍのポリクローナル抗体を流通
させることにより周波数がさらに減少し、全体で約３０
０ＨZ 以上の感度が得られた。
【００１８】実施例２ 実施例１において使用した水晶振動子を再使用するた
め、測定後のフローセルにＰＢＳを循環流通させて洗浄
した後、ｐＨ３．０のリン酸水素二ナトリウム−クエン
酸緩衝液を循環流通させた。次いで、ＰＢＳを循環流通
させながら共振周波数を測定したところ、図２に示すよ
うに、共振周波数は測定前のレベルにまで回復した。従
って、本発明の方法によれば、同一固定化水晶振動子を
繰り返し使用することが可能である。事実、この固定化
水晶振動子は、４日間に１００ｐｐｍのＨＳＡに対する
応答を約３０回繰り返しても、安定した感度が得られ
た。
め、測定後のフローセルにＰＢＳを循環流通させて洗浄
した後、ｐＨ３．０のリン酸水素二ナトリウム−クエン
酸緩衝液を循環流通させた。次いで、ＰＢＳを循環流通
させながら共振周波数を測定したところ、図２に示すよ
うに、共振周波数は測定前のレベルにまで回復した。従
って、本発明の方法によれば、同一固定化水晶振動子を
繰り返し使用することが可能である。事実、この固定化
水晶振動子は、４日間に１００ｐｐｍのＨＳＡに対する
応答を約３０回繰り返しても、安定した感度が得られ
た。
【００１９】実施例３ 実施例１および実施例２と同様にして、各種濃度のＨＳ
Ａ溶液について共振周波数を測定し、ΔＦ1 およびΔＦ
2 を求めた。その結果を図３に示す。ＨＳＡ濃度が０〜
２０ｐｐｍの範囲で、ＨＳＡ濃度はΔＦ1 またはΔＦ2
のいずれとも比例関係が成立することが分かる。また、
１ｐｐｍ当たりのΔＦ1 が約６ＨZ であるのに対し、Δ
Ｆ2 については約２０ＨZ であり、ポリクローナル抗体
のさらなる付加により、感度が約３倍以上増幅されたこ
とが分かる。なお、ヒトの尿中のＨＳＡ濃度は、正常値
が約１０ｐｐｍであり、本発明の測定方法は糖尿病性腎
症の早期診断に適しているといえる。
Ａ溶液について共振周波数を測定し、ΔＦ1 およびΔＦ
2 を求めた。その結果を図３に示す。ＨＳＡ濃度が０〜
２０ｐｐｍの範囲で、ＨＳＡ濃度はΔＦ1 またはΔＦ2
のいずれとも比例関係が成立することが分かる。また、
１ｐｐｍ当たりのΔＦ1 が約６ＨZ であるのに対し、Δ
Ｆ2 については約２０ＨZ であり、ポリクローナル抗体
のさらなる付加により、感度が約３倍以上増幅されたこ
とが分かる。なお、ヒトの尿中のＨＳＡ濃度は、正常値
が約１０ｐｐｍであり、本発明の測定方法は糖尿病性腎
症の早期診断に適しているといえる。
【００２０】比較例 ＨＳＡの代わりにウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を循環
流通させ、実施例１と同様にして共振周波数を測定し
た。実験した１０００ｐｐｍまで共振周波数の変化はみ
られなかった。
流通させ、実施例１と同様にして共振周波数を測定し
た。実験した１０００ｐｐｍまで共振周波数の変化はみ
られなかった。
【００２１】
【発明の効果】本発明の測定方法により、微量のＨＳ
Ａ、特に尿中の微量のＨＳＡを簡易かつ迅速に測定する
ことが可能となる。したがって、尿中に排泄される微量
のヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）をマーカーとして検出
する糖尿病性腎症の早期診断のための有用な手段を提供
することができる。
Ａ、特に尿中の微量のＨＳＡを簡易かつ迅速に測定する
ことが可能となる。したがって、尿中に排泄される微量
のヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）をマーカーとして検出
する糖尿病性腎症の早期診断のための有用な手段を提供
することができる。
【図１】図１は、本発明の測定方法に使用される水晶振
動式ＨＳＡセンサ用のフローセルの断面図の１例を示す
ものである。
動式ＨＳＡセンサ用のフローセルの断面図の１例を示す
ものである。
【図２】図２は、ＨＳＡ溶液、ついでポリクローナル抗
体溶液を流通させた場合のセンサの周波数応答を示す図
である。また測定後に酸性緩衝液を流通させた場合の周
波数の回復をも示す。
体溶液を流通させた場合のセンサの周波数応答を示す図
である。また測定後に酸性緩衝液を流通させた場合の周
波数の回復をも示す。
【図３】図３は、各種ＨＳＡ濃度の溶液を流通させた場
合に得られる周波数減少量（ΔＦ1 およびΔＦ2 ）とＨ
ＳＡ濃度との相関関係を示す図である。
合に得られる周波数減少量（ΔＦ1 およびΔＦ2 ）とＨ
ＳＡ濃度との相関関係を示す図である。
１ サンプル溶液入口 ２ サンプル溶液出口 ３ 金電極 ４ 水晶振動子 ５ シリコンラバーシート ６ 銅リード線 ７ アクリル樹脂
Claims (5)
- 【請求項１】 金属電極付きのＡＴカット素子を水晶振
動子とし、この電極に抗ヒト血清アルブミン抗体（抗Ｈ
ＳＡ抗体）を吸着固定化させた水晶振動式センサーを用
いて被検液中のヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）を該固定
化抗体に結合させ、結合したＨＳＡにさらに他の抗ＨＳ
Ａ抗体を結合させ、次いで振動数を測定することを特徴
とするヒト血清アルブミンの測定方法。 - 【請求項２】 金属電極に吸着固定化される抗ＨＳＡ抗
体がＨＳＡに対するモノクローナル抗体である請求項１
記載の方法。 - 【請求項３】 ＨＳＡにさらに結合させる他の抗ＨＳＡ
抗体が、ＨＳＡに対するポリクローナル抗体である請求
項１または２に記載の方法。 - 【請求項４】 モノクローナル抗体を５０〜８０℃に加
熱処理することを特徴とする請求項２または３に記載の
方法。 - 【請求項５】 金属電極が金電極である請求項１〜４の
いずれか１項に記載の方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP07424094A JP3338551B2 (ja) | 1994-03-17 | 1994-03-17 | ヒト血清アルブミンの測定方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP07424094A JP3338551B2 (ja) | 1994-03-17 | 1994-03-17 | ヒト血清アルブミンの測定方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH07260782A true JPH07260782A (ja) | 1995-10-13 |
| JP3338551B2 JP3338551B2 (ja) | 2002-10-28 |
Family
ID=13541445
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP07424094A Expired - Lifetime JP3338551B2 (ja) | 1994-03-17 | 1994-03-17 | ヒト血清アルブミンの測定方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3338551B2 (ja) |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2005026689A2 (en) | 2003-09-10 | 2005-03-24 | I-Stat Corporation | Immunoassay device with immuno-reference electrode |
| JP2007040717A (ja) * | 2005-07-29 | 2007-02-15 | Kyowa Medex Co Ltd | 測定器具及びこれを用いた測定用キット、測定方法並びに測定装置 |
| US7407814B2 (en) | 2000-08-09 | 2008-08-05 | California Institute Of Technology | Active NEMS arrays for biochemical analyses |
| US7682833B2 (en) | 2003-09-10 | 2010-03-23 | Abbott Point Of Care Inc. | Immunoassay device with improved sample closure |
| JP2010529422A (ja) * | 2007-06-01 | 2010-08-26 | アトノミックス アクティーゼルスカブ | 標的検体の検出用のナノ粒子を用いた生体表面弾性波（ｓａｗ）共振器増幅 |
| US8747774B2 (en) | 2009-12-18 | 2014-06-10 | Abbott Point Of Care Inc. | Integrated hinged cartridge housings for sample analysis |
| WO2014159615A2 (en) | 2013-03-14 | 2014-10-02 | Abbott Point Of Care Inc | Thermal control system for controlling the temperature of a fluid |
-
1994
- 1994-03-17 JP JP07424094A patent/JP3338551B2/ja not_active Expired - Lifetime
Cited By (20)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7989198B2 (en) | 2000-08-09 | 2011-08-02 | California Institute Of Technology | Active NEMS arrays for biochemical analyses |
| US8329452B2 (en) | 2000-08-09 | 2012-12-11 | California Institute Of Technology | Active NEMS arrays for biochemical analyses |
| US7407814B2 (en) | 2000-08-09 | 2008-08-05 | California Institute Of Technology | Active NEMS arrays for biochemical analyses |
| US8765075B2 (en) | 2003-09-10 | 2014-07-01 | Abbott Point Of Care, Inc. | Immunoassay reagent composition |
| EP2551671A2 (en) | 2003-09-10 | 2013-01-30 | Abbott Point Of Care, Inc. | Immunoassay device with immuno-reference electrode |
| US8808626B2 (en) | 2003-09-10 | 2014-08-19 | Abbott Point Of Care Inc. | Amperometric immunosensor |
| US7981387B2 (en) | 2003-09-10 | 2011-07-19 | Abbott Point Of Care Inc. | Immunoassay device with improved sample closure |
| US7682833B2 (en) | 2003-09-10 | 2010-03-23 | Abbott Point Of Care Inc. | Immunoassay device with improved sample closure |
| US8168439B2 (en) | 2003-09-10 | 2012-05-01 | Abbott Point Of Care Inc. | Method for measuring an analyte in blood |
| US8216853B2 (en) | 2003-09-10 | 2012-07-10 | Abbott Point Of Care Inc. | Immunoassay device with improved sample closure |
| US8309364B2 (en) | 2003-09-10 | 2012-11-13 | Abbott Point Of Care Inc. | Method of performing an immunoassay in blood |
| WO2005026689A2 (en) | 2003-09-10 | 2005-03-24 | I-Stat Corporation | Immunoassay device with immuno-reference electrode |
| US7723099B2 (en) | 2003-09-10 | 2010-05-25 | Abbott Point Of Care Inc. | Immunoassay device with immuno-reference electrode |
| US8460922B2 (en) | 2003-09-10 | 2013-06-11 | Abbott Point Of Care Inc. | Immunosensor system for blood with reduced interference |
| JP2007040717A (ja) * | 2005-07-29 | 2007-02-15 | Kyowa Medex Co Ltd | 測定器具及びこれを用いた測定用キット、測定方法並びに測定装置 |
| JP2010529422A (ja) * | 2007-06-01 | 2010-08-26 | アトノミックス アクティーゼルスカブ | 標的検体の検出用のナノ粒子を用いた生体表面弾性波（ｓａｗ）共振器増幅 |
| US8747774B2 (en) | 2009-12-18 | 2014-06-10 | Abbott Point Of Care Inc. | Integrated hinged cartridge housings for sample analysis |
| US9415389B2 (en) | 2009-12-18 | 2016-08-16 | Abbott Point Of Care Inc. | Integrated hinged cartridge housings for sample analysis |
| WO2014159615A2 (en) | 2013-03-14 | 2014-10-02 | Abbott Point Of Care Inc | Thermal control system for controlling the temperature of a fluid |
| US10981172B2 (en) | 2013-03-14 | 2021-04-20 | Abbott Point Of Care Inc. | Thermal control system for controlling the temperature of a fluid |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP3338551B2 (ja) | 2002-10-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4735906A (en) | Sensor having piezoelectric crystal for microgravimetric immunoassays | |
| US5501986A (en) | Piezoelectric specific binding assay with mass amplified reagents | |
| US7811831B2 (en) | Systems and methods for molecular recognition | |
| EP0026215A1 (en) | METHOD FOR DETERMINING THE CLASSES OF ANTIQUE-SPECIFIC ANTIBODIES. | |
| Luong et al. | Analytical applications of piezoelectric crystal biosensors | |
| EP2694946B1 (en) | Optical chemical sensing device with pyroelectric or piezoelectric transducer | |
| AU752190B2 (en) | Sensor for detecting biological matter | |
| Suri et al. | Development of piezoelectric crystal based microgravimetric immunoassay for determination of insulin concentration | |
| JPH0660901B2 (ja) | 酵素免疫測定法 | |
| Le et al. | A goat-anti-human IgG modified piezoimmunosensor for Staphylococcus aureus detection | |
| Lee et al. | Application of a flow type quartz crystal microbalance immunosensor for real time determination of cattle bovine ephemeral fever virus in liquid | |
| Geddes et al. | Piezoelectric crystal for the detection of immunoreactions in buffer solutions | |
| JP3848416B2 (ja) | 質量感受性バイオセンサー | |
| JP3338551B2 (ja) | ヒト血清アルブミンの測定方法 | |
| EP0408641B1 (en) | Piezoelectric specific binding assay with mass amplified reagents | |
| JPWO2005015217A1 (ja) | 測定対象物測定器具、測定装置および測定方法 | |
| Sakai et al. | Evaluation of binding of human serum albumin (HSA) to monoclonal and polyclonal antibody by means of piezoelectric immunosensing technique | |
| Wu et al. | A direct immunoassay for schistosoma japonium antibody (SjAb) in serum by piezoelectric body acoustic wave sensor | |
| ATE138203T1 (de) | Testverfahren für antigene oder antikörper | |
| JPH07225233A (ja) | 水晶発振子を用いる免疫測定法 | |
| Pohanka | Piezoelectric immunosensor for the determination of immunoglobulin G | |
| JP2694809B2 (ja) | 酵素免疫測定方法及び酵素免疫センサ | |
| Vaughan et al. | Piezoelectric immunosensors for environmental monitoring | |
| JPS6311835A (ja) | 生体関連物質の濃度測定方法 | |
| JP2690849B2 (ja) | 水晶振動子式バイオセンサの製法及び水晶振動子式バイオセンサ |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20080809 Year of fee payment: 6 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Year of fee payment: 7 Free format text: PAYMENT UNTIL: 20090809 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20090809 Year of fee payment: 7 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Year of fee payment: 8 Free format text: PAYMENT UNTIL: 20100809 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Year of fee payment: 8 Free format text: PAYMENT UNTIL: 20100809 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Year of fee payment: 9 Free format text: PAYMENT UNTIL: 20110809 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20110809 Year of fee payment: 9 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120809 Year of fee payment: 10 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120809 Year of fee payment: 10 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Year of fee payment: 11 Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130809 |
|
| EXPY | Cancellation because of completion of term |