JP2009240268A - Method for discriminating kind of zoysia spp. plant with microsatellite marker - Google Patents
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Abstract
【課題】対照シバ属植物のゲノムDNAにおける特定のマイクロサテライト座位の遺伝子型であって、対照シバ属植物品種に特異的な遺伝子型を指標とする被検シバ属植物の品種判別法などを提供することを課題とする。
【解決手段】ノシバの地上部、地下部ならびにカルス由来のESTから、マイクロサテライトを抽出し、それらを含むPCR断片が得られるようにプライマーを設計した。多品種のシバ属植物それぞれについて、ゲノムDNAを鋳型として、設計したプライマーペアを用いてPCRを行ない、それらのPCR産物に対して蛍光ラベル反応を行い、DNAアナライザーによる電気泳動で分離した。その結果、品種特異的なPCR断片長を検出することができ、品種特異的なPCR断片長を指標に被検シバ属植物の品種判定を行えることが判明した。
【選択図】なしKind Code: A1 Provided is a method for discriminating varieties of a test genus plant using a genotype of a specific microsatellite locus in genomic DNA of a control genus plant and using a genotype specific to the control genus plant variety as an index The task is to do.
[MEANS FOR SOLVING PROBLEMS] Microsatellite is extracted from aboveground, underground, and callus-derived ESTs of wild buckwheat, and primers are designed so as to obtain PCR fragments containing them. PCR was performed on the various varieties of the genus Shiva using genomic DNA as a template and using the designed primer pairs. The PCR products were subjected to a fluorescent labeling reaction and separated by electrophoresis using a DNA analyzer. As a result, it was found that the variety-specific PCR fragment length can be detected, and the variety determination of the test genus plant can be performed using the variety-specific PCR fragment length as an index.
[Selection figure] None
Description
本発明は、マイクロサテライトマーカーを用いるシバ属植物品種判別法に関する。 The present invention relates to a method for discriminating plant genus plant species using a microsatellite marker.
シバ属植物(Zoysia spp.)は、日本を含めた東アジアから東南アジアに自生するイネ科の多年生草種である。そのうち、ノシバ(Z. japonica)、コウライシバ/ビロードシバ(Z. tenuifolia)およびコウシュンシバ/ヒメコウライシバ(Z. matrella)は庭園、公園、競技場等に広く利用され、また放牧用飼料としても利用されている。そのため、常緑性、環境ストレス耐性あるいは病虫害抵抗性を持つ新品種育成が盛んに行なわれている。 The plant of the genus Zoysia spp. Is a perennial grass species that grows naturally from East Asia including Japan to Southeast Asia. Among them, wild buckwheat ( Z. japonica ), yellow mulberry ( Z. tenuifolia ) and red mulberry ( Z. matrella ) are widely used in gardens, parks, stadiums, etc. and are also used as grazing feed. . Therefore, breeding of new varieties having evergreenness, resistance to environmental stress or resistance to insects and insects is actively performed.
シバ属植物の品種・系統識別や分類には、主に形態の違いが指標とされてきた。形態観察以外の識別法として、DNAマーカーの利用が挙げられる。シバ属植物においては、制限酵素断片長多型マーカー(RFLP)やゲノム配列由来単純反復配列（マイクロサテライト）マーカーなどのDNAマーカーが開発されている。
芝利用の多様化に伴い、今後も新たな登録品種の増加が予想される。そのため、従来の形態的特徴による品種識別に加えて、DNAマーカーによる品種識別もまた併用することが望ましい。DNAマーカーによる品種識別としてはRFLPマーカーによる品種識別があるが、RFLPマーカーによる品種識別には大量のDNAが必要であり、操作も煩雑である点で不利である。また、DNAマーカーによる品種識別としてはマイクロサテライトマーカーによる品種識別がある。ゲノムDNA内のmRNAに転写されない領域に存在するマイクロサテライトは、そのマイクロサテライトが単離された生物と遠縁の生物には存在しない可能性があるので、そのようなマイクロサテライトをマーカーとした品種識別は汎用性に乏しい。 With the diversification of turf use, new registered varieties are expected to increase in the future. For this reason, it is desirable to use cultivar identification using DNA markers in addition to conventional cultivar identification. Variety identification using a DNA marker includes breed identification using an RFLP marker. However, identification of a variety using an RFLP marker requires a large amount of DNA, and is disadvantageous in that the operation is complicated. In addition, cultivar identification using a DNA marker includes cultivar identification using a microsatellite marker. Microsatellite that exists in a region that is not transcribed into mRNA in genomic DNA may not be present in organisms that are distant from the organism in which the microsatellite is isolated, so cultivar identification using such microsatellite as a marker Is not very versatile.
本発明は、上記状況に鑑みてなされたものであり、対照シバ属植物のゲノムDNAにおける特定のマイクロサテライト座位の遺伝子型であって、対照シバ属植物品種に特異的な遺伝子型を指標とする被検シバ属植物の品種判別法、該方法に用いるための試薬やキット、該方法に使用できるオリゴヌクレオチド、該方法に使用できるオリゴヌクレオチドのセットなどを提供することを課題とする。 The present invention has been made in view of the above situation, and is a genotype of a specific microsatellite locus in genomic DNA of a control genus plant, and uses a genotype specific to the control genus plant variety as an index. It is an object of the present invention to provide a method for discriminating varieties of test genus plants, reagents and kits for use in the method, oligonucleotides usable in the method, a set of oligonucleotides usable in the method, and the like.
本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意研究を行った。本発明者らは、ノシバの地上部、地下部ならびにカルス由来のEST(Expressed Sequence Tag)から、マイクロサテライトを抽出し、それらを含む90〜300bpのPCR断片が得られるようにプライマーを設計した。多品種のシバ属植物それぞれについて、ゲノムDNAを鋳型として、設計したプライマーペアを用いてPCRを行ない、それらのPCR産物に対して蛍光ラベル反応を行い、DNAアナライザー（キャピラリー式蛍光DNAシークエンサーとも呼ばれる）による電気泳動で分離した。その結果、品種特異的なPCR断片長を検出することができ、品種特異的なPCR断片長を指標に被検シバ属植物の品種判定を行えることが判明した。本発明は、この知見に基づくものであり、より詳細には、以下の〔１〕から〔１０〕に記載の発明に関する。
〔１〕下記（ａ）に記載の遺伝子型、及び、下記（ｂ）に記載の遺伝子型を比較する工程を含む被検シバ属植物の品種判別法であって、前記工程において比較した遺伝子型が一致したときに、被検シバ属植物の品種が、対照シバ属植物と同一の品種であると判別される方法；
（ａ）対照シバ属植物のゲノムDNAにおける下記（１）から（１３）からなる群より選択される少なくとも1つのマイクロサテライト座位の遺伝子型であって、対照シバ属植物に特異的な遺伝子型、
（ｂ）被検シバ属植物のゲノムDNAにおける（ａ）と同じ座位の遺伝子型、
（１）配列番号：1に記載の塩基配列と相補的な塩基配列、及び、配列番号：2に記載の塩基配列と相補的な塩基配列によって挟まれるマイクロサテライト座位、
（２）配列番号：3に記載の塩基配列と相補的な塩基配列、及び、配列番号：4に記載の塩基配列と相補的な塩基配列によって挟まれるマイクロサテライト座位、
（３）配列番号：5に記載の塩基配列と相補的な塩基配列、及び、配列番号：6に記載の塩基配列と相補的な塩基配列によって挟まれるマイクロサテライト座位、
（４）配列番号：7に記載の塩基配列と相補的な塩基配列、及び、配列番号：8に記載の塩基配列と相補的な塩基配列によって挟まれるマイクロサテライト座位、
（５）配列番号：9に記載の塩基配列と相補的な塩基配列、及び、配列番号：10に記載の塩基配列と相補的な塩基配列によって挟まれるマイクロサテライト座位、
（６）配列番号：11に記載の塩基配列と相補的な塩基配列、及び、配列番号：12に記載の塩基配列と相補的な塩基配列によって挟まれるマイクロサテライト座位、
（７）配列番号：13に記載の塩基配列と相補的な塩基配列、及び、配列番号：14に記載の塩基配列と相補的な塩基配列によって挟まれるマイクロサテライト座位、
（８）配列番号：15に記載の塩基配列と相補的な塩基配列、及び、配列番号：16に記載の塩基配列と相補的な塩基配列によって挟まれるマイクロサテライト座位、
（９）配列番号：17に記載の塩基配列と相補的な塩基配列、及び、配列番号：18に記載の塩基配列と相補的な塩基配列によって挟まれるマイクロサテライト座位、
（１０）配列番号：19に記載の塩基配列と相補的な塩基配列、及び、配列番号：20に記載の塩基配列と相補的な塩基配列によって挟まれるマイクロサテライト座位、
（１１）配列番号：21に記載の塩基配列と相補的な塩基配列、及び、配列番号：22に記載の塩基配列と相補的な塩基配列によって挟まれるマイクロサテライト座位、
（１２）配列番号：23に記載の塩基配列と相補的な塩基配列、及び、配列番号：24に記載の塩基配列と相補的な塩基配列によって挟まれるマイクロサテライト座位、並びに、
（１３）配列番号：25に記載の塩基配列と相補的な塩基配列、及び、配列番号：26に記載の塩基配列と相補的な塩基配列によって挟まれるマイクロサテライト座位。
〔２〕対照シバ属植物が、アケミドリ、青太郎、アプロード、朝駆、朝萌、バーニングラブ、ちばフェアグリーン、チバラフワン、コプロス、デアンザ、エルトロ、エメラルド、エクイターフ、フラッツ、フジコンパクト、はるか、はやと、ヒメノ、イナヒカリ、クサセンリ、メイヤー、みやこ、オアシスグリーン、ロンパーフィールド、緑光、相良姫、スクラム、シャムロン、シルキーフィールド、草剣、たねぞう、ティーエムナイン、つくば輝、つくば太郎、ビクトール、及び、ヤエヤマからなる群より選択される少なくとも1つのシバ属植物である、〔１〕に記載の方法。
〔３〕下記（ａ）に記載の遺伝子型、及び、下記（ｂ）に記載の遺伝子型を比較する工程を含む被検シバ属植物の品種判別法であって、前記工程において比較した遺伝子型が一致したときに、被検シバ属植物の品種が、対照シバ属植物と同一の品種であると判別される方法；
（ａ）アケミドリ、青太郎、アプロード、朝駆、朝萌、バーニングラブ、ちばフェアグリーン、チバラフワン、コプロス、デアンザ、エルトロ、エメラルド、エクイターフ、フラッツ、フジコンパクト、はるか、はやと、ヒメノ、イナヒカリ、クサセンリ、メイヤー、みやこ、オアシスグリーン、ロンパーフィールド、緑光、相良姫、スクラム、シャムロン、シルキーフィールド、草剣、たねぞう、ティーエムナイン、つくば輝、つくば太郎、ビクトール、及び、ヤエヤマからなる群より選択されるいずれかのシバ属植物のゲノムDNAにおける下記（１）から（１３）からなる群より選択される少なくとも（５）、（８）、（９）、（１２）、及び、（１３）に記載のマイクロサテライト座位の遺伝子型、
（ｂ）被検シバ属植物のゲノムDNAにおける（ａ）と同じ座位の遺伝子型、
（１）配列番号：1に記載の塩基配列と相補的な塩基配列、及び、配列番号：2に記載の塩基配列と相補的な塩基配列によって挟まれるマイクロサテライト座位、
（２）配列番号：3に記載の塩基配列と相補的な塩基配列、及び、配列番号：4に記載の塩基配列と相補的な塩基配列によって挟まれるマイクロサテライト座位、
（３）配列番号：5に記載の塩基配列と相補的な塩基配列、及び、配列番号：6に記載の塩基配列と相補的な塩基配列によって挟まれるマイクロサテライト座位、
（４）配列番号：7に記載の塩基配列と相補的な塩基配列、及び、配列番号：8に記載の塩基配列と相補的な塩基配列によって挟まれるマイクロサテライト座位、
（５）配列番号：9に記載の塩基配列と相補的な塩基配列、及び、配列番号：10に記載の塩基配列と相補的な塩基配列によって挟まれるマイクロサテライト座位、
（６）配列番号：11に記載の塩基配列と相補的な塩基配列、及び、配列番号：12に記載の塩基配列と相補的な塩基配列によって挟まれるマイクロサテライト座位、
（７）配列番号：13に記載の塩基配列と相補的な塩基配列、及び、配列番号：14に記載の塩基配列と相補的な塩基配列によって挟まれるマイクロサテライト座位、
（８）配列番号：15に記載の塩基配列と相補的な塩基配列、及び、配列番号：16に記載の塩基配列と相補的な塩基配列によって挟まれるマイクロサテライト座位、
（９）配列番号：17に記載の塩基配列と相補的な塩基配列、及び、配列番号：18に記載の塩基配列と相補的な塩基配列によって挟まれるマイクロサテライト座位、
（１０）配列番号：19に記載の塩基配列と相補的な塩基配列、及び、配列番号：20に記載の塩基配列と相補的な塩基配列によって挟まれるマイクロサテライト座位、
（１１）配列番号：21に記載の塩基配列と相補的な塩基配列、及び、配列番号：22に記載の塩基配列と相補的な塩基配列によって挟まれるマイクロサテライト座位、
（１２）配列番号：23に記載の塩基配列と相補的な塩基配列、及び、配列番号：24に記載の塩基配列と相補的な塩基配列によって挟まれるマイクロサテライト座位、並びに、
（１３）配列番号：25に記載の塩基配列と相補的な塩基配列、及び、配列番号：26に記載の塩基配列と相補的な塩基配列によって挟まれるマイクロサテライト座位。
〔４〕〔１〕から〔３〕のいずれかに記載の方法に用いるためのシバ属植物の品種判別用試薬。
〔５〕〔１〕から〔３〕のいずれかに記載の方法に用いるためのシバ属植物の品種判別用キット。
〔６〕配列番号：1から26のいずれかに記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチド。
〔７〕下記（Ａ）から（Ｍ）からなる群より選択される少なくとも1組のセット；
（Ａ）配列番号：1に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチド、及び、配列番号：2に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチドのセット、
（Ｂ）配列番号：3に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチド、及び、配列番号：4に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチドのセット、
（Ｃ）配列番号：5に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチド、及び、配列番号：6に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチドのセット、
（Ｄ）配列番号：7に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチド、及び、配列番号：8に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチドのセット、
（Ｅ）配列番号：9に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチド、及び、配列番号：10に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチドのセット、
（Ｆ）配列番号：11に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチド、及び、配列番号：12に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチドのセット、
（Ｇ）配列番号：13に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチド、及び、配列番号：14に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチドのセット、
（Ｈ）配列番号：15に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチド、及び、配列番号：16に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチドのセット、
（Ｉ）配列番号：17に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチド、及び、配列番号：18に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチドのセット、
（Ｊ）配列番号：19に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチド、及び、配列番号：20に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチドのセット、
（Ｋ）配列番号：21に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチド、及び、配列番号：22に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチドのセット、
（Ｌ）配列番号：23に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチド、及び、配列番号：24に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチドのセット、並びに、
（Ｍ）配列番号：25に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチド、及び、配列番号：26に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチドのセット。
〔８〕〔７〕に記載のセットを含有するシバ属植物の品種判別用試薬。
〔９〕〔７〕に記載のセットを含有するシバ属植物の品種判別用キット。
〔１０〕アケミドリ、青太郎、アプロード、朝駆、朝萌、バーニングラブ、ちばフェアグリーン、チバラフワン、コプロス、デアンザ、エルトロ、エメラルド、エクイターフ、フラッツ、フジコンパクト、はるか、はやと、ヒメノ、イナヒカリ、クサセンリ、メイヤー、みやこ、オアシスグリーン、ロンパーフィールド、緑光、相良姫、スクラム、シャムロン、シルキーフィールド、草剣、たねぞう、ティーエムナイン、つくば輝、つくば太郎、ビクトール、及び、ヤエヤマからなる群より選択されるいずれかのシバ属植物のゲノムDNAを鋳型とし、下記（Ａ）から（Ｍ）からなる群より選択されるいずれかのセットをプライマーセットとするPCRによって増幅されるPCR産物；
（Ａ）配列番号：1に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチド、及び、配列番号：2に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチドのセット、
（Ｂ）配列番号：3に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチド、及び、配列番号：4に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチドのセット、
（Ｃ）配列番号：5に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチド、及び、配列番号：6に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチドのセット、
（Ｄ）配列番号：7に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチド、及び、配列番号：8に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチドのセット、
（Ｅ）配列番号：9に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチド、及び、配列番号：10に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチドのセット、
（Ｆ）配列番号：11に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチド、及び、配列番号：12に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチドのセット、
（Ｇ）配列番号：13に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチド、及び、配列番号：14に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチドのセット、
（Ｈ）配列番号：15に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチド、及び、配列番号：16に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチドのセット、
（Ｉ）配列番号：17に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチド、及び、配列番号：18に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチドのセット、
（Ｊ）配列番号：19に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチド、及び、配列番号：20に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチドのセット、
（Ｋ）配列番号：21に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチド、及び、配列番号：22に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチドのセット、
（Ｌ）配列番号：23に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチド、及び、配列番号：24に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチドのセット、並びに、
（Ｍ）配列番号：25に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチド、及び、配列番号：26に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチドのセット。
The inventors of the present invention have intensively studied to solve the above problems. The present inventors have extracted primers from EST (Expressed Sequence Tag) derived from the above-ground part, underground part and callus of Nosyba, and designed primers so as to obtain a 90-300 bp PCR fragment containing them. For each of the various genus plants, PCR is performed using the designed primer pairs using genomic DNA as a template, and a fluorescent labeling reaction is performed on the PCR products. DNA analyzer (also called capillary fluorescent DNA sequencer) Separation by electrophoresis. As a result, it was found that the variety-specific PCR fragment length can be detected, and the variety determination of the test genus plant can be performed using the variety-specific PCR fragment length as an index. The present invention is based on this finding, and more specifically, relates to the inventions described in [1] to [10] below.
[1] A method for discriminating plant genus plants including the step of comparing the genotype described in (a) below and the genotype described in (b) below, wherein the genotypes compared in the above step A method of discriminating that the varieties of the test genus plant are the same varieties as the control genus plant when
(A) a genotype of at least one microsatellite locus selected from the group consisting of the following (1) to (13) in the genomic DNA of a control genus plant, wherein the genotype is specific to the control genus plant:
(B) the genotype of the same locus as (a) in the genomic DNA of the test Shiba genus plant,
(1) a microsatellite locus sandwiched between a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 1 and a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 2;
(2) a microsatellite locus sandwiched between a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 3 and a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 4;
(3) a microsatellite locus sandwiched between a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 5 and a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 6;
(4) a microsatellite locus sandwiched between a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 7 and a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 8;
(5) a microsatellite locus sandwiched by a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 9 and a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 10;
(6) a microsatellite locus sandwiched between a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 11 and a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 12;
(7) a microsatellite locus sandwiched between a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 13 and a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 14;
(8) a microsatellite locus sandwiched between a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 15 and a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 16;
(9) a microsatellite locus sandwiched between a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 17 and a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 18;
(10) a microsatellite locus sandwiched between a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 19 and a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 20;
(11) a microsatellite locus sandwiched between a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 21 and a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 22;
(12) a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 23, and a microsatellite locus sandwiched between base sequences complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 24, and
(13) A microsatellite locus sandwiched between a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 25 and a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 26.
[2] The control Shiba genus plants are Achemidori, Aotaro, Approad, Asaka, Morning Moe, Burning Love, Chiba Fair Green, Chibara Huwan, Copros, Deanza, El Toro, Emerald, Equiterf, Flats, Fuji Compact, Haruka, Hayato, It consists of Himeno, Inahikari, Kusasenri, Mayer, Miyako, Oasis Green, Romper Field, Green Light, Sagara Hime, Scrum, Shamron, Silky Field, Grass Sword, Tanezo, Thiem Nine, Tsukuba Teru, Tsukuba Taro, Victor, and Yaeyama The method according to [1], wherein the method is at least one plant of the genus Shiba selected from the group.
[3] A method for discriminating the genus of test genus plants comprising the step of comparing the genotype described in the following (a) and the genotype described in the following (b), wherein the genotype compared in the step A method of discriminating that the varieties of the test genus plant are the same varieties as the control genus plant when
(A) Akemidori, Aotaro, Approad, Asakan, Aso Moe, Burning Love, Chiba Fair Green, Chibara Huwan, Copros, Deansa, El Toro, Emerald, Equiterf, Flats, Fuji Compact, Haruka, Himano, Himeno, Inahikari, Kusasenri, Any selected from the group consisting of Meyer, Miyako, Oasis Green, Romper Field, Green Light, Sagara Hime, Scrum, Shamron, Silky Field, Grass Sword, Tanesou, Thiem Nine, Tsukuba Teru, Tsukuba Taro, Victor, and Yaeyama The micro DNA according to at least (5), (8), (9), (12), and (13) selected from the group consisting of the following (1) to (13) in the genomic DNA of the genus Shiba The genotype of the satellite locus,
(B) the genotype of the same locus as (a) in the genomic DNA of the test Shiba genus plant,
(1) a microsatellite locus sandwiched between a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 1 and a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 2;
(2) a microsatellite locus sandwiched between a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 3 and a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 4;
(3) a microsatellite locus sandwiched between a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 5 and a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 6;
(4) a microsatellite locus sandwiched between a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 7 and a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 8;
(5) a microsatellite locus sandwiched by a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 9 and a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 10;
(6) a microsatellite locus sandwiched between a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 11 and a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 12;
(7) a microsatellite locus sandwiched between a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 13 and a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 14;
(8) a microsatellite locus sandwiched between a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 15 and a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 16;
(9) a microsatellite locus sandwiched between a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 17 and a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 18;
(10) a microsatellite locus sandwiched between a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 19 and a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 20;
(11) a microsatellite locus sandwiched between a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 21 and a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 22;
(12) a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 23, and a microsatellite locus sandwiched between base sequences complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 24, and
(13) A microsatellite locus sandwiched between a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 25 and a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 26.
[4] A reagent for discriminating varieties of genus plants for use in the method according to any one of [1] to [3].
[5] A kit for discriminating varieties of a genus plant for use in the method according to any one of [1] to [3].
[6] An oligonucleotide comprising the base sequence according to any one of SEQ ID NOs: 1 to 26.
[7] At least one set selected from the group consisting of (A) to (M) below:
(A) an oligonucleotide comprising the base sequence described in SEQ ID NO: 1, and a set of oligonucleotides comprising the base sequence described in SEQ ID NO: 2,
(B) an oligonucleotide comprising the base sequence set forth in SEQ ID NO: 3 and a set of oligonucleotides comprising the base sequence set forth in SEQ ID NO: 4.
(C) an oligonucleotide comprising the base sequence set forth in SEQ ID NO: 5 and an oligonucleotide set comprising the base sequence set forth in SEQ ID NO: 6;
(D) an oligonucleotide comprising the base sequence set forth in SEQ ID NO: 7 and a set of oligonucleotides comprising the base sequence set forth in SEQ ID NO: 8;
(E) an oligonucleotide containing the base sequence set forth in SEQ ID NO: 9 and a set of oligonucleotides containing the base sequence set forth in SEQ ID NO: 10;
(F) a set of oligonucleotides containing the base sequence set forth in SEQ ID NO: 11 and an oligonucleotide containing the base sequence set forth in SEQ ID NO: 12;
(G) an oligonucleotide containing the base sequence set forth in SEQ ID NO: 13 and a set of oligonucleotides containing the base sequence set forth in SEQ ID NO: 14;
(H) an oligonucleotide comprising the base sequence set forth in SEQ ID NO: 15 and an oligonucleotide set comprising the base sequence set forth in SEQ ID NO: 16;
(I) an oligonucleotide comprising the base sequence set forth in SEQ ID NO: 17 and a set of oligonucleotides comprising the base sequence set forth in SEQ ID NO: 18;
(J) an oligonucleotide comprising the base sequence set forth in SEQ ID NO: 19 and an oligonucleotide set comprising the base sequence set forth in SEQ ID NO: 20;
(K) an oligonucleotide containing the base sequence set forth in SEQ ID NO: 21 and a set of oligonucleotides containing the base sequence set forth in SEQ ID NO: 22;
(L) an oligonucleotide comprising the base sequence set forth in SEQ ID NO: 23, a set of oligonucleotides comprising the base sequence set forth in SEQ ID NO: 24, and
(M) A set of an oligonucleotide containing the base sequence set forth in SEQ ID NO: 25 and an oligonucleotide containing the base sequence set forth in SEQ ID NO: 26.
[8] A reagent for discriminating varieties of the genus Plant containing the set according to [7].
[9] A kit for discriminating varieties of genus plants containing the set according to [7].
[10] Akemidori, Aotaro, Approad, Asakan, Aso Moe, Burning Love, Chiba Fair Green, Chibara Fwan, Copros, Deansa, El Toro, Emerald, Equiterf, Flats, Fuji Compact, Haruka, Hayato, Himeno, Inahikari, Kusasenri, Any selected from the group consisting of Meyer, Miyako, Oasis Green, Romper Field, Green Light, Sagara Hime, Scrum, Shamron, Silky Field, Grass Sword, Tanesou, Thiem Nine, Tsukuba Teru, Tsukuba Taro, Victor, and Yaeyama PCR product amplified by PCR using the genomic DNA of the genus Shiba as a template, and using any set selected from the group consisting of (A) to (M) below as a primer set;
(A) an oligonucleotide comprising the base sequence described in SEQ ID NO: 1, and a set of oligonucleotides comprising the base sequence described in SEQ ID NO: 2,
(B) an oligonucleotide comprising the base sequence set forth in SEQ ID NO: 3 and a set of oligonucleotides comprising the base sequence set forth in SEQ ID NO: 4.
(C) an oligonucleotide comprising the base sequence set forth in SEQ ID NO: 5 and an oligonucleotide set comprising the base sequence set forth in SEQ ID NO: 6;
(D) an oligonucleotide comprising the base sequence set forth in SEQ ID NO: 7 and a set of oligonucleotides comprising the base sequence set forth in SEQ ID NO: 8;
(E) an oligonucleotide containing the base sequence set forth in SEQ ID NO: 9 and a set of oligonucleotides containing the base sequence set forth in SEQ ID NO: 10;
(F) a set of oligonucleotides containing the base sequence set forth in SEQ ID NO: 11 and an oligonucleotide containing the base sequence set forth in SEQ ID NO: 12;
(G) an oligonucleotide containing the base sequence set forth in SEQ ID NO: 13 and a set of oligonucleotides containing the base sequence set forth in SEQ ID NO: 14;
(H) an oligonucleotide comprising the base sequence set forth in SEQ ID NO: 15 and an oligonucleotide set comprising the base sequence set forth in SEQ ID NO: 16;
(I) an oligonucleotide comprising the base sequence set forth in SEQ ID NO: 17 and a set of oligonucleotides comprising the base sequence set forth in SEQ ID NO: 18;
(J) an oligonucleotide comprising the base sequence set forth in SEQ ID NO: 19 and an oligonucleotide set comprising the base sequence set forth in SEQ ID NO: 20;
(K) an oligonucleotide containing the base sequence set forth in SEQ ID NO: 21 and a set of oligonucleotides containing the base sequence set forth in SEQ ID NO: 22;
(L) an oligonucleotide comprising the base sequence set forth in SEQ ID NO: 23, a set of oligonucleotides comprising the base sequence set forth in SEQ ID NO: 24, and
(M) A set of an oligonucleotide containing the base sequence set forth in SEQ ID NO: 25 and an oligonucleotide containing the base sequence set forth in SEQ ID NO: 26.
本発明によって、形態が類似するシバ属植物種内において、DNAレベルでの品種の識別、品種の雑種性や遺伝的背景の同定などが可能となる。また、本発明のマイクロサテライトは、EST由来のマイクロサテライト、すなわちゲノムDNA内のmRNAに転写される領域に存在するマイクロサテライトであるので、そのマイクロサテライトが単離されたシバ属植物と遠縁のシバ属植物にも存在する可能性が高い。よって、本発明は、マイクロサテライトが単離されたシバ属植物だけでなく、該シバ属植物と類縁のシバ属植物や遠縁のシバ属植物にも応用可能である。さらに、本発明において、複数のマイクロサテライト座位の遺伝子型を品種識別の指標とする場合は、品種判別法によって得られる結果の信頼性が高くなる。 According to the present invention, it is possible to identify varieties at the DNA level, to identify the hybridity and genetic background of varieties, etc., in the species of Shiba sp. Further, since the microsatellite of the present invention is a microsatellite derived from EST, that is, a microsatellite existing in a region transcribed into mRNA in genomic DNA, it is a distantly related Shiba genus plant from which the microsatellite was isolated. It is also likely to exist in genus plants. Therefore, the present invention can be applied not only to the plant of the genus from which the microsatellite is isolated, but also to the plant of the genus Shiba belonging to the plant belonging to the genus Shiba or the plant belonging to the genus Fern from the remote. Furthermore, in the present invention, when the genotypes of a plurality of microsatellite loci are used as an index for breed identification, the reliability of the result obtained by the breed identification method is increased.
〔発明の実施の形態〕
本発明者らは、シバ属植物のゲノムDNAにおいて、下記（１）から（１３）に記載のマイクロサテライト座位を解析したところ、該マイクロサテライト座位が多型性を示すことを見出した。また、本発明者らは、該マイクロサテライト座位の遺伝子型を解析したところ、特定のシバ属植物品種に特異的な遺伝子型が存在すること、及び、該遺伝子型を指標とすることにより、被検シバ属植物の品種判別を行えることを見出した。本発明は、このような知見に基づき、以下の発明を提供する。
[Embodiment of the Invention]
The present inventors have analyzed the microsatellite loci described in the following (1) to (13) in the genomic DNA of the genus Shiba, and found that the microsatellite loci exhibit polymorphism. In addition, the inventors analyzed the genotype of the microsatellite locus, and found that a specific genotype exists in a specific genus plant of the genus Shiba and that the genotype is used as an index, We found that cultivar identification of Shiba spp. The present invention provides the following inventions based on such findings.
下記（ａ）に記載の遺伝子型、及び、下記（ｂ）に記載の遺伝子型を比較する工程を含む被検シバ属植物の品種判別法であって、前記工程において比較した遺伝子型が一致したときに、被検シバ属植物の品種が、対照シバ属植物と同一の品種であると判別される方法；
（ａ）対照シバ属植物のゲノムDNAにおける下記（１）から（１３）からなる群より選択される少なくとも1つのマイクロサテライト座位の遺伝子型であって、対照シバ属植物に特異的な遺伝子型、
（ｂ）被検シバ属植物のゲノムDNAにおける（ａ）と同じ座位の遺伝子型、
（１）配列番号：1に記載の塩基配列と相補的な塩基配列、及び、配列番号：2に記載の塩基配列と相補的な塩基配列によって挟まれるマイクロサテライト座位、
（２）配列番号：3に記載の塩基配列と相補的な塩基配列、及び、配列番号：4に記載の塩基配列と相補的な塩基配列によって挟まれるマイクロサテライト座位、
（３）配列番号：5に記載の塩基配列と相補的な塩基配列、及び、配列番号：6に記載の塩基配列と相補的な塩基配列によって挟まれるマイクロサテライト座位、
（４）配列番号：7に記載の塩基配列と相補的な塩基配列、及び、配列番号：8に記載の塩基配列と相補的な塩基配列によって挟まれるマイクロサテライト座位、
（５）配列番号：9に記載の塩基配列と相補的な塩基配列、及び、配列番号：10に記載の塩基配列と相補的な塩基配列によって挟まれるマイクロサテライト座位、
（６）配列番号：11に記載の塩基配列と相補的な塩基配列、及び、配列番号：12に記載の塩基配列と相補的な塩基配列によって挟まれるマイクロサテライト座位、
（７）配列番号：13に記載の塩基配列と相補的な塩基配列、及び、配列番号：14に記載の塩基配列と相補的な塩基配列によって挟まれるマイクロサテライト座位、
（８）配列番号：15に記載の塩基配列と相補的な塩基配列、及び、配列番号：16に記載の塩基配列と相補的な塩基配列によって挟まれるマイクロサテライト座位、
（９）配列番号：17に記載の塩基配列と相補的な塩基配列、及び、配列番号：18に記載の塩基配列と相補的な塩基配列によって挟まれるマイクロサテライト座位、
（１０）配列番号：19に記載の塩基配列と相補的な塩基配列、及び、配列番号：20に記載の塩基配列と相補的な塩基配列によって挟まれるマイクロサテライト座位、
（１１）配列番号：21に記載の塩基配列と相補的な塩基配列、及び、配列番号：22に記載の塩基配列と相補的な塩基配列によって挟まれるマイクロサテライト座位、
（１２）配列番号：23に記載の塩基配列と相補的な塩基配列、及び、配列番号：24に記載の塩基配列と相補的な塩基配列によって挟まれるマイクロサテライト座位、並びに、
（１３）配列番号：25に記載の塩基配列と相補的な塩基配列、及び、配列番号：26に記載の塩基配列と相補的な塩基配列によって挟まれるマイクロサテライト座位。
A method for discriminating varieties of a test genus plant including the step of comparing the genotype described in the following (a) and the genotype described in the following (b), wherein the genotypes compared in the step matched A method in which, in some cases, the cultivar of the test genus plant is identified as the same cultivar as the control genus plant;
(A) a genotype of at least one microsatellite locus selected from the group consisting of the following (1) to (13) in the genomic DNA of a control genus plant, wherein the genotype is specific to the control genus plant:
(B) the genotype of the same locus as (a) in the genomic DNA of the test Shiba genus plant,
(1) a microsatellite locus sandwiched between a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 1 and a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 2;
(2) a microsatellite locus sandwiched between a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 3 and a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 4;
(3) a microsatellite locus sandwiched between a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 5 and a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 6;
(4) a microsatellite locus sandwiched between a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 7 and a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 8;
(5) a microsatellite locus sandwiched by a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 9 and a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 10;
(6) a microsatellite locus sandwiched between a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 11 and a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 12;
(7) a microsatellite locus sandwiched between a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 13 and a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 14;
(8) a microsatellite locus sandwiched between a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 15 and a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 16;
(9) a microsatellite locus sandwiched between a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 17 and a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 18;
(10) a microsatellite locus sandwiched between a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 19 and a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 20;
(11) a microsatellite locus sandwiched between a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 21 and a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 22;
(12) a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 23, and a microsatellite locus sandwiched between base sequences complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 24, and
(13) A microsatellite locus sandwiched between a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 25 and a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 26.
なお、この方法では、遺伝子型が一致しなかったときに、被検シバ属植物の品種が、対照シバ属植物と同一の品種ではないと判定される。 In this method, when the genotype does not match, it is determined that the variety of the test Shiba genus plant is not the same variety as the control Shiba genus plant.
本発明において、「マイクロサテライト」とは、1つまたは複数の塩基を1反復単位とする反復配列を意味する。1つまたは複数の塩基としては、1から5の塩基が例示できるが、これに制限されるものではない。本発明の「マイクロサテライト」は、「SSR（Simple Sequence Repeat）」と表現することもできる。 In the present invention, “microsatellite” means a repeating sequence having one or more bases as one repeating unit. Examples of one or more bases include, but are not limited to, 1 to 5 bases. The “microsatellite” of the present invention can also be expressed as “SSR (Simple Sequence Repeat)”.
本発明において、「マイクロサテライト座位」とは、染色体又は遺伝地図上におけるマイクロサテライトの位置を意味する。本発明の「マイクロサテライト座位」は、「マイクロサテライト座」と表現することもできる。 In the present invention, the “microsatellite locus” means the position of the microsatellite on the chromosome or genetic map. The “microsatellite locus” of the present invention can also be expressed as “microsatellite locus”.
本発明において、「遺伝子型」とは、アリルの種類（パターン）を意味する。よって、本発明の「遺伝子型」は「アリルパターン」と表現することもできる。また、本発明の「アリル」は「アレル」や「対立遺伝子」と表現することもできる。また、本発明において、「マイクロサテライト座位の遺伝子型」とは、マイクロサテライト座位におけるアリルの種類を意味する。マイクロサテライト座位におけるアリルは、当該するマイクロサテライトの反復単位の繰り返し回数の違いによって種類わけされ、PCR産物中のマイクロサテライトの長さ、すなわち分子量サイズが異なるためにその違いを検出することができる。 In the present invention, the “genotype” means the kind (pattern) of allele. Therefore, the “genotype” of the present invention can also be expressed as an “allyl pattern”. Moreover, the “allyl” of the present invention can also be expressed as “allele” or “allele”. In the present invention, the “genotype of the microsatellite locus” means the type of allyl in the microsatellite locus. Alleles at the microsatellite locus are classified according to the difference in the number of repetitions of the repetitive unit of the microsatellite, and the difference can be detected because the length of the microsatellite in the PCR product, that is, the molecular weight size is different.
本発明において、「少なくとも1つのマイクロサテライト座位の遺伝子型」には、1つのマイクロサテライト座位の遺伝子型、及び、複数のマイクロサテライト座位それぞれの遺伝子型の組み合わせが含まれる。 In the present invention, “genotype of at least one microsatellite locus” includes a genotype of one microsatellite locus and a combination of genotypes of a plurality of microsatellite loci.
本発明における「対照シバ属植物に特異的な遺伝子型」は「対照シバ属植物品種に特異的な遺伝子型」と表現することもできる。 In the present invention, “a genotype specific to a control genus plant” can also be expressed as “a genotype specific to a control genus plant variety”.
本発明における対照シバ属植物は、そのシバ属植物のゲノムDNAにおける上記（１）から（１３）からなる群より選択される少なくとも1つのマイクロサテライト座位の遺伝子型であって、そのシバ属植物に特異的な遺伝子型が検出されるシバ属植物である。対照シバ属植物としては、ノシバ、コウライシバ（ビロードシバ、ヒメシバ、キヌシバ）、コウシュンシバ（ヒメコウライシバ）、オニシバ等のZoysia属のシバ属植物が挙げられるが、シバ属植物である限り、これらに制限されるものではない。また、対照シバ属植物としては、例えば、以下の1から36からなる群より選択される少なくとも1つのシバ属植物が挙げられるが、これらに限定されるものではない。以下の1から36のシバ属植物と類縁のシバ属植物や遠縁のシバ属植物もまた本発明の対照シバ属植物に含まれる。
1.アケミドリ（販売元：株式会社日本草地畜産種子協会、登録番号：第7224号、育成者権者：株式会社飼料作物改良増殖技術研究所）
2.青太郎（販売元：ゾイシアンジャパン）
3.アプロード（販売元：株式会社日本草地畜産種子協会、登録番号：第7226号、育成者権者：株式会社飼料作物改良増殖技術研究所）
4.朝駆（販売元：宮崎芝園、登録番号：第10487号、育成者権者：独立行政法人農業・食品産業技術総合研究機構）
5.朝萌（販売元：宮崎芝園、登録番号：第11724号、育成者権者：独立行政法人農業・食品産業技術総合研究機構）
6.バーニングラブ（販売元：株式会社住友林業、登録番号：第14694号、育成者権者：国立大学法人千葉大学）
7.ちばフェアグリーン（販売元：有限会社千葉グリーン技研、登録番号：第13775号、育成者権者：千葉県）
8.チバラフワン（販売元：有限会社千葉グリーン技研、登録番号：第11260号、育成者権者：千葉県）
9.コプロス（販売元：海水化学工業、登録番号：第10638号、育成者権者：海水化学工業株式会社）
10.デアンザ（販売元：株式会社ニチノー緑化、登録番号：第9132号、育成者権者：ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティー オブ カリフォルニア）
11.エルトロ（販売元：ニチノー緑化）
12.エメラルド（研究用途に限り千葉県農業総合研究センターより入手可能）
13.エクイターフ（販売元：株式会社芝良、登録番号：第13772号、育成者権者：日本中央競馬会）
14.フラッツ（販売元：海水化学工業、登録番号：第13648号、育成者権者：海水化学工業株式会社）
15.フジコンパクト（販売元：フジコンパクト生産販売部会（事務局JA南駿北部営農センター）、登録番号：第9210号、育成者権者：静岡県）
16.はるか（販売元：ジェイツー、登録番号：第5868号、育成者権者：株式会社ジャパン・ターフグラス）
17.はやと（販売元：ジェイツー、登録番号：第5869号、育成者権者：株式会社ジャパン・ターフグラス）
18.ヒメノ（販売元：ゾイシアンジャパン、登録番号：第9209号、育成者権者：ゾイシアンジャパン株式会社）
19.イナヒカリ（販売元：株式会社日本草地畜産種子協会、登録番号：第7225号、育成者権者：株式会社飼料作物改良増殖技術研究所）
20.クサセンリ（配布元：九州東海大学より研究機関に配布可能、登録番号：第10255号、育成者権者：学校法人東海大学）
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21.メイヤー（販売元：研究用途に限り千葉県農業総合研究センターより入手可能）
22.みやこ（販売元：ジェイツー、登録番号：第4300号、育成者権者：株式会社ジャパン・ターフグラス）
23.オアシスグリーン（販売元：株式会社住友林業、登録番号：第14692号、育成者権者：国立大学法人千葉大学）
24.ロンパーフィールド（販売元：株式会社住友林業、登録番号：第14695号、育成者権者：国立大学法人千葉大学）
25.緑光（販売元：伊藤園、登録番号：第11964号、育成者権者：株式会社伊藤園）
26.相良姫（販売元：伊藤園、登録番号：第11963号、育成者権者：株式会社伊藤園）
27.スクラム（販売元：海水化学工業、登録番号：第13647号、育成者権者：海水化学工業株式会社）
28.シャムロン（配布元：九州東海大学より研究機関に配布可能、登録番号：第10254号、育成者権者：学校法人東海大学）
29.シルキーフィールド（販売元：株式会社住友林業、登録番号：第14693号、育成者権者：国立大学法人千葉大学）
30.草剣（販売元：研究用途に限り日本中央競馬会より入手可能、登録番号：第13773号、育成者権者：日本中央競馬会）
31.たねぞう（販売元：株式会社日本草地畜産種子協会、登録番号：第16032号、育成者権者：社団法人日本草地畜産種子協会）
32.ティーエムナイン（販売元：トヨタ自動車、登録番号：第14320号、育成者権者：トヨタ自動車株式会社）
33.つくば輝（販売元：研究用途に限り茨城県農業総合研究センターより入手可能、登録番号：第14789号、育成者権者：茨城県）
34.つくば太郎（販売元：研究用途に限り茨城県農業総合研究センターより入手可能、登録番号：第14790号、育成者権者：茨城県）
35.ビクトール（販売元：ニチノー緑化、登録番号：第9131号、育成者権者：ザリージェンツオブザユニバーシティー オブ カリフォルニア）
36.ヤエヤマ（配布元：九州東海大学より研究機関に配布可能、登録番号：第10080号、育成者権者：学校法人東海大学）
The control genus plant in the present invention is at least one microsatellite locus genotype selected from the group consisting of (1) to (13) in the genomic DNA of the genus plant, It is a Shiba genus plant in which a specific genotype is detected. Examples of the control genus plant include Zoysia genus plants such as wild buckwheat, quercus shiba (velvet shiba, Japanese Shiba, Kinusiba), Koshushiba (Hymenoptera), onishiba, etc. It is not a thing. Examples of the control genus plant include, but are not limited to, at least one genus plant selected from the group consisting of 1 to 36 below. The following 1 to 36 Shiba plants and related Shiba plants and distantly related Shiba plants are also included in the control plant of the present invention.
1. Akemidori (Distributor: Japan Grassland Livestock Seeds Association, Registration No. 7224, Breeder: Feed Crop Improvement Breeding Technology Institute, Inc.)
2. Aotaro (Distributor: Zoisian Japan)
3. Upload (Seller: Japan Grassland Livestock Seeds Association, Registration No. 7226, Breeder: Feed Crop Improvement Breeding Technology Institute, Inc.)
4. Asakusa (sales agency: Miyazaki Shibaen, registration number: 10487, grower right holder: National Agriculture and Food Research Organization)
5. Asamoe (Seller: Miyazaki Shibaen, Registration No. 11724, Breeder: Agricultural and Food Industry Research Organization)
6. Burning Love (sales agency: Sumitomo Forestry Co., Ltd., registration number: 14694, holder of the breeder: Chiba University)
7. Chiba Fair Green (Distributor: Chiba Green Giken Co., Ltd., Registration Number: No. 13775, Breeder Rights: Chiba Prefecture)
8. Chibarahuwan (Distributor: Chiba Green Giken Co., Ltd., registration number: No. 11260, trainer: Chiba Prefecture)
9. Copros (sales agency: seawater chemical industry, registration number: 10638, breeder right person: seawater chemical industry corporation)
10. Deansa (Seller: Nichino Greening Co., Ltd., Registration No. 9132, Breeder: The Regents of the University of California)
11. El Toro (Distributor: Nichino Greening)
12. Emerald (available for research use only from Chiba Agricultural Research Center)
13. Equiterf (sales agency: Shiba Ryo, registration number: No. 13772, breeder right: Japan Central Horse Racing Association)
14. Flats (Seller: Seawater Chemical Industry, Registration Number: No. 13648, Breeder: Seawater Chemical Industry Co., Ltd.)
15. Fuji Compact (Seller: Fuji Compact Production Sales Subcommittee (Secretariat JA Nanjo Northern Farming Center), Registration Number: 9210, Breeder Rights: Shizuoka Prefecture)
16. Haruka (Distributor: Jtwo, Registration Number: No. 5868, Breeder: Japan Turf Glass Co., Ltd.)
17. Hayato (Distributor: Jtwo, Registration Number: No. 5869, Breeder: Japan Turf Glass Co., Ltd.)
18.Himeno (Distributor: Zoisian Japan, Registration No. 9209, Breeder: Zoisian Japan)
19. Inahikari (Distributor: Japan Grassland Livestock Seed Association, Registration No. 7225, Breeder: Feed Crop Improvement Breeding Technology Institute, Inc.)
20. Kusasenri (distributor: Kyushu Tokai University can be distributed to research institutions, registration number: No. 10255, nurturing rights holder: Tokai University)
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21. Mayer (Seller: Available for research purposes only, available from Chiba Agricultural Research Center)
22.Miyako (sales agency: Jtwo, registration number: No. 4300, breeder right person: Japan Turf Glass Co., Ltd.)
23. Oasis Green (sales agency: Sumitomo Forestry Co., Ltd., registration number: No. 14692, nurturing rights holder: National University Corporation Chiba University)
24. Romper Field (Seller: Sumitomo Forestry Co., Ltd., registration number: No. 14695, holder of the breeder: Chiba University)
25. Midoriko (Seller: Itoen, registration number: No. 11964, grower right holder: Itoen Co., Ltd.)
26.Princess Sagara (Seller: ITO EN, Registration No. 11963, Breeder: ITO EN Co., Ltd.)
27. Scrum (sales agency: seawater chemical industry, registration number: No. 13647, breeder right person: seawater chemical industry corporation)
28. Shamron (distribution source: Kyushu Tokai University can be distributed to research institutes, registration number: 10254, nurturing rights holder: Tokai University)
29.Silky Field (Distributor: Sumitomo Forestry Co., Ltd., registration number: No. 14663, breeder right: Chiba University, National University Corporation)
30. Grass sword (distributor: available for research purposes only from the Japan Central Horse Racing Association, registration number: 13773, breeder: Japan Central Horse Racing Association)
31. Tanezo (Seller: Japan Grassland Livestock Seeds Association, Registration Number: No. 16032, Breeder: Japan Grassland Livestock Seeds Association)
32. TEM NINE (Distributor: Toyota Motor Corporation, registration number: 14320, trainer: Toyota Motor Corporation)
33. Teru Tsukuba (Distributor: Available for research purposes only from Ibaraki Prefectural Agricultural Research Center, registration number: No. 14789, breeder right holder: Ibaraki Prefecture)
34.Tsukuba Taro (Seller: Available for research purposes only from Ibaraki Prefectural Agricultural Research Center, registration number: 14790, grower right holder: Ibaraki Prefecture)
35. Victor (distributor: Nichino Greening, registration number: 9131, grower right: The League of the University of California)
36.Yaeyama (distributor: Kyushu Tokai University can be distributed to research institutes, registration number: 10080, nurturing rights holder: Tokai University)
なお、「登録番号」及び「育成者権者」とは、日本国の品種登録制度における登録番号及び育成者権者を意味する。 The “registration number” and the “nurturing person” mean the registration number and the breeding person in the Japanese variety registration system.
本発明において、被検シバ属植物としては、シバ属植物の特徴を有する植物、シバ属植物の可能性がある植物、遺伝的にシバ属に近縁な植物種等が例示できるが、これらに制限されない。 In the present invention, examples of the plant of the genus Shiba include plants having the characteristics of the plant of the genus Shiba, plants having the possibility of the plant of the genus Shiba, and plant species genetically related to the genus Shiba, Not limited.
またシバ属植物の特徴としては、匍匐茎があり地を這うように広がる、が例示できるが、これらに限定されない。 Further, as a characteristic of the plant of the genus Shiba, it can be exemplified that there is a stem and spreads so as to crawl the ground, but it is not limited to these.
また、本発明における「品種」は、品種登録制度がある国においては「品種又は育成系統」と表現することもできる。「品種又は育成系統」における「品種」は品種登録制度における登録品種を意味し、「品種又は育成系統」における「育成系統」は品種登録制度における未登録品種（例えば、品種として確立される前の育成段階のもの、広く流通している系統などが例示できる）を意味する。 Further, the “variety” in the present invention can also be expressed as “variety or breeding line” in a country having a variety registration system. “Cultivar” in “Cultivar or breeding line” means a registered variety in the breed registration system, and “Growth line” in “Cultivar or breeding line” means an unregistered variety (for example, before being established as a breed in the breed registration system) Examples include those in the breeding stage and widely distributed systems).
本発明における「判別」は、「識別」、「同定」、「特定」、「鑑定」、又は「判定」と表現することもできる。 The “discrimination” in the present invention can also be expressed as “identification”, “identification”, “specific”, “appraisal”, or “determination”.
本発明の具体的な態様としては、以下の発明が例示できるが、これらに限定されるものではなく、本発明には実施例の結果に基づき特定可能な全ての発明が含まれる。 Specific embodiments of the present invention can be exemplified by the following inventions, but are not limited thereto, and the present invention includes all inventions that can be specified based on the results of the examples.
下記（ａ）に記載の遺伝子型、及び、下記（ｂ）に記載の遺伝子型を比較する工程を含む被検シバ属植物の品種判別法であって、前記工程において比較した遺伝子型が一致したときに、被検シバ属植物の品種が、青太郎と同一の品種であると判別される方法；
（ａ）青太郎のゲノムDNAにおける上記（１）から（１３）からなる群より選択される少なくとも（５）又は（８）に記載のマイクロサテライト座位の遺伝子型、
（ｂ）被検シバ属植物のゲノムDNAにおける（ａ）と同じ座位の遺伝子型。
A method for discriminating varieties of a test genus plant including the step of comparing the genotype described in the following (a) and the genotype described in the following (b), wherein the genotypes compared in the step matched A method in which the cultivar of the genus Shiba is sometimes identified as the same cultivar as Aotaro;
(A) at least the genotype of the microsatellite locus according to (5) or (8) selected from the group consisting of (1) to (13) in genomic DNA of Aotaro,
(B) The genotype of the same locus as (a) in the genomic DNA of the test Shiba genus plant.
下記（ａ）に記載の遺伝子型、及び、下記（ｂ）に記載の遺伝子型を比較する工程を含む被検シバ属植物の品種判別法であって、前記工程において比較した遺伝子型が一致したときに、被検シバ属植物の品種が、バーニングラブと同一の品種であると判別される方法；
（ａ）バーニングラブのゲノムDNAにおける上記（１）から（１３）からなる群より選択される少なくとも（５）又は（８）に記載のマイクロサテライト座位の遺伝子型、
（ｂ）被検シバ属植物のゲノムDNAにおける（ａ）と同じ座位の遺伝子型。
A method for discriminating varieties of a test genus plant including the step of comparing the genotype described in the following (a) and the genotype described in the following (b), wherein the genotypes compared in the step matched A method in which the cultivar of the genus Shiba is sometimes determined to be the same variety as the burning love;
(A) at least the genotype of the microsatellite locus according to (5) or (8) selected from the group consisting of (1) to (13) in the genomic DNA of Burning Love;
(B) The genotype of the same locus as (a) in the genomic DNA of the test Shiba genus plant.
下記（ａ）に記載の遺伝子型、及び、下記（ｂ）に記載の遺伝子型を比較する工程を含む被検シバ属植物の品種判別法であって、前記工程において比較した遺伝子型が一致したときに、被検シバ属植物の品種が、デアンザと同一の品種であると判別される方法；
（ａ）デアンザのゲノムDNAにおける上記（１）から（１３）からなる群より選択される少なくとも（１）に記載のマイクロサテライト座位の遺伝子型、
（ｂ）被検シバ属植物のゲノムDNAにおける（ａ）と同じ座位の遺伝子型。
A method for discriminating varieties of a test genus plant including the step of comparing the genotype described in the following (a) and the genotype described in the following (b), wherein the genotypes compared in the step matched A method in which the cultivar of the test genus plant is sometimes identified as the same cultivar as Deanza;
(A) the genotype of the microsatellite locus according to at least (1) selected from the group consisting of (1) to (13) above in the genomic DNA of Deanza,
(B) The genotype of the same locus as (a) in the genomic DNA of the test Shiba genus plant.
下記（ａ）に記載の遺伝子型、及び、下記（ｂ）に記載の遺伝子型を比較する工程を含む被検シバ属植物の品種判別法であって、前記工程において比較した遺伝子型が一致したときに、被検シバ属植物の品種が、はやとと同一の品種であると判別される方法；
（ａ）はやとのゲノムDNAにおける上記（１）から（１３）からなる群より選択される少なくとも（１２）に記載のマイクロサテライト座位の遺伝子型、
（ｂ）被検シバ属植物のゲノムDNAにおける（ａ）と同じ座位の遺伝子型。
A method for discriminating varieties of a test genus plant including the step of comparing the genotype described in the following (a) and the genotype described in the following (b), wherein the genotypes compared in the step matched A method in which the cultivar of the genus Shiba is sometimes identified as the same variety as Hayato;
(A) a genotype of the microsatellite locus according to at least (12) selected from the group consisting of (1) to (13) in the genomic DNA of Hayato,
(B) The genotype of the same locus as (a) in the genomic DNA of the test Shiba genus plant.
下記（ａ）に記載の遺伝子型、及び、下記（ｂ）に記載の遺伝子型を比較する工程を含む被検シバ属植物の品種判別法であって、前記工程において比較した遺伝子型が一致したときに、被検シバ属植物の品種が、ヒメノと同一の品種であると判別される方法；
（ａ）ヒメノのゲノムDNAにおける上記（１）から（１３）からなる群より選択される少なくとも（７）に記載のマイクロサテライト座位の遺伝子型、
（ｂ）被検シバ属植物のゲノムDNAにおける（ａ）と同じ座位の遺伝子型。
A method for discriminating varieties of a test genus plant including the step of comparing the genotype described in the following (a) and the genotype described in the following (b), wherein the genotypes compared in the step matched A method in which the cultivar of the genus Shiba is sometimes determined to be the same variety as Himeno;
(A) a genotype of the microsatellite locus according to at least (7) selected from the group consisting of (1) to (13) above in genomic DNA of HIMENO;
(B) The genotype of the same locus as (a) in the genomic DNA of the test Shiba genus plant.
下記（ａ）に記載の遺伝子型、及び、下記（ｂ）に記載の遺伝子型を比較する工程を含む被検シバ属植物の品種判別法であって、前記工程において比較した遺伝子型が一致したときに、被検シバ属植物の品種が、クサセンリと同一の品種であると判別される方法；
（ａ）クサセンリのゲノムDNAにおける上記（１）から（１３）からなる群より選択される少なくとも（７）又は（１３）に記載のマイクロサテライト座位の遺伝子型、
（ｂ）被検シバ属植物のゲノムDNAにおける（ａ）と同じ座位の遺伝子型。
A method for discriminating varieties of a test genus plant including the step of comparing the genotype described in the following (a) and the genotype described in the following (b), wherein the genotypes compared in the step matched A method in which the cultivar of the genus Shiba is sometimes determined to be the same cultivar as Xanthoris;
(A) a genotype of a microsatellite locus according to (7) or (13) selected from the group consisting of (1) to (13) above in genomic DNA of Xanthori;
(B) The genotype of the same locus as (a) in the genomic DNA of the test Shiba genus plant.
下記（ａ）に記載の遺伝子型、及び、下記（ｂ）に記載の遺伝子型を比較する工程を含む被検シバ属植物の品種判別法であって、前記工程において比較した遺伝子型が一致したときに、被検シバ属植物の品種が、メイヤーと同一の品種であると判別される方法；
（ａ）メイヤーのゲノムDNAにおける上記（１）から（１３）からなる群より選択される少なくとも（６）に記載のマイクロサテライト座位の遺伝子型、
（ｂ）被検シバ属植物のゲノムDNAにおける（ａ）と同じ座位の遺伝子型。
A method for discriminating varieties of a test genus plant including the step of comparing the genotype described in the following (a) and the genotype described in the following (b), wherein the genotypes compared in the step matched A method in which the cultivar of the genus Shiba is sometimes determined to be the same variety as the Mayer;
(A) a genotype of the microsatellite locus according to at least (6) selected from the group consisting of (1) to (13) above in Mayer's genomic DNA;
(B) The genotype of the same locus as (a) in the genomic DNA of the test Shiba genus plant.
下記（ａ）に記載の遺伝子型、及び、下記（ｂ）に記載の遺伝子型を比較する工程を含む被検シバ属植物の品種判別法であって、前記工程において比較した遺伝子型が一致したときに、被検シバ属植物の品種が、ロンパーフィールドと同一の品種であると判別される方法；
（ａ）ロンパーフィールドのゲノムDNAにおける上記（１）から（１３）からなる群より選択される少なくとも（１１）に記載のマイクロサテライト座位の遺伝子型、
（ｂ）被検シバ属植物のゲノムDNAにおける（ａ）と同じ座位の遺伝子型。
A method for discriminating varieties of a test genus plant including the step of comparing the genotype described in the following (a) and the genotype described in the following (b), wherein the genotypes compared in the step matched A method in which the cultivar of the genus Shiba is sometimes determined to be the same variety as the romper field;
(A) a genotype of at least the microsatellite locus according to (11) selected from the group consisting of (1) to (13) in the genomic DNA of romper field,
(B) The genotype of the same locus as (a) in the genomic DNA of the test Shiba genus plant.
下記（ａ）に記載の遺伝子型、及び、下記（ｂ）に記載の遺伝子型を比較する工程を含む被検シバ属植物の品種判別法であって、前記工程において比較した遺伝子型が一致したときに、被検シバ属植物の品種が、緑光と同一の品種であると判別される方法；
（ａ）緑光のゲノムDNAにおける上記（１）から（１３）からなる群より選択される少なくとも（５）に記載のマイクロサテライト座位の遺伝子型、
（ｂ）被検シバ属植物のゲノムDNAにおける（ａ）と同じ座位の遺伝子型。
A method for discriminating varieties of a test genus plant including the step of comparing the genotype described in the following (a) and the genotype described in the following (b), wherein the genotypes compared in the step matched A method in which the cultivar of the genus Shiba is sometimes determined to be the same variety as the green light;
(A) the genotype of the microsatellite locus according to at least (5) selected from the group consisting of (1) to (13) above in the genomic DNA of green light;
(B) The genotype of the same locus as (a) in the genomic DNA of the test Shiba genus plant.
下記（ａ）に記載の遺伝子型、及び、下記（ｂ）に記載の遺伝子型を比較する工程を含む被検シバ属植物の品種判別法であって、前記工程において比較した遺伝子型が一致したときに、被検シバ属植物の品種が、相良姫と同一の品種であると判別される方法；
（ａ）相良姫のゲノムDNAにおける上記（１）から（１３）からなる群より選択される少なくとも（９）に記載のマイクロサテライト座位の遺伝子型、
（ｂ）被検シバ属植物のゲノムDNAにおける（ａ）と同じ座位の遺伝子型。
A method for discriminating varieties of a test genus plant including the step of comparing the genotype described in the following (a) and the genotype described in the following (b), wherein the genotypes compared in the step matched A method in which the varieties of the genus Shiba are sometimes determined to be the same variety as the Princess Sagara;
(A) a genotype of the microsatellite locus according to at least (9) selected from the group consisting of (1) to (13) in the genomic DNA of Sagarahime;
(B) The genotype of the same locus as (a) in the genomic DNA of the test Shiba genus plant.
下記（ａ）に記載の遺伝子型、及び、下記（ｂ）に記載の遺伝子型を比較する工程を含む被検シバ属植物の品種判別法であって、前記工程において比較した遺伝子型が一致したときに、被検シバ属植物の品種が、シャムロンと同一の品種であると判別される方法；
（ａ）シャムロンのゲノムDNAにおける上記（１）から（１３）からなる群より選択される少なくとも（５）に記載のマイクロサテライト座位の遺伝子型、
（ｂ）被検シバ属植物のゲノムDNAにおける（ａ）と同じ座位の遺伝子型。
A method for discriminating varieties of a test genus plant including the step of comparing the genotype described in the following (a) and the genotype described in the following (b), wherein the genotypes compared in the step matched A method in which the cultivar of the genus Shiba is sometimes identified as the same variety as Shamron;
(A) the genotype of the microsatellite locus according to at least (5) selected from the group consisting of (1) to (13) in the genomic DNA of Shamron;
(B) The genotype of the same locus as (a) in the genomic DNA of the test Shiba genus plant.
下記（ａ）に記載の遺伝子型、及び、下記（ｂ）に記載の遺伝子型を比較する工程を含む被検シバ属植物の品種判別法であって、前記工程において比較した遺伝子型が一致したときに、被検シバ属植物の品種が、朝萌と同一の品種であると判別される方法；
（ａ）朝萌のゲノムDNAにおける上記（１）から（１３）からなる群より選択される少なくとも（１０）に記載のマイクロサテライト座位の遺伝子型、
（ｂ）被検シバ属植物のゲノムDNAにおける（ａ）と同じ座位の遺伝子型。
A method for discriminating varieties of a test genus plant including the step of comparing the genotype described in the following (a) and the genotype described in the following (b), wherein the genotypes compared in the step matched A method in which the cultivar of the genus Shiba is sometimes identified as the same variety as Asamoe;
(A) the genotype of at least the microsatellite locus according to (10) selected from the group consisting of (1) to (13) above in Asamoe genomic DNA;
(B) The genotype of the same locus as (a) in the genomic DNA of the test Shiba genus plant.
下記（ａ）に記載の遺伝子型、及び、下記（ｂ）に記載の遺伝子型を比較する工程を含む被検シバ属植物の品種判別法であって、前記工程において比較した遺伝子型が一致したときに、被検シバ属植物の品種が、アケミドリと同一の品種であると判別される方法；
（ａ）アケミドリのゲノムDNAにおける上記（１）から（１３）からなる群より選択される少なくとも（５）及び（１２）に記載のマイクロサテライト座位の遺伝子型、
（ｂ）被検シバ属植物のゲノムDNAにおける（ａ）と同じ座位の遺伝子型。
A method for discriminating varieties of a test genus plant including the step of comparing the genotype described in the following (a) and the genotype described in the following (b), wherein the genotypes compared in the step matched A method in which the cultivar of the genus Shiba is sometimes determined to be the same cultivar as that of Achemid;
(A) a genotype of at least the microsatellite locus according to (5) and (12) selected from the group consisting of (1) to (13) in the genomic DNA of Achamidori,
(B) The genotype of the same locus as (a) in the genomic DNA of the test Shiba genus plant.
下記（ａ）に記載の遺伝子型、及び、下記（ｂ）に記載の遺伝子型を比較する工程を含む被検シバ属植物の品種判別法であって、前記工程において比較した遺伝子型が一致したときに、被検シバ属植物の品種が、アプロードと同一の品種であると判別される方法；
（ａ）アプロードのゲノムDNAにおける上記（１）から（１３）からなる群より選択される少なくとも（２）、（４）、（５）、（６）、（９）又は（１２）に記載のマイクロサテライト座位、及び、（１３）に記載のマイクロサテライト座位の遺伝子型、
（ｂ）被検シバ属植物のゲノムDNAにおける（ａ）と同じ座位の遺伝子型。
A method for discriminating varieties of a test genus plant including the step of comparing the genotype described in the following (a) and the genotype described in the following (b), wherein the genotypes compared in the step matched A method in which the cultivar of the genus Shiba is sometimes identified as the same cultivar as Aproad;
(A) at least (2), (4), (5), (6), (9) or (12) selected from the group consisting of (1) to (13) in the genomic DNA of the upload A microsatellite locus, and a genotype of the microsatellite locus according to (13),
(B) The genotype of the same locus as (a) in the genomic DNA of the test Shiba genus plant.
下記（ａ）に記載の遺伝子型、及び、下記（ｂ）に記載の遺伝子型を比較する工程を含む被検シバ属植物の品種判別法であって、前記工程において比較した遺伝子型が一致したときに、被検シバ属植物の品種が、朝駆と同一の品種であると判別される方法；
（ａ）朝駆のゲノムDNAにおける上記（１）から（１３）からなる群より選択される少なくとも（３）、（９）又は（１２）に記載のマイクロサテライト座位、及び、（５）に記載のマイクロサテライト座位の遺伝子型、
（ｂ）被検シバ属植物のゲノムDNAにおける（ａ）と同じ座位の遺伝子型。
A method for discriminating varieties of a test genus plant including the step of comparing the genotype described in the following (a) and the genotype described in the following (b), wherein the genotypes compared in the step matched A method in which the cultivar of the genus Shiba is sometimes determined to be the same variety as the morning dynasty;
(A) at least a microsatellite locus according to (3), (9) or (12) selected from the group consisting of (1) to (13) in the genomic DNA of Asakusa, and (5) Genotype of the microsatellite locus,
(B) The genotype of the same locus as (a) in the genomic DNA of the test Shiba genus plant.
下記（ａ）に記載の遺伝子型、及び、下記（ｂ）に記載の遺伝子型を比較する工程を含む被検シバ属植物の品種判別法であって、前記工程において比較した遺伝子型が一致したときに、被検シバ属植物の品種が、ちばフェアグリーンと同一の品種であると判別される方法；
（ａ）ちばフェアグリーンのゲノムDNAにおける上記（１）から（１３）からなる群より選択される少なくとも（８）又は（９）に記載のマイクロサテライト座位、及び、（５）に記載のマイクロサテライト座位の遺伝子型、
（ｂ）被検シバ属植物のゲノムDNAにおける（ａ）と同じ座位の遺伝子型。
A method for discriminating varieties of a test genus plant including the step of comparing the genotype described in the following (a) and the genotype described in the following (b), wherein the genotypes compared in the step matched A method in which the cultivar of the genus Shiba is sometimes identified as the same variety as Chiba Fair Green;
(A) at least the microsatellite locus according to (8) or (9) selected from the group consisting of (1) to (13) in the genomic DNA of Chiba Fairgreen, and the microsatellite according to (5) Genotype of the locus,
(B) The genotype of the same locus as (a) in the genomic DNA of the test Shiba genus plant.
下記（ａ）に記載の遺伝子型、及び、下記（ｂ）に記載の遺伝子型を比較する工程を含む被検シバ属植物の品種判別法であって、前記工程において比較した遺伝子型が一致したときに、被検シバ属植物の品種が、コプロスと同一の品種であると判別される方法；
（ａ）コプロスのゲノムDNAにおける上記（１）から（１３）からなる群より選択される少なくとも（５）及び（１３）に記載のマイクロサテライト座位の遺伝子型、
（ｂ）被検シバ属植物のゲノムDNAにおける（ａ）と同じ座位の遺伝子型。
A method for discriminating varieties of a test genus plant including the step of comparing the genotype described in the following (a) and the genotype described in the following (b), wherein the genotypes compared in the step matched A method in which, in some cases, the variety of the test genus plant is identified as the same variety as Copros;
(A) a genotype of at least the microsatellite locus according to (5) and (13) selected from the group consisting of (1) to (13) in the genomic DNA of Copros,
(B) The genotype of the same locus as (a) in the genomic DNA of the test Shiba genus plant.
下記（ａ）に記載の遺伝子型、及び、下記（ｂ）に記載の遺伝子型を比較する工程を含む被検シバ属植物の品種判別法であって、前記工程において比較した遺伝子型が一致したときに、被検シバ属植物の品種が、エメラルドと同一の品種であると判別される方法；
（ａ）エメラルドのゲノムDNAにおける上記（１）から（１３）からなる群より選択される少なくとも（８）又は（１２）に記載のマイクロサテライト座位、及び、（５）に記載のマイクロサテライト座位の遺伝子型、
（ｂ）被検シバ属植物のゲノムDNAにおける（ａ）と同じ座位の遺伝子型。
A method for discriminating varieties of a test genus plant including the step of comparing the genotype described in the following (a) and the genotype described in the following (b), wherein the genotypes compared in the step matched A method in which the cultivar of the genus Shiba is sometimes identified as the same cultivar as the emerald;
(A) at least the microsatellite locus according to (8) or (12) selected from the group consisting of (1) to (13) in the genomic DNA of the emerald, and the microsatellite locus according to (5) Genotype,
(B) The genotype of the same locus as (a) in the genomic DNA of the test Shiba genus plant.
下記（ａ）に記載の遺伝子型、及び、下記（ｂ）に記載の遺伝子型を比較する工程を含む被検シバ属植物の品種判別法であって、前記工程において比較した遺伝子型が一致したときに、被検シバ属植物の品種が、エクイターフと同一の品種であると判別される方法；
（ａ）エクイターフのゲノムDNAにおける上記（１）から（１３）からなる群より選択される少なくとも（６）又は（９）に記載のマイクロサテライト座位、及び、（８）に記載のマイクロサテライト座位の遺伝子型、
（ｂ）被検シバ属植物のゲノムDNAにおける（ａ）と同じ座位の遺伝子型。
A method for discriminating varieties of a test genus plant including the step of comparing the genotype described in the following (a) and the genotype described in the following (b), wherein the genotypes compared in the step matched A method in which the cultivar of the genus Shiba is sometimes identified as the same cultivar as Equiterf;
(A) at least the microsatellite locus according to (6) or (9) selected from the group consisting of (1) to (13) above in the genomic DNA of Equiturf, and the microsatellite locus according to (8) Genotype,
(B) The genotype of the same locus as (a) in the genomic DNA of the test Shiba genus plant.
下記（ａ）に記載の遺伝子型、及び、下記（ｂ）に記載の遺伝子型を比較する工程を含む被検シバ属植物の品種判別法であって、前記工程において比較した遺伝子型が一致したときに、被検シバ属植物の品種が、フラッツと同一の品種であると判別される方法；
（ａ）フラッツのゲノムDNAにおける上記（１）から（１３）からなる群より選択される少なくとも（９）又は（１３）に記載のマイクロサテライト座位、及び、（４）に記載のマイクロサテライト座位の遺伝子型、
（ｂ）被検シバ属植物のゲノムDNAにおける（ａ）と同じ座位の遺伝子型。
A method for discriminating varieties of a test genus plant including the step of comparing the genotype described in the following (a) and the genotype described in the following (b), wherein the genotypes compared in the step matched A method in which the cultivar of the genus Shiba is sometimes identified as the same cultivar as Flats;
(A) at least a microsatellite locus according to (9) or (13) selected from the group consisting of (1) to (13) in the genomic DNA of Flats, and a microsatellite locus according to (4) Genotype,
(B) The genotype of the same locus as (a) in the genomic DNA of the test Shiba genus plant.
下記（ａ）に記載の遺伝子型、及び、下記（ｂ）に記載の遺伝子型を比較する工程を含む被検シバ属植物の品種判別法であって、前記工程において比較した遺伝子型が一致したときに、被検シバ属植物の品種が、はるかと同一の品種であると判別される方法；
（ａ）はるかのゲノムDNAにおける上記（１）から（１３）からなる群より選択される少なくとも（８）及び（１２）に記載のマイクロサテライト座位の遺伝子型、
（ｂ）被検シバ属植物のゲノムDNAにおける（ａ）と同じ座位の遺伝子型。
A method for discriminating varieties of a test genus plant including the step of comparing the genotype described in the following (a) and the genotype described in the following (b), wherein the genotypes compared in the step matched A method in which the varieties of the genus Shiba are sometimes identified as much the same variety;
(A) at least a genotype of the microsatellite locus according to (8) and (12) selected from the group consisting of (1) to (13) in far genomic DNA;
(B) The genotype of the same locus as (a) in the genomic DNA of the test Shiba genus plant.
下記（ａ）に記載の遺伝子型、及び、下記（ｂ）に記載の遺伝子型を比較する工程を含む被検シバ属植物の品種判別法であって、前記工程において比較した遺伝子型が一致したときに、被検シバ属植物の品種が、イナヒカリと同一の品種であると判別される方法；
（ａ）イナヒカリのゲノムDNAにおける上記（１）から（１３）からなる群より選択される少なくとも（１）、（２）、（４）、（６）、（８）、（１０）又は（１２）に記載のマイクロサテライト座位、及び、（９）に記載のマイクロサテライト座位の遺伝子型、
（ｂ）被検シバ属植物のゲノムDNAにおける（ａ）と同じ座位の遺伝子型。
A method for discriminating varieties of a test genus plant including the step of comparing the genotype described in the following (a) and the genotype described in the following (b), wherein the genotypes compared in the step matched A method in which the cultivar of the genus Shiba is sometimes identified as the same cultivar as Inahikari;
(A) At least (1), (2), (4), (6), (8), (10) or (12) selected from the group consisting of (1) to (13) in genomic DNA of Inahikari ) Microsatellite locus according to (9), and genotype of the microsatellite locus according to (9),
(B) The genotype of the same locus as (a) in the genomic DNA of the test Shiba genus plant.
下記（ａ）に記載の遺伝子型、及び、下記（ｂ）に記載の遺伝子型を比較する工程を含む被検シバ属植物の品種判別法であって、前記工程において比較した遺伝子型が一致したときに、被検シバ属植物の品種が、スクラムと同一の品種であると判別される方法；
（ａ）スクラムのゲノムDNAにおける上記（１）から（１３）からなる群より選択される少なくとも（１）又は（１３）に記載のマイクロサテライト座位、及び、（４）に記載のマイクロサテライト座位の遺伝子型、
（ｂ）被検シバ属植物のゲノムDNAにおける（ａ）と同じ座位の遺伝子型。
A method for discriminating varieties of a test genus plant including the step of comparing the genotype described in the following (a) and the genotype described in the following (b), wherein the genotypes compared in the step matched A method in which the cultivar of the genus Shiba is sometimes determined to be the same variety as the scrum;
(A) at least a microsatellite locus according to (1) or (13) selected from the group consisting of (1) to (13) in the genomic DNA of scrum, and a microsatellite locus according to (4) Genotype,
(B) The genotype of the same locus as (a) in the genomic DNA of the test Shiba genus plant.
下記（ａ）に記載の遺伝子型、及び、下記（ｂ）に記載の遺伝子型を比較する工程を含む被検シバ属植物の品種判別法であって、前記工程において比較した遺伝子型が一致したときに、被検シバ属植物の品種が、シルキーフィールドと同一の品種であると判別される方法；
（ａ）シルキーフィールドのゲノムDNAにおける上記（１）から（１３）からなる群より選択される少なくとも（１）、（２）、（４）、（６）、（８）、（１０）又は（１２）に記載のマイクロサテライト座位、及び、（９）に記載のマイクロサテライト座位の遺伝子型、
（ｂ）被検シバ属植物のゲノムDNAにおける（ａ）と同じ座位の遺伝子型。
A method for discriminating varieties of a test genus plant including the step of comparing the genotype described in the following (a) and the genotype described in the following (b), wherein the genotypes compared in the step matched A method in which the cultivar of the genus Shiba is sometimes determined to be the same variety as the silky field;
(A) At least (1), (2), (4), (6), (8), (10) or (10) selected from the group consisting of (1) to (13) in the genomic DNA of silky field The microsatellite locus according to 12), and the genotype of the microsatellite locus according to (9),
(B) The genotype of the same locus as (a) in the genomic DNA of the test Shiba genus plant.
下記（ａ）に記載の遺伝子型、及び、下記（ｂ）に記載の遺伝子型を比較する工程を含む被検シバ属植物の品種判別法であって、前記工程において比較した遺伝子型が一致したときに、被検シバ属植物の品種が、草剣と同一の品種であると判別される方法；
（ａ）草剣のゲノムDNAにおける上記（１）から（１３）からなる群より選択される少なくとも（８）又は（１２）に記載のマイクロサテライト座位、及び、（５）に記載のマイクロサテライト座位の遺伝子型、
（ｂ）被検シバ属植物のゲノムDNAにおける（ａ）と同じ座位の遺伝子型。
A method for discriminating varieties of a test genus plant including the step of comparing the genotype described in the following (a) and the genotype described in the following (b), wherein the genotypes compared in the step matched A method in which the varieties of the genus Shiba are sometimes identified as the same variety as the grass sword;
(A) At least the microsatellite locus according to (8) or (12) selected from the group consisting of (1) to (13) in the genomic DNA of grass sword, and the microsatellite locus according to (5) Genotype,
(B) The genotype of the same locus as (a) in the genomic DNA of the test Shiba genus plant.
下記（ａ）に記載の遺伝子型、及び、下記（ｂ）に記載の遺伝子型を比較する工程を含む被検シバ属植物の品種判別法であって、前記工程において比較した遺伝子型が一致したときに、被検シバ属植物の品種が、たねぞうと同一の品種であると判別される方法；
（ａ）たねぞうのゲノムDNAにおける上記（１）から（１３）からなる群より選択される少なくとも（１）、（５）又は（８）に記載のマイクロサテライト座位、及び、（１２）に記載のマイクロサテライト座位の遺伝子型、
（ｂ）被検シバ属植物のゲノムDNAにおける（ａ）と同じ座位の遺伝子型。
A method for discriminating varieties of a test genus plant including the step of comparing the genotype described in the following (a) and the genotype described in the following (b), wherein the genotypes compared in the step matched A method in which the cultivar of the genus Shiba is sometimes determined to be the same cultivar as Tanezou;
(A) at least microsatellite loci according to (1), (5) or (8) selected from the group consisting of (1) to (13) above in the genomic DNA of Tanzo, and (12) Genotype of the microsatellite locus,
(B) The genotype of the same locus as (a) in the genomic DNA of the test Shiba genus plant.
下記（ａ）に記載の遺伝子型、及び、下記（ｂ）に記載の遺伝子型を比較する工程を含む被検シバ属植物の品種判別法であって、前記工程において比較した遺伝子型が一致したときに、被検シバ属植物の品種が、ティーエムナインと同一の品種であると判別される方法；
（ａ）ティーエムナインのゲノムDNAにおける上記（１）から（１３）からなる群より選択される少なくとも（１）、（８）又は（１３）に記載のマイクロサテライト座位、及び、（６）に記載のマイクロサテライト座位の遺伝子型、
（ｂ）被検シバ属植物のゲノムDNAにおける（ａ）と同じ座位の遺伝子型。
A method for discriminating varieties of a test genus plant including the step of comparing the genotype described in the following (a) and the genotype described in the following (b), wherein the genotypes compared in the step matched A method in which the cultivar of the genus Shiba is sometimes determined to be the same variety as the tea emnaine;
(A) at least the microsatellite locus according to (1), (8), or (13) selected from the group consisting of (1) to (13) in the genomic DNA of T-emnine; and (6) Genotype of the microsatellite locus,
(B) The genotype of the same locus as (a) in the genomic DNA of the test Shiba genus plant.
下記（ａ）に記載の遺伝子型、及び、下記（ｂ）に記載の遺伝子型を比較する工程を含む被検シバ属植物の品種判別法であって、前記工程において比較した遺伝子型が一致したときに、被検シバ属植物の品種が、つくば輝と同一の品種であると判別される方法；
（ａ）つくば輝のゲノムDNAにおける上記（１）から（１３）からなる群より選択される少なくとも（１）、（８）又は（１３）に記載のマイクロサテライト座位、及び、（６）に記載のマイクロサテライト座位の遺伝子型、
（ｂ）被検シバ属植物のゲノムDNAにおける（ａ）と同じ座位の遺伝子型。
A method for discriminating varieties of a test genus plant including the step of comparing the genotype described in the following (a) and the genotype described in the following (b), wherein the genotypes compared in the step matched A method in which the cultivar of the genus Shiba is sometimes identified as the same cultivar as Tsukuba Teru;
(A) At least the microsatellite locus according to (1), (8) or (13) selected from the group consisting of (1) to (13) in Tsukuba Akira genomic DNA, and (6) Genotype of the microsatellite locus,
(B) The genotype of the same locus as (a) in the genomic DNA of the test Shiba genus plant.
下記（ａ）に記載の遺伝子型、及び、下記（ｂ）に記載の遺伝子型を比較する工程を含む被検シバ属植物の品種判別法であって、前記工程において比較した遺伝子型が一致したときに、被検シバ属植物の品種が、つくば太郎と同一の品種であると判別される方法；
（ａ）つくば太郎のゲノムDNAにおける上記（１）から（１３）からなる群より選択される少なくとも（１）、（５）又は（８）に記載のマイクロサテライト座位、及び、（１２）に記載のマイクロサテライト座位の遺伝子型、
（ｂ）被検シバ属植物のゲノムDNAにおける（ａ）と同じ座位の遺伝子型。
A method for discriminating varieties of a test genus plant including the step of comparing the genotype described in the following (a) and the genotype described in the following (b), wherein the genotypes compared in the step matched A method in which the varieties of the genus Shiba are sometimes identified as the same varieties as Taro Tsukuba;
(A) at least a microsatellite locus according to (1), (5) or (8) selected from the group consisting of (1) to (13) in the genomic DNA of Tsukuba Taro, and (12) Genotype of the microsatellite locus,
(B) The genotype of the same locus as (a) in the genomic DNA of the test Shiba genus plant.
下記（ａ）に記載の遺伝子型、及び、下記（ｂ）に記載の遺伝子型を比較する工程を含む被検シバ属植物の品種判別法であって、前記工程において比較した遺伝子型が一致したときに、被検シバ属植物の品種が、チバラフワンと同一の品種であると判別される方法；
（ａ）チバラフワンのゲノムDNAにおける上記（１）から（１３）からなる群より選択される少なくとも（１）、（２）及び（１２）に記載のマイクロサテライト座位の遺伝子型、
（ｂ）被検シバ属植物のゲノムDNAにおける（ａ）と同じ座位の遺伝子型。
A method for discriminating varieties of a test genus plant including the step of comparing the genotype described in the following (a) and the genotype described in the following (b), wherein the genotypes compared in the step matched A method in which the cultivar of the genus Shiba is sometimes determined to be the same cultivar as Chivalahuwan;
(A) a genotype of at least the microsatellite locus according to (1), (2) and (12) selected from the group consisting of (1) to (13) above in genomic DNA of Chibarahuwan;
(B) The genotype of the same locus as (a) in the genomic DNA of the test Shiba genus plant.
下記（ａ）に記載の遺伝子型、及び、下記（ｂ）に記載の遺伝子型を比較する工程を含む被検シバ属植物の品種判別法であって、前記工程において比較した遺伝子型が一致したときに、被検シバ属植物の品種が、エルトロと同一の品種であると判別される方法；
（ａ）エルトロのゲノムDNAにおける上記（１）から（１３）からなる群より選択される少なくとも（１）又は（３）に記載のマイクロサテライト座位、上記（６）又は（１３）に記載のマイクロサテライト座位、及び、（５）に記載のマイクロサテライト座位の遺伝子型、
（ｂ）被検シバ属植物のゲノムDNAにおける（ａ）と同じ座位の遺伝子型。
A method for discriminating varieties of a test genus plant including the step of comparing the genotype described in the following (a) and the genotype described in the following (b), wherein the genotypes compared in the step matched A method in which the varieties of the genus Shiba are sometimes determined to be the same variety as Eltro;
(A) at least a microsatellite locus according to (1) or (3) selected from the group consisting of (1) to (13) in the genomic DNA of Eltro, and the micro described in (6) or (13) A satellite locus, and a genotype of the microsatellite locus according to (5),
(B) The genotype of the same locus as (a) in the genomic DNA of the test Shiba genus plant.
下記（ａ）に記載の遺伝子型、及び、下記（ｂ）に記載の遺伝子型を比較する工程を含む被検シバ属植物の品種判別法であって、前記工程において比較した遺伝子型が一致したときに、被検シバ属植物の品種が、フジコンパクトと同一の品種であると判別される方法；
（ａ）フジコンパクトのゲノムDNAにおける上記（１）から（１３）からなる群より選択される少なくとも（５）又は（８）に記載のマイクロサテライト座位、（１）に記載のマイクロサテライト座位、及び、（１２）に記載のマイクロサテライト座位の遺伝子型、
（ｂ）被検シバ属植物のゲノムDNAにおける（ａ）と同じ座位の遺伝子型。
A method for discriminating varieties of a test genus plant including the step of comparing the genotype described in the following (a) and the genotype described in the following (b), wherein the genotypes compared in the step matched A method in which the cultivar of the genus Shiba is sometimes identified as the same cultivar as Fuji Compact;
(A) at least the microsatellite locus according to (5) or (8) selected from the group consisting of (1) to (13) in the genomic DNA of Fuji Compact, the microsatellite locus according to (1), and The genotype of the microsatellite locus according to (12),
(B) The genotype of the same locus as (a) in the genomic DNA of the test Shiba genus plant.
下記（ａ）に記載の遺伝子型、及び、下記（ｂ）に記載の遺伝子型を比較する工程を含む被検シバ属植物の品種判別法であって、前記工程において比較した遺伝子型が一致したときに、被検シバ属植物の品種が、みやこと同一の品種であると判別される方法；
（ａ）みやこのゲノムDNAにおける上記（１）から（１３）からなる群より選択される少なくとも（１）、（２）、（４）、（１２）又は（１３）に記載のマイクロサテライト座位、（５）に記載のマイクロサテライト座位、及び、（９）に記載のマイクロサテライト座位の遺伝子型、
（ｂ）被検シバ属植物のゲノムDNAにおける（ａ）と同じ座位の遺伝子型。
A method for discriminating varieties of a test genus plant including the step of comparing the genotype described in the following (a) and the genotype described in the following (b), wherein the genotypes compared in the step matched A method in which the varieties of the genus Shiba are sometimes identified as the same varieties of Miyako;
(A) at least a microsatellite locus according to (1), (2), (4), (12) or (13) selected from the group consisting of (1) to (13) above in the genomic DNA; The microsatellite locus according to (5), and the genotype of the microsatellite locus according to (9),
(B) The genotype of the same locus as (a) in the genomic DNA of the test Shiba genus plant.
下記（ａ）に記載の遺伝子型、及び、下記（ｂ）に記載の遺伝子型を比較する工程を含む被検シバ属植物の品種判別法であって、前記工程において比較した遺伝子型が一致したときに、被検シバ属植物の品種が、オアシスグリーンと同一の品種であると判別される方法；
（ａ）オアシスグリーンのゲノムDNAにおける上記（１）から（１３）からなる群より選択される少なくとも（２）、（８）又は（１２）に記載のマイクロサテライト座位、（５）に記載のマイクロサテライト座位、及び、（１３）に記載のマイクロサテライト座位の遺伝子型、
（ｂ）被検シバ属植物のゲノムDNAにおける（ａ）と同じ座位の遺伝子型
A method for discriminating varieties of a test genus plant including the step of comparing the genotype described in the following (a) and the genotype described in the following (b), wherein the genotypes compared in the step matched A method in which the cultivar of the test genus plant is sometimes identified as the same cultivar as oasis green;
(A) at least a microsatellite locus according to (2), (8) or (12) selected from the group consisting of (1) to (13) in the genomic DNA of Oasis Green; A satellite locus, and a genotype of the microsatellite locus according to (13),
(B) Genotype of the same locus as (a) in the genomic DNA of the test Shiba genus plant
下記（ａ）に記載の遺伝子型、及び、下記（ｂ）に記載の遺伝子型を比較する工程を含む被検シバ属植物の品種判別法であって、前記工程において比較した遺伝子型が一致したときに、被検シバ属植物の品種が、ビクトールと同一の品種であると判別される方法；
（ａ）ビクトールのゲノムDNAにおける上記（１）から（１３）からなる群より選択される少なくとも（４）、（５）、（６）、（９）又は（１３）に記載のマイクロサテライト座位、（８）に記載のマイクロサテライト座位、及び、（１２）に記載のマイクロサテライト座位の遺伝子型、
（ｂ）被検シバ属植物のゲノムDNAにおける（ａ）と同じ座位の遺伝子型。
A method for discriminating varieties of a test genus plant including the step of comparing the genotype described in the following (a) and the genotype described in the following (b), wherein the genotypes compared in the step matched A method in which the cultivar of the genus Shiba is sometimes determined to be the same cultivar as Victor;
(A) at least a microsatellite locus according to (4), (5), (6), (9) or (13) selected from the group consisting of (1) to (13) in the genomic DNA of Victor; The microsatellite locus according to (8) and the genotype of the microsatellite locus according to (12),
(B) The genotype of the same locus as (a) in the genomic DNA of the test Shiba genus plant.
下記（ａ）に記載の遺伝子型、及び、下記（ｂ）に記載の遺伝子型を比較する工程を含む被検シバ属植物の品種判別法であって、前記工程において比較した遺伝子型が一致したときに、被検シバ属植物の品種が、ヤエヤマと同一の品種であると判別される方法；
（ａ）ヤエヤマのゲノムDNAにおける上記（１）から（１３）からなる群より選択される少なくとも（１）又は（３）に記載のマイクロサテライト座位、上記（６）又は（１３）に記載のマイクロサテライト座位、及び、（５）に記載のマイクロサテライト座位の遺伝子型、
（ｂ）被検シバ属植物のゲノムDNAにおける（ａ）と同じ座位の遺伝子型。
A method for discriminating varieties of a test genus plant including the step of comparing the genotype described in the following (a) and the genotype described in the following (b), wherein the genotypes compared in the step matched A method in which the cultivar of the genus Shiba is sometimes identified as the same variety as Yaeyama;
(A) at least a microsatellite locus according to (1) or (3) selected from the group consisting of (1) to (13) in the genomic DNA of Yaeyama; and a microsatellite according to (6) or (13) A satellite locus, and a genotype of the microsatellite locus according to (5),
(B) The genotype of the same locus as (a) in the genomic DNA of the test Shiba genus plant.
下記（ａ）に記載の遺伝子型、及び、下記（ｂ）に記載の遺伝子型を比較する工程を含む被検シバ属植物の品種判別法であって、前記工程において比較した遺伝子型が一致したときに、被検シバ属植物の品種が、下記（ａ）で選択されるシバ属植物と同一の品種であると判別される方法に関する。この方法には、被検シバ属植物の品種が、下記36品種のいずれかであるのか、又は、それ以外であるのかを判別する方法も含まれる。
（ａ）アケミドリ、青太郎、アプロード、朝駆、朝萌、バーニングラブ、ちばフェアグリーン、チバラフワン、コプロス、デアンザ、エルトロ、エメラルド、エクイターフ、フラッツ、フジコンパクト、はるか、はやと、ヒメノ、イナヒカリ、クサセンリ、メイヤー、みやこ、オアシスグリーン、ロンパーフィールド、緑光、相良姫、スクラム、シャムロン、シルキーフィールド、草剣、たねぞう、ティーエムナイン、つくば輝、つくば太郎、ビクトール、及び、ヤエヤマからなる群より選択されるいずれかのシバ属植物のゲノムDNAにおける上記（１）から（１３）からなる群より選択される少なくとも（５）、（８）、（９）、（１２）、及び、（１３）に記載のマイクロサテライト座位の遺伝子型、
（ｂ）被検シバ属植物のゲノムDNAにおける（ａ）と同じ座位の遺伝子型。
A method for discriminating varieties of a test genus plant including the step of comparing the genotype described in the following (a) and the genotype described in the following (b), wherein the genotypes compared in the step matched In some cases, the present invention relates to a method for discriminating that the variety of the plant belonging to the genus Shiba is the same variety as the plant belonging to the genus Shiba selected in the following (a). This method also includes a method of determining whether the variety of the test Shiba genus plant is any one of the following 36 varieties or the other.
(A) Akemidori, Aotaro, Approad, Asakan, Aso Moe, Burning Love, Chiba Fair Green, Chibara Huwan, Copros, Deansa, El Toro, Emerald, Equiterf, Flats, Fuji Compact, Haruka, Himano, Himeno, Inahikari, Kusasenri, Any selected from the group consisting of Meyer, Miyako, Oasis Green, Romper Field, Green Light, Sagara Hime, Scrum, Shamron, Silky Field, Grass Sword, Tanesou, Thiem Nine, Tsukuba Teru, Tsukuba Taro, Victor, and Yaeyama At least the micro of (5), (8), (9), (12) and (13) selected from the group consisting of (1) to (13) in the genomic DNA of the genus The genotype of the satellite locus,
(B) The genotype of the same locus as (a) in the genomic DNA of the test Shiba genus plant.
また、本発明は、下記（ａ）に記載の遺伝子型、及び、下記（ｂ）に記載の遺伝子型を比較する工程を含む被検シバ属植物の品種判別法であって、前記工程において比較した遺伝子型が一致したときに、被検シバ属植物の品種が、下記（ａ）で選択されるシバ属植物と同一の品種であると判別される方法に関する。この方法には、被検シバ属植物の品種が、下記36品種のいずれかであるのか、又は、それ以外であるのかを判別する方法も含まれる。
（ａ）アケミドリ、青太郎、アプロード、朝駆、朝萌、バーニングラブ、ちばフェアグリーン、チバラフワン、コプロス、デアンザ、エルトロ、エメラルド、エクイターフ、フラッツ、フジコンパクト、はるか、はやと、ヒメノ、イナヒカリ、クサセンリ、メイヤー、みやこ、オアシスグリーン、ロンパーフィールド、緑光、相良姫、スクラム、シャムロン、シルキーフィールド、草剣、たねぞう、ティーエムナイン、つくば輝、つくば太郎、ビクトール、及び、ヤエヤマからなる群より選択されるいずれかのシバ属植物のゲノムDNAにおける上記（１）から（１３）からなる群より選択される少なくとも（１）から（７）、（１０）、（１１）及び（１３）に記載のマイクロサテライト座位の遺伝子型、
（ｂ）被検シバ属植物のゲノムDNAにおける（ａ）と同じ座位の遺伝子型。
The present invention also relates to a method for discriminating the genus of test genus plants, comprising the step of comparing the genotype described in (a) below and the genotype described in (b) below, The present invention relates to a method for discriminating that the varieties of a test genus plant are the same varieties as those selected in the following (a) when the obtained genotypes match. This method also includes a method of determining whether the variety of the test Shiba genus plant is any one of the following 36 varieties or the other.
(A) Akemidori, Aotaro, Approad, Asakan, Aso Moe, Burning Love, Chiba Fair Green, Chibara Huwan, Copros, Deansa, El Toro, Emerald, Equiterf, Flats, Fuji Compact, Haruka, Himano, Himeno, Inahikari, Kusasenri, Any selected from the group consisting of Meyer, Miyako, Oasis Green, Romper Field, Green Light, Sagara Hime, Scrum, Shamron, Silky Field, Grass Sword, Tanesou, Thiem Nine, Tsukuba Teru, Tsukuba Taro, Victor, and Yaeyama The microsatellite locus according to at least (1) to (7), (10), (11) and (13) selected from the group consisting of (1) to (13) in the genomic DNA of the genus Genotype,
(B) The genotype of the same locus as (a) in the genomic DNA of the test Shiba genus plant.
また、本発明は、下記（ａ）に記載の遺伝子型、及び、下記（ｂ）に記載の遺伝子型を比較する工程を含む被検シバ属植物の品種判別法であって、前記工程において比較した遺伝子型が一致したときに、被検シバ属植物の品種が、下記（ａ）で選択されるシバ属植物と同一の品種であると判別される方法に関する。この方法には、被検シバ属植物の品種が、下記36品種のいずれかであるのか、又は、それ以外であるのかを判別する方法も含まれる。
（ａ）アケミドリ、青太郎、アプロード、朝駆、朝萌、バーニングラブ、ちばフェアグリーン、チバラフワン、コプロス、デアンザ、エルトロ、エメラルド、エクイターフ、フラッツ、フジコンパクト、はるか、はやと、ヒメノ、イナヒカリ、クサセンリ、メイヤー、みやこ、オアシスグリーン、ロンパーフィールド、緑光、相良姫、スクラム、シャムロン、シルキーフィールド、草剣、たねぞう、ティーエムナイン、つくば輝、つくば太郎、ビクトール、及び、ヤエヤマからなる群より選択されるいずれかのシバ属植物のゲノムDNAにおける上記（１）から（１３）からなる群より選択される全てのマイクロサテライト座位の遺伝子型、
（ｂ）被検シバ属植物のゲノムDNAにおける（ａ）と同じ座位の遺伝子型。
The present invention also relates to a method for discriminating the genus of test genus plants, comprising the step of comparing the genotype described in (a) below and the genotype described in (b) below, The present invention relates to a method for discriminating that the varieties of a test genus plant are the same varieties as those selected in the following (a) when the obtained genotypes match. This method also includes a method of determining whether the variety of the test Shiba genus plant is any one of the following 36 varieties or the other.
(A) Akemidori, Aotaro, Approad, Asakan, Aso Moe, Burning Love, Chiba Fair Green, Chibara Huwan, Copros, Deansa, El Toro, Emerald, Equiterf, Flats, Fuji Compact, Haruka, Himano, Himeno, Inahikari, Kusasenri, Any selected from the group consisting of Meyer, Miyako, Oasis Green, Romper Field, Green Light, Sagara Hime, Scrum, Shamron, Silky Field, Grass Sword, Tanesou, Thiem Nine, Tsukuba Teru, Tsukuba Taro, Victor, and Yaeyama Genotypes of all microsatellite loci selected from the group consisting of (1) to (13) in the genomic DNA of the genus
(B) The genotype of the same locus as (a) in the genomic DNA of the test Shiba genus plant.
本発明は、以下のように別の形式で表現することができる。また、本発明の具体的な態様として例示した上記発明も以下の形式で表現することができる。 The present invention can be expressed in another form as follows. Further, the above-described invention exemplified as a specific aspect of the present invention can also be expressed in the following format.
下記（ａ）に記載の遺伝子型、及び、下記（ｂ）に記載の遺伝子型を比較する工程を含む、下記（ｂ）に記載の遺伝子型が下記（ａ）に記載の遺伝子型と一致するか否かを判定する方法；
（ａ）対照シバ属植物のゲノムDNAにおける上記（１）から（１３）からなる群より選択される少なくとも1つのマイクロサテライト座位の遺伝子型であって、対照シバ属植物に特異的な遺伝子型、
（ｂ）被検シバ属植物のゲノムDNAにおける（ａ）と同じ座位の遺伝子型。遺伝子型同士が一致すると判定された場合、対照シバ属植物の品種が被検シバ属植物の品種の候補であると判断される。
The genotype described in the following (b) includes the step of comparing the genotype described in the following (a) and the genotype described in the following (b), and matches the genotype described in the following (a) How to determine whether or not;
(A) a genotype of at least one microsatellite locus selected from the group consisting of (1) to (13) in the genomic DNA of a control genus plant, wherein the genotype is specific to the control genus plant,
(B) The genotype of the same locus as (a) in the genomic DNA of the test Shiba genus plant. When it is determined that the genotypes coincide with each other, it is determined that the cultivar of the control genus plant is a candidate for the genus of the test genus plant.
本発明は、以下のように別の形式で表現することができる。また、本発明の具体的な態様として例示した上記発明も以下の形式で表現することができる。 The present invention can be expressed in another form as follows. Further, the above-described invention exemplified as a specific aspect of the present invention can also be expressed in the following format.
下記（ａ）に記載の遺伝子型、及び、下記（ｂ）に記載の遺伝子型を比較する工程を含む被検シバ属植物の品種判別法であって、前記工程において比較した遺伝子型が一致したときに、被検シバ属植物の品種が、対照シバ属植物と同一の品種であると判別される方法；
（ａ）対照シバ属植物のゲノムDNAにおける下記（１４）から（２６）からなる群より選択される少なくとも1つの領域の遺伝子型であって、対照シバ属植物に特異的な遺伝子型、
（ｂ）被検シバ属植物のゲノムDNAにおける（ａ）と同じ領域の遺伝子型、
（１４）配列番号：1に記載の塩基配列と相補的な塩基配列、及び、配列番号：2に記載の塩基配列と相補的な塩基配列によって挟まれる領域であって、マイクロサテライトを含む領域、
（１５）配列番号：3に記載の塩基配列と相補的な塩基配列、及び、配列番号：4に記載の塩基配列と相補的な塩基配列によって挟まれる領域であって、マイクロサテライトを含む領域、
（１６）配列番号：5に記載の塩基配列と相補的な塩基配列、及び、配列番号：6に記載の塩基配列と相補的な塩基配列によって挟まれる領域であって、マイクロサテライトを含む領域、
（１７）配列番号：7に記載の塩基配列と相補的な塩基配列、及び、配列番号：8に記載の塩基配列と相補的な塩基配列によって挟まれる領域であって、マイクロサテライトを含む領域、
（１８）配列番号：9に記載の塩基配列と相補的な塩基配列、及び、配列番号：10に記載の塩基配列と相補的な塩基配列によって挟まれる領域であって、マイクロサテライトを含む領域、
（１９）配列番号：11に記載の塩基配列と相補的な塩基配列、及び、配列番号：12に記載の塩基配列と相補的な塩基配列によって挟まれる領域であって、マイクロサテライトを含む領域、
（２０）配列番号：13に記載の塩基配列と相補的な塩基配列、及び、配列番号：14に記載の塩基配列と相補的な塩基配列によって挟まれる領域であって、マイクロサテライトを含む領域、
（２１）配列番号：15に記載の塩基配列と相補的な塩基配列、及び、配列番号：16に記載の塩基配列と相補的な塩基配列によって挟まれる領域であって、マイクロサテライトを含む領域、
（２２）配列番号：17に記載の塩基配列と相補的な塩基配列、及び、配列番号：18に記載の塩基配列と相補的な塩基配列によって挟まれる領域であって、マイクロサテライトを含む領域、
（２３）配列番号：19に記載の塩基配列と相補的な塩基配列、及び、配列番号：20に記載の塩基配列と相補的な塩基配列によって挟まれる領域であって、マイクロサテライトを含む領域、
（２４）配列番号：21に記載の塩基配列と相補的な塩基配列、及び、配列番号：22に記載の塩基配列と相補的な塩基配列によって挟まれる領域であって、マイクロサテライトを含む領域、
（２５）配列番号：23に記載の塩基配列と相補的な塩基配列、及び、配列番号：24に記載の塩基配列と相補的な塩基配列によって挟まれる領域であって、マイクロサテライトを含む領域、並びに、
（２６）配列番号：25に記載の塩基配列と相補的な塩基配列、及び、配列番号：26に記載の塩基配列と相補的な塩基配列によって挟まれる領域であって、マイクロサテライトを含む領域。
A method for discriminating varieties of a test genus plant including the step of comparing the genotype described in the following (a) and the genotype described in the following (b), wherein the genotypes compared in the step matched A method in which, in some cases, the cultivar of the test genus plant is identified as the same cultivar as the control genus plant;
(A) a genotype of at least one region selected from the group consisting of the following (14) to (26) in the genomic DNA of a control genus plant, wherein the genotype is specific to the control genus plant:
(B) the genotype of the same region as (a) in the genomic DNA of the test Shiba plant,
(14) A region sandwiched by a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 1 and a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 2, comprising a region containing microsatellite;
(15) a region sandwiched by a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 3 and a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 4, wherein the region includes microsatellite;
(16) A region sandwiched by a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 5 and a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 6 and comprising a microsatellite;
(17) A region sandwiched by a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 7 and a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 8 and comprising a microsatellite;
(18) A region sandwiched by a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 9 and a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 10 and comprising a microsatellite;
(19) A region sandwiched by a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 11 and a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 12, wherein the region includes microsatellite;
(20) a region sandwiched by a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 13 and a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 14 and including a microsatellite;
(21) a region sandwiched by a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 15 and a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 16 and comprising a microsatellite;
(22) A region sandwiched by a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 17 and a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 18 and comprising a microsatellite;
(23) a region sandwiched by a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 19 and a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 20 and comprising a microsatellite;
(24) a region sandwiched between a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 21 and a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 22 and including a microsatellite;
(25) a region sandwiched by a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 23, and a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 24, the region containing microsatellite; And
(26) A region sandwiched by a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 25 and a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 26, and including a microsatellite.
本発明は、以下のように別の形式で表現することができる。また、本発明の具体的な態様として例示した上記発明も以下の形式で表現することができる。 The present invention can be expressed in another form as follows. Further, the above-described invention exemplified as a specific aspect of the present invention can also be expressed in the following format.
下記（ａ）に記載の遺伝子型、及び、下記（ｂ）に記載の遺伝子型を比較する工程を含む被検シバ属植物の品種判別法であって、前記工程において比較した遺伝子型が一致したときに、被検シバ属植物の品種が、対照シバ属植物と同一の品種であると判別される方法；
（ａ）下記（Ａ）から（Ｍ）からなる群より選択される少なくとも1つのセットをプライマーセットとするPCRの増幅対象となる対照シバ属植物のゲノムDNAにおける領域の遺伝子型であって、対照シバ属植物に特異的な遺伝子型、
（ｂ）被検シバ属植物のゲノムDNAにおける（ａ）と同じ領域の遺伝子型、
（Ａ）配列番号：1に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチド、及び、配列番号：2に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチドのセット、
（Ｂ）配列番号：3に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチド、及び、配列番号：4に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチドのセット、
（Ｃ）配列番号：5に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチド、及び、配列番号：6に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチドのセット、
（Ｄ）配列番号：7に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチド、及び、配列番号：8に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチドのセット、
（Ｅ）配列番号：9に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチド、及び、配列番号：10に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチドのセット、
（Ｆ）配列番号：11に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチド、及び、配列番号：12に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチドのセット、
（Ｇ）配列番号：13に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチド、及び、配列番号：14に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチドのセット、
（Ｈ）配列番号：15に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチド、及び、配列番号：16に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチドのセット、
（Ｉ）配列番号：17に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチド、及び、配列番号：18に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチドのセット、
（Ｊ）配列番号：19に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチド、及び、配列番号：20に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチドのセット、
（Ｋ）配列番号：21に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチド、及び、配列番号：22に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチドのセット、
（Ｌ）配列番号：23に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチド、及び、配列番号：24に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチドのセット、並びに、
（Ｍ）配列番号：25に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチド、及び、配列番号：26に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチドのセット。
A method for discriminating varieties of a test genus plant including the step of comparing the genotype described in the following (a) and the genotype described in the following (b), wherein the genotypes compared in the step matched A method in which, in some cases, the cultivar of the test genus plant is identified as the same cultivar as the control genus plant;
(A) a genotype of a region in the genomic DNA of a control Shiba plant that is an amplification target of PCR using at least one set selected from the group consisting of (A) to (M) below as a primer set, Genotype specific to the plant of the genus Shiba,
(B) the genotype of the same region as (a) in the genomic DNA of the test Shiba plant,
(A) an oligonucleotide comprising the base sequence described in SEQ ID NO: 1, and a set of oligonucleotides comprising the base sequence described in SEQ ID NO: 2,
(B) an oligonucleotide comprising the base sequence set forth in SEQ ID NO: 3 and a set of oligonucleotides comprising the base sequence set forth in SEQ ID NO: 4.
(C) an oligonucleotide comprising the base sequence set forth in SEQ ID NO: 5 and an oligonucleotide set comprising the base sequence set forth in SEQ ID NO: 6;
(D) an oligonucleotide comprising the base sequence set forth in SEQ ID NO: 7 and a set of oligonucleotides comprising the base sequence set forth in SEQ ID NO: 8;
(E) an oligonucleotide containing the base sequence set forth in SEQ ID NO: 9 and a set of oligonucleotides containing the base sequence set forth in SEQ ID NO: 10;
(F) a set of oligonucleotides containing the base sequence set forth in SEQ ID NO: 11 and an oligonucleotide containing the base sequence set forth in SEQ ID NO: 12;
(G) an oligonucleotide containing the base sequence set forth in SEQ ID NO: 13 and a set of oligonucleotides containing the base sequence set forth in SEQ ID NO: 14;
(H) an oligonucleotide comprising the base sequence set forth in SEQ ID NO: 15 and an oligonucleotide set comprising the base sequence set forth in SEQ ID NO: 16;
(I) an oligonucleotide comprising the base sequence set forth in SEQ ID NO: 17 and a set of oligonucleotides comprising the base sequence set forth in SEQ ID NO: 18;
(J) an oligonucleotide comprising the base sequence set forth in SEQ ID NO: 19 and an oligonucleotide set comprising the base sequence set forth in SEQ ID NO: 20;
(K) an oligonucleotide containing the base sequence set forth in SEQ ID NO: 21 and a set of oligonucleotides containing the base sequence set forth in SEQ ID NO: 22;
(L) an oligonucleotide comprising the base sequence set forth in SEQ ID NO: 23, a set of oligonucleotides comprising the base sequence set forth in SEQ ID NO: 24, and
(M) A set of an oligonucleotide containing the base sequence set forth in SEQ ID NO: 25 and an oligonucleotide containing the base sequence set forth in SEQ ID NO: 26.
本発明において「含む」という文言の代わりに、「からなる」という文言を使用できる。 In the present invention, the word “consisting of” can be used instead of the word “including”.
本発明は、以下のように別の形式で表現することができる。また、本発明の具体的な態様として例示した上記発明も以下の形式で表現することができる。 The present invention can be expressed in another form as follows. Further, the above-described invention exemplified as a specific aspect of the present invention can also be expressed in the following format.
下記（ａ）に記載のPCR産物の種類、及び、下記（ｂ）に記載のPCR産物の種類を比較する工程を含む被検シバ属植物の品種判別法であって、前記工程において比較したPCR産物の種類が一致したときに、被検シバ属植物の品種が、対照シバ属植物と同一の品種であると判別される方法；
（ａ）対照シバ属植物のゲノムDNAを鋳型とし、上記（Ａ）から（Ｍ）からなる群より選択される少なくとも1つのセットをプライマーセットとするPCRによって増幅されるPCR産物の種類であって、対照シバ属植物に特異的なPCR産物の種類、
（ｂ）被検シバ属植物のゲノムDNAを鋳型とし、（ａ）と同じセットをプライマーセットとするPCRによって増幅されるPCR産物の種類。
A method for discriminating varieties of test genus plants, comprising the step of comparing the types of PCR products described in (a) below and the types of PCR products described in (b) below, wherein the PCRs compared in the above steps A method in which, when the types of products match, the variety of the test genus plant is identified as the same variety as the control genus plant;
(A) a kind of PCR product amplified by PCR using genomic DNA of a control genus plant as a template and at least one set selected from the group consisting of (A) to (M) as a primer set; , The types of PCR products specific to the control plant,
(B) A type of PCR product amplified by PCR using the genomic DNA of the test genus plant as a template and the same set as (a) as a primer set.
本発明において、「PCR産物の種類」とは、分子サイズによって分類されたPCR産物の種類（パターン）を意味し、「PCR産物の種類」は「PCRパターン」と表現することができる。「PCR産物の種類（PCRパターン）」は「遺伝子型（アレルパターン）」に相当する。 In the present invention, “type of PCR product” means the type (pattern) of PCR products classified by molecular size, and “type of PCR product” can be expressed as “PCR pattern”. “Type of PCR product (PCR pattern)” corresponds to “genotype (allele pattern)”.
本発明は、以下のように別の形式で表現することができる。また、本発明の具体的な態様として例示した上記発明も以下の形式で表現することができる。 The present invention can be expressed in another form as follows. Further, the above-described invention exemplified as a specific aspect of the present invention can also be expressed in the following format.
下記（ａ）に記載のPCR産物、及び、下記（ｂ）に記載のPCR産物の同一性を決定する工程を含む被検シバ属植物の品種判別法であって、前記工程においてPCR産物が同一であったときに、被検シバ属植物の品種が、対照シバ属植物と同一の品種であると判別される方法；
（ａ）対照シバ属植物のゲノムDNAを鋳型とし、上記（Ａ）から（Ｍ）からなる群より選択される少なくとも1つのセットをプライマーセットとするPCRによって増幅されるPCR産物であって、対照シバ属植物に特異的なPCR産物、
（ｂ）被検シバ属植物のゲノムDNAを鋳型とし、（ａ）と同じセットをプライマーセットとするPCRによって増幅されるPCR産物。
A method for discriminating varieties of test genus plants comprising the step of determining the identity of the PCR product described in (a) below and the PCR product described in (b) below, wherein the PCR products are the same in the above step A method of discriminating that the variety of the test genus plant is the same as the control genus plant;
(A) a PCR product amplified by PCR using the genomic DNA of a control genus plant as a template and at least one set selected from the group consisting of (A) to (M) as a primer set, PCR products specific to Shiba spp.
(B) A PCR product amplified by PCR using the genomic DNA of a test genus plant as a template and the same set as (a) as a primer set.
以下に本発明の方法を例示するが、これに限定されるものではない。
本発明においては、まず、多品種のシバ属植物それぞれについて、ゲノムDNAにおける上記（１）から（１３）からなる群より選択される少なくとも1つのマイクロサテライト座位の遺伝子型を検出する。次いで、多品種のシバ属植物うち特定又は1つの品種のシバ属植物に特異的な遺伝子型（以下、遺伝子型Xと称する）、及び、該遺伝子型Xを示すマイクロサテライト座位（以下、マイクロサテライト座位Yと称する）を同定する。また、該特定又は1つの品種のシバ属植物を対照シバ属植物とする。次いで、被検シバ属植物のゲノムDNAにおいて、マイクロサテライト座位Yと同じ座位の遺伝子型（以下、遺伝子型Zと称する）を同定する。次いで、遺伝子型X、及び、遺伝子型Zを比較する。比較した遺伝子型が一致したときに、被検シバ属植物の品種が、対照シバ属植物と同一の品種であると判別される。
Although the method of this invention is illustrated below, it is not limited to this.
In the present invention, first, the genotype of at least one microsatellite locus selected from the group consisting of the above (1) to (13) in the genomic DNA is detected for each of various varieties of Shiba genus plants. Next, a genotype (hereinafter referred to as genotype X) specific to a specific or one variety of Shiba genus plants among various varieties of Shiba genus plants, and a microsatellite locus indicating the genotype X (hereinafter referred to as microsatellite) Identified as locus Y). In addition, the specific or one variety of Shiba spp. Next, the genotype (hereinafter referred to as genotype Z) of the same locus as the microsatellite locus Y is identified in the genomic DNA of the test Shiba genus plant. Next, genotype X and genotype Z are compared. When the compared genotypes match, it is determined that the variety of the test genus plant is the same as the control genus plant.
具体的には、まず、上記（１）から（１３）からなる群より選択されるいずれかのマイクロサテライト座位におけるDNA領域をPCRにより増幅するためのプライマーを設計する。プライマーを設計する際には、プライマーの長さが20bp前後、Tm値が55〜60℃程度になることが好ましいが、これに制限されるものではない。プライマーはPrimer3 (Rozen and Skaletsky, 2000, In: Krawets and Misener (eds.) Bioinfomatics Methods and Protocols: Methods in Molecular Biology, Totowa, NJ, USA: Humana Press, 365-386)によって設計できる。上記（１）から（１３）からなる群より選択されるいずれかのマイクロサテライト座位におけるDNA領域としては、上記（Ａ）から（Ｍ）からなる群より選択されるいずれかのセットをプライマーセットとするPCRの増幅対象となるシバ属植物のゲノムDNAにおける領域である。 Specifically, first, a primer for amplifying a DNA region at any microsatellite locus selected from the group consisting of (1) to (13) by PCR is designed. When designing a primer, it is preferable that the length of the primer is about 20 bp and the Tm value is about 55 to 60 ° C. However, the present invention is not limited to this. Primers can be designed by Primer 3 (Rozen and Skaletsky, 2000, In: Krawets and Misener (eds.) Bioinfomatics Methods and Protocols: Methods in Molecular Biology, Totowa, NJ, USA: Humana Press, 365-386). As a DNA region in any microsatellite locus selected from the group consisting of (1) to (13) above, any set selected from the group consisting of (A) to (M) above is a primer set. This is a region in the genomic DNA of the plant of the genus Shiba that is to be amplified by PCR.
次いで、設計したプライマーを合成する。プライマーは、その塩基配列情報に従って化学的に合成することができる。任意の塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを合成する方法が公知である。たとえば、オリゴヌクレオチドは、DNA合成装置(DNA synthesizer)によって合成することができる。具体的には、現在、ホスホロアミダイト法やホスホン酸エステル法などの原理に基づく、DNA合成装置が実用化されている。これらのDNA合成装置は、与えられた塩基配列にしたがって、固相上に、ヌクレオチドモノマーをひとつずつ化学的に連結する。全ての反応工程は自動化されていて、目的とする塩基配列情報を入力することで合成が開始される。したがって、このようなDNA合成装置に対して、設計したプライマーの塩基配列を与えることによって、目的とするDNAを合成することができる。 The designed primer is then synthesized. Primers can be chemically synthesized according to the nucleotide sequence information. Methods for synthesizing oligonucleotides having an arbitrary base sequence are known. For example, the oligonucleotide can be synthesized by a DNA synthesizer. Specifically, DNA synthesizers based on principles such as the phosphoramidite method and the phosphonate method are now in practical use. These DNA synthesizers chemically link nucleotide monomers one by one on a solid phase according to a given base sequence. All reaction steps are automated, and synthesis is started by inputting target base sequence information. Therefore, the target DNA can be synthesized by giving the designed primer base sequence to such a DNA synthesizer.
次いで、多品種からなる対照シバ属植物それぞれについて、ゲノムDNAを鋳型とし、合成したプライマーセットを用いてPCRを行う。本発明においては、好ましくは、まず対照シバ属植物のゲノムDNAの調製（ゲノムDNAの抽出）を行う。ゲノムDNAの調製は、例えば、対照シバ属植物の葉、根、種子、カルス、葉鞘、培養細胞等を用いて行うことができるが、これらに特に限定されない。これらの植物体もしくは植物細胞からのゲノムDNAの抽出は、当業者においては一般的に公知の方法、例えば、セチルトリメチルアンモニウムブロミド（CTAB）法（Murray and Thompson, Nucleic Acids Research 8, p.4321−4325, 1980）等によって行うことができる。また、DNeasy（登録商標） Plant Mini Kit(QIAGEN)等を利用してゲノムDNAを抽出することができる。また、ゲノムDNAの抽出処理を行わず、例えば、直接細胞破砕液等を用いてPCRを実施することも可能である。 Next, PCR is performed on the control genus plants of various varieties using the synthesized primer set with genomic DNA as a template. In the present invention, preferably, genomic DNA of a control genus plant is first prepared (genomic DNA extraction). Genomic DNA can be prepared using, for example, leaves, roots, seeds, calli, leaf sheaths, cultured cells, and the like of control Shiba plants, but is not particularly limited thereto. Extraction of genomic DNA from these plants or plant cells is generally performed by those skilled in the art, for example, the cetyltrimethylammonium bromide (CTAB) method (Murray and Thompson, Nucleic Acids Research 8, p.4321- 4325, 1980). In addition, genomic DNA can be extracted using DNeasy (registered trademark) Plant Mini Kit (QIAGEN) or the like. Moreover, it is also possible to carry out PCR without using a genomic DNA extraction process, for example, directly using a cell disruption solution or the like.
PCR法としては、例えば、タッチダウンPCR法（Sato et al. 2005, DNA Res. 12, 301-364）が挙げられるが、これに限定されるものではなく、当業者においては、その反応条件等について実験または経験によって最適な条件を適宜選択して実施することが可能である。 Examples of the PCR method include a touchdown PCR method (Sato et al. 2005, DNA Res. 12, 301-364), but are not limited thereto. It is possible to appropriately select and carry out optimal conditions according to experiments or experience.
通常、PCRは、反応液および耐熱性ポリメラーゼを含む市販の試薬キット(rTaq, ExTaq, Takara; BIOTAQ, BIOLINEなど) 、および市販のPCR装置(GeneAmp（登録商標） PCR System 9700, ABIなど)等を利用して、簡便に実施することができる。 Usually, PCR is performed using a commercially available reagent kit (rTaq, ExTaq, Takara; BIOTAQ, BIOLINE, etc.) containing a reaction solution and a thermostable polymerase, a commercially available PCR device (GeneAmp (registered trademark) PCR System 9700, ABI, etc.), etc. It can be carried out simply by using.
次いで、PCRによって増幅されたPCR産物の分子サイズを測定する。PCRによって増幅されたPCR産物の分子サイズの測定方法としては、当業者に周知の方法が挙げられる。ポリアクリルアミドゲル電気泳動を用いる方法、アガロースゲル電気泳動を用いる方法、フラグメントアナライザーを用いる方法、マイクロチップ電気泳動装置（Multina, 島津）が例示できるが、これらに限定されるものではない。 The molecular size of the PCR product amplified by PCR is then measured. Methods for measuring the molecular size of a PCR product amplified by PCR include methods well known to those skilled in the art. Examples include, but are not limited to, a method using polyacrylamide gel electrophoresis, a method using agarose gel electrophoresis, a method using a fragment analyzer, and a microchip electrophoresis apparatus (Multina, Shimadzu).
具体的には、PCR産物を蛍光ラベルした後にキャピラリー電気泳動で分離し、分離された各々のPCR産物の分子サイズを測定する。あるいは、PCR産物を（ポリアクリルアミドゲル/アガロースゲルで）電気泳動で分離し、分離された各々のPCR産物の分子サイズを測定する。通常、予めサイズが既知のDNA断片（例えば、サイズマーカー）を対照として、分離された各々のPCR産物の分子サイズ（例えば、分子量や長さ）を測定する。次いで、分子サイズによってPCR産物を分類し、PCR産物の種類を特定する。特定されたPCR産物の種類は、マイクロサテライト座位の遺伝子型に相当する。 Specifically, PCR products are fluorescently labeled and then separated by capillary electrophoresis, and the molecular size of each separated PCR product is measured. Alternatively, PCR products are separated by electrophoresis (on polyacrylamide gel / agarose gel) and the molecular size of each separated PCR product is measured. Usually, the molecular size (for example, molecular weight or length) of each separated PCR product is measured using a DNA fragment (for example, a size marker) of a known size as a control. Next, the PCR products are classified by molecular size, and the kind of the PCR product is specified. The type of PCR product identified corresponds to the genotype of the microsatellite locus.
次いで、多品種からなる対照シバ属植物のうち特定又は1つの対照シバ属植物に特異的な遺伝子型を示すマイクロサテライト座位を同定する。 Next, a microsatellite locus showing a genotype specific to a specific or one control genus plant among a variety of control genus plants is identified.
次いで、被検シバ属植物のゲノムDNAにおいて、多品種からなる対照シバ属植物のうち特定又は1つの対照シバ属植物に特異的な遺伝子型を示すマイクロサテライト座位と同じ座位の遺伝子型（以下、「被検シバ属植物における遺伝子型」と称する）を同定する。被検シバ属植物における遺伝子型の同定は、対照シバ属植物と同一の実験方法及び実験条件で行われることが好ましい。次いで、例えばBioNumerics (販売元：インフォコム、作製者：Applied Maths社)によって、対照シバ属植物に特異的な遺伝子型と被検シバ属植物における遺伝子型を比較する。 Next, in the genomic DNA of the test Shiba genus plant, the genotype of the same locus as the microsatellite locus (hereinafter referred to as the microsatellite locus) indicating the genotype specific to one specific or one of the control genus plants among the various control genus plants. (Referred to as “genotype in the test Shiba genus plant”). The identification of the genotype in the test genus plant is preferably performed by the same experimental method and experimental conditions as the control genus plant. Next, the genotype specific to the control genus plant and the genotype in the test genus plant are compared, for example, by BioNumerics (distributor: Infocom, creator: Applied Maths).
本発明において、アケミドリ、青太郎、アプロード、朝駆、朝萌、バーニングラブ、ちばフェアグリーン、チバラフワン、コプロス、デアンザ、エルトロ、エメラルド、エクイターフ、フラッツ、フジコンパクト、はるか、はやと、ヒメノ、イナヒカリ、クサセンリ、メイヤー、みやこ、オアシスグリーン、ロンパーフィールド、緑光、相良姫、スクラム、シャムロン、シルキーフィールド、草剣、たねぞう、ティーエムナイン、つくば輝、つくば太郎、ビクトール、及び、ヤエヤマからなる群より選択されるいずれかの対照シバ属植物に特異的な遺伝子型としては、本実施例に記載された遺伝子型が例示できるが、これに限定されない。例えば、これら対照シバ属植物に特異的な遺伝子型としては、本実施例と異なるPCR条件によって増幅されたPCR産物を本実施例と同じ分離方法及び分離条件で分離したときに検出されるPCR産物の種類に相当する遺伝子型でもよいし、本実施例と同じPCR条件又は異なるPCR条件によって増幅されたPCR産物を本実施例と異なる分離方法及び分離条件で分離したときに検出されるPCR産物の種類に相当する遺伝子型でもよい。 In the present invention, Akemidori, Aotaro, Approad, Asakan, Asa Moe, Burning Love, Chiba Fair Green, Chibara Fwan, Copros, Deanza, El Toro, Emerald, Equiterf, Flats, Fuji Compact, Haruka, Himeno, Inahikari, Kussaenri , Mayer, Miyako, Oasis Green, Romper Field, Green Light, Sagara Hime, Scrum, Shamron, Silky Field, Grass Sword, Elephant, Thiem Nine, Tsukuba Teru, Tsukuba Taro, Victor, and Yaeyama Examples of the genotype specific to any control genus plant include, but are not limited to, the genotypes described in this example. For example, as a genotype specific to these control genus plants, PCR products detected when PCR products amplified under PCR conditions different from those in this example are separated by the same separation method and conditions as in this example. The genotype corresponding to the kind of the PCR product may be used, or the PCR product detected when the PCR product amplified under the same PCR conditions or different PCR conditions as in this example is separated by a different separation method and separation conditions from this example. It may be a genotype corresponding to the type.
また、本発明は、本発明の方法に用いるためのシバ属植物の品種判別用試薬やシバ属植物の品種判別用キットを提供する。このような試薬やキットには、少なくとも次の構成要素i）が含まれる。
i）上記（１）から（１３）からなる群より選択されるいずれかのマイクロサテライト座位におけるDNA領域をPCRにより増幅するためのオリゴヌクレオチドのセット
In addition, the present invention provides a reagent for discriminating genus of genus plant and a kit for discriminating genus of genus plant for use in the method of the invention. Such reagents and kits include at least the following component i).
i) A set of oligonucleotides for amplifying by PCR a DNA region at any microsatellite locus selected from the group consisting of (1) to (13) above
上記キットには、前記構成要素i）に加え、次のような付加的な要素を含むことができる。
ii）DNAポリメラーゼ：本発明のキットは、鋳型依存性の相補鎖合成反応を触媒するDNAポリメラーゼを含むことができる。PCRなどの公知の核酸合成反応に利用されている種々のDNAポリメラーゼは、本発明に利用することができる。
iii)ヌクレオチド基質：本発明のキットは、核酸の相補鎖合成反応の基質として利用されるヌクレオチド類を含むことができる。具体的には、dCTP、dGTP、dTPT、およびdATPの少なくとも一つ、通常はこれらの全て(dNTP)をキットに含むことができる。これらのヌクレオチド類は、天然の構造のみならず、誘導体を利用することもできる。蛍光物資や結合性リガンドで修飾したヌクレオチド類が公知である。上記キットには、PCRにより増幅されたPCR産物のサイズが記載された書類を添付することができる。また、PCRにより増幅されたPCR産物のサイズ情報を機械読み取り可能なデータとし、それを格納した記録媒体としてキットに加えることもできる。
The kit may contain the following additional elements in addition to the component i).
ii) DNA polymerase: The kit of the present invention may comprise a DNA polymerase that catalyzes a template-dependent complementary strand synthesis reaction. Various DNA polymerases used in known nucleic acid synthesis reactions such as PCR can be used in the present invention.
iii) Nucleotide substrate: The kit of the present invention may contain nucleotides used as a substrate for a complementary strand synthesis reaction of a nucleic acid. Specifically, at least one of dCTP, dGTP, dTPT, and dATP, usually all of these (dNTP) can be included in the kit. These nucleotides can utilize not only natural structures but also derivatives. Nucleotides modified with fluorescent materials or binding ligands are known. A document describing the size of the PCR product amplified by PCR can be attached to the kit. Moreover, the size information of the PCR product amplified by PCR can be converted into machine-readable data and added to the kit as a recording medium storing the data.
本発明は、配列番号：1から26のいずれかに記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチドを提供する。本発明は、さらに、上記（Ａ）から（Ｍ）からなる群より選択される少なくとも1組のセットを提供する。このようなセットは、上記（１）から（１３）からなる群より選択されるいずれかのマイクロサテライト座位におけるDNA領域をPCRにより増幅するためのオリゴヌクレオチドのセットの一例である。 The present invention provides an oligonucleotide comprising the base sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 1 to 26. The present invention further provides at least one set selected from the group consisting of (A) to (M) above. Such a set is an example of an oligonucleotide set for amplifying a DNA region at any microsatellite locus selected from the group consisting of (1) to (13) by PCR.
例えば、被検シバ属植物の品種が、青太郎と同一の品種であるか否かを判別するために用いられるプライマーセットとしては、上記（Ａ）から（Ｍ）からなる群より選択される少なくとも（Ｅ）又は（Ｈ）に記載のセットが例示できる。 For example, as a primer set used for determining whether or not the variety of the plant of the genus Shiba is the same variety as Aotaro, at least selected from the group consisting of (A) to (M) above The set as described in (E) or (H) can be illustrated.
被検シバ属植物の品種が、バーニングラブと同一の品種であるか否かを判別するために用いられるプライマーセットとしては、上記（Ａ）から（Ｍ）からなる群より選択される少なくとも（Ｅ）又は（Ｈ）に記載のセットが例示できる。 The primer set used for determining whether or not the cultivar of the test genus plant is the same cultivar as Burning Love is at least selected from the group consisting of (A) to (M) above (E ) Or (H) can be exemplified.
被検シバ属植物の品種が、デアンザと同一の品種であるか否かを判別するために用いられるプライマーセットとしては、上記（Ａ）から（Ｍ）からなる群より選択される少なくとも（Ａ）に記載のセットが例示できる。 The primer set used to determine whether or not the variety of the plant belonging to the genus Shiba is the same variety as Deanza is at least selected from the group consisting of (A) to (M) above. Can be exemplified.
被検シバ属植物の品種が、はやとと同一の品種であるか否かを判別するために用いられるプライマーセットとしては、上記（Ａ）から（Ｍ）からなる群より選択される少なくとも（Ｌ）に記載のセットが例示できる。 As a primer set used for determining whether or not the cultivar of the test genus plant is the same cultivar as Hayato, at least (L) selected from the group consisting of (A) to (M) above. Can be exemplified.
被検シバ属植物の品種が、ヒメノと同一の品種であるか否かを判別するために用いられるプライマーセットとしては、上記（Ａ）から（Ｍ）からなる群より選択される少なくとも（Ｇ）に記載のセットが例示できる。 The primer set used for determining whether or not the cultivar of the test genus plant is the same cultivar as Himeno is at least selected from the group consisting of (A) to (M) above (G) Can be exemplified.
被検シバ属植物の品種が、クサセンリと同一の品種であるか否かを判別するために用いられるプライマーセットとしては、上記（Ａ）から（Ｍ）からなる群より選択される少なくとも（Ｇ）又は（Ｍ）に記載のセットが例示できる。 As a primer set used for determining whether or not the cultivar of the test genus plant is the same cultivar as Xanthoris, at least (G) selected from the group consisting of (A) to (M) above. Or the set as described in (M) can be illustrated.
被検シバ属植物の品種が、メイヤーと同一の品種であるか否かを判別するために用いられるプライマーセットとしては、上記（Ａ）から（Ｍ）からなる群より選択される少なくとも（Ｆ）に記載のセットが例示できる。 As a primer set used to determine whether or not the cultivar of the test genus plant is the same cultivar as Meyer, at least (F) selected from the group consisting of (A) to (M) above. Can be exemplified.
被検シバ属植物の品種が、ロンパーフィールドと同一の品種であるか否かを判別するために用いられるプライマーセットとしては、上記（Ａ）から（Ｍ）からなる群より選択される少なくとも（Ｋ）に記載のセットが例示できる。 As a primer set used for determining whether or not the cultivar of the test genus plant is the same cultivar as the romper field, at least (K) selected from the group consisting of (A) to (M) above. ) Can be exemplified.
被検シバ属植物の品種が、緑光と同一の品種であるか否かを判別するために用いられるプライマーセットとしては、上記（Ａ）から（Ｍ）からなる群より選択される少なくとも（Ｅ）に記載のセットが例示できる。 As a primer set used for determining whether or not the variety of the plant belonging to the genus Shiba is the same variety as that of green light, at least (E) selected from the group consisting of (A) to (M) above. Can be exemplified.
被検シバ属植物の品種が、相良姫と同一の品種であるか否かを判別するために用いられるプライマーセットとしては、上記（Ａ）から（Ｍ）からなる群より選択される少なくとも（Ｉ）に記載のセットが例示できる。 The primer set used to determine whether or not the cultivar of the test Shiba genus plant is the same cultivar as Sagarahime is at least selected from the group consisting of (A) to (M) above (I ) Can be exemplified.
被検シバ属植物の品種が、シャムロンと同一の品種であるか否かを判別するために用いられるプライマーセットとしては、上記（Ａ）から（Ｍ）からなる群より選択される少なくとも（Ｅ）に記載のセットが例示できる。 The primer set used for determining whether or not the variety of the plant of the genus Shiba belongs to the same variety as Shamron is at least selected from the group consisting of (A) to (M) above (E) Can be exemplified.
被検シバ属植物の品種が、朝萌と同一の品種であるか否かを判別するために用いられるプライマーセットとしては、上記（Ａ）から（Ｍ）からなる群より選択される少なくとも（Ｊ）に記載のセットが例示できる。 The primer set used to determine whether or not the cultivar of the test Shiba genus plant is the same cultivar as Asamoe is at least selected from the group consisting of (A) to (M) above (J ) Can be exemplified.
被検シバ属植物の品種が、アケミドリと同一の品種であるか否かを判別するために用いられるプライマーセットとしては、上記（Ａ）から（Ｍ）からなる群より選択される少なくとも（Ｅ）及び（Ｌ）に記載のセットが例示できる。 As a primer set used for determining whether or not the cultivar of the test genus plant is the same cultivar as that of Achemidori, at least (E) selected from the group consisting of (A) to (M) above. And the set as described in (L) can be illustrated.
被検シバ属植物の品種が、アプロードと同一の品種であるか否かを判別するために用いられるプライマーセットとしては、上記（Ａ）から（Ｍ）からなる群より選択される少なくとも（Ｂ）、（Ｄ）、（Ｅ）、（Ｆ）、（Ｉ）又は（Ｌ）に記載のセット、及び、（Ｍ）に記載のセットが例示できる。 As a primer set used for determining whether or not the cultivar of the test genus plant is the same cultivar as Approde, at least (B) selected from the group consisting of (A) to (M) above. , (D), (E), (F), (I) or a set described in (L), and a set described in (M).
被検シバ属植物の品種が、朝駆と同一の品種であるか否かを判別するために用いられるプライマーセットとしては、上記（Ａ）から（Ｍ）からなる群より選択される少なくとも（Ｃ）、（Ｉ）又は（Ｌ）に記載のセット、及び、（E）に記載のセットが例示できる。 As a primer set used for determining whether or not the varieties of the plant of the genus Shiba are the same varieties as those in the morning run, at least (C) selected from the group consisting of (A) to (M) above. ), (I) or (L), and (E).
被検シバ属植物の品種が、ちばフェアグリーンと同一の品種であるか否かを判別するために用いられるプライマーセットとしては、上記（Ａ）から（Ｍ）からなる群より選択される少なくとも（Ｈ）又は（Ｉ）に記載のセット、及び、（E）に記載のセットが例示できる。 The primer set used for determining whether or not the variety of the plant belonging to the genus Shiba is the same variety as Chiba Fair Green is at least selected from the group consisting of (A) to (M) above ( The set as described in H) or (I), and the set as described in (E) can be illustrated.
被検シバ属植物の品種が、コプロスと同一の品種であるか否かを判別するために用いられるプライマーセットとしては、上記（Ａ）から（Ｍ）からなる群より選択される少なくとも（Ｅ）及び（Ｍ）に記載のセットが例示できる。 The primer set used for determining whether or not the cultivar of the test genus plant is the same cultivar as Copros is at least selected from the group consisting of (A) to (M) above (E) And the set as described in (M) can be illustrated.
被検シバ属植物の品種が、エメラルドと同一の品種であるか否かを判別するために用いられるプライマーセットとしては、上記（Ａ）から（Ｍ）からなる群より選択される少なくとも（Ｈ）又は（Ｌ）に記載のセット、及び、（Ｅ）に記載のセットが例示できる。 As a primer set used for determining whether or not the cultivar of the test genus plant is the same cultivar as the emerald, at least (H) selected from the group consisting of (A) to (M) above. Or the set as described in (L) and the set as described in (E) can be illustrated.
被検シバ属植物の品種が、エクイターフと同一の品種であるか否かを判別するために用いられるプライマーセットとしては、上記（Ａ）から（Ｍ）からなる群より選択される少なくとも（Ｆ）又は（Ｉ）に記載のセット、及び、（Ｈ）に記載のセットが例示できる。 As a primer set used for determining whether or not the cultivar of the test genus plant is the same cultivar as Equiturf, at least (F) selected from the group consisting of (A) to (M) above. Or the set as described in (I) and the set as described in (H) can be illustrated.
被検シバ属植物の品種が、フラッツと同一の品種であるか否かを判別するために用いられるプライマーセットとしては、上記（Ａ）から（Ｍ）からなる群より選択される少なくとも（Ｉ）及び（Ｍ）からなる群より選択されるいずれか、並びに、（Ｄ）に記載のセットが例示できる。 The primer set used to determine whether or not the cultivar of the test genus plant is the same cultivar as Flats is at least selected from the group consisting of (A) to (M) above (I) And a group selected from the group consisting of (M) and the set described in (D).
被検シバ属植物の品種が、はるかと同一の品種であるか否かを判別するために用いられるプライマーセットとしては、上記（Ａ）から（Ｍ）からなる群より選択される少なくとも（Ｈ）及び（Ｌ）に記載のセットが例示できる。 As a primer set used to determine whether or not the variety of the genus plant of the test genus is much the same variety, at least (H) selected from the group consisting of (A) to (M) above. And the set as described in (L) can be illustrated.
被検シバ属植物の品種が、イナヒカリと同一の品種であるか否かを判別するために用いられるプライマーセットとしては、上記（Ａ）から（Ｍ）からなる群より選択される少なくとも（Ａ）、（Ｂ）、（Ｄ）、（Ｆ）、（Ｈ）、（Ｊ）又は（Ｌ）に記載のセット、及び、（Ｉ）に記載のセットが例示できる。 The primer set used for determining whether or not the cultivar of the genus Shiba is the same cultivar as Inahikari is at least selected from the group consisting of (A) to (M) above. The set as described in (B), (D), (F), (H), (J) or (L), and the set as described in (I) can be illustrated.
被検シバ属植物の品種が、スクラムと同一の品種であるか否かを判別するために用いられるプライマーセットとしては、上記（Ａ）から（Ｍ）からなる群より選択される少なくとも（Ａ）又は（Ｍ）に記載のセット、及び、（Ｄ）に記載のセットが例示できる。 The primer set used to determine whether or not the variety of the plant of the genus Shiba is the same variety as Scrum is at least selected from the group consisting of (A) to (M) above. Or the set as described in (M) and the set as described in (D) can be illustrated.
被検シバ属植物の品種が、シルキーフィールドと同一の品種であるか否かを判別するために用いられるプライマーセットとしては、上記（Ａ）から（Ｍ）からなる群より選択される少なくとも（Ａ）、（Ｂ）、（Ｄ）、（Ｆ）、（Ｈ）、（Ｊ）又は（Ｌ）に記載のセット、及び、（Ｉ）に記載のセットが例示できる。 The primer set used for determining whether or not the variety of the plant belonging to the genus Shiba is the same as the silky field is at least selected from the group consisting of (A) to (M) above (A ), (B), (D), (F), (H), (J) or (L), and (I).
被検シバ属植物の品種が、草剣と同一の品種であるか否かを判別するために用いられるプライマーセットとしては、上記（Ａ）から（Ｍ）からなる群より選択される少なくとも（Ｈ）又は（Ｌ）に記載のセット、及び、（Ｅ）に記載のセットが例示できる。 The primer set used to determine whether or not the variety of the genus Shiba is the same variety as the grass sword is at least (H) selected from the group consisting of (A) to (M) above. ) Or (L) and the set described in (E) can be exemplified.
被検シバ属植物の品種が、たねぞうと同一の品種であるか否かを判別するために用いられるプライマーセットとしては、上記（Ａ）から（Ｍ）からなる群より選択される少なくとも（Ａ）、（Ｅ）又は（Ｈ）に記載のセット、及び、（Ｌ）に記載のセットが例示できる。 The primer set used for determining whether or not the cultivar of the plant of the genus Shiba is the same variety as that of Tanezou is at least selected from the group consisting of (A) to (M) above (A ), (E) or (H), and (L).
被検シバ属植物の品種が、ティーエムナインと同一の品種であるか否かを判別するために用いられるプライマーセットとしては、上記（Ａ）から（Ｍ）からなる群より選択される少なくとも（Ａ）、（Ｈ）又は（Ｍ）に記載のセット、及び、（Ｆ）に記載のセットが例示できる。 The primer set used for determining whether or not the cultivar of the plant of the genus Shiba is the same cultivar as the tea emnaine is at least selected from the group consisting of (A) to (M) above (A ), (H) or a set described in (M), and a set described in (F).
被検シバ属植物の品種が、つくば輝と同一の品種であるか否かを判別するために用いられるプライマーセットとしては、上記（Ａ）から（Ｍ）からなる群より選択される少なくとも（Ａ）、（Ｈ）又は（Ｍ）に記載のセット、及び、（Ｆ）に記載のセットが例示できる。 The primer set used to determine whether or not the cultivar of the test genus plant is the same cultivar as Tsukuba Teru is at least selected from the group consisting of (A) to (M) above (A ), (H) or (M), and (F).
被検シバ属植物の品種が、つくば太郎と同一の品種であるか否かを判別するために用いられるプライマーセットとしては、上記（Ａ）から（Ｍ）からなる群より選択される少なくとも（Ａ）、（Ｅ）又は（Ｈ）に記載のセット、及び、（Ｌ）に記載のセットが例示できる。 As a primer set used for determining whether or not the cultivar of the plant of the genus Shiba is the same cultivar as Taro Tsukuba, at least (A) selected from the group consisting of (A) to (M) above. ), (E) or (H), and (L).
被検シバ属植物の品種が、チバラフワンと同一の品種であるか否かを判別するために用いられるプライマーセットとしては、上記（Ａ）から（Ｍ）からなる群より選択される少なくとも（Ａ）、（Ｂ）及び（Ｌ）に記載のセットが例示できる。 As a primer set used for determining whether or not the variety of the plant belonging to the genus Shiba is the same variety as Chibarahuwan, at least (A) selected from the group consisting of (A) to (M) above. , (B) and (L) can be exemplified.
被検シバ属植物の品種が、エルトロと同一の品種であるか否かを判別するために用いられるプライマーセットとしては、上記（Ａ）から（Ｍ）からなる群より選択される少なくとも（Ａ）又は（Ｃ）に記載のセット、上記（Ｆ）及び（Ｍ）に記載のセット、及び、（Ｅ）に記載のセットが例示できる。 As a primer set used for determining whether or not the cultivar of the test genus plant is the same cultivar as Eltro, at least (A) selected from the group consisting of (A) to (M) above. Or the set as described in (C), the set as described in said (F) and (M), and the set as described in (E) can be illustrated.
被検シバ属植物の品種が、フジコンパクトと同一の品種であるか否かを判別するために用いられるプライマーセットとしては、上記（Ａ）から（Ｍ）からなる群より選択される少なくとも（Ｅ）又は（Ｈ）に記載のセット、（Ａ）に記載のセット、及び、（Ｌ）に記載のセットが例示できる。 The primer set used to determine whether or not the cultivar of the test genus plant is the same cultivar as Fuji Compact is at least selected from the group consisting of (A) to (M) above (E ) Or (H), the set described in (A), and the set described in (L).
被検シバ属植物の品種が、みやこと同一の品種であるか否かを判別するために用いられるプライマーセットとしては、上記（Ａ）から（Ｍ）からなる群より選択される少なくとも（Ａ）、（Ｂ）、（Ｄ）、（Ｌ）又は（Ｍ）に記載のセット、（Ｅ）に記載のセット、及び、（Ｉ）に記載のセットが例示できる。 The primer set used to determine whether or not the varieties of the test genus plant are the same varieties of Miyako and at least (A) selected from the group consisting of (A) to (M) above. The set as described in (B), (D), (L) or (M), the set as described in (E), and the set as described in (I) can be illustrated.
被検シバ属植物の品種が、オアシスグリーンと同一の品種であるか否かを判別するために用いられるプライマーセットとしては、上記（Ａ）から（Ｍ）からなる群より選択される少なくとも（Ｂ）、（Ｈ）又は（Ｌ）に記載のセット、（Ｅ）に記載のセット、及び、（Ｍ）に記載のセットが例示できる。 As a primer set used for determining whether or not the cultivar of the test genus plant is the same cultivar as oasis green, at least (B selected from the group consisting of (A) to (M) above. ), (H) or (L), the set described in (E), and the set described in (M).
被検シバ属植物の品種が、ビクトールと同一の品種であるか否かを判別するために用いられるプライマーセットとしては、上記（Ａ）から（Ｍ）からなる群より選択される少なくとも（Ｄ）、（Ｅ）、（Ｆ）、（Ｉ）又は（Ｍ）に記載のセット、（Ｈ）に記載のセット、及び、（Ｌ）に記載のセットが例示できる。 The primer set used for determining whether or not the cultivar of the test genus plant is the same cultivar as Victor is at least (D) selected from the group consisting of (A) to (M) above. , (E), (F), (I) or a set described in (M), a set described in (H), and a set described in (L).
被検シバ属植物の品種が、ヤエヤマと同一の品種であるか否かを判別するために用いられるプライマーセットとしては、上記（Ａ）から（Ｍ）からなる群より選択される少なくとも（Ａ）又は（Ｃ）に記載のセット、上記（Ｆ）又は（Ｍ）に記載のセット、及び、（Ｅ）に記載のセットが例示できる。 As a primer set used for determining whether or not the cultivar of the test genus plant is the same cultivar as Yaeyama, at least (A) selected from the group consisting of (A) to (M) above. Or the set as described in (C), the set as described in said (F) or (M), and the set as described in (E) can be illustrated.
被検シバ属植物の品種が、アケミドリ、青太郎、アプロード、朝駆、朝萌、バーニングラブ、ちばフェアグリーン、チバラフワン、コプロス、デアンザ、エルトロ、エメラルド、エクイターフ、フラッツ、フジコンパクト、はるか、はやと、ヒメノ、イナヒカリ、クサセンリ、メイヤー、みやこ、オアシスグリーン、ロンパーフィールド、緑光、相良姫、スクラム、シャムロン、シルキーフィールド、草剣、たねぞう、ティーエムナイン、つくば輝、つくば太郎、ビクトール、及び、ヤエヤマからなる群より選択されるいずれかのシバ属植物と同一の品種であるか否かを判別するために用いられるプライマーセットとしては、上記（Ａ）から（Ｍ）からなる群より選択される少なくとも（Ｅ）、（Ｈ）、（Ｉ）、（Ｌ）、及び、（Ｍ）に記載のセットが例示できる。 The varieties of the genus Shiba genus plant are Achemidori, Aotaro, Approad, Asakudo, Asamoe, Burning Love, Chiba Fairgreen, Chibarahuwan, Copros, Deanza, El Toro, Emerald, Equiterf, Flats, Fuji Compact, Haruka, Hayato, It consists of Himeno, Inahikari, Kusasenri, Mayer, Miyako, Oasis Green, Romper Field, Green Light, Sagara Hime, Scrum, Shamron, Silky Field, Grass Sword, Tanezo, Thiem Nine, Tsukuba Teru, Tsukuba Taro, Victor, and Yaeyama The primer set used for determining whether or not the same variety as any plant of the genus Shiba selected from the group is at least selected from the group consisting of (A) to (M) above (E ), (H), (I), (L), and (M) Set can be exemplified.
被検シバ属植物の品種が、アケミドリ、青太郎、アプロード、朝駆、朝萌、バーニングラブ、ちばフェアグリーン、チバラフワン、コプロス、デアンザ、エルトロ、エメラルド、エクイターフ、フラッツ、フジコンパクト、はるか、はやと、ヒメノ、イナヒカリ、クサセンリ、メイヤー、みやこ、オアシスグリーン、ロンパーフィールド、緑光、相良姫、スクラム、シャムロン、シルキーフィールド、草剣、たねぞう、ティーエムナイン、つくば輝、つくば太郎、ビクトール、及び、ヤエヤマからなる群より選択されるいずれかのシバ属植物と同一の品種であるか否かを判別するために用いられるプライマーセットとしては、上記（Ａ）から（Ｍ）からなる群より選択される少なくとも（Ａ）から（Ｇ）、（Ｊ）、（Ｋ）及び（Ｍ）に記載のセットが例示できる。 The varieties of the genus Shiba genus plant are Achemidori, Aotaro, Approad, Asakudo, Asamoe, Burning Love, Chiba Fairgreen, Chibarahuwan, Copros, Deanza, El Toro, Emerald, Equiterf, Flats, Fuji Compact, Haruka, Hayato, It consists of Himeno, Inahikari, Kusasenri, Mayer, Miyako, Oasis Green, Romper Field, Green Light, Sagara Hime, Scrum, Shamron, Silky Field, Grass Sword, Tanezo, Thiem Nine, Tsukuba Teru, Tsukuba Taro, Victor, and Yaeyama As a primer set used for determining whether or not the same variety as any plant of the genus Shiva selected from the group is at least selected from the group consisting of (A) to (M) above (A ) To (G), (J), (K) and (M) Tsu door can be exemplified.
被検シバ属植物の品種が、アケミドリ、青太郎、アプロード、朝駆、朝萌、バーニングラブ、ちばフェアグリーン、チバラフワン、コプロス、デアンザ、エルトロ、エメラルド、エクイターフ、フラッツ、フジコンパクト、はるか、はやと、ヒメノ、イナヒカリ、クサセンリ、メイヤー、みやこ、オアシスグリーン、ロンパーフィールド、緑光、相良姫、スクラム、シャムロン、シルキーフィールド、草剣、たねぞう、ティーエムナイン、つくば輝、つくば太郎、ビクトール、及び、ヤエヤマからなる群より選択されるいずれかのシバ属植物と同一の品種であるか否かを判別するために用いられるプライマーセットとしては、上記（Ａ）から（Ｍ）からなる群より選択される全てに記載のセットが例示できる。 The varieties of the genus Shiba genus plant are Achemidori, Aotaro, Approad, Asakudo, Asamoe, Burning Love, Chiba Fairgreen, Chibarahuwan, Copros, Deanza, El Toro, Emerald, Equiterf, Flats, Fuji Compact, Haruka, Hayato, It consists of Himeno, Inahikari, Kusasenri, Mayer, Miyako, Oasis Green, Romper Field, Green Light, Sagara Hime, Scrum, Shamron, Silky Field, Grass Sword, Tanezo, Thiem Nine, Tsukuba Teru, Tsukuba Taro, Victor, and Yaeyama As a primer set used to determine whether or not the same variety as any plant of the genus Shiva selected from the group is described in all selected from the group consisting of (A) to (M) above The set of can be illustrated.
さらに、本発明は、アケミドリ、青太郎、アプロード、朝駆、朝萌、バーニングラブ、ちばフェアグリーン、チバラフワン、コプロス、デアンザ、エルトロ、エメラルド、エクイターフ、フラッツ、フジコンパクト、はるか、はやと、ヒメノ、イナヒカリ、クサセンリ、メイヤー、みやこ、オアシスグリーン、ロンパーフィールド、緑光、相良姫、スクラム、シャムロン、シルキーフィールド、草剣、たねぞう、ティーエムナイン、つくば輝、つくば太郎、ビクトール、及び、ヤエヤマからなる群より選択されるいずれかのシバ属植物のゲノムDNAを鋳型とし、上記（Ａ）から（Ｍ）からなる群より選択されるいずれかのセットをプライマーセットとするPCRによって増幅されるPCR産物を提供する。該PCR産物の製造方法や利用方法は上述の通りである。
なお、本明細書において引用されたすべての先行技術文献は、参照として本明細書に組み入れられる。
In addition, the present invention includes Akemidori, Aotaro, Approad, Asakudo, Asamoe, Burning Love, Chiba Fair Green, Chibara Fwan, Copros, Deanza, El Toro, Emerald, Equiterf, Flats, Fuji Compact, Haruka, Himeno, Inahikari , Kusasenri, Mayer, Miyako, Oasis Green, Romper Field, Green Light, Sagara Hime, Scrum, Shamron, Silky Field, Grass Sword, Tanesou, Thiem Nine, Tsukuba Teru, Tsukuba Taro, Victor, and Yaeyama Provided is a PCR product amplified by PCR using the genomic DNA of any of the genus Shiba plants as a template and using any set selected from the group consisting of (A) to (M) as a primer set. The production method and utilization method of the PCR product are as described above.
It should be noted that all prior art documents cited in the present specification are incorporated herein by reference.
以下、本発明を実施例によりさらに具体的に説明するが、本発明はこれら実施例に制限されるものではない。
本発明者らは、ノシバの地上部、地下部ならびにカルス由来のESTから、マイクロサテライトを抽出し、それらを含む90〜300bpのPCR断片が得られるようにプライマーを設計した。DNeasy（登録商標） Plant Mini Kit (QIAGEN)を用いて抽出したシバ属植物のゲノムDNAを鋳型として、設計したプライマーペアを用いてPCRを行なった。それらのPCR産物に対して蛍光ラベル反応を行い、DNAアナライザーで、品種特異的なPCR断片長を検出することにより品種判定を行なった。以下に主な実施例を記述する。
EXAMPLES Hereinafter, the present invention will be described more specifically with reference to examples, but the present invention is not limited to these examples.
The present inventors designed primers so that 90-300 bp PCR fragments containing them were obtained by extracting microsatellite from ESTs derived from the above-ground part, under-ground part and callus of Noshba. PCR was carried out using the designed primer pair, using as a template genomic DNA of the genus Shiba that was extracted using DNeasy (registered trademark) Plant Mini Kit (QIAGEN). Fluorescence labeling reaction was performed on these PCR products, and the variety was determined by detecting the variety-specific PCR fragment length with a DNA analyzer. The main examples are described below.
1-1)反応液組成
1-1-1)384穴プレートでPCRを行なう場合の1検体あたりの反応液組成
鋳型DNA (~0.25 ng/μｌ) 2 μｌ
10xPCR緩衝液 [160 mM (NH4) 2SO4、67 mM Tris-HCl (pH8.8)、0.1% Tween20] 0.5 μｌ
2.5 mM each dNTP 0.4 μｌ
50 mM MgCl2 0.6 μｌ
25 μM each プライマー混合液 0.08 μｌ
耐熱性DNAポリメラーゼ (5 unit/μｌ、BIOTAQTM、BIOLINE社) 0.008 μｌ
水 1.412 μｌ
全量 5 μｌ
1-1) Composition of reaction solution
1-1-1) Composition of reaction solution per sample when PCR is performed in a 384-well plate Template DNA (~ 0.25 ng / μl) 2 μl
10xPCR buffer [160 mM (NH 4 ) 2 SO 4 , 67 mM Tris-HCl (pH 8.8), 0.1% Tween20] 0.5 μl
2.5 mM each dNTP 0.4 μl
50 mM MgCl 2 0.6 μl
25 μM each primer mixture 0.08 μl
Thermostable DNA polymerase (5 unit / μl, BIOTAQ ™ , BIOLINE) 0.008 μl
1.412 μl of water
Total volume 5 μl
1-1-2)96穴プレートでPCRを行なう場合の1検体あたりの反応液組成
鋳型DNA (~0.25 ng/μｌ) 4 μｌ
10xPCR緩衝液 [160 mM (NH4) 2SO4、67 mM Tris-HCl (pH8.8)、0.1% Tween20] 1 μｌ
2.5 mM each dNTP 0.8 μｌ
50 mM MgCl2 1.2 μｌ
25 μM each プライマー混合液 0.16 μｌ
耐熱性DNAポリメラーゼ (5 unit/μｌ、BIOTAQTM、BIOLINE社) 0.016 μｌ
水 2.824 μｌ
全量 10 μｌ
1-1-2) Composition of reaction solution per sample when PCR is performed in a 96-well plate Template DNA (~ 0.25 ng / μl) 4 μl
10xPCR buffer [160 mM (NH 4 ) 2 SO 4 , 67 mM Tris-HCl (pH 8.8), 0.1% Tween20] 1 μl
2.5 mM each dNTP 0.8 μl
50 mM MgCl 2 1.2 μl
25 μM each primer mixture 0.16 μl
Thermostable DNA polymerase (5 unit / μl, BIOTAQ ™ , BIOLINE) 0.016 μl
2.824 μl of water
10 μl total volume
1-2)PCR条件
Biometra社製あるいはABI社製のサーマルサイクラーを用いて、以下のプログラムでPCRを行なった。
94℃ 3分
[94℃ 30秒、 68℃ 30秒] 3サイクル
[94℃ 30秒、 66℃ 30秒] 3サイクル
[94℃ 30秒、 64℃ 30秒] 3サイクル
[94℃ 30秒、 62℃ 30秒、72℃ 30秒] 3サイクル
[94℃ 30秒、 60℃ 30秒、72℃ 30秒] 3サイクル
[94℃ 30秒、 58℃ 30秒、72℃ 30秒] 3サイクル
[94℃ 30秒、 55℃ 30秒、72℃ 30秒] 30サイクル
72℃ 10分
1-2) PCR conditions
PCR was performed with the following program using a thermal cycler manufactured by Biometra or ABI.
94 ° C 3 minutes
[94 ℃ 30 seconds, 68 ℃ 30 seconds] 3 cycles
[94 ℃ 30 seconds, 66 ℃ 30 seconds] 3 cycles
[94 ℃ 30 seconds, 64 ℃ 30 seconds] 3 cycles
[94 ℃ 30 seconds, 62 ℃ 30 seconds, 72 ℃ 30 seconds] 3 cycles
[94 ℃ 30 seconds, 60 ℃ 30 seconds, 72 ℃ 30 seconds] 3 cycles
[94 ℃ 30 seconds, 58 ℃ 30 seconds, 72 ℃ 30 seconds] 3 cycles
[94 ℃ 30 seconds, 55 ℃ 30 seconds, 72 ℃ 30 seconds] 30 cycles
72 ° C 10 minutes
1-3)蛍光ラベリング
タッチダウンPCR 法によるPCR後、増幅断片の蛍光ラベル反応を行なった。1μl PCR産物に対して5μlラベリングミックス*を添加し、37℃ 5分、57℃ 15分インキュベートした。エタノール沈殿を行い、70%エタノールでリンスし、脱気乾燥させた後、ホルムアミドマーカー液（ホルムアミド 5μl、サイズマーカー 0.025 μl）で溶解した。
*ラベリングミックス
Klenow fragment (8 unit/μl) 0.02 μl
ThermoSequenase (32 unit/μl) 0.005 μl
10 μM R6G-ddCTP (or R110-ddUTP, etc.) 0.004 μl
10x Klenow緩衝液 [120 mM Tris-HCl (pH8.3)、120 mM MgCl2] 0.5 μl
水 4.471 μl
全量 5μl
1-3) Fluorescent labeling After PCR by touchdown PCR, fluorescent labeling reaction of the amplified fragment was performed. 5 μl labeling mix * was added to 1 μl PCR product and incubated at 37 ° C. for 5 minutes and 57 ° C. for 15 minutes. Ethanol precipitation was performed, rinsed with 70% ethanol, deaerated and dried, and then dissolved with a formamide marker solution (formamide 5 μl, size marker 0.025 μl).
* Labeling mix
Klenow fragment (8 unit / μl) 0.02 μl
ThermoSequenase (32 unit / μl) 0.005 μl
10 μM R6G-ddCTP (or R110-ddUTP, etc.) 0.004 μl
10x Klenow buffer [120 mM Tris-HCl (pH8.3), 120 mM MgCl 2 ] 0.5 μl
4.471 μl water
Total volume 5μl
1-4) フラグメント解析
蛍光ラベリングしたPCR増幅断片をABI3730 DNAアナライザーで泳動を行った。泳動後、GeneMapper ver.4.0でフラグメント解析を行った。
1-4) Fragment analysis Fluorescently labeled PCR amplified fragments were electrophoresed with an ABI3730 DNA analyzer. After electrophoresis, fragment analysis was performed with GeneMapper ver.4.0.
1-5)結果
表1に示したプライマーペアを用いて、表2に示した日本のシバ属植物登録品種32品種を含めた36品種・系統の判別を行なった。表3にはフラグメントアナライザーで解析したPCR産物のサイズを、表4にはそれらのアリルをアルファベットで記号化した結果を示す。表3及び表4が示すように、これらのプライマーペアにおける供試36品種・系統間での推定対立遺伝子数は2〜6であった。また、表3及び表4が示すように、供試36品種・系統間で多型が認められ、これら全てのプライマーペアを組み合わせることにより供試した36品種・系統の識別が可能となった。
1-5) Results Using the primer pairs shown in Table 1, 36 varieties and strains including 32 varieties registered in Japan as shown in Table 2 were identified. Table 3 shows the sizes of the PCR products analyzed by the fragment analyzer, and Table 4 shows the results of symbolizing alleles thereof alphabetically. As shown in Tables 3 and 4, the estimated number of alleles among the 36 cultivars / lines tested in these primer pairs was 2-6. Furthermore, as shown in Tables 3 and 4, polymorphisms were observed among the 36 varieties / lines tested, and it was possible to identify the 36 varieties / lines tested by combining all these primer pairs.
(サイズの小さいものからA, B…と表示した)
(A, B ... are displayed from the smallest size)
1-6)考察
表2に示した36品種の識別マーカーは表４の結果より以下の組み合わせであることが判明した。
36品種全てを識別可能な最小マーカー数は5マーカー(ZOS0241, ZOS0506, ZOS1300, ZOS0644, ZOS2449)である。また、表2に示した品種群の中で、1品種を識別可能な最小マーカー数は１である。ZOS0078によって「デアンザ」を、ZOS0241によって「青太郎」、「シャムロン」、「バーニングラブ」ならびに「緑光」を、ZOS0347によって「メイヤー」を、ZOS0481によって「クサセンリ」ならびに「ヒメノ」を、ZOS0506によって「青太郎」ならびに「バーニングラブ」を、ZOS0644によって「相良姫」を、ZOS1300によって「はやと」を、ZOS2449によって「クサセンリ」をそれぞれ識別することが出来る。
1-6) Consideration From the results shown in Table 4, the 36 types of identification markers shown in Table 2 were found to have the following combinations.
The minimum number of markers that can distinguish all 36 varieties is 5 markers (ZOS0241, ZOS0506, ZOS1300, ZOS0644, ZOS2449). In addition, in the variety group shown in Table 2, the minimum number of markers that can identify one variety is 1. ZOS0078 is "Dean", ZOS0241 is "Aotaro", "Shamron", "Burning Love" and "Green Light", ZOS0347 is "Meyer", ZOS0481 is "Kusasenri" and "Himeno", and ZOS0506 is "Blue" “Taro” and “Burning Love” can be identified by “ZOS0644”, “Sara Hime”, by “ZOS1300” by “Hayato”, and by “ZOS2449” by “Xensenri”.
ZOS0227とZOS0078(あるいはZOS2449)によって「スクラム」、ZOS0227とZOS0644(あるいはZOS2449)によって「フラッツ」、ZOS0241とZOS0222(あるいはZOS0644、ZOS1300)によって「朝駆」、ZOS0241とZOS0506(あるいはZOS0644)によって「ちばフェアグリーン」、ZOS0241とZOS0506(あるいはZOS1300)によって「エメラルド」ならびに「草剣」、ZOS0241とZOS1300によって「アケミドリ」、ZOS0241とZOS2449によって「コプロス」、ZOS0347とZOS0078(あるいはZOS0506、ZOS2449)によって「ティーエムナイン」、「つくば輝」、ZOS0506とZOS0347(あるいはZOS0644)によって「エクイターフ」、ZOS0506とZOS1300によって「はるか」、ZOS0644とZOS0078(あるいはZOS0203、ZOS0227、ZOS0347、ZOS0506、ZOS0685、ZOS1300)によって「イナヒカリ」ならびに「シルキーフィールド」、ZOS1300とZOS0078(あるいはZOS0241、ZOS0506)によって「たねぞう」ならびに「つくば太郎」、ZOS2449とZOS0203(あるいはZOS0227、ZOS0241、ZOS0347、ZOS0644、ZOS1300)によって「アプロード」をそれぞれ識別することができる。また、ZOS0078とZOS0203とZOS1300によって「チバラフワン」、ZOS0078とZOS1300とZOS0241(あるいはZOS0506)によって「フジコンパクト」、ZOS0241とZOS0078(あるいはZOS0222)とZOS0347(あるいはZOS2449)によって「エルトロ」ならびに「ヤエヤマ」、ZOS0241とZOS0644とZOS0078(あるいはZOS0203、ZOS0227、ZOS1300、ZOS2449)によって「みやこ」、ZOS0241とZOS2449とZOS0203(あるいはZOS0506、ZOS1300)によって「オアシスグリーン」、ZOS0506とZOS1300とZOS0227(あるいはZOS0241、ZOS0347、ZOS0347、ZOS0644、ZOS2449)によって「ビクトール」をそれぞれ識別することができる。 ZOS0227 and ZOS0078 (or ZOS2449) "Scrum", ZOS0227 and ZOS0644 (or ZOS2449) "Flats", ZOS0241 and ZOS0222 (or ZOS0644, ZOS1300) "Morning", ZOS0241 and ZOS0506 (or ZOS0644) "Chiba Fair "Green", "Emerald" by ZOS0241 and ZOS0506 (or ZOS1300) and "Grass Sword", "Achemidri" by ZOS0241 and ZOS1300, "Copros" by ZOS0241 and ZOS2449, "Teem Nine" by ZOS0347 and ZOS0078 (or ZOS0506, ZOS2449) , `` Tsukuba Teru '', `` Equaturf '' by ZOS0506 and ZOS0347 (or ZOS0644), `` Haruka '' by ZOS0506 and ZOS1300, `` Inhikari '' and `` Silky '' by ZOS0644 and ZOS0078 (or ZOS0203, ZOS0227, ZOS0347, ZOS0506, ZOS0685, ZOS1300) Field, ZOS1300 and ZOS0078 (or ZOS0241, ZOS0506) "Taro Tsukuba", can be identified ZOS2449 and ZOS0203 (or ZOS0227, ZOS0241, ZOS0347, ZOS0644, ZOS1300) by the "Apurodo" respectively. ZOS0078, ZOS0203 and ZOS1300 are `` Chibarahuwan '', ZOS0078 and ZOS1300 and ZOS0241 (or ZOS0506) are `` Fuji Compact '', ZOS0241 and ZOS0078 (or ZOS0222) and ZOS0347 (or ZOS2449) are `` Eltro '' and `` Yaeyama '', ZOS0241 And ZOS0644 and ZOS0078 (or ZOS0203, ZOS0227, ZOS1300, ZOS2449) `` Miyako '', ZOS0241 and ZOS2449 and ZOS0203 (or ZOS0506, ZOS1300) `` Oasis Green '', ZOS0506 and ZOS1300 and ZOS0227 (or ZOS0241, ZOS0347, ZOS0347, ZOS0347, ZOS0347, Z0347, , ZOS2449) can identify “Victor” respectively.
また、2つのマーカーの組み合わせで識別できる品種は17品種で、3つのマーカーの組み合わせで識別できる品種は7品種である。 There are 17 varieties that can be identified by a combination of two markers, and 7 varieties that can be identified by a combination of three markers.
また、最もアリル数の多いマーカーはZOS0241であり（6アリル)、最もアリルが少ないマーカーはZOS 0203、ZOS0222、ZOS0227、ZOS0685及びZOS1203である（2アリル)。 In addition, the marker having the largest number of alleles is ZOS0241 (6 alleles), and the markers having the least allele are ZOS0203, ZOS0222, ZOS0227, ZOS0685, and ZOS1203 (2 alleles).
さらに、「ちばフェアグリーン」と「ヤエヤマ」は、少なくともZOS0241で識別が可能である。それ以外の品種は2つ以上のマーカーで識別が可能である。 Furthermore, “Chiba Fair Green” and “Yaeyama” can be identified by at least ZOS0241. Other varieties can be identified by two or more markers.
Claims (10)
（ａ）対照シバ属植物のゲノムDNAにおける下記（１）から（１３）からなる群より選択される少なくとも1つのマイクロサテライト座位の遺伝子型であって、対照シバ属植物に特異的な遺伝子型、
（ｂ）被検シバ属植物のゲノムDNAにおける（ａ）と同じ座位の遺伝子型、
（１）配列番号：1に記載の塩基配列と相補的な塩基配列、及び、配列番号：2に記載の塩基配列と相補的な塩基配列によって挟まれるマイクロサテライト座位、
（２）配列番号：3に記載の塩基配列と相補的な塩基配列、及び、配列番号：4に記載の塩基配列と相補的な塩基配列によって挟まれるマイクロサテライト座位、
（３）配列番号：5に記載の塩基配列と相補的な塩基配列、及び、配列番号：6に記載の塩基配列と相補的な塩基配列によって挟まれるマイクロサテライト座位、
（４）配列番号：7に記載の塩基配列と相補的な塩基配列、及び、配列番号：8に記載の塩基配列と相補的な塩基配列によって挟まれるマイクロサテライト座位、
（５）配列番号：9に記載の塩基配列と相補的な塩基配列、及び、配列番号：10に記載の塩基配列と相補的な塩基配列によって挟まれるマイクロサテライト座位、
（６）配列番号：11に記載の塩基配列と相補的な塩基配列、及び、配列番号：12に記載の塩基配列と相補的な塩基配列によって挟まれるマイクロサテライト座位、
（７）配列番号：13に記載の塩基配列と相補的な塩基配列、及び、配列番号：14に記載の塩基配列と相補的な塩基配列によって挟まれるマイクロサテライト座位、
（８）配列番号：15に記載の塩基配列と相補的な塩基配列、及び、配列番号：16に記載の塩基配列と相補的な塩基配列によって挟まれるマイクロサテライト座位、
（９）配列番号：17に記載の塩基配列と相補的な塩基配列、及び、配列番号：18に記載の塩基配列と相補的な塩基配列によって挟まれるマイクロサテライト座位、
（１０）配列番号：19に記載の塩基配列と相補的な塩基配列、及び、配列番号：20に記載の塩基配列と相補的な塩基配列によって挟まれるマイクロサテライト座位、
（１１）配列番号：21に記載の塩基配列と相補的な塩基配列、及び、配列番号：22に記載の塩基配列と相補的な塩基配列によって挟まれるマイクロサテライト座位、
（１２）配列番号：23に記載の塩基配列と相補的な塩基配列、及び、配列番号：24に記載の塩基配列と相補的な塩基配列によって挟まれるマイクロサテライト座位、並びに、
（１３）配列番号：25に記載の塩基配列と相補的な塩基配列、及び、配列番号：26に記載の塩基配列と相補的な塩基配列によって挟まれるマイクロサテライト座位。 A method for discriminating varieties of a test genus plant including the step of comparing the genotype described in the following (a) and the genotype described in the following (b), wherein the genotypes compared in the step matched A method in which, in some cases, the cultivar of the test genus plant is identified as the same cultivar as the control genus plant;
(A) a genotype of at least one microsatellite locus selected from the group consisting of the following (1) to (13) in the genomic DNA of a control genus plant, wherein the genotype is specific to the control genus plant:
(B) the genotype of the same locus as (a) in the genomic DNA of the test Shiba genus plant,
(1) a microsatellite locus sandwiched between a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 1 and a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 2;
(2) a microsatellite locus sandwiched between a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 3 and a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 4;
(3) a microsatellite locus sandwiched between a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 5 and a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 6;
(4) a microsatellite locus sandwiched between a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 7 and a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 8;
(5) a microsatellite locus sandwiched by a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 9 and a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 10;
(6) a microsatellite locus sandwiched between a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 11 and a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 12;
(7) a microsatellite locus sandwiched between a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 13 and a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 14;
(8) a microsatellite locus sandwiched between a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 15 and a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 16;
(9) a microsatellite locus sandwiched between a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 17 and a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 18;
(10) a microsatellite locus sandwiched between a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 19 and a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 20;
(11) a microsatellite locus sandwiched between a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 21 and a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 22;
(12) a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 23, and a microsatellite locus sandwiched between base sequences complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 24, and
(13) A microsatellite locus sandwiched between a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 25 and a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 26.
（ａ）アケミドリ、青太郎、アプロード、朝駆、朝萌、バーニングラブ、ちばフェアグリーン、チバラフワン、コプロス、デアンザ、エルトロ、エメラルド、エクイターフ、フラッツ、フジコンパクト、はるか、はやと、ヒメノ、イナヒカリ、クサセンリ、メイヤー、みやこ、オアシスグリーン、ロンパーフィールド、緑光、相良姫、スクラム、シャムロン、シルキーフィールド、草剣、たねぞう、ティーエムナイン、つくば輝、つくば太郎、ビクトール、及び、ヤエヤマからなる群より選択されるいずれかのシバ属植物のゲノムDNAにおける下記（１）から（１３）からなる群より選択される少なくとも（５）、（８）、（９）、（１２）、及び、（１３）に記載のマイクロサテライト座位の遺伝子型、
（ｂ）被検シバ属植物のゲノムDNAにおける（ａ）と同じ座位の遺伝子型、
（１）配列番号：1に記載の塩基配列と相補的な塩基配列、及び、配列番号：2に記載の塩基配列と相補的な塩基配列によって挟まれるマイクロサテライト座位、
（２）配列番号：3に記載の塩基配列と相補的な塩基配列、及び、配列番号：4に記載の塩基配列と相補的な塩基配列によって挟まれるマイクロサテライト座位、
（３）配列番号：5に記載の塩基配列と相補的な塩基配列、及び、配列番号：6に記載の塩基配列と相補的な塩基配列によって挟まれるマイクロサテライト座位、
（４）配列番号：7に記載の塩基配列と相補的な塩基配列、及び、配列番号：8に記載の塩基配列と相補的な塩基配列によって挟まれるマイクロサテライト座位、
（５）配列番号：9に記載の塩基配列と相補的な塩基配列、及び、配列番号：10に記載の塩基配列と相補的な塩基配列によって挟まれるマイクロサテライト座位、
（６）配列番号：11に記載の塩基配列と相補的な塩基配列、及び、配列番号：12に記載の塩基配列と相補的な塩基配列によって挟まれるマイクロサテライト座位、
（７）配列番号：13に記載の塩基配列と相補的な塩基配列、及び、配列番号：14に記載の塩基配列と相補的な塩基配列によって挟まれるマイクロサテライト座位、
（８）配列番号：15に記載の塩基配列と相補的な塩基配列、及び、配列番号：16に記載の塩基配列と相補的な塩基配列によって挟まれるマイクロサテライト座位、
（９）配列番号：17に記載の塩基配列と相補的な塩基配列、及び、配列番号：18に記載の塩基配列と相補的な塩基配列によって挟まれるマイクロサテライト座位、
（１０）配列番号：19に記載の塩基配列と相補的な塩基配列、及び、配列番号：20に記載の塩基配列と相補的な塩基配列によって挟まれるマイクロサテライト座位、
（１１）配列番号：21に記載の塩基配列と相補的な塩基配列、及び、配列番号：22に記載の塩基配列と相補的な塩基配列によって挟まれるマイクロサテライト座位、
（１２）配列番号：23に記載の塩基配列と相補的な塩基配列、及び、配列番号：24に記載の塩基配列と相補的な塩基配列によって挟まれるマイクロサテライト座位、並びに、
（１３）配列番号：25に記載の塩基配列と相補的な塩基配列、及び、配列番号：26に記載の塩基配列と相補的な塩基配列によって挟まれるマイクロサテライト座位。 A method for discriminating varieties of a test genus plant including the step of comparing the genotype described in the following (a) and the genotype described in the following (b), wherein the genotypes compared in the step matched A method in which, in some cases, the cultivar of the test genus plant is identified as the same cultivar as the control genus plant;
(A) Akemidori, Aotaro, Approad, Asakan, Aso Moe, Burning Love, Chiba Fair Green, Chibara Huwan, Copros, Deansa, El Toro, Emerald, Equiterf, Flats, Fuji Compact, Haruka, Himano, Himeno, Inahikari, Kusasenri, Any selected from the group consisting of Meyer, Miyako, Oasis Green, Romper Field, Green Light, Sagara Hime, Scrum, Shamron, Silky Field, Grass Sword, Tanesou, Thiem Nine, Tsukuba Teru, Tsukuba Taro, Victor, and Yaeyama The micro DNA according to at least (5), (8), (9), (12), and (13) selected from the group consisting of the following (1) to (13) in the genomic DNA of the genus Shiba The genotype of the satellite locus,
(B) the genotype of the same locus as (a) in the genomic DNA of the test Shiba genus plant,
(1) a microsatellite locus sandwiched between a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 1 and a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 2;
(2) a microsatellite locus sandwiched between a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 3 and a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 4;
(3) a microsatellite locus sandwiched between a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 5 and a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 6;
(4) a microsatellite locus sandwiched between a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 7 and a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 8;
(5) a microsatellite locus sandwiched by a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 9 and a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 10;
(6) a microsatellite locus sandwiched between a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 11 and a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 12;
(7) a microsatellite locus sandwiched between a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 13 and a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 14;
(8) a microsatellite locus sandwiched between a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 15 and a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 16;
(9) a microsatellite locus sandwiched between a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 17 and a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 18;
(10) a microsatellite locus sandwiched between a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 19 and a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 20;
(11) a microsatellite locus sandwiched between a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 21 and a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 22;
(12) a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 23, and a microsatellite locus sandwiched between base sequences complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 24, and
(13) A microsatellite locus sandwiched between a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 25 and a base sequence complementary to the base sequence described in SEQ ID NO: 26.
（Ａ）配列番号：1に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチド、及び、配列番号：2に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチドのセット、
（Ｂ）配列番号：3に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチド、及び、配列番号：4に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチドのセット、
（Ｃ）配列番号：5に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチド、及び、配列番号：6に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチドのセット、
（Ｄ）配列番号：7に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチド、及び、配列番号：8に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチドのセット、
（Ｅ）配列番号：9に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチド、及び、配列番号：10に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチドのセット、
（Ｆ）配列番号：11に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチド、及び、配列番号：12に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチドのセット、
（Ｇ）配列番号：13に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチド、及び、配列番号：14に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチドのセット、
（Ｈ）配列番号：15に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチド、及び、配列番号：16に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチドのセット、
（Ｉ）配列番号：17に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチド、及び、配列番号：18に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチドのセット、
（Ｊ）配列番号：19に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチド、及び、配列番号：20に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチドのセット、
（Ｋ）配列番号：21に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチド、及び、配列番号：22に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチドのセット、
（Ｌ）配列番号：23に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチド、及び、配列番号：24に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチドのセット、並びに、
（Ｍ）配列番号：25に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチド、及び、配列番号：26に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチドのセット。 At least one set selected from the group consisting of (A) to (M) below:
(A) an oligonucleotide comprising the base sequence described in SEQ ID NO: 1, and a set of oligonucleotides comprising the base sequence described in SEQ ID NO: 2,
(B) an oligonucleotide comprising the base sequence set forth in SEQ ID NO: 3 and a set of oligonucleotides comprising the base sequence set forth in SEQ ID NO: 4.
(C) an oligonucleotide comprising the base sequence set forth in SEQ ID NO: 5 and an oligonucleotide set comprising the base sequence set forth in SEQ ID NO: 6;
(D) an oligonucleotide comprising the base sequence set forth in SEQ ID NO: 7 and a set of oligonucleotides comprising the base sequence set forth in SEQ ID NO: 8;
(E) an oligonucleotide containing the base sequence set forth in SEQ ID NO: 9 and a set of oligonucleotides containing the base sequence set forth in SEQ ID NO: 10;
(F) a set of oligonucleotides containing the base sequence set forth in SEQ ID NO: 11 and an oligonucleotide containing the base sequence set forth in SEQ ID NO: 12;
(G) an oligonucleotide containing the base sequence set forth in SEQ ID NO: 13 and a set of oligonucleotides containing the base sequence set forth in SEQ ID NO: 14;
(H) an oligonucleotide comprising the base sequence set forth in SEQ ID NO: 15 and an oligonucleotide set comprising the base sequence set forth in SEQ ID NO: 16;
(I) an oligonucleotide comprising the base sequence set forth in SEQ ID NO: 17 and a set of oligonucleotides comprising the base sequence set forth in SEQ ID NO: 18;
(J) an oligonucleotide comprising the base sequence set forth in SEQ ID NO: 19 and an oligonucleotide set comprising the base sequence set forth in SEQ ID NO: 20;
(K) an oligonucleotide containing the base sequence set forth in SEQ ID NO: 21 and a set of oligonucleotides containing the base sequence set forth in SEQ ID NO: 22;
(L) an oligonucleotide comprising the base sequence set forth in SEQ ID NO: 23, a set of oligonucleotides comprising the base sequence set forth in SEQ ID NO: 24, and
(M) A set of an oligonucleotide containing the base sequence set forth in SEQ ID NO: 25 and an oligonucleotide containing the base sequence set forth in SEQ ID NO: 26.
（Ａ）配列番号：1に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチド、及び、配列番号：2に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチドのセット、
（Ｂ）配列番号：3に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチド、及び、配列番号：4に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチドのセット、
（Ｃ）配列番号：5に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチド、及び、配列番号：6に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチドのセット、
（Ｄ）配列番号：7に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチド、及び、配列番号：8に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチドのセット、
（Ｅ）配列番号：9に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチド、及び、配列番号：10に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチドのセット、
（Ｆ）配列番号：11に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチド、及び、配列番号：12に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチドのセット、
（Ｇ）配列番号：13に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチド、及び、配列番号：14に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチドのセット、
（Ｈ）配列番号：15に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチド、及び、配列番号：16に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチドのセット、
（Ｉ）配列番号：17に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチド、及び、配列番号：18に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチドのセット、
（Ｊ）配列番号：19に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチド、及び、配列番号：20に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチドのセット、
（Ｋ）配列番号：21に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチド、及び、配列番号：22に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチドのセット、
（Ｌ）配列番号：23に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチド、及び、配列番号：24に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチドのセット、並びに、
（Ｍ）配列番号：25に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチド、及び、配列番号：26に記載の塩基配列を含むオリゴヌクレオチドのセット。 Akimidori, Aotaro, Approad, Asakudo, Asamoe, Burning Love, Chiba Fair Green, Chibara Fwan, Cyprus, Deansa, El Toro, Emerald, Equiterf, Flats, Fuji Compact, Haruka, Hayato, Himeno, Inahikari, Kusasenri, Meyer, Miyako , Oasis Green, Romper Field, Green Light, Sagara Hime, Scrum, Shamron, Silky Field, Grass Sword, Tanezo, Thiem Nine, Tsukuba Teru, Tsukuba Taro, Victor, and Yaeyama PCR products amplified by PCR using genomic DNA of a genus plant as a template and using any set selected from the group consisting of (A) to (M) below as a primer set;
(A) an oligonucleotide comprising the base sequence described in SEQ ID NO: 1, and a set of oligonucleotides comprising the base sequence described in SEQ ID NO: 2,
(B) an oligonucleotide comprising the base sequence set forth in SEQ ID NO: 3 and a set of oligonucleotides comprising the base sequence set forth in SEQ ID NO: 4.
(C) an oligonucleotide comprising the base sequence set forth in SEQ ID NO: 5 and an oligonucleotide set comprising the base sequence set forth in SEQ ID NO: 6;
(D) an oligonucleotide comprising the base sequence set forth in SEQ ID NO: 7 and a set of oligonucleotides comprising the base sequence set forth in SEQ ID NO: 8;
(E) an oligonucleotide containing the base sequence set forth in SEQ ID NO: 9 and a set of oligonucleotides containing the base sequence set forth in SEQ ID NO: 10;
(F) a set of oligonucleotides containing the base sequence set forth in SEQ ID NO: 11 and an oligonucleotide containing the base sequence set forth in SEQ ID NO: 12;
(G) an oligonucleotide containing the base sequence set forth in SEQ ID NO: 13 and a set of oligonucleotides containing the base sequence set forth in SEQ ID NO: 14;
(H) an oligonucleotide comprising the base sequence set forth in SEQ ID NO: 15 and an oligonucleotide set comprising the base sequence set forth in SEQ ID NO: 16;
(I) an oligonucleotide comprising the base sequence set forth in SEQ ID NO: 17 and a set of oligonucleotides comprising the base sequence set forth in SEQ ID NO: 18;
(J) an oligonucleotide comprising the base sequence set forth in SEQ ID NO: 19 and an oligonucleotide set comprising the base sequence set forth in SEQ ID NO: 20;
(K) an oligonucleotide containing the base sequence set forth in SEQ ID NO: 21 and a set of oligonucleotides containing the base sequence set forth in SEQ ID NO: 22;
(L) an oligonucleotide comprising the base sequence set forth in SEQ ID NO: 23, a set of oligonucleotides comprising the base sequence set forth in SEQ ID NO: 24, and
(M) A set of an oligonucleotide containing the base sequence set forth in SEQ ID NO: 25 and an oligonucleotide containing the base sequence set forth in SEQ ID NO: 26.
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