JP2010516287A - パピローマウイルスワクチン - Google Patents
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Abstract
Description
HPV-16 E2ポリペプチドをコードする核酸分子を含んでなるベクター、
HPV-18 E2ポリペプチドをコードする核酸分子を含んでなるベクター、
HPV-33E2ポリペプチドをコードする核酸分子を含んでなるベクター、
HPV-52E2ポリペプチドをコードする核酸分子を含んでなるベクター
を包含する。
(i) HPV-16 E2ポリペプチドをコードする核酸分子を含んでなりかつ(ii) HPV-18 E2ポリペプチドをコードする核酸分子をも含んでなるベクター、
(i) HPV-16 E2ポリペプチドをコードする核酸分子、(ii) HPV-18 E2ポリペプチドをコードする核酸分子および(iii) HPV-33E2ポリペプチドをコードする核酸分子を含んでなるベクター、
(i) HPV-16 E2ポリペプチドをコードする核酸分子、(ii) HPV-18 E2ポリペプチドをコードする核酸分子および(iii) HPV-52E2ポリペプチドをコードする核酸分子を含んでなるベクター、
(i) HPV-16 E2ポリペプチドをコードする核酸分子、(ii) HPV-33E2ポリペプチドをコードする核酸分子および(iii) HPV-52E2ポリペプチドをコードする核酸分子を含んでなるベクター、
(i) HPV-16 E2ポリペプチドをコードする核酸分子、(ii) HPV-18 E2ポリペプチドをコードする核酸分子、(iii) HPV-33E2ポリペプチドをコードする核酸分子および(iv) HPV-52E2ポリペプチドをコードする核酸分子を含んでなるベクター、
(i) HPV-16 E2ポリペプチドをコードする核酸分子および(ii) HPV-16 E1ポリペプチドをコードする核酸分子を含んでなるベクター、
(i) HPV-16 E2ポリペプチドをコードする核酸分子、(ii) HPV-16 E1ポリペプチドをコードする核酸分子、(iii) HPV-18 E2ポリペプチドをコードする核酸分子および(iv) HPV-18 E1ポリペプチドをコードする核酸分子を含んでなるベクター、
(i) HPV-16 E2ポリペプチドをコードする核酸分子および(ii) HPV-16E6ポリペプチドをコードする核酸分子を含んでなるベクター、
(i) HPV-16 E2ポリペプチドをコードする核酸分子および(ii) HPV-16E7ポリペプチドをコードする核酸分子を含んでなるベクター、
(i) HPV-16 E2ポリペプチドをコードする核酸分子、(ii) HPV-16 E1ポリペプチドをコードする核酸分子、(iii) HPV-16E6ポリペプチドをコードする核酸分子および(iv) HPV-16E7ポリペプチドをコードする核酸分子を含んでなるベクター、および
HPV-16 E1、E2、E6およびE7ポリペプチドおよびHPV-18 E1、E2、E6およびE7ポリペプチドをコードする核酸分子
からなる群から選択されるベクターを包含する。
o 1Mサッカロース、150 mM NaCl、1mM MgCl2、54 mg/1 Tween 80、10 mM Tris- HCl pH 8.5(特に、活性剤がアデノウイルスベクターであるとき)、
o 10 mg/mlマンニトール、1 mg/ml HSA、20 mM Tris, pH 7.2、および150 mM NaCl、および
o 生理食塩水
が挙げられる。
HPV16 E2をコードするヌクレオチド配列を、CaSki細胞(ATCC CRL-1550)から単離したゲノムDNAからクローニングした。E2遺伝子を、プライマーOTG 16809(配列番号:9)およびOTG 16810(配列番号:10)を用いて増幅した。生成する断片をBamHIおよびEcoBIによって消化し、同じ酵素によって制限したpGEX2T(Amersham Biosciences)に挿入し、pTG17239を生じた。クローニングしたE2遺伝子のシークエンシングでは、HPV16 E2プロトタイプ配列(Genbank NC-01526に記載)と比較して5つの突然変異を示した。2個の突然変異はサイレントであり、3個の非サイレント突然変異(T210I、S219P、K310T)はQuikChange Site Directed Mutagenesisキット(Stratagene)を用いて修正し、pTG17268を生じた。
pTG 17268に組込まれたE2ヌクレオチド配列を位置指定突然変異誘発によって修飾し、E2*と呼ばれるHPV-16 E2変異体(E39AおよびI73A)を生成した。更に具体的には、E2複製機能を39位のGlu残基をAlaで置換することによって廃止し、トランス活性化機能を73位のIle残基をAlaで置換することによって廃止した。生成するプラスミドpTG17318は、HPV-16 E2*をコードする修飾配列を含んでなる。
MVATG17408ウイルスの生成は、MVATGN33.1(MOI 0.1 pfu/細胞)に感染しpTG17408でトランスフェクションした(標準的リン酸カルシウムDNA沈降による)一次ニワトリ胚繊維芽細胞(CEF)での相同組換えによって行った。ウイルス選択は、ミコフェノール酸,キサンチンおよびヒポキサンチンを含む選択培地の存在下にて3回のプラーク精製によって行った。上記のように、選択マーカーを非選択培地で継代することによって除去した。親MVAによる汚染がないことを、PCRによって確かめた。
HPV-52E2ポリペプチドをコードする合成遺伝子をGeneart (Regensburg, ドイツ)によって合成した。この合成配列は、(i) HPV-16、HPV-18およびHPV-33由来のE2遺伝子で相同性率を75%未満まで減少させ(相同部分は、好ましくは6連続ヌクレオチド未満まで減少する)および(ii) HPV-52遺伝子産物(E39AおよびI73 A)の酵素機能を廃止する突然変異を導入するようにデザインした。
Claims (49)
- 少なくとも1種類のパピローマウイルスE2ポリペプチドまたはベクターまたは感染性ウイルス粒子をコードする核酸分子の使用であって、少なくとも1種類のパピローマウイルスによって引き起こされる持続性パピローマウイルス感染症に罹っている宿主生物の治療を目的とする薬剤を調製するための上記核酸分子を含んでなる使用。
- 上記核酸分子、ベクターまたは感染性ウイルス粒子を、少なくとも1種類のパピローマウイルスに暴露した後であってパピローマウイルス関連病巣の検出/出現前に投与する、請求項1に記載の使用。
- 上記の少なくとも1種類のパピローマウイルスE2ポリペプチドが、HPV-16、HPV-18、HPV-30、HPV-31、HPV-33、HPV-35、HPV-39、HPV-45、HPV-51、HPV-52、HPV-56、HPV-58、HPV-59、HPV-66、HPV-68、HPV-70およびHPV-85からなる群から選択されるHR-HPVから生じる、請求項1または2に記載の使用。
- 上記の少なくとも1種類のパピローマウイルスE2ポリペプチドがHPV-16、HPV-18、HPV-33またはHPV-52、またはそれらの任意の組合せから生じる、請求項3に記載の使用。
- 上記核酸分子が少なくとも輻射および/または転写活性化活性を欠いたE2ポリペプチドをコードするように修飾される、請求項1-4のいずれか一項に記載の使用。
- 上記E2ポリペプチドがHPV-16から生じ、少なくとも39位(E39)のGlu残基および/または73位(I73)のIle残基がそれぞれの39および73位でGluおよびIle以外の任意のアミノ酸残基に置換されていることを除き、配列番号:1に示されるアミノ酸配列を含んでなる、請求項5に記載の使用。
- 39位のGlu残基および/または73位のIle残基がAla残基で置換されている、請求項6に記載の使用。
- 上記核酸分子が、膜によって提示されるE2ポリペプチドをコードするように修飾される、請求項1-7のいずれか一項に記載の使用。
- 上記膜によって提示されるE2ポリペプチドが、上記パピローマウイルスE2ポリペプチドの分泌および膜固着配列への融合によって修飾される、請求項8に記載の使用。
- 上記分泌および/または膜固着配列が狂犬病糖タンパク質、HIVウイルスエンベロープ糖タンパク質または麻疹ウイルスFタンパク質から生じるか、または合成的なものである、請求項9に記載の使用。
- 上記ベクターが、
HPV-16 E2ポリペプチドをコードする核酸分子を含んでなるベクター、
HPV-18 E2ポリペプチドをコードする核酸分子を含んでなるベクター、
HPV-33E2ポリペプチドをコードする核酸分子を含んでなるベクター、
HPV-52E2ポリペプチドをコードする核酸分子を含んでなるベクター
からなる群から選択される、請求項4-10のいずれか一項に記載の使用。 - 上記核酸分子が配列番号:2に示されるアミノ酸配列を含んでなるE2ポリペプチドをコードする、請求項10または11に記載の使用。
- 上記ベクターまたは感染性ウイルス粒子が、異なるパピローマウイルス遺伝子型に由来する少なくとも2種類のE2ポリペプチドをコードする核酸分子を含んでなる、請求項1-12のいずれか一項に記載の使用。
- 上記核酸、ベクター、感染性ウイルス粒子が、1種類以上の追加ポリペプチドまたは上記の追加ポリペプチドをコードする1種類以上の核酸、ベクター、または感染性ウイルス粒子と組み合わせて用いられる、請求項1-13のいずれか一項に記載の使用。
- 上記の追加ポリペプチドがE1、E2、E4、E5、E6およびE7からなる群から選択される初期HPVポリペプチドである、請求項14に記載の使用。
- 上記パピローマウイルスの追加ポリペプチドが、上記核酸分子によってコードされるE2ポリペプチドと同じパピローマウイルスに由来する、請求項15に記載の使用。
- 上記パピローマウイルスの追加ポリペプチドが、上記核酸分子によってコードされるE2ポリペプチとは異なるパピローマウイルス遺伝子型に由来する、請求項15に記載の使用。
- 上記パピローマウイルスの追加ポリペプチドが対応する天然のE1ポリペプチドと比較して1個以上の修飾を含んでなりウイルス複製の刺激には不完全となるような修飾E1ポリペプチドであり、特に好ましくは、482位のGly残基がAsp残基で置換されていることを除き天然のHPV-16 E1ポリペプチドのアミノ酸配列を含んでなる修飾E1ポリペプチドである、請求項15-17のいずれか一項に記載の使用。
- 上記パピローマウイルスの追加ポリペプチドが、非発癌性でありかつ細胞腫瘍抑制遺伝子産物p53に結合するために変化している修飾E6ポリペプチドである、請求項15-17のいずれか一項に記載の使用。
- 上記パピローマウイルス追加ポリペプチドが、非発癌性でありかつ細胞腫瘍抑制遺伝子産物Rbに結合するために変化している修飾E7ポリペプチドである、請求項15-17のいずれか一項に記載の使用。
- 上記パピローマウイルス追加ポリペプチドが配列番号:3-5に示されるアミノ酸配列のいずれかを含んでなるポリペプチドからなる群から選択される、請求項15-20のいずれか一項に記載の使用。
- パピローマウイルスE1ポリペプチドをコードする核酸分子とパピローマウイルスE2ポリペプチドをコードする核酸分子を含んでなるベクターであって、天然状態では上記E2をコードする核酸分子の5'部分と100%同一である上記E1をコードする核酸分子の3'部分が、上記E2をコードする核酸分子の上記部分と75%未満の同一性率を示すように修飾されることを特徴とする、ベクター。
- パピローマウイルスE1ポリペプチドをコードする核酸分子とパピローマウイルスE2ポリペプチドをコードする核酸分子を含んでなるベクターであって、上記E1をコードする核酸分子と上記E2をコードする核酸分子が75%または75%を上回る同一性率を示す40以上の隣接ヌクレオチドの部分を含まないことを特徴とする、ベクター。
- 少なくとも2種類のパピローマウイルスE2ポリペプチドをコードする核酸分子を含んでなるベクターであって、上記E2をコードする核酸分子が75%または75%を上回る同一性率を示す40以上の隣接ヌクレオチドの部分を含まないことを特徴とする、ベクター。
- 上記E1をコードする核酸分子が配列番号:6または配列番号:7に示されるヌクレオチド配列を含んでなる、請求項22-24のいずれか一項に記載のベクター。
- 上記E2をコードする(複数の)核酸分子が請求項3-10および12のいずれか一項に記載のE2ポリペプチドをコードする、請求項22-25のいずれか一項に記載のベクター。
- 上記ベクターが、
(i) HPV-16 E2ポリペプチドをコードする核酸分子を含んでなりかつ(ii) HPV-18 E2ポリペプチドをコードする核酸分子をも含んでなるベクター、
(i) HPV-16 E2ポリペプチドをコードする核酸分子、(ii) HPV-18 E2ポリペプチドをコードする核酸分子および(iii) HPV-33E2ポリペプチドをコードする核酸分子を含んでなるベクター、
(i) HPV-16 E2ポリペプチドをコードする核酸分子、(ii) HPV-18 E2ポリペプチドをコードする核酸分子および(iii) HPV-52E2ポリペプチドをコードする核酸分子を含んでなるベクター、
(i) HPV-16 E2ポリペプチドをコードする核酸分子、(ii) HPV-33E2ポリペプチドをコードする核酸分子および(iii) HPV-52E2ポリペプチドをコードする核酸分子を含んでなるベクター、
(i) HPV-16 E2ポリペプチドをコードする核酸分子、(ii) HPV-18 E2ポリペプチドをコードする核酸分子、(iii) HPV-33E2ポリペプチドをコードする核酸分子および(iv) HPV-52E2ポリペプチドをコードする核酸分子を含んでなるベクター、
(i) HPV-16 E2ポリペプチドをコードする核酸分子および(ii) HPV-16 E1ポリペプチドをコードする核酸分子を含んでなるベクター、
(i) HPV-16 E2ポリペプチドをコードする核酸分子、(ii) HPV-16 E1ポリペプチドをコードする核酸分子、(iii) HPV-18 E2ポリペプチドをコードする核酸分子および(iv) HPV-18 E1ポリペプチドをコードする核酸分子を含んでなるベクター、
(i) HPV-16 E2ポリペプチドをコードする核酸分子および(ii) HPV-16E6ポリペプチドをコードする核酸分子を含んでなるベクター、
(i) HPV-16 E2ポリペプチドをコードする核酸分子および(ii) HPV-16E7ポリペプチドをコードする核酸分子を含んでなるベクター、
(i) HPV-16 E2ポリペプチドをコードする核酸分子、(ii) HPV-16 E1ポリペプチドをコードする核酸分子、(iii) HPV-16E6ポリペプチドをコードする核酸分子および(iv) HPV-16E7ポリペプチドをコードする核酸分子を含んでなるベクター、および
HPV-16 E1、E2、E6およびE7ポリペプチドおよびHPV-18 E1、E2、E6およびE7ポリペプチドをコードする核酸分子
からなる群から選択される請求項22-26のいずれか一項に記載のベクター。 - 上記HPV-16 E2ポリペプチドが配列番号:2に示されるアミノ酸配列を含んでなり、および/または上記HPV-18 E2ポリペプチドが配列番号:29に示されるアミノ酸配列を含んでなり、および/または上記HPV-33E2ポリペプチドが配列番号:30に示されるアミノ酸配列を含んでなり、および/または上記HPV-52E2ポリペプチドが配列番号:31に示されるアミノ酸配列を含んでなる、請求項11に記載の使用または請求項27に記載のベクター。
- 上記HPV-16 E1ポリペプチドが配列番号:3に示されるアミノ酸配列を含んでなり、および/または上記HPV-18 E1ポリペプチドが配列番号:32に示されるアミノ酸配列を含んでなり、および/または上記HPV-16E6ポリペプチドが配列番号:4に示されるアミノ酸配列を含んでなり、および/または上記HPV-16E7ポリペプチドが配列番号:5に示されるアミノ酸配列を含んでなる、請求項15-20のいずれか一項に記載の使用または請求項27または28に記載のベクター。
- HPV-16 E2ポリペプチドをコードする上記核酸分子が配列番号:8に示されるヌクレオチド配列を含んでなり、および/またはHPV-18 E2ポリペプチドをコードする上記核酸分子が配列番号:33に示されるヌクレオチド配列を含んでなり、および/またはHPV-33E2ポリペプチドをコードする上記核酸分子が配列番号:34または配列番号:35に示されるヌクレオチド配列を含んでなり、および/またはHPV-52E2ポリペプチドをコードする上記核酸分子が配列番号:36または配列番号:37に示されるヌクレオチド配列を含んでなり、および/またはHPV-16 E1ポリペプチドをコードする上記核酸分子が配列番号:7に示されるヌクレオチド配列を含んでなり、および/またはHPV-18 E1ポリペプチドをコードする上記核酸分子配列番号:38に示されるヌクレオチド配列を含んでなる、請求項1-21のいずれか一項に記載の使用または請求項27-29のいずれか一項に記載のベクター。
- 請求項22-30のいずれか一項に記載のベクターの使用、または少なくとも1種類のパピローマウイルスによって引き起こされる持続性パピローマウイルス感染症に罹っている宿主生物の治療を目的とする薬剤を調製するための上記ベクターを含んでなる感染性ウイルス粒子。
- 上記ベクターがカナリアポックスウイルス、鶏痘ウイルスまたはワクシニアウイルス由来のポックスウイルスベクターである、請求項1-21および28-31のいずれか一項に記載の使用、または請求項22-30のいずれか一項に記載のベクター。
- 上記ワクシニアウイルスがコペンハーゲン株、ワイス株、NYVACまたは改質アンカラ(MVA)株である、請求項32に記載の使用。
- 上記ウイルスベクターがコペンハーゲンワクシニアウイルスに由来し、上記核酸分子をチミジンキナーゼ遺伝子に挿入する、請求項33に記載の使用。
- 上記ウイルスベクターがMVAワクシニアウイルスに由来し、上記核酸分子を欠失IIIに挿入する、請求項33に記載の使用。
- 上記E2および/またはE7をコードする1または複数の核酸分子をワクシニアH5Rプロモーター下に置き、E1および/またはE6をコードする1または複数の核酸分子をp7.5Kプロモーターの制御下に置く、請求項33-35のいずれか一項に記載の使用。
- 上記核酸分子、ベクター、または感染性ウイルス粒子、またはそれらの任意の組合せが組成物に構成されている、請求項1-21および28-36のいずれか一項に記載の使用。
- 上記組成物を注射に適した形態に処方する、請求項37に記載の使用。
- 上記注射が筋肉内または皮下投与によるものである、請求項38に記載の使用。
- 少なくとも1種類のHR-HPVによって引き起こされる持続性感染症を治療するための、請求項1-39のいずれか一項に記載の使用。
- 上記核酸分子がHPV-16に由来するE2ポリペプチドをコードする、HPV16、HPV31、HPV33、HPV35、HPV52およびHPV58の少なくとも1種類によって引き起こされる感染症にかかっている宿主生物を治療するための、請求項40に記載の使用。
- 上記核酸分子がHPV-18に由来するE2ポリペプチドをコードする、HPV-18、HPV-39、HPV-45、HPV-51、HPV-56、HPV-59、HPV-68、HPV-70,およびHPV-85の少なくとも1種類によって引き起こされる感染症に罹っている宿主生物を治療するための、請求項40に記載の使用。
- 上記使用が、数日から4週間までの期間内で逐次的に行われる第一の投与シリーズに次いで第一のシリーズの最後の投与後の1-6ヶ月間に行われる第二の投与シリーズを含んでなる、請求項1-21および28-42のいずれか一項に記載の使用。
- 第一の投与シリーズが週間隔での3回の逐次投与を含んでなり、第二のシリーズが第一のシリーズ後の5または6ヶ月以内の1回の投与を含んでなる、請求項43に記載の使用。
- 上記核酸分子、ベクター、感染性ウイルス粒子または組成物を用いて、感染性パピローマウイルスの少なくとも1種類に対して抗ウイルス応答を提供する、請求項1-21および28-44のいずれか一項に記載の使用。
- 上記核酸分子、ベクター、感染性ウイルス粒子または組成物を用いて、動物またはヒト生物に免疫応答を誘発しまたは活性化する、請求項1-21および28-45のいずれか一項に記載の使用。
- 動物またはヒト生物における持続性パピローマウイルス感染症の治療に用いるための、請求項22-30のいずれか一項に記載のベクターまたは感染性ウイルス粒子または組成物、または請求項1-21および28-46のいずれか一項に記載の使用。
- 動物またはヒト生物における免疫応答を誘発または活性化に用いるための、請求項22-30のいずれか一項に記載のベクターまたは感染性ウイルス粒子または組成物、または請求項1-21および28-46のいずれか一項に記載の使用。
- 動物またはヒト生物に抗ウイルス応答を提供するのに用いるための、請求項22-30のいずれか一項に記載のベクターまたは感染性ウイルス粒子または組成物、または請求項1-21および28-46のいずれか一項に記載の使用。
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