JP2009540278A - 前立腺癌腫の検出のためのモノクローナル抗アネキシンa3抗体 - Google Patents
前立腺癌腫の検出のためのモノクローナル抗アネキシンa3抗体 Download PDFInfo
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Abstract
Description
本発明は、アネキシンA3、特に細胞外アネキシンA3を、高度に特異的な抗体、特にモノクローナル抗体を用いて決定することを含む、前立腺癌腫の診断のための方法に関する。この方法は、更に、このような抗体を含有する試験剤にも関する。
(i) VRDYPDFSPSVD(配列番号1)、
(ii) MLISILTERSNA(配列番号2)、
(iii) GDFRKALLTLADGRRDESLKVDEHLAKQ(配列番号3)、
(iv) KLTFDEYRNISQKDIVDSIKGELSG(配列番号4)、
(v) IMVSRSEIDLLDIRTEF(配列番号5)、
(vi) YSAIKSDTSGDYEITLL(配列番号6)
又は、少なくとも6アミノ酸の長さを有するこの部分的な連続配列
から選択される配列を含む、アネキシンA3上のエピトープに対して指向されているモノクローナル抗体である。
実施例1
ANXA 3に対して指向した特異的モノクローナル抗体の産生
ヒトのアネキシンA3、vANA−5(AA 107〜243)、vANA−7(AA1〜106)、vANA−1(AA1〜324)、vANA−2(AA1〜159)、vANA−3(AA35〜159)、vANA−4(AA191〜324)及びvANA−6(AA107〜190)の組み換え溶解性断片をクローニングし、かつ、大腸菌中で発現させ、引き続き、クロマトグラフィにより精製した。アネキシンA3及びこの組み換え断片の構造の概要は、図1中に示されている。
圧出物尿試料及び組織区画における抗体特異性の決定
実施例1のモノクローナル抗体を、上述したELISAフォーマットにおいて使用し、癌患者からの圧出物尿からの上清中のANXA3を検出した。
圧出物尿試料中のANXA3の決定のための臨床試験
多施設盲検臨床試験を、体液、特に圧出物尿中のANXA3の非侵入的な検出を基礎とする前立腺癌診断の感受性及び特異性を決定するために実施した。
A:組織学的に確認された前立腺癌腫を有する患者(PCA群):n=約200名
B:組織学的試験により決定して、前立腺癌腫を有しない患者(対照群):n=約300名
3.2.1 血清/血漿
血清PSA値の日常的な決定のための血清管を、静脈的に採取した。更に、1〜2mlの血清を、付加的に提供(asserve)し、深冷凍結して貯蔵した。この血液試料を更に、PSAについて分析した。血液試料の採取を、パンチバイオプシー又は直腸触診の実施前に実施した。
20秒間の触診及び前立腺のマッサージ後に、患者に膀胱を空にするように要求した。この得られる圧出物尿を、刊行された手法(I. Rehman, A. R. Azzouzi, J. W. F. Catto, S. Allen, S. S. Cross, K. Feeley, M. Meuth, & F. C. Hamdy, Proteomic analysis of voided urine after prostatic massage from patients with prostate cancer: A pilot study, Urology 64 (6), 2004, 1238-1243; C. Goessl, M. Mueller, R. Heicappell, H. Krause, B. Straub, M. Schrader & K. Miller, DNA-based detection of prostate cancer in urine after prostatic massage. Urology 58 (3), 2001 , 335-338)に応じて処理し、この生成物を−80℃で貯蔵した。
約200名のPSA陽性患者において、圧出物尿の試料中の沈殿及び上清中のANXA3の決定では、約90%の感受性を、そして、約80%の特異性を示した。
癌細胞に対するモノクローナル抗体の結合
このモノクローナル抗ANXA3抗体は、診断(病理学的組織学)及び治療的適用において表面マーカーとして適している。
エピトープマッピング
アネキシンA3(ANXA3)の全体的の抗原性領域をカバーする、重複するペプチド配列の使用後に、我々は、6個のみのエピトープが、高い特異性結合を担うことを結論づけ、これは図13及び14中に、高度に特異的なポリクローナル抗体の結合を分析することにより示されるとおりである(図1参照)。
Claims (43)
- アネキシンA3の存在及び/又は量について、他のアネキシンに対して低い交差反応性を有するアネキシンA3に特異的な抗体を用いて試料を分析する、癌の診断方法。
- 癌が、尿生殖器及び/又は消化管路の癌である、請求項1記載の方法。
- 癌が、上皮癌である、請求項1又は2記載の方法。
- 癌が、前立腺癌である、請求項1から3までのいずれか1項記載の方法。
- 抗体が、モノクローナル抗体である、請求項1から4までのいずれか1項記載の方法。
- 抗体が、アネキシンA3のN末端に、特に、ヒトのアネキシンA3のアミノ酸1〜16の領域内のエピトープに対して指向している、請求項1から5までのいずれか1項記載の方法。
- 抗体が、ハイブリドーマ細胞系列により産生された抗体tgc 5 Proll6G7 (DSM ACC2788), tgc 6 Prolll1G11(DSM ACC2779), tgc 7 ProVII5C5 (DSM ACC2780), tgc 8 Prolll1E1(DSM ACC2781), tgc 13 Prol/5G9, tgc12 Prolll/4B11 , tgc 14 ProVIII/3D7又はアネキシンA3上の同じエピトープに結合する抗体から選択されている、請求項1から6までのいずれか1項記載の方法。
- 抗体が、
(i) VRDYPDFSPSVD(配列番号1)、
(ii) MLISILTERSNA(配列番号2)、
(iii) GDFRKALLTLADGRRDESLKVDEHLAKQ(配列番号3)、
(iv) KLTFDEYRNISQKDIVDSIKGELSG(配列番号4)、
(v) IMVSRSEIDLLDIRTEF(配列番号5)、
(vi) YSAIKSDTSGDYEITLL(配列番号6)
又は、少なくとも6アミノ酸の長さを有するこの部分的な連続配列
から選択される配列を含む、アネキシンA3上のエピトープに対して指向されている、請求項1から7までのいずれか1項記載の方法。 - 抗体が、ラベリング基を有する、請求項1から8までのいずれか1項記載の方法。
- 非侵入性の手法である、請求項1から9までのいずれか1項記載の方法。
- 試料が、尿の試料、特に圧出物尿試料である、請求項10記載の方法。
- 試料が、糞試料である、請求項10記載の方法。
- 組織化学的手法である、請求項1から9までのいずれか1項記載の方法。
- 試料が、組織試料、特にバイオプシーである、請求項13記載の方法。
- 細胞外アネキシンA3の存在及び/又は量及び/又は細胞内アネキシンA3の存在及び/又は量を決定する、請求項1から14までのいずれか1項記載の方法。
- 少なくとも1つの更なるマーカーを決定する、請求項1から15までのいずれか1項記載の方法。
- 更なるマーカーが、前立腺特異的な抗原(PSA)及び/又は前立腺特異的な膜抗原(PSMA)である、請求項16記載の方法。
- 診断が、この疾病段階の決定を含む、請求項1から17までのいずれか1項記載の方法。
- 前癌段階及び癌段階の間の少なくとも1つの区別化を実施する、請求項18記載の方法。
- 他のアネキシンに対して低い交差反応性を有する、アネキシンA3に対して特異的な少なくとも1つの抗体を含有する、前立腺癌の診断のための試験剤。
- 抗体が、モノクローナル抗体である、請求項20記載の剤。
- 抗体が、アネキシンA3のN末端に、特に、ヒトのアネキシンA3のアミノ酸1〜16の領域内のエピトープに対して指向している、請求項20又は21記載の剤。
- 抗体が、ハイブリドーマ細胞系列により産生された抗体tgc 5 Proll6G7 (DSM ACC2788), tgc 6 Prolll1 G11(DSM ACC2779), tgc 7 ProVII5C5 (DSM ACC2780), tgc 8 Prolll1E1(DSM ACC2781), tgc 13 Prol/5G9, tgc12 Prolll/4B11 , tgc 14 ProVIII/3D7又はアネキシンA3上の同じエピトープに結合する抗体から選択されている、請求項20から22までのいずれか1項記載の剤。
- 抗体が、
(i) VRDYPDFSPSVD(配列番号1)、
(ii) MLISILTERSNA(配列番号2)、
(iii) GDFRKALLTLADGRRDESLKVDEHLAKQ(配列番号3)、
(iv) KLTFDEYRNISQKDIVDSIKGELSG(配列番号4)、
(v) IMVSRSEIDLLDIRTEF(配列番号5)、
(vi) YSAIKSDTSGDYEITLL(配列番号6)
又は、少なくとも6アミノ酸の長さを有するこの部分的な連続配列
から選択される配列を含む、アネキシンA3上のエピトープに対して指向されている、請求項20から23までのいずれか1項記載の剤。 - 抗体が、ラベリング基を有する、請求項20から24までのいずれか1項記載の剤。
- 癌の治療のための医薬品の製造のための、他のアネキシンに対して低い交差反応性を有するアネキシンA3に対して特異的な抗体の使用。
- 癌が、尿生殖器及び/又は消化管路の癌である、請求項26記載の使用。
- 抗体が、キメラの又はヒト化した又はヒトのモノクローナル抗体である、請求項26又は27記載の使用。
- 抗体が、アネキシンA3のN末端に、特に、ヒトのアネキシンA3のアミノ酸1〜16の領域内のエピトープに対して指向している、請求項26から28までのいずれか1項記載の使用。
- 抗体が、ハイブリドーマ細胞系列により産生された抗体tgc 5 Proll6G7 (DSM ACC2788), tgc 6 Prolll1 G11(DSM ACC2779), tgc 7 ProVII5C5 (DSM ACC2780), tgc 8 Prolll1E1(DSM ACC2781), tgc 13 Prol/5G9, tgc12 Prolll/4B11 , tgc 14 ProVIII/3D7又はアネキシンA3上の同じエピトープに結合する抗体から選択されている、請求項26から29までのいずれか1項記載の使用。
- 抗体が、
(i) VRDYPDFSPSVD(配列番号1)、
(ii) MLISILTERSNA(配列番号2)、
(iii) GDFRKALLTLADGRRDESLKVDEHLAKQ(配列番号3)、
(iv) KLTFDEYRNISQKDIVDSIKGELSG(配列番号4)、
(v) IMVSRSEIDLLDIRTEF(配列番号5)、
(vi) YSAIKSDTSGDYEITLL(配列番号6)
又は、少なくとも6アミノ酸の長さを有するこの部分的な連続配列
から選択される配列を含む、アネキシンA3上のエピトープに対して指向されている、請求項26から30までのいずれか1項記載の使用。 - 抗体が、エフェクター分子にコンジュゲートしている、請求項26から31までのいずれか1項記載の使用。
- 癌の治療のための医薬品の製造のための、他のアネキシンに対して低い交差反応性を有するアネキシンA3に対して特異的な抗体を活性剤として含有する医薬組成物。
- 他のアネキシンに対して低い交差反応性を有する、アネキシンA3に対して特異的な抗体。
- 抗体が、モノクローナル抗体である、請求項34記載の抗体。
- 抗体が、アネキシンA3のN末端に、特に、ヒトのアネキシンA3のアミノ酸1〜16の領域内のエピトープに対して指向している、請求項34又は35記載の抗体。
- 抗体が、ハイブリドーマ細胞系列により産生された抗体tgc 5 Proll6G7 (DSM ACC2788), tgc 6 Prolll1 G11(DSM ACC2779), tgc 7 ProVII5C5 (DSM ACC2780), tgc 8 Prolll1E1(DSM ACC2781), tgc 13 Prol/5G9, tgc12 Prolll/4B11 , tgc 14 ProVIII/3D7又はアネキシンA3上の同じエピトープに結合する抗体から選択されている、請求項34から36までのいずれか1項記載の抗体。
- 抗体が、
(i) VRDYPDFSPSVD(配列番号1)、
(ii) MLISILTERSNA(配列番号2)、
(iii) GDFRKALLTLADGRRDESLKVDEHLAKQ(配列番号3)、
(iv) KLTFDEYRNISQKDIVDSIKGELSG(配列番号4)、
(v) IMVSRSEIDLLDIRTEF(配列番号5)、
(vi) YSAIKSDTSGDYEITLL(配列番号6)
又は、少なくとも6アミノ酸の長さを有するこの部分的な連続配列
から選択される配列を含む、アネキシンA3上のエピトープに対して指向されている、請求項34から37までのいずれか1項記載の抗体。 - ラベリング基又はエフェクター基を有する、請求項34から38までのいずれか1項記載の抗体。
- 請求項34から39までのいずれか1項記載の抗体を産生する細胞。
- 免疫化剤の製造のための、天然のヒトのアネキシンA3の使用。
- 天然のヒトのアネキシンA3が、好中球から単離されている、請求項41記載の使用。
- ヒトのアネキシンA3に対して指向したヒトの抗体を産生するための方法において、この抗体をヒトの試料から産生することができるB細胞を単離し、この抗体をこのB細胞又は細胞、例えばこの細胞に由来するハイブリドーマ細胞から獲得することを含む、ヒトのアネキシンA3に対して指向したヒトの抗体を産生するための方法。
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