JP2008133233A - Wnt5a産生促進剤、養毛剤 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】リナロールオキシド、フェニルエチルアルコール、アンスラニル酸メチルから選択される1種又は2種以上を有効成分とするWnt5a産生促進剤。また、リナロールオキシド、フェニルエチルアルコール、アンスラニル酸メチルから選択される1種又は2種以上のWnt5a産生促進剤を有効成分とする養毛剤。
【選択図】図1
Description
リアルタイムPCRを用いてWnt5aの細胞からの分泌促進効果の評価を行った。
ヒト毛乳頭細胞(hDPC,東洋紡社製)は、10%FBS含有DMEMを用いて維持培養した。
五代目ヒト毛乳頭細胞(hDPC)を6穴プレートに1%FBS含有DMEMを用いて播種し、一晩培養した。サンプル非添加/添加培地と交換し、さらに24時間培養した。培養終了後、培地を除去し、PBS(−)で洗浄後、ISOGEN試薬(WAKO社製)を用いて全てのRNA(総RNA)を抽出した。各総RNA 1250ngをTaKaRaRT−PCRkit(TaKaRa社製)を用い、添付のプロトコルに従って全量25μlの反応系でFirst Strand cDNA合成を行った。この反応液を使用し、リアルタイムPCRを行った。
Wnt5a mRNA由来のcDNAは配列番号1および2のプライマー(それぞれ、Wnt5aの621〜640および762〜780の塩基配列、表3)を使用して、サイバーグリーン(SYBR−Green)法によるリアルタイムPCRで測定した。このときの試料問の誤差補正のために、GAPDH(グリセリルアルデヒド−3−リン酸 デヒドロゲナーゼ)mRNA由来のcDNAを配列番号3および4のプライマー(それぞれ、GAPDHの502〜522および629〜648の塩基配列)を使用したサイバーグリーン法によるリアルタイムPCRの測定も行った。
Wnt5a:プライマー
配列番号1 CAA GGG CTC CTA CGA GAG TG
配列番号2 CAG CCA GCA TGT CTT CAG G
GAPDH:プライマー
配列番号3 TTT GGT ATC GTG GAA GGA CTC
配列番号4 GAG GCA GGG ATG ATG TTC TG
同一の試料毎に3本の反応ウェルを使用して、リアルタイムPCR反応1反応ウェル当たり、総RNA 100ngに相当する分量を投入して鋳型とした。反応1ウェル当たり、6pmolずつのプライマー、最終濃度1倍のSYBR Green PCR MasterMix(App1ied Biosystems社製)を加えた。リアルタイムPCRは、ABI PRISM 7500 Fast Sequence Detection System(Applied Biosystems社製)を使用してサイバーグリーン法の標準的方法(95℃15分、95℃15秒、60℃1分×45サイクル、その後解離曲線を描くために95℃まで緩やかに上昇)にて行った。なお、プライマー非添加の反応で増幅が検出されないことを確認すると同時に、解離曲線のパターンから、対照配列以外の増幅反応が発生していないことを毎回確認した。測定後、倍数増幅の算出が可能なように演算開始サイクル数および演算終了サイクル数を設定し、倍数増幅範囲における増幅率であるR値を求めた。各試料については3ウェルの反応それぞれについて、増幅が一定量に到達するに要したサイクル数をCT値として求め、1/(RCT)値を求めることによりcDNA量の割合を算出した。その平均およびSD値を求めた後、サンプル非添加時及び添加時におけるGAPDH cDNAとWnt5a cDNAの比を求め、非添加時の値を100とした相対値をWnt5a mRNA平均発現率として、表1、図1に示した。
(1)エタノール 20.0(質量%)
(2)ポリオキシエチレン(60E.O.)硬化ヒマシ油 1.0
(3)ジプロピレングリコール 5.0
(4)1,3-ブチレングリコール 10.0
(5)パラオキシ安息香酸メチル 0.1
(6)リナロールオキシド 0.1
(7)フェニルエチルアルコール 0.1
(8)精製水 63.7
製法:(1)〜(7)を(8)に順次添加して溶解する。
(1)セタノール 1.0(質量%)
(2)ミツロウ 0.5
(3)ワセリン 2.0
(4)スクワラン 6.0
(5)ジメチルポリシロキサン 2.0
(6)ポリオキシエチレン(20E.O.)ソルビタン
モノステアリン酸エステル 1.0
(7)グリセリルモノステアリン酸エステル 1.0
(8)グリセリン 4.0
(9)1,3-ブチレングリコール 4.0
(10)パラオキシ安息香酸メチル 0.1
(11)精製水 67.2
(12)カルボキシビニルポリマー(1.0質量%水溶液)10.0
(13)水酸化カリウム(10.0質量溶液) 1.0
(14)アンスラニル酸メチル 0.1
(15)リモネン 0.1
製法:(1)〜(7)の油相成分を混合し、加熱溶解して75℃とする。一方、(8)〜(11)の水相成分を混合,溶解して75℃とする。これに前記油相を加えて予備乳化した後、(12)を添加してホモミキサーにて均一に乳化し、次いで(13)を加えて増粘させた後冷却し、40℃で(14)〜(15)を添加,混合する。
(1)ジプロピレングリコール 10.0(質量%)
(2)カルボキシビニルポリマー 0.5
(3)水酸化カリウム(10.0質量%水溶液) 1.0
(4)パラオキシ安息香酸メチル 0.1
(5)リナロールオキシド 0.1
(6)フェニルエチルアルコール 0.1
(7)アンスラニル酸メチル 0.1
(8)精製水 88.1
製法:(8)に(2)を均一に溶解した後、(1)に(4)〜(7)を溶解して添加し、次いで(3)を加えて増粘させる。
(1)アルキルエーテル硫酸ナトリウム 18.0(質量%)
(2)ヤシ油脂肪酸ジエタノールアミド 2.0
(3)リナロールオキシド 0.1
(4)フェニルエチルアルコール 0.1
(5)アンスラニル酸メチル 0.1
(6)精製水 79.4
製法;(1)〜(5)を順次(6)に添加し、均一に混合,溶解させる。
(1)セタノール 2.0(質量%)
(2)塩化ステアリルトリメチルアンモニウム 2.0
(3)シリコーン油 3.0
(4)ポリオキシエチレンオレイルエーテル(10E.O.) 1.0
(5)グリセリン 3.0
(6)リナロールオキシド 0.1
(7)フェニルエチルアルコール 0.1
(8)アンスラニル酸メチル 0.1
(9)精製水 88.4
製法;(9)に(5)を加え、70℃に加熱する。一方(1)〜(4)を混合,溶解し、70℃に加熱する。この油相を撹拌しながら先に調製した水相に徐々に加えて予備乳化し、ホモミキサーを加えて均一とした後冷却し、40℃にて(6)〜(8)を添加する。
Claims (2)
- リナロールオキシド、フェニルエチルアルコール、アンスラニル酸メチルから選択される1種又は2種以上を有効成分とする、Wnt5a産生促進剤。
- 請求項1に記載のWnt5a産生促進剤を有効成分とする、養毛剤。
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JP2006321342A JP2008133233A (ja) | 2006-11-29 | 2006-11-29 | Wnt5a産生促進剤、養毛剤 |
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Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2017516457A (ja) * | 2014-03-26 | 2017-06-22 | ヘルムホルツ・ツェントルム・ミュンヒェン・ドイチェス・フォルシュンクスツェントルム・フューア・ゲズントハイト・ウント・ウムベルト(ゲーエムベーハー)Helmholtz Zentrum Muenchen Deutsches Forschungszentrum fuer Gesundheit und Umwelt (GmbH) | Flattop(Fltp)はβ細胞成熟についての新規のバイオマーカーである |
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2006
- 2006-11-29 JP JP2006321342A patent/JP2008133233A/ja active Pending
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