JP2010503415A - SCAPのRNAi調節およびその治療的使用 - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、遺伝子SREPB切断活性化タンパク質(SCAP)の調節因子を用いての治療法に関する。具体的には、本発明は、望ましくないSCAP活性に関連する障害の治療法であって、SCAPの発現をダウンレギュレートする短鎖干渉RNAを投与することによる方法、およびそれにおいて有用な物質に関する。
脂質ホメオスタシスは、すべての動物およびヒトを含む、細胞の重要な機能を環境から分離することを脂質膜に頼るすべての生物にとって不可欠である。さらに、脂質は多くの生物によってエネルギー貯蔵庫として用いられる。例えば、リン脂質、トリグリセリド、脂肪酸、およびステロールを含む、莫大な数の異なる脂質物質が細胞において多様な不可欠の機能を行う。要するに、脂質ホメオスタシスは、本質的にすべての高等生物における相互依存プロセスの緊密に調節され、多岐にわたる、複雑な網である。
大文字=デスオキシリボヌクレオチド;小文字=リボヌクレオチド;下線:ヌクレオシドチオホスフェート
の群より選択され、細胞、例えば、プライマリハムスター肝細胞において、SCAP遺伝子の発現を少なくとも20%阻害する。薬学的組成物のさらに好ましい態様のために、dsRNAは前述の群より選択される。
(a)細胞に二本鎖リボ核酸(dsRNA)を導入する段階、ここでdsRNは互いに相補的な少なくとも2つの配列を含む。dsRNAは第一の配列を含むセンス鎖および第二の配列を含むアンチセンス鎖を含む。アンチセンス鎖はSCAP遺伝子をコードするmRNAの少なくとも一部に実質的に相補的な相補性の領域を含み、ここで相補性の領域は長さ30ヌクレオチド未満、一般には長さ19〜24ヌクレオチドであり、かつここでdsRNAは、例えば、プライマリハムスター肝細胞において、SCAP遺伝子を発現する細胞に接触すると、SCAP遺伝子の発現を少なくとも20%、または少なくとも25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、85%、90%もしくは95%阻害する;および
(b)段階(a)で生成した細胞を、SCAP遺伝子のmRNA転写物を分解するのに十分な時間維持し、それにより細胞におけるSCAP遺伝子の発現を阻害する段階。
の群より選択され、細胞、例えば、プライマリハムスター肝細胞において、SCAP遺伝子の発現を少なくとも20%阻害する。前述の方法のさらに好ましい態様のために、dsRNAは前述の群より選択される。
の群より選択され、細胞、例えば、プライマリハムスター肝細胞において、SCAP遺伝子の発現を少なくとも20%阻害する。薬学的組成物のさらに好ましい態様のために、dsRNAは前述の群より選択される。
本発明は、二本鎖リボ核酸(dsRNA)、ならびにdsRNAを用いて細胞または哺乳動物におけるSCAP遺伝子の発現を阻害するための組成物および方法を提供する。本発明は、dsRNAを用いてSCAP遺伝子の発現によって引き起こされる哺乳動物の病的状態および疾患を治療するための組成物および方法も提供する。dsRNAはRNA干渉(RNAi)として公知のプロセスによるmRNAの配列特異的分解を目的とする。
便宜上、本明細書、実施例、および添付の特許請求の範囲において用いられる特定の用語および語句の意味を以下に示す。本明細書の他の部分における用語の用法とこの項に提供するその定義との間に明らかな矛盾がある場合、この項の定義が優先される。
一つの態様において、本発明は、細胞または哺乳動物においてSCAP遺伝子、例えば、ヒトSCAP遺伝子の発現を阻害するための二本鎖リボ核酸(dsRNA)分子であって、SCAP遺伝子、例えば、ヒトSCAP遺伝子の発現において生成されるmRNAの少なくとも一部に相補的な相補性の領域を含むアンチセンス鎖を含み、ここで相補性の領域は長さ30ヌクレオチド未満、一般には長さ19〜24ヌクレオチドであり、かつ該SCAP遺伝子を発現する細胞に接触すると、該SCAP遺伝子の発現を少なくとも20%阻害するdsRNA分子を提供する。dsRNAは、ハイブリダイズして二重鎖構造を形成するのに十分相補的な2つのRNA鎖を含む。dsRNAの一方の鎖(アンチセンス鎖)は、SCAP遺伝子の発現中に生成されるmRNAの配列由来の標的配列に実質的に相補的、一般には完全に相補的な相補性の領域を含み、他方の鎖(センス鎖)は、適当な条件下で混合すると、2つの鎖がハイブリダイズして二重鎖構造を形成するような、アンチセンス鎖に相補的な領域を含む。一般には、二重鎖構造は長さ15から30塩基対の間、より一般には18から25塩基対の間、さらにより一般には19から24塩基対の間、および最も一般には19から21塩基対の間である。同様に、標的配列に対する相補性の領域は長さ15から30ヌクレオチドの間、より一般には18から25ヌクレオチドの間、さらにより一般には19から24ヌクレオチドの間、および最も一般には19から21ヌクレオチドの間である。本発明のdsRNAは1つまたは複数の一本鎖ヌクレオチド突出部をさらに含んでいてもよい。
本発明のdsRNAは、インビボでの細胞内で組換えウイルスベクターからも発現されうる。本発明の組換えウイルスベクターは、本発明のdsRNAをコードする配列およびdsRNA配列を発現するための任意の適当なプロモーターを含む。適当なプロモーターには、例えば、U6またはH1 RNA pol IIIプロモーター配列およびサイトメガロウイルスプロモーターが含まれる。他の適当なプロモーターの選択は当分野における技術の範囲内である。本発明の組換えウイルスベクターは、特定の組織または特定の細胞内環境におけるdsRNA発現のための誘導性または調節性プロモーターも含みうる。インビボで本発明のdsRNAを細胞に送達するための組換えウイルスベクターの使用を、以下により詳細に論じる。
一つの態様において、本発明は、本明細書に記載のdsRNA、および薬学的に許容される担体を含む薬学的組成物を提供する。dsRNAを含む薬学的組成物は、ヒトSCAP発現によって仲介される病的過程などのSCAP遺伝子の発現もしくは活性に関連する疾患もしくは障害、またはSCAP発現のダウンレギュレーションによって治療しうる疾患もしくは障害を治療するために有用である。そのような薬学的組成物を送達の様式に基づいて製剤する。一例は非経口送達による全身投与のために製剤されている組成物である。
本発明の組成物は、乳剤として調製し、製剤してもよい。乳剤は典型的には、1つの液体がもう1つの液体中に、通常は直径0.1μmを超える液滴の形で分散した不均質系である(Idson, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N. Y., volume 1, p. 199;Rosoff, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N. Y., Volume 1, p. 245;Block in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 2, p. 335;Higuchi et al., in Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, Pa., 1985, p. 301)。乳剤は、密接に混合し、互いに分散した、2つの不混和性液相を含む二相系であることが多い。一般に、乳剤は油中水(w/o)または水中油(o/w)いずれかの種でありうる。水相が大量の油相中に微粒化し、微小液滴として分散している場合、得られる組成物は油中水(w/o)乳剤と呼ぶ。または、油相が大量の水相中に微粒化し、微小液滴として分散している場合、得られる組成物は水中油(o/w)乳剤と呼ぶ。乳剤は分散相および水相中、油相中いずれかの溶液として、またはそれ自体が別の相として存在しうる活性薬物に加えて、追加の成分を含んでいてもよい。乳化剤、安定化剤、色素、および抗酸化剤などの薬学的賦形剤も、必要に応じて乳剤中に含まれていてもよい。薬学的乳剤は、例えば、油中水中油(o/w/o)および水中油中水(w/o/w)乳剤の場合などの3相以上からなる多相乳剤であってもよい。そのような複合製剤はしばしば、単純な二相乳剤では得られない特定の利点を提供する。o/w乳剤の個々の油滴が小さい水滴を封入する多相乳剤は、w/o/w乳剤を構成する。同様に、油性連続相中に安定化された水の小滴中に封入された油滴の系はo/w/o乳剤を提供する。
薬物の製剤のために試験され、用いられている、マイクロエマルジョン以外の多くの組織化された界面活性剤構造がある。これらには、単分子層、ミセル、二分子層、および小胞が含まれる。リポソームなどの小胞は、薬物送達の見地から、それらの特異性およびそれらが提供する作用の持続期間のゆえに、多大なる興味を引きつけている。本発明において用いられる「リポソーム」なる用語は、球状の1つまたは複数の二層に配列された両親媒性脂質からなる小胞を意味する。
一つの態様において、本発明は動物の皮膚への核酸、特にdsRNAの効率的送達を行うために、様々な浸透増強剤を用いる。ほとんどの薬物は溶液中にイオン化および非イオン化型の両方で存在する。しかし、通常は脂質溶解性または親油性薬物だけが容易に細胞膜を通過する。非親油性薬物でも、通過する膜を浸透増強剤で処理すれば、細胞膜を通過しうることが明らかにされている。細胞膜を通過しての非親油性薬物の拡散を補助するのに加えて、浸透増強剤は親油性薬物の透過性も増強する。
本発明の特定の組成物は、製剤中の担体化合物を組み込む。本明細書において用いられる「担体化合物」または「担体」は、不活性(すなわち、それ自体は生物活性を持たない)であるが、例えば、生物活性核酸を分解するか、またはその循環からの除去を促進することにより生物活性を有する核酸のバイオアベイラビリティを低減するインビボプロセスによって核酸と認識される、核酸またはその類縁体を意味しうる。核酸および担体化合物の、典型的には後者の物質を過剰に用いての同時投与は、肝臓、腎臓または他の循環外貯蔵所において回収される核酸の量を実質的に減少させることができ、これはおそらくは担体化合物と核酸との間の共通の受容体に対する競合による。例えば、肝組織における部分的ホスホロチオエートdsRNAの回収は、ポリイノシン酸、デキストラン硫酸、ポリシチジン酸または4-アセトアミド-4'イソチオシアノ-スチルベン-2,2'-ジスルホン酸と同時投与した場合に減少させることができる(Miyao et al., Antisense Res. Dev., 1995, 5, 115-121;Takakura et al., Antisense & Nucl. Acid Drug Dev., 1996, 6, 177-183。
担体化合物とは対照的に、「薬学的担体」または「賦形剤」は、1つまたは複数の核酸を動物に送達するための、薬学的に許容される溶媒、懸濁化剤または任意の他の薬理学的に不活性な媒体である。賦形剤は液体または固体であってもよく、計画した投与様式を念頭に置いて、所与の薬学的組成物の核酸および他の成分と混合したときに、所望の嵩、堅さなどを提供するよう選択する。典型的な薬学的担体には、結合剤(例えば、アルファ化トウモロコシデンプン、ポリビニルピロリドンまたはヒドロキシプロピルメチルセルロースなど);充填剤(例えば、乳糖および他の糖類、微結晶セルロース、ペクチン、ゼラチン、硫酸カルシウム、エチルセルロース、ポリアクリレートまたはリン酸水素カルシウムなど);滑沢剤(例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルク、シリカ、コロイド状二酸化ケイ素、ステアリン酸、ステアリン酸金属、硬化植物油、トウモロコシデンプン、ポリエチレングリコール、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウムなど);崩壊剤(例えば、デンプングリコール酸ナトリウムなど);および湿潤剤(例えば、ラウリル硫酸ナトリウムなど)が含まれるが、それらに限定されるわけではない。
本発明のもう一つの局面は、IRNA物質の気道への送達を提供する。気道は中咽頭および咽頭を含む上気道と、それに続く下気道を含み、下気道は気管とそれに続く気管支および細気管支への分岐部を含む。上気道および下気道は誘導気管支と呼ばれる。次いで、終末細気管支は呼吸細気管支へと分かれ、これは最終の呼吸領域である肺胞または深肺へと続く。深肺または肺胞は、iRNA物質の全身送達のために吸入した治療用エアロゾルの第一の標的である。
本発明の組成物は、薬学的組成物中に通常見いだされる他の補助成分を、それらの当技術分野において確立されている用法レベルでさらに含んでいてもよい。したがって、例えば、組成物は、例えば、止痒剤、収斂剤、局所麻酔薬もしくは抗炎症剤などの追加の適合性薬学的活性材料を含んでいてもよく、または色素、着香剤、保存剤、抗酸化剤、乳白剤、増粘剤および安定化剤などの、本発明の組成物の物理的に製剤する様々な剤形において有用な追加の材料を含んでいてもよい。しかし、そのような材料は、加えたときに、本発明の組成物の成分の生物活性を過度に妨害すべきではない。製剤は滅菌することができ、望まれる場合には、製剤の核酸と有害な相互作用をしない補助物質、例えば、滑沢剤、保存剤、安定化剤、湿潤剤、乳化剤、浸透圧に影響をおよぼすための塩、緩衝剤、着色剤、着香剤および/または芳香物質などと混合することもできる。
本発明は特に、dsRNAまたはそれから調製した薬学的組成物の、脂質代謝、脂質ホメオスタシス、および/または脂質分布の障害、例えば、非アルコール性肝疾患、脂肪肝、脂肪過剰血症、高脂血症、高リポタンパク血症、高コレステロール血症および/または高トリグリセリド血症、アテローム性動脈硬化症、膵炎、インスリン非依存性糖尿病(NIDDM)、冠動脈性心疾患、肥満、代謝症候群、末梢動脈疾患、ならびに脳血管疾患を治療するための使用に関する。SCAP発現に対する阻害効果により、本発明のdsRNAまたはそれから調製した薬学的組成物はそのような疾患または障害を有する患者の生活の質を高めることができる。
さらにもう一つの局面において、本発明は哺乳動物においてSCAP遺伝子の発現を阻害する方法を提供する。この方法は、本発明の組成物を哺乳動物に、標的SCAP遺伝子、例えば、ヒトSCAPの発現が抑制されるように投与する段階を含む。それらの高い特異性ゆえに、本発明のdsRNAは標的SCAP遺伝子のRNA(一次または処理済み)を特異的に標的とする。dsRNAを用いてこれらのSCAP遺伝子の発現を阻害するための組成物および方法を、本明細書の他所に記載のとおりに実施することができる。
siRNAの設計
siRNA設計を、ハムスター、マウス、および/またはヒトSCAPを標的とするsiRNAを特定するために実施した。まず、ハツカネズミ(NM_001001144.1)およびクロハラハムスター(U67060;Hua et al., Cell. 1996, 87:415)SCAPのmRNA配列をコンピューター分析で調べて、これら2つの種の間で交差反応性のRNAi物質を生じる19ヌクレオチドの相同配列を特定した。
1大文字=デスオキシリボヌクレオチド;小文字=リボヌクレオチド:下線:ヌクレオシドチオホスフェート;cm=2'-O-メチル-シチジン;um=2'-O-メチル-ウリジン
試薬の供給元
試薬の供給元が本明細書において具体的に示されていない場合、そのような試薬は分子生物学用の試薬の任意の供給者から、分子生物学における適用のために標準的な品質/純度で入手しうる。
一本鎖RNAを、Expedite 8909合成機(Applied Biosystems, Applera Deutschland GmbH, Darmstadt, Germany)および固体支持体として多孔性ガラス(CPG、500Å、Proligo Biochemie GmbH, Hamburg, Germany)を用い、1μmoleのスケールでの固相合成により生成した。RNAおよび2'-O-メチルヌクレオチドを含むRNAは、それぞれ対応するホスホラミダイトおよび2'-O-メチルホスホラミダイト(Proligo Biochemie GmbH, Hamburg, Germany)を用いての固相合成により生成した。これらの構築ブロックを、Current protocols in nucleic acid chemistry, Beaucage, S.L. et al. (Edrs.), John Wiley & Sons, Inc., New York, NY, USAに記載のものなどの、標準的ヌクレオシドホスホラミダイト化学を用い、オリゴリボヌクレオチド鎖の配列内の選択した部位で組み込んだ。ホスホロチオエート連結を、ヨウ素酸化剤溶液をアセトニトリル中のBeaucage試薬(Chruachem Ltd, Glasgow, UK)の溶液(1%)で置き換えることにより導入した。さらなる補助試薬はMallinckrodt Baker(Griesheim, Germany)から入手した。
水(50mL)中のエチルグリシネート塩酸塩(32.19g、0.23mole)の溶液を撹拌し、氷冷しながら、これに4.7Mの水酸化ナトリウム水溶液(50mL)を加えた。次いで、アクリル酸エチル(23.1g、0.23mole)を加え、混合物を室温でTLCにより反応完了が確認されるまで撹拌した。19時間後、溶液をジクロロメタン(3×100mL)で分配した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過して蒸発させた。残渣を蒸留して、AAを得た(28.8g、61%)。
Fmoc-6-アミノ-ヘキサン酸(9.12g、25.83mmol)をジクロロメタン(50mL)に溶解し、氷で冷却した。ジイソプロピルカルボジイミド(3.25g、3.99mL、25.83mmol)を溶液に0℃で加えた。次いで、アザブタン-1,4-ジカルボン酸ジエチル(5g、24.6mmol)およびジメチルアミノピリジン(0.305g、2.5mmol)を加えた。溶液を室温に戻し、さらに6時間撹拌した。反応の完了をTLCで確認した。反応混合物を減圧下で濃縮し、酢酸エチルを加えてジイソプロピル尿素を沈澱させた。懸濁液をろ過した。ろ液を5%塩酸水溶液、5%炭酸水素ナトリウムおよび水で洗浄した。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮して、粗生成物を得、これをカラムクロマトグラフィ(50%EtOAC/ヘキサン)で精製して、11.87g(88%)のABを得た。
3-{エトキシカルボニルメチル-[6-(9H-フルオレン-9-イルメトキシカルボニルアミノ)-ヘキサノイル]-アミノ}-プロピオン酸エチルエステルAB(11.5g、21.3mmol)をジメチルホルムアミド中の20%ピペリジンに0℃で溶解した。溶液を1時間撹拌し続けた。反応混合物を減圧下で濃縮し、残渣に水を加え、生成物を酢酸エチルで抽出した。粗生成物をその塩酸塩への変換により精製した。
3-[(6-アミノ-ヘキサノイル)-エトキシカルボニルメチル-アミノ]-プロピオン酸エチルエステルAC(4.7g、14.8mmol)の塩酸塩をジクロロメタンに溶解した。懸濁液を氷上で0℃に冷却した。懸濁液にジイソプロピルエチルアミン(3.87g、5.2mL、30mmol)を加えた。得られた溶液にクロロギ酸コレステリル(6.675g、14.8mmol)を加えた。反応混合物を終夜撹拌した。反応混合物をジクロロメタンで希釈し、10%塩酸で洗浄した。生成物をフラッシュクロマトグラフィで精製した(10.3g、92%)。
カリウムt-ブトキシド(1.1g、9.8mmol)を無水トルエン30mL中でスラリー化した。混合物を氷上で0℃に冷却し、ジエステルAD 5g(6.6mmol)を撹拌しながら20分以内にゆっくり加えた。温度を添加中は5℃未満に維持した。撹拌を0℃で30分間続け、氷酢酸1mLを加え、その直後に水40mL中のNaH2PO4・H2O 4gを加えた。得られた混合物をジクロロメタン各100mLで2回抽出し、合わせた有機抽出物をリン酸緩衝液各10mLで2回洗浄し、乾燥し、蒸発乾固させた。残渣をトルエン60mLに溶解し、0℃に冷却し、冷却したpH9.5の炭酸緩衝液50mLで3回抽出した。水性抽出物をリン酸でpH3に調節し、クロロホルム40mLで5回抽出し、これを合わせて乾燥し、蒸発乾固させた。残渣をカラムクロマトグラフィで25%酢酸エチル/ヘキサンを用いて精製し、b-ケトエステル1.9g(39%)を得た。
テトラヒドロフラン(10mL)中のb-ケトエステルAE(1.5g、2.2mmol)および水素化ホウ素ナトリウム(0.226g、6mmol)の混合物を還流し、これにメタノール(2mL)を1時間かけて滴下した。撹拌を還流温度で1時間続けた。室温まで冷却した後、1N HCl(12.5mL)を加え、混合物を酢酸エチル(3×40mL)で抽出した。合わせた酢酸エチル層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で濃縮して生成物を得、これをカラムクロマトグラフィ(10%MeOH/CHCl3)で精製した(89%)。
ジオールAF(1.25g、1.994mmol)をピリジン(2×5mL)と共に減圧下で蒸発させて乾燥した。無水ピリジン(10mL)および塩化4,4'-ジメトキシトリチル(0.724g、2.13mmol)を撹拌しながら加えた。反応を室温で終夜実施した。メタノールを加えることにより反応を停止した。反応混合物を減圧下で濃縮し、残渣にジクロロメタン(50mL)を加えた。有機層を1M炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過して濃縮した。残留ピリジンをトルエンと共に蒸発させることにより除去した。粗生成物をカラムクロマトグラフィ(2%MeOH/クロロホルム、5%MeOH/CHCl3中のRf=0.5)で精製した(1.75g、95%)。
化合物AG(1.0g、1.05mmol)を無水コハク酸(0.150g、1.5mmol)およびDMAP(0.073g、0.6mmol)と混合し、減圧下、40℃で終夜乾燥した。混合物を無水ジクロロメタン(3mL)に溶解し、トリエチルアミン(0.318g、0.440mL、3.15mmol)を加え、溶液をアルゴン雰囲気下、室温で16時間撹拌した。次いで、ジクロロメタン(40mL)で希釈し、氷冷クエン酸水溶液(5重量%、30mL)および水(2×20mL)で洗浄した。有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮乾固した。残渣をそのままで次の段階に用いた。
コハク酸エステルAH(0.254g、0.242mmol)をジクロロメタン/アセトニトリル(3:2、3mL)の混合物に溶解した。この溶液にアセトニトリル(1.25mL)中のDMAP(0.0296g、0.242mmol)、アセトニトリル/ジクロロエタン(3:1、1.25mL)中の2,2'-ジチオ-ビス(5-ニトロピリジン)(0.075g、0.242mmol)を逐次加えた。得られた溶液にアセトニトリル(0.6ml)中のトリフェニルホスフィン(0.064g、0.242mmol)を加えた。反応混合物は明橙色に変わった。溶液をリストアクション撹拌機を用いて短時間(5分間)撹拌した。長鎖アルキルアミン-CPG(LCAA-CPG)(1.5g、61mM)を加えた。懸濁液を2時間撹拌した。CPGをガラスフィルターを通してろ過し、アセトニトリル、ジクロロメタンおよびエーテルで逐次洗浄した。未反応のアミノ基を無水酢酸/ピリジンを用いてマスクした。達成したCPGのローディングをUV測定により調べた(37mM/g)。
a大文字は2'-デオキシリボヌクレオチド(DNA)を意味し、小文字はリボヌクレオチド(RNA)を意味する。
本発明のもう一つの局面において、ヒトSCAP遺伝子発現活性を調節するヒトSCAP特異的dsRNA分子がDNAまたはRNAベクターに挿入した転写ユニットから発現される(例えば、Couture, A, et al., TIG. (1996), 12:5-10;Skillern, A., et al.、国際PCT公報WO 00/22113号、Conrad、国際PCT公報WO 00/22114号、およびConrad、米国特許第6,054,299号参照)。これらの導入遺伝子は直鎖作成物、環状プラスミド、またはウイルスベクターとして導入することができ、これらは宿主ゲノムに統合される導入遺伝子として組み込まれ、遺伝することができる。導入遺伝子は染色体外プラスミドとして遺伝することが可能となるよう作成することもできる(Gassmann, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1995) 92:1292)。
米国特許第4,868,116号;米国特許第4,980,286号;PCT出願WO 89/07136号;PCT出願WO 89/02468号;PCT出願WO 89/05345号;およびPCT出願WO 92/07573号参照)。細胞のゲノムに挿入された遺伝子を形質導入および発現可能な組換えレトロウイルスベクターを、組換えレトロウイルスゲノムをPA317およびPsi-CRIPなどの適当なパッケージング細胞株に形質移入することにより生成することができる(Comette et al., 1991, Human Gene Therapy 2:5-10;Cone et al., 1984, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81:6349)。組換えアデノウイルスベクターは、感受性宿主(例えば、ハムスター、イヌ、およびチンパンジー)の多様な細胞および組織に感染させるために用いることができ(Hsu et al., 1992, J. Infectious Disease, 166:769)、感染のために有糸分裂的に活性な細胞を必要としないという利点も有する。
プライマリハムスター肝細胞における単一用量スクリーン
肝細胞をハムスターの肝臓から単離し、60mmの皿に1.2×106細胞/皿の密度で播種した。2時間の接着期間後、細胞にoligofectamineを用いて200nMの指定のsiRNAを形質移入した。形質移入の24時間後、全RNAを細胞からRNA STAT-60溶液(Tel-Test Inc., Friendswood, Texas, USA)を用いて単離した。各皿10μgのRNAをDNアーゼI(DNAを含まない;Ambion Inc., Austin, Texas, USA)で処理した。第一鎖cDNAを2μgのDNアーゼI処理した全RNAおよびランダム6量体プライマーからABI cDNA合成キット(N808-0234;PE Biosystems, Foster City, California, USA)を用いて合成した。各遺伝子のために以下の特異的プライマーをPrimer Expressソフトウェア(PE Biosystems)を用いて設計した:β-アクチン、5'プライマー、
、3'プライマー、
;SCAP、5'プライマー、
、3'プライマー、
β-アクチンを不変の対照として用いた。リアルタイムRT-PCR反応を、20ngの逆転写全RNA、167nMの順方向および逆方向プライマー、ならびに10μlの2×SYBR Green PCR Master Mix(4312704;PE Biosystems)を含む最終量20μlに設定した。PCR反応を384穴プレートで、ABI PRISM 7900HT Sequence Detection System(PE Biosystems)を用いて実施した。すべての反応を三重複で行った。すべてのmRNAの相対量を、比較Ct法を用いて算出した。ハムスターβ-アクチンmRNAを不変の対照として用いた。値は、非形質移入細胞に対するmRNAの量を表し、非形質移入細胞のmRNA量を1と定義する(n=1プレート)。
インビボRNAi実験のために、リポソームにより製剤したAL-DP-6062を6匹のハムスターに頸静脈から注射した(4mg/kg)。注射から3日後、動物を屠殺し、確立された方法を用いて全RNAを肝臓から調製した。
リアルタイムRT-PCR反応を前述のとおりに設定した。ハムスターβ-アクチンを不変の対照として用いた。値は、食塩水を注射したハムスターの肝臓におけるmRNAの量を1と定義し、これに対するmRNAの量を表す。
膜および核タンパク質を凍結した肝臓から以前に記載されてるとおりに調製した(Engelking et.al., J. Clin. Invest. 113: 1168-1175, 2004)。等しい量のタンパク質を8%ゲルのSDS-PAGEにかけ、Hybond ECL膜(Amersham)に転写した。免疫ブロット分析を、ポリクローナル抗ハムスターSREBP-1およびSREBP-2抗体を用いて実施した(Shimomura et al., PNAS, 94: 12354-12359, 1997)。抗体に結合したバンドをSuperSignal CL-HRP基質システム(Pierce Biotechnology Inc., Rockford, IL)を用いて検出した。抗-CREB(cAMP応答配列結合タンパク質)および抗-RAP(受容体関連タンパク質)をそれぞれ肝臓の核および膜タンパク質のローディング対照として用いた。シグナルをResearch Services Branch, National Institute of Mental Health(Bethesda, Maryland)から入手可能なImage Jプログラムを用いて定量し、値は食塩水を注射したハムスターの肝臓におけるタンパク質の量を1と定義し、これに対するタンパク質の量を表す。
Claims (21)
- 細胞においてSCAP遺伝子の発現を阻害するための二本鎖リボ核酸(dsRNA)であって、dsRNAが互いに相補的な少なくとも2つの配列を含み、センス鎖は第一の配列を含み、アンチセンス鎖は、SCAP遺伝子をコードするmRNAの少なくとも一部に実質的に相補的な相補性の領域を含む第二の配列を含み、該相補性の領域は長さ30ヌクレオチド未満であり、かつ該SCAPを発現する細胞に接触すると、dsRNAが該SCAP遺伝子の発現を少なくとも20%阻害する、dsRNA。
- 前記SCAP遺伝子がヒトSCAP遺伝子であり、好ましくはホモサピエンス(Homo sapiens)SCAP遺伝子である、請求項1記載のdsRNA。
- SCAP遺伝子の発現の少なくとも20%の前記阻害がプライマリハムスター肝細胞において行われる、請求項1および2記載のdsRNA。
- 前記第一の配列および前記第二の配列がそれぞれ配列番号:1〜48からなる群の偶数番号および奇数番号から選択される、前記請求項のいずれか一項記載のdsRNA。
- 前記dsRNAが少なくとも1つの修飾ヌクレオチドを含む、前記請求項のいずれか一項記載のdsRNA。
- 前記修飾ヌクレオチドが以下の群より選択される、前記請求項のいずれか一項記載のdsRNA:2'-O-メチル修飾ヌクレオチド、5'-ホスホロチオエート基を含むヌクレオチド、およびコレステリル誘導体またはドデカン酸ビスデシルアミド基(dodecanoic acid bisdecylamide group)に連結された末端ヌクレオチド。
- 前記修飾ヌクレオチドが以下の群より選択される、前記請求項のいずれか一項記載のdsRNA:2'-デオキシ-2'-フルオロ修飾ヌクレオチド、2'-デオキシ-修飾ヌクレオチド、ロックされたヌクレオチド(locked nucreotide)、脱塩基ヌクレオチド、2'-アミノ-修飾ヌクレオチド、2'-アルキル-修飾ヌクレオチド、モルホリノヌクレオチド、ホスホロアミデート(phosphoramidate)、および非天然塩基を含むヌクレオチド。
- 前記第一の配列および前記第二の配列がそれぞれ配列番号:1〜48からなる群の偶数番号および奇数番号から選択される、前記請求項のいずれか一項記載のdsRNA。
- 前記請求項のいずれか一項記載のdsRNAを含む細胞。
- 生物においてSCAP遺伝子の発現を阻害するための、dsRNAおよび薬学的に許容される担体を含む薬学的組成物であって、dsRNAは互いに相補的な少なくとも2つの配列を含み、センス鎖は第一の配列を含み、アンチセンス鎖はSCAPをコードするmRNAの少なくとも一部に実質的に相補的な相補性の領域を含む第二の配列を含み、該相補性の領域は長さ30ヌクレオチド未満であり、該dsRNAは該ヒトSCAPを発現する細胞に接触すると、該ホモサピエンスSCAP遺伝子の発現を少なくとも20%阻害する、組成物。
- 前記SCAP遺伝子がヒトSCAP遺伝子であり、好ましくはホモサピエンスSCAP遺伝子である、請求項11記載の薬学的組成物。
- SCAP遺伝子の発現の少なくとも20%の前記阻害がプライマリハムスター肝細胞において行われる、請求項11または12記載の薬学的組成物。
- 前記第一の配列および前記第二の配列がそれぞれ配列番号:1〜48からなる群の偶数番号および奇数番号から選択される、請求項11から13のいずれか一項記載の薬学的組成物。
- 以下の段階を含む、細胞においてSCAP遺伝子の発現を阻害する方法:
(a)細胞に二本鎖リボ核酸(dsRNA)を導入する段階であって、dsRNAは互いに相補的な少なくとも2つの配列を含み、センス鎖は第一の配列を含み、アンチセンス鎖はSCAPをコードするmRNAの少なくとも一部に実質的に相補的な相補性の領域を含む第二の配列を含み、該相補性の領域は長さ30ヌクレオチド未満であり、該dsRNAは該SCAP遺伝子を発現する細胞に接触すると、該SCAP遺伝子の発現を少なくとも20%阻害する、段階;および
(b)段階(a)で生成した細胞を、SCAP遺伝子のmRNA転写物を分解するのに十分な時間維持し、それにより細胞におけるSCAP遺伝子の発現を阻害する段階。 - 遺伝子がヒトSCAP遺伝子であり、好ましくはホモサピエンスSCAP遺伝子である、請求項16記載の方法。
- SCAP発現によって仲介される病的過程を治療、予防または管理する方法であって、そのような治療、予防または管理を必要としている患者に、治療的または予防的有効量のdsRNAを投与する段階を含み、dsRNAは互いに相補的な少なくとも2つの配列を含み、センス鎖は第一の配列を含み、アンチセンス鎖はSCAPをコードするmRNAの少なくとも一部に実質的に相補的な相補性の領域を含む第二の配列を含み、該相補性の領域は長さ30ヌクレオチド未満であり、該dsRNAは該SCAP遺伝子を発現する細胞に接触すると、該SCAP遺伝子の発現を少なくとも20%阻害する、方法。
- 患者が非アルコール性肝疾患、脂肪肝、脂肪過剰血症、高脂血症、高リポタンパク血症、高コレステロール血症および/または高トリグリセリド血症、アテローム性動脈硬化症、膵炎、インスリン非依存性糖尿病(NIDDM)、冠動脈性心疾患、肥満、代謝症候群、末梢動脈疾患、ならびに脳血管疾患を患っている、請求項18記載の方法。
- 細胞においてSCAP遺伝子の発現を阻害するための、dsRNAの少なくとも1つの鎖をコードするヌクレオチド配列に機能的に連結された調節配列を含むベクターであって、該dsRNAの鎖の1つはSCAPをコードするmRNAの少なくとも一部に実質的に相補的であり、該dsRNAは長さ30塩基対未満であり、該dsRNAは該SCAP遺伝子を発現する細胞に接触すると、該SCAP遺伝子の発現を少なくとも20%阻害する、ベクター。
- 請求項20記載のベクターを含む細胞。
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Cited By (2)
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JP2016515608A (ja) * | 2013-04-22 | 2016-05-30 | カディラ・ヘルスケア・リミテッド | 非アルコール性脂肪性肝疾患(nafld)のための新規組成物 |
JP2018536689A (ja) * | 2015-12-10 | 2018-12-13 | アルナイラム ファーマシューティカルズ, インコーポレイテッドAlnylam Pharmaceuticals, Inc. | ステロール調節エレメント結合タンパク質(SREBP)シャペロン(SCAP)iRNA組成物およびその使用方法 |
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US11504390B2 (en) | 2019-03-20 | 2022-11-22 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Treatment of increased lipid levels with sterol regulatory element binding transcription factor 1 (SREBF1) inhibitors |
AU2020284254A1 (en) * | 2019-05-30 | 2021-12-23 | Amgen Inc. | RNAi constructs for inhibiting SCAP expression and methods of use thereof |
US20230203533A1 (en) * | 2020-04-28 | 2023-06-29 | University Of Florida Research Foundation, Incorporated | Machine guided directed evolution of raav combinatorial capsid libraries |
WO2024104416A1 (zh) * | 2022-11-17 | 2024-05-23 | 北京福元医药股份有限公司 | 抑制SCAP基因表达的siRNA、其缀合物和药物组合物及用途 |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2005014782A2 (en) * | 2003-06-13 | 2005-02-17 | Alnylam Europe Ag., | Double-stranded ribonucleic acid with increased effectiveness in an organism |
Family Cites Families (18)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5801154A (en) * | 1993-10-18 | 1998-09-01 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense oligonucleotide modulation of multidrug resistance-associated protein |
US6054299A (en) * | 1994-04-29 | 2000-04-25 | Conrad; Charles A. | Stem-loop cloning vector and method |
US6054229A (en) | 1996-07-19 | 2000-04-25 | Ztek Corporation | System for electric generation, heating, cooling, and ventilation |
US6506559B1 (en) | 1997-12-23 | 2003-01-14 | Carnegie Institute Of Washington | Genetic inhibition by double-stranded RNA |
EP2267139B1 (en) | 1998-04-08 | 2017-03-22 | Commonwealth Scientific and Industrial Research Organisation | Methods and means for obtaining modified phenotypes |
AR020078A1 (es) | 1998-05-26 | 2002-04-10 | Syngenta Participations Ag | Metodo para alterar la expresion de un gen objetivo en una celula de planta |
US6602710B1 (en) | 1998-08-27 | 2003-08-05 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Screening method for SREBP pathway-specific inhibitors |
AU6298899A (en) | 1998-10-09 | 2000-05-01 | Ingene, Inc. | Production of ssdna (in vivo) |
IL142490A0 (en) | 1998-10-09 | 2002-03-10 | Ingene Inc | ENZYMATIC SYNTHESIS OF ssDNA |
DE19956568A1 (de) | 1999-01-30 | 2000-08-17 | Roland Kreutzer | Verfahren und Medikament zur Hemmung der Expression eines vorgegebenen Gens |
GB9916757D0 (en) * | 1999-07-17 | 1999-09-15 | Glaxo Group Ltd | Method |
DE10100586C1 (de) | 2001-01-09 | 2002-04-11 | Ribopharma Ag | Verfahren zur Hemmung der Expression eines Ziegens |
KR20010097781A (ko) | 2000-04-26 | 2001-11-08 | 김순택 | 1-[2-(트랜스-4-알킬 싸이클로헥실) 에틸]-4-아릴싸이클로헥스-1-엔 및 이를 포함하는 액정 조성물 |
JP4583671B2 (ja) * | 2000-07-19 | 2010-11-17 | 日東電工株式会社 | スパイラル型膜エレメントおよびスパイラル型膜モジュールの運転方法および洗浄方法 |
EP1386004A4 (en) * | 2001-04-05 | 2005-02-16 | Ribozyme Pharm Inc | MODULATION OF GENE EXPRESSION ASSOCIATED WITH INFLAMMATORY PROLIFERATION AND GROWTH OF NEURITIES BY METHODS INVOLVING NUCLEIC ACID |
US20030170891A1 (en) | 2001-06-06 | 2003-09-11 | Mcswiggen James A. | RNA interference mediated inhibition of epidermal growth factor receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
AU2002312373A1 (en) * | 2001-06-07 | 2002-12-23 | Incyte Genomics, Inc. | Structural and cytoskeleton-associated proteins |
PT2284266E (pt) * | 2002-11-14 | 2013-12-17 | Thermo Fisher Scient Biosciences Inc | Siarn contra tp53 |
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Patent Citations (1)
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WO2005014782A2 (en) * | 2003-06-13 | 2005-02-17 | Alnylam Europe Ag., | Double-stranded ribonucleic acid with increased effectiveness in an organism |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
JPN6012030001; Circ. Res. Vol.95, 2004, p.471-478 * |
JPN6012030003; Proc. Natl. Acad. Sci. USA Vol.96, 1999, p.11235-11240 * |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2016515608A (ja) * | 2013-04-22 | 2016-05-30 | カディラ・ヘルスケア・リミテッド | 非アルコール性脂肪性肝疾患(nafld)のための新規組成物 |
JP2018536689A (ja) * | 2015-12-10 | 2018-12-13 | アルナイラム ファーマシューティカルズ, インコーポレイテッドAlnylam Pharmaceuticals, Inc. | ステロール調節エレメント結合タンパク質(SREBP)シャペロン(SCAP)iRNA組成物およびその使用方法 |
JP2022050419A (ja) * | 2015-12-10 | 2022-03-30 | アルナイラム ファーマシューティカルズ, インコーポレイテッド | ステロール調節エレメント結合タンパク質(SREBP)シャペロン(SCAP)iRNA組成物およびその使用方法 |
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