JP2010506701A - 酵母細胞触媒支持体における細胞表面ディスプレイの使用 - Google Patents
酵母細胞触媒支持体における細胞表面ディスプレイの使用 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2010506701A JP2010506701A JP2009532411A JP2009532411A JP2010506701A JP 2010506701 A JP2010506701 A JP 2010506701A JP 2009532411 A JP2009532411 A JP 2009532411A JP 2009532411 A JP2009532411 A JP 2009532411A JP 2010506701 A JP2010506701 A JP 2010506701A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- protein
- phage
- catalyst
- ligand
- yeast
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
- C12N15/1034—Isolating an individual clone by screening libraries
- C12N15/1037—Screening libraries presented on the surface of microorganisms, e.g. phage display, E. coli display
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J31/00—Catalysts comprising hydrides, coordination complexes or organic compounds
- B01J31/02—Catalysts comprising hydrides, coordination complexes or organic compounds containing organic compounds or metal hydrides
- B01J31/06—Catalysts comprising hydrides, coordination complexes or organic compounds containing organic compounds or metal hydrides containing polymers
- B01J31/063—Polymers comprising a characteristic microstructure
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J31/00—Catalysts comprising hydrides, coordination complexes or organic compounds
- B01J31/16—Catalysts comprising hydrides, coordination complexes or organic compounds containing coordination complexes
- B01J31/165—Polymer immobilised coordination complexes, e.g. organometallic complexes
- B01J31/1658—Polymer immobilised coordination complexes, e.g. organometallic complexes immobilised by covalent linkages, i.e. pendant complexes with optional linking groups, e.g. on Wang or Merrifield resins
- B01J31/1683—Polymer immobilised coordination complexes, e.g. organometallic complexes immobilised by covalent linkages, i.e. pendant complexes with optional linking groups, e.g. on Wang or Merrifield resins the linkage being to a soluble polymer, e.g. PEG or dendrimer, i.e. molecular weight enlarged complexes
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J31/00—Catalysts comprising hydrides, coordination complexes or organic compounds
- B01J31/16—Catalysts comprising hydrides, coordination complexes or organic compounds containing coordination complexes
- B01J31/18—Catalysts comprising hydrides, coordination complexes or organic compounds containing coordination complexes containing nitrogen, phosphorus, arsenic or antimony as complexing atoms, e.g. in pyridine ligands, or in resonance therewith, e.g. in isocyanide ligands C=N-R or as complexed central atoms
- B01J31/1805—Catalysts comprising hydrides, coordination complexes or organic compounds containing coordination complexes containing nitrogen, phosphorus, arsenic or antimony as complexing atoms, e.g. in pyridine ligands, or in resonance therewith, e.g. in isocyanide ligands C=N-R or as complexed central atoms the ligands containing nitrogen
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J31/00—Catalysts comprising hydrides, coordination complexes or organic compounds
- B01J31/16—Catalysts comprising hydrides, coordination complexes or organic compounds containing coordination complexes
- B01J31/22—Organic complexes
- B01J31/2204—Organic complexes the ligands containing oxygen or sulfur as complexing atoms
- B01J31/2208—Oxygen, e.g. acetylacetonates
- B01J31/2217—At least one oxygen and one nitrogen atom present as complexing atoms in an at least bidentate or bridging ligand
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J31/00—Catalysts comprising hydrides, coordination complexes or organic compounds
- B01J31/16—Catalysts comprising hydrides, coordination complexes or organic compounds containing coordination complexes
- B01J31/24—Phosphines, i.e. phosphorus bonded to only carbon atoms, or to both carbon and hydrogen atoms, including e.g. sp2-hybridised phosphorus compounds such as phosphabenzene, phosphole or anionic phospholide ligands
- B01J31/2404—Cyclic ligands, including e.g. non-condensed polycyclic ligands, the phosphine-P atom being a ring member or a substituent on the ring
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N11/00—Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
- C12N11/02—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier
- C12N11/06—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier attached to the carrier via a bridging agent
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J2231/00—Catalytic reactions performed with catalysts classified in B01J31/00
- B01J2231/70—Oxidation reactions, e.g. epoxidation, (di)hydroxylation, dehydrogenation and analogues
- B01J2231/76—Dehydrogenation
- B01J2231/763—Dehydrogenation of -CH-XH (X= O, NH/N, S) to -C=X or -CX triple bond species
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J2531/00—Additional information regarding catalytic systems classified in B01J31/00
- B01J2531/02—Compositional aspects of complexes used, e.g. polynuclearity
- B01J2531/0238—Complexes comprising multidentate ligands, i.e. more than 2 ionic or coordinative bonds from the central metal to the ligand, the latter having at least two donor atoms, e.g. N, O, S, P
- B01J2531/0241—Rigid ligands, e.g. extended sp2-carbon frameworks or geminal di- or trisubstitution
- B01J2531/0252—Salen ligands or analogues, e.g. derived from ethylenediamine and salicylaldehyde
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J2531/00—Additional information regarding catalytic systems classified in B01J31/00
- B01J2531/02—Compositional aspects of complexes used, e.g. polynuclearity
- B01J2531/0261—Complexes comprising ligands with non-tetrahedral chirality
- B01J2531/0266—Axially chiral or atropisomeric ligands, e.g. bulky biaryls such as donor-substituted binaphthalenes, e.g. "BINAP" or "BINOL"
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J2531/00—Additional information regarding catalytic systems classified in B01J31/00
- B01J2531/10—Complexes comprising metals of Group I (IA or IB) as the central metal
- B01J2531/16—Copper
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J2531/00—Additional information regarding catalytic systems classified in B01J31/00
- B01J2531/80—Complexes comprising metals of Group VIII as the central metal
- B01J2531/82—Metals of the platinum group
- B01J2531/821—Ruthenium
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J2531/00—Additional information regarding catalytic systems classified in B01J31/00
- B01J2531/80—Complexes comprising metals of Group VIII as the central metal
- B01J2531/82—Metals of the platinum group
- B01J2531/824—Palladium
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J2531/00—Additional information regarding catalytic systems classified in B01J31/00
- B01J2531/80—Complexes comprising metals of Group VIII as the central metal
- B01J2531/84—Metals of the iron group
- B01J2531/845—Cobalt
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J2531/00—Additional information regarding catalytic systems classified in B01J31/00
- B01J2531/90—Catalytic systems characterized by the solvent or solvent system used
- B01J2531/96—Water
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J2540/00—Compositional aspects of coordination complexes or ligands in catalyst systems
- B01J2540/60—Groups characterized by their function
- B01J2540/68—Associating groups, e.g. with a second ligand or a substrate molecule via non-covalent interactions such as hydrogen bonds
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
- C07K2319/035—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a signal for targeting to the external surface of a cell, e.g. to the outer membrane of Gram negative bacteria, GPI- anchored eukaryote proteins
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Virology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Catalysts (AREA)
- Low-Molecular Organic Synthesis Reactions Using Catalysts (AREA)
Abstract
Description
この出願は、2006年10月13日に出願された、係属中の米国仮特許出願第60/851,434号に対する優先権の利益を主張する。米国仮特許出願第60/851,434号は、あたかも完全に本明細書中に再び記載されているかのように参考として本明細書に援用される。
1.発明の分野
本発明は、合成触媒用の均質な触媒支持体としての表面ディスプレイ技術の使用に関する。本発明の触媒支持体は、それら表面に触媒の均一な(uniform)層を含み、均質な(homogeneous)触媒の特性を有する触媒を可能にすると同時に、上記触媒の効率的な分離およびリサイクルをさらに可能にする。種々の生物学的支持体が本明細書中に教示されているが、酵母細胞支持触媒(yeast cell−supported catalyst)が特に好ましい。
A.細胞表面ディスプレイ
多くの微生物およびビリオンは、タンパク質がそれら表面に遺伝子的にディスプレイされるように操作され得る。酵母Saccharomyces cerevisiaeは、しばしばこの目的で使用される。多くの方法、構造、および酵母細胞表面ディスプレイの適用が報告されてきた。非特許文献1;非特許文献2。
大きさが均一でかつ触媒を触媒支持体の表面を均一に覆うように配置させた触媒支持体が必要である。均一な支持体は、多くの利点を提供し、その利点としては、拡散の効果および触媒部位間の差異を最小にすることが挙げられる。触媒支持体はまた、いくつかの触媒の便利な取り扱いを補助し得る。
以下の説明は、当業者が本発明の種々の局面を理解または実施するのを補助し得る種々の言及を引用する。このような言及に対する引用は、本発明を実施するために使用され得る、当業者を先行技術のより詳細な技術および例示材料およびシステムに方向付けるために略式の方法として意図される。従って、各々のこのような言及は、その目的を達成するために必要な程度まで、本明細書中に参考として援用される。本明細書中での言及の引用は、このような言及が特許性の何らかの決定のための先行技術を構成するという容認ではない。
種々の生物学的細胞は、本発明の実施形態における使用に適切である。当業者は、多くの微生物株が本発明の実施形態における使用に適していることを認識する。酵母株が好ましい。酵母株Saccharomyces cerevisiaeは、本発明の実施形態において特に有用である。なぜなら、一部は、酵母ゲノムは広範囲に研究されているからであり、食品医薬品局によるGRAS(「一般に安全と考えられる(Generally Regarded As Safe)」)状態を享受するからである。Saccharomyces cerevisiaeは、迅速に増殖し得かつ融通の利くDNA形質転換系を有するモデル真核生物として認識される。
当業者は、種々の固定タンパク質が本発明の実施形態において使用され得ることを認識する。理想的には、固定タンパク質は、細胞機能または細胞構造にとって必須ではなく、それによって、細胞または他の生物学的支持体に対する増殖欠陥または機能的問題を避ける。Leeら,「Microbial Cell−Surface Display」 Trends in Biotech.21(1):45−52(2003)。Leeらは、固定タンパク質の有益な特徴を報告している:
首尾よいキャリアは、以下の4つの要件を満たすべきである:上記キャリアは、未熟(premature)融合タンパク質が内膜を通って行くことを可能にするのに効率的なシグナルペプチドまたは輸送シグナルを有するべきである;上記キャリアは、細胞表面上に融合タンパク質を分離することなく保持するために、強い固定構造(strain anchoring structure)を有するべきである;上記キャリアは、挿入または融合されるべき外来の配列と適合性であるべきである(すなわち、上記キャリアは、異種配列の挿入または融合に対して不安定にならないはずである);そして、上記キャリアは、細胞周辺腔または培地中に存在するプロテアーゼによる攻撃に抵抗するべきである。
広い範囲のタンパク質が、報告されるところによれば、細胞表面上にディスプレイされてきた。これらタンパク質は、細胞の形質膜を貫通して伸びることによってかまたは細胞膜表面との共有結合的相互作用もしくは非共有結合的相互作用によってかのいずれかで、細胞の外側にディスプレイされ得る。代表的には、酵母細胞は、上記細胞の表面上にタンパク質を発現することによって、そして上記タンパク質を、上記固定タンパク質のうちの1つと融合することによって、つなげられる(armed)。必須ではないものの、理想的には、上記融合タンパク質をコードする遺伝子は、上記酵母細胞のゲノムに組み込まれ得る。この組み込みは、当業者に公知の方法によって達成され得る。例えば、上記酵母細胞は、リチウム塩法、組み込み複製ベクター、スフェロプラスト、「遺伝子銃」、またはエレクトロポレーションを使用して形質転換され得る。
好ましい実施形態において、ビオチン/アビジン結合は、上記レセプタータンパク質に上記触媒をつなぐために使用され得る。ビオチン/ストレプトアビジン結合もまた、使用され得る。これらは、例えば、アビジンもしくはストレプトアビジンを酵母細胞の表面上にレセプタータンパク質としてディスプレイし、ビオチンを上記触媒に結合させることによって達成され得る。上記細胞および触媒は混合され、強いビオチン/アビジンまたはビオチン/ストレプトアビジンの結合相互作用が、上記細胞に上記触媒をつなぐ。
ADIキット中に提供される試薬:
1.ビオチン1バイアル(10mg;Cat#80301)
2.結合緩衝液(pH8.4,100ml,Cat#80302)
3.安定化緩衝液;5ml,Cat#80303。
1.結合体を透析するためのPBS(pH7.4)(0.26g KH2PO4、2.17g Na2HPO4・7H2O、および8.71gのNaClを1L H2Oに溶解する)。
2.透析バッグ(カットオフサイズ<10,000kDa)
3.ビオチンを溶解するためのDMF。
1.1×結合緩衝液(0.1M NaHCO3,pH8.4)中で結合させるためにタンパク質を徹底的に透析する。上記タンパク質濃度は、1〜10mg/mlであるべきである。上記タンパク質が純粋形態であるかまたは生理食塩水中もしくはH2O中に存在するのであれば、10×結合緩衝液を添加し、透析を省略することによって、そのpHを調整することが可能である。
2.使用前に、ビオチンをDMF中に、10mg/mlで溶解する。所定の比率の溶解したビオチンタンパク質溶液を、タンパク質溶液に、連続して混合しながらゆっくりと添加する。1:10(ビオチン:タンパク質)の比率が、ヤギ抗体またはウサギ抗体のために使用され得る。室温で1時間または4℃で一晩、それを混合する。
3.そのビオチン−結合体をPBSに対して4℃で徹底的に透析する。
4.安定化緩衝液を、その透析した結合体に添加する(出発タンパク質容量各500μlに対して2ml添加する)。
5.その結合体は、4℃で6ヶ月間まで保持され得る。凍結および融解を回避する。
多くのプラスミドが、固定タンパク質、レセプタータンパク質およびこれらの融合物の発現のために適切である。多くのプラスミドがまた、酵母ゲノムへのこれらタンパク質をコードする核酸の組み込みのためおよびそのコード配列の発現のために利用可能である。発現プラスミドは、代表的には、上記タンパク質をコードする核酸の発現のためのプロモーターエレメントを含む。発現プラスミドはまた、発現されたタンパク質を細胞表面にタンパク質を運ぶための細胞輸送装置に指向するように、コード配列への融合のために、シグナルペプチドおよび輸送ペプチド配列(transit peptide sequence)を含み得る。Boder,E.T.&Wittrup,K.D.,「Yeast Surface Display for Directed Evolution of Protein Expression,Affinity,and Stability」,Methods in Enzymology,25:430−444(2000)(本明細書中以降「Boder&Wittrup(II)」)は、pCT302プラスミドの構築を報告している。このpCT302プラスミド(図4に示される)は、Aga2pアグルチニン接合タンパク質へのタンパク質融合物の発現を可能にする。発現は、GAL1,10ガラクトース誘導性プロモーターの制御下にある。上記プロモーターの5’隣接配列(配列番号4)および3’隣接配列(配列番号5)の両方が報告された。Boder&Wittrup(II)はまた、この報告されたプラスミドの使用を通じて、細胞表面上に固定されたタンパク質の検出法を報告している。
(a)Saccharomyces cerevisiae由来のAGA2遺伝子。この遺伝子は、a−アグルチニンレセプターのサブユニットのうちの1つをコードする。AGA2への目的の遺伝子の融合は、目的のタンパク質の分泌およびディスプレイを可能にする。
(c)ディスプレイされるタンパク質の検出のためのXpressTMエピトープおよびV5エピトープ
(d)検出および金属キレート化樹脂上での考えられる精製のためのポリヒスチジン(6×His)タグ
(e)Saccharomyces cerevisiaeにおける選択のためのTRPl遺伝子
(f)酵母における安定なエピソーム複製のためのCEN6/ARS4
(g)E.coliにおける選択および複製のためのアンピシリン耐性遺伝子およびpUC起点。
pYD1プラスミドの調製および使用のための方法は、「pYD1 Yeast Display Vector Kit」,Catalog No.V835−01,Version D,December 10,2002,25−0259,Invitrogenに示されている。
種々の触媒が、本発明の実施形態において有用である。本発明における使用に適切であるために、触媒は、レセプタータンパク質につながれる(例えば、吸着されるかまたは結合されるかのいずれか)リガンドに、触媒が結合されるように、改変され得るべきである。次に、上記レセプタータンパク質は、細胞表面に固定される。理想的には、触媒はまた、上記酵母細胞によって有害でもなく、破壊的でもないべきである。触媒は、無機性であってもよいし、有機性であってもよい。
実施例1は、sec−フェネチルアルコールのアミノスルホンアミドルテニウム錯体酸化を提供する。この触媒ビオチン複合体は、J.Collotら,J.Am.Chem Soc.125(2003)に報告される方法によって調製する。この複合体を、水中でアビジンディスプレイ酵母と混合して、固定化無機触媒/酵母複合体を調製し、この酵母を、全ての非結合触媒から遠心分離によって分離する。以下の条件下で酸化を行う:室温で90時間、窒素雰囲気:62.5ミリモルのフェネチルアルコール、および75ミルモルのtert−ブチルヒドロペルオキシドを、500mlの水と100mlのアセトンとの混合物中で混合する。この混合物に、0.25ミリモルのビオチン金属酵素複合体を有する固定化複合体を添加する。反応が完了すると、酸化フェネチルアルコールが観察される。上記酵母金属酵素複合体を、濾過または遠心分離により、反応混合物から除去する。
実施例2は、ビオチン化触媒合成を提供する。ビオチン(0.1mol)を、60℃で、90mLのN,N−ジメチルホルムアミドに溶解する。(上記アミドの1つの合成は、S.Amslingerら,Tetrahedron 60(2004)11565−11569に報告されている)。次いで、上記溶液を室温に冷却し、0.1molのN,N’−カルボニルジイミダゾールを窒素下で添加する(約7時間)。反応が完了したときに、二酸化炭素放出は止まる。等モル量(0.1mol)の所定のNH2−R(ここでRは適切な触媒作用部位である)を、125mLのDMF中で添加し、24時間攪拌する。例えば、上記NH2−R化合物は、アミノ−TEMPO(2,2,6,6−テトラメチル−1−オキシ−4−ピペリジニル)アミンであり得る。DMFを、60℃で、真空下で除去し、次いで、その生成物を、フラッシュクロマトグラフィー、カラムクロマトグラフィーまたは再結晶化によって精製し得る。
実施例3は、アビジン酵母細胞表面ディスプレイプラスミドの構築を報告する。短縮化アビジンタンパク質(配列番号42)をコードする短縮化アビジンDNA(配列番号41)を、PCRのテンプレートとしてニワトリアビジンcDNAクローンを使用して、以下のプライマーを使用する30サイクルのPCR増幅によって行う:順方向,CGAACTGGATCCTCTCCCAGAAAGTGCTCGCTG(配列番号30)および逆方向,CGGATCCTCGAGTCACTCCTTCTGTGTGCG(配列番号31)。この増幅したDNAをBamHIおよびXhoIで切断し、BamHIおよびXhoIで切断したベクターpYD1(Invitrogen)に連結する。
実施例4は、グルコピラノシドのTEMPO触媒酸化を提供する。tempo/ビオチン複合体は、実施例2の方法によって調製される。次いで、この複合体を、アビジンタンパク質をディスプレイして、固定化Tempo複合体を形成する酵母細胞の懸濁物と混合し;非結合Tempoを、遠心分離によって酵母から分離する。この複合体を、pH10および20℃において、αメチルグルコシド(25mM)およびNaOCl(50mM)の水溶液と混合する。反応が完了すると、αメチルグルクロン酸が観察される。上記触媒複合体は、遠心分離によって上記混合物から容易に分離される。例えば、R. Ciriminnaら,「Sol−gel entrapped TEMPO for the selective oxidation of methyl−α−D−glucopyranoside」,J.Chem.Soc.Chem.Comm.,1441−1442(2000)から、上記TEMPO触媒に関するさらなる情報が得られ得る。
実施例5は、カップリング酵素反応を示す。グルコースオキシダーゼおよびカタラーゼのビオチン化形態は、上記で議論されるように調製される。これらを、6 IUのカタラーゼ 対 1 IUのグルコースオキシダーゼの割合で混合する。アビジンをディスプレイする酵母細胞を、酵素活性の全てを吸収する量でこの混合物に添加する。この触媒作用性複合体を、約25℃で6.0にpH制御した10% デキストロース溶液に添加する。約24時間通気する。この反応が完了すると、グルコン酸が観察され、この反応の間に精製された過酸化水素の全てが、カタラーゼによって分解される。この触媒複合体は、濾過によって容易に回収される。
実施例6は、ストレプトアビジンが表面上にディスプレイされたT7バクテリオファージの構築を示す。短縮化ストレプトアビジンタンパク質(配列番号44)をコードする短縮化ストレプトアビジンDNA(配列番号43)を、以下のプライマー:
順方向,GCGAATTCAGACCCCTCCAAGGACTCG(配列番号32)および逆方向,GCAAGCTTCTACTGCTGAACGGCGTC(配列番号33)、
を使用して、ならびにテンプレートとしてStreptomyces avidinii(ATCC 27419D)のゲノムDNAを使用して、30サイクルのPCR増幅によって作製する。
実施例7は、E.coliの株の細胞表面上にストレプトアビジンをディスプレイするためのプラスミドの構築を報告する。短縮化fadL遺伝子(配列番号40)を、以下のプライマー:
順方向,GGAATTCATGGTCATGAGCCAGAAAACC(配列番号34)および逆方向,GCTCTAGAACGATTCTGTGCAGGAAC(配列番号35)
を使用して、ならびにE.coliゲノムDNA(ATCC 700926D)を使用して、PCR増幅によってクローニングする。
順方向,GCTCTAGAGACCCCTCCAAGGACTCG(配列番号36)、および逆方向,GCAAGCTTCTACTGCTGAACGGCGTC(配列番号33)を使用して、ならびにテンプレートとしてStreptomyces avidinii(ATCC 27419D)ゲノムDNAを使用して、PCRによって作製する。
Claims (25)
- 以下:
表面を有する生物学的支持体;
該表面と結合される固定ドメインを含む固定タンパク質;
該固定タンパク質に融合されかつ該表面から配置されるリガンド結合ドメインを有するレセプタータンパク質;
該リガンド結合ドメインに結合されるリガンド;および
該リガンドに結合される非生物学的触媒、
を含む、触媒物質組成物。 - 複数の異なるレセプタータンパク質が複数の固定タンパク質に結合される、請求項1に記載の組成物。
- 前記生物学的支持体は、酵母細胞、細菌細胞およびビリオンからなる群より選択される、請求項1に記載の組成物。
- 前記ビリオンは、λファージ、T4ファージ、T7ファージ、R17ファージ、M13ファージ、MS2ファージ、G4ファージ、P1ファージ、P2ファージ、N4ファージ、φ6ファージ、およびφ29ファージからなる群より選択されるバクテリオファージである、請求項3に記載の組成物。
- 前記生物学的支持体は、Escherichia、Corynebacteria、Brevibacteria、Bacillus、Saccharomyces、Candida、Pichia、およびLactococcusからなる群より選択される属の微生物である、請求項3に記載の組成物。
- 前記微生物は、Saccharomyces cerevisiae株の酵母細胞である、請求項5に記載の組成物。
- 前記生物学的支持体は、酵母細胞でありかつ前記固定タンパク質およびレセプタータンパク質は、酵母細胞表面ディスプレイ系を含む、請求項1に記載の組成物。
- 前記酵母細胞表面ディスプレイ系は、α−アグルチニンに融合されたグリコシルホスファチジルイノシトール(GPI)アンカー(anchor);該細胞表面上にα−アグルチニンのC末端領域のジスルフィド結合で合わせられたa−アグルチニンのN末端領域に融合されたGPIアンカー;FlolpのC末端領域に融合されたGPIアンカー;およびGPIなしのFlolpの凝集機能ドメインのN末端固定(anchoring)からなる群より選択されるポリペプチド成分を含む、請求項7に記載の組成物。
- 前記レセプタータンパク質は、アビジンとストレプトアビジンからなる群より選択されるタンパク質を含み;前記リガンドはビオチンである、請求項1に記載の組成物。
- 前記レセプタータンパク質はレクチンを含み、前記リガンドは該レクチンに結合するグリカンである、請求項1に記載の組成物。
- 前記触媒は、[{N,N’−ビス(3,5−ジ−tert−ブチルサリチリデン)1,2−シクロヘキサンジアミナト(−2−)}コバルト(2)]、クロロメチルポリスチレン樹脂−1,10−フェナントロリンルテニウム、2,2,6,6−テトラメチルピペリジン−1−オキシル(TEMPO)ファミリーのポリ(エチレングリコール)支持ニトロキシルラジカル、Rh6クラスター触媒およびOs6クラスター触媒、バナジウム触媒、マンガンポルフィリン、ビス(サリチリデンエチレンジアミン)のCo(II)錯体、ニトロキシルラジカル、遷移金属、銅(ii)イオン、ホモキラルパラジウム錯体、貴金属、ポリマー性の2’−固定,6−固定および6’−固定の2−ジフェニルホスフィノ−1−1’−ビナフチル(MOP)リガンド、ならびにオキソアザボリリジン(oxazaborolidine)からなる群より選択される、請求項1に記載の組成物。
- 以下:
表面を有する生物学的支持体;
該表面に結合された固定ドメインを含む固定タンパク質;
該固定タンパク質に融合されかつ該表面から配置されたリガンド結合ドメインを有するレセプタータンパク質;および
選択された触媒に結合するためのドメインを有する、該リガンド結合ドメインに結合されたリガンド
を含む、触媒支持体組成物。 - 化学反応のための反応物と、表面を有する生物学的支持体、該表面に結合(engaged)された固定ドメインを含む固定タンパク質、該固定タンパク質に融合されかつ該表面から配置されたリガンド結合ドメインを有する、レセプタータンパク質、該リガンド結合ドメインに結合されたリガンド、ならびに該リガンドに結合された非生物学的触媒、を含む触媒物質組成物とを接触させる工程を包含する、化学反応を触媒するための方法。
- 生物学的支持体の表面から非生物学的触媒をディスプレイする工程を包含する、触媒支持体組成物を作製するための方法。
- 前記生物学的支持体の表面から前記非生物学的触媒をディスプレイする工程は、以下:
固定タンパク質への融合によって、少なくとも1種のレセプタータンパク質を該生物学的支持体の表面上にディスプレイする工程;
リガンドに結合された少なくとも1種の非生物学的触媒分子を提供する工程;および
該リガンドを該レセプタータンパク質に結合して、該触媒物質組成物を形成する工程、
を包含する、請求項14に記載の方法。 - 前記生物学的支持体は、酵母細胞、細菌細胞およびビリオンからなる群より選択される、請求項14に記載の方法。
- 前記ビリオンは、λファージ、T4ファージ、T7ファージ、R17ファージ、M13ファージ、MS2ファージ、G4ファージ、P1ファージ、P2ファージ、N4ファージ、φ6ファージ、およびφ29ファージからなる群より選択されるバクテリオファージである、請求項16に記載の方法。
- 前記生物学的支持体は、Escherichia、Corynebacteria、Brevibacteria、Bacillus、Saccharomyces、Candida、Pichia、およびLactococcusからなる群より選択される属の微生物である、請求項16に記載の方法。
- 前記生物学的支持体は、酵母細胞ディスプレイ系の一部である固定タンパク質に融合されるレセプタータンパク質を含む、請求項14に記載の方法。
- 前記酵母細胞表面ディスプレイ系は、α−アグルチニンに融合されたグリコシルホスファチジルイノシトール(GPI)アンカー;該細胞表面上にα−アグルチニンのC末端領域のジスルフィド結合で合わせられたa−アグルチニンのN末端領域に融合されたGPIアンカー;FlolpのC末端領域に融合されたGPIアンカー;およびGPIなしのFlolpの凝集機能ドメインのN末端固定からなる群より選択される、請求項19に記載の方法。
- 前記酵母ディスプレイ系は、前記レセプタータンパク質に融合された前記固定タンパク質をコードする組換え核酸配列を含み、該レセプタータンパク質は、前記酵母細胞において該レセプタータンパク質に融合される固定タンパク質を発現するプロモーター配列と、該酵母細胞の表面に該レセプタータンパク質を融合した該固定タンパク質を輸送するように機能するペプチドドメインをコードする輸送配列とともに、作動可能に構成されている、請求項19に記載の方法。
- 前記組換え核酸は、前記細胞の染色体に組み込まれる、請求項21に記載の方法。
- 前記レセプタータンパク質は、アビジンとストレプトアビジンからなる群より選択されるタンパク質を含み;前記リガンドはビオチンである、請求項15に記載の方法。
- 前記レセプタータンパク質はレクチンであり、前記リガンドは該レクチンに結合するグリカンである、請求項15に記載の方法。
- 前記触媒分子は、[{N,N’−ビス(3,5−ジ−tert−ブチルサリチリデン)1,2−シクロヘキサンジアミナト(−2−)}コバルト(2)]、クロロメチルポリスチレン樹脂−1,10−フェナントロリンルテニウム、2,2,6,6−テトラメチルピペリジン−1−オキシル(TEMPO)ファミリーのポリ(エチレングリコール)支持ニトロキシルラジカル、Rh6クラスター触媒およびOs6クラスター触媒、バナジウム触媒、マンガンポルフィリン、ビス(サリチリデンエチレンジアミン)のCo(II)錯体、ニトロキシルラジカル、遷移金属、銅(ii)イオン、ホモキラルパラジウム錯体、貴金属、ポリマー性の2’−固定,6−固定および6’−固定の2−ジフェニルホスフィノ−1−1’−ビナフチル(MOP)リガンド、ならびにオキソアザボリリジンからなる群より選択される、請求項15に記載の方法。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US85143406P | 2006-10-13 | 2006-10-13 | |
US60/851,434 | 2006-10-13 | ||
PCT/US2007/021729 WO2008063310A2 (en) | 2006-10-13 | 2007-10-11 | Use of cell surface displays in yeast cell catalyst supports |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2010506701A true JP2010506701A (ja) | 2010-03-04 |
JP5571955B2 JP5571955B2 (ja) | 2014-08-13 |
Family
ID=39430247
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2009532411A Active JP5571955B2 (ja) | 2006-10-13 | 2007-10-11 | 酵母細胞触媒支持体における細胞表面ディスプレイの使用 |
Country Status (6)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US8183030B2 (ja) |
EP (1) | EP2078198B1 (ja) |
JP (1) | JP5571955B2 (ja) |
AU (1) | AU2007322278B2 (ja) |
CA (1) | CA2666336C (ja) |
WO (1) | WO2008063310A2 (ja) |
Families Citing this family (12)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US8709980B2 (en) * | 2007-03-26 | 2014-04-29 | Celexion, Llc | Cell surface display, screening and production of proteins of interest |
US9127087B2 (en) * | 2008-12-01 | 2015-09-08 | University Of Maryland, Baltimore | High affinity recombinant sea lamprey antibodies selected by a Yeast Surface Display platform |
US8859235B2 (en) * | 2009-08-14 | 2014-10-14 | Basf Se | Methods in cell cultures, and related inventions, employing certain additives |
WO2013043582A1 (en) * | 2011-09-23 | 2013-03-28 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Cell surface display of ligands for the insulin and/or insulin growth factor 1 receptor and applications thereof |
US10988759B2 (en) | 2016-01-15 | 2021-04-27 | University Of Washington | High throughput protein-protein interaction screening in yeast liquid culture |
DE102016125516B4 (de) * | 2016-12-22 | 2022-03-31 | Rheinisch-Westfälische Technische Hochschule Aachen (RWTH) | Ganzzell-basierte Biohybridkatalysator-Systeme |
JP6909591B2 (ja) * | 2017-03-01 | 2021-07-28 | 三洋化成工業株式会社 | 有用物質の生産方法 |
TWI660043B (zh) * | 2017-10-24 | 2019-05-21 | 國立清華大學 | 人工纖維小體、利用其分解纖維素及生產酒精之方法 |
CN109755503B (zh) * | 2018-12-13 | 2021-09-07 | 温州大学 | 锰系化合物/碳管载硫复合材料的制备方法及其在锂硫电池中的应用 |
IL298006A (en) | 2020-05-11 | 2023-01-01 | A Alpha Bio Inc | High-throughput screening methods for identifying small molecule targets |
JP2023521933A (ja) | 2020-06-01 | 2023-05-25 | エー-アルファ バイオ,インコーポレイテッド | タンパク質間相互作用を特徴付け、且つ遺伝子操作する方法 |
WO2021260022A1 (en) | 2020-06-23 | 2021-12-30 | Universität Für Bodenkultur Wien | Production of carbonyl compounds using cell surface display of oxidases |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2001081663A (ja) * | 1999-09-13 | 2001-03-27 | Shinshu Ceramics:Kk | シルク製品及び光触媒処理体 |
JP2001279187A (ja) * | 2000-03-31 | 2001-10-10 | Tojo Yoko | 光触媒含有コーティング組成物及び光触媒含有塗膜劣化防止方法 |
JP2002508977A (ja) * | 1998-01-20 | 2002-03-26 | ザ、ボード、オブ、トラスティーズ、オブ、ザ、ユニバシティー、オブ、イリノイ | タンパク質の酵母細胞表面ディスプレイおよびその使用 |
JP2007513602A (ja) * | 2003-08-18 | 2007-05-31 | ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア | ポリペプチドディスプレイライブラリ並びにそれらの作製及び使用方法 |
Family Cites Families (12)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5637508A (en) | 1993-03-26 | 1997-06-10 | Geo-Centers, Inc. | Biomolecules bound to polymer or copolymer coated catalytic inorganic particles, immunoassays using the same and kits containing the same |
JP4101314B2 (ja) * | 1996-03-01 | 2008-06-18 | 三菱電機株式会社 | 電力変換貯蔵方法および装置 |
US6699658B1 (en) * | 1996-05-31 | 2004-03-02 | Board Of Trustees Of The University Of Illinois | Yeast cell surface display of proteins and uses thereof |
US6436171B1 (en) * | 1999-07-22 | 2002-08-20 | The Boc Group, Inc. | Oxygen-selective adsorbents |
US7033781B1 (en) * | 1999-09-29 | 2006-04-25 | Diversa Corporation | Whole cell engineering by mutagenizing a substantial portion of a starting genome, combining mutations, and optionally repeating |
US20050009004A1 (en) * | 2002-05-04 | 2005-01-13 | Jia Xu | Apparatus including ion transport detecting structures and methods of use |
US7244592B2 (en) * | 2002-03-07 | 2007-07-17 | Dyax Corp. | Ligand screening and discovery |
EP1682568A4 (en) * | 2003-10-15 | 2009-10-28 | Univ Texas | MULTIFUNCTIONAL BIOLOGICAL MATERIALS AS EQUIPMENT FOR ELECTRONIC, OPTICAL, MAGNETIC, SEMI-ENDING AND BIOTECHNOLOGICAL APPLICATIONS |
AU2005233502A1 (en) * | 2004-02-05 | 2005-10-27 | Massachusetts Institute Of Technology | Cell display libraries |
US20050272067A1 (en) * | 2004-03-10 | 2005-12-08 | Macina Roberto A | Compositions, splice variants and methods relating to cancer specific genes and proteins |
US7541012B2 (en) * | 2004-07-07 | 2009-06-02 | The Hong Kong University Of Science And Technology | Catalytic material and method of production thereof |
US7435168B2 (en) * | 2005-01-14 | 2008-10-14 | Archer-Daniels-Midland Company | Compositions and methods for manipulating carbon flux in cells |
-
2007
- 2007-10-11 JP JP2009532411A patent/JP5571955B2/ja active Active
- 2007-10-11 CA CA2666336A patent/CA2666336C/en active Active
- 2007-10-11 EP EP07870778.3A patent/EP2078198B1/en active Active
- 2007-10-11 US US11/974,097 patent/US8183030B2/en active Active
- 2007-10-11 AU AU2007322278A patent/AU2007322278B2/en active Active
- 2007-10-11 WO PCT/US2007/021729 patent/WO2008063310A2/en active Application Filing
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2002508977A (ja) * | 1998-01-20 | 2002-03-26 | ザ、ボード、オブ、トラスティーズ、オブ、ザ、ユニバシティー、オブ、イリノイ | タンパク質の酵母細胞表面ディスプレイおよびその使用 |
JP2001081663A (ja) * | 1999-09-13 | 2001-03-27 | Shinshu Ceramics:Kk | シルク製品及び光触媒処理体 |
JP2001279187A (ja) * | 2000-03-31 | 2001-10-10 | Tojo Yoko | 光触媒含有コーティング組成物及び光触媒含有塗膜劣化防止方法 |
JP2007513602A (ja) * | 2003-08-18 | 2007-05-31 | ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア | ポリペプチドディスプレイライブラリ並びにそれらの作製及び使用方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP5571955B2 (ja) | 2014-08-13 |
EP2078198A2 (en) | 2009-07-15 |
EP2078198A4 (en) | 2010-06-16 |
WO2008063310A2 (en) | 2008-05-29 |
CA2666336A1 (en) | 2008-05-29 |
CA2666336C (en) | 2014-01-28 |
AU2007322278B2 (en) | 2014-04-10 |
US8183030B2 (en) | 2012-05-22 |
US20080090282A1 (en) | 2008-04-17 |
WO2008063310A3 (en) | 2009-01-15 |
EP2078198B1 (en) | 2015-12-23 |
AU2007322278A1 (en) | 2008-05-29 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP5571955B2 (ja) | 酵母細胞触媒支持体における細胞表面ディスプレイの使用 | |
Popp et al. | Making and breaking peptide bonds: protein engineering using sortase | |
Kim et al. | Engineered bacterial outer membrane vesicles with enhanced functionality | |
Li et al. | Functional display of foreign protein on surface of Escherichia coli using N‐terminal domain of ice nucleation protein | |
US9394344B2 (en) | Compositions and methods for the display of proteins on the surface of bacteria and their derived vesicles and uses thereof | |
Lee et al. | Microbial cell-surface display | |
US11453883B2 (en) | Display systems for proteins of interest | |
US20110046011A1 (en) | Secretion of proteins with multiple disulfide bonds in bacteria and uses thereof | |
AU2006267968A1 (en) | Novel phage display technologies | |
Mei et al. | Application of modified yeast surface display technologies for non-Antibody protein engineering | |
AU2005302274A1 (en) | Ultra high throughput capture lift screening methods | |
Cruz-Teran et al. | Inefficient ribosomal skipping enables simultaneous secretion and display of proteins in Saccharomyces cerevisiae | |
Silvius et al. | A Novel “prebinding” strategy dramatically enhances sortase-mediated coupling of proteins to liposomes | |
US20160222372A1 (en) | Enzyme/Protein Packaged Bacterial Vesicles for Therapeutic Delivery | |
US20050147962A1 (en) | Display of dimeric proteins on phage | |
Jung et al. | Binding and enrichment of Escherichia coli spheroplasts expressing inner membrane tethered scFv antibodies on surface immobilized antigens | |
JPH11514201A (ja) | 安定な融合タンパク質の産生に使用する細菌および該細菌の検出方法 | |
WO2006006561A1 (ja) | 核酸構造体 | |
Parwin et al. | Bacterial cell surface display | |
WO2015127365A2 (en) | Calcium-independent sortase a mutants | |
CN112961872B (zh) | 益生菌嵌合传感器及其构建方法和应用 | |
Permana et al. | Strategies for making multimeric and polymeric bifunctional protein conjugates and their applications as bioanalytical Tools | |
Kim | Engineering dynamic protein binding pairs for protein purification and delivery | |
JP2005522188A (ja) | バクテリア内での遺伝子組み換え体蛋白質の分泌を促進するためのリーダー・ペプチド及びその単離方法 | |
RU2639246C1 (ru) | Применение домена белка S-слоя из Lactobacillus brevis в качестве компонента системы для экспонирования слитых белков на поверхности клеток молочнокислых бактерий |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20100928 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20110915 |
|
RD03 | Notification of appointment of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7423 Effective date: 20120308 |
|
A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20121001 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20121031 |
|
RD04 | Notification of resignation of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7424 Effective date: 20130124 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20130130 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20130206 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20130225 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20130828 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20131128 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20140619 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20140627 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 5571955 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |