JP2008127312A

JP2008127312A - 抗菌剤

Info

Publication number: JP2008127312A
Application number: JP2006312672A
Authority: JP
Inventors: Hisatoyo Kato; 久豊加藤; Shuhei Yamaguchi; 修平山口; Junichi Masuda; 順一増田
Original assignee: Toagosei Co Ltd
Current assignee: Toagosei Co Ltd
Priority date: 2006-11-20
Filing date: 2006-11-20
Publication date: 2008-06-05

Abstract

【課題】
本発明の目的は、多種類の微生物に対して有効な優れた抗菌剤を提供することである。
【解決手段】
本発明者等は、上記課題を解決するため鋭意研究を行った結果、下記一般式（１）で示される化合物が優れた抗菌活性を有していることを見出し、本発明を完成した。
【化１】

（式（１）において、Ｒ¹は、炭素数１〜１８の分岐を有してもよいアルキル基を示し、Ｒ²は水素原子、炭素数１〜４のアルキル基又はフェノール性水酸基の保護基を示す。）
【選択図】なし

Description

本発明は、食品、医薬品、医薬部外品等の分野で有用なフラン化合物を含む抗菌剤に関する。

食品、医薬品や化粧品などの分野で、細菌や真菌（カビ）の有害微生物による種々な感染症の予防や治療、医療用具の滅菌、食品・化粧品工場などの無菌性が要求される場所の殺菌・消毒、製品の品質低下、劣化や腐敗など、有害微生物の繁殖や増殖を制御する技術は、生活環境の多様化と生活意識の変化に伴ってそのニーズが広がり、急速な進歩を遂げている。
有害微生物の制御方法には、紫外線やγ線などを使う方法、加熱やろ過技術などを使った、いわゆる物理的な方法や、種々な抗菌・抗カビ剤、防腐剤を使用する化学的な方法が、従来から行われている。例えば、医薬品として、あるいは医薬品や化粧品などの防腐剤として、ソルビン酸、デヒドロ酢酸及びその塩、安息香酸及びその塩、パラオキシ安息香酸エステル誘導体（パラベン）、イソプロピルメチルフェノール、フェノキシエタノール、塩化ベンザルコニウム等の第４アンモニウム類、塩酸アルキルアミノエチルグリシン、塩化ステアリルヒドロキシエチルベタインナトリウム等の両面界面活性剤、感光素、ヨウ素などが挙げらる。

しかしながら、上記のような防腐剤は安全性の点で問題があるため、添加量や対象となる製品に制限があり、実際に有効な抗菌活性を示す量を配合できないことも多い。例えばパラベンは、皮膚刺激性や感作性の問題から、化粧品などへの配合量が１．０％に定められており、さらには環境ホルモン作用を示すとの指摘もある（例えば非特許文献１及び２）。
また、近年の安全性指向の高まりから、より安全性の高い新規な抗菌剤及び抗カビ剤の研究開発や、抗菌活性の効力を高めることで使用量を減らすなどの試みが数々行われている（例えば特許文献１〜５）。しかしながら、十分な抗菌活性や防腐力を得るのは難しく、なかでも真菌に対する防腐力を高めることは困難である。
有力な抗カビ活性を持つ抗菌剤として、カワラヨモギ（ＡｒｔｅｍｉｓｉａｃａｐｐｉｌｌａｒｉｓＴｈｕｎｂ．）から抽出されるカピリンが挙げられるが（例えば非特許文献３）、特異な構造を有する物質であるため、安価に安定的に供給することは難しい。
このように、抗菌・抗カビ剤による有害微生物の制御は、衣食住をはじめとする生活関連分野から、プラスチックス製品や電子部品などの産業関連分野においても、きわめて広範囲にわたって応用展開されながら、より有効で安全な抗菌剤・抗カビ剤の開発が望まれている。

特開平６−７３３７２号公報（特許請求の範囲）特開平１１−３２２５９１号公報（特許請求の範囲）特開平１１−３１０５０６号公報（特許請求の範囲）特開平１０−５３５１０号公報（特許請求の範囲）特開２００４−３５２６８８号公報（特許請求の範囲）厚生省、「第１２回内分泌かく乱物質の健康影響に関する討論会」議事録、ｐ．２７−２８大石眞之、「パラベンの雄ラット性腺系への影響」、環境ホルモン学会第3回研究発表会要旨集、２０００年、ｐ．２７９大嶋悟士、他３名、「カワラヨモギの抗黴作用と化粧品用抗菌剤への応用」、ＦＲＡＧＲＡＮＣＥＪＯＵＲＮＡＬ、２００２年、ｐ．６７−７１

本発明の目的は、以上のような状況をふまえ、多種類の微生物に対して有効な優れた抗菌剤を提供することである。

本発明者等は、上記課題を解決するため鋭意研究を行った結果、下記一般式（１）で示される化合物が優れた抗菌活性を有していることを見出し、本発明を完成した。

式（１）において、Ｒ¹は、炭素数１〜１８の分岐を有してもよいアルキル基を示し、Ｒ²は水素原子、炭素数１〜４のアルキル基又はフェノール性水酸基の保護基を示す。

本発明の一般式（１）で表わされる化合物は優れた抗菌活性を有しており、食品、医薬品、医薬部外品及び化粧品等の分野に利用することができる。

本発明において、一般式（１）で示される化合物のＲ¹は炭素数１〜１８のアルキル基であり、当該アルキル基は分岐を有するもの又は有しないもののいずれであってもよい。かかるアルキル基の具体例としては、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、イソブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、ヘプチル基、オクチル基、２−エチルへキシル基、ノニル基、デシル基、ラウリル基、及びステアリル基等が挙げられる。より好ましいアルキル基は、直鎖アルキル基であり、具体的にはメチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、へプチル基、オクチル基、ノニル基、及びデシル基が挙げられる。

本発明において、一般式（１）のＲ²は水素原子、炭素数１〜４のアルキル基又はフェノール性水酸基の保護基である。このＲ²の炭素数１〜４のアルキル基としては、メチル基、エチル基及びプロピル基が挙げられる。またこのＲ²のフェノール性水酸基の保護基としては、メトキシメチル基、テトラヒドロピラニル基、ベンジル基及び４−メトキシベンジル基等のエーテル系の保護基、トリメチルシリル基及びｔ−ブチルジメチルシリル基等のシリル系の保護基、並びにアセチル基、プロピオニル基、ブチロイル基、イソブチロイル基、ピバロイル基、ベンゾイル基及びトリオイル基等のエステル系の保護基等が挙げられ、好ましくはエステル系の保護基である。一般式（１）のＲ²としてはメチル基又はエチル基が好ましく、更に好ましくはメチル基である。

本発明において、一般式（１）のフェノールは、フェノール性水酸基の保護基が結合していても良い。このフェノール性水酸基の保護基としては、上記記載のものが例示できる。

○一般式（１）で表される化合物の合成について
一般式（１）で表わされる化合物は、例えば特開２００４−３１５４９８号に記載の方法に準じて製造することができる。

本発明において、一般式（１）で表わされる化合物は、後記する実施例からも明らかなように、抗菌作用を有するため、食品、医薬品、医薬部外品や化粧品等の処方に配合して使用することができる。

本発明において、一般式（１）で表される化合物の含有量および使用量は、使用形態や使用剤型、使用の対象となる微生物の種類、それらの予想される発生時期および期間等の条件に応じて、広範囲に変えることができる。

式（１）で表される化合物は、単独で優れた抗菌・抗真菌活性を発揮するものではあるが、通常、式（１）で表される化合物を抗菌剤として使用する際には、単独で、又はこれらを組み合わせて用いる時、その濃度は抗菌剤の総量で抗菌製剤中０．００１〜１０重量％であることが好ましい。０．００１重量％未満では本発明の効果が十分得られず、１０重量％を越えると製剤上あるいはコスト的に不利である。
しかしながら特別な場合は、これらの範囲を超えるか、または下回ることも可能である。例えば他の抗菌剤や抗カビ剤との併用により、相乗効果や相加効果が認められる場合にはさらに低用量で使用できる。

本発明において、抗菌剤としての形態には特に制限はなく、粉末状、顆粒状、錠剤状、溶液状、乳濁液状、懸濁液状等、任意の形態で使用することができる。式（１）化合物を、適宜固体又は液体に担持させて使用することも、また必要に応じて界面活性剤等の他の成分を配合して、エマルジョン、水和剤、粒状材、粉末、スプレー及びエアゾール剤等としても使用できる。さらに抗菌剤の形態に応じて通常の有効基剤を用いてもよく、例えば、トラネキサム酸、グリチルリチン酸ジカリウム、ビタミンＥ、アズレンなどの薬剤やその他界面活性剤、溶剤、ｐＨ調整剤、防腐剤、甘味剤、香料、粘結剤、研磨剤等を配合することもできる。
たとえば、液状の形態で一液製剤化して用いる場合、一液製剤化する方法には特に制限はなく、溶媒に溶解して一液製剤化することができ、水に懸濁して一液製剤化することもできる。

式（１）化合物を溶媒に溶解して一液製剤化する場合、使用する溶媒としては、殺菌または防腐の対象物が水系の場合には、有効成分の溶解、分散性を考慮して水または親水性有機溶媒を用いることが好ましい。親水性有機溶媒としては、たとえば、ジメチルホルムアミド等のアミド類、エチレングリコール、プロピレングリコール、ジエチレングリコール、ジプロピレングリコール等のグリコール類、メチルセロソルブ、フェニルセロソルブ、ジエチレングリコールモノメチルエーテル、ジエチレングリコールモノエチルエーテル、ジプロピレングリコールモノメチルエーテル等のグリコールエーテル類、メチルアセテート、エチルアセテート、３−メトキシブチルアセテート、２−メトキシエチルアセテート、２−エトキシエチルアセテート、プロピレンカーボネート等のエステル類、炭素数８以下のアルコール類等を挙げることができる。

式（１）化合物を水に懸濁して一液製剤化する場合、増粘剤としてキサンタンガム、ラムザンガム、グアーガム等を、分散剤としてノニオン界面活性剤、アニオン界面活性剤、カチオン界面活性剤、両性界面活性剤等を用いることができる。また、水懸濁剤とするために、ボールミル、アトライター等を用いて湿式粉砕することができる。

殺菌または防腐の対象物が、重油スラッジ、切削油、油性塗料等の油系の場合、重油、灯油、スピンドル油等の炭化水素溶媒を用いて一液製剤化することができる。炭化水素溶媒を用いて一液製剤する際には、ノニオン界面活性剤、アニオン界面活性剤、カチオン界面活性剤、両性界面活性剤等を用いることもできる。

＜実施例＞
以下、実施例により本発明を詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。なお、Ｔｓはｐ−トルエンスルホニル基を示す。

＜合成例１＞化合物６の合成
○化合物２の合成
下記式（２）で表される化合物１を出発原料として下記式（３）で表される化合物２を合成した。

テトラヒドロフラン３５０ｍＬに１４．４ｇ（７９．９ｍｍｏｌ）の化合物１、トリエチルアミン２２．３ｍＬ（１６０ｍｍｏｌ）及びＮ，Ｎ−ジメチルアミノピリジ９７６ｍｇ（７．９９ｍｍｏｌ）を溶かし、氷冷下でピバロイルクロリド１９．７ｍＬ（１６０ｍｍｏｌ）を滴下した。そして室温で１６時間攪拌後、飽和食塩水１００ｍＬで２回洗浄した。有機相を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、濃縮した。

つぎに、得られた残渣をテトラヒドロフラン２７０ｍＬ及びメタノール９０ｍＬに溶かし、ｐ−トルエンスルフィン酸ナトリウム１５．７ｇ（８７．９ｍｍｏｌ）及びテトラキストリフェニルホスフィンパラジウム（０）９２３ｍｇ（０．７９９ｍｍｏｌ）を加えて４時間還流した。反応後、蒸留水９０ｍＬを加えて攪拌した後、４℃で放置した。そして生成した結晶を濾別し回収した。濾液を濃縮した後、酢酸エチルエステル２００ｍＬで抽出し、有機相を蒸留水１００ｍＬで洗浄した。有機相を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、濃縮し、酢酸エチルエステル−ヘキサン混合溶媒から再結晶を行った。得られた結晶を前述の結晶とあわせ、黄色結晶性の化合物を２０．３ｇ（収率６３％）得た。

本品の重クロロホルム中で測定した¹Ｈ−ＮＭＲスペクトルのケミカルシフト値は、1.36(9H, s), 2.44(3H, s), 3.80(3H, s), 3.93(2H, d), 6.06(1H, dt), 6.33(1H, d), 6.83-6.94(3H, m), 7.33(2H, d), 7.75(2H, d)であった。また、赤外線吸収スペクトル（KBrペレット法）で吸収があった波数(cm^-1)は、2980, 1747, 1600, 1508, 1480, 1465, 1420, 1399, 1343, 1314, 1304, 1289, 1269であった。さらに、ＣＨＮ元素分析の結果は、炭素65.65%、水素6.51%であった。
以上の分析により、得られた化合物が化合物２であることを確認した。

○化合物３の合成
続いて化合物２を１−ヘプタナールと反応させることにより、下記式（４）で表される化合物３を合成した。

テトラヒドロフラン５０ｍＬ及び１，３−ジメチル−２−イミダゾリノン１０ｍＬの混合溶媒に４．４５ｇ（１１．４ｍｍｏｌ）の化合物２を溶かし、ドライアイス／アセトンで−７８℃に冷却した。この溶液に、１．６Ｍのｔ−ブチルリチウム／ペンタン溶液７．４ｍＬ（１１．８ｍｍｏｌ）を滴下した。この反応液を同温度で５分間攪拌後、１−ヘプタナール１．６ｍＬ（１１．５ｍｍｏｌ）を滴下した。滴下後、同温度で１０分間攪拌した後、徐々に昇温した。反応溶液の温度が−３０℃になったところで、クエン酸１ｇを含むメタノール２ｍＬ溶液を加えて反応を停止させた。この反応混合物に飽和食塩水６０ｍＬ、蒸留水２０ｍＬ、及び酢酸エチルエステル２０ｍＬを加えて攪拌後、有機相を分取した。水層を酢酸エチルエステル２０ｍＬで抽出し、合せた有機相を無水硫酸マグネシウムで乾燥した。有機相から溶媒を留去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによる精製を行い、淡黄色の高粘度液状の化合物を４．１５ｇ（７２％）得た。

本品の重クロロホルム中で測定した¹Ｈ−ＮＭＲスペクトルのケミカルシフト値は、0.84-0.87(3H, m), 1.19-1.36(19H, m), 2.42(3H, s), 3.57(1H, d), 3.81(3H, s), 4.50-4.61(1H, m), 5.72(1H, dd), 6.18(1H, d), 6.29(1H, dd), 6.79(1H, d), 6.88(1H, s), 6.91(1H, d), 7.31(2H, d), 7.71(2H, d)であった。また、赤外線吸収スペクトル（KBrペレット法）で吸収があった波数(cm^-1)は、3510, 2933, 2337, 1755, 1508, 1268であった。さらに、ＣＨＮ元素分析の結果は、炭素67.41%、水素7.80%であつた。
以上の分析により、得られた化合物が化合物３であることを確認した。

○化合物４の合成
続いて化合物３をフェニルセレニルクロリドと反応させ環化し、下記式（５）で表される化合物４を合成した。

アセトニトリル５０ｍＬに３．４３ｇ（６．７１ｍｍｏｌ）の化合物３を溶かし、これにモレキュラーシーブス３Ａ１ｇ、及びフェニルセレニルクロリド１．３５ｇ（７．０５ｍｍｏｌ）を加え、室温で２．５時間攪拌した。この反応混合物を酢酸エチルエステル５０ｍＬで希釈し、飽和食塩水５０ｍＬにて２回洗浄し、得られた有機相を無水硫酸マグネシウムで乾燥した。有機相から溶媒を留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、淡黄色の高粘度液状の化合物を４．１４ｇ（収率９２％）得た。

本品の重クロロホルム中で測定した¹Ｈ−ＮＭＲスペクトルのケミカルシフト値は、0.84-0.89(3H, m), 1.24-1.38(19H, m), 2.36(3H, s), 3.51(1H, dd), 3.72(1H, dd), 3.86(3H, s), 3.92-3.97(1H, m), 4.67(1H, d), 6.89-7.55(12H, m)であった。また、赤外線吸収スペクトル（KBrペレット法）で吸収があった波数(cm^-1)は、2932, 1755, 1508, 1464, 1274であった。さらに、質量分析の結果は、Ｍ＋＝６７３であった。
以上の分析により、得られた化合物が化合物４であることを確認した。

○化合物５の合成
続いて化合物４を酸化し、下記式（６）で表される化合物５を調製した。

ジクロロメタン１００ｍＬに４．２９ｇ（６．３６ｍｍｏｌ）の化合物４を溶解した。これに対して、氷冷下、あらかじめ調製しておいたｍ−クロロ過安息香酸１．６５ｇ（９．５８ｍｍｏｌ）をジクロロメタン２５ｍＬに溶かした溶液を滴下した。反応液を同温で３０分間攪拌後、１０％チオ硫酸ナトリウム水溶液１００ｍＬ加え、反応を停止させた。反応液から有機相を分取し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。有機相から溶媒を留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、淡黄色の高粘度液状の化合物を２．８４ｇ（収率８７％）得た。

本品の重クロロホルム中で測定した¹Ｈ−ＮＭＲスペクトルのケミカルシフト値は、0.83-0.87(3H,m)、1.18-1.36(19H,m)、2.46(3H,s)、3.77(3H,s)、5.01(1H,m)、5.79(1H,d)、6.66(1H,s)、6.82(1H,d)、6.88(1H,d)、6.98(1H,d)、7.37(2H,d)、7.80(2H,d)であった。また、赤外線吸収スペクトル（KBrペレット法）で吸収があった波数(cm^-1)は、2935、1755、1599、1510、1321、1283であった。さらに、ＣＨＮ元素分析の結果は、炭素６７．６８％、水素７．４４％であった。
以上の分析により、得られた化合物が化合物５であることを確認した。

○化合物６の合成
化合物５に対して、アルコール溶媒中で水素化ナトリウムを作用させることで、一般式（１）中のＲ¹がヘキシル基及びＲ²がメチル基に相当する下記式（７）で表される化合物６を合成した。

ｔ−ブチルアルコール５０ｍＬに１．４１ｇ（２．７４ｍｍｏｌ）の化合物５を溶解した。これに対して、あらかじめ調製しておいた水素化ナトリウム５４８ｍｇ（１３．７ｍｍｏｌ）をｔ−ブチルアルコール３０ｍＬに溶かした溶液を滴下した。反応液を４０℃にて４．５時間攪拌後、１Ｍ／Ｌ塩酸を適量加え反応を停止させた。反応液から溶媒を留去した後、酢酸エチルエステル５０ｍＬを加えて抽出し、有機相を飽和食塩水２５ｍＬで２回洗浄し、有機相を無水硫酸マグネシウムで乾燥した。有機相から溶媒を留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、淡黄色の高粘度液状の化合物を５４０ｍｇ（収率７２％）得た。

本品の重クロロホルム中で測定した¹Ｈ−ＮＭＲスペクトルのケミカルシフト値は、0.88-0.91(3H,m)、1.25-1.39(8H,m)、2.66(2H,t)、3.95(3H,s)、5.59(1H,s)、6.02(1H,d)、6.39(1H,d)、6.80(1H,d)、7.13-7.16(2H,m)であった。また、赤外線吸収スペクトル（KBrペレット法）で吸収があった波数(cm^-1)は、3532、2931、1505、1254、1212であった。さらに、さらにＣＨＮ元素分析の結果は、炭素74.42%、水素8.08%であった。
以上の分析により、得られた化合物が化合物６であることを確認した。

＜合成例２＞化合物１０の合成
○化合物７の合成
化合物２とプロピオンアルデヒドを反応させ、下記式（８）で表される化合物７を合成した。

テトラヒドロフラン５０ｍＬ及び１，３−ジメチル−２−イミダゾリノン１０ｍＬの混合溶媒に４．４５ｇ（７．４５ｍｍｏｌ）の化合物２を溶かし、ドライアイス／アセトンで−７８℃に冷却した。この溶液に、１．６Ｍのｔ−ブチルリチウム／ペンタン溶液７．４ｍＬ（１１．８ｍｍｏｌ）を滴下した。更に同温度で５分間攪拌後、プロピオンアルデヒド０．８７ｍＬ（１２．１ｍｍｏｌ）を滴下した。滴下後、同温度で１０分間攪拌した後、徐々に昇温した。反応溶液の温度が−３０℃になったところで、クエン酸１ｇを含むメタノール２ｍＬ溶液を加えて反応を停止させた。この反応混合物に飽和食塩水６０ｍＬ、蒸留水２０ｍＬ及び酢酸エチルエステル２０ｍＬを加えて攪拌後、有機相を分取した。水層を酢酸エチル２０ｍＬで抽出し、合せた有機相を無水硫酸マグネシウムで乾燥した。有機相から溶媒を留去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによる精製を行い、淡黄色の高粘度液状の化合物を３．７２ｇ（収率７３％）得た。
本品の重クロロホルム中で測定した¹Ｈ−ＮＭＲスペクトルのケミカルシフト値は、0.97-1.01(3H, m),1.24-1.44(11H, m),2.43(3H, s),3.71(1H, t),3.80(3H, s), 4.30-4.32(1H, m), 5.72(1H, dd), 6.16(1H, d), 6.78-6.80(2H, m),6.93(1H, d), 7.31(2H, d), 7.71(2H, d)であった。
また、赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒペレット法）で吸収があった波数（ｃｍ^-1）は、3511, 2972, 1753, 1598, 1509, 1268, 1124であった。
さらに、ＣＨＮ元素分析の結果は、炭素６５．１９％、水素７．００％であった。
以上の分析により、得られた化合物が化合物７であることを確認した。

○化合物８の合成
続いて化合物７をフェニルセレニルクロリドと反応させ環化し、下記式（９）で表される化合物８を合成した。

アセトニトリル５０ｍＬに９．０３ｇ（１９．６ｍｍｏｌ）の化合物７を溶かし、これにモレキュラーシーブス３Ａ２ｇ及びフェニルセレニルクロリド４．３６ｇ（２２．８ｍｍｏｌ）を加え、室温で２時間攪拌した。この反応混合物を飽和食塩水１００ｍＬにて２回洗浄し、得られた有機相を無水硫酸マグネシウムで乾燥した。有機相から溶媒を留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、淡黄色の高粘度液状の化合物を１０．９ｇ（収率９０％）得た。
本品の重クロロホルム中で測定した¹Ｈ−ＮＭＲスペクトルのケミカルシフト値は、1.07-1.11(3H，ｍ), 1.24-1.38(11H，m), 2.37(3H，s), 3.50(1H, ｄd), 3.73(1H，dd), 3.79-3.89(4H, m), 4.68(1H, d), 6.87-7.55(12H, m)であった。
また、赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒペレット法）で吸収があった波数（ｃｍ^-1）は、2971, 1754, 1598, 1509. 1478, 1463, 1274, 1118であった。さらに、質量分析の結果は、Ｍ＋＝６１7であった。
以上の分析により、得られた化合物が化合物８であることを確認した。

○化合物９の合成
続いて化合物８を酸化し、下記式（１０）で表される化合物９を調製した。

ジクロロメタン２００ｍＬに９．９３ｇ（１６．１ｍｍｏｌ）の化合物８を溶解した。これに対して氷冷下、あらかじめ調製しておいたｍ−クロロ過安息香酸４．１８ｇ（２４．２ｍｍｏｌ）をジクロロメタン５０ｍＬに溶かした溶液を滴下した。更に同温で３０分間攪拌後、反応混合物に１０％チオ硫酸ナトリウム水溶液２００ｍＬを加え、反応を停止させた。この反応液から有機相を分取し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。有機相から溶媒を留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、淡黄色の高粘度液状の化合物を7．２６ｇ（収率９８％）得た。
本品の重クロロホルム中で測定した¹Ｈ−ＮＭＲスペクトルのケミカルシフト値は、0.91-0.95(3H，m), 1.24-1.38(11H，m), 2.36(3H，s), 3.78(3H，s), 4.97(1H，m), 5.79(1H，d), 6.67(1H，s), 6.83(1H，d), 6.89(1H，d), 6.98(1H，d), 7.37(2H，d), 7.80(2H，d)であった。
また、赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒペレット法）で吸収があった波数（ｃｍ^-1）は、2973, 1754, 1508, 1458, 1321, 1304, 1283であった。さらに、ＣＨＮ元素分析の結果は、炭素６５．４８％、水素６．５９％であった。
以上の分析により、得られた化合物が化合物９であることを確認した。

○化合物１０の合成
上述の合成例３で得られた化合物９に対して、アルコール溶媒中で水素化ナトリウムを作用させることで、本発明の一般式（１）中のＲ¹がエチル基及びＲ²がメチル基に相当する下記式（１１）で表される化合物１０を合成した。

すなわち、ｔ−ブチルアルコール３０ｍＬに化合物９、１．４９ｇ（３．２５ｍｍｏｌ）を溶かした。これに対して、あらかじめ調製しておいた水素化ナトリウム３９０ｍｇ（９．7５ｍｍｏｌ）をｔ−ブチルアルコール２０ｍＬに溶かした溶液を滴下した。この反応液を４０℃にて２時間攪拌後、１Ｍ／Ｌ塩酸を適量加えて反応を停止させた。反応液から溶媒を留去した後、酢酸エチルエステル１００ｍＬを加えて抽出し、有機相を飽和食塩水５０ｍＬで２回洗浄し、この有機相を無水硫酸マグネシウムで乾燥した。有機相から溶媒を留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、淡黄色の高粘度液状の化合物を４２０ｍｇ（収率５９％）得た。
本品の重クロロホルム中で測定した¹Ｈ−ＮＭＲスペクトルのケミカルシフト値は、1.24-1.29(3H，m), 2.70(2H，dd), 3.94(3H，s), 5.62(1H，s), 6.03(1H，d), 6.40(1H，d), 6.91(1H，d), 7.13-7.16(2H，m)であった。
また、赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒペレット法）で吸収があった波数（ｃｍ^-1）は、3510, 2974, 2362, 1506, 1254, 1209であった。さらに、ＣＨＮ元素分析の結果は、炭素７１．５４％、水素６．４7％であった。
以上の分析により、得られた化合物が化合物１０であることを確認した。

○抗微生物活性評価
上記の合成例で調製した、化合物６、化合物１０および比較例としてｐ−ヒドロキシ安息香酸メチル（メチルパラベン、和光純薬社製）について、試験菌の増殖を阻止するための最小濃度（ＭＩＣ）を測定した。

（１）被験試料の調製
被験試料は正確に一定量秤量し25.6mg/mlの濃度になるようにdimethylsulfoxide（ＤＭＳＯ）で溶解した。25.6mg/mlを薬剤希釈系列の1本目として順次ＤＭＳＯを用いて２倍希釈系列を作成した。

（２）試験菌株
試験に使用した各種真菌Trichophyton mentagrophytes IFO（NBRC）6124、Trichophyton rubrum IFO（NBRC）5467、Aspergillus niger NBRC6341、Aspergillus terreus NBRC6346、Aureobasidium pullulans NBRC6353、Eurotium tonophilum NBRC8157は独立行政法人製品評価技術基盤機構から分譲を受けた株を使用した。
2継代培養後27℃10日間Potato Dextrose Agar(Difco)スラントで培養した。培養後スラント表面を0.1%Tween80加生理食塩水で洗浄して分生子浮遊液を作成した。作成した浮遊液をCell strainer(40μｍ、FALCON)で濾過後生理食塩水により10⁵cell/mlに調整し接種菌液とした。
また細菌はStaphylococcus aureus 209P、Bacillus subutillis ATCC 6633、Escherichia coli NIH JC-2を使用した。継代培養後Mueller Hinton broth（Difco）で37℃24時間培養した培養液を同培地で10⁴cell/mlに調整し接種菌液とした。

（３）培養
96穴マイクロプレートの各ウェルに、上記（１）で調製した、ＤＭＳＯで作成した２倍希釈系列の各被験試料を2μｌ注入後、真菌はPotato Dextrose Agar、細菌はMueller Hinton agar（Difco）を198μｌ注入した。注入した寒天が固化後真菌は10⁵cell/ml、細菌は10⁴cell/mlの菌液を2μｌ培地表面上に接種した。発育コントロールとしては薬剤不含のウェルを設けた。
真菌は30℃で3日〜5日間、細菌は37℃24時間培養した。ＭＩＣの判定は目視で発育の認められないウェルの中で最も低い濃度をＭＩＣとした。
各試験菌に対する各化合物被験試料のＭＩＣ（μｇ/ｍｌ）を表１に示す。

化合物６、および、化合物１０は全ての試験菌に対して良好な抗菌・抗真菌活性を有してした。中でも真菌に対して強い効果を示した。

本発明のフラン化合物は優れた抗菌・抗真菌活性を有しており、食品、医薬品、医薬部外品の分野で抗菌剤又は防腐剤として、さらにプラスチック製品、紙製品、布製品、革製品等への関連分野に応用が可能である。

Claims

下記一般式（１）で表される化合物を含有することを特徴とする抗菌剤。

（式（１）において、Ｒ¹は、炭素数１〜１８の分岐を有してもよいアルキル基を示し、Ｒ²は水素原子、炭素数１〜４のアルキル基又はフェノール性水酸基の保護基を示す。）