JP2008237050A - 体色変異水生生物の作出方法 - Google Patents

Abstract

【課題】観賞対象として希少価値の高い体色変異水生生物を簡易且つ短期間に作出する。
【解決手段】飼育水の塩分濃度を３５‰未満に調整して水生生物を飼育し、水生生物の体色を変異させるようにした。水生生物がクマノミ類の場合には、孵化から１２時間以内に飼育水の塩分濃度を３５‰未満に調整し、この塩分濃度を少なくとも６日間維持するようにした。
【選択図】図２

Description

本発明は、体色変異水生生物の作出方法に関する。さらに詳述すると、本発明は、観賞対象として希少価値の高い体色変異水生生物を作出する方法に関する。

観賞用水生動物は愛玩用としての人気が高いだけでなく、最近では、その色彩の鮮やかさ等から、観賞用水生動物や観賞用植物を収容した水槽がインテリアとして利用されつつある。

観賞用水生動物や観賞用植物の中でも、体色が変異した個体は希少価値が高く、観賞用水生動物や観賞用植物の愛好家から珍重されるだけでなく、インテリアの素材としても非常に貴重であることから、体色変異個体を作出するニーズが常に存在している。そこで、従来は、異系統交配により得られた個体を選別、淘汰することにより、体色変異個体の作出が行われていた。

他にも、遺伝子操作によりトランスジェニック魚を得る方法（特許文献１）や、観賞魚や観賞用植物に紫外線を照射しながら飼育し、体色を調節する方法（特許文献２）が提案されている。

特表２００２−５０４８２１ 特開平８−３０８３８３

しかしながら、異系統交配や個体の選別、淘汰には熟練を要すると共に、体色変異個体を作出するまでに長期間が必要である。また、特許文献１に記載された遺伝子操作によるトランスジェニック魚の作出方法は、操作が非常に煩雑であると共に、遺伝子汚染の虞がある。さらに、特許文献２に記載された飼育方法を用いた場合、観賞魚や観賞用植物の発色状態は良好になるものの、個体の体色や模様そのものを変異させることはできない。

そこで本発明は、観賞対象として希少価値の高い体色変異水生生物を簡易且つ短期間に作出する方法を提供することを目的とする。

本願発明者は、カクレクマノミを対象とした飼育試験を積み重ねた結果、海水（塩分濃度３５‰）よりも塩分濃度を低濃度とした飼育水を用いることで、体色変異個体を高確率に作出し得ることを知見した。この結果から、水生生物全般について、飼育水の塩分濃度を海水の塩分濃度よりも低濃度とすることで、体色変異個体を高確率に作出し得る可能性が導かれることを知見し、本願発明に至った。

かかる知見に基づく本発明の体色変異水生生物の作出方法は、飼育水の塩分濃度を３５‰未満に調整して水生生物を飼育し、水生生物の体色を変異させるようにしている。

このように、飼育水の塩分濃度を３５‰未満として海水の塩分濃度よりも低濃度とすることで、飼育水として海水を用いた場合と比較して体色変異個体の作出率を高めることができる。

尚、本明細書中における「体色変異」とは、水生生物の体表面の体色及び模様のうちの少なくともいずれか一方が変異していることを意味する。

ここで、水生生物をクマノミ類とした場合、孵化から１２時間以内に飼育水の塩分濃度を３５‰未満に調整し、この塩分濃度を少なくとも６日間維持することが好ましい。

本発明の体色変異水生生物の作出方法によれば、遺伝子操作等の煩雑な操作を行うことなく短期間に体色変異水生生物を作出することが可能になる。しかも、飼育水の塩分濃度を調整するという簡易な手法を用いているので、安全かつ環境負荷を与えることがなく、非常に低コストに体色変異個体の作出を行うことが可能になる。

以下、本発明の体色変異水生生物の作出方法について詳細に説明する。

本発明の体色変異水生生物の作出方法は、飼育水の塩分濃度を３５‰未満に調整して水生生物を飼育し、水生生物の体色を変異させるようにしている。以下、本実施形態では、水生生物種として海産魚であるクマノミ類を例に挙げて説明する。

本発明の対象となるクマノミ類としては、例えば、カクレクマノミ、ハマクマノミ、ハナビラクマノミ、トウアカクマノミ、セジロクマノミ、クマノミ、シロミスジ、さらには外産種のペルクラ、スパインチーク、インドトマトが挙げられるが、これらのクマノミ類に限定されるものではない。

クマノミ類を飼育する飼育水の塩分濃度の調整は、例えば、海水に淡水を添加することにより行う。

海水としては、天然の海水は勿論のこと、人工的に海水含有成分を調整してその組成を天然の海水に近づけた人工海水を用いることができる。以下、これらの海水を通常海水と呼ぶこととする。

淡水としては、河川水、井戸水、純水、蒸留水、水道水等の実質的に塩分を含有しない水が挙げられる。尚、水道水はそのまま用いてもよいが、脱塩素処理を行ってから使用に供することがより好適である。

ここで、飼育水の塩分濃度の調整は、海水に淡水を添加する方法には限定されない。例えば、人工海水を調整する段階で、塩分濃度を所望の濃度に調整するようにしてもよい。

体色が変異したクマノミ類の作出率の向上に寄与する飼育水の海水濃度は、本願発明者等の実験によれば、１００％未満とすれば良く、７５％以下とすることが好ましく、５０％以下とすることがより好ましく、２５％以下とすることがさらに好ましいことが確認されている。尚、本明細書における「％」とは「体積％」を意味している。また、海水濃度とは、海水体積と淡水体積との和に対する海水体積の割合の百分率を意味している。

本願発明者等は通常海水として、塩分濃度が３５‰の海水を用いて実験を行った。したがって、上記範囲を塩分濃度に換算すると、３５‰未満とすれば良く、２６‰以下とすることが好ましく、１８‰以下とすることがさらに好ましく、９‰以下とすることが最も好ましいということになる。即ち、飼育水の塩分濃度をこの濃度範囲に調整することで、飼育水を通常海水とした場合と比較して体色が変異したクマノミ類の作出率が向上する。

ここで、飼育水の海水濃度を２５％未満にすると、飼育水を通常海水とした場合と比較して生残率が低下する可能性があり、特に、飼育水の海水濃度を２０％以下とした場合には、飼育水を通常海水とした場合と比較して生残率が確実に低下する。したがって、クマノミ類の生残率を低下させることなく、通常海水で飼育した場合よりも体色が変異したクマノミ類の作出率を高めるためには、飼育水の海水濃度を２０％超〜１００％未満とすれば良く、２０％超〜７５％とすることが好ましく、２０％超〜５０％とすることがより好ましく、２０％超〜２５％とすることが最も好ましい。より確実には、飼育水の海水濃度を２５％〜１００％未満とすれば良く、２５％〜７５％とすることが好ましく、２５％〜５０％とすることがより好ましく、２５％とすることが最も好ましい。

上記範囲を塩分濃度に換算すると、７‰超〜３５‰未満とすれば良く、７‰超〜２６‰とすることが好ましく、７‰超〜１８‰とすることがより好ましく、７‰超〜９‰とすることが最も好ましい。そして、より確実には、９‰〜３５‰未満とすれば良く、９‰〜２６‰とすることが好ましく、９‰〜１８‰とすることがより好ましく、９‰とすることが最も好ましい。即ち、飼育水の塩分濃度をこの濃度範囲に調整することで、飼育水を通常海水とした場合と比較して体色が変異したクマノミ類の作出率が向上すると共に、通常海水で飼育した場合と同程度あるいはそれ以上の生残率が得られる。

また、孵化から１２時間以内に飼育水の塩分濃度を上記濃度とすることが好ましい。この場合には、体色が変異したクマノミ類の作出率をより確実に高めることができる。

さらに、上記の塩分濃度を少なくとも６日間維持すれば体色が変異したクマノミ類の作出率の向上の効果が認められるが、その効果をさらに確実なものとするためには、上記塩分濃度を１５日間維持することが好ましく、３０日間維持することがさらに好ましい。塩分濃度の維持を６日間未満とすると、体色が変異したクマノミ類が得られない可能性がある。

また、飼育水の海水濃度を２５％以下として１５日間以上飼育すると、通常海水で飼育した個体と比較して飼育個体の体重が低くなりやすい。したがって、通常海水で飼育した個体と同程度の大きさの体色変異クマノミ類を作出したい場合には、１５日目以降は通常海水で飼育することが好ましい。逆に、１５日目以降も飼育水の海水濃度を２５％以下とすることにより通常海水で飼育した個体と比較して飼育個体の体重が低くなること利用して、通常海水で飼育した個体よりも小型で、且つ体色が変異したクマノミ類を作出することも可能であるが、上記塩分濃度で３０日間を超えて飼育するとクマノミ類が充分に成長せず、その健康が害される虞があることから、上記塩分濃度による飼育は３０日間以内とし、それ以降は通常海水で飼育することが好ましい。

クマノミ類は、孵化直後から２週間程度経過すると、体色、体型、鰭の条数が成体と同等となり、孵化直後から３０日程度経過すると、体側の模様もはっきりと認識できるようになる。カクレクマノミの場合、孵化直後から３０日間通常海水で飼育した個体は、図１に示すように３本の白色バンドが体側に見られるようになる。

本発明の体色変異水生生物の作出方法をカクレクマノミに適用した場合には、例えば、図２及び図３に示す体色変異個体が得られる。即ち、図２に示すように、体側に見られる３本の白色バンドのうち中央のバンドが分岐したり、尾びれの付け根に位置する白色バンドの両端が尾びれの方向とは逆方向に突出した個体が得られ、図３に示すように、頭部から数えて１本目の白色バンドと２本目の白色バンドとの間に、新たな白色バンドが発生した個体が得られる。

次に、図４〜６に示す体色変異水生生物作出装置の一実施形態についてクマノミ類を対象とした場合を例に挙げて説明する。この実施形態の体色変異水生生物作出装置１７は、クマノミ類を飼育する水槽内の飼育水の塩分濃度を一定期間、一定濃度に維持する塩分濃度維持装置１８を備えるようにしている。

本実施形態の体色変異水生生物作出装置１７は、海域から分離されて構成された閉鎖循環系の装置であり、例えば海水を一定期間交換することなく或いは適量を交換しながら更に濾過・循環して飼育水を維持するものである。このような閉鎖循環系とすることにより、飼育水槽１内の飼育水の水質、温度、塩分濃度等を制御して一定の範囲内に維持できるようにしている。

図４において体色変異水生生物作出装置１７における水槽１は、円形、または矩形、六角、八角などの多角形のものが用いられている。水槽１の底部は１／１０から１／２０程度の傾斜を有し、水槽１への注水の流れにより糞や残餌などが自動的に水槽中央部に集められて水槽底部の排出口２より飼育水とともに排出されるようになっている。また、水槽１の周囲には効率よく断熱材を組み込むことにより断熱性の向上が図られている。排出口２には、飼育中のクマノミ類の迷入、吸い込みを防止するためのプラスチック製筒状をした網が取り付けられる。なお、クマノミ類の成長段階に応じて網の目合いを換えるため脱着式とすることが好ましい。

沈澱槽３は水槽１の水位調節槽を兼ねて設置されている。沈澱槽３の形状は図５に示すように円筒または下部に逆円錐形状の部分を有する円筒形状であり、水槽１からの飼育水の排水注入口１４は、前者の形状にあっては円筒体部３ａの下部、後者の形状にあっては逆円錐形部分３ｂの直上の円筒体部３ａ下部に開口し、その位置は図６に示すように円筒体の中心から外側にずれ、注入水が円筒体の内壁に沿って流れることにより渦巻き流を生じる位置となっている。この渦巻き流によって排水中の糞や残餌を積極的に沈降させ捕集することができる。沈澱槽３の最下部には沈澱捕集された糞や残餌を水とともに排出できるように排出コック１６が設けられている。沈澱物が除去された飼育水は沈澱槽３の上部側壁に設けられた出水管１５から排出される。この沈澱槽３の効果により、次に設置した浮遊懸濁物除去のためのフィルター装置４にかかる負荷を減少でき、フィルター装置４のスクリーン部分の洗浄回数を減じることができ、また、このための逆洗水の使用量も少なくできる。なお、このフィルター装置４は、水位センサーが取り付けられており、フィルター効率の低下を検知して自動逆洗を行うことができる。

バイオフィルター５では、好気性バクテリアの働きにより毒性の高い排泄物のアンモニアが亜硝酸を経由して毒性の低い硝酸に酸化される。バイオフィルター５の容器の大きさおよび必要濾材量は、水槽１で飼育されるクマノミ類の大きさと個体数により変化するため、アンモニアなどの窒素排泄量と濾材のアンモニア酸化速度に基づき決定される。この決定方法については、例えば特公平７−５５１１６号公報（特許第２０３５８８５号）の方法を用いる。また、バイオフィルター５中の前方に堰板を設け、フィルター装置４からの水が滝落ちとなるようにする。これにより、飼育水中の二酸化炭素の除去と飼育水への空気を利用した酸素補給を行う。

脱窒槽１１は、飼育水中に蓄積される硝酸を嫌気性バクテリアの働きにより飼育水１中から除去するものである。また、浮遊懸濁物除去のためのフィルター装置４とバイオフィルター５との間には、飼育水中のタンパク質などの溶存有機物を微細気泡とともに除去するための微細気泡発生装置１２が組み込まれている。微細気泡の発生には空気を用い、小型のエアーブロワー１３により給気する。

バイオフィルター５からの飼育水は循環ポンプ６により紫外線照射装置７に通流される。紫外線照射は飼育水の殺菌にとどまらず、水中の有機物の分解つまり低分子化の効果をも有する。

次に、飼育水は酸素溶入器８に送られる。ここでは、酸素発生装置９から通気される純酸素を用いて飼育水中の酸素濃度を高める。通気量の調整は、クマノミ類の生理的要求量と飼育量から算定される酸素必要量に基づいて行われ、例えば、水槽１中で酸素飽和度７０〜１００％となるように調整する。

酸素溶入器８で酸素濃度を調整された飼育水（以下、「濾過済みの飼育水」と称する）は混合槽２０を経由して水槽１へと供給されるが、一部はヒートポンプ１０に送られ、対象となるクマノミ類の生育に適した水温に調整されてから、水槽１内へ供給される。濾過済みの飼育水は混合槽２０に流入すると、そこで必要に応じて塩分濃度維持装置１８によって淡水と海水の双方、あるいはそれらのうちのいずれか一方が加えられ、塩分濃度が調整されてから水槽１内へ供給される。勿論、混合槽２０を設けずに、直接塩分濃度維持装置１８によって制御された海水と淡水あるいはこれらの混合物が濾過済みの飼育水若しくは濾過前の飼育水に混入されて塩分濃度の調整が行なわれるようにしても良い。

塩分濃度維持装置１８は水槽１内の飼育水の塩分濃度を一定期間、一定の範囲内に維持するものである。

本実施形態において一定期間とは、例えば、少なくとも孵化から１２時間以内に少なくとも６日間以上１５日間未満、または３０日間以下のことを示す。クマノミ類の水槽１内への導入は、孵化前、即ち卵の段階で行ってもよいし、孵化後に行っても良い。何れの場合にも、少なくとも孵化から１２時間以内に飼育水を体色変異個体の作出率の向上に寄与する一定の範囲内の塩分濃度とする。そして、この塩分濃度を少なくとも６日間以上１５日間未満、または３０日間以下維持し、その後、飼育水を通常海水に戻す。

また、一定の範囲内とは体色変異個体の作出率の向上に寄与する塩分濃度範囲、即ち、３５‰未満、好ましくは２６‰以下、さらに好ましくは１８‰以下、最も好ましくは９‰以下のことを示す。または、体色変異個体の作出率の向上と共に生残率を充分に確保し得る塩分濃度範囲、即ち、７‰超〜３５‰未満、好ましくは７‰超〜２６‰、より好ましくは７‰超〜１８‰、最も好ましくは７‰超〜９‰のことを示し、より確実には、９‰〜３５‰未満、好ましくは９‰〜２６‰、より好ましくは９‰〜１８‰、最も好ましくは９‰のことを示す。

塩分濃度維持装置１８は、水槽１内に設置され、水槽１内の飼育水の塩分濃度を測定する水槽用塩分濃度測定装置１９と、濾過処理済みの飼育水を水槽１に供給する直前の段階で一時的に滞留させる槽であり、必要に応じて海水や淡水が混合される混合槽２０と、この混合槽２０に海水を供給する海水供給装置２１と、混合槽２０に淡水を供給する淡水供給装置２２と、混合槽２０内に設置され、混合槽２０内の水の塩分濃度を測定する混合槽用塩分濃度測定装置２３と、塩分濃度測定装置１９、２３の測定結果に基づいて海水と淡水の混合槽２０への供給量を決定するとともに、その決定した供給量に基づいて海水供給装置２１と淡水供給装置２２の動作を制御するＣＰＵまたはＭＰＵからなる制御装置２４とを備えている。ここで、海水と淡水の混合槽２０への供給量は、海水と淡水の双方、あるいはいずれか一方が混合槽２０内において濾過済みの飼育水と混合され、その混合水が水槽１内に供給されたときに水槽１内の飼育水の塩分濃度が上記の一定の範囲内の濃度になるように制御される。また、水槽１に飼育水を貯留する当初においては、混合槽２０において予め調整された所定濃度の飼育水が供給されるようにしてもよいし、通常海水と同じ塩分濃度とした飼育水が供給された後、孵化から１２時間以内に飼育水が所定の塩分濃度となるように調整してもよい。

海水供給装置２１と淡水供給装置２２は、海水、淡水を汲み上げるポンプ２１ａ、２２ａと、開閉動作によってポンプ２１ａ、２２ａで汲み上げられた海水や淡水の混合槽２０内への供給を制御するバルブ２１ｂ、２２ｂとを備えている。バルブ２１ｂ、２２ｂのそれぞれには、例えば制御装置２４からの命令信号に応答して駆動するソレノイドが組み込まれており、ソレノイドの駆動に伴って開閉動作するように構成されている。なお、淡水としては、上水道をそのままあるいは塩素分などを除去してから供給するようにしても良い。

以上のように構成された体色変異水生生物作出装置１７においては、水槽１の飼育水は水槽１と水質・塩分濃度調整手段との間を循環する間に水質並びに塩分濃度が一定幅内に調整されて維持される。即ち、飼育水は、沈澱槽３、フィルター装置４、バイオフィルター５、循環ポンプ６、紫外線照射装置７、酸素溶入器８によって濾過されると、その濾過済みの飼育水は混合槽２０に流入する。制御装置２４は、水槽１内の飼育水の塩分濃度と混合槽２０内の水の塩分濃度とを常時監視しており、水槽１内の飼育水の塩分濃度が予め定められた範囲内にある場合、混合槽２０に海水と淡水を供給せず、水槽１内の飼育水の塩分濃度が上記の一定の範囲内になかった場合、バルブ２１ｂ、２２ｂの開閉動作を制御することにより混合槽２０に海水や淡水を適量供給する。

混合槽２０内における濾過済みの飼育水と海水による混合水、濾過済みの飼育水と淡水による混合水、あるいは濾過済みの飼育水と海水と淡水とによる混合水が水槽１内に供給されることによって水槽１内の飼育水の塩分濃度が上記の一定の範囲内に復帰すると、バルブ２１ｂ、２２ｂは制御装置２４の命令に従って閉じられる。そして、水槽１内の飼育水の塩分濃度が再び上記の一定の範囲外になった場合には混合槽２０内に海水と淡水の双方、あるいはいずれか一方が供給される。このように、槽内の飼育水の塩分濃度を監視しつつ予め定められた範囲内の塩分濃度となるように海水や淡水を適宜に混合してから水槽１内に供給することによって水槽１内の飼育水の塩分濃度は常に上記の一定の範囲内に維持される。そして、一定期間経過後は、混合槽２０内に海水のみを供給することによって槽内の飼育水の塩分濃度が通常海水と同じ塩分濃度に維持される。

このように閉鎖循環系の体色変異水生生物作出装置１７を用いて飼育水の塩分濃度を一定期間、一定範囲に維持し、そこでクマノミ類を飼育することによって、海水による飼育に比べ、体色変異個体の作出率の向上と共に海水使用量の削減を図ることができる。

なお、上述の実施形態は本発明の好適な実施の一例ではあるがこれに限定されるものではなく本発明の要旨を逸脱しない範囲において種々変形実施可能である。例えば、上述した実施形態においては、水生生物としてクマノミ類を例に挙げて説明したが、本発明の体色変異水生生物の作出方法の適用対象は、クマノミ類に限定されるものではない。

例えば、クマノミ類以外の観賞用海産生物、例えば、カニなどの甲殻類や、ヒトデ、貝類、海藻類などについても、本発明の体色変異水生生物の作出方法の適用することで、体色変異個体を作出できるものと推定される。

また、観賞用淡水生物である錦鯉、グッピー、レッドビーシュリンプ、水草類などについても、通常飼育水（淡水）よりも塩分濃度を高めて上記濃度範囲に調整した飼育水を用いることで、体色変異個体を作出できるものと推定される。

さらに、観賞用水生生物に限らず、従来観賞用水生生物としての価値が認められていなかった水生生物の体色を変異させることによって、観賞用水生生物としての価値を付与することも可能であると推定される。

また、上述した実施形態においては、塩分濃度維持装置１８を用いることによって水槽１内の飼育水の塩分濃度を一定の範囲内に維持するようにしているがこれは一例に過ぎない。例えば、海水と淡水を一定の割合で混合した汽水をタンクに予め用意しておき、そのタンクに溜められている汽水を水槽１内に供給するとともに、その供給に伴って水槽１内に供給される汽水の量と同等量の水を水槽１から抜くことによって飼育水の塩分濃度を一定の範囲内に維持するようにしても良い。また、塩分濃度調整剤を水槽１に投与することによって水槽１内の飼育水の塩分濃度を一定の範囲内に維持するようにしても良い。

また、体色変異個体の作出対象としてカクレクマノミを選択した場合には、本願発明者等が先に出願した特開２００６−２７１３２１に開示された飼育方法を併用することもできる。即ち、少なくとも孵化直後から成体とほぼ同等の形態に成長するまでの期間であるカクレクマノミの初期生活段階において、カクレクマノミを飼育する飼育水または初期生活段階において与える初期飼料として用いる生物飼料の一方または双方に銅を付加することで、飼育水中の銅濃度を好適な範囲にして、カクレクマノミの生残率を向上させる飼育方法を併用することができる。飼育水中の銅濃度の範囲は０．０４〜０．３２ミリグラム／リットルであれば好ましく、より好ましくは０．０７〜０．２１ミリグラム／リットル、さらに好ましくは０．０９〜０．１６ミリグラム／リットルである。また、孵化から３６時間以内に飼育水中の銅濃度を前記濃度とし、少なくとも４８時間前記濃度を維持すれば生残率の向上の効果が認められるが、その効果をより確実なものとするためには、前記濃度を４８〜７２時間維持することが好ましい。尚、前記濃度を４８〜７２時間維持した後は飼育水に銅を添加しなくても生残率の向上は充分見込めるため、銅を添加する必要はなく、よってコストダウンや飼育にかかる手間を省くことができる。ただし、初期生活段階中（孵化から１４日間）は銅を添加し続けてもカクレクマノミの成長に何ら影響を与えるものではない。このカクレクマノミの飼育方法を本発明の体色変異個体作出方法と併用することによって、生残率を高めつつ、体色変異個体を作出することが可能になり、カクレクマノミの体色変異個体の作出効率が向上するものと推定される。

以下、実施例を挙げて本発明を説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。

（実施例１）
カクレクマノミを対象とした体色変異個体の作出実験を行った。市販の個体および本願発明者等が仔魚から育成したカクレクマノミ個体を用意し、雌雄１ペアごとにイソギンチャクを収容した水量２７０Ｌの循環濾過式水槽で飼育した。水温を２７℃に設定して、アサリや配合飼料を与えて飼育したところ、親魚は飼育槽の底および岩の表面に産卵し、産卵から８〜９日後の消灯後に孵化を開始した。孵化仔魚は飼育槽内に設置した仔魚採取ネットに水流により集めて、翌朝（孵化から１２時間後）ビニルチューブで採取し、実験に用いた。

５００ｍｌの飼育水を入れたプラスチック製のジョッキを１６個用意し、カクレクマノミの孵化直後の仔魚を各ジョッキに１５尾ずつ収容した。飼育水は、（ａ）通常海水（塩分濃度３５‰）、（ｂ）海水濃度７５％（塩分濃度２６‰）、（ｃ）海水濃度５０％（塩分濃度１７‰）、（ｄ）海水濃度２５％（塩分濃度９‰）の４種類とし、同じ飼育水あたり４グループ飼育した。尚、通常海水として天然海水を用い、これを純水で希釈することにより（ｂ）〜（ｄ）の飼育水を得た。また、飼育期間は３０日間とし、飼育開始から１５日目以降は（ｂ）〜（ｄ）の飼育水を通常海水として飼育を継続した。

飼育条件は以下の通りとした。即ち、飼育水の水温は２６．５±０．５℃に維持した。照明は１５時間点灯させ、その後９時間消灯するようにした。また、エアレーションは行わなかったが、飼育水の溶存酸素飽和度は７０％以上に維持されていた。餌として、孵化直後のブラインシュリンプ幼生を給餌した。ブラインシュリンプ幼生は以下のようにして得た後に給餌した。即ち、ブラインシュリンプ乾燥卵を海水に懸濁し、２８℃に保温し、２４時間後に孵化した幼生を、２００μｍおよび６０μｍのフィルタを用いて海水で卵殻の除去および洗浄を行った後に給餌した。給餌は毎日１回行い、給餌量は２４時間後に摂餌しきれなかったブラインシュリンプ幼生が飼育水１ｍｌあたり１個体以上残るように調整した。２４時間毎に新たな飼育水に仔魚を移し、摂餌しきれなかった古いブラインシュリンプを飼育水から取り除いた。

上記条件で飼育を行った後、生残魚を肉眼で観察し、図１に示すように体側に見られる３本の白いバンドが滑らかな横縞となっている個体を正常個体と判定し、それ以外の個体、例えば、図２及び図３に示す個体を体色変異（模様乱れ）個体と判定した。この実験は２回実施した。１回目の実験結果を表１に示し、２回目の実験結果を表２に示す。

通常海水を飼育水とした場合、表１及び表２いずれの場合も体色変異個体が作出されなかったが、塩分濃度を通常海水よりも低濃度とした飼育水を用いた場合には、いずれにおいても体色変異個体が作出されることが明らかとなった。また、体色変異個体の作出率は飼育水の塩分濃度が低下するにつれて高まる傾向が見られ、特に表１の（ｄ）の条件においては、１０尾中９尾が体色変異個体となった。以上の結果から、飼育水を通常海水よりも低塩分濃度とすることで、希少価値の高い体色変異カクレクマノミ個体が作出できることが明らかとなった。また、体色変異個体の作出率の向上に寄与する飼育水の海水濃度は、１００％未満とすればよいが、７５％以下とすることが好ましく、５０％以下とすることがより好ましく、２５％以下とすることが最も好ましいことが明らかとなった。

また、カクレクマノミ以外のクマノミ類、例えば、ハマクマノミ、ハナビラクマノミ、トウアカクマノミ、セジロクマノミ、クマノミ、シロミスジ、さらには外産種のペルクラ、スパインチーク、インドトマトなどのクマノミ類についても、上記結果が当て嵌まらないとの積極的な理由が存在しないことから、上記条件により飼育することで、体色変異個体を作出できるものと推定される。

さらに、クマノミ類以外の観賞用海産生物、例えば、カニなどの甲殻類や、ヒトデ、貝類、海藻類などについても、上記結果が当て嵌まらないとの積極的な理由が存在しないことから、上記条件により飼育することで、体色変異個体を作出できるものと推定される。

また、観賞用淡水生物である錦鯉、グッピー、レッドビーシュリンプ、水草類などについても、通常飼育水よりも塩分濃度を高めて上記濃度範囲に調整した飼育水を用いることで、体色変異個体を作出できるものと推定される。

尚、観賞用水生生物に限らず、従来観賞用水生生物としての価値が認められていなかった水生生物の体色を変異させて、観賞用水生生物としての価値を付与することも可能であると推定される。

（実施例２）
飼育水の塩分濃度の調整期間が体色変異個体の作出率に与える影響についてカクレクマノミを対象として調査した。５００ｍｌの飼育水を入れたプラスチック製のジョッキを２４個用意し、カクレクマノミの孵化直後の仔魚を各ジョッキに１５尾ずつ収容した。飼育実験は以下の条件で行った。即ち、（ａ）通常海水で３０日間飼育を対照区とし、（ｂ）海水濃度２５％の飼育水で３日間飼育した後、２７日間通常海水で飼育、（ｃ）海水濃度２５％の飼育水で６日間飼育した後、２４日間通常海水で飼育、（ｄ）海水濃度２５％の飼育水で９日間飼育した後、２１日間通常海水で飼育、（ｅ）海水濃度２５％の飼育水で１５日間飼育した後、１５日間通常海水で飼育、（ｆ）海水濃度２５％の飼育水で３０日間飼育、の６種類とし、同じ飼育条件あたり４グループ飼育した。尚、海水濃度２５％の飼育水による飼育は、孵化から１２時間後に開始した。この理由は、孵化が起こる時間が夜間の消灯後であり、仔魚の採取時に親魚に刺激を与える可能性があったからである。他の飼育条件については、実施例１と同様とした。

飼育実験終了後に生残したカクレクマノミの仔魚の体色変異個体作出率、生残率及び体重を調査した結果を表３に示す。

表３に示されるように、少なくとも６日間飼育水の海水濃度を２５％にすることで、飼育水を全期間通常海水とした場合と比較して、体色変異個体作出率を有意に高めることができることが明らかとなった。また、海水濃度２５％の飼育水での飼育期間を長くするにつれて、体色変異個体の作出率が増加する傾向が見られた。尚、（ｄ）の条件については、生残した個体数が１匹だったため、正確なデータが得られなかった。

次に、体重について検討すると、（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）と比較して（ｅ）と（ｆ）の飼育条件で得られる個体の体重が有意に少ないことが確認された。この結果から、低塩分濃度の飼育水を用いた飼育期間を１５日間以上とすると、飼育水を全期間通常海水とした場合と比較して体重が低くなる可能性があることが明らかとなった。

ここで、本実施例においては、孵化から１２時間経過時に飼育水の塩分濃度の調整を開始して生残率の飛躍的な向上が見られたことから、孵化から１２時間以内に飼育水の塩分濃度の調整を開始すれば良いということが確認された。カクレクマノミの孵化は夜間の消灯後に起こるが、本実施例の結果から、孵化直後である夜間の消灯後に飼育水の塩分濃度を調整しなくても、孵化から１２時間以内に飼育水の塩分濃度を調整すれば体色変異個体の作出率を高めることができるので、夜間の消灯後に塩分濃度を調整するといった手間がかからない。

以上の結果から、少なくとも孵化から１２時間以内に飼育水の塩分濃度の調整を開始し、この塩分濃度を少なくとも６日間、好ましくは１５日間、さらに好ましくは３０日間維持することで、カクレクマノミの体色変異個体の作出率が高まることが明らかになった。また、海水濃度２５％で１５日間以上飼育した場合、通常海水で飼育した場合と比較して体重の低減が見られることが明らかとなった。

また、カクレクマノミ以外のクマノミ類、例えば、ハマクマノミ、ハナビラクマノミ、トウアカクマノミ、セジロクマノミ、クマノミ、シロミスジ、さらには外産種のペルクラ、スパインチーク、インドトマトなどのクマノミ類についても、上記結果が当て嵌まらないとの積極的な理由が存在しないことから、上記条件により飼育することで、体色変異個体の作出率をより確実に向上させることができるものと推定される。

さらに、クマノミ類以外の水生生物、例えば、観賞用海産生物であるカニなどの甲殻類や、ヒトデ、貝類、海藻類、観賞用淡水生物である錦鯉、グッピー、レッドビーシュリンプ、水草類などについても、上記結果が当て嵌まらないとの積極的な理由が存在しないことから、成長初期段階において低塩分濃度条件下で一定期間飼育することで、体色変異個体の作出率をより確実に向上させることができるものと推定される。

（実施例３）
カクレクマノミを対象として、飼育水の塩分濃度に対する生残率の変化について検討した。市販の個体および本願発明者等が仔魚から育成したカクレクマノミ個体を用意し、雌雄１ペアごとにイソギンチャクを収容した水量２７０Ｌの循環濾過式水槽で飼育した。水温を２７℃に設定して、アサリや配合飼料を与えて飼育したところ、親魚は飼育槽の底および岩の表面に産卵し、産卵から８〜９日後の消灯後に孵化を開始した。孵化仔魚は飼育槽内に設置した仔魚採取ネットに水流により集めて、翌朝（孵化から１２時間後）ビニルチューブで採取し、実験に用いた。

５００ｍｌの飼育水を入れたプラスチック製のジョッキを２０個用意し、カクレクマノミの孵化直後の仔魚を各ジョッキに１５尾ずつ収容した。飼育水は、（ａ）通常海水（塩分濃度３５‰）、（ｂ）海水濃度７５％（塩分濃度２６‰）、（ｃ）海水濃度５０％（塩分濃度１７‰）、（ｄ）海水濃度２５％（塩分濃度９‰）、（ｅ）海水濃度２０％（塩分濃度７‰）、の５種類とし、同じ飼育水あたり４グループ飼育した。尚、通常海水として天然海水を用い、これを純水で希釈することにより（ｂ）〜（ｅ）の飼育水を得た。

実施例１と同様の飼育条件で１４日間の飼育を行い、上記５種類の飼育水について生残率を比較した。図７に比較結果を示す。図７中の◆のプロットが通常海水での孵化仔魚の生残率の経時変化を示し、■のプロットが海水濃度７５％での孵化仔魚の生残率の経時変化を示し、●のプロットが海水濃度５０％での孵化仔魚の生残率の経時変化を示し、▲のプロットが海水濃度２５％での孵化仔魚の生残率の経時変化を示し、＊のプロットが海水濃度２０％での孵化仔魚の生残率の経時変化を示す。尚、図７中の各飼育日数の生残率は、同じ飼育水を用いた４グループの平均値をとった。

図７に示される結果から、飼育水を海水濃度７５％、海水濃度５０％及び海水濃度２５％とした場合には、通常海水を飼育水として用いた場合と比較して有意に生残率が向上することが確認された。一方、飼育水を海水濃度２０％とした場合には、通常海水を飼育水として用いた場合と比較して有意に生残率が低減することが確認された。したがって、海水濃度２０％と海水濃度２５％の間に生残率が通常海水よりも高まるしきい値が存在することが明らかとなった。また、海水濃度５０％とした場合に最も生残率が高まり、海水濃度２５％とした場合よりも海水濃度７５％とした場合の方が生残率が向上することが明らかとなった。

以上の結果から、カクレクマノミの生残率を向上させるための飼育水の海水濃度は、２０％超〜１００％未満とすれば良いが、２５％〜１００％未満とすることが好ましく、２５％〜７５％とすることがより好ましく、５０％〜７５％とすることがさらに好ましく、５０％程度とすることが最も好ましいことが明らかとなった。

尚、海水濃度２０％〜２５％の間に存在するしきい値は、本実施例に示した初期生活段階におけるクマノミ類の生残率評価試験と同様の試験を行うことによって導き出すことが可能である。例えばクマノミ類の孵化仔魚を、通常海水と、海水濃度を２０％〜２５％の間の濃度とした複数の飼育水、例えば、２０％〜２５％の間で１％毎に濃度を振った飼育水にそれぞれ収容して、初期餌料を与えて飼育し、通常海水における孵化仔魚と２０％〜２５％の間の濃度とした複数の飼育水における孵化仔魚とで生残率を比較し、通常海水を飼育水とした場合と比較して生残率が高くなる最も低い海水濃度がしきい値となる。

次に、飼育実験終了後（１４日後）に生残したカクレクマノミの仔魚の生残率及び体重を調査した結果を表４に示す。表４中において、生残率並びに体重は平均値±標準偏差で示している。飼育水を海水濃度７５％、海水濃度５０％及び海水濃度２５％とした場合には、通常海水を飼育水として用いた場合と比較して有意に生残率が向上することが確認された。一方、海水濃度２０％とした場合には、通常海水を飼育水として用いた場合と比較して生残率が大幅に低減することが確認された。また、飼育水を海水濃度７５％、海水濃度５０％とした場合には、通常海水を飼育水として用いた場合とほぼ同等の体重となることが確認された。一方、飼育水を海水濃度２５％とすると、通常海水を飼育水として用いた場合と比較して有意に体重が低くなり、飼育水を海水濃度２０％とした場合には、さらに体重が低くなることが確認された。

以上の結果から、カクレクマノミの生残率の向上を図りつつ、通常海水で飼育した場合と同程度の成長率を得るための飼育水の海水濃度は、２５％超〜１００％未満であれば良いが、２５％超〜７５％とすることが好ましく、５０％〜７５％とすることがより好ましく、５０％程度とすることが最も好ましいことが明らかとなった。

（実施例４）
市販の個体および本願発明者等が仔魚から育成したハマクマノミ個体を用意し、雌雄１ペアごとにイソギンチャクを収容した水量２７０Ｌの循環濾過式水槽で飼育した。水温を２７℃に設定して、アサリや配合飼料を与えて飼育したところ、親魚は飼育槽の底および岩の表面に産卵し、産卵から８〜９日後の消灯後に孵化を開始した。孵化仔魚は飼育槽内に設置した仔魚採取ネットに水流により集めて、翌朝（孵化から１２時間後）ビニルチューブで採取し、実験に用いた。

５００ｍｌの飼育水を入れたプラスチック製のジョッキを２個用意し、飼育水を（ａ）通常海水（塩分濃度３５‰）及び（ｂ）海水濃度５０％（塩分濃度１８‰）として、（ａ）にはハマクマノミの孵化直後の仔魚を１５尾、（ｂ）にはハマクマノミの孵化直後の仔魚を１４尾収容した。尚、通常海水として天然海水を用い、これを純水で希釈することにより（ｂ）の飼育水を得た。

実施例１と同様の飼育条件で１４日間の飼育を行い、上記２種類の飼育水について生残率を比較した。図８に比較結果を示す。図８中の●のプロットが通常海水での孵化仔魚の生残率の経時変化を示し、◆のプロットが海水濃度５０％での孵化仔魚の生残率の経時変化を示す。

図８に示される結果から、飼育水を海水濃度５０％とした場合には、通常海水を飼育水として用いた場合と比較して有意に生残率が向上することが確認された。したがって、カクレクマノミだけでなく、ハマクマノミに対しても本発明の生残率の向上効果が得られることが明らかとなった。また、カクレクマノミやハマクマノミ以外のクマノミ類、例えば、ハナビラクマノミ、トウアカクマノミ、セジロクマノミ、クマノミ、シロミスジ、さらには外産種のペルクラ、スパインチーク、インドトマトなどのクマノミ類についても、上記結果が当て嵌まらないとの積極的な理由が存在しないことから、これらのクマノミ類についても、飼育水の海水濃度を上記濃度とすることで、通常海水と比較して飛躍的に高い生残率が得られるものと推定される。

（実施例５）
飼育水の塩分濃度の調整期間が生残率に与える影響について調査した。実験方法の概略について図９に示す。５００ｍｌの飼育水を入れたプラスチック製のジョッキを２０個用意し、カクレクマノミの孵化直後の仔魚を各ジョッキに１５尾ずつ収容した。飼育条件は、（ａ）通常海水で１４日間飼育を対照区とし、（ｂ）海水濃度５０％の飼育水で２日間飼育した後、１２日間通常海水で飼育、（ｃ）海水濃度５０％の飼育水で４日間飼育した後、１０日間通常海水で飼育、（ｄ）海水濃度５０％の飼育水で８日間飼育した後、６日間通常海水で飼育、（ｅ）海水濃度５０％の飼育水で１４日間飼育し、１４日後の生残率と体重を調査した。尚、同じ飼育水あたり４グループ飼育した。また、（ａ）と（ｅ）については、１４日目以降も飼育を継続し、３０日後における生残率と体重を調査した。尚、海水濃度５０％の飼育水による飼育は、孵化から１２時間後に開始した。この理由は、孵化が起こる時間が夜間の消灯後であり、仔魚の採取時に親魚に刺激を与える可能性があったからである。

飼育水以外の飼育条件については実施例１と同様の飼育条件として飼育を行った。飼育実験終了後（１４日後、３０日後）に生残したカクレクマノミの仔魚の生残率及び体重を調査した結果を表５に示す。表５中において、生残率並びに体重は平均値±標準偏差で示している。また、（ａ）と（ｅ）について、１４日後の体重は、体重の計測により稚魚が死亡してしまうことにより、３０日後の正確な生残率が得られなくなることから、実施例３により得られた結果を引用した。

表５の（ｂ）に示されるように、海水濃度５０％の飼育水で２日間飼育した後、１２日間通常海水で飼育した場合、（ａ）の通常海水で１４日間飼育と比較して生残率が向上することが確認された。また、表５の（ｃ）に示されるように、海水濃度５０％の飼育水で４日間飼育した後、１０日間通常海水で飼育した場合、（ａ）の通常海水で１４日間飼育と比較して生残率が飛躍的に向上することが確認された。尚、表５の（ｄ）、（ｅ）については、（ｃ）の生残率と比較してほとんど差が見られなかった。また、（ｅ）について、海水濃度５０％の飼育水で３０日間飼育した場合であっても、（ｃ）の生残率と比較してほとんど差が見られなかった。したがって、低塩分濃度の飼育水を用いた飼育期間は、２日間とすることで生残率向上の効果が見られ、４日間とすることで生残率向上の効果が飛躍的に高まることが明らかとなった。また、低塩分濃度の飼育水を用いた飼育期間を６日間、８日間、１４日間、３０日間とした場合、低塩分濃度の飼育水を用いた飼育期間を４日間とした場合の生残率とほとんど差が見られなかった。

次に、体重について検討すると、１４日後の体重については、（ａ）〜（ｅ）間で有意差が見られなかったが、３０日後の体重については、（ａ）と比較して（ｅ）の方が体重が低いことが確認された。この結果から、低塩分濃度の飼育水を用いた飼育期間を３０日とすると、飼育水を全期間通常海水とした場合と比較して体重が低くなる可能性があることが明らかになり、低塩分濃度の飼育水を用いた飼育期間は長くても１４日間、即ち、初期生活段階のみで行うことが好適であることが明らかとなった。

ここで、本実施例においては、孵化から１２時間経過時に飼育水の塩分濃度の調整を開始して生残率の飛躍的な向上が見られたことから、孵化から１２時間以内に飼育水の塩分濃度の調整を開始すれば良いということが確認された。しかしながら、孵化から１２時間以内ではなく、孵化から３６時間以内に飼育水の塩分濃度を調整してもよい。即ち、実施例３では、孵化から３６時間経過時（飼育期間１日目）では通常海水を用いた場合であっても大幅な生残率の低下は見られていない。一方、６０時間経過時（飼育期間２日目）では通常海水を用いた場合には生残率が大幅に低下してしまう。したがって、飼育水の塩分濃度の調整は孵化から３６時間以内に行えばよく、１２時間以内に行うことが好ましいと言える。カクレクマノミの孵化は夜間の消灯後に起こるが、本実施例の結果から、孵化直後である夜間の消灯後に飼育水の塩分濃度を調整しなくても、孵化から３６時間以内、好ましくは１２時間以内に飼育水の塩分濃度を調整すれば生残率向上の効果は得られるので、夜間の消灯後に塩分濃度を調整するといった手間がかからない。

以上の結果から、少なくとも孵化から３６時間以内、好ましくは１２時間以内に飼育水の塩分濃度の調整を開始し、この塩分濃度を少なくとも２日間、好ましくは４日間維持することで、初期生活段階におけるカクレクマノミの生残率が飛躍的に向上することが明らかとなった。また、海水濃度５０％で３０日間飼育した場合、通常海水で飼育した場合と比較して体重の低減が見られたことから、飼育水の塩分濃度の調整は、１４日間、即ち、カクレクマノミの初期生活段階の期間のみで行うことが好ましいことがわかった。また、カクレクマノミ以外のクマノミ類、例えば、ハマクマノミ、ハナビラクマノミ、トオアカクマノミ、セジロクマノミなどのクマノミ類についても、上記結果が当て嵌まらないとの積極的な理由が存在しないことから、これらのクマノミ類についても、上記条件を適用することで、飛躍的に高い生残率が得られるものと推定される。

カクレクマノミの通常個体を示す図である。 カクレクマノミの体色変異個体の一例を示す図である。 カクレクマノミの体色変異個体の他の例を示す図である。 体色変異水生生物作出装置の一実施形態を示す構成図である。 体色変異水生生物作出装置の沈殿槽の側面概略図である。 体色変異水生生物作出装置の沈殿槽の横断面概略図である。 塩分濃度を各種調整した飼育水中でのカクレクマノミの初期生活段階の生残率の経時変化を示すグラフである。 塩分濃度を各種調整した飼育水中でのハマクマノミの初期生活段階の生残率の経時変化を示すグラフである。 飼育水の塩分濃度の調整期間が生残率に与える影響について調査した実験方法の概略を示す図である。

Claims (2)

1. 飼育水の塩分濃度を３５‰未満に調整して水生生物を飼育し、前記水生生物の体色を変異させることを特徴とする体色変異水生生物の作出方法。
2. 前記水生生物がクマノミ類であり、孵化から１２時間以内に飼育水の塩分濃度を３５‰未満に調整し、この塩分濃度を少なくとも６日間維持する請求項１に記載の体色変異水生生物の作出方法。