JP2009518387A - 免疫反応を調節する組成物および方法 - Google Patents
免疫反応を調節する組成物および方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2009518387A JP2009518387A JP2008543996A JP2008543996A JP2009518387A JP 2009518387 A JP2009518387 A JP 2009518387A JP 2008543996 A JP2008543996 A JP 2008543996A JP 2008543996 A JP2008543996 A JP 2008543996A JP 2009518387 A JP2009518387 A JP 2009518387A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- cells
- protein
- peptide
- secretion
- excretion
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 230000028993 immune response Effects 0.000 title claims abstract description 64
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 59
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 45
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 138
- 241000242711 Fasciola hepatica Species 0.000 claims abstract description 122
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims abstract description 74
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 claims abstract description 72
- 230000028327 secretion Effects 0.000 claims abstract description 63
- 230000029142 excretion Effects 0.000 claims abstract description 62
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 claims abstract description 34
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims abstract description 18
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 claims abstract description 17
- 230000021633 leukocyte mediated immunity Effects 0.000 claims abstract description 5
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 claims description 139
- 102000003814 Interleukin-10 Human genes 0.000 claims description 129
- 108090000174 Interleukin-10 Proteins 0.000 claims description 129
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 86
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 86
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 85
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 claims description 76
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 claims description 76
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 claims description 75
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 claims description 75
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 68
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 67
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 claims description 57
- 102000004388 Interleukin-4 Human genes 0.000 claims description 57
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 52
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 51
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 51
- 108050003558 Interleukin-17 Proteins 0.000 claims description 46
- 102000013691 Interleukin-17 Human genes 0.000 claims description 46
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 46
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 37
- 208000006275 fascioliasis Diseases 0.000 claims description 36
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 33
- 210000003289 regulatory T cell Anatomy 0.000 claims description 32
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 31
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 claims description 27
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 claims description 25
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 claims description 25
- 102000002689 Toll-like receptor Human genes 0.000 claims description 24
- 108020000411 Toll-like receptor Proteins 0.000 claims description 24
- 230000001629 suppression Effects 0.000 claims description 24
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 21
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 20
- 102000013462 Interleukin-12 Human genes 0.000 claims description 19
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 claims description 19
- 230000004968 inflammatory condition Effects 0.000 claims description 19
- 102000004172 Cathepsin L Human genes 0.000 claims description 18
- 108090000624 Cathepsin L Proteins 0.000 claims description 18
- 210000000447 Th1 cell Anatomy 0.000 claims description 18
- 230000004044 response Effects 0.000 claims description 18
- 239000000556 agonist Substances 0.000 claims description 16
- 230000006870 function Effects 0.000 claims description 16
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims description 16
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 claims description 16
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 claims description 16
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 15
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 13
- 102000004887 Transforming Growth Factor beta Human genes 0.000 claims description 12
- 108090001012 Transforming Growth Factor beta Proteins 0.000 claims description 12
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 claims description 12
- 230000004913 activation Effects 0.000 claims description 10
- 208000010877 cognitive disease Diseases 0.000 claims description 9
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 9
- 230000007423 decrease Effects 0.000 claims description 8
- 230000003828 downregulation Effects 0.000 claims description 7
- 230000019734 interleukin-12 production Effects 0.000 claims description 7
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 7
- 230000009467 reduction Effects 0.000 claims description 7
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 6
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 6
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 6
- 230000024949 interleukin-17 production Effects 0.000 claims description 6
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 claims description 6
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 5
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 5
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims description 5
- 208000028698 Cognitive impairment Diseases 0.000 claims description 4
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 claims description 4
- 230000003915 cell function Effects 0.000 claims description 4
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 claims description 4
- 229940046168 CpG oligodeoxynucleotide Drugs 0.000 claims description 3
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 claims description 3
- 208000019622 heart disease Diseases 0.000 claims description 3
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 claims description 3
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 claims description 3
- OEDPHAKKZGDBEV-GFPBKZJXSA-N (2s)-6-amino-2-[[(2s)-6-amino-2-[[(2s)-6-amino-2-[[(2s)-6-amino-2-[[(2s)-2-[[(2r)-3-[2,3-di(hexadecanoyloxy)propylsulfanyl]-2-(hexadecanoylamino)propanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]hexanoyl]amino]hexanoyl]amino]hexanoyl]amino]hexanoic acid Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC)CSCC(COC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC OEDPHAKKZGDBEV-GFPBKZJXSA-N 0.000 claims description 2
- 108010040721 Flagellin Proteins 0.000 claims description 2
- 229920000392 Zymosan Polymers 0.000 claims description 2
- 239000012636 effector Substances 0.000 claims description 2
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims description 2
- 230000004770 neurodegeneration Effects 0.000 claims description 2
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 claims description 2
- 229940123384 Toll-like receptor (TLR) agonist Drugs 0.000 claims 2
- 239000003970 toll like receptor agonist Substances 0.000 claims 2
- 230000029662 T-helper 1 type immune response Effects 0.000 claims 1
- 230000003704 interleukin-23 production Effects 0.000 claims 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 abstract description 6
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 210
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 191
- 241000415078 Anemone hepatica Species 0.000 description 102
- 239000000047 product Substances 0.000 description 56
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 43
- 201000002491 encephalomyelitis Diseases 0.000 description 42
- 108010058846 Ovalbumin Proteins 0.000 description 38
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 37
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 36
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 36
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 36
- 102100036011 T-cell surface glycoprotein CD4 Human genes 0.000 description 35
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 34
- 108010002616 Interleukin-5 Proteins 0.000 description 33
- 102000000743 Interleukin-5 Human genes 0.000 description 33
- 230000031261 interleukin-10 production Effects 0.000 description 32
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 30
- 229940092253 ovalbumin Drugs 0.000 description 30
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 29
- 102100022297 Integrin alpha-X Human genes 0.000 description 28
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- 206010009887 colitis Diseases 0.000 description 27
- TVZRAEYQIKYCPH-UHFFFAOYSA-N 3-(trimethylsilyl)propane-1-sulfonic acid Chemical compound C[Si](C)(C)CCCS(O)(=O)=O TVZRAEYQIKYCPH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 26
- 102100039019 Nuclear receptor subfamily 0 group B member 1 Human genes 0.000 description 26
- 108010045069 keyhole-limpet hemocyanin Proteins 0.000 description 23
- 210000003200 peritoneal cavity Anatomy 0.000 description 23
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 22
- 102100035875 C-C chemokine receptor type 5 Human genes 0.000 description 21
- 101710149870 C-C chemokine receptor type 5 Proteins 0.000 description 21
- 101150013553 CD40 gene Proteins 0.000 description 21
- -1 CD86 Proteins 0.000 description 21
- 102000043131 MHC class II family Human genes 0.000 description 21
- 108091054438 MHC class II family Proteins 0.000 description 21
- 102100040245 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 5 Human genes 0.000 description 21
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 18
- 101000914484 Homo sapiens T-lymphocyte activation antigen CD80 Proteins 0.000 description 17
- 108010000123 Myelin-Oligodendrocyte Glycoprotein Proteins 0.000 description 17
- 102100023302 Myelin-oligodendrocyte glycoprotein Human genes 0.000 description 17
- 102100027222 T-lymphocyte activation antigen CD80 Human genes 0.000 description 17
- 210000000416 exudates and transudate Anatomy 0.000 description 17
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 17
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 16
- 230000016396 cytokine production Effects 0.000 description 16
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 16
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 15
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 15
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 15
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 15
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 15
- 102000014158 Interleukin-12 Subunit p40 Human genes 0.000 description 13
- 108010011429 Interleukin-12 Subunit p40 Proteins 0.000 description 13
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 13
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 13
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 13
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 13
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 13
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 13
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 12
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 12
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 12
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 12
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 11
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 11
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 11
- 210000005007 innate immune system Anatomy 0.000 description 11
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 11
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 11
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 10
- 108010081690 Pertussis Toxin Proteins 0.000 description 10
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 10
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 10
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 10
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 9
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 9
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 9
- 108010062580 Concanavalin A Proteins 0.000 description 8
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 8
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 8
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 8
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 8
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 8
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 8
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 8
- ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N tgfbeta Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N 0.000 description 8
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 7
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 7
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 7
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 7
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 7
- 238000011813 knockout mouse model Methods 0.000 description 7
- 210000003024 peritoneal macrophage Anatomy 0.000 description 7
- 241000894007 species Species 0.000 description 7
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 7
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 7
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 6
- 102000005600 Cathepsins Human genes 0.000 description 6
- 108010084457 Cathepsins Proteins 0.000 description 6
- 108010065637 Interleukin-23 Proteins 0.000 description 6
- 102000013264 Interleukin-23 Human genes 0.000 description 6
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 6
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 6
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 6
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 6
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 6
- 230000006058 immune tolerance Effects 0.000 description 6
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 6
- 238000011533 pre-incubation Methods 0.000 description 6
- 230000003827 upregulation Effects 0.000 description 6
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 5
- 208000032116 Autoimmune Experimental Encephalomyelitis Diseases 0.000 description 5
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 5
- 101001057504 Homo sapiens Interferon-stimulated gene 20 kDa protein Proteins 0.000 description 5
- 101001055144 Homo sapiens Interleukin-2 receptor subunit alpha Proteins 0.000 description 5
- 102100027268 Interferon-stimulated gene 20 kDa protein Human genes 0.000 description 5
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 5
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 5
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 5
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 5
- 229960000633 dextran sulfate Drugs 0.000 description 5
- 239000003651 drinking water Substances 0.000 description 5
- 235000020188 drinking water Nutrition 0.000 description 5
- 230000017307 interleukin-4 production Effects 0.000 description 5
- 238000002826 magnetic-activated cell sorting Methods 0.000 description 5
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 5
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 5
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 5
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102100027581 Forkhead box protein P3 Human genes 0.000 description 4
- 101000861452 Homo sapiens Forkhead box protein P3 Proteins 0.000 description 4
- 102000003777 Interleukin-1 beta Human genes 0.000 description 4
- 108090000193 Interleukin-1 beta Proteins 0.000 description 4
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 4
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 4
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 4
- 210000000683 abdominal cavity Anatomy 0.000 description 4
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 4
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 4
- 230000030741 antigen processing and presentation Effects 0.000 description 4
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 4
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 4
- 238000003501 co-culture Methods 0.000 description 4
- 230000000139 costimulatory effect Effects 0.000 description 4
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 4
- 208000012997 experimental autoimmune encephalomyelitis Diseases 0.000 description 4
- 230000002550 fecal effect Effects 0.000 description 4
- 210000003630 histaminocyte Anatomy 0.000 description 4
- 238000010185 immunofluorescence analysis Methods 0.000 description 4
- 230000022023 interleukin-5 production Effects 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 4
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 4
- 230000000284 resting effect Effects 0.000 description 4
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 4
- KISWVXRQTGLFGD-UHFFFAOYSA-N 2-[[2-[[6-amino-2-[[2-[[2-[[5-amino-2-[[2-[[1-[2-[[6-amino-2-[(2,5-diamino-5-oxopentanoyl)amino]hexanoyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)p Chemical compound C1CCN(C(=O)C(CCCN=C(N)N)NC(=O)C(CCCCN)NC(=O)C(N)CCC(N)=O)C1C(=O)NC(CO)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CCCN=C(N)N)C(=O)NC(CO)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C(=O)NC(CC(C)C)C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 KISWVXRQTGLFGD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010021064 CTLA-4 Antigen Proteins 0.000 description 3
- 229940045513 CTLA4 antagonist Drugs 0.000 description 3
- 208000011231 Crohn disease Diseases 0.000 description 3
- 102100039498 Cytotoxic T-lymphocyte protein 4 Human genes 0.000 description 3
- 206010012438 Dermatitis atopic Diseases 0.000 description 3
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000009329 Graft vs Host Disease Diseases 0.000 description 3
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 3
- 101000914514 Homo sapiens T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Proteins 0.000 description 3
- 208000022559 Inflammatory bowel disease Diseases 0.000 description 3
- 102000000589 Interleukin-1 Human genes 0.000 description 3
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 3
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 3
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 3
- 206010033799 Paralysis Diseases 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000006011 Stroke Diseases 0.000 description 3
- 102100027213 T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Human genes 0.000 description 3
- 208000007502 anemia Diseases 0.000 description 3
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 3
- 201000008937 atopic dermatitis Diseases 0.000 description 3
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 description 3
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 3
- 239000002458 cell surface marker Substances 0.000 description 3
- 230000001934 delay Effects 0.000 description 3
- 230000004041 dendritic cell maturation Effects 0.000 description 3
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 3
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 3
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 3
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 3
- 208000024908 graft versus host disease Diseases 0.000 description 3
- 108040006870 interleukin-10 receptor activity proteins Proteins 0.000 description 3
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 3
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 3
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 3
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 3
- 239000011325 microbead Substances 0.000 description 3
- 230000007302 negative regulation of cytokine production Effects 0.000 description 3
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 3
- 210000004303 peritoneum Anatomy 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 3
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 3
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 3
- 102000003390 tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 3
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 description 2
- 208000032467 Aplastic anaemia Diseases 0.000 description 2
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 description 2
- 208000012657 Atopic disease Diseases 0.000 description 2
- 241000588832 Bordetella pertussis Species 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 2
- 229940123003 Cathepsin inhibitor Drugs 0.000 description 2
- 208000015943 Coeliac disease Diseases 0.000 description 2
- 206010009900 Colitis ulcerative Diseases 0.000 description 2
- 206010010741 Conjunctivitis Diseases 0.000 description 2
- 201000004624 Dermatitis Diseases 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 2
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 2
- 102100039620 Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 2
- 208000030836 Hashimoto thyroiditis Diseases 0.000 description 2
- 208000006968 Helminthiasis Diseases 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- 102000047918 Myelin Basic Human genes 0.000 description 2
- 101710107068 Myelin basic protein Proteins 0.000 description 2
- 241000935974 Paralichthys dentatus Species 0.000 description 2
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 2
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 2
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 2
- 201000004681 Psoriasis Diseases 0.000 description 2
- 201000001263 Psoriatic Arthritis Diseases 0.000 description 2
- 208000036824 Psoriatic arthropathy Diseases 0.000 description 2
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 2
- 239000008156 Ringer's lactate solution Substances 0.000 description 2
- 208000021386 Sjogren Syndrome Diseases 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 2
- 230000006052 T cell proliferation Effects 0.000 description 2
- 210000000068 Th17 cell Anatomy 0.000 description 2
- 206010067584 Type 1 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 2
- 201000006704 Ulcerative Colitis Diseases 0.000 description 2
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 2
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 2
- 208000030961 allergic reaction Diseases 0.000 description 2
- 206010002026 amyotrophic lateral sclerosis Diseases 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 230000006472 autoimmune response Effects 0.000 description 2
- 150000001540 azides Chemical class 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 2
- 210000000133 brain stem Anatomy 0.000 description 2
- 210000005013 brain tissue Anatomy 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 230000020411 cell activation Effects 0.000 description 2
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 description 2
- 208000037976 chronic inflammation Diseases 0.000 description 2
- 208000037893 chronic inflammatory disorder Diseases 0.000 description 2
- 238000011260 co-administration Methods 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 210000003162 effector t lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- 210000001320 hippocampus Anatomy 0.000 description 2
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 2
- 210000003141 lower extremity Anatomy 0.000 description 2
- 206010025135 lupus erythematosus Diseases 0.000 description 2
- 238000007885 magnetic separation Methods 0.000 description 2
- 239000003094 microcapsule Substances 0.000 description 2
- 230000002025 microglial effect Effects 0.000 description 2
- 208000027061 mild cognitive impairment Diseases 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 2
- 229940035032 monophosphoryl lipid a Drugs 0.000 description 2
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 2
- 206010028417 myasthenia gravis Diseases 0.000 description 2
- 210000003007 myelin sheath Anatomy 0.000 description 2
- 230000000626 neurodegenerative effect Effects 0.000 description 2
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 description 2
- 201000008482 osteoarthritis Diseases 0.000 description 2
- 244000045947 parasite Species 0.000 description 2
- 208000014837 parasitic helminthiasis infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 2
- 229940066827 pertussis vaccine Drugs 0.000 description 2
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 2
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 2
- 229940024999 proteolytic enzymes for treatment of wounds and ulcers Drugs 0.000 description 2
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 201000000596 systemic lupus erythematosus Diseases 0.000 description 2
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 230000004797 therapeutic response Effects 0.000 description 2
- 206010043554 thrombocytopenia Diseases 0.000 description 2
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 2
- 208000001072 type 2 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 2
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 2
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 2
- QGVLYPPODPLXMB-UBTYZVCOSA-N (1aR,1bS,4aR,7aS,7bS,8R,9R,9aS)-4a,7b,9,9a-tetrahydroxy-3-(hydroxymethyl)-1,1,6,8-tetramethyl-1,1a,1b,4,4a,7a,7b,8,9,9a-decahydro-5H-cyclopropa[3,4]benzo[1,2-e]azulen-5-one Chemical compound C1=C(CO)C[C@]2(O)C(=O)C(C)=C[C@H]2[C@@]2(O)[C@H](C)[C@@H](O)[C@@]3(O)C(C)(C)[C@H]3[C@@H]21 QGVLYPPODPLXMB-UBTYZVCOSA-N 0.000 description 1
- XMQUEQJCYRFIQS-YFKPBYRVSA-N (2s)-2-amino-5-ethoxy-5-oxopentanoic acid Chemical compound CCOC(=O)CC[C@H](N)C(O)=O XMQUEQJCYRFIQS-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 1
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- 238000010600 3H thymidine incorporation assay Methods 0.000 description 1
- 206010065040 AIDS dementia complex Diseases 0.000 description 1
- 208000035285 Allergic Seasonal Rhinitis Diseases 0.000 description 1
- 206010003399 Arthropod bite Diseases 0.000 description 1
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 1
- 208000008439 Biliary Liver Cirrhosis Diseases 0.000 description 1
- 208000033222 Biliary cirrhosis primary Diseases 0.000 description 1
- 108700031361 Brachyury Proteins 0.000 description 1
- 208000014644 Brain disease Diseases 0.000 description 1
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 1
- 208000017667 Chronic Disease Diseases 0.000 description 1
- 206010008909 Chronic Hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 206010011878 Deafness Diseases 0.000 description 1
- 208000016192 Demyelinating disease Diseases 0.000 description 1
- 206010012305 Demyelination Diseases 0.000 description 1
- 208000019872 Drug Eruptions Diseases 0.000 description 1
- 208000032274 Encephalopathy Diseases 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 241000283074 Equus asinus Species 0.000 description 1
- 206010015150 Erythema Diseases 0.000 description 1
- 206010015226 Erythema nodosum Diseases 0.000 description 1
- 241000123208 Fistulina hepatica Species 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 206010072579 Granulomatosis with polyangiitis Diseases 0.000 description 1
- 208000003084 Graves Ophthalmopathy Diseases 0.000 description 1
- 206010019196 Head injury Diseases 0.000 description 1
- 206010019755 Hepatitis chronic active Diseases 0.000 description 1
- 101000980827 Homo sapiens T-cell surface glycoprotein CD1a Proteins 0.000 description 1
- 101000716149 Homo sapiens T-cell surface glycoprotein CD1b Proteins 0.000 description 1
- 101000716124 Homo sapiens T-cell surface glycoprotein CD1c Proteins 0.000 description 1
- 101000716102 Homo sapiens T-cell surface glycoprotein CD4 Proteins 0.000 description 1
- 101000669447 Homo sapiens Toll-like receptor 4 Proteins 0.000 description 1
- 208000023105 Huntington disease Diseases 0.000 description 1
- 206010021245 Idiopathic thrombocytopenic purpura Diseases 0.000 description 1
- 206010062016 Immunosuppression Diseases 0.000 description 1
- 208000029523 Interstitial Lung disease Diseases 0.000 description 1
- 208000003456 Juvenile Arthritis Diseases 0.000 description 1
- 206010059176 Juvenile idiopathic arthritis Diseases 0.000 description 1
- 206010024229 Leprosy Diseases 0.000 description 1
- 108010028921 Lipopeptides Proteins 0.000 description 1
- 102000043129 MHC class I family Human genes 0.000 description 1
- 108091054437 MHC class I family Proteins 0.000 description 1
- 206010027926 Monoplegia Diseases 0.000 description 1
- 208000010428 Muscle Weakness Diseases 0.000 description 1
- 206010028372 Muscular weakness Diseases 0.000 description 1
- 241000187479 Mycobacterium tuberculosis Species 0.000 description 1
- 241001049988 Mycobacterium tuberculosis H37Ra Species 0.000 description 1
- 102000006386 Myelin Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010083674 Myelin Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108010084333 N-palmitoyl-S-(2,3-bis(palmitoyloxy)propyl)cysteinyl-seryl-lysyl-lysyl-lysyl-lysine Proteins 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 206010048685 Oral infection Diseases 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 208000018737 Parkinson disease Diseases 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 1
- 201000005702 Pertussis Diseases 0.000 description 1
- 206010065159 Polychondritis Diseases 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 208000012654 Primary biliary cholangitis Diseases 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- 208000024777 Prion disease Diseases 0.000 description 1
- 206010036774 Proctitis Diseases 0.000 description 1
- 239000012979 RPMI medium Substances 0.000 description 1
- 208000025747 Rheumatic disease Diseases 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 description 1
- 241000282849 Ruminantia Species 0.000 description 1
- 206010039710 Scleroderma Diseases 0.000 description 1
- 208000019802 Sexually transmitted disease Diseases 0.000 description 1
- 230000006044 T cell activation Effects 0.000 description 1
- 230000020385 T cell costimulation Effects 0.000 description 1
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 1
- 102100024219 T-cell surface glycoprotein CD1a Human genes 0.000 description 1
- 210000000662 T-lymphocyte subset Anatomy 0.000 description 1
- 210000004241 Th2 cell Anatomy 0.000 description 1
- 102100039360 Toll-like receptor 4 Human genes 0.000 description 1
- 108060008683 Tumor Necrosis Factor Receptor Proteins 0.000 description 1
- 206010046851 Uveitis Diseases 0.000 description 1
- 201000008100 Vaginitis Diseases 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- 208000016807 X-linked intellectual disability-macrocephaly-macroorchidism syndrome Diseases 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N acetic acid Substances CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 239000013566 allergen Substances 0.000 description 1
- 201000009961 allergic asthma Diseases 0.000 description 1
- 230000000172 allergic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000961 alloantigen Effects 0.000 description 1
- 208000004631 alopecia areata Diseases 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 239000010775 animal oil Substances 0.000 description 1
- 229940019748 antifibrinolytic proteinase inhibitors Drugs 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 208000002399 aphthous stomatitis Diseases 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 208000037979 autoimmune inflammatory disease Diseases 0.000 description 1
- 201000003710 autoimmune thrombocytopenic purpura Diseases 0.000 description 1
- 201000004982 autoimmune uveitis Diseases 0.000 description 1
- 230000005784 autoimmunity Effects 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 1
- 210000003651 basophil Anatomy 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 229940038481 bee pollen Drugs 0.000 description 1
- AFYNADDZULBEJA-UHFFFAOYSA-N bicinchoninic acid Chemical compound C1=CC=CC2=NC(C=3C=C(C4=CC=CC=C4N=3)C(=O)O)=CC(C(O)=O)=C21 AFYNADDZULBEJA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002146 bilateral effect Effects 0.000 description 1
- 229920001222 biopolymer Polymers 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 208000027503 bloody stool Diseases 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 210000002798 bone marrow cell Anatomy 0.000 description 1
- DQXBYHZEEUGOBF-UHFFFAOYSA-N but-3-enoic acid;ethene Chemical compound C=C.OC(=O)CC=C DQXBYHZEEUGOBF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000981 bystander Effects 0.000 description 1
- BPKIGYQJPYCAOW-FFJTTWKXSA-I calcium;potassium;disodium;(2s)-2-hydroxypropanoate;dichloride;dihydroxide;hydrate Chemical compound O.[OH-].[OH-].[Na+].[Na+].[Cl-].[Cl-].[K+].[Ca+2].C[C@H](O)C([O-])=O BPKIGYQJPYCAOW-FFJTTWKXSA-I 0.000 description 1
- BMLSTPRTEKLIPM-UHFFFAOYSA-I calcium;potassium;disodium;hydrogen carbonate;dichloride;dihydroxide;hydrate Chemical compound O.[OH-].[OH-].[Na+].[Na+].[Cl-].[Cl-].[K+].[Ca+2].OC([O-])=O BMLSTPRTEKLIPM-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 208000020670 canker sore Diseases 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000009134 cell regulation Effects 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 208000019069 chronic childhood arthritis Diseases 0.000 description 1
- 230000003920 cognitive function Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- 210000004087 cornea Anatomy 0.000 description 1
- 208000004921 cutaneous lupus erythematosus Diseases 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 210000001787 dendrite Anatomy 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000006806 disease prevention Effects 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 1
- 239000000428 dust Substances 0.000 description 1
- 206010014599 encephalitis Diseases 0.000 description 1
- 230000012202 endocytosis Effects 0.000 description 1
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 210000003979 eosinophil Anatomy 0.000 description 1
- 231100000321 erythema Toxicity 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000005038 ethylene vinyl acetate Substances 0.000 description 1
- 210000003414 extremity Anatomy 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 1
- 230000003325 follicular Effects 0.000 description 1
- 210000000285 follicular dendritic cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 1
- 230000005021 gait Effects 0.000 description 1
- 238000001641 gel filtration chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 229960002989 glutamic acid Drugs 0.000 description 1
- 150000002334 glycols Chemical class 0.000 description 1
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000010370 hearing loss Effects 0.000 description 1
- 231100000888 hearing loss Toxicity 0.000 description 1
- 208000016354 hearing loss disease Diseases 0.000 description 1
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 1
- 208000035861 hematochezia Diseases 0.000 description 1
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000777 hematopoietic system Anatomy 0.000 description 1
- 230000002008 hemorrhagic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008348 humoral response Effects 0.000 description 1
- 229960002751 imiquimod Drugs 0.000 description 1
- DOUYETYNHWVLEO-UHFFFAOYSA-N imiquimod Chemical compound C1=CC=CC2=C3N(CC(C)C)C=NC3=C(N)N=C21 DOUYETYNHWVLEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005965 immune activity Effects 0.000 description 1
- 230000008004 immune attack Effects 0.000 description 1
- 230000036737 immune function Effects 0.000 description 1
- 230000003832 immune regulation Effects 0.000 description 1
- 230000008629 immune suppression Effects 0.000 description 1
- 208000026278 immune system disease Diseases 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 1
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 1
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 1
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 230000015788 innate immune response Effects 0.000 description 1
- 102000006495 integrins Human genes 0.000 description 1
- 108010044426 integrins Proteins 0.000 description 1
- 230000014828 interferon-gamma production Effects 0.000 description 1
- 230000004073 interleukin-2 production Effects 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 238000010212 intracellular staining Methods 0.000 description 1
- 238000007917 intracranial administration Methods 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000007913 intrathecal administration Methods 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 201000004614 iritis Diseases 0.000 description 1
- 230000000366 juvenile effect Effects 0.000 description 1
- 201000002215 juvenile rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 1
- 210000002510 keratinocyte Anatomy 0.000 description 1
- 206010023332 keratitis Diseases 0.000 description 1
- 201000010666 keratoconjunctivitis Diseases 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 238000009533 lab test Methods 0.000 description 1
- 210000001821 langerhans cell Anatomy 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 201000011486 lichen planus Diseases 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 210000003563 lymphoid tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000008176 lyophilized powder Substances 0.000 description 1
- 230000002101 lytic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 1
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 1
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000003226 mitogen Substances 0.000 description 1
- 238000007799 mixed lymphocyte reaction assay Methods 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 210000005012 myelin Anatomy 0.000 description 1
- 210000000066 myeloid cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000006199 nebulizer Substances 0.000 description 1
- 230000002956 necrotizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000025020 negative regulation of T cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000031990 negative regulation of inflammatory response Effects 0.000 description 1
- 210000004126 nerve fiber Anatomy 0.000 description 1
- 210000004498 neuroglial cell Anatomy 0.000 description 1
- 229940021182 non-steroidal anti-inflammatory drug Drugs 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 1
- 210000004248 oligodendroglia Anatomy 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 230000003071 parasitic effect Effects 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 231100000915 pathological change Toxicity 0.000 description 1
- 230000036285 pathological change Effects 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 239000003330 peritoneal dialysis fluid Substances 0.000 description 1
- 230000008823 permeabilization Effects 0.000 description 1
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 1
- 239000008024 pharmaceutical diluent Substances 0.000 description 1
- 229940124531 pharmaceutical excipient Drugs 0.000 description 1
- QGVLYPPODPLXMB-QXYKVGAMSA-N phorbol Natural products C[C@@H]1[C@@H](O)[C@]2(O)[C@H]([C@H]3C=C(CO)C[C@@]4(O)[C@H](C=C(C)C4=O)[C@@]13O)C2(C)C QGVLYPPODPLXMB-QXYKVGAMSA-N 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 229920001200 poly(ethylene-vinyl acetate) Polymers 0.000 description 1
- 229920000747 poly(lactic acid) Polymers 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920002338 polyhydroxyethylmethacrylate Polymers 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 230000007112 pro inflammatory response Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000007115 recruitment Effects 0.000 description 1
- 230000000306 recurrent effect Effects 0.000 description 1
- 201000000306 sarcoidosis Diseases 0.000 description 1
- 230000001953 sensory effect Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 235000015170 shellfish Nutrition 0.000 description 1
- 210000004927 skin cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000008354 sodium chloride injection Substances 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000023750 transforming growth factor beta production Effects 0.000 description 1
- 201000008827 tuberculosis Diseases 0.000 description 1
- 102000003298 tumor necrosis factor receptor Human genes 0.000 description 1
- 210000000689 upper leg Anatomy 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 210000001835 viscera Anatomy 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
- 208000016261 weight loss Diseases 0.000 description 1
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/164—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/56—Materials from animals other than mammals
- A61K35/62—Leeches; Worms, e.g. cestodes, tapeworms, nematodes, roundworms, earth worms, ascarids, filarias, hookworms, trichinella or taenia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
- A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
- A61P15/02—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives for disorders of the vagina
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/06—Antipsoriatics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/14—Drugs for dermatological disorders for baldness or alopecia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
- A61P21/04—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system for myasthenia gravis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
- A61P27/02—Ophthalmic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
- A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/08—Antiallergic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
- A61P5/14—Drugs for disorders of the endocrine system of the thyroid hormones, e.g. T3, T4
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/06—Antianaemics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/14—Vasoprotectives; Antihaemorrhoidals; Drugs for varicose therapy; Capillary stabilisers
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Immunology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Neurology (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Oncology (AREA)
- Obesity (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Ophthalmology & Optometry (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Gynecology & Obstetrics (AREA)
Abstract
本発明は、Fasciola hepaticaの排出/分泌(ES)成分またはその分画を含む、炎症性免疫反応を抑制する組成物を提供する。組成物は、T細胞介在性炎症性免疫反応および特に自己免疫疾患の処置および予防において特に有用である。本発明は、T細胞介在性免疫反応を調節する方法にまでさらに及び、この場合、反応の進行を抑制するために、Fasciola hepatica由来の排泄/分泌(ES)成分の治療的有効量をこのような処置を必要とする被検体に投与する。
【選択図】なし
【選択図】なし
Description
[技術分野]
本発明は、例えばTh1またはThIL−17介在性炎症状態、慢性炎症状態および自己免疫疾患等の、Tリンパ球細胞が病原性役割を有する疾患および/または状態を、予防または処置するために免疫反応を調節する新規の組成物および方法に関する。
本発明は、例えばTh1またはThIL−17介在性炎症状態、慢性炎症状態および自己免疫疾患等の、Tリンパ球細胞が病原性役割を有する疾患および/または状態を、予防または処置するために免疫反応を調節する新規の組成物および方法に関する。
[背景技術]
自然免疫系の細胞、特に樹状細胞(DC)は、未感作(ナイーブ)CD4+T細胞の、機能的に別個のTh1、Th2、ThIL−17(Th17としても知られる)または制御性T(Treg)細胞のサブタイプへの分化を方向付ける。保存微生物分子と病原体認識受容体(PRR)、例えば、Toll様受容体(TLR)およびインテグリンの結合を介した未成熟DCの活性化は、DCの成熟およびリンパ節へのホーミングを伴い、ここで、成熟DCは、未感作T細胞に対して抗原(Ag)を提示する。病原体由来分子による樹状細胞の活性化は、未感作CD4+T細胞の、別個のT細胞のサブタイプへの分化を制御する重要な役割を果たす。Th1細胞は、細胞内感染に対して防御するが、さらに炎症反応および自己免疫疾患に関連し、一方、Th2細胞は、アレルギー性反応に関与する。IL−17産生T細胞(ThIL−17またはTh17)は、T細胞の病原性サブセットであり、これらは、自己免疫疾患に寄与する重要な炎症促進性サイトカインであるIL−6、TNF−アルファおよび特に、IL−17およびIL−17Fの産生を特徴とする。Treg細胞は、Th1、Th2およびTh17反応を抑制することができる。
自然免疫系の細胞、特に樹状細胞(DC)は、未感作(ナイーブ)CD4+T細胞の、機能的に別個のTh1、Th2、ThIL−17(Th17としても知られる)または制御性T(Treg)細胞のサブタイプへの分化を方向付ける。保存微生物分子と病原体認識受容体(PRR)、例えば、Toll様受容体(TLR)およびインテグリンの結合を介した未成熟DCの活性化は、DCの成熟およびリンパ節へのホーミングを伴い、ここで、成熟DCは、未感作T細胞に対して抗原(Ag)を提示する。病原体由来分子による樹状細胞の活性化は、未感作CD4+T細胞の、別個のT細胞のサブタイプへの分化を制御する重要な役割を果たす。Th1細胞は、細胞内感染に対して防御するが、さらに炎症反応および自己免疫疾患に関連し、一方、Th2細胞は、アレルギー性反応に関与する。IL−17産生T細胞(ThIL−17またはTh17)は、T細胞の病原性サブセットであり、これらは、自己免疫疾患に寄与する重要な炎症促進性サイトカインであるIL−6、TNF−アルファおよび特に、IL−17およびIL−17Fの産生を特徴とする。Treg細胞は、Th1、Th2およびTh17反応を抑制することができる。
免疫介在性状態
多発性硬化症(MS)は、中枢神経系に影響を及ぼす自己免疫疾患である。この疾患を有する個体は、自己反応性T細胞(自己抗原を認識するT細胞)を有し、これは、インターロイキン(IL)−1ベータおよび腫瘍壊死因子(TNF)アルファと合わせて、神経線維のミエリン鞘に沿った炎症性病変の形成に関与する。MS患者の脳脊髄液(CSF)は、活性化T細胞を含有し、これは、脳組織に浸潤し、特徴的な炎症性病変を引き起こし、ミエリンを破壊する。実験的自己免疫性脳脊髄炎(EAE)は、MSの動物モデルである。これは、マウスまたはラットにおいて、完全フロインドアジュバントと、ミエリン塩基性タンパク質(MBP)またはミエリン乏突起膠細胞糖タンパク質(MOG)またはそのペプチドの注射により誘導される。この疾患はまた、IL−17を分泌する(ThIL−17細胞またはTh17細胞と呼ばれる)MBPまたはMOG特異的T細胞の移入によっても誘導することができる。動物は、中枢神経系のミエリン鞘の細胞浸潤を進行させ、脱髄およびついには麻痺を生じる。臨床兆候および病理学的変化は、MSと似ている。
多発性硬化症(MS)は、中枢神経系に影響を及ぼす自己免疫疾患である。この疾患を有する個体は、自己反応性T細胞(自己抗原を認識するT細胞)を有し、これは、インターロイキン(IL)−1ベータおよび腫瘍壊死因子(TNF)アルファと合わせて、神経線維のミエリン鞘に沿った炎症性病変の形成に関与する。MS患者の脳脊髄液(CSF)は、活性化T細胞を含有し、これは、脳組織に浸潤し、特徴的な炎症性病変を引き起こし、ミエリンを破壊する。実験的自己免疫性脳脊髄炎(EAE)は、MSの動物モデルである。これは、マウスまたはラットにおいて、完全フロインドアジュバントと、ミエリン塩基性タンパク質(MBP)またはミエリン乏突起膠細胞糖タンパク質(MOG)またはそのペプチドの注射により誘導される。この疾患はまた、IL−17を分泌する(ThIL−17細胞またはTh17細胞と呼ばれる)MBPまたはMOG特異的T細胞の移入によっても誘導することができる。動物は、中枢神経系のミエリン鞘の細胞浸潤を進行させ、脱髄およびついには麻痺を生じる。臨床兆候および病理学的変化は、MSと似ている。
クローン病および潰瘍性大腸炎は、ヒトの炎症性腸疾患である。これらの自己免疫疾患は、CD4+T細胞により媒介される腸の炎症状態である。
多くの自己免疫および慢性炎症性疾患は、満足できる処置がなく、多くの場合、ステロイドおよび非ステロイド系抗炎症薬を使用する。しかし、これらは、非特異的であり、副作用を有する。ごく最近、主要な炎症性サイトカイン、特に腫瘍壊死因子アルファ(TNF−アルファ)を阻害する薬剤が開発されている。これらは、特定の自己免疫疾患に対して効果的な抗体または可溶性TNF受容体を含むが、(再発性結核および癌を含めた)副作用と関連し、TNF−アルファが病状の主要なメディエーターである疾患に限定される。別の治療的手法は、抗炎症性サイトカイン(例えば、IL−10)の直接投与であるが、これは、in vivoのサイトカインの半減期が短いことにより効果が損なわれる。別の方法は、抗炎症性サイトカイン、例えば、IL−10を誘導する薬剤を使用し、これは、in vivoで直接の免疫抑制効果を有する。サプレッサーまたは制御性T細胞の誘導を促進する分子は、炎症性Th1介在性免疫反応を制限する可能性を有し、T細胞介在性自己免疫反応の炎症性反応を媒介する、IL−17を分泌するT細胞(ThIL−17)もまたそうである。
蠕虫感染
寄生蠕虫類の感染は、免疫抑制および低下したT細胞反応に関連する。マウスにおいて、肝吸虫であるFasciola hepatica感染は、高濃度のサイトカインIL−4、IL−5およびIL−10ならびにIgG1抗体を伴う、非常に分極されたTh2反応を誘導する。F.hepatica感染は、IFN−ガンマ分泌性T細胞(Th1細胞)反応および細菌病原体であるBordetella pertussisに対する防御を抑制した。F.hepatica感染はまた、Th1反応および全細胞pertussisワクチンで誘導されたB.pertussisに対する防御を阻害した。
寄生蠕虫類の感染は、免疫抑制および低下したT細胞反応に関連する。マウスにおいて、肝吸虫であるFasciola hepatica感染は、高濃度のサイトカインIL−4、IL−5およびIL−10ならびにIgG1抗体を伴う、非常に分極されたTh2反応を誘導する。F.hepatica感染は、IFN−ガンマ分泌性T細胞(Th1細胞)反応および細菌病原体であるBordetella pertussisに対する防御を抑制した。F.hepatica感染はまた、Th1反応および全細胞pertussisワクチンで誘導されたB.pertussisに対する防御を阻害した。
F.hepaticaの排泄/分泌(ES)成分はまた、全細胞B.pertussisワクチンにより誘導されたTh1反応を抑制することが示されている。この抑制は、カテプシンLプロテイナーゼの阻害剤により反転することが示され、これは、カテプシンLプロテイナーゼが抑制効果の媒介に関与したことを示唆する。
さらに、F.hepatica ES成分から精製されたカテプシンLプロテイナーゼは、Pwワクチンで誘導されたTh1反応を抑制した。これらの試験はまた、免疫反応の抑制がIL−4欠損マウスにおいて反転することが示されたことから、F.hepaticaまたはカテプシンLプロテイナーゼにより誘導された抑制が、IL−4により媒介されたことを明らかにした。
それゆえ、上記の試験の結論は、カテプシンLプロテイナーゼが、F.hepaticaおよびF.hepatica ES成分に関与し、これらの抑制効果を媒介し、かつこの抑制がIL−4誘導を介して媒介されることであった。
自己免疫疾患、炎症状態または免疫介在性障害の発症および進行を、これらの状態の原因であるT細胞反応の調節を介して予防する方法は、これらの状態の予防および処置に非常に有利であるだろう。
本発明の発明者等は、驚くことに、Fasciola hepaticaの排泄/分泌(ES)成分が免疫反応の抑制を媒介するカテプシンLプロテイナーゼ以外の化合物を含むことを同定した。カテプシンLプロテイナーゼによる免疫反応の抑制がIL−4サイトカイン産生により媒介されると考えられる一方、本発明者らは、ES成分が、免疫反応を調節するよう作用する多くの別のメカニズムを介した免疫抑制を媒介することを同定した。特に、本発明者らは、Fasciola hepaticaの排泄/分泌(ES)成分が自然免疫系の細胞と相互作用し、樹状細胞をT制御性表現型へと活性化し(これは、IL−10を産生する)、これがTh1および/またはThIL−17表現型を有するT細胞の産生から免疫応答を偏らせることによって、サイトカイン発現の調節、特にIL−10サイトカインレベルの上方制御を介して、免疫反応を調節することを同定した。
特に、本発明者らは、F.hepaticaのES成分が抗炎症性サイトカイン、例えば免疫反応の強力な調節物質として作用することができるIL−10の産生を刺激することを同定した。
さらに、本発明者らはまた、驚くことに、F.hepatica由来のES分画が制御性T細胞(Treg)の産生を促進する表現型に樹状細胞を活性化することができることを示しており、続いて、これらのTregは、Th1およびThIL−17型反応の抑制を介して免疫反応を調節する。特に、このような樹状細胞は、未感作(ナイーブ)の樹状細胞の細胞表面マーカーの発現濃度に比べ、細胞表面マーカーCD80、CD86、CD40およびMHCクラスIIの発現濃度が低い一方、CCR5の発現濃度が高いことが観察されることが示された。IL−17産生T細胞サブセットは、IL−17、IL−17F、IL−17H、IL−17F、IL−17A、IL−6およびTNFを含めたサイトカインプロフィールを分泌する。IL−1およびIL−23またはIL−6およびTGF−ベータにより促進されるIL−17産生T(Th17(ThIL−17))細胞は、Th1細胞とは別個の炎症性T細胞のサブタイプであり、多くの自己免疫疾患および慢性炎症状態の病原である。
これらの効果は、今までにカテプシンLプロテイナーゼに関連して認められている免疫調節効果から独立している。本発明者らにより認められた免疫調節効果は、カテプシンLプロテイナーゼ阻害剤により抑制されず、IL−4依存性ではないことが重要である。理論に制約されることを望まないが、それゆえ、本発明者らは、ES成分により媒介される免疫調節効果が少なくとも部分的に、カテプシンLプロテイナーゼ以外のES成分由来の成分または産物により媒介されると予測する。
免疫系の特定の細胞型により発現される反応およびサイトカインプロフィールの調節は、言い換えると、免疫反応全体のより広範囲の調節を導くことができる。本発明者らは、さらに驚くことに、F.hepatica由来のES分画がIFN−ガンマ、IL−17産生Th1細胞(Th17(ThIL−17)細胞)およびTh1細胞の誘導を、Th1およびThIL−17細胞の増殖を促進するIL−12およびIL−23の阻害、またはTh1およびThIL−17細胞の活性化を阻害すること、あるいはTh1およびThIL−17細胞の機能を抑制することによるいずれかを介して阻害することを示した。
[発明の開示]
本発明の第1の態様において、T細胞介在性炎症性免疫反応の処置または予防のための組成物を提供し、この組成物は、Fasciola hepaticaの排泄/分泌(ES)成分もしくはその分画もしくは突然変異体またはそこから単離されたタンパク質もしくはペプチドの誘導体産物、断片もしくは変異体を含む。
本発明の第1の態様において、T細胞介在性炎症性免疫反応の処置または予防のための組成物を提供し、この組成物は、Fasciola hepaticaの排泄/分泌(ES)成分もしくはその分画もしくは突然変異体またはそこから単離されたタンパク質もしくはペプチドの誘導体産物、断片もしくは変異体を含む。
組成物が、Fasciola hepaticaのES成分から単離されたタンパク質もしくはペプチドの分画、誘導体産物、突然変異体、断片または変異体を含む場合、次いで、前記分画または分子は、ES成分に関連して、本明細書において本発明者らにより同定されたものと同じ免疫調節活性、すなわち、Th1およびThIL−17細胞の増殖を促進するIL−12およびIL−23の阻害、またはTh1およびThIL−17細胞の活性化を阻害すること、あるいはTh1およびThIL−17細胞の機能を抑制することによるいずれかを介して、IFN−ガンマ、IL−17産生Th1細胞(Th17(ThIL−17)細胞)およびTh1細胞の産生および/または活性の抑制を示す。
適切には、ES成分から単離されたタンパク質は、カテプシンLではない。
適切には、組成物により処置されたT細胞介在性炎症性免疫反応は、炎症促進性免疫反応である。典型的な炎症促進性免疫反応は、Th1介在性免疫反応であり、この進行は、本発明の本態様の組成物投与後に抑制される。特に、この組成物は、Th1細胞の誘導および機能を抑制または阻害する。適切には、Th1細胞産生の上記抑制または阻害は、抗炎症性サイトカイン、特にIL−10の産生により引き起こされる。適切には、IL−10産生は、ES成分またはその分画あるいは産物の投与により誘導される樹状細胞の成熟後に誘導される。上記抑制は、サイトカインTGF−ベータの産生または機能の強化によりさらに媒介されることができる。さらに、前記炎症促進性免疫反応の抑制は、ES成分またはTreg(制御性T細胞)を刺激するその成分に起因し、細胞間接触により炎症促進性免疫反応の抑制を媒介することができる。
適切には、組成物により処置されたT細胞介在性炎症性免疫反応は、炎症促進性免疫反応である。典型的な炎症促進性免疫反応は、Th1介在性免疫反応であり、この進行は、本発明の本態様の組成物投与後に抑制される。特に、この組成物は、Th1細胞の誘導および機能を抑制または阻害する。適切には、Th1細胞産生の上記抑制または阻害は、抗炎症性サイトカイン、特にIL−10の産生により引き起こされる。適切には、IL−10産生は、ES成分またはその分画あるいは産物の投与により誘導される樹状細胞の成熟後に誘導される。上記抑制は、サイトカインTGF−ベータの産生または機能の強化によりさらに媒介されることができる。さらに、前記炎症促進性免疫反応の抑制は、ES成分またはTreg(制御性T細胞)を刺激するその成分に起因し、細胞間接触により炎症促進性免疫反応の抑制を媒介することができる。
適切には、ES成分は、寄生虫Fasciola hepaticaにより放出される排泄/分泌産物を含む。一実施形態において、ES成分は、単離形態または精製形態として提供されることができる。ES成分は、生組織由来のES成分の回収により得ることができる。
他の実施形態において、ES成分は、複数の分画に分画されることができ、上記得られた分画の少なくとも1つは、本発明の本態様の組成物として使用される。さらなる実施形態において、具体的な分子が、ES成分から単離または精製されることができる。さらなる実施形態において、具体的な分子を組換え手段により産生することができる。
一実施形態において、ES成分は、少なくとも1つのカテプシンLプロテイナーゼ(FhCatL)タンパク質が欠乏している。
さらなる実施形態において、ES成分内に存在する場合に単離または同定された分画またはペプチドは、組換え手段により産生される。このような産物は、ES成分から同定された、2つ以上のペプチド成分を含有することができる。
本発明の第2の態様は、T細胞介在性炎症促進性状態の予防および/または処置のための医薬組成物を提供し、この場合、組成物は、Fasciola hepaticaの排泄/分泌(ES)成分または分画あるいはそこから単離されたタンパク質もしくはペプチドの誘導体、突然変異体、断片もしくは変異体および薬学的に許容される賦形剤または担体を含む。
T細胞介在性炎症促進性状態により、本発明者らは、天然において炎症促進性であり、Th1細胞およびCTL(細胞傷害性Tリンパ球)により媒介される免疫反応を意味する。炎症促進性反応は、IL−12およびIFN−ガンマ等の炎症促進性サイトカインにより促進されることができる。
本発明のさらなる態様において、このような処置を必要とする被検体においてT細胞介在性免疫反応を調節する方法を提供し、この方法は、
このような処置を必要とする被検体に、Fasciola hepatica由来の排泄/分泌(ES)成分もしくは分画または誘導体産物、そこから単離されたタンパク質またはペプチドの突然変異体、断片もしくは変異体を含む薬剤の有効量を投与するステップを含む。
このような処置を必要とする被検体に、Fasciola hepatica由来の排泄/分泌(ES)成分もしくは分画または誘導体産物、そこから単離されたタンパク質またはペプチドの突然変異体、断片もしくは変異体を含む薬剤の有効量を投与するステップを含む。
適切には、Fasciola hepaticaのES成分または分画または誘導体産物、突然変異体、またはそこから得られた断片またはタンパク質が、
被検体のIL−10サイトカインレベルの増加、
被検体のTGF−ベータサイトカインレベルの増加、
制御性T細胞の増加、
IL−12、IL−2および/またはIFN−ガンマ等の少なくとも1つの炎症促進性サイトカインの減少、
細胞傷害性Tリンパ球の減少、
Th1細胞の減少または
混合リンパ球反応の低下
の少なくとも1つを媒介するよう作用する。
被検体のIL−10サイトカインレベルの増加、
被検体のTGF−ベータサイトカインレベルの増加、
制御性T細胞の増加、
IL−12、IL−2および/またはIFN−ガンマ等の少なくとも1つの炎症促進性サイトカインの減少、
細胞傷害性Tリンパ球の減少、
Th1細胞の減少または
混合リンパ球反応の低下
の少なくとも1つを媒介するよう作用する。
適切には、T細胞介在性免疫反応は、T細胞介在性炎症促進性免疫反応である。
適切には、被検体は、自己免疫疾患の処置またはそれに対する防御を必要とする。
本発明の本態様の一実施形態において、T細胞介在性炎症促進性免疫反応が抑制される。理論に制約されることを望まないが、本発明の本態様の方法に従い、この抑制は、Fasciola hepatica由来の排泄/分泌(ES)成分を含む薬剤と免疫細胞とが接触するステップに起因する。
本明細書において定義される、サイトカイン産生の増加に関連して使用される場合の「上方制御」という語句は、そのサイトカインの活性または発現が休止細胞に認められたものに比べ大きいことを意味する。
本明細書において定義される、サイトカイン産生の低下に関連して使用される場合の「抑制」という語句は、サイトカインの活性または発現が休止細胞に認められたものに比べ小さいことを意味する。
本明細書において定義される、サイトカイン産生の阻害に関連して使用される場合の「阻害」という語句は、サイトカインの活性または発現が休止細胞に認められた活性または発現濃度に比較した場合、阻害または実質的に阻害されていることを意味する。
適切には、ES成分の投与は、IL−12および/またはIFN−ガンマ等の炎症促進性サイトカインの抑制およびIL−10および/またはTGF−ベータ等の抗炎症性サイトカインの上方制御を生じる。
本発明のさらなる実施形態は、Fasciola hepatica由来の排泄/分泌(ES)成分または誘導体産物あるいはそこから単離されたタンパク質またはペプチドの突然変異体、断片もしくは変異体を含む有効量の薬剤が、少なくとも1つの免疫細胞型の少なくとも1つの細胞表面活性分子と連結、結合または会合することを提供し、これは、その細胞の1つまたは複数の機能的活性の抑制、阻害または下方制御を生じる。
本発明の一実施形態において、機能が調節される免疫細胞は、自然免疫系の少なくとも1つの細胞である。適切には、細胞は、抗原プロセッシングおよび提示機能を有する細胞型であり、例えば、抗原提示細胞(APC)、例えば、樹状細胞またはマクロファージあるいはB細胞である。
APCが樹状細胞である場合、それは、未成熟樹状細胞、半成熟樹状細胞であってよく、または成熟樹状細胞であってよい。
さらなる実施形態において、自然免疫系の細胞は、抗原提示細胞として機能しない細胞、例えば、肥満細胞である。肥満細胞は、IL−4等のサイトカインを分泌し、したがって、免疫反応を促進する役割を有することが知られている。しかし、これらは、関連する抗原プロセッシング機能を有さない。
一実施形態において、被検体は、哺乳動物である。さらなる実施形態において、哺乳動物は、ヒトである。
理論に制約されることを望まないが、本発明の発明者らは、Fasciola hepatica由来の排泄/分泌(ES)成分の投与後に生じるT細胞反応の下方制御が、抗原提示細胞(APC)および特に、免疫反応を抑制するIL−10および/またはTGF−ベータ等のサイトカインプロフィールを発現する制御性T細胞(Treg)の産生を誘導する、樹状細胞(DC)の活性を調節することにより引き起こされると考える。
理論に制約されることを望まないが、本発明者らは、少なくとも1つの特異的なタンパク質分子が免疫機能調節に関与する排泄/分泌(ES)成分内に存在し、この少なくとも1つのタンパク質が、認められた免疫調節に関与すると考える。さらに、またはタンパク質の存在以外のものとして、脂質、リポペプチドまたはペプチド分子がES成分に存在し、下方制御に関与するかも知れない。
IL−10発現の促進に加え、ES成分分画はまた、自然免疫系の細胞由来の他の抗炎症性サイトカインの発現を誘導することができる。
さらに、本発明者らは、樹状細胞の機能が、ES成分に暴露後に調節されることを同定したが、自然免疫系の他の細胞、例えばマクロファージの機能もまた、調節されることができ、この調節は、抗炎症性反応を促進する。
さらに、ES成分は、少なくとも1つのToll様受容体(TLR)リガンドをさらに含むことができる。しかし、本発明の本態様の他の実施形態において、TLRリガンド(作動薬)を本発明の組成物とともに外部から投与することができる。
したがって、一実施形態において、本方法は、前記組成物とともに少なくとも1つのTLR作動薬を投与するステップをさらに含むことができる。
TLR作動薬は、TLR−2、TLR−3、TLR−4、TLR−5、TLR−7、TLR−8およびTLR−9の少なくとも1つに結合特異性を有することができる。適切なTLR作動薬の具体例は、Pam3CSK4、ザイモサン、ポリIC、dsRNA、LPS(リポポリサッカライド)、モノホスホリル脂質A(MPL)、フラジェリン、CpG−ODN(CPG−オリゴデオキシヌクレオチド)、イミキモド、R838およびR837を含むがそれだけに限定されない。さらに、Bordetella pertussisおよびMycobacterium tuberculosis等の全菌体もまた、TLR作動薬(Toll作動薬)として作用することができる。さらに、上記のTLR作動薬の適切な類似体もまた使用することができ、この場合、この類似体は、少なくとも1つのToll様受容体を活性化するよう機能する。
本発明のさらなる態様は、自己免疫疾患の処置方法を提供し、
(i)Fasciola hepatica由来のES成分またはその分画あるいはそこから単離されたタンパク質を得るステップと、
(ii)ES成分または分画あるいはペプチドの治療的有効量を、自己免疫疾患を患う個体に投与するステップ
を含む。
(i)Fasciola hepatica由来のES成分またはその分画あるいはそこから単離されたタンパク質を得るステップと、
(ii)ES成分または分画あるいはペプチドの治療的有効量を、自己免疫疾患を患う個体に投与するステップ
を含む。
適切には自己免疫疾患は、リウマチ様関節炎または多発性硬化症からなる群から選択される。さらなる自己疾患について、以降に詳述する。
適切にはES成分またはその分画あるいはそこから単離されたタンパク質は、
混合リンパ球反応を阻害し、
細胞傷害性Tリンパ球反応を阻害し、
Th1リンパ球を誘導し、
Th1サイトカインプロフィールを誘導し、
IL−2産生を阻害し、
IL−12産生を阻害し、
インターフェロンガンマ産生を阻害すること
の少なくとも1つからなる群から選択される免疫反応を抑制することができる。
混合リンパ球反応を阻害し、
細胞傷害性Tリンパ球反応を阻害し、
Th1リンパ球を誘導し、
Th1サイトカインプロフィールを誘導し、
IL−2産生を阻害し、
IL−12産生を阻害し、
インターフェロンガンマ産生を阻害すること
の少なくとも1つからなる群から選択される免疫反応を抑制することができる。
さらに、ES成分またはその分画あるいはそこから単離されたタンパク質は、
IL−10産生を強化し、
TGF−ベータ産生を強化し、
制御性T細胞の機能を強化し、かつ/または
Th2サイトカインプロフィールを強化すること
により免疫反応の進行をさらに抑制することができる。
IL−10産生を強化し、
TGF−ベータ産生を強化し、
制御性T細胞の機能を強化し、かつ/または
Th2サイトカインプロフィールを強化すること
により免疫反応の進行をさらに抑制することができる。
本明細書において定義される、サイトカイン産生の阻害に関連して使用される場合の「阻害」という語句は、サイトカインの活性または発現が休止細胞に認められた活性または発現濃度に比較した場合、阻害または実質的に阻害されていることを意味する。
「ES成分タンパク質を投与する」という語句は、ES成分タンパク質の投与およびES成分タンパク質をコードする核酸配列の投与をともに含む。後者の場合において、ES成分タンパク質は、動物においてin vivoで産生される。
ES成分由来の分画またはペプチドを得るために、ES成分は、ゲル濾過クロマトグラフィー、例えばSepharyl S−3000により分離後、ポリアクリルアミドゲル電気泳動(SDS−PAGE)し、続いてウェスタン法により分析することができる。
「有効量」により、それは、自己免疫疾患を患う患者に投与される場合、ES成分またはその分画あるいはそこから単離されたタンパク質の濃度が治療的に有益な効果を産生することを意味する。本発明のES成分またはその分画あるいはそこから単離されたタンパク質の有効量は、疾患状態、年齢、性別および被検動物の体重等の因子によって異なる。投与計画を調節し、至適治療反応を提供することができる。例えば、1日に用量を数回に分割して投与することができ、または用量を、緊急の治療状況である場合、比例的に減量することができる。
別の実施形態において、本発明は、レシピエント動物の移植された器官または組織に対する免疫寛容を誘導する方法を提供し、これは、器官または組織の移植前にレシピエント動物に、Fasciola hepatica由来のES成分またはその分画あるいはそこから単離されたタンパク質の有効量を投与することを含む。
本発明は、Fasciola hepatica由来のES成分またはその分画あるいはそこから単離されたタンパク質の有効量を使用し、移植された器官または組織に対する免疫寛容を誘導することを含む。
「免疫寛容を誘導する」という語句は、長期の全身免疫欠損を誘導することなく、免疫系に特定抗原への非反応性を付与することを意味する。「抗原」という語句は、免疫反応を誘導することができる物質を意味する。自己免疫疾患の場合において、免疫寛容は、免疫系に、宿主が異物として認識しており、それゆえ、自己免疫反応を引き起こす自己抗原への非反応性を付与することを意味する。アレルギーの場合において、免疫寛容は、免疫系に、通常、宿主の免疫反応を引き起こすアレルギー抗原に、非反応性を付与することを意味する。移植の場合において、免疫寛容は、免疫系に、移植片上の抗原への非反応性を付与することを意味する。アロ抗原は、種のいくつかのメンバーにのみ見つけられる抗原、例えば、血液型抗原を指す。異種抗原は、ある種のメンバーに存在するが他のメンバーには存在しない抗原を指す。これに対応して、同種移植片は、同種のメンバー間の移植片であり、異種移植片は、異種のメンバー間の移植片である。
レシピエントは、げっ歯類、ブタ、ネコ、イヌ、反芻動物、非ヒト霊長類および好ましくはヒトを含めた動物界のいずれのメンバーであってもよい。移植される器官または組織は、レシピエントと同種由来(同種移植片)であってよく、または別種由来(異種移植片)であってよい。組織または器官は、心臓、肝臓、腎臓、肺、膵臓、膵島、脳組織、角膜、骨、腸、皮膚および造血細胞を含めたいずれの組織または器官であってもよい。
本発明の方法を使用して、移植片対宿主病を予防することができ、この場合、移植片の免疫細胞は、レシピエントの免疫系において免疫攻撃を開始する。これは、移植された組織が免疫細胞を含有する場合、例えば、骨髄またはリンパ組織を、例えば、白血病、再生不良性貧血および酵素もしくは免疫疾患を処置する場合に移植する場合に生じうる。
したがって、別の実施形態において、本発明は、器官または組織移植片を受け入れるレシピエント動物の移植片対宿主病を予防または阻害する方法を提供し、レシピエント動物に移植する前に、器官または組織に、Fasciola hepatica由来のES成分またはその分画あるいはそこから単離されたタンパク質の有効量を投与することを含む。
本発明は、Fasciola hepatica由来のES成分またはその分画あるいはそこから単離されたタンパク質の有効量を使用して移植片対宿主病を予防または阻害することを含む。
本発明の方法を使用して、アレルギー性反応を処置または予防することもできる。アレルギー性反応において、免疫系は、通常無害、無毒な抗原またはアレルゲンに対する攻撃を開始する。本発明の方法を使用して予防または処置することができるアレルギーは、花粉症、喘息、アトピー性湿疹、およびウルシおよびツタ(ivy)、イエダニ、ハチ花粉、ナッツ、貝、ペニシリンおよびその他多くのものに対するアレルギーを含むがそれだけに限定されない。
したがって、さらなる実施形態において、本発明は、アレルギーを予防または処置する方法を提供し、Fasciola hepatica由来のES成分またはその分画あるいはそこから単離されたタンパク質の有効量を、アレルギーを有するまたは有する疑いのある動物に投与することを含む。本発明は、Fasciola hepatica由来のES成分またはその分画あるいはそこから単離されたタンパク質の有効量を使用して、アレルギーを予防または処置することを含む。
別の態様において、本発明は、Fasciola hepatica感染を患う宿主において媒介される免疫抑制を予防する方法を提供し、Fasciola hepatica由来のES成分またはその分画の有効量をその必要とする動物に投与することを含む。
本発明のさらなる態様は、免疫反応の下方制御により有利となる疾患または状態の処置および/または予防の方法に関し、この方法は、
このような処置を必要する被検体に、Fasciola hepatica由来の排泄/分泌(ES)成分もしくは分画、またはそこから単離されたタンパク質またはペプチドの誘導体、突然変異体、分画、断片もしくは変異体を含む薬剤の治療的有効量を投与するステップを含む。
このような処置を必要する被検体に、Fasciola hepatica由来の排泄/分泌(ES)成分もしくは分画、またはそこから単離されたタンパク質またはペプチドの誘導体、突然変異体、分画、断片もしくは変異体を含む薬剤の治療的有効量を投与するステップを含む。
適切には、免疫反応は、炎症性免疫反応、例えば、Th1細胞またはThIL−17細胞により媒介される免疫反応である。
被検体は、哺乳動物、特にヒトであってよい。適切には、被検体は、免疫介在性状態、例えば、アレルギーまたは自己免疫障害である状態を有する。一実施形態において、状態は、自己免疫疾患、特に、Th1介在性および/またはThIL−17介在性自己免疫疾患である。
具体的な実施形態において、免疫介在性疾患は、自己免疫状態および多発性硬化症、クローン病、炎症性腸疾患、1型糖尿病、2型糖尿病、脳卒中、アテローム性動脈硬化症、関節炎(リウマチ様関節炎、若年性関節リウマチ、変形性関節症、乾癬性関節炎を含む)、乾癬、紅斑性狼瘡、全身性紅斑性狼瘡、橋本甲状腺炎、重症筋無力症、自己免疫性貧血、血小板減少症、喘息またはアトピー性疾患を含むがそれだけに限定されない疾患を含むがそれだけに限定されない。
「免疫介在性疾患」の定義もまた、他の免疫介在性障害、例えば1つまたは複数の皮膚炎(アトピー性皮膚炎および湿疹様皮膚炎を含む)、シェーグレン症候群、シェーグレン症候群に続発する乾性角結膜炎、円形脱毛症、節足動物の刺咬傷反応によるアレルギー反応、アフタ性潰瘍、虹彩炎、結膜炎、角結膜炎、潰瘍性大腸炎、喘息、アレルギー性喘息、皮膚紅斑性狼瘡、強皮症、膣炎、直腸炎、薬疹、ハンセン病逆転反応(leprosy reversal reactions)、癩性結節性紅斑、自己免疫性ブドウ膜炎、アレルギー性脳脊髄炎、急性壊死性出血性脳症、特発性両側性進行性感音難聴、再生不良性貧血、真性赤血球性貧血、特発性血小板減少症、多発軟骨炎、ウェゲナー肉芽腫症、慢性活動性肝炎、スティーブンス・ジョンソン症候群、特発性スプルー、扁平苔癬、グレーブス眼症、サルコイドーシス、大腸炎、原発性胆汁性肝硬変、後ブドウ膜炎、間質性肺線維症およびセリアック病を含む。
さらなる実施形態において、疾患または状態は、具体的なサイトカインプロフィールの発現が疾患の発症または進行に寄与することが示された神経変性状態を含むことができる。このような状態および疾患は、アルツハイマー疾患(AD)、軽度認知機能障害(MCI)、多発性硬化症(MS)、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症(ALS)、ハンチントン病、CJD等のプリオン病、AIDS関連性認知症、脳炎、脳卒中および頭部外傷を含むことができる。
神経変性状態はまた、細菌およびウィルス感染の結果として生じる脳の急性炎症状態を含むことができる。
神経変性状態はまた、細菌およびウィルス感染の結果として生じる脳の急性炎症状態を含むことができる。
上記の自己免疫状態に加えて、本発明は、望ましくないまたは不必要な免疫反応が抗原の提示により誘発されるいずれの免疫介在性障害にも及ぶことができる。
したがって、本発明のなお追加の態様は、被検体の異常な、不必要なまたは不適切な免疫介在性反応を特徴とする状態の予防および/または治療目的の処置の方法を提供し、この方法は、Fasciola hepatica由来の排泄/分泌(ES)成分もしくは分画、誘導体産物またはそこから単離されたタンパク質もしくはペプチドの突然変異体、断片もしくは変異体を含む有効量の薬剤を被検体に投与することを含み、これらの薬剤は、上記細胞型の免疫活性を十分に抑制、阻害または下方制御する時間および状態下において、自然免疫系に属する少なくとも1つの細胞型に連結し、結合しまたは会合する。
典型的な自然免疫系に属する少なくとも1つの細胞型は、樹状細胞(DC)または濾胞性DC、マクロファージあるいはB細胞等の抗原提示細胞(APC)を含む。別法として、自然免疫系に属する少なくとも1つの細胞型は、肥満細胞等の具体的な抗原提示細胞機能を呈しない少なくとも1つの細胞であってよい。
APCが樹状細胞である場合、それは、未成熟、半成熟または成熟樹状細胞であってよい。
本発明のさらなる態様は、Fasciola hepatica由来の排泄/分泌(ES)成分もしくはその断片、誘導体産物またはそこから単離されたタンパク質もしくはペプチドの突然変異体、断片もしくは変異体の免疫介在性疾患の処置への使用を提供する。
本発明のさらなる態様は、Fasciola hepatica由来の排泄/分泌(ES)成分もしくはその断片、誘導体産物またはそこから単離されたタンパク質もしくはペプチドの突然変異体、断片もしくは変異体の免疫介在性疾患の処置のための医薬品の調製における使用を提供する。
本発明のなお追加の態様は、Fasciola hepatica由来の排泄/分泌(ES)成分またはそこから単離されたタンパク質もしくはペプチドの誘導体産物もしくは突然変異体、断片もしくは変異体の自己免疫疾患の処置のための医薬品の調製における使用を提供する。
一実施形態において、ES成分は、カテプシンLプロテイナーゼを欠乏する。
さらなる実施形態において、組成物は、さらにカテプシンLプロテイナーゼ阻害剤を含む。
本発明のさらに追加の態様は、Fasciola hepatica由来の排泄/分泌(ES)成分もしくは分画もしくは誘導体産物、またはそこから単離されたタンパク質もしくはペプチドの突然変異体、断片もしくは変異体の炎症状態の処置のための医薬品の調製における使用を提供する。
本発明のさらに追加の態様は、Fasciola hepatica由来の排泄/分泌(ES)成分もしくは誘導体産物またはそこから単離されたタンパク質もしくはペプチドの突然変異体、断片もしくは変異体の神経変性疾患の処置のための医薬品の調製における使用を提供する。
本発明のさらに追加の態様は、Fasciola hepatica由来の排泄/分泌(ES)成分もしくは誘導体産物またはそこから単離されたタンパク質もしくはペプチドの突然変異体、断片もしくは変異体の心臓病または心疾患の処置のための医薬品の調製における使用を提供する。
樹状細胞調節
本発明者らは、Fasciola hepatica由来の排泄/分泌(ES)成分を使用して、サイトカイン発現プロフィールおよび樹状細胞の成熟状態を調節することができることをさらに同定した。
本発明者らは、Fasciola hepatica由来の排泄/分泌(ES)成分を使用して、サイトカイン発現プロフィールおよび樹状細胞の成熟状態を調節することができることをさらに同定した。
樹状細胞は、免疫反応の主要な調節因子である。これらが発現するサイトカインプロフィールは、免疫反応の進行において重要な影響を有する。特に、樹状細胞により発現されるサイトカインは、Th1またはTh2経路の下流に偏らせる場合またはThIL−17またはサプレッサー活性を持つT細胞の産生を誘導する場合に重要となりうる。
F.hepatica感染マウスの腹腔から単離された樹状細胞は、高濃度のIL−10を分泌し、未感作マウス由来の樹状細胞に比べ、CD80、CD86、CD40およびMHCクラスIIの細胞表面発現は顕著に低いが、高濃度のCCR5を有した。F.hepaticaは、IL−10またはTGF−ベータ等の樹状細胞産生のサイトカインを誘導することにより、T細胞反応を抑制することを示し、これは、サプレッサーT細胞活性を誘導する。
したがって、本発明のさらなる態様は、このような処置を必要とする被検体の免疫介在性疾患の処置に適切な免疫反応を抑制する方法を提供し、この方法は、
樹状細胞の機能を調節するために、単離された樹状細胞を、Fasciola hepatica由来の排泄/分泌(ES)成分もしくは分画もしくは誘導体産物、またはそこから単離されたタンパク質もしくはペプチドの突然変異体、断片もしくは変異体を含む薬剤にex−vivoで暴露し、
樹状細胞を被検体に投与する、
ステップを含み、これにより、続いて被検体内の樹状細胞により誘導された免疫反応は、免疫介在性疾患の発症または進行を十分に予防する。
樹状細胞の機能を調節するために、単離された樹状細胞を、Fasciola hepatica由来の排泄/分泌(ES)成分もしくは分画もしくは誘導体産物、またはそこから単離されたタンパク質もしくはペプチドの突然変異体、断片もしくは変異体を含む薬剤にex−vivoで暴露し、
樹状細胞を被検体に投与する、
ステップを含み、これにより、続いて被検体内の樹状細胞により誘導された免疫反応は、免疫介在性疾患の発症または進行を十分に予防する。
一実施形態において、樹状細胞を活性化して、高濃度のサイトカインIL−10またはTGF−ベータ等の他の抗炎症性サイトカインあるいはTregの誘導を促進する他のサイトカインを発現する。
本発明の本態様の一実施形態において、樹状細胞は、被検体に対して自家性である。
一実施形態において、樹状細胞は、未成熟樹状細胞である。
別法として、樹状細胞は、成熟樹状細胞である。
別法として、樹状細胞は、成熟樹状細胞である。
さらなる実施形態において、樹状細胞は、Toll様受容体(TLR)リガンドとともに投与することができ、この例は、Pam3Cysである。
さらに、自己抗原を、場合により、樹状細胞とともに共投与することができる。自己抗原の例は、MOGまたはミエリン塩基性タンパク質である。
本発明のなお追加の態様は、Fasciola hepatica由来の排泄/分泌(ES)成分の自己免疫疾患の処置のための医薬品の調製における樹状細胞の処置への使用を提供する。
IL−17活性の阻害
本発明者らは、さらに驚くことに、Fasciola hepatica由来の排泄/分泌(ES)成分がIL−17(いわゆるThIL−17細胞)を発現するT細胞の誘導を抑制することを示した。IL−17は、自己免疫疾患および慢性炎症状態、特に多発性硬化症、大腸炎およびリウマチ様関節炎の発症および進行の主要な調節因子として同定されている。したがって、Fasciola hepatica由来の排泄/分泌(ES)成分もしくは誘導体産物またはそこから単離されたタンパク質もしくはペプチドの突然変異体、断片もしくは変異体を含む薬剤によるIL−17濃度の調節は、自己免疫疾患および慢性炎症状態の予防および/または処置に適用可能な新規の治療を提供する。
本発明者らは、さらに驚くことに、Fasciola hepatica由来の排泄/分泌(ES)成分がIL−17(いわゆるThIL−17細胞)を発現するT細胞の誘導を抑制することを示した。IL−17は、自己免疫疾患および慢性炎症状態、特に多発性硬化症、大腸炎およびリウマチ様関節炎の発症および進行の主要な調節因子として同定されている。したがって、Fasciola hepatica由来の排泄/分泌(ES)成分もしくは誘導体産物またはそこから単離されたタンパク質もしくはペプチドの突然変異体、断片もしくは変異体を含む薬剤によるIL−17濃度の調節は、自己免疫疾患および慢性炎症状態の予防および/または処置に適用可能な新規の治療を提供する。
本発明のなお追加の態様において、免疫介在性状態の予防および/または処置の方法を提供し、この方法は、
Fasciola hepatica由来の排泄/分泌(ES)成分もしくは誘導体産物またはそこから単離されたタンパク質もしくはペプチドの突然変異体、断片もしくは変異体を含む薬剤を投与するステップ
を含み、この場合、薬剤投与がIL−17を分泌するT細胞の産生を抑制または阻害するよう作用する。
Fasciola hepatica由来の排泄/分泌(ES)成分もしくは誘導体産物またはそこから単離されたタンパク質もしくはペプチドの突然変異体、断片もしくは変異体を含む薬剤を投与するステップ
を含み、この場合、薬剤投与がIL−17を分泌するT細胞の産生を抑制または阻害するよう作用する。
本発明のさらに追加の態様において、免疫介在性状態の予防および/または処置の方法を提供し、この方法は、
Fasciola hepatica由来の排泄/分泌(ES)成分もしくは誘導体産物またはそこから単離されたタンパク質もしくはペプチドの突然変異体、断片もしくは変異体を含む薬剤を投与するステップ
を含み、この場合、薬剤投与がIL−23の産生を抑制または阻害するよう作用する。
Fasciola hepatica由来の排泄/分泌(ES)成分もしくは誘導体産物またはそこから単離されたタンパク質もしくはペプチドの突然変異体、断片もしくは変異体を含む薬剤を投与するステップ
を含み、この場合、薬剤投与がIL−23の産生を抑制または阻害するよう作用する。
典型的には、IL−23の阻害は、IL−17の産生の阻害をさらに生じるだろう。
本発明のさらに追加の態様は、免疫介在性疾患の処置のためのIL−17産生を阻害する医薬品の調製において、Fasciola hepatica由来の排泄/分泌(ES)成分、そこから単離されたタンパク質の誘導体、突然変異体、断片もしくは変異体の使用を提供する。
IL−12抑制
本発明者らは、ES投与の結果として、IL−12の産生が抑制されることをさらに同定した。IL−12は、免疫反応の促進を促す役割を有し、特に、これらは、Th1およびThIL−17細胞により媒介される。この抑制は、IL−12サイトカインファミリー、例えばIL−23およびIL−27のメンバーにまでさらに及ぶことができる。
本発明者らは、ES投与の結果として、IL−12の産生が抑制されることをさらに同定した。IL−12は、免疫反応の促進を促す役割を有し、特に、これらは、Th1およびThIL−17細胞により媒介される。この抑制は、IL−12サイトカインファミリー、例えばIL−23およびIL−27のメンバーにまでさらに及ぶことができる。
したがって、本発明のさらなる態様は、IL−12産生の抑制またはIL−12ファミリーメンバーの産生の抑制のための組成物を提供し、この組成物は、Fasciola hepatica由来の排泄/分泌(ES)成分もしくは誘導体産物またはそこから単離されたタンパク質もしくはペプチドの突然変異体、断片もしくは変異体を含む。
さらに追加の態様は、IL−12産生の抑制またはIL−12ファミリーメンバーの産生の抑制において使用する医薬組成物を提供し、この場合、組成物は、Fasciola hepatica由来の排泄/分泌(ES)成分もしくは誘導体産物またはそこから単離されたタンパク質もしくはペプチドの突然変異体、断片もしくは変異体を含む。本発明のなお追加の態様は、IL−12またはIL−12ファミリーメンバーの産生を抑制する方法を提供し、この方法は、
Fasciola hepatica由来の排泄/分泌(ES)成分もしくは誘導体産物またはそこから単離されたタンパク質もしくはペプチドの突然変異体、断片もしくは変異体を含む薬剤の有効量を投与するステップ
を含む。
Fasciola hepatica由来の排泄/分泌(ES)成分もしくは誘導体産物またはそこから単離されたタンパク質もしくはペプチドの突然変異体、断片もしくは変異体を含む薬剤の有効量を投与するステップ
を含む。
一実施形態において、IL−12ファミリーメンバーは、IL−23および/またはIL−27である。
肝吸虫ホモジネート(LFH)
Fasciola hepaticaのES(排泄/分泌)成分もしくは誘導体産物またはそこから単離されたタンパク質もしくはペプチドの突然変異体、断片もしくは変異体の投与に加え、組成物、上記組成物の使用および本発明の方法はまた、ES成分の代わりに肝吸虫ホモジネート(LFH)の使用を介して実現することができる。
Fasciola hepaticaのES(排泄/分泌)成分もしくは誘導体産物またはそこから単離されたタンパク質もしくはペプチドの突然変異体、断片もしくは変異体の投与に加え、組成物、上記組成物の使用および本発明の方法はまた、ES成分の代わりに肝吸虫ホモジネート(LFH)の使用を介して実現することができる。
本発明者らは、驚くことに、LFHの投与が免疫介在性炎症状態において重要となる特定のサイトカインの発現を調節することができることを同定した。例えば、肝吸虫ホモジネート(LFH)もしくは分画もしくは誘導体産物、またはそこから単離されたタンパク質もしくはペプチドの突然変異体、断片もしくは変異体は、サイトカインIL−4およびIL−10の発現レベルを調節することができる。
したがって、本発明のさらなる態様は、炎症状態の予防および/または処置のための組成物を提供し、この組成物は、肝吸虫ホモジネート(LFH)もしくは誘導体産物またはそこから単離されたタンパク質もしくはペプチドの突然変異体、断片もしくは変異体を含む。
一実施形態において、炎症状態は、T細胞介在性炎症性免疫反応である。
本発明のなお追加の態様は、炎症状態の予防および/または処置のための医薬組成物を提供し、この場合、組成物は、肝吸虫ホモジネート(LFH)もしくは誘導体産物またはそこから単離されたタンパク質もしくはペプチドの突然変異体、断片もしくは変異体を含む。
一実施形態において、炎症状態は、T細胞介在性炎症性免疫反応である。
本発明のなお追加の態様は、炎症状態を調節する方法を提供し、この方法は、
このような処置を必要とする被検体に肝吸虫ホモジネート(LFH)もしくは誘導体産物またはそこから単離されたタンパク質もしくはペプチドの突然変異体、断片もしくは変異体を含む薬剤の有効量を被検体に投与するステップ
を含む。
このような処置を必要とする被検体に肝吸虫ホモジネート(LFH)もしくは誘導体産物またはそこから単離されたタンパク質もしくはペプチドの突然変異体、断片もしくは変異体を含む薬剤の有効量を被検体に投与するステップ
を含む。
一実施形態において、炎症状態は、T細胞介在性炎症性免疫反応である。
一実施形態において、炎症状態は、免疫介在性状態であり、例えば、アレルギーまたは自己免疫障害である。さらなる実施形態において、状態は、自己免疫疾患、特にTh1介在性および/またはThIL−17介在性自己免疫疾患である。具体的な実施形態において、免疫介在性疾患は、多発性硬化症、クローン病、炎症性腸疾患、1型糖尿病、2型糖尿病、脳卒中、アテローム性動脈硬化症、関節炎(リウマチ様関節炎、若年性関節リウマチ、変形性関節症、乾癬性関節炎を含む)、乾癬、紅斑性狼瘡、全身性紅斑性狼瘡、橋本甲状腺炎、重症筋無力症、自己免疫性貧血、血小板減少症、喘息またはアトピー性疾患を含むことができるがそれだけに限定されない。
免疫介在性状態、例えば、上記のものの調節においてLFHの新規および思いがけない使用を同定するのに加え、本発明者らはまた、驚くことに、LFHがIL−4レベルを調節する場合、特に有効であることを同定した。
本発明のさらに追加の態様において、認知機能障害の予防および/または処置のための方法を提供し、この方法は、このような治療を必要とする個体に、肝吸虫ホモジネート(LFH)もしくは誘導体産物またはそこから単離されたタンパク質もしくはペプチドの突然変異体、断片もしくは変異体を含む薬剤を投与するステップを含む。
本発明のさらなる態様は、認知機能障害の処置において、肝吸虫ホモジネート(LFH)もしくは誘導体産物またはそこから単離されたタンパク質もしくはペプチドの突然変異体、断片もしくは変異体を含む薬剤の使用にまで及ぶ。
さらに追加の態様は、認知機能障害の処置のための医薬品の調製において、肝吸虫ホモジネート(LFH)もしくは誘導体産物またはそこから単離されたタンパク質もしくはペプチドの突然変異体、断片もしくは変異体の使用に関する。
好ましい実施形態において、LFHの投与は、抗炎症性サイトカイン、例えば、IL−4の上方制御および炎症促進性サイトカイン、例えば、IL−1の下方制御を生じる。好ましくは、上方制御は、海馬においてであり、最も好ましくは、この抗炎症性サイトカインプロフィールの上方制御は、ミクログリア細胞に存在するだろう。LFHまたはESを、脳または直接に中枢神経系(CNS)の別の領域に投与することが好ましい。
典型的に、上方制御される抗炎症性サイトカインは、IL−4、IL−10およびTGF−ベータである。下方制御される炎症促進性サイトカインは、典型的にIL−1ベータおよびTNF−アルファである。炎症促進性および抗炎症性サイトカインレベルの調節は、海馬において好ましく、サイトカインプロフィールのこの調節は、ミクログリア細胞において最も好ましい。
本発明のなお追加の態様は、脳またはCNSへの肝吸虫ホモジネート(LFH)もしくは誘導体産物またはそこから単離されたタンパク質もしくはペプチドの突然変異体、断片もしくは変異体の直接投与を介した認知機能障害の処置方法を提供する。
さらに追加の態様は、認知機能障害の処置のための、脳またはCNSに直接投与する医薬品の調製における、肝吸虫ホモジネート(LFH)もしくは誘導体産物またはそこから単離されたタンパク質もしくはペプチドの突然変異体、断片もしくは変異体の使用に関する。
さらに追加の態様は、免疫介在性状態の処置のための医薬品の調製における、肝吸虫ホモジネート(LFH)もしくは誘導体産物またはそこから単離されたタンパク質もしくはペプチドの突然変異体、断片もしくは変異体の使用に関する。
Toll様受容体(TLR)作動薬
本発明者らは、驚くことに、TLR作動薬がFasciola hepaticaのES(排泄/分泌)成分に存在することを同定した。このTLR作動薬は、免疫反応の誘導においてアジュバントとして非常に有用でありうる。
本発明者らは、驚くことに、TLR作動薬がFasciola hepaticaのES(排泄/分泌)成分に存在することを同定した。このTLR作動薬は、免疫反応の誘導においてアジュバントとして非常に有用でありうる。
TLR作動薬は、例えば、治療薬、例えば、癌または悪性状態の処置のためのワクチンとともにまたは感染性疾患に対するワクチンとともに投与することもできる。
さらなる態様において、本発明は、樹状細胞の成熟を誘導する方法において、Fasciola hepaticaのES(排泄/分泌)成分内で同定されたTLR作動薬の使用にまで及ぶ。
本発明のなお追加の態様において、癌または感染性疾患の処置に適切な被検体においてTh1反応を誘導する方法を提供し、この方法は、
エフェクター細胞機能を促進する表現型に樹状細胞を成熟させるために、Fasciola hepaticaのES(排泄/分泌)成分から単離されたワクチンおよびTLR作動薬の存在下において、単離された樹状細胞を疾患特異的抗原にex−vivoで暴露するステップと、
樹状細胞を被検体に投与するステップ
を含み、それにより被検体に産生された免疫反応が、癌の発症または進行を十分に予防し、または病原性微生物感染を十分に予防し、それにより感染性疾患を予防する。
エフェクター細胞機能を促進する表現型に樹状細胞を成熟させるために、Fasciola hepaticaのES(排泄/分泌)成分から単離されたワクチンおよびTLR作動薬の存在下において、単離された樹状細胞を疾患特異的抗原にex−vivoで暴露するステップと、
樹状細胞を被検体に投与するステップ
を含み、それにより被検体に産生された免疫反応が、癌の発症または進行を十分に予防し、または病原性微生物感染を十分に予防し、それにより感染性疾患を予防する。
定義
本明細書において使用される、「免疫細胞」という語句は、造血系に由来する細胞を含み、免疫反応の役割を果たす。免疫細胞は、リンパ球、例えば、B細胞およびT細胞、ナチュラルキラー細胞、骨髄系細胞、例えば、単球、マクロファージ、好酸球、肥満細胞、好塩基球および顆粒球を含む。
本明細書において使用される、「免疫細胞」という語句は、造血系に由来する細胞を含み、免疫反応の役割を果たす。免疫細胞は、リンパ球、例えば、B細胞およびT細胞、ナチュラルキラー細胞、骨髄系細胞、例えば、単球、マクロファージ、好酸球、肥満細胞、好塩基球および顆粒球を含む。
本明細書において使用される、「T細胞」という語句は、CD4+T細胞およびCD8+T細胞を含む。「T細胞」という語句はまた、Tヘルパー1型T細胞およびTヘルパー2型T細胞ならびにさらにTh−IL17細胞を含む。
本明細書において使用される、「1つまたは複数の抗原提示細胞」またはその省略形「1つまたは複数のAPC」は、抗原のエンドサイトーシス吸着、プロセッシングおよび提示することができる1つまたは複数の細胞を指す。この語句は、専門の抗原提示細胞、例えば、Bリンパ球、単球、樹状細胞(DC)およびランゲルハンス細胞ならびにケラチノサイト、内皮細胞、グリア細胞、線維芽細胞および乏突起膠細胞等の他の抗原提示細胞を含む。「抗原提示」という語句は、細胞表面上においてMHC分子に結合されたペプチド断片としての抗原の表示を意味する。多くの様々な種類の細胞、例えば、マクロファージ、B細胞、濾胞性樹状細胞および樹状細胞を含めた細胞が、APCとして機能することができる。
本明細書において使用される、「免疫反応」という語句は、T細胞共刺激の調節により影響されるT細胞介在性および/またはB細胞介在性免疫反応を含む。免疫反応という語句は、T細胞活性化により間接的になされる抗体産生(液性反応)およびマクロファージ等のサイトカイン反応性細胞の活性化等の免疫反応をさらに含む。
本明細書において使用される、「1つまたは複数の樹状細胞」(DC)という語句は、その最も広義の内容の、1つまたは複数の樹状細胞を指し、抗原提示することができるあらゆるDCを含む。この語句は、免疫反応を開始し、かつ/またはTリンパ球に抗原を提示し、かつ/または免疫反応の刺激に必要な他のあらゆる活性化信号を有するT細胞を提供する全てのDCを含む。本明細書において、「DC」への言及は、樹状細胞の形態、表現型または機能活性を呈する細胞およびその突然変異体または変異体への言及を含めるものとして読むものとする。樹状細胞の形態学的特徴は、長い細胞質突起または多数の微細樹状突起を有する大細胞を含むことができるがそれだけに限定されない。表現型の特徴は、1つまたは複数のMHCクラスI分子、MHCクラスII分子、CD1またはCD4の発現を含むことができるがそれだけに限定されない。
本明細書において使用される、「抗原」という語句は、免疫反応を刺激することができるあらゆる有機または無機分子である。本明細書において使用される、「抗原」という語句は、免疫反応を刺激することができる、例えば、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、核酸分子、炭水化物分子、有機または無機分子に限定されないあらゆる分子にまで及ぶ。
本発明に関して「被検体」は、ヒト、霊長類および家畜動物(例えば、ヒツジ、ブタ、ウシ、ウマおよびロバ)、実験用試験動物、例えばマウス、ウサギ、ラットおよびモルモットならびにペット動物、例えばイヌおよびネコ等の哺乳動物を含み、包含する。本発明の目的において、哺乳動物は、ヒトであることが好ましい。
処置
本明細書において使用される「処置」という語句は、ヒトまたは非ヒト動物に有利となることができるあらゆる療法を指す。処置は、存在する状態に関してであってよく、または予防(予防的処置)であってよい。処置は、治癒、緩和または予防的効果を含むことができる。
本明細書において使用される「処置」という語句は、ヒトまたは非ヒト動物に有利となることができるあらゆる療法を指す。処置は、存在する状態に関してであってよく、または予防(予防的処置)であってよい。処置は、治癒、緩和または予防的効果を含むことができる。
より具体的には、本明細書において「治療的」および「予防的」処置の言及は、その最も広義の内容において考慮される。「治療的」という語句は、被検体が完全に回復するまで処置されることを必ずしも意味しない。同様に、「予防的」は、被検体が最終的に疾患状態にかからないことを必ずしも意味しない。
したがって、治療的および予防的処置は、特定の状態の症状の改善または特定の状態を進行する危険を予防あるいは低下させることを含む。「予防的」という語句は、特定の状態の重症度または発症を低下させるものとして見なすことができる。「治療的」はまた、存在する状態の重症度を低下させることができる。
投与
本発明において使用するFasciola hepatica由来の排泄/分泌(ES)成分もしくは誘導体産物またはそこから単離されたタンパク質もしくはペプチドの突然変異体、断片もしくは変異体は、単一で投与することができるが、医薬組成物として投与することが好ましく、これは、一般に、意図される投与経路に応じて選択される適切な医薬賦形剤、希釈剤または担体を含むだろう。
本発明において使用するFasciola hepatica由来の排泄/分泌(ES)成分もしくは誘導体産物またはそこから単離されたタンパク質もしくはペプチドの突然変異体、断片もしくは変異体は、単一で投与することができるが、医薬組成物として投与することが好ましく、これは、一般に、意図される投与経路に応じて選択される適切な医薬賦形剤、希釈剤または担体を含むだろう。
本発明において使用するFasciola hepatica由来の排泄/分泌(ES)成分もしくは誘導体産物またはそこから単離されたタンパク質もしくはペプチドの突然変異体、断片もしくは変異体を、あらゆる適切な経路を介して、処置を必要とする患者に投与することができる。正確な用量は、投与されるFasciola hepatica由来の排泄/分泌(ES)成分もしくは誘導体産物またはそこから単離されたタンパク質もしくはペプチドの突然変異体、断片もしくは変異体の形態の正確な性質を含めた多くの因子に応じて決定されるだろう。
好ましい投与経路は、非経口(皮下、筋肉内、静脈内を含む)であるが、いくつかのさらに適切な投与経路は、経口、経直腸、経鼻、局所(経頬および舌下を含む)、注入、経膣、皮内、腹腔内、頭蓋内、鞘内および硬膜外投与あるいは経口または鼻吸入を介した投与、例えば、ネブライザーまたは吸入器により、あるいは移植を含む(がそれだけに限定されない)。
静脈内注射において、有効成分は、発熱物質非含有であり、適切なpH、等張性および安定性を有する非経口的に許容される水溶液の形態であるだろう。当業者は、例えば、塩化ナトリウム注射液、リンゲル注射液または乳酸加リンゲル注射液などの等張性ベヒクルを使用して適切な溶液を十分に調製することができる。防腐剤、安定剤、緩衝剤、抗酸化剤および/または他の添加剤を、必要な場合含むことができる。
経口投与の医薬組成物は、錠剤、カプセル、粉末または液体形態であってよい。錠剤は、ゼラチンまたはアジュバント等の固体担体を含むことができる。一般に、液体医薬組成物は、水、石油、動物または植物油、鉱油あるいは合成油等の液体担体を含む。生理食塩溶液、デキストロースまたは他のサッカライド溶液あるいはエチレングリコール、プロピレングリコールまたはポリエチレングリコール等のグリコールを含むことができる。
また、組成物を、ミクロスフィア、リポソーム、他の微粒子送達系または血液を含めた特定の組織に入れる徐放性製剤を介して投与することができる。徐放性担体の適切な例として、シェア製品(shared articles)の形態の半透過性ポリマーマトリックス、例えば、座剤またはマイクロカプセルがある。移植可能またはマイクロカプセル状の徐放性マトリックスは、ポリラクチド(米国特許第3773919号;欧州特許出願第0058481(A)号)、L−グルタミン酸およびガンマエチル−L−グルタミン酸塩のコポリマー(Sidman et al,Biopolymers 22(1):547−556,1985)、ポリ(2−ヒドロキシエチル−メタクリレート)またはエチレンビニルアセテート(Langer et al,J.Biomed.Mater.Res.15:167−277,1981およびLanger,Chem.Tech.12:98−105,1982)を含む。
上記の技法およびプロトコールならびに本発明において使用することができる他の技法およびプロトコールの例は、Remington’s Pharmaceutical Siences,18th edition,Gennaro,A.R.,Lippincott Williams&Wilkins;20th edition(December 15,2000)ISBN 0−912734−04−3およびPharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems;Ansel,H.C.et al.7th Edition ISBN 0−683305−72−7に見つけることができ、これらの開示全体を参照として本明細書に組み込む。
医薬組成物
上記のように、本発明は、免疫反応の調節、特に、T細胞反応の下方制御のための医薬組成物にまで及び、この場合、組成物は、少なくともFasciola hepatica由来の排泄/分泌(ES)成分もしくは誘導体産物またはそこから単離されたタンパク質もしくはペプチドの突然変異体、断片もしくは変異体あるいはその組換え形態の誘導体、断片、変異体、突然変異体を含む。
上記のように、本発明は、免疫反応の調節、特に、T細胞反応の下方制御のための医薬組成物にまで及び、この場合、組成物は、少なくともFasciola hepatica由来の排泄/分泌(ES)成分もしくは誘導体産物またはそこから単離されたタンパク質もしくはペプチドの突然変異体、断片もしくは変異体あるいはその組換え形態の誘導体、断片、変異体、突然変異体を含む。
本発明における医薬組成物および本発明に従う使用は、有効成分(すなわち、Fasciola hepatica由来の排泄/分泌(ES)成分もしくは誘導体産物またはそこから単離されたタンパク質もしくはペプチドの突然変異体、断片もしくは変異体)に加えて、薬学的に許容される賦形剤、担体、緩衝剤、安定剤または当業者に公知の他の材料を含むことができる。
このような材料は、非毒性であるべきであり、有効成分の効果と干渉しないものであるべきである。担体または他の材料の正確な性質は、投与経路に応じて決定し、これは、例えば、経口、静脈内、鼻内または経口もしくは鼻吸入を介してであってよい。
製剤は、液体、例えばpH6.8〜7.6の非リン酸緩衝液を含有する生理食塩溶液または凍結乾燥もしくは冷凍乾燥粉末であってよい。
用量
組成物は、治療的「有効量」または「所望量」において個体に投与することが好ましく、これは、個体に十分に役立つことを示す。
組成物は、治療的「有効量」または「所望量」において個体に投与することが好ましく、これは、個体に十分に役立つことを示す。
本明細書において定義されるように、「有効量」という語句は、所望の反応を少なくとも部分的に得るために、または発症を遅延もしくは進行を阻害し、あるいは処置された特定の状態の発症または進行を完全に停止するために必要な量を意味する。
量は、処置される被検体の健康および身体的状態、処置される被検体の分類群、所望される防御の程度、組成物の配合、医学的状況および他の関連因子の評価に応じて変化する。量は、相対的に広範囲であり、これは、所定の試験を介して決定することができることが期待される。
処置の処方、例えば、用量等の判断は、最終的には一般開業医、内科医または他科の医師の責任の範囲および判断であり、典型的に、処置される障害、個々の患者の状態、送達部位、投与方法および実施者の公知の他の因子を考慮する。
至適用量は、例えば、年齢、性別、体重、処置される状態の重症度、投与される有効成分および投与経路を含めた多くのパラメーターに基づいて医師により決定されることができる。
広範囲の用量を適用することができる。患者を考慮して、例えば、薬剤約0.1mg〜約1mgを1日当たり体重kg当たりで投与することができる。至適治療反応を得るために投与方法を調節することができる。例えば、1日毎、週毎、月毎または他の適切な時間間隔で数回に分割して投与することができ、または用量を、緊急の状況である場合、比例的に減量することができる。
他に定義されない限り、本明細書において使用される技術および科学用語は全て、本発明の分野の当業者により通常、理解される意味を有する。
本明細書を通して、文脈上、他の意味に解すべき場合を除き、「comprise(含む)」もしくは「include(含む)」という語句または「comprises(三人称)」もしくは「comprising(進行形)」、「includes(三人称)」もしくは「including(進行形)」等の変形は、明記された整数または整数群の包括を意味するが、いくつかの他の整数もしくは整数群を排除しないことが理解されるだろう。
本明細書において使用される、T細胞反応の調節に関連して使用される場合の「阻害する」という語句は、T細胞の増殖および/または活性の部分的または完全な下方制御を意味する。
本発明の各態様の好ましい特徴および実施形態は、文脈上、他の意味に解すべき場合を除き、他の態様のそれぞれに関して必要であれば変更を加える。
本発明は、ここで、説明の目的において提供され、本発明を限定するように解釈されることを意図しない以下の実施例を参照し、さらに図を参照して記載される。
材料および方法
動物および免疫化
雌BALB/cマウスをHarlan Olac(ビセスター、英国)から購入し、6〜8週齢、1群マウス4匹にて使用した。マウスを個別換気ケージで飼育し、全ての実験は、アイルランド保健局(Irish Department of Health)、欧州連合およびTrinity College Dublinの倫理委員会の規則に従い行われた。マウスを脱発熱化したキーホールリンペットヘモシアニン(KLH)(5μg;Calbiochem、ラホーヤ、カリフォルニア州);KLH(5μg)およびES(20または50μg;またはダルベッコのPBS(Sigma、プール、英国)で最終的に200μlを側腹部に皮下(s.c.)免疫した。免疫7日後に、マウスを頸椎脱臼により屠殺し、血清および鼠径リンパ節を採集した。
動物および免疫化
雌BALB/cマウスをHarlan Olac(ビセスター、英国)から購入し、6〜8週齢、1群マウス4匹にて使用した。マウスを個別換気ケージで飼育し、全ての実験は、アイルランド保健局(Irish Department of Health)、欧州連合およびTrinity College Dublinの倫理委員会の規則に従い行われた。マウスを脱発熱化したキーホールリンペットヘモシアニン(KLH)(5μg;Calbiochem、ラホーヤ、カリフォルニア州);KLH(5μg)およびES(20または50μg;またはダルベッコのPBS(Sigma、プール、英国)で最終的に200μlを側腹部に皮下(s.c.)免疫した。免疫7日後に、マウスを頸椎脱臼により屠殺し、血清および鼠径リンパ節を採集した。
F.hepatica由来の排泄−分泌産物の調製
生きた成熟吸虫を地域の食肉処理場にてウシ肝臓から採集した。吸虫をCa2+非含有およびMg2+非含有ダルベッコPBSを数回交換して洗浄後、空気中5%CO2、37℃にてPBSで一晩インキュベートした。排泄−分泌(ES)産物を含有する上清液を採取し、4℃、13000gにて15分間遠心分離により浄化し、0.22μmフィルターに通した。ES調製物のタンパク質濃度を、ビシンコニン酸タンパク質キット(Pierce)を使用して決定した。抗原調製物を必要な時まで−80℃で保存した。
生きた成熟吸虫を地域の食肉処理場にてウシ肝臓から採集した。吸虫をCa2+非含有およびMg2+非含有ダルベッコPBSを数回交換して洗浄後、空気中5%CO2、37℃にてPBSで一晩インキュベートした。排泄−分泌(ES)産物を含有する上清液を採取し、4℃、13000gにて15分間遠心分離により浄化し、0.22μmフィルターに通した。ES調製物のタンパク質濃度を、ビシンコニン酸タンパク質キット(Pierce)を使用して決定した。抗原調製物を必要な時まで−80℃で保存した。
マウスのF.hepatica注射
メタセルカリア(metacercariae)をCompton Paddock Laboratories(バークシャー、英国)から得た。実態顕微鏡を使用して、生存能力を検討し、その後、F.hepaticaのメタセルカリア10個をマウスに経口感染させた。これは、動物100%に感染する結果となった。他に明記されない限り、マウスを感染3週間後に頸椎脱臼により屠殺した。
メタセルカリア(metacercariae)をCompton Paddock Laboratories(バークシャー、英国)から得た。実態顕微鏡を使用して、生存能力を検討し、その後、F.hepaticaのメタセルカリア10個をマウスに経口感染させた。これは、動物100%に感染する結果となった。他に明記されない限り、マウスを感染3週間後に頸椎脱臼により屠殺した。
骨髄由来DC(BMDC)の単離および培養
骨髄由来未成熟DCを、マウスの大腿骨から得られた骨髄細胞をGM−CSF発現性細胞株(J558−GM−CSF)由来の上清(10%)を補充した10%FCSを含むRPMI1640において培養することにより調製した。3日目に、10%GM−CSF細胞上清を含む新鮮な培地を付着細胞に添加した。7日目に、細胞を採集し、洗浄し、アッセイに使用した。BMDCを細胞1×106個/mlにて培養した。
骨髄由来未成熟DCを、マウスの大腿骨から得られた骨髄細胞をGM−CSF発現性細胞株(J558−GM−CSF)由来の上清(10%)を補充した10%FCSを含むRPMI1640において培養することにより調製した。3日目に、10%GM−CSF細胞上清を含む新鮮な培地を付着細胞に添加した。7日目に、細胞を採集し、洗浄し、アッセイに使用した。BMDCを細胞1×106個/mlにて培養した。
腹腔マクロファージ、CD11c + DCおよびCD4 + T細胞の精製
腹腔マクロファージの単離において、腹腔滲出細胞(PEC)をマウスから洗浄により採取した。PECを6ウェル組織培養プレートにおいて2時間インキュベートし、マクロファージを可塑的に付着させた。付着しなかった細胞を洗浄により除去し、付着マクロファージを、刺激するためにプレートから採取した。CD4+T細胞またはCD11c+樹状細胞をMACSマイクロビーズ(Miltenyi Biotec、Bergisch Gladbach、独国)およびautoMACS細胞分離装置を用いた正の選択を使用して脾臓およびPECから単離した。赤血球細胞の溶解後、PECまたは脾臓細胞のどちらかの単一細胞懸濁液をMACS CD4またはCD11c免疫磁気ビーズ(Miltenyi Biotec)のどちらかとともにインキュベートし、正の選択を使用してautoMACSに通した。autoMACS分離後のCD4+T細胞およびCD11c+樹状細胞の純度をFITC標識CD4またはCD11cそれぞれを使用して、FACScan分析により評価した場合、通常90〜95%であった。
腹腔マクロファージの単離において、腹腔滲出細胞(PEC)をマウスから洗浄により採取した。PECを6ウェル組織培養プレートにおいて2時間インキュベートし、マクロファージを可塑的に付着させた。付着しなかった細胞を洗浄により除去し、付着マクロファージを、刺激するためにプレートから採取した。CD4+T細胞またはCD11c+樹状細胞をMACSマイクロビーズ(Miltenyi Biotec、Bergisch Gladbach、独国)およびautoMACS細胞分離装置を用いた正の選択を使用して脾臓およびPECから単離した。赤血球細胞の溶解後、PECまたは脾臓細胞のどちらかの単一細胞懸濁液をMACS CD4またはCD11c免疫磁気ビーズ(Miltenyi Biotec)のどちらかとともにインキュベートし、正の選択を使用してautoMACSに通した。autoMACS分離後のCD4+T細胞およびCD11c+樹状細胞の純度をFITC標識CD4またはCD11cそれぞれを使用して、FACScan分析により評価した場合、通常90〜95%であった。
J774細胞培養
J774.A1細胞(ATCC番号TIB67)を組織培養フラスコにおいて、10%ウシ胎仔血清(FCS)を含有するRPMI1640培地を用いて空気中5%CO2、37℃にて成長させた。細胞がコンフルエンスに達した場合、それらを培養物から取り出し、1200rpmにて5分間遠心分離して細胞を沈殿させ、1×106個/ml濃度にて新鮮なフラスコに再播種した。細胞が実験に十分な数に達した場合、次いで、細胞を激しくピペッティングすることより採集し、1200rpmにて5分間遠心分離した。細胞を10%RPMIで1回洗浄後、刺激するために1ml/ウェルの容量で1×106個/mlにて24ウェル培養プレートに播種した。
J774.A1細胞(ATCC番号TIB67)を組織培養フラスコにおいて、10%ウシ胎仔血清(FCS)を含有するRPMI1640培地を用いて空気中5%CO2、37℃にて成長させた。細胞がコンフルエンスに達した場合、それらを培養物から取り出し、1200rpmにて5分間遠心分離して細胞を沈殿させ、1×106個/ml濃度にて新鮮なフラスコに再播種した。細胞が実験に十分な数に達した場合、次いで、細胞を激しくピペッティングすることより採集し、1200rpmにて5分間遠心分離した。細胞を10%RPMIで1回洗浄後、刺激するために1ml/ウェルの容量で1×106個/mlにて24ウェル培養プレートに播種した。
サイトカイン産生の誘導または阻害
J774および腹腔マクロファージ、骨髄由来DC、MACS単離CD11c+DCおよび腹腔滲出細胞を1×106個/mlの細胞密度にて24ウェル組織培養プレートで培養した。いくつかの実験において、腹腔滲出細胞およびJ774マクロファージは、10mM濃度のカテプシン阻害剤E−64(Sigma)の存在下のESまたは100℃で20分間加熱した熱不活性化ESで刺激した。空気中5%CO2、37℃にて24時間インキュベーション後、上清を取り出し、市販の免疫アッセイキット(R&D systems)を使用するIL−10、IL−12p40濃度の分析まで、またはIL−4およびIL−5、IL−12p70およびTGF−ベータ用モノクローナル抗体の対(Pharmingen)を使用する分析まで保存した。IL−12産生におけるES効果を、ES(4および20μg/ml)を用いてBMDCまたはJ774マクロファージ(1×106個/ml)を2時間前刺激し、その後、LPS(10ng/ml)およびIFN−ガンマ(20ng/ml)またはLPSのみを添加し、さらに22時間インキュベーションして決定した。上清を取り出し、IL−10、IL−12p40および/またはIL−12p70の濃度を免疫アッセイにより決定した。ConA誘導性サイトカインの産生および増殖におけるESの効果は、ConA(5μg/ml)の存在または非存在下においてES(4および20μg/ml)を用いて未感作マウス由来の脾臓細胞(2×106個/ml)を刺激することにより決定した。上清を空気中5%CO2、37℃にて72時間インキュベーション後に取り出し、T細胞サイトカイン濃度をELISA法により決定した。T細胞の増殖は、48時間培養の最後の4時間における[3H]チミジン取り込みにより測定した。in vivoのESによるサイトカイン誘導を評価するため、BALB/cマウスに50μgのESを合計200μl/マウスs.c.の容積で注射した。6時間後、鼠径リンパ節を取り出し、氷冷PBS 1mlでホモジナイズした。4℃にて、1200rpm、5分間の遠心分離により細胞を除去後、上清を取り出し、市販のサイトカインDuoSets(R&D)を使用して、IL−4およびIL−10の存在について分析した。別の実験において、BALB/cマウス4匹の群にPBSまたはES(50μg)のどちらかを300μl注射した。2時間後、PBS注射およびES注射マウス由来の腹腔滲出細胞(PEC)を氷冷PBSの腹腔洗浄により採取した。細胞を50%PBS/FCS(v/v)でブロックし、抗CD11cで表面標識し、その後、固定し、PE標識化抗IL−10ならびにFITC標識化抗IL−4および抗IFN−ガンマモノクローナル抗体またはラット対照Igを添加することにより透過させ、細胞内サイトカイン標識した。氷上に30分後、次いで、細胞をPBS/BSA/アジドで洗浄し、速やかに回収した。試料当たり合計20000個の細胞を得た。細胞をCD11c+集団上にゲートし、細胞内タンパク質の発現を、CellQuestソフトウェアを使用してFACSCaliburフローサイトメーターで分析した。
J774および腹腔マクロファージ、骨髄由来DC、MACS単離CD11c+DCおよび腹腔滲出細胞を1×106個/mlの細胞密度にて24ウェル組織培養プレートで培養した。いくつかの実験において、腹腔滲出細胞およびJ774マクロファージは、10mM濃度のカテプシン阻害剤E−64(Sigma)の存在下のESまたは100℃で20分間加熱した熱不活性化ESで刺激した。空気中5%CO2、37℃にて24時間インキュベーション後、上清を取り出し、市販の免疫アッセイキット(R&D systems)を使用するIL−10、IL−12p40濃度の分析まで、またはIL−4およびIL−5、IL−12p70およびTGF−ベータ用モノクローナル抗体の対(Pharmingen)を使用する分析まで保存した。IL−12産生におけるES効果を、ES(4および20μg/ml)を用いてBMDCまたはJ774マクロファージ(1×106個/ml)を2時間前刺激し、その後、LPS(10ng/ml)およびIFN−ガンマ(20ng/ml)またはLPSのみを添加し、さらに22時間インキュベーションして決定した。上清を取り出し、IL−10、IL−12p40および/またはIL−12p70の濃度を免疫アッセイにより決定した。ConA誘導性サイトカインの産生および増殖におけるESの効果は、ConA(5μg/ml)の存在または非存在下においてES(4および20μg/ml)を用いて未感作マウス由来の脾臓細胞(2×106個/ml)を刺激することにより決定した。上清を空気中5%CO2、37℃にて72時間インキュベーション後に取り出し、T細胞サイトカイン濃度をELISA法により決定した。T細胞の増殖は、48時間培養の最後の4時間における[3H]チミジン取り込みにより測定した。in vivoのESによるサイトカイン誘導を評価するため、BALB/cマウスに50μgのESを合計200μl/マウスs.c.の容積で注射した。6時間後、鼠径リンパ節を取り出し、氷冷PBS 1mlでホモジナイズした。4℃にて、1200rpm、5分間の遠心分離により細胞を除去後、上清を取り出し、市販のサイトカインDuoSets(R&D)を使用して、IL−4およびIL−10の存在について分析した。別の実験において、BALB/cマウス4匹の群にPBSまたはES(50μg)のどちらかを300μl注射した。2時間後、PBS注射およびES注射マウス由来の腹腔滲出細胞(PEC)を氷冷PBSの腹腔洗浄により採取した。細胞を50%PBS/FCS(v/v)でブロックし、抗CD11cで表面標識し、その後、固定し、PE標識化抗IL−10ならびにFITC標識化抗IL−4および抗IFN−ガンマモノクローナル抗体またはラット対照Igを添加することにより透過させ、細胞内サイトカイン標識した。氷上に30分後、次いで、細胞をPBS/BSA/アジドで洗浄し、速やかに回収した。試料当たり合計20000個の細胞を得た。細胞をCD11c+集団上にゲートし、細胞内タンパク質の発現を、CellQuestソフトウェアを使用してFACSCaliburフローサイトメーターで分析した。
抑制アッセイ
CD4+T細胞をMACSマイクロビーズおよびAutoMacs system(上記)を使用して、OVA特異的TCRトランスジェニック(TCR−Tg)マウスから精製した。OVA−特異的T細胞(1×105個/ml)をOVA323−339ペプチド(2μg/ml)、および、抗原提示細胞(APC)として、照射した脾臓細胞(2×106個/ml)とともに培養した。このOVA特異反応は、対照として機能した。F.hepatica特異的T細胞(FH T細胞)をCD4+MACSマイクロビーズ(上記)を使用して感染3週間後に感染マウスの腹腔洗浄液から単離した。次いで、FH T細胞を、抗原もしくはAPCを全く含まないか、肝吸虫ホモジネート(LFH)20μg/mlまたはES(20μg/ml)を含むどちらかで、APCとして未感作BALB/cマウス由来の照射された脾臓細胞とともに培養した。次いで、同じウェルまたは半透過膜(transwell)による分離されたウェルのどちらかにおいて、OVA特異的およびFH T細胞を1:1比で合わせて培養した。空気中5%CO2、37℃にて72時間インキュベーション後、ELISA法によるIL−4、IL−5、IL−10およびIFN−ガンマ濃度の決定のために、上清をtranswellの上下から、およびに共培養細胞から取り出した。増殖を96時間培養後の3Hチミジン取り込みにより決定した。
CD4+T細胞をMACSマイクロビーズおよびAutoMacs system(上記)を使用して、OVA特異的TCRトランスジェニック(TCR−Tg)マウスから精製した。OVA−特異的T細胞(1×105個/ml)をOVA323−339ペプチド(2μg/ml)、および、抗原提示細胞(APC)として、照射した脾臓細胞(2×106個/ml)とともに培養した。このOVA特異反応は、対照として機能した。F.hepatica特異的T細胞(FH T細胞)をCD4+MACSマイクロビーズ(上記)を使用して感染3週間後に感染マウスの腹腔洗浄液から単離した。次いで、FH T細胞を、抗原もしくはAPCを全く含まないか、肝吸虫ホモジネート(LFH)20μg/mlまたはES(20μg/ml)を含むどちらかで、APCとして未感作BALB/cマウス由来の照射された脾臓細胞とともに培養した。次いで、同じウェルまたは半透過膜(transwell)による分離されたウェルのどちらかにおいて、OVA特異的およびFH T細胞を1:1比で合わせて培養した。空気中5%CO2、37℃にて72時間インキュベーション後、ELISA法によるIL−4、IL−5、IL−10およびIFN−ガンマ濃度の決定のために、上清をtranswellの上下から、およびに共培養細胞から取り出した。増殖を96時間培養後の3Hチミジン取り込みにより決定した。
FACSによる自然細胞活性化の分析
BMDCまたはJ774マクロファージ(1×106個/ml)を培地のみ、ES(20μg/ml)またはE.coli LPS(10ng/ml)中で培養した。細胞を取り出し、表面マーカー発現を蛍光により標識化した抗体(BD Pharmingen)を使用してフローサイトメトリーにより評価した。50%FCS/PBS(w/v)でブロックング後、細胞をマウスCD80、CD86、CD11c(BMDCのみ)、MHCクラスII、CD40およびCCR5に特異的な抗体を用いて暗室にて氷上で30分間インキュベートした。非関連の特異性を有する適当なアイソタイプ適合抗体で標識した細胞は、対照として作用した。試料当たり合計20000個の細胞をFACSCaliburフローサイトメーターで分析した。分析をCellQuestソフトウェア(バーション3.3;Becton Dickinson immunocytometry Systems、サンノゼ、カリフォルニア州)を使用して行った。
BMDCまたはJ774マクロファージ(1×106個/ml)を培地のみ、ES(20μg/ml)またはE.coli LPS(10ng/ml)中で培養した。細胞を取り出し、表面マーカー発現を蛍光により標識化した抗体(BD Pharmingen)を使用してフローサイトメトリーにより評価した。50%FCS/PBS(w/v)でブロックング後、細胞をマウスCD80、CD86、CD11c(BMDCのみ)、MHCクラスII、CD40およびCCR5に特異的な抗体を用いて暗室にて氷上で30分間インキュベートした。非関連の特異性を有する適当なアイソタイプ適合抗体で標識した細胞は、対照として作用した。試料当たり合計20000個の細胞をFACSCaliburフローサイトメーターで分析した。分析をCellQuestソフトウェア(バーション3.3;Becton Dickinson immunocytometry Systems、サンノゼ、カリフォルニア州)を使用して行った。
J774表面マーカー発現の調節
LPS誘導性細胞表面マーカー発現におけるESの効果を、ES(20μg/ml)を用いてJ774マクロファージ(1×106個/ml)を2時間前刺激後、LPS(10ng/ml)を添加し、さらに22時間インキュベーションすることにより決定した。24時間後、細胞を回収し、洗浄し、ブロックし、表面マーカー発現をCD86、CD80、CD40、CCR5およびMHCクラスIIを使用して評価した。非関連の特異性を有するアイソタイプ適合した直接標識抗原でインキュベーションした細胞は、対照として作用した。暗室において、氷上で30分間インキュベーション後、細胞を洗浄し、免疫蛍光分析をFACScan(Becton Dickinson)において行い、CellQuestソフトウェアを使用して分析し、試料当たり細胞20000個を分析した。
LPS誘導性細胞表面マーカー発現におけるESの効果を、ES(20μg/ml)を用いてJ774マクロファージ(1×106個/ml)を2時間前刺激後、LPS(10ng/ml)を添加し、さらに22時間インキュベーションすることにより決定した。24時間後、細胞を回収し、洗浄し、ブロックし、表面マーカー発現をCD86、CD80、CD40、CCR5およびMHCクラスIIを使用して評価した。非関連の特異性を有するアイソタイプ適合した直接標識抗原でインキュベーションした細胞は、対照として作用した。暗室において、氷上で30分間インキュベーション後、細胞を洗浄し、免疫蛍光分析をFACScan(Becton Dickinson)において行い、CellQuestソフトウェアを使用して分析し、試料当たり細胞20000個を分析した。
細胞内サイトカイン合成のフローサイトメトリー分析
F.hepatica感染マウス由来DCおよびT細胞のサイトカイン産生を分析するため、腹腔滲出細胞(PEC)を最初に、50%PBS/FCS(v/v)を用いて、室温にて20分間インキュベートした。次いで、DCおよびT細胞を抗CD11cおよび抗CD4それぞれを用いて染色した。細胞内IL−10、IL−4およびIFN−ガンマの検出において、細胞を固定し、市販の細胞内サイトカイン染色キット(Caltag)を使用して透過処理した。PE標識抗IL−10およびFITC標識IL−4、IFN−ガンマmAbまたはラット対照Igを所定の飽和濃度にて30分間添加した。次いで、細胞をPBS/BSA/アジドで洗浄し、速やかに回収した。試料当たり合計50000個の細胞を得た。細胞をDCおよびT細胞それぞれにおいてCD11cまたはCD4上にゲートし、細胞内タンパク質の発現を、CellQuestソフトウェアを使用してFACSCaliburフローサイトメーターにおいて分析した。
F.hepatica感染マウス由来DCおよびT細胞のサイトカイン産生を分析するため、腹腔滲出細胞(PEC)を最初に、50%PBS/FCS(v/v)を用いて、室温にて20分間インキュベートした。次いで、DCおよびT細胞を抗CD11cおよび抗CD4それぞれを用いて染色した。細胞内IL−10、IL−4およびIFN−ガンマの検出において、細胞を固定し、市販の細胞内サイトカイン染色キット(Caltag)を使用して透過処理した。PE標識抗IL−10およびFITC標識IL−4、IFN−ガンマmAbまたはラット対照Igを所定の飽和濃度にて30分間添加した。次いで、細胞をPBS/BSA/アジドで洗浄し、速やかに回収した。試料当たり合計50000個の細胞を得た。細胞をDCおよびT細胞それぞれにおいてCD11cまたはCD4上にゲートし、細胞内タンパク質の発現を、CellQuestソフトウェアを使用してFACSCaliburフローサイトメーターにおいて分析した。
抗原特異的サイトカイン産生
免疫マウスまたは感染マウス由来の脾臓(2×106個/ml)またはリンパ節細胞(1×106個/ml)をMOGペプチド(10および100μg/ml)またはKLH(2〜50μg/ml)あるいはホルボール12−ミリスチン酸13−酢酸(PMA)(25ng/ml;Sigma)および抗CD3(0.5μg/ml;BD Pharmingen、サンディエゴ、カリフォルニア州)あるいは培地のみのいずれかを用いてRPMI培地において37℃および5%CO2にて培養した。72時間後、サイトカイン決定において上清を採集し、培地を置き換えた。増殖を[3H]チミジン取り込みにより評価した。IL−4、IL−5、IL−10およびIFN−ガンマ濃度を免疫アッセイにより決定した。
免疫マウスまたは感染マウス由来の脾臓(2×106個/ml)またはリンパ節細胞(1×106個/ml)をMOGペプチド(10および100μg/ml)またはKLH(2〜50μg/ml)あるいはホルボール12−ミリスチン酸13−酢酸(PMA)(25ng/ml;Sigma)および抗CD3(0.5μg/ml;BD Pharmingen、サンディエゴ、カリフォルニア州)あるいは培地のみのいずれかを用いてRPMI培地において37℃および5%CO2にて培養した。72時間後、サイトカイン決定において上清を採集し、培地を置き換えた。増殖を[3H]チミジン取り込みにより評価した。IL−4、IL−5、IL−10およびIFN−ガンマ濃度を免疫アッセイにより決定した。
EAEの誘導およびES処置
各マウスにMycobacterium tuberculosis H37Ra(Difco)5mg/mlを含有するCFA中のMOG35−55ペプチド150μgを尾の根元にs.c.注射した。全てのマウスに0日目および免疫化2日後にi.p.注射によりpertussis毒素(Sigma)500ngを投与した。ES処置において、PBS中のES 50μgを2日毎にi.p.注射した。マウスをEAEの臨床兆候において毎日評価し、以下のようにスコアした:1=尾の麻痺、2=不安定な歩行、3=後肢の筋力低下、4=後肢の麻痺、5=四肢の完全な麻痺、6=死亡。疾患指数は、1日の平均疾患スコア全てを加算し、平均発症日を割り、100を掛けることにより算出した。対照EAEマウスが臨床スコア3〜4を表示した場合、実験を終了した。マウスを頸椎脱臼により屠殺し、血清および脾臓を採取した。
各マウスにMycobacterium tuberculosis H37Ra(Difco)5mg/mlを含有するCFA中のMOG35−55ペプチド150μgを尾の根元にs.c.注射した。全てのマウスに0日目および免疫化2日後にi.p.注射によりpertussis毒素(Sigma)500ngを投与した。ES処置において、PBS中のES 50μgを2日毎にi.p.注射した。マウスをEAEの臨床兆候において毎日評価し、以下のようにスコアした:1=尾の麻痺、2=不安定な歩行、3=後肢の筋力低下、4=後肢の麻痺、5=四肢の完全な麻痺、6=死亡。疾患指数は、1日の平均疾患スコア全てを加算し、平均発症日を割り、100を掛けることにより算出した。対照EAEマウスが臨床スコア3〜4を表示した場合、実験を終了した。マウスを頸椎脱臼により屠殺し、血清および脾臓を採取した。
0日目にCFA中のMOG35−55ペプチドで免疫し、0および2日目にpertussis毒素の注射により、C57BL/6マウスにおいてEAEを誘導した。1つのマウスの群は、処置しないままにした。2つ目の群は、EAE誘導1日前にF.hepaticaのメタセルカリア10個で感染させた。3つ目は、EAE誘導1日前およびその後2日毎にES 50μgをi.p.注射した。EAE誘導後20日後に、マウスを屠殺し、脾臓を取り出した。脾臓細胞(2×106個/ml)を培地のみ、MOG35−55ペプチド(10および100μg/ml)または抗CD3およびPMAで刺激した。上清を3日後に取り出し、IL−17、IFN−ガンマ、IL−4およびIL−10濃度をELISA法により決定した。結果は、マウス4〜5匹の群において、3回調べた平均値である。
結果
F.hepatica感染は、樹状細胞成熟を阻害する
F.hepaticaメタルセルカリアで経口感染後、寄生虫は、腹腔を通り、内臓から肝臓に移動する。それゆえ、腹腔が肝吸虫の産物に暴露される。本明細書において、本発明者らは、腹腔において自然免疫反応の細胞におけるF.hepatica感染の影響を検討した。マウスにF.hepaticaを感染させ、感染3週間後、細胞を腹腔から回収した。未感作マウスの細胞は、対照として機能した。成熟の指標である細胞表面マーカーの発現について、樹状細胞(DC)を検討した。対照マウス由来の細胞の比較において、F.hepatica由来のDCは、MHCクラスIIおよび共刺激分子、CD80、CD86およびCD40の発現がかなり低く、CCR5の発現は高かった(図1)。これは、感染がDC成熟を阻害するか、または腹腔へ未成熟DCの動員することを示唆する。
F.hepatica感染は、樹状細胞成熟を阻害する
F.hepaticaメタルセルカリアで経口感染後、寄生虫は、腹腔を通り、内臓から肝臓に移動する。それゆえ、腹腔が肝吸虫の産物に暴露される。本明細書において、本発明者らは、腹腔において自然免疫反応の細胞におけるF.hepatica感染の影響を検討した。マウスにF.hepaticaを感染させ、感染3週間後、細胞を腹腔から回収した。未感作マウスの細胞は、対照として機能した。成熟の指標である細胞表面マーカーの発現について、樹状細胞(DC)を検討した。対照マウス由来の細胞の比較において、F.hepatica由来のDCは、MHCクラスIIおよび共刺激分子、CD80、CD86およびCD40の発現がかなり低く、CCR5の発現は高かった(図1)。これは、感染がDC成熟を阻害するか、または腹腔へ未成熟DCの動員することを示唆する。
F.hepatica感染マウスの腹腔由来の樹状細胞は、高頻度でIL−10を分泌し、低頻度でIL−4を分泌する。
マウスにF.hepaticaを感染させ、感染3週間後に、細胞を腹腔から回収した。未感作マウス由来の細胞は、対照として機能した。CD11c+DCについて、細胞内IL−4、IL−10およびIFN−ガンマを、免疫蛍光分析により検討した(図2)。未感作マウスの腹腔由来のDCと比較して、F.hepatica感染マウス由来のDCは、高頻度でIL−10を分泌した(未感作2〜3%に対して感染34〜35%)。また、DC分泌性IL−4(未感作0.37%に対して感染2.26%)およびIFN−ガンマ(未感作0.48%に対して感染1.57%)の頻度もわずかに増加した。
マウスにF.hepaticaを感染させ、感染3週間後に、細胞を腹腔から回収した。未感作マウス由来の細胞は、対照として機能した。CD11c+DCについて、細胞内IL−4、IL−10およびIFN−ガンマを、免疫蛍光分析により検討した(図2)。未感作マウスの腹腔由来のDCと比較して、F.hepatica感染マウス由来のDCは、高頻度でIL−10を分泌した(未感作2〜3%に対して感染34〜35%)。また、DC分泌性IL−4(未感作0.37%に対して感染2.26%)およびIFN−ガンマ(未感作0.48%に対して感染1.57%)の頻度もわずかに増加した。
F.hepatica感染マウスの腹腔において、制御性表現型を有するIL−10分泌性T細胞が高頻度で検出される
IL−10産生DCがIL−10分泌性制御性T(Treg)細胞の誘導を促進することが示されているため、本発明者らは、F.hepatica感染がTreg細胞の誘導にも関連する可能性を検討した。BALB/cマウスをF.hepaticaに感染させ、感染3週間後、細胞を腹腔から回収した。未感作マウスの細胞は、対照として機能した。細胞内IL−4、IL−10およびIFN−ガンマにおいて、免疫蛍光分析によりCD4+T細胞を検討した(図3)。結果は、F.hepatica感染マウスの腹腔のT細胞は、高頻度でIL−10を分泌することを示す(未感作3〜5%に対して感染66〜67%)。対照に、IL−4およびIFN−ガンマ分泌性T細胞の頻度は、顕著に強化されなかった。
IL−10産生DCがIL−10分泌性制御性T(Treg)細胞の誘導を促進することが示されているため、本発明者らは、F.hepatica感染がTreg細胞の誘導にも関連する可能性を検討した。BALB/cマウスをF.hepaticaに感染させ、感染3週間後、細胞を腹腔から回収した。未感作マウスの細胞は、対照として機能した。細胞内IL−4、IL−10およびIFN−ガンマにおいて、免疫蛍光分析によりCD4+T細胞を検討した(図3)。結果は、F.hepatica感染マウスの腹腔のT細胞は、高頻度でIL−10を分泌することを示す(未感作3〜5%に対して感染66〜67%)。対照に、IL−4およびIFN−ガンマ分泌性T細胞の頻度は、顕著に強化されなかった。
また、Treg細胞に関連することが知られている表面マーカーの表面発現において、腹腔由来のT細胞を評価した。特異的抗体を用いた免疫蛍光分析は、CTLA−4、IL−10R、CD28、T1/ST2およびCCR5の発現がF.hepatica感染マウス由来の細胞において強化されることを明らかにした(図5)。対照に、CD25発現は、低かった。これらの所見は、誘導性Treg細胞が産生され、またはF.hepatica感染中に腹腔に動員されることを示唆する。
Fasciola hepaticaは、FOXP3発現T細胞を誘導する
図4は、F.hepatica感染が腹腔へのCD4+CD25+Foxp3+制御性T細胞の非常に顕著な動員に関連していることを示す。感染マウスのリンパ節の制御性T細胞数がわずかに増加(5%〜6.7%)したが、一方、腹腔での頻度は、F.hepatica感染後に24%〜96%までに増加した。
図4は、F.hepatica感染が腹腔へのCD4+CD25+Foxp3+制御性T細胞の非常に顕著な動員に関連していることを示す。感染マウスのリンパ節の制御性T細胞数がわずかに増加(5%〜6.7%)したが、一方、腹腔での頻度は、F.hepatica感染後に24%〜96%までに増加した。
F.hepatica感染マウスの腹腔由来のT細胞は、サプレッサー活性を有する
F.hepatica感染マウスの腹腔由来のT細胞がIL−10を分泌し、制御性表現型を有することを明らかにしたので、本発明者らは、オボアルブミン(OVA)T細胞受容体(TLR)トランスジェニック(Tg)マウス由来のT細胞を用いた共培養実験において、これらのサプレッサー活性を検討した。高頻度のDO11.10 TCR Tgマウスは、OVAに特異的であり、抗原特異反応の読み出しに有用である。DO11.10 TCR Tgマウス由来のT細胞は、増殖し、in vitroで抗原(OVA)および抗原提示細胞(APC)で刺激後にIFN−ガンマ、IL−4、IL−5およびIL−10を分泌する。F.hepatica感染マウスの腹腔由来のT細胞を用いた共培養は、増殖およびIFN−ガンマ産生において顕著な抑制効果を有した。これは、抗原(肝吸虫ホモジネート;F.hepatica由来のLFHまたは排泄/分泌分画;ES)を用いた刺激または未刺激において認められた。また、IL−4産生は、F.hepatica感染マウス由来の未刺激T細胞で特に低下した。対照に、IL−5およびIL−10産生は、特にF.hepatica感染マウス由来の抗原刺激細胞で強化された(図6)。
F.hepatica感染マウスの腹腔由来のT細胞がIL−10を分泌し、制御性表現型を有することを明らかにしたので、本発明者らは、オボアルブミン(OVA)T細胞受容体(TLR)トランスジェニック(Tg)マウス由来のT細胞を用いた共培養実験において、これらのサプレッサー活性を検討した。高頻度のDO11.10 TCR Tgマウスは、OVAに特異的であり、抗原特異反応の読み出しに有用である。DO11.10 TCR Tgマウス由来のT細胞は、増殖し、in vitroで抗原(OVA)および抗原提示細胞(APC)で刺激後にIFN−ガンマ、IL−4、IL−5およびIL−10を分泌する。F.hepatica感染マウスの腹腔由来のT細胞を用いた共培養は、増殖およびIFN−ガンマ産生において顕著な抑制効果を有した。これは、抗原(肝吸虫ホモジネート;F.hepatica由来のLFHまたは排泄/分泌分画;ES)を用いた刺激または未刺激において認められた。また、IL−4産生は、F.hepatica感染マウス由来の未刺激T細胞で特に低下した。対照に、IL−5およびIL−10産生は、特にF.hepatica感染マウス由来の抗原刺激細胞で強化された(図6)。
次に、本発明者らは、抑制のメカニズム、具体的に溶解性因子に対する細胞接触の役割を評価した。ここで、DO11.10 TCR Tgマウス由来のT細胞は、半透過膜によりF.hepatica感染マウス由来のT細胞から分離した。LFHまたはESを用いたF.hepatica感染マウスの腹腔由来のT細胞の刺激は、高濃度のIL−5およびIL−10および低濃度IFN−ガンマの産生を生じた。IL−4はまた、LFHで刺激後に検出されたが、ESでは検出されなかった(図7)。OVAを用いたDO11.10 TCR Tgマウス由来のT細胞の刺激は、強力な増殖およびIFN−ガンマ、IL−4、IL−5およびIL−10の分泌を生じた。F.hepatica感染マウス由来のT細胞を用いた共培養は、増殖およびIFN−ガンマ産生を部分的に抑制したが、IL−4、IL−5およびIL−10産生を強化した。
これらの所見は、F.hepatica感染マウスのT細胞がバイスタンダー様式において、非関連抗原に対するT細胞反応を抑制することを明らかにする。さらに、この抑制は、溶解性因子、おそらくIL−10により部分的に媒介され、これは、F.hepatica感染マウス由来のT細胞により高濃度で分泌される。
F.hepatica感染中のIL−10産生は、in vivoでIL−5およびIFN−ガンマ産生を制御する
in vivoの免疫反応の抑制におけるIL−10の役割を検討するため、C57BL/6およびIL−10ノックアウトマウスにF.hepaticaを感染させ、腹水において、およびin vitroで抗原を用いて再刺激された腸管膜リンパ節細胞において、サイトカイン産生を検討した。
in vivoの免疫反応の抑制におけるIL−10の役割を検討するため、C57BL/6およびIL−10ノックアウトマウスにF.hepaticaを感染させ、腹水において、およびin vitroで抗原を用いて再刺激された腸管膜リンパ節細胞において、サイトカイン産生を検討した。
IL−10およびIL−5が、F.hepaticaを感染させたC57BL/6マウスの腹水において検出されたがIL−4およびIFN−ガンマは検出されなかった(図8)。対照に、顕著な濃度のIL−4および強化されたIL−5が、F.hepaticaに感染させたIL−10ノックアウトマウスの腹水において検出された。IL−10およびIL−5が、F.hepatica感染C57BL/6マウス由来のES刺激腸管膜リンパ節細胞で検出されたが、IL−5ならびにIFN−ガンマは検出されなかった(図9)。対照に、顕著な濃度のIFN−ガンマおよび強化されたIL−5が、IL−10ノックアウトマウス由来のES刺激腸管膜リンパ節細胞に検出された。これらの所見は、F.hepatica感染マウスのIL−10産生細胞がin vivoでTh1およびTh2サイトカイン産生をともに抑制することを示す。
F.hepatica排泄/分泌(ES)産物は、自然IL−10産生を刺激する
F.hepatica感染が自然細胞およびT細胞由来のIL−10産生を誘導することを明らかにしたので、本発明者らは、自然免疫系の細胞によるIL−10産生におけるF.hepatica ESの影響を検討した。腹腔滲出細胞、腹腔マクロファージ、J774マクロファージ、骨髄由来DCおよび腹膜と脾臓由来のCD11c+DCは全て、ESに反応してIL−10を分泌した(図10および11)。本発明者らは、肝吸虫ホモジネート(LFH)もまた、腹腔マクロファージ由来のIL−10産生を刺激することを見出した。IL−12p40産生は、骨髄由来DCおよびJ774細胞の上清において検出されたが、IL−12p70は検出されなかった(図11)。IL−10産生は、ESを用いてin vitro刺激後6〜48時間でマクロファージにおいて、および24〜48時間でDCにおいて検出された(図12)。
F.hepatica感染が自然細胞およびT細胞由来のIL−10産生を誘導することを明らかにしたので、本発明者らは、自然免疫系の細胞によるIL−10産生におけるF.hepatica ESの影響を検討した。腹腔滲出細胞、腹腔マクロファージ、J774マクロファージ、骨髄由来DCおよび腹膜と脾臓由来のCD11c+DCは全て、ESに反応してIL−10を分泌した(図10および11)。本発明者らは、肝吸虫ホモジネート(LFH)もまた、腹腔マクロファージ由来のIL−10産生を刺激することを見出した。IL−12p40産生は、骨髄由来DCおよびJ774細胞の上清において検出されたが、IL−12p70は検出されなかった(図11)。IL−10産生は、ESを用いてin vitro刺激後6〜48時間でマクロファージにおいて、および24〜48時間でDCにおいて検出された(図12)。
ESは、in vivoで自然IL−10およびIL−4産生を刺激する
in vitroで自然免疫細胞によるIL−10の誘導を明らかにしたので、本発明者らは、in vivoでESの自然サイトカイン産生の刺激能を検討した。マウスの側腹部にs.c.注射し、流入領域リンパ節を6時間後に取り出し、ホモジナイズし、IL−4およびIL−10濃度をELISA法により決定した。別法として、マウスにi.p.注射し、2時間後に腹膜DCのサイトカイン産生を評価した。結果は、ESのs.c.注射が流入領域リンパ節における顕著な濃度のIL−10および低濃度のIL−4の産生を刺激したことを明らかにした(図13)。i.p.経路によるES注射はまた、腹腔のIL−10およびIL−4産生DC細胞を刺激した。IL−10分泌性DCの頻度は、対照マウスの7〜12%からES注射マウスの15〜21%まで増加し、IL−4産生細胞の頻度は、7.5から17%まで増加した(図14)。IFN−ガンマ分泌性DCの頻度において、1.9から4.0%と、あまり顕著な増加はなかった。
in vitroで自然免疫細胞によるIL−10の誘導を明らかにしたので、本発明者らは、in vivoでESの自然サイトカイン産生の刺激能を検討した。マウスの側腹部にs.c.注射し、流入領域リンパ節を6時間後に取り出し、ホモジナイズし、IL−4およびIL−10濃度をELISA法により決定した。別法として、マウスにi.p.注射し、2時間後に腹膜DCのサイトカイン産生を評価した。結果は、ESのs.c.注射が流入領域リンパ節における顕著な濃度のIL−10および低濃度のIL−4の産生を刺激したことを明らかにした(図13)。i.p.経路によるES注射はまた、腹腔のIL−10およびIL−4産生DC細胞を刺激した。IL−10分泌性DCの頻度は、対照マウスの7〜12%からES注射マウスの15〜21%まで増加し、IL−4産生細胞の頻度は、7.5から17%まで増加した(図14)。IFN−ガンマ分泌性DCの頻度において、1.9から4.0%と、あまり顕著な増加はなかった。
ESは、TLR作動薬誘導性IL−12p70産生を阻害する
自然細胞によるIL−10産生は、Treg細胞の誘導に関連し、一方、IL−12は、IFN−ガンマ分泌性Th1細胞の増殖を促進する。それゆえ、本発明者らは、マクロファージおよびDCによるIL−12p40およびIL−12p70産生におけるESの影響を検討した。ESのみは、IL−12p70を刺激しなかったが、J774マクロファージ由来のIL−12p40およびIL−10産生を刺激した(図15)。さらに、LPS誘導性IL−12p40は、ESを用いた2時間のプレインキュベーションにより阻害された。ESは、DC由来のIL−12p70を誘導せず、LPSおよびIFN−ガンマにより誘導されたIL−12p70を阻害した。ESの阻害効果は広範囲の濃度にわたり認められ、より高濃度において非常に顕著であった(図16)。
自然細胞によるIL−10産生は、Treg細胞の誘導に関連し、一方、IL−12は、IFN−ガンマ分泌性Th1細胞の増殖を促進する。それゆえ、本発明者らは、マクロファージおよびDCによるIL−12p40およびIL−12p70産生におけるESの影響を検討した。ESのみは、IL−12p70を刺激しなかったが、J774マクロファージ由来のIL−12p40およびIL−10産生を刺激した(図15)。さらに、LPS誘導性IL−12p40は、ESを用いた2時間のプレインキュベーションにより阻害された。ESは、DC由来のIL−12p70を誘導せず、LPSおよびIFN−ガンマにより誘導されたIL−12p70を阻害した。ESの阻害効果は広範囲の濃度にわたり認められ、より高濃度において非常に顕著であった(図16)。
ESの免疫調節効果は、カテプシン以外の熱感受性分子により媒介される
Fasciola hepatica由来のカテプシンLプロテイナーゼが免疫調節特性を有することは以前に報告されている。ここで、本発明者らは、IL−10産生の誘導において、カテプシンの役割を評価した。本発明者らは、最初に、ES活性の熱処理の効果を評価した。ESの熱処理は、腹腔滲出細胞によるIL−10産生を刺激するその能力を顕著に低下させた(図17)。対照的に、カテプシン阻害剤の添加は、IL−10を刺激し、またはDCによるIL−12p40あるいはmIL−12p70の産生を阻害するESの能力に全く影響しなかった(図18および19)。これらの所見は、IL−10産生を刺激するES分画の免疫調節産物は、カテプシンではないが、熱感受性分子であることを示唆する。
Fasciola hepatica由来のカテプシンLプロテイナーゼが免疫調節特性を有することは以前に報告されている。ここで、本発明者らは、IL−10産生の誘導において、カテプシンの役割を評価した。本発明者らは、最初に、ES活性の熱処理の効果を評価した。ESの熱処理は、腹腔滲出細胞によるIL−10産生を刺激するその能力を顕著に低下させた(図17)。対照的に、カテプシン阻害剤の添加は、IL−10を刺激し、またはDCによるIL−12p40あるいはmIL−12p70の産生を阻害するESの能力に全く影響しなかった(図18および19)。これらの所見は、IL−10産生を刺激するES分画の免疫調節産物は、カテプシンではないが、熱感受性分子であることを示唆する。
ESは、DCおよびマクロファージにおける表面マーカー発現を調節する
DCおよびマクロファージは、強力な抗原提示細胞であるが、最初にMHCクラスIIおよび共刺激分子の発現を強化するよう活性化されなければならない。完全な成熟DCは、エフェクターT細胞、特にTh1細胞の増殖を促進し、一方、未成熟または部分的成熟DCは、アネルギー性または制御性T細胞の増殖を促進する。本明細書において、本発明者らは、ESがC57BL/6マウス由来のDCのCD86、CD80、CD40およびMHCクラスIIの表面発現を強化することを見つけた。活性化のレベルは、LPSで認められたものと同様であった。しかし、CCR5発現を抑制するLPSと異なり(CCR5発現は、通常、DC成熟後に低下する)、ESは、CCR5発現を強化した。IL−10欠損マウスにおいて、この強化は、認められなかった。さらに、CD80、CD86、CD40およびMHCクラスIIは、IL−10欠損マウス由来のES刺激DCで強化された(図20)。これは、DC成熟がES誘導性IL−10産生により強制されることを示唆する。
DCおよびマクロファージは、強力な抗原提示細胞であるが、最初にMHCクラスIIおよび共刺激分子の発現を強化するよう活性化されなければならない。完全な成熟DCは、エフェクターT細胞、特にTh1細胞の増殖を促進し、一方、未成熟または部分的成熟DCは、アネルギー性または制御性T細胞の増殖を促進する。本明細書において、本発明者らは、ESがC57BL/6マウス由来のDCのCD86、CD80、CD40およびMHCクラスIIの表面発現を強化することを見つけた。活性化のレベルは、LPSで認められたものと同様であった。しかし、CCR5発現を抑制するLPSと異なり(CCR5発現は、通常、DC成熟後に低下する)、ESは、CCR5発現を強化した。IL−10欠損マウスにおいて、この強化は、認められなかった。さらに、CD80、CD86、CD40およびMHCクラスIIは、IL−10欠損マウス由来のES刺激DCで強化された(図20)。これは、DC成熟がES誘導性IL−10産生により強制されることを示唆する。
ESはまた、J774マクロファージのCD80、CD86、CD40、CCR5およびMHCクラスIIの表面発現を強化し(図21)、ESにより阻害されたCD40を除いて、これらのマーカーのLPS誘導性発現を強化した(図22)。抑制されたCD40発現は、Treg細胞の誘導に関連している。それゆえ、これらの所見は、ESがDCおよびマクロファージの中間表現型への成熟を誘導することを示唆し、これは、Treg細胞を刺激するこれらの能力と一致する。
ESは、IL−10産生Treg細胞を誘導し、エフェクターT細胞による増殖およびIFN−ガンマ産生を抑制する
本発明者らは、モデル抗原であるKLHに対するT細胞反応の誘導におけるESの影響を検討した。マウスにESのみ、KLHのみまたはKLHおよびESを注射し、流入領域リンパ節を7日後に取り出し、細胞をin vitroで抗原(KLH)を用いて再刺激した。この実験において、陽性対照刺激である抗CD3およびPMAに対して反応が検出されたが、KLHのみは、抗原特異的免疫反応を誘導しなかった。対照的に、ES(50μg)を用いた共注射は、高濃度の抗原特異的IL−10および低濃度のIL−5を分泌するが、IL−4およびIFN−ガンマを分泌しないT細胞を産生した(図23)。このサイトカインパターンは、Treg細胞の誘導と一致する。KLHのみの免疫に反応してIL−5およびIFN−ガンマを検出した別の実験において、本発明者らは、ES共投与(20μg)後にこのKLH特異的サイトカイン産生の抑制を認めた(図24)。
本発明者らは、モデル抗原であるKLHに対するT細胞反応の誘導におけるESの影響を検討した。マウスにESのみ、KLHのみまたはKLHおよびESを注射し、流入領域リンパ節を7日後に取り出し、細胞をin vitroで抗原(KLH)を用いて再刺激した。この実験において、陽性対照刺激である抗CD3およびPMAに対して反応が検出されたが、KLHのみは、抗原特異的免疫反応を誘導しなかった。対照的に、ES(50μg)を用いた共注射は、高濃度の抗原特異的IL−10および低濃度のIL−5を分泌するが、IL−4およびIFN−ガンマを分泌しないT細胞を産生した(図23)。このサイトカインパターンは、Treg細胞の誘導と一致する。KLHのみの免疫に反応してIL−5およびIFN−ガンマを検出した別の実験において、本発明者らは、ES共投与(20μg)後にこのKLH特異的サイトカイン産生の抑制を認めた(図24)。
また、本発明者らは、in vitroにおいて、分裂促進因子であるコンカナバリンA(ConA)に対するT細胞反応におけるESの影響を検討した。ConAで刺激された脾臓細胞は、増殖し、IFN−ガンマおよび低濃度のIL−10を分泌した(図25)。ESの共インキュベーションは、特に、高濃度で使用された場合に(20μg/ml)、これは、単独では増殖またはサイトカイン産生を誘導しないが、ConA誘導性増殖およびIFN−ガンマ産生を顕著に阻害し、IL−10を強化した。これらの所見により、ESが優先的にIL−10分泌性T細胞を誘導し、Th1細胞の誘導を抑制することが確認された。
F.hepatica感染またはESの非経口投与は、実験的自己免疫性脳脊髄炎(EAE)に対して防御する
IFN−ガンマおよびIL−17を分泌する自己抗原特異的T細胞は、多発性硬化症のマウスモデルである実験的自己免疫性脳脊髄炎(EAE)を含めた多くの自己免疫疾患の病原体を媒介した。正常な個体において、病原性T細胞を抑制する天然および誘導性Treg細胞により、T細胞介在性自己免疫疾患が調整される。F.hepatica感染およびESがIL−10分泌性Treg細胞を誘導することを示したので、本発明者らは、pertussis毒素(PT)を有する完全フロインドアジュバンド(CFA)中のミエリン乏突起膠細胞糖タンパク質(MOG)ペプチドの投与を含む慢性疾患モデルのEAE進行におけるEAEの感染または非経口投与の影響を検討した。未処置のマウスは、12日後にEAEの臨床症状を進行させ、20日後にグレード3以上の臨床スコアに達し、この段階で屠殺しなければならなかった。対照的に、F.hepatica感染マウスは、14日まで症状が進行せず、ES処置マウスは、16日まで症状が進行しなかった(図26)。さらに、これらのマウスの疾患の重症度は、かなり低下した。これらの所見は、ESの非経口送達が、マウスの自己免疫疾患に対して防御効果を有することを明らかにする。
IFN−ガンマおよびIL−17を分泌する自己抗原特異的T細胞は、多発性硬化症のマウスモデルである実験的自己免疫性脳脊髄炎(EAE)を含めた多くの自己免疫疾患の病原体を媒介した。正常な個体において、病原性T細胞を抑制する天然および誘導性Treg細胞により、T細胞介在性自己免疫疾患が調整される。F.hepatica感染およびESがIL−10分泌性Treg細胞を誘導することを示したので、本発明者らは、pertussis毒素(PT)を有する完全フロインドアジュバンド(CFA)中のミエリン乏突起膠細胞糖タンパク質(MOG)ペプチドの投与を含む慢性疾患モデルのEAE進行におけるEAEの感染または非経口投与の影響を検討した。未処置のマウスは、12日後にEAEの臨床症状を進行させ、20日後にグレード3以上の臨床スコアに達し、この段階で屠殺しなければならなかった。対照的に、F.hepatica感染マウスは、14日まで症状が進行せず、ES処置マウスは、16日まで症状が進行しなかった(図26)。さらに、これらのマウスの疾患の重症度は、かなり低下した。これらの所見は、ESの非経口送達が、マウスの自己免疫疾患に対して防御効果を有することを明らかにする。
F.hepatica感染またはESの非経口投与は、EAE進行中の病原性T細胞の誘導を抑制する
T細胞は、多くの自己免疫疾患を媒介し、従来、IFN−ガンマ分泌性Th1細胞が炎症性病原体に関与すると考えられてきた。しかし、最近の証拠では、IL−17分泌性T細胞が、リウマチ様関節炎、大腸炎、多発性硬化症および多発性硬化症のマウスモデルであるEAEを含めた多くの慢性炎症性疾患および自己免疫疾患において多くの損傷を媒介することを示唆する。本明細書において、EAE進行は、未処理のマウスのMOG特異的IL−17およびIFN−ガンマ分泌性T細胞の誘導に関連した(図27)。F.hepatica感染またはESの非経口投与(これは、EAEの臨床症状を低下させた)は、MOG特異的IL−17およびIFN−ガンマ産生T細胞の誘導を抑制した。さらに、ポリクローナル刺激、抗CD3およびPMAに対するIL−17産生も、感染またはES処置マウスにおいて抑制された。対照に、MOG特異的IL−10は、未処置マウスにおいて検出できなかったが、F.hepatica感染またはES処置マウスにおいてかなりの濃度にて検出可能であった。さらに、MOG特異的IL−4は、F.hepatica感染マウスにおいて強化された。さらに、抗CD−3およびPMA誘導性IL−4およびIL−10は、感染およびES処置マウスにおいて強化された。これらの所見は、F.hepatica感染またはES治療が、抗炎症性サイトカイン、IL−10を強化し、自己抗原特異的病原性IL−17およびIFN−ガンマ分泌性T細胞を抑制することにより、EAEの誘導を予防することを明らかにする。
T細胞は、多くの自己免疫疾患を媒介し、従来、IFN−ガンマ分泌性Th1細胞が炎症性病原体に関与すると考えられてきた。しかし、最近の証拠では、IL−17分泌性T細胞が、リウマチ様関節炎、大腸炎、多発性硬化症および多発性硬化症のマウスモデルであるEAEを含めた多くの慢性炎症性疾患および自己免疫疾患において多くの損傷を媒介することを示唆する。本明細書において、EAE進行は、未処理のマウスのMOG特異的IL−17およびIFN−ガンマ分泌性T細胞の誘導に関連した(図27)。F.hepatica感染またはESの非経口投与(これは、EAEの臨床症状を低下させた)は、MOG特異的IL−17およびIFN−ガンマ産生T細胞の誘導を抑制した。さらに、ポリクローナル刺激、抗CD3およびPMAに対するIL−17産生も、感染またはES処置マウスにおいて抑制された。対照に、MOG特異的IL−10は、未処置マウスにおいて検出できなかったが、F.hepatica感染またはES処置マウスにおいてかなりの濃度にて検出可能であった。さらに、MOG特異的IL−4は、F.hepatica感染マウスにおいて強化された。さらに、抗CD−3およびPMA誘導性IL−4およびIL−10は、感染およびES処置マウスにおいて強化された。これらの所見は、F.hepatica感染またはES治療が、抗炎症性サイトカイン、IL−10を強化し、自己抗原特異的病原性IL−17およびIFN−ガンマ分泌性T細胞を抑制することにより、EAEの誘導を予防することを明らかにする。
Fasciola hepatica感染は、C57BL/6野生型およびIL−10欠損マウスのEAEの発症を遅延し、臨床兆候を軽減する
図28は、F.hepatica感染がC57BL/6野生型およびIL−10欠損マウスのEAEの発症を遅延し、臨床兆候を軽減することを示し、F.hepaticaによるEAEの軽減がIL−10誘導により媒介されないことを示唆する。
図28は、F.hepatica感染がC57BL/6野生型およびIL−10欠損マウスのEAEの発症を遅延し、臨床兆候を軽減することを示し、F.hepaticaによるEAEの軽減がIL−10誘導により媒介されないことを示唆する。
F.hepatica感染は、IL−10非依存性メカニズムによりEAE中の病原性IFN−ガンマおよびIL−17分泌性細胞を阻害する
図29は、F.hepatica感染がC57BL/6野生型およびIL−10欠損マウスのMOG特異的IL−17およびIFN−ガンマ産生を阻害し、野生型マウスのIL−10産生を強化することを示す。データは、F.hepatica感染による病原性T細胞の阻害がIL−10により媒介されないことを示唆する。
図29は、F.hepatica感染がC57BL/6野生型およびIL−10欠損マウスのMOG特異的IL−17およびIFN−ガンマ産生を阻害し、野生型マウスのIL−10産生を強化することを示す。データは、F.hepatica感染による病原性T細胞の阻害がIL−10により媒介されないことを示唆する。
Fasciola hepatica感染は、BALB/cマウスのDSS誘導性大腸炎の臨床兆候を軽減する
図30は、Fasciola hepatica感染がBALB/cマウスのDSSにより誘導された大腸炎の臨床兆候(下痢および糞便血)を軽減することを示す。
図30は、Fasciola hepatica感染がBALB/cマウスのDSSにより誘導された大腸炎の臨床兆候(下痢および糞便血)を軽減することを示す。
Fasciola hepatica感染は、DSS誘導性大腸炎中の結腸における炎症促進性サイトカイン産生を抑制する
図31は、DSS誘導性大腸炎中の結腸におけるIL−1ベータ、IL−17およびTNF−アルファの誘導がFasciola hepatica感染後に低下することを示す。これらのサイトカインは、大腸炎の病態を媒介することを示し、データは、F.hepaticaが炎症促進性サイトカインの産生を阻害することにより、ある程度の防御を付与することを示唆する。
図31は、DSS誘導性大腸炎中の結腸におけるIL−1ベータ、IL−17およびTNF−アルファの誘導がFasciola hepatica感染後に低下することを示す。これらのサイトカインは、大腸炎の病態を媒介することを示し、データは、F.hepaticaが炎症促進性サイトカインの産生を阻害することにより、ある程度の防御を付与することを示唆する。
Fasciola hepatica ES産物を用いた治療は、BALB/cマウスのDSS誘導性大腸炎の臨床兆候を軽減する
図32は、Fasciola hepatica ES産物の非経口投与が、BALB/cマウスのDSSにより誘導された大腸炎の臨床兆候(下痢、血便および体重減少)を軽減することを示す。
図32は、Fasciola hepatica ES産物の非経口投与が、BALB/cマウスのDSSにより誘導された大腸炎の臨床兆候(下痢、血便および体重減少)を軽減することを示す。
Fasciola hepatica ES産物を用いた治療は、BALB/cマウスのDSS誘導性大腸炎中の炎症促進性サイトカイン産生を抑制する
図33は、DSS誘導性大腸炎中の結腸におけるIL−1ベータ、IL−17およびIL−10の誘導がFasciola hepatica ES産物の投与により低下することを示す。IL−1およびIL−17は、大腸炎の病態を媒介することを示し、データは、F.hepatica ES産物がこれらの炎症促進性サイトカインの産生を阻害することにより、ある程度の防御を付与することを示唆する。
図33は、DSS誘導性大腸炎中の結腸におけるIL−1ベータ、IL−17およびIL−10の誘導がFasciola hepatica ES産物の投与により低下することを示す。IL−1およびIL−17は、大腸炎の病態を媒介することを示し、データは、F.hepatica ES産物がこれらの炎症促進性サイトカインの産生を阻害することにより、ある程度の防御を付与することを示唆する。
ESは、共投与抗原に対する抗原特異的IL−17およびIFN−ガンマ産生を阻害する
図34は、in vivoで外来抗原とESの共投与が、抗原特異的T細胞、特に、IFN−ガンマ(Th1細胞)またはIL−17(Th17細胞)を分泌するT細胞の誘導を抑制することを示す。
図34は、in vivoで外来抗原とESの共投与が、抗原特異的T細胞、特に、IFN−ガンマ(Th1細胞)またはIL−17(Th17細胞)を分泌するT細胞の誘導を抑制することを示す。
要約
本発明者らは、マウスへのF.hepatica感染またはF.hepatica ESの投与が高頻度のIL−10分泌性制御性T(Treg)細胞を誘導し、ES産物が自己免疫疾患の阻害能を有することを発見した。本発明者らは、F.hepatica感染マウスが、腹腔において、IL−4の非存在下で非常に高濃度のIL−10を分泌する非常に高頻度のCD4+T細胞を有することを明らかにした。感染により誘導されたこれらのTreg細胞は、共培養系または半透過膜により分離された場合における、OVA特異的T細胞の増殖およびIFN−ガンマ産生を阻害し、これは可溶性因子介在性抑制を示した。さらに、F.hepatica感染マウスの腹腔由来の樹状細胞(DC)は、高濃度のIL−10を分泌し、未感作マウス由来のDCに比べCD80、CD86、CD40およびMHCクラスIIの細胞表面発現は顕著に低いが、CCR5は高く、未成熟状態を示した。OVA特異的T細胞において抗原提示細胞として使用された場合、F−hepatica感染マウス由来のDCは、未感作マウス由来のDCと比較した場合、顕著に低いサイトカイン産生を誘導した。これらの所見は、DC活性化およびTreg細胞誘導を調節することにより、F.hepaticaがT細胞反応を抑制することを示す。
本発明者らは、マウスへのF.hepatica感染またはF.hepatica ESの投与が高頻度のIL−10分泌性制御性T(Treg)細胞を誘導し、ES産物が自己免疫疾患の阻害能を有することを発見した。本発明者らは、F.hepatica感染マウスが、腹腔において、IL−4の非存在下で非常に高濃度のIL−10を分泌する非常に高頻度のCD4+T細胞を有することを明らかにした。感染により誘導されたこれらのTreg細胞は、共培養系または半透過膜により分離された場合における、OVA特異的T細胞の増殖およびIFN−ガンマ産生を阻害し、これは可溶性因子介在性抑制を示した。さらに、F.hepatica感染マウスの腹腔由来の樹状細胞(DC)は、高濃度のIL−10を分泌し、未感作マウス由来のDCに比べCD80、CD86、CD40およびMHCクラスIIの細胞表面発現は顕著に低いが、CCR5は高く、未成熟状態を示した。OVA特異的T細胞において抗原提示細胞として使用された場合、F−hepatica感染マウス由来のDCは、未感作マウス由来のDCと比較した場合、顕著に低いサイトカイン産生を誘導した。これらの所見は、DC活性化およびTreg細胞誘導を調節することにより、F.hepaticaがT細胞反応を抑制することを示す。
また、F.hepatica ESがDC成熟を調節し、in virtoでIL−10産生を強化することが思いがけなく示された。カテプシンLプロテイナーゼ阻害剤の添加が、ESの調節効果を反転しなかった。さらに、マウスへのES注射は、多発性硬化症のマウスモデルである実験的自己免疫性脳脊髄炎(EAE)の進行を予防した。ThIL17と呼ばれるIL−17を分泌するT細胞は、EAEの病原体であり、本発明者らのデータは、ESがThIL−17細胞の増殖を促進するIL−23を阻害することにより、またはThIL−17細胞の活性化もしくは機能を阻害することによるどちらかでThIL−17細胞の誘導を抑制することを示唆する。所見は、F.hepatica由来のES分画がカテプシンLプロテイナーゼ以外の成分を含み、これは、自然免疫系の細胞と相互作用し、抗炎症性サイトカインの誘導を刺激し、Treg細胞の誘導を促進する表現型に樹状細胞を活性化する一方、ThIL−17細胞を阻害し、それにより自己免疫疾患の進行を予防することを示唆する。
本明細書において参照する全ての文書は、本明細書において参照として組み込まれる。本発明の記載の実施形態に対する種々の修正および変更は、本発明の範囲から逸脱することなく、当業者にとっては明らかであろう。本発明は、具体的な好ましい実施形態に関して記載しているが、それは、請求される本発明がこのような具体的な実施形態に過度に制限されるべきではないと理解されるべきである。実際、当業者であれば明らかである本発明を実施する記載様式の種々の修正は、本発明により包含されることを意図する。本明細書において、いくつかの従来技術への参照は、この従来技術のいずれかの国における通常の一般的な知識の部分を形成するものとしての承認、またはいずれかの形態における示唆とみなされるものではなく、またそのようにみなされるべきではない。
Claims (36)
- T細胞介在性炎症性免疫反応の処置または予防のための組成物であって、Fasciola hepaticaの排泄/分泌(ES)成分もしくはその分画もしくは誘導体産物またはそこから単離されたタンパク質もしくはペプチドの突然変異体、断片もしくは変異体を含む組成物。
- 少なくとも1つのToll様受容体作動薬をさらに含む、請求項1に記載の組成物。
- 前記組成物がカテプシンLを含まない、請求項1または請求項2に記載の組成物。
- 前記組成物がIL−4濃度を調節しない、請求項1〜3のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記免疫反応を調節する場合、
被検体のIL−10サイトカインレベルの増加、
被検体のTGF−ベータサイトカインレベルの増加、
制御性T細胞の増加、
IL−12、IL−2および/またはIFN−ガンマ等の少なくとも1つの炎症促進性サイトカインの減少、
細胞傷害性Tリンパ球の減少、
Th1細胞の減少、または
混合リンパ球反応の低下
の少なくとも1つを媒介するよう作用する、請求項1〜4のいずれか一項に記載の組成物。 - T細胞介在性炎症促進性状態の予防および/または処置のための医薬組成物であって、Fasciola hepaticaの排泄/分泌(ES)成分もしくはその分画もしくは誘導体産物またはそこから単離されたタンパク質もしくはペプチドの突然変異体、断片もしくは変異体とともに薬学的に許容される賦形剤または担体を含む医薬組成物。
- 少なくとも1つのToll様受容体作動薬をさらに含む、請求項6に記載の医薬組成物。
- T細胞介在性免疫反応を調節する方法であって、
このような処置を必要とする被検体に、Fasciola hepatica由来の排泄/分泌(ES)成分もしくはその分画もしくは誘導体産物またはそこから単離されたタンパク質もしくはペプチドの突然変異体、断片もしくは変異体を含む薬剤の有効量を投与するステップを含む方法。 - 前記免疫反応を調節する場合、前記薬剤が
前記被検体のIL−10サイトカインレベルの増加、
前記被検体のTGF−ベータサイトカインレベルの増加、
制御性T細胞の増加、
IL−12、IL−2および/またはIFN−ガンマ等の少なくとも1つの炎症促進性サイトカインの減少、
細胞傷害性Tリンパ球の減少、
Th1細胞の減少、または
混合リンパ球反応の低下
の少なくとも1つを媒介するよう作用する、請求項8に記載の方法。 - 前記薬剤がPam3CSK4、ザイモサン、ポリIC、LPS、フラジェリンおよびCpG−ODNを含む群から選択される、TLR作動薬とともに投与される、請求項8または請求項9に記載の方法。
- Th1免疫反応の下方制御により有利となる状態を有する被検体を処置する方法であって、
当該被検体に、Fasciola hepaticaの排泄/分泌(ES)成分もしくはその分画もしくは誘導体産物またはそこから単離されたタンパク質もしくはペプチドの突然変異体、断片もしくは変異体を含む薬剤の有効量を投与するステップを含む方法。 - 免疫介在性疾患の処置のための医薬品の調製のための、Fasciola hepaticaの排泄/分泌(ES)成分もしくはその分画もしくは誘導体産物またはそこから単離されたペプチドの突然変異体、断片もしくは変異体の使用。
- 自己免疫疾患の処置のための医薬品の調製のための、Fasciola hepaticaの排泄/分泌(ES)成分もしくはその分画もしくは誘導体産物またはそこから単離されたペプチドの突然変異体、断片もしくは変異体の使用。
- このような処置を必要とする被検体において、免疫介在性疾患の処置に適切な免疫反応を抑制する方法であって、
樹状細胞の機能を調節するために、単離された当該樹状細胞を、Fasciola hepaticaの排泄/分泌(ES)成分もしくはその分画もしくは誘導体産物またはそこから単離されたタンパク質もしくはペプチドの突然変異体、断片もしくは変異体を含む薬剤にex vivoで暴露し、
前記樹状細胞を前記被検体に投与する
ステップを含み、それにより、続いて前記被検体中で前記樹状細胞により誘導される免疫反応が、前記免疫介在性疾患の発症または進行を十分に予防する方法。 - 前記疾患が、自己免疫疾患である、請求項14に記載の方法。
- 前記自己免疫疾患が、リウマチ様関節炎または多発性硬化症である、請求項15に記載の方法。
- 免疫介在性疾患の処置に適切な被検体の免疫反応を誘発する方法であって、
樹状細胞の機能を調節するために、単離された当該樹状細胞を、Fasciola hepaticaの排泄/分泌(ES)成分もしくはその分画またはそこから単離されたペプチドの誘導体産物、突然変異体、断片もしくは変異体を含む薬剤にex vivoで暴露し、
前記樹状細胞を前記被検体に投与する
ステップを含み、それにより、前記被検体中で産生される免疫反応が、前記免疫介在性疾患の発症または進行を十分に予防する方法。 - 免疫介在性状態の予防および/または処置の方法であって、
Fasciola hepaticaの排泄/分泌(ES)成分もしくはその分画もしくは誘導体産物またはそこから単離されたタンパク質もしくはペプチドの突然変異体、断片もしくは変異体を含む薬剤を投与するステップを含み、当該薬剤の投与がIL−17を分泌するT細胞の産生を阻害するよう作用する方法。 - 免疫介在性状態の予防および/または処置の方法であって、
Fasciola hepaticaの排泄/分泌(ES)成分もしくはその分画もしくは誘導体産物またはそこから単離されたタンパク質もしくはペプチドの突然変異体、断片もしくは変異体を含む薬剤を投与するステップを含み、当該薬剤の投与がIL−23産生を阻害するよう作用する方法。 - 免疫介在性疾患の処置のための、IL−17産生を阻害する医薬品の調製のための、Fasciola hepaticaの排泄/分泌(ES)成分もしくはその分画またはそこから単離されたタンパク質の誘導体、突然変異体、断片もしくは変異体の使用。
- 神経変性疾患の処置のための医薬品の調製のための、Fasciola hepaticaの排泄/分泌(ES)成分もしくはその分画もしくは誘導体産物またはそこから単離されたタンパク質もしくはペプチドの突然変異体、断片もしくは変異体の使用。
- 心疾患または状態のための医薬品の調製のための、Fasciola hepaticaの排泄/分泌(ES)成分もしくはその分画もしくは突然変異体またはそこから単離されたタンパク質もしくはペプチドの誘導体産物、断片もしくは変異体の使用。
- 癌または感染性疾患の処置に適切な被検体のTh1反応を誘導する方法であって、
樹状細胞を、エフェクター細胞機能を促進する表現型に成熟させるために、単離された当該樹状細胞を、ワクチンおよびFasciola hepaticaのES(排泄/分泌)成分から単離されたTLR作動薬の存在下において、疾患特異的抗原にex vivoで暴露し、
前記樹状細胞を前記被検体に投与する
ステップを含み、それにより前記被検体中に産生された免疫反応が、癌の発症または進行を十分に予防し、あるいは病原性微生物感染を十分に予防し、それにより感染性疾患を予防する方法。 - IL−12産生またはIL−12ファミリーメンバーの産生の抑制のための組成物であって、Fasciola hepaticaの排泄/分泌(ES)成分もしくはその分画もしくは突然変異体またはそこから単離されたタンパク質もしくはペプチドの誘導体産物、断片もしくは変異体を含む組成物。
- IL−12産生または前記IL−12ファミリーメンバーの産生の抑制において使用される医薬組成物であって、Fasciola hepaticaの排泄/分泌(ES)成分もしくはその分画もしくは突然変異体またはそこから単離されたタンパク質もしくはペプチドの誘導体産物、断片もしくは変異体とともに薬学的に許容される賦形剤または担体を含む組成物。
- IL−12またはIL−12ファミリーメンバーの産生を抑制する方法であって、
Fasciola hepaticaの排泄/分泌(ES)成分もしくはその分画もしくは突然変異体またはそこから単離されたタンパク質もしくはペプチドの誘導体産物、断片もしくは変異体を含む薬剤の有効量を投与する
ステップを含む方法。 - 制御性T細胞の活性化、増殖および/または産生を促進する組成物であって、Fasciola hepaticaの排泄/分泌(ES)成分もしくはその分画もしくは突然変異体またはそこから単離されたタンパク質もしくはペプチドの誘導体産物、断片もしくは変異体を含む組成物。
- 制御性T細胞の活性化、増殖および/または産生を促進する医薬組成物であって、Fasciola hepaticaの排泄/分泌(ES)成分もしくはその分画もしくは突然変異体またはそこから単離されたタンパク質もしくはペプチドの誘導体産物、断片もしくは変異体とともに薬学的に許容される賦形剤または担体を含む組成物。
- 制御性T細胞の活性化、増殖および/または産生を促進する方法であって、
Fasciola hepaticaの排泄/分泌(ES)成分もしくはその分画もしくは突然変異体またはそこから単離されたタンパク質もしくはペプチドの誘導体産物、断片もしくは変異体を含む薬剤の有効量を投与するステップを含む方法。 - 炎症状態の予防および/または処置のための組成物であって、肝吸虫ホモジネート(LFH)もしくは誘導体産物またはそこから単離されたタンパク質もしくはペプチドの突然変異体、断片もしくは変異体を含む組成物。
- 炎症状態の予防および/または処置のための医薬組成物であって、肝吸虫ホモジネート(LFH)もしくは誘導体産物またはそこから単離されたタンパク質もしくはペプチドの突然変異体、断片もしくは変異体とともに薬学的に許容される賦形剤または担体を含む組成物。
- 炎症状態を調節する方法であって、
肝吸虫ホモジネート(LFH)もしくは誘導体産物またはそこから単離されたタンパク質もしくはペプチドの突然変異体、断片もしくは変異体を含む薬剤の有効量を投与するステップを含む方法。 - 認知機能障害の予防および/または処置の方法であって、このような治療を必要とする個体に、肝吸虫ホモジネート(LFH)もしくは誘導体産物またはそこから単離されたタンパク質もしくはペプチドの突然変異体、断片もしくは変異体を含む薬剤を投与するステップを含む方法。
- 認知機能障害の処置のための、肝吸虫ホモジネート(LFH)もしくは誘導体産物またはそこから単離されたタンパク質もしくはペプチドの突然変異体、断片もしくは変異体を含む薬剤の使用。
- 認知機能障害の処置のための医薬品の調製のための、肝吸虫ホモジネート(LFH)もしくは誘導体産物またはそこから単離されたタンパク質もしくはペプチドの突然変異体、断片もしくは変異体の使用。
- 免疫介在性状態の処置のための医薬品の調製のための、肝吸虫ホモジネート(LFH)もしくは誘導体産物またはそこから単離されたタンパク質もしくはペプチドの突然変異体、断片もしくは変異体の使用。
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
IE20050811 | 2005-12-05 | ||
PCT/IE2006/000136 WO2007066313A2 (en) | 2005-12-05 | 2006-12-05 | Compositions and methods for modulating an immune response |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2009518387A true JP2009518387A (ja) | 2009-05-07 |
Family
ID=37843131
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2008543996A Pending JP2009518387A (ja) | 2005-12-05 | 2006-12-05 | 免疫反応を調節する組成物および方法 |
Country Status (6)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US8105601B2 (ja) |
EP (1) | EP1962872B1 (ja) |
JP (1) | JP2009518387A (ja) |
AU (1) | AU2006322887A1 (ja) |
CA (1) | CA2632341A1 (ja) |
WO (1) | WO2007066313A2 (ja) |
Families Citing this family (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GB0620705D0 (en) | 2006-10-18 | 2006-11-29 | Opsona Therapeutics | Compounds for the modulation of toll-like receptor activity and assay methods for the identification of said compounds |
ES2393936T3 (es) * | 2008-04-28 | 2013-01-02 | Txcell | Composiciones para tratar una afección auto-inmune inflamatoria |
US20130122046A1 (en) * | 2010-07-09 | 2013-05-16 | Institut Pasteur Of Shanghai, Cas | Regulatory factor of foxp3 and regulatory t cells and use thereof |
WO2013039872A1 (en) * | 2011-09-12 | 2013-03-21 | Tufts Medical Center | Compositions and methods for treating inflammatory bowel diseases |
US9931361B2 (en) * | 2013-03-18 | 2018-04-03 | Rutgers, The State University Of New Jersey | Treatment to promote wound healing |
Family Cites Families (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3773919A (en) | 1969-10-23 | 1973-11-20 | Du Pont | Polylactide-drug mixtures |
IE52535B1 (en) | 1981-02-16 | 1987-12-09 | Ici Plc | Continuous release pharmaceutical compositions |
BR9808251B1 (pt) * | 1997-03-11 | 2012-09-04 | vacina, e, uso de uma proteìna isolada ou recombinante ou fragmento antigênico da mesma. | |
US6593511B1 (en) * | 2000-05-12 | 2003-07-15 | Bioseek, Inc. | Models of chronic and acute inflammatory diseases |
EP1395826A4 (en) * | 2001-05-17 | 2005-11-09 | Miltenyi Biotec Gmbh | ANTIGEN-BINDING FRAGMENTS FOR A SUB-GROUP OF DENDRITIC CELLS AND USE THEREOF |
US20040202647A1 (en) * | 2002-12-17 | 2004-10-14 | Novasante Inc. | Compositions and methods related to nitrotyrosine - containing compounds as antigenic agents |
-
2006
- 2006-12-05 CA CA002632341A patent/CA2632341A1/en not_active Abandoned
- 2006-12-05 AU AU2006322887A patent/AU2006322887A1/en not_active Abandoned
- 2006-12-05 JP JP2008543996A patent/JP2009518387A/ja active Pending
- 2006-12-05 EP EP06821545.8A patent/EP1962872B1/en not_active Not-in-force
- 2006-12-05 US US12/096,239 patent/US8105601B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2006-12-05 WO PCT/IE2006/000136 patent/WO2007066313A2/en active Application Filing
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
WO2007066313A2 (en) | 2007-06-14 |
CA2632341A1 (en) | 2007-06-14 |
US8105601B2 (en) | 2012-01-31 |
AU2006322887A1 (en) | 2007-06-14 |
US20080260784A1 (en) | 2008-10-23 |
EP1962872A2 (en) | 2008-09-03 |
WO2007066313A3 (en) | 2007-08-09 |
EP1962872B1 (en) | 2014-05-28 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Peng et al. | Characterization of IL-17+ interphotoreceptor retinoid-binding protein-specific T cells in experimental autoimmune uveitis | |
Shaw et al. | Signaling via the RIP2 adaptor protein in central nervous system-infiltrating dendritic cells promotes inflammation and autoimmunity | |
Murphy et al. | Infiltration of Th1 and Th17 cells and activation of microglia in the CNS during the course of experimental autoimmune encephalomyelitis | |
JP2006265212A (ja) | Il−21産生誘導剤 | |
JP2009519234A (ja) | 癌および感染性疾患の処置に関する組成物および方法 | |
JP6462002B2 (ja) | 免疫疾患治療効果を有する新規化合物およびその使用 | |
AU758622B2 (en) | Method for activating natural killer (NK) cells | |
KR101469167B1 (ko) | 봉독-pla2를 포함하는 이상 조절 t 세포 활성 저하 관련 질환의 치료 또는 예방용 약학적 조성물 | |
Wang et al. | Caspase-1 inhibitor ameliorates experimental autoimmune myasthenia gravis by innate dendric cell IL-1-IL-17 pathway | |
JP2014508164A (ja) | 細胞内損傷の治療のための組成物および方法 | |
Gregerson et al. | CD45-positive cells of the retina and their responsiveness to in vivo and in vitro treatment with IFN-γ or anti-CD40 | |
US8815229B2 (en) | Granulysin in immunotherapy | |
JP2009518387A (ja) | 免疫反応を調節する組成物および方法 | |
Xin et al. | Phenotype of CD4+ T cell subsets that develop following mouse facial nerve axotomy | |
Valizadeh et al. | Potential role of regulatory B cells in immunological diseases | |
US20090176696A1 (en) | Methods And Compositions For Modulating An Immune Response | |
TW201021830A (en) | Methods to reduce B-helper T cells to treat autoimmune diseases | |
KR20130106786A (ko) | 골수유래억제세포 및 레바미피드를 유효성분으로 포함하는 면역질환의 예방 또는 치료용 조성물 | |
WO2011048766A1 (ja) | 自己免疫疾患治療に用いる新規抗原としての炭酸脱水酵素i | |
KR101273747B1 (ko) | Sta-21을 유효성분으로 함유하는 관절염의 예방 및 치료용 조성물 | |
KR101488224B1 (ko) | 면역학적 질병의 치료를 위한 티모신 알파 1의 용도 | |
JP2022513590A (ja) | 新規な化合物およびカルシニューリン阻害剤を含む、移植拒絶反応または移植拒絶疾患を予防および治療するための組成物 | |
US9499628B2 (en) | Method of boosting the immune response in neonates | |
WO2015100150A1 (en) | Oral administration of tocilizumab treatment of autoimmune disease | |
RU2652752C1 (ru) | Способ лечения бронхиальной астмы |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20091202 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20091203 |
|
A072 | Dismissal of procedure [no reply to invitation to correct request for examination] |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A073 Effective date: 20110419 |