JP2008048671A - 遺伝子検査方法及び遺伝子検査方法に使用されるキット - Google Patents
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- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
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Abstract
【課題】対象遺伝子の差異を、簡易にまたは迅速に検出する。
【解決手段】対象遺伝子ＵＣＰ１（β２、β３）に対し、「ｃａｃｔｔｇａｔｔａａａｃｔｇ」または「ｃａｃｔｃｇａｔｔａａａｃｔｇ」の塩基配列（１５ｍｅｒ乃至１９ｍｅｒ）を含むプローブ（緑発光）と「ｃａａｔｃａｇａａａｔｃｇｃｔｇｃａｃａａａａｔｇｔｃｔｔｃｃｔａｔｔａａａｔａａａａａｔ」の塩基配列（４５ｍｅｒ乃至５３ｍｅｒ）を含むプローブ（赤発光）が結合され、このプローブには発色する成分が予め混合・結合・標識されていて発色される。これが加熱されて、上記プローブが上記対象遺伝子から剥がれると、発色が低下し、この低下するときの温度の違いに基づいて、上記対象遺伝子の差異「ａａ型」「ｇｇ型」「ａｇ型」が検出される。
【選択図】図１
【解決手段】対象遺伝子ＵＣＰ１（β２、β３）に対し、「ｃａｃｔｔｇａｔｔａａａｃｔｇ」または「ｃａｃｔｃｇａｔｔａａａｃｔｇ」の塩基配列（１５ｍｅｒ乃至１９ｍｅｒ）を含むプローブ（緑発光）と「ｃａａｔｃａｇａａａｔｃｇｃｔｇｃａｃａａａａｔｇｔｃｔｔｃｃｔａｔｔａａａｔａａａａａｔ」の塩基配列（４５ｍｅｒ乃至５３ｍｅｒ）を含むプローブ（赤発光）が結合され、このプローブには発色する成分が予め混合・結合・標識されていて発色される。これが加熱されて、上記プローブが上記対象遺伝子から剥がれると、発色が低下し、この低下するときの温度の違いに基づいて、上記対象遺伝子の差異「ａａ型」「ｇｇ型」「ａｇ型」が検出される。
【選択図】図１
Description
本発明は、遺伝子検査方法及び遺伝子検査方法に使用されるキットに関し、特に対象遺伝子の差異を検出する方法に関する。
従来、対象遺伝子（ＤＮＡ）の差異を検査することが考えられてきている。このような対象遺伝子としては、例えば肥満関連遺伝子などが考えられる。このような肥満関連遺伝子は、人によって差異が認められ、この差異によって、腹の周囲に脂肪が付き易いタイプか、大腿部または尻の周囲に脂肪が付き易いタイプか、安静時代謝量（基礎代謝量）が大きく太りにくいタイプか、などがわかる。
一方、対象遺伝子（ＤＮＡ）の差異を検査するにあたって、プローブに対して発色する成分を混合・結合して蛍光標識させ、対象遺伝子（目的の変異箇所）及びその周辺にこの蛍光標識したプローブを結合（ハイブリダイゼーション。以下以上同じ）させて発色させ、この発色内容の差異によって、対象遺伝子（ＤＮＡ）の差異を検査することも考えられている。
本件発明は、上述の従来の対象遺伝子の差異の検出をさらに発展させて、対象遺伝子（ＤＮＡ。以下以上同じ）の差異を、簡易にまたは迅速に検出できるようにすることにある。
上記目的を達成するため、本発明の遺伝子検査方法は、増幅した対象遺伝子に対して、 少なくとも「ｃａｃｔｔｇａｔｔａａａｃｔｇ」または「ｃａｃｔｃｇａｔｔａａａｃｔｇ」の塩基配列（１５ｍｅｒ乃至１９ｍｅｒ）またはこれらの塩基配列のうち１つ、２つまたは３つの塩基が別の異なる塩基に置き換えられた塩基配列を含むプローブ、 及び少なくとも「ｃａａｔｃａｇａａａｔｃｇｃｔｇｃａｃａａａａｔｇｔｃｔｔｃｃｔａｔｔａａａｔａａａａａｔ」の塩基配列（４５ｍｅｒ乃至５３ｍｅｒ）またはこれらの塩基配列のうち１つ、２つまたは３つの塩基が別の異なる塩基に置き換えられた塩基配列を含むプローブ、 またはこれらのプローブの塩基配列と相補的な塩基配列、この塩基配列のうち１つ、２つまたは３つの塩基が別の異なる塩基に置き換えられた塩基配列を含むプローブ、を混合して結合させ、 これらの各プローブに対して、結合することによって発色する成分をそれぞれ結合させて発色させ、 上記混合物を加熱することによって、上記プローブを上記対象遺伝子から剥がし、これにより上記発色する成分による発色を低下させ、この低下するときの温度の違いに基づいて、上記対象遺伝子の差異を検出するようにした。
このような検査方法によれば、加熱するときの温度の違いに基づいて、上記対象遺伝子の差異を検出するから、一連の一回の温度上昇の中で差異を検出でき、対象遺伝子（ＤＮＡを含む。以下以上同じ）の差異を、簡易にまたは迅速に検出できる。
（１）本発明の遺伝子検査方法の原理
図１及び図２は、本発明の遺伝子検査方法の原理を示す。対象遺伝子ＵＣＰ１（脱共役蛋白質 Uncoupling Protein 1）、β２ＡＤＲ（β２アドレナリン受容体 β２-adrenergic receptor gene）、β３ＡＤＲ（β３アドレナリン受容体 β３-adrenergic receptor gene）に対し、緑発光する緑標識プローブと赤発光する赤標識プローブが混合され結合される。これらのプローブに事前に発色（励起光・発光・蛍光も含む。以下以上同じ）する成分が混合されて結合されており、レーザー光が照射されると、蛍光共鳴エネルギー転移によって緑及び赤の発光（蛍光）が発生する。
図１及び図２は、本発明の遺伝子検査方法の原理を示す。対象遺伝子ＵＣＰ１（脱共役蛋白質 Uncoupling Protein 1）、β２ＡＤＲ（β２アドレナリン受容体 β２-adrenergic receptor gene）、β３ＡＤＲ（β３アドレナリン受容体 β３-adrenergic receptor gene）に対し、緑発光する緑標識プローブと赤発光する赤標識プローブが混合され結合される。これらのプローブに事前に発色（励起光・発光・蛍光も含む。以下以上同じ）する成分が混合されて結合されており、レーザー光が照射されると、蛍光共鳴エネルギー転移によって緑及び赤の発光（蛍光）が発生する。
これが加熱されて、上記プローブが上記対象遺伝子から剥がれると、上記発色が低下し、この低下するときの温度の違いに基づいて、上記対象遺伝子の差異が検出される。変異が無いまたは有る配列と相補的となる塩基配列を有するプローブを用いた場合及びその他の場合、変異があれば、発色低下温度は低く、変異がなければ、発色低下温度は高く、これらの変異がヘテロ型（中間型）であれば、発色低下温度の特性は両者の中間特性となる。
対象遺伝子ＵＣＰ１であれば、「ａａ型」「ｇｇ型」「ａｇ型」が検出され、対象遺伝子β２ＡＤＲであれば、「ｃｃ型」「ｇｇ型」「ｃｇ型」が検出され、対象遺伝子β３ＡＤＲであれば、「ｔｔ型」「ｃｃ型」「ｔｃ型」が検出される。
なお、人間の染色体は、２３対４６本存在するので、上記対象遺伝子ＵＣＰ１、対象遺伝子β２ＡＤＲ、対象遺伝子β３ＡＤＲは一対ずつ存在する。この一対の対象遺伝子が両方とも変異、片方のみ変異、両方とも変異していない、の３つの状態に応じて上記３つの型が検出される。
遺伝子ＤＮＡにおいて、「アッパー」（フォーワード／センス）側とは、図１乃至図４の遺伝子ＤＮＡの二本の鎖の上側をいい、「ロワー」（リバース／アンチセンス）側とは、図１乃至図４の遺伝子ＤＮＡの二本の鎖の下側をいう。この上側の鎖は、左から右に向かって「５′−…−３′」の配列となっており、下側の鎖は、左から右に向かって「３′−…−５′」の配列となっている。
通常、プライマーは糖３′にリン酸を経由して糖５′が付くというかたちで、糖の５′から糖３′の方向に伸びていく。しかし、糖５′から少し離れた箇所で糖５′から糖３′の方向に伸び、さらにここから少し離れた箇所でまた糖５′から糖３′の方向に伸びていくというかたち、つまり後ずさりするようにして、糖の３′から糖５′の方向に伸びていくことも可能である。このような後ずさりによって後述する相補的／逆相補的なプライマーでも対象遺伝子ＤＮＡを複製・増幅することは可能である。
したがって、本件対象遺伝子ＤＮＡ、プローブ、プライマーのセットは、図３及び図４に示すように、相補的／逆相補的にそっくり置き換えることが可能であり、これらの対象遺伝子ＤＮＡ、プローブ、プライマーはこの相補的／逆相補的な両方が示されている。
「相補（的）」というのは、遺伝子ＤＮＡ、プローブ、プライマーなどの各塩基の「ａ」（アデニン）と「ｔ」（チミン）、「ｃ」（シトシン）と「ｇ」（グアニン）とを入れ換えた状態を指す。「逆」というのは、遺伝子ＤＮＡ、プローブ、プライマーなどの塩基配列の向きを逆にして、「−３′」側と、「５′−」側と入れ換える、または塩基配列部分の両端の「５′−」と「−３′」と入れ換えて「３′−」と「−５′」との形にすることをいう。「逆相補（的）」は、これらの両方をともに行うことをいう。
（２）対象遺伝子（ＤＮＡ）配列番号１〜６
図５、図６、図７は変異・差異を検出する対象遺伝子を含む塩基配列を示し、これらの塩基配列は米国ＮＣＢＩ（National Center for Biotechnology Information）のAccession No. X72861、No.J02960、No.HSU28479より引用したものである。この図５、図６、図７の対象遺伝子（ＤＮＡ）は人の遺伝子の一部の配列であって、それぞれのアクセッション（Accession）ナンバー（ヒト遺伝子）の１番目から４７２番目、１１４１番目から１５６０番目、４８１番目から９６０番目までの塩基配列（遺伝子配列、ＤＮＡ配列）である。
図５、図６、図７は変異・差異を検出する対象遺伝子を含む塩基配列を示し、これらの塩基配列は米国ＮＣＢＩ（National Center for Biotechnology Information）のAccession No. X72861、No.J02960、No.HSU28479より引用したものである。この図５、図６、図７の対象遺伝子（ＤＮＡ）は人の遺伝子の一部の配列であって、それぞれのアクセッション（Accession）ナンバー（ヒト遺伝子）の１番目から４７２番目、１１４１番目から１５６０番目、４８１番目から９６０番目までの塩基配列（遺伝子配列、ＤＮＡ配列）である。
上記のうち、上記対象遺伝子はＵＣＰ１遺伝子、β２ＡＤＲ遺伝子、β３ＡＤＲ遺伝子と呼ばれ、それぞれ２９２番目の「ａ」の塩基、１３４２番目の「ｃ」の塩基、８２７番目の「ｔ」の塩基を指す。これらの塩基が「ａ」から「ｇ」に変異すると肥満になり易く、「ｃ」から「ｇ」に変異すると肥満になり難く、「ｔ」から「ｃ」に変異すると肥満になり易くなる。本件発明の差異の検出では、これらの「ａ」から「ｇ」、「ｃ」から「ｇ」、「ｔ」から「ｃ」の変異、野生（無変異、非変異）いずれも検出される。
上記図５、図６、図７の対象遺伝子（ＤＮＡ）につき、この対象遺伝子（ＤＮＡ）と結合する相補的／逆相補的な遺伝子も本対象遺伝子に含まれる。この相補的／逆相補的な対象遺伝子は、図５、図６、図７のａ（アデニン）、ｔ（チミン）、ｃ（シトシン）、ｇ（グアニン）が、ａ→ｔ、ｔ→ａ、ｃ→ｇ、ｇ→ｃに入れ換えられ、図８、図９、図１０に示される。
上記対象遺伝子のＵＣＰ１遺伝子、β２ＡＤＲ遺伝子、β３ＡＤＲ遺伝子の相補的／逆相補的な塩基も、同様に相補的ＵＣＰ１遺伝子、相補的β２ＡＤＲ遺伝子、相補的β３ＡＤＲ遺伝子とされ、それぞれ２９２番目の「ｔ」の塩基、１３４２番目の「ｇ」の塩基、８２７番目の「ａ」の塩基が該当する。これらの塩基が「ｔ」から「ｃ」、「ｇ」から「ｃ」、「ａ」から「ｇ」に変異すると、肥満になり易いことになる。本件発明の差異の検出では、これらの「ｔ」から「ｃ」、「ｇ」から「ｃ」、「ａ」から「ｇ」の変異、野生（無変異、非変異）、いずれも検出される。
上記ＵＣＰ１遺伝子が「ａ→ｇ」に変異していると、一日あたりの安静時代謝量が所定量例えば８０〜１００ｋｃａｌほど低くなり、臀部や下腹部に脂肪が蓄積され易くなり、洋ナシ型肥満になり易くなる。上記β２ＡＤＲ遺伝子が「ｃ→ｇ」に変異していると、一日あたりの安静時代謝量が所定量例えば２００ｋｃａｌほど高くなり、痩せ易くなり、筋肉が付きにくく、バナナ型肥満になり易くなる。上記β３ＡＤＲ遺伝子が「ｔ→ｃ」に変異していると、一日あたりの安静時代謝量が所定量例えば２００ｋｃａｌほど低くなり、腹部に脂肪が蓄積され易くなり、リンゴ型肥満になり易くなる。
（３）プローブ（ＵＣＰ１）
（ＵＣＰ１ＦＩＴＣ緑標識プローブＮｏ１）配列番号７〜２４、２１７〜２３４
上記ＵＣＰ１遺伝子及びその周辺に結合（ハイブリダイゼーション）させられる一対のプローブの一方、つまりＵＣＰ１ＦＩＴＣ緑標識プローブＮｏ１の塩基配列は以下の通りである。この緑標識プローブは対象遺伝子の変異箇所及びその周辺に結合するセンサープローブである。ＦＩＴＣはフルオレセインイソシアネートを意味する。このＵＣＰ１ＦＩＴＣ緑標識プローブＮｏ１は、少なくとも「ｃａｃｔｔｇａｔｔａａａｃｔｇ」または「ｃａｃｔｃｇａｔｔａａａｃｔｇ」の塩基配列（１５ｍｅｒ乃至１９ｍｅｒ）を含むプローブである。
（ＵＣＰ１ＦＩＴＣ緑標識プローブＮｏ１）配列番号７〜２４、２１７〜２３４
上記ＵＣＰ１遺伝子及びその周辺に結合（ハイブリダイゼーション）させられる一対のプローブの一方、つまりＵＣＰ１ＦＩＴＣ緑標識プローブＮｏ１の塩基配列は以下の通りである。この緑標識プローブは対象遺伝子の変異箇所及びその周辺に結合するセンサープローブである。ＦＩＴＣはフルオレセインイソシアネートを意味する。このＵＣＰ１ＦＩＴＣ緑標識プローブＮｏ１は、少なくとも「ｃａｃｔｔｇａｔｔａａａｃｔｇ」または「ｃａｃｔｃｇａｔｔａａａｃｔｇ」の塩基配列（１５ｍｅｒ乃至１９ｍｅｒ）を含むプローブである。
「ｃａｃｔｔｇａｔｔａａａｃｔｇ」の塩基はＵＣＰ１遺伝子が変異していない場合におけるもので、「ｃａｃｔｃｇａｔｔａａａｃｔｇ」の塩基はＵＣＰ１遺伝子が変異している場合におけるものである。配列番号２１７〜２３４は配列番号７〜２４の塩基配列を相補的または逆相補的にしたものである。
５′− ｃａｃｔｔｇａｔｔａａａｃｔｇ −３′（１５ｍｅｒ）
５′− ｇｃａｃｔｔｇａｔｔａａａｃｔｇ −３′（１６ｍｅｒ）
５′−ｔｇｃａｃｔｔｇａｔｔａａａｃｔｇ −３′（１７ｍｅｒ）
５′− ｇｃａｃｔｔｇａｔｔａａａｃｔｇ −３′（１６ｍｅｒ）
５′−ｔｇｃａｃｔｔｇａｔｔａａａｃｔｇ −３′（１７ｍｅｒ）
５′− ｃａｃｔｔｇａｔｔａａａｃｔｇｔ −３′（１６ｍｅｒ）
５′− ｇｃａｃｔｔｇａｔｔａａａｃｔｇｔ −３′（１７ｍｅｒ）
５′−ｔｇｃａｃｔｔｇａｔｔａａａｃｔｇｔ −３′（１８ｍｅｒ）
５′− ｇｃａｃｔｔｇａｔｔａａａｃｔｇｔ −３′（１７ｍｅｒ）
５′−ｔｇｃａｃｔｔｇａｔｔａａａｃｔｇｔ −３′（１８ｍｅｒ）
５′− ｃａｃｔｔｇａｔｔａａａｃｔｇｔｇ−３′（１７ｍｅｒ）
５′− ｇｃａｃｔｔｇａｔｔａａａｃｔｇｔｇ−３′（１８ｍｅｒ）
５′−ｔｇｃａｃｔｔｇａｔｔａａａｃｔｇｔｇ−３′（１９ｍｅｒ）
５′− ｇｃａｃｔｔｇａｔｔａａａｃｔｇｔｇ−３′（１８ｍｅｒ）
５′−ｔｇｃａｃｔｔｇａｔｔａａａｃｔｇｔｇ−３′（１９ｍｅｒ）
５′− ｃａｃｔｃｇａｔｔａａａｃｔｇ −３′（１５ｍｅｒ）
５′− ｇｃａｃｔｃｇａｔｔａａａｃｔｇ −３′（１６ｍｅｒ）
５′−ｔｇｃａｃｔｃｇａｔｔａａａｃｔｇ −３′（１７ｍｅｒ）
５′− ｇｃａｃｔｃｇａｔｔａａａｃｔｇ −３′（１６ｍｅｒ）
５′−ｔｇｃａｃｔｃｇａｔｔａａａｃｔｇ −３′（１７ｍｅｒ）
５′− ｃａｃｔｃｇａｔｔａａａｃｔｇｔ −３′（１６ｍｅｒ）
５′− ｇｃａｃｔｃｇａｔｔａａａｃｔｇｔ −３′（１７ｍｅｒ）
５′−ｔｇｃａｃｔｃｇａｔｔａａａｃｔｇｔ −３′（１８ｍｅｒ）
５′− ｇｃａｃｔｃｇａｔｔａａａｃｔｇｔ −３′（１７ｍｅｒ）
５′−ｔｇｃａｃｔｃｇａｔｔａａａｃｔｇｔ −３′（１８ｍｅｒ）
５′− ｃａｃｔｃｇａｔｔａａａｃｔｇｔｇ−３′（１７ｍｅｒ）
５′− ｇｃａｃｔｃｇａｔｔａａａｃｔｇｔｇ−３′（１８ｍｅｒ）
５′−ｔｇｃａｃｔｃｇａｔｔａａａｃｔｇｔｇ−３′（１９ｍｅｒ）
５′− ｇｃａｃｔｃｇａｔｔａａａｃｔｇｔｇ−３′（１８ｍｅｒ）
５′−ｔｇｃａｃｔｃｇａｔｔａａａｃｔｇｔｇ−３′（１９ｍｅｒ）
この５′−ｔｇｃａｃｔｔｇａｔｔａａａｃｔｇｔｇ−３′または５′−ｔｇｃａｃｔｃｇａｔｔａａａｃｔｇｔｇ−３′のプローブの塩基配列部分の端に塩基がさらに付加されて２３ｍｅｒまで長くなってもよい。この場合、図５の塩基配列に沿った塩基または相補的に置き換えられた塩基が付加されていく。
上述のＵＣＰ１ＦＩＴＣ緑標識プローブＮｏ１の塩基配列のうち、１つ、２つまたは３つの塩基が別の異なる塩基に置き換えられても良い。これを変異ＵＣＰ１ＦＩＴＣ緑標識プローブという。例えば以下のように、上記プローブの１つの「ｔ」を「ｃ」に置き換えてもよい。このように置き換えられた塩基のみは、上記対象遺伝子の対応する塩基に結合していないことになる。このように意図的に塩基を置き換えて一部結合しないようにすると、プローブが剥がれ易くなり、プローブが剥がれる温度が低くなり、対象遺伝子の変異の検出が早くなって容易になるし、後述するプローブが剥がれる温度のピーク特性がより明確になる。
（変異ＵＣＰ１ＦＩＴＣ緑標識プローブＮｏ２）配列番号２５〜５１、２３５〜２６１
上記ＵＣＰ１遺伝子及びその周辺に結合（ハイブリダイゼーション）させられる一対のプローブの一方、つまり変異ＵＣＰ１ＦＩＴＣ緑標識プローブＮｏ２の塩基配列は以下の通りである。この赤標識プローブは対象遺伝子の変異箇所及びその周辺に結合するセンサープローブである。この変異ＵＣＰ１ＦＩＴＣ緑標識プローブＮｏ２は、少なくとも「ｃａｃｔｔｇａｔｃａａａｃｔｇ」または「ｃａｃｔｃｇａｔｃａａａｃｔｇ」の塩基配列（１５ｍｅｒ乃至１９ｍｅｒ）を含むプローブである。
上記ＵＣＰ１遺伝子及びその周辺に結合（ハイブリダイゼーション）させられる一対のプローブの一方、つまり変異ＵＣＰ１ＦＩＴＣ緑標識プローブＮｏ２の塩基配列は以下の通りである。この赤標識プローブは対象遺伝子の変異箇所及びその周辺に結合するセンサープローブである。この変異ＵＣＰ１ＦＩＴＣ緑標識プローブＮｏ２は、少なくとも「ｃａｃｔｔｇａｔｃａａａｃｔｇ」または「ｃａｃｔｃｇａｔｃａａａｃｔｇ」の塩基配列（１５ｍｅｒ乃至１９ｍｅｒ）を含むプローブである。
「ｃａｃｔｔｇａｔｃａａａｃｔｇ」の塩基はＵＣＰ１遺伝子が変異していない場合におけるもので、「ｃａｃｔｃｇａｔｃａａａｃｔｇ」の塩基はＵＣＰ１遺伝子が変異している場合におけるものである。配列番号２３５〜２６１は配列番号２５〜５１の塩基配列を相補的または逆相補的にしたものである。
５′− ｃａｃｔｔｇａｔｃａａａｃｔｇ −３′（１５ｍｅｒ）
５′− ｇｃａｃｔｔｇａｔｃａａａｃｔｇ −３′（１６ｍｅｒ）
５′−ｔｇｃａｃｔｔｇａｔｃａａａｃｔｇ −３′（１７ｍｅｒ）
５′− ｇｃａｃｔｔｇａｔｃａａａｃｔｇ −３′（１６ｍｅｒ）
５′−ｔｇｃａｃｔｔｇａｔｃａａａｃｔｇ −３′（１７ｍｅｒ）
５′− ｃａｃｔｔｇａｔｃａａａｃｔｇｔ −３′（１６ｍｅｒ）
５′− ｇｃａｃｔｔｇａｔｃａａａｃｔｇｔ −３′（１７ｍｅｒ）
５′−ｔｇｃａｃｔｔｇａｔｃａａａｃｔｇｔ −３′（１８ｍｅｒ）
５′− ｇｃａｃｔｔｇａｔｃａａａｃｔｇｔ −３′（１７ｍｅｒ）
５′−ｔｇｃａｃｔｔｇａｔｃａａａｃｔｇｔ −３′（１８ｍｅｒ）
５′− ｃａｃｔｔｇａｔｃａａａｃｔｇｔｇ−３′（１７ｍｅｒ）
５′− ｇｃａｃｔｔｇａｔｃａａａｃｔｇｔｇ−３′（１８ｍｅｒ）
５′−ｔｇｃａｃｔｔｇａｔｃａａａｃｔｇｔｇ−３′（１９ｍｅｒ）
５′− ｇｃａｃｔｔｇａｔｃａａａｃｔｇｔｇ−３′（１８ｍｅｒ）
５′−ｔｇｃａｃｔｔｇａｔｃａａａｃｔｇｔｇ−３′（１９ｍｅｒ）
５′− ｃａｃｔｃｇａｔｃａａａｃｔｇ −３′（１５ｍｅｒ）
５′− ｇｃａｃｔｃｇａｔｃａａａｃｔｇ −３′（１６ｍｅｒ）
５′−ｔｇｃａｃｔｃｇａｔｃａａａｃｔｇ −３′（１７ｍｅｒ）
５′− ｇｃａｃｔｃｇａｔｃａａａｃｔｇ −３′（１６ｍｅｒ）
５′−ｔｇｃａｃｔｃｇａｔｃａａａｃｔｇ −３′（１７ｍｅｒ）
５′− ｃａｃｔｃｇａｔｃａａａｃｔｇｔ −３′（１６ｍｅｒ）
５′− ｇｃａｃｔｃｇａｔｃａａａｃｔｇｔ −３′（１７ｍｅｒ）
５′−ｔｇｃａｃｔｃｇａｔｃａａａｃｔｇｔ −３′（１８ｍｅｒ）
５′− ｇｃａｃｔｃｇａｔｃａａａｃｔｇｔ −３′（１７ｍｅｒ）
５′−ｔｇｃａｃｔｃｇａｔｃａａａｃｔｇｔ −３′（１８ｍｅｒ）
５′− ｃａｃｔｃｇａｔｃａａａｃｔｇｔｇ−３′（１７ｍｅｒ）
５′− ｇｃａｃｔｃｇａｔｃａａａｃｔｇｔｇ−３′（１８ｍｅｒ）
５′−ｔｇｃａｃｔｃｇａｔｃａａａｃｔｇｔｇ−３′（１９ｍｅｒ）
５′− ｇｃａｃｔｃｇａｔｃａａａｃｔｇｔｇ−３′（１８ｍｅｒ）
５′−ｔｇｃａｃｔｃｇａｔｃａａａｃｔｇｔｇ−３′（１９ｍｅｒ）
この５′−ｔｇｃａｃｔｔｇａｔｃａａａｃｔｇｔｇ−３′または５′−ｔｇｃａｃｔｃｇａｔｃａａａｃｔｇｔｇ−３′のプローブの塩基配列部分の端に塩基がさらに付加されて２３ｍｅｒまで長くなってもよい。この場合、図５の塩基配列に沿った塩基または相補的に置き換えられた塩基が付加されていく。
上述のＵＣＰ１ＦＩＴＣ緑標識プローブＮｏ１または変異ＵＣＰ１ＦＩＴＣ緑標識プローブＮｏ２につき、図１に対して図３に示すように、各塩基配列を相補的／逆相補的にしたプローブも含まれる。この相補的／逆相補的な置き換えは、緑標識プローブ及び赤標識プローブの両方のプローブにつき行なわれてもよいし、片方のプローブにつき行なわれてもよい。この場合、発色成分（発光成分を含む。以下以上同じ）は、緑標識プローブ及び赤標識プローブに蛍光共鳴エネルギー転移の相関性のないものが用いられる。
この相補的／逆相補的なプローブは、上記変異ＵＣＰ１ＦＩＴＣ緑標識プローブＮｏ１、変異ＵＣＰ１ＦＩＴＣ緑標識プローブＮｏ２のａ（アデニン）、ｔ（チミン）、ｃ（シトシン）、ｇ（グアニン）が、ａ→ｔ、ｔ→ａ、ｃ→ｇ、ｇ→ｃに入れ換えられ、「５′−」と「−３′」との向きが入れ替わり、上記発色成分（蛍光色素）の標識位置が変わり、相補的変異ＵＣＰ１ＦＩＴＣ緑標識プローブＮｏ１、相補的変異ＵＣＰ１ＦＩＴＣ緑標識プローブＮｏ２と呼ばれる。
「ｍｅｒ」は塩基の数を示す単位である。このプローブには、緑色の発色色素が混合・結合・標識されて発色される。このプローブ、発色色素、増幅（増殖も含む。以上以下同じ）した上記対象遺伝子の混合物が加熱されると、このプローブは、対象遺伝子から剥がれ、蛍光共鳴エネルギー転移による緑色の励起光（発色色素の発色）は消える。上記端の糖「５′−」と「−３′」とは入れ替わって逆向きでもよい。
（ＵＣＰ１ＬＣ−Ｒｅｄ６４０赤標識プローブ）配列番号５２〜７６、２６２〜２８６
上記ＵＣＰ１遺伝子及びその周辺に結合（ハイブリダイゼーション）させられる一対のプローブの他方、つまりＵＣＰ１ＬＣ−Ｒｅｄ６４０赤標識プローブの塩基配列は以下の通りである。この赤標識プローブは対象遺伝子の変異箇所及びその周辺には結合しないアンカープローブである。
上記ＵＣＰ１遺伝子及びその周辺に結合（ハイブリダイゼーション）させられる一対のプローブの他方、つまりＵＣＰ１ＬＣ−Ｒｅｄ６４０赤標識プローブの塩基配列は以下の通りである。この赤標識プローブは対象遺伝子の変異箇所及びその周辺には結合しないアンカープローブである。
このＵＣＰ１ＬＣ−Ｒｅｄ６４０赤標識プローブは、少なくとも「ｃａａｔｃａｇａａａｔｃｇｃｔｇｃａｃａａａａｔｇｔｃｔｔｃｃｔａｔｔａａａｔａａａａａｔ」の塩基配列（４５ｍｅｒ乃至５３ｍｅｒ）を含むプローブである。配列番号２６２〜２８６は配列番号５２〜７６の塩基配列を相補的または逆相補的にしたものである。
５′− ｃａａｔｃａｇａａａｔｃｇｃｔｇｃａｃａａａａｔｇｔｃｔｔｃｃｔａｔｔａａａｔａａａａａｔ −３′（４５ｍｅｒ）
５′− ｔｃａａｔｃａｇａａａｔｃｇｃｔｇｃａｃａａａａｔｇｔｃｔｔｃｃｔａｔｔａａａｔａａａａａｔ −３′（４６ｍｅｒ）
５′− ｇｔｃａａｔｃａｇａａａｔｃｇｃｔｇｃａｃａａａａｔｇｔｃｔｔｃｃｔａｔｔａａａｔａａａａａｔ −３′（４７ｍｅｒ）
５′− ｇｇｔｃａａｔｃａｇａａａｔｃｇｃｔｇｃａｃａａａａｔｇｔｃｔｔｃｃｔａｔｔａａａｔａａａａａｔ −３′（４８ｍｅｒ）
５′−ｔｇｇｔｃａａｔｃａｇａａａｔｃｇｃｔｇｃａｃａａａａｔｇｔｃｔｔｃｃｔａｔｔａａａｔａａａａａｔ −３′（４９ｍｅｒ）
５′− ｔｃａａｔｃａｇａａａｔｃｇｃｔｇｃａｃａａａａｔｇｔｃｔｔｃｃｔａｔｔａａａｔａａａａａｔ −３′（４６ｍｅｒ）
５′− ｇｔｃａａｔｃａｇａａａｔｃｇｃｔｇｃａｃａａａａｔｇｔｃｔｔｃｃｔａｔｔａａａｔａａａａａｔ −３′（４７ｍｅｒ）
５′− ｇｇｔｃａａｔｃａｇａａａｔｃｇｃｔｇｃａｃａａａａｔｇｔｃｔｔｃｃｔａｔｔａａａｔａａａａａｔ −３′（４８ｍｅｒ）
５′−ｔｇｇｔｃａａｔｃａｇａａａｔｃｇｃｔｇｃａｃａａａａｔｇｔｃｔｔｃｃｔａｔｔａａａｔａａａａａｔ −３′（４９ｍｅｒ）
５′− ｃａａｔｃａｇａａａｔｃｇｃｔｇｃａｃａａａａｔｇｔｃｔｔｃｃｔａｔｔａａａｔａａａａａｔｃ −３′（４６ｍｅｒ）
５′− ｔｃａａｔｃａｇａａａｔｃｇｃｔｇｃａｃａａａａｔｇｔｃｔｔｃｃｔａｔｔａａａｔａａａａａｔｃ −３′（４７ｍｅｒ）
５′− ｇｔｃａａｔｃａｇａａａｔｃｇｃｔｇｃａｃａａａａｔｇｔｃｔｔｃｃｔａｔｔａａａｔａａａａａｔｃ −３′（４８ｍｅｒ）
５′− ｇｇｔｃａａｔｃａｇａａａｔｃｇｃｔｇｃａｃａａａａｔｇｔｃｔｔｃｃｔａｔｔａａａｔａａａａａｔｃ −３′（４９ｍｅｒ）
５′−ｔｇｇｔｃａａｔｃａｇａａａｔｃｇｃｔｇｃａｃａａａａｔｇｔｃｔｔｃｃｔａｔｔａａａｔａａａａａｔｃ −３′（５０ｍｅｒ）
５′− ｔｃａａｔｃａｇａａａｔｃｇｃｔｇｃａｃａａａａｔｇｔｃｔｔｃｃｔａｔｔａａａｔａａａａａｔｃ −３′（４７ｍｅｒ）
５′− ｇｔｃａａｔｃａｇａａａｔｃｇｃｔｇｃａｃａａａａｔｇｔｃｔｔｃｃｔａｔｔａａａｔａａａａａｔｃ −３′（４８ｍｅｒ）
５′− ｇｇｔｃａａｔｃａｇａａａｔｃｇｃｔｇｃａｃａａａａｔｇｔｃｔｔｃｃｔａｔｔａａａｔａａａａａｔｃ −３′（４９ｍｅｒ）
５′−ｔｇｇｔｃａａｔｃａｇａａａｔｃｇｃｔｇｃａｃａａａａｔｇｔｃｔｔｃｃｔａｔｔａａａｔａａａａａｔｃ −３′（５０ｍｅｒ）
５′− ｃａａｔｃａｇａａａｔｃｇｃｔｇｃａｃａａａａｔｇｔｃｔｔｃｃｔａｔｔａａａｔａａａａａｔｃａ −３′（４７ｍｅｒ）
５′− ｔｃａａｔｃａｇａａａｔｃｇｃｔｇｃａｃａａａａｔｇｔｃｔｔｃｃｔａｔｔａａａｔａａａａａｔｃａ −３′（４８ｍｅｒ）
５′− ｇｔｃａａｔｃａｇａａａｔｃｇｃｔｇｃａｃａａａａｔｇｔｃｔｔｃｃｔａｔｔａａａｔａａａａａｔｃａ −３′（４９ｍｅｒ）
５′− ｇｇｔｃａａｔｃａｇａａａｔｃｇｃｔｇｃａｃａａａａｔｇｔｃｔｔｃｃｔａｔｔａａａｔａａａａａｔｃａ −３′（５０ｍｅｒ）
５′−ｔｇｇｔｃａａｔｃａｇａａａｔｃｇｃｔｇｃａｃａａａａｔｇｔｃｔｔｃｃｔａｔｔａａａｔａａａａａｔｃａ −３′（５１ｍｅｒ）
５′− ｔｃａａｔｃａｇａａａｔｃｇｃｔｇｃａｃａａａａｔｇｔｃｔｔｃｃｔａｔｔａａａｔａａａａａｔｃａ −３′（４８ｍｅｒ）
５′− ｇｔｃａａｔｃａｇａａａｔｃｇｃｔｇｃａｃａａａａｔｇｔｃｔｔｃｃｔａｔｔａａａｔａａａａａｔｃａ −３′（４９ｍｅｒ）
５′− ｇｇｔｃａａｔｃａｇａａａｔｃｇｃｔｇｃａｃａａａａｔｇｔｃｔｔｃｃｔａｔｔａａａｔａａａａａｔｃａ −３′（５０ｍｅｒ）
５′−ｔｇｇｔｃａａｔｃａｇａａａｔｃｇｃｔｇｃａｃａａａａｔｇｔｃｔｔｃｃｔａｔｔａａａｔａａａａａｔｃａ −３′（５１ｍｅｒ）
５′− ｃａａｔｃａｇａａａｔｃｇｃｔｇｃａｃａａａａｔｇｔｃｔｔｃｃｔａｔｔａａａｔａａａａａｔｃａｔ −３′（４８ｍｅｒ）
５′− ｔｃａａｔｃａｇａａａｔｃｇｃｔｇｃａｃａａａａｔｇｔｃｔｔｃｃｔａｔｔａａａｔａａａａａｔｃａｔ −３′（４９ｍｅｒ）
５′− ｇｔｃａａｔｃａｇａａａｔｃｇｃｔｇｃａｃａａａａｔｇｔｃｔｔｃｃｔａｔｔａａａｔａａａａａｔｃａｔ −３′（５０ｍｅｒ）
５′− ｇｇｔｃａａｔｃａｇａａａｔｃｇｃｔｇｃａｃａａａａｔｇｔｃｔｔｃｃｔａｔｔａａａｔａａａａａｔｃａｔ −３′（５１ｍｅｒ）
５′−ｔｇｇｔｃａａｔｃａｇａａａｔｃｇｃｔｇｃａｃａａａａｔｇｔｃｔｔｃｃｔａｔｔａａａｔａａａａａｔｃａｔ −３′（５２ｍｅｒ）
５′− ｔｃａａｔｃａｇａａａｔｃｇｃｔｇｃａｃａａａａｔｇｔｃｔｔｃｃｔａｔｔａａａｔａａａａａｔｃａｔ −３′（４９ｍｅｒ）
５′− ｇｔｃａａｔｃａｇａａａｔｃｇｃｔｇｃａｃａａａａｔｇｔｃｔｔｃｃｔａｔｔａａａｔａａａａａｔｃａｔ −３′（５０ｍｅｒ）
５′− ｇｇｔｃａａｔｃａｇａａａｔｃｇｃｔｇｃａｃａａａａｔｇｔｃｔｔｃｃｔａｔｔａａａｔａａａａａｔｃａｔ −３′（５１ｍｅｒ）
５′−ｔｇｇｔｃａａｔｃａｇａａａｔｃｇｃｔｇｃａｃａａａａｔｇｔｃｔｔｃｃｔａｔｔａａａｔａａａａａｔｃａｔ −３′（５２ｍｅｒ）
５′− ｃａａｔｃａｇａａａｔｃｇｃｔｇｃａｃａａａａｔｇｔｃｔｔｃｃｔａｔｔａａａｔａａａａａｔｃａｔａ−３′（４９ｍｅｒ）
５′− ｔｃａａｔｃａｇａａａｔｃｇｃｔｇｃａｃａａａａｔｇｔｃｔｔｃｃｔａｔｔａａａｔａａａａａｔｃａｔａ−３′（５０ｍｅｒ）
５′− ｇｔｃａａｔｃａｇａａａｔｃｇｃｔｇｃａｃａａａａｔｇｔｃｔｔｃｃｔａｔｔａａａｔａａａａａｔｃａｔａ−３′（５１ｍｅｒ）
５′− ｇｇｔｃａａｔｃａｇａａａｔｃｇｃｔｇｃａｃａａａａｔｇｔｃｔｔｃｃｔａｔｔａａａｔａａａａａｔｃａｔａ−３′（５２ｍｅｒ）
５′−ｔｇｇｔｃａａｔｃａｇａａａｔｃｇｃｔｇｃａｃａａａａｔｇｔｃｔｔｃｃｔａｔｔａａａｔａａａａａｔｃａｔａ−３′（５３ｍｅｒ）
５′− ｔｃａａｔｃａｇａａａｔｃｇｃｔｇｃａｃａａａａｔｇｔｃｔｔｃｃｔａｔｔａａａｔａａａａａｔｃａｔａ−３′（５０ｍｅｒ）
５′− ｇｔｃａａｔｃａｇａａａｔｃｇｃｔｇｃａｃａａａａｔｇｔｃｔｔｃｃｔａｔｔａａａｔａａａａａｔｃａｔａ−３′（５１ｍｅｒ）
５′− ｇｇｔｃａａｔｃａｇａａａｔｃｇｃｔｇｃａｃａａａａｔｇｔｃｔｔｃｃｔａｔｔａａａｔａａａａａｔｃａｔａ−３′（５２ｍｅｒ）
５′−ｔｇｇｔｃａａｔｃａｇａａａｔｃｇｃｔｇｃａｃａａａａｔｇｔｃｔｔｃｃｔａｔｔａａａｔａａａａａｔｃａｔａ−３′（５３ｍｅｒ）
この５′−ｔｇｇｔｃａａｔｃａｇａａａｔｃｇｃｔｇｃａｃａａａａｔｇｔｃｔｔｃｃｔａｔｔａａａｔａａａａａｔｃａｔａ−３′のプローブの塩基配列部分の端に塩基がさらに付加されて５７ｍｅｒまで長くなってもよい。この場合、図５の塩基配列に沿った塩基または相補的に置き換えられた塩基が付加されていく。
上述のＵＣＰ１ＬＣ−Ｒｅｄ６４０赤標識プローブの塩基配列のうち、１つ、２つまたは３つの塩基が別の異なる塩基に置き換えられても良い。これを変異ＵＣＰ１ＬＣ−Ｒｅｄ６４０赤標識プローブという。このように置き換えられた塩基のみは、上記対象遺伝子の対応する塩基に結合していないことになる。このように意図的に塩基を置き換えて一部結合しないようにすると、プローブが剥がれ易くなって、プローブが剥がれる温度が低くなり、対象遺伝子の変異の検出が早くなって容易になるし、後述するプローブが剥がれる温度のピーク特性がより明確になる。
上述のＵＣＰ１ＬＣ−Ｒｅｄ６４０赤標識プローブまたは変異ＵＣＰ１ＬＣ−Ｒｅｄ６４０赤標識プローブにつき、図１に対して図３に示すように、各塩基配列を相補的／逆相補的にしたプローブも含まれる。この相補的／逆相補的な置き換えは、緑標識プローブ及び赤標識プローブの両方のプローブにつき行なわれてもよいし、片方のプローブにつき行なわれてもよい。発色成分は、緑標識プローブ及び赤標識プローブに蛍光共鳴エネルギー転移の相関性のないものが用いられる。
この相補的／逆相補的なプローブは、ＵＣＰ１ＬＣ−Ｒｅｄ６４０赤標識プローブのａ（アデニン）、ｔ（チミン）、ｃ（シトシン）、ｇ（グアニン）が、ａ→ｔ、ｔ→ａ、ｃ→ｇ、ｇ→ｃに入れ換えられ、「５′−」と「−３′」との向きが入れ替わり、上記発色成分（蛍光色素）の標識位置が変わり、相補的ＵＣＰ１ＬＣ−Ｒｅｄ６４０赤標識プローブと呼ばれる。
（４）プローブ（β２）
（β２ＡＤＲＦＩＴＣ緑標識プローブ）配列番号７７〜９４、２８７〜３０４
上記β２遺伝子及びその周辺に結合（ハイブリダイゼーション）させられる一対のプローブの一方、つまりβ２ＡＤＲＦＩＴＣ緑標識プローブの塩基配列は以下の通りである。この緑標識プローブは対象遺伝子の変異箇所及びその周辺に結合するセンサープローブである。
（β２ＡＤＲＦＩＴＣ緑標識プローブ）配列番号７７〜９４、２８７〜３０４
上記β２遺伝子及びその周辺に結合（ハイブリダイゼーション）させられる一対のプローブの一方、つまりβ２ＡＤＲＦＩＴＣ緑標識プローブの塩基配列は以下の通りである。この緑標識プローブは対象遺伝子の変異箇所及びその周辺に結合するセンサープローブである。
このβ２ＡＤＲＦＩＴＣ緑標識プローブは、少なくとも「ｃｇｔｃａｃｇｃａｇｃａａａ」または「ｃｇｔｃａｃｇｃａｇｇａａａ」の塩基配列（１４ｍｅｒ乃至１８ｍｅｒ）を含むプローブである。「ｃｇｔｃａｃｇｃａｇｃａａａ」の塩基はβ２ＡＤＲ遺伝子が変異していない場合におけるもので、「ｃｇｔｃａｃｇｃａｇｇａａａ」の塩基はβ２ＡＤＲ遺伝子が変異している場合におけるものである。配列番号２８７〜３０４は配列番号７７〜９４の塩基配列を相補的または逆相補的にしたものである。
５′− ｃｇｔｃａｃｇｃａｇｃａａａ −３′（１４ｍｅｒ）
５′− ａｃｇｔｃａｃｇｃａｇｃａａａ −３′（１５ｍｅｒ）
５′−ｇａｃｇｔｃａｃｇｃａｇｃａａａ −３′（１６ｍｅｒ）
５′− ａｃｇｔｃａｃｇｃａｇｃａａａ −３′（１５ｍｅｒ）
５′−ｇａｃｇｔｃａｃｇｃａｇｃａａａ −３′（１６ｍｅｒ）
５′− ｃｇｔｃａｃｇｃａｇｃａａａｇ −３′（１５ｍｅｒ）
５′− ａｃｇｔｃａｃｇｃａｇｃａａａｇ −３′（１６ｍｅｒ）
５′−ｇａｃｇｔｃａｃｇｃａｇｃａａａｇ −３′（１７ｍｅｒ）
５′− ａｃｇｔｃａｃｇｃａｇｃａａａｇ −３′（１６ｍｅｒ）
５′−ｇａｃｇｔｃａｃｇｃａｇｃａａａｇ −３′（１７ｍｅｒ）
５′− ｃｇｔｃａｃｇｃａｇｃａａａｇｇ−３′（１６ｍｅｒ）
５′− ａｃｇｔｃａｃｇｃａｇｃａａａｇｇ−３′（１７ｍｅｒ）
５′−ｇａｃｇｔｃａｃｇｃａｇｃａａａｇｇ−３′（１８ｍｅｒ）
５′− ａｃｇｔｃａｃｇｃａｇｃａａａｇｇ−３′（１７ｍｅｒ）
５′−ｇａｃｇｔｃａｃｇｃａｇｃａａａｇｇ−３′（１８ｍｅｒ）
５′− ｃｇｔｃａｃｇｃａｇｇａａａ −３′（１４ｍｅｒ）
５′− ａｃｇｔｃａｃｇｃａｇｇａａａ −３′（１５ｍｅｒ）
５′−ｇａｃｇｔｃａｃｇｃａｇｇａａａ −３′（１６ｍｅｒ）
５′− ａｃｇｔｃａｃｇｃａｇｇａａａ −３′（１５ｍｅｒ）
５′−ｇａｃｇｔｃａｃｇｃａｇｇａａａ −３′（１６ｍｅｒ）
５′− ｃｇｔｃａｃｇｃａｇｇａａａｇ −３′（１５ｍｅｒ）
５′− ａｃｇｔｃａｃｇｃａｇｇａａａｇ −３′（１６ｍｅｒ）
５′−ｇａｃｇｔｃａｃｇｃａｇｇａａａｇ −３′（１７ｍｅｒ）
５′− ａｃｇｔｃａｃｇｃａｇｇａａａｇ −３′（１６ｍｅｒ）
５′−ｇａｃｇｔｃａｃｇｃａｇｇａａａｇ −３′（１７ｍｅｒ）
５′− ｃｇｔｃａｃｇｃａｇｇａａａｇｇ−３′（１６ｍｅｒ）
５′− ａｃｇｔｃａｃｇｃａｇｇａａａｇｇ−３′（１７ｍｅｒ）
５′−ｇａｃｇｔｃａｃｇｃａｇｇａａａｇｇ−３′（１８ｍｅｒ）
５′− ａｃｇｔｃａｃｇｃａｇｇａａａｇｇ−３′（１７ｍｅｒ）
５′−ｇａｃｇｔｃａｃｇｃａｇｇａａａｇｇ−３′（１８ｍｅｒ）
このプローブには、緑色の発色色素が混合・結合・標識されて発色される。このプローブ、発色色素、増幅した上記対象遺伝子の混合物が加熱されると、このプローブは、対象遺伝子から剥がれ、蛍光共鳴エネルギー転移による緑色の励起光（発色色素の発色）は消える。上記端の糖「５′−」と「−３′」とは入れ替わって逆向きでもよい。
この５′−ｇａｃｇｔｃａｃｇｃａｇｃａａａｇｇ−３′または５′−ｇａｃｇｔｃａｃｇｃａｇｇａａａｇｇ−３′のプローブの塩基配列部分の端に塩基がさらに付加されて２２ｍｅｒまで長くなってもよい。この場合、図６の塩基配列に沿った塩基または相補的に置き換えられた塩基が付加されていく。
上述のβ２ＡＤＲＦＩＴＣ緑標識プローブの塩基配列のうち、１つ、２つまたは３つの塩基が別の異なる塩基に置き換えられても良い。これを変異β２ＡＤＲＦＩＴＣ緑標識プローブという。このように置き換えられた塩基のみは、上記対象遺伝子の対応する塩基に結合していないことになる。このように意図的に塩基を置き換えて一部結合しないようにすると、プローブが剥がれ易くなって、プローブが剥がれる温度が低くなり、対象遺伝子の変異の検出が早くなって容易になるし、後述するプローブが剥がれる温度のピーク特性がより明確になる。
上述のβ２ＡＤＲＦＩＴＣ緑標識プローブまたは変異β２ＡＤＲＦＩＴＣ緑標識プローブにつき、図１に対して図３に示すように、各塩基配列を相補的／逆相補的にしたプローブも含まれる。この相補的／逆相補的な置き換えは、緑標識プローブ及び赤標識プローブの両方のプローブにつき行なわれてもよいし、片方のプローブにつき行なわれてもよい。この場合、発色成分は、緑標識プローブ及び赤標識プローブに蛍光共鳴エネルギー転移の相関性のないものが用いられる。
この相補的／逆相補的なプローブは、β２ＡＤＲＦＩＴＣ緑標識プローブのａ（アデニン）、ｔ（チミン）、ｃ（シトシン）、ｇ（グアニン）が、ａ→ｔ、ｔ→ａ、ｃ→ｇ、ｇ→ｃに入れ換えられ、「５′−」と「−３′」との向きが入れ替わり、上記発色成分（蛍光色素）の標識位置が変わり、相補的β２ＡＤＲＦＩＴＣ緑標識プローブと呼ばれる。
（β２ＡＤＲＬＣ−Ｒｅｄ６４０赤標識プローブ）配列番号９５〜１１９、３０５〜３２９
上記β２遺伝子及びその周辺に結合（ハイブリダイゼーション）させられる一対のプローブの他方、つまりβ２ＡＤＲＬＣ−Ｒｅｄ６４０赤標識プローブの塩基配列は以下の通りである。この赤標識プローブは対象遺伝子の変異箇所及びその周辺には結合しないアンカープローブである。
上記β２遺伝子及びその周辺に結合（ハイブリダイゼーション）させられる一対のプローブの他方、つまりβ２ＡＤＲＬＣ−Ｒｅｄ６４０赤標識プローブの塩基配列は以下の通りである。この赤標識プローブは対象遺伝子の変異箇所及びその周辺には結合しないアンカープローブである。
このβ２ＡＤＲＬＣ−Ｒｅｄ６４０赤標識プローブは、少なくとも「ｃｇａｇｇｔｇｔｇｇｇｔｇｇｔｇｇｇｃａｔｇｇｇｃａｔｃｇｔｃａｔｇｔｃｔｃｔｃａｔｃｇｔ」の塩基配列（４５ｍｅｒ乃至５３ｍｅｒ）を含むプローブである。配列番号３０５〜３２９は配列番号９５〜１１９の塩基配列を相補的または逆相補的にしたものである。
５′− ｃｇａｇｇｔｇｔｇｇｇｔｇｇｔｇｇｇｃａｔｇｇｇｃａｔｃｇｔｃａｔｇｔｃｔｃｔｃａｔｃｇｔ −３′（４５ｍｅｒ）
５′− ａｃｇａｇｇｔｇｔｇｇｇｔｇｇｔｇｇｇｃａｔｇｇｇｃａｔｃｇｔｃａｔｇｔｃｔｃｔｃａｔｃｇｔ −３′（４６ｍｅｒ）
５′− ｇａｃｇａｇｇｔｇｔｇｇｇｔｇｇｔｇｇｇｃａｔｇｇｇｃａｔｃｇｔｃａｔｇｔｃｔｃｔｃａｔｃｇｔ −３′（４７ｍｅｒ）
５′− ｇｇａｃｇａｇｇｔｇｔｇｇｇｔｇｇｔｇｇｇｃａｔｇｇｇｃａｔｃｇｔｃａｔｇｔｃｔｃｔｃａｔｃｇｔ −３′（４８ｍｅｒ）
５′−ｇｇｇａｃｇａｇｇｔｇｔｇｇｇｔｇｇｔｇｇｇｃａｔｇｇｇｃａｔｃｇｔｃａｔｇｔｃｔｃｔｃａｔｃｇｔ −３′（４９ｍｅｒ）
５′− ａｃｇａｇｇｔｇｔｇｇｇｔｇｇｔｇｇｇｃａｔｇｇｇｃａｔｃｇｔｃａｔｇｔｃｔｃｔｃａｔｃｇｔ −３′（４６ｍｅｒ）
５′− ｇａｃｇａｇｇｔｇｔｇｇｇｔｇｇｔｇｇｇｃａｔｇｇｇｃａｔｃｇｔｃａｔｇｔｃｔｃｔｃａｔｃｇｔ −３′（４７ｍｅｒ）
５′− ｇｇａｃｇａｇｇｔｇｔｇｇｇｔｇｇｔｇｇｇｃａｔｇｇｇｃａｔｃｇｔｃａｔｇｔｃｔｃｔｃａｔｃｇｔ −３′（４８ｍｅｒ）
５′−ｇｇｇａｃｇａｇｇｔｇｔｇｇｇｔｇｇｔｇｇｇｃａｔｇｇｇｃａｔｃｇｔｃａｔｇｔｃｔｃｔｃａｔｃｇｔ −３′（４９ｍｅｒ）
５′− ｃｇａｇｇｔｇｔｇｇｇｔｇｇｔｇｇｇｃａｔｇｇｇｃａｔｃｇｔｃａｔｇｔｃｔｃｔｃａｔｃｇｔｃ −３′（４６ｍｅｒ）
５′− ａｃｇａｇｇｔｇｔｇｇｇｔｇｇｔｇｇｇｃａｔｇｇｇｃａｔｃｇｔｃａｔｇｔｃｔｃｔｃａｔｃｇｔｃ −３′（４７ｍｅｒ）
５′− ｇａｃｇａｇｇｔｇｔｇｇｇｔｇｇｔｇｇｇｃａｔｇｇｇｃａｔｃｇｔｃａｔｇｔｃｔｃｔｃａｔｃｇｔｃ −３′（４８ｍｅｒ）
５′− ｇｇａｃｇａｇｇｔｇｔｇｇｇｔｇｇｔｇｇｇｃａｔｇｇｇｃａｔｃｇｔｃａｔｇｔｃｔｃｔｃａｔｃｇｔｃ −３′（４９ｍｅｒ）
５′−ｇｇｇａｃｇａｇｇｔｇｔｇｇｇｔｇｇｔｇｇｇｃａｔｇｇｇｃａｔｃｇｔｃａｔｇｔｃｔｃｔｃａｔｃｇｔｃ −３′（５０ｍｅｒ）
５′− ａｃｇａｇｇｔｇｔｇｇｇｔｇｇｔｇｇｇｃａｔｇｇｇｃａｔｃｇｔｃａｔｇｔｃｔｃｔｃａｔｃｇｔｃ −３′（４７ｍｅｒ）
５′− ｇａｃｇａｇｇｔｇｔｇｇｇｔｇｇｔｇｇｇｃａｔｇｇｇｃａｔｃｇｔｃａｔｇｔｃｔｃｔｃａｔｃｇｔｃ −３′（４８ｍｅｒ）
５′− ｇｇａｃｇａｇｇｔｇｔｇｇｇｔｇｇｔｇｇｇｃａｔｇｇｇｃａｔｃｇｔｃａｔｇｔｃｔｃｔｃａｔｃｇｔｃ −３′（４９ｍｅｒ）
５′−ｇｇｇａｃｇａｇｇｔｇｔｇｇｇｔｇｇｔｇｇｇｃａｔｇｇｇｃａｔｃｇｔｃａｔｇｔｃｔｃｔｃａｔｃｇｔｃ −３′（５０ｍｅｒ）
５′− ｃｇａｇｇｔｇｔｇｇｇｔｇｇｔｇｇｇｃａｔｇｇｇｃａｔｃｇｔｃａｔｇｔｃｔｃｔｃａｔｃｇｔｃｃ −３′（４７ｍｅｒ）
５′− ａｃｇａｇｇｔｇｔｇｇｇｔｇｇｔｇｇｇｃａｔｇｇｇｃａｔｃｇｔｃａｔｇｔｃｔｃｔｃａｔｃｇｔｃｃ −３′（４８ｍｅｒ）
５′− ｇａｃｇａｇｇｔｇｔｇｇｇｔｇｇｔｇｇｇｃａｔｇｇｇｃａｔｃｇｔｃａｔｇｔｃｔｃｔｃａｔｃｇｔｃｃ −３′（４９ｍｅｒ）
５′− ｇｇａｃｇａｇｇｔｇｔｇｇｇｔｇｇｔｇｇｇｃａｔｇｇｇｃａｔｃｇｔｃａｔｇｔｃｔｃｔｃａｔｃｇｔｃｃ −３′（５０ｍｅｒ）
５′−ｇｇｇａｃｇａｇｇｔｇｔｇｇｇｔｇｇｔｇｇｇｃａｔｇｇｇｃａｔｃｇｔｃａｔｇｔｃｔｃｔｃａｔｃｇｔｃｃ −３′（５１ｍｅｒ）
５′− ａｃｇａｇｇｔｇｔｇｇｇｔｇｇｔｇｇｇｃａｔｇｇｇｃａｔｃｇｔｃａｔｇｔｃｔｃｔｃａｔｃｇｔｃｃ −３′（４８ｍｅｒ）
５′− ｇａｃｇａｇｇｔｇｔｇｇｇｔｇｇｔｇｇｇｃａｔｇｇｇｃａｔｃｇｔｃａｔｇｔｃｔｃｔｃａｔｃｇｔｃｃ −３′（４９ｍｅｒ）
５′− ｇｇａｃｇａｇｇｔｇｔｇｇｇｔｇｇｔｇｇｇｃａｔｇｇｇｃａｔｃｇｔｃａｔｇｔｃｔｃｔｃａｔｃｇｔｃｃ −３′（５０ｍｅｒ）
５′−ｇｇｇａｃｇａｇｇｔｇｔｇｇｇｔｇｇｔｇｇｇｃａｔｇｇｇｃａｔｃｇｔｃａｔｇｔｃｔｃｔｃａｔｃｇｔｃｃ −３′（５１ｍｅｒ）
５′− ｃｇａｇｇｔｇｔｇｇｇｔｇｇｔｇｇｇｃａｔｇｇｇｃａｔｃｇｔｃａｔｇｔｃｔｃｔｃａｔｃｇｔｃｃｔ −３′（４８ｍｅｒ）
５′− ａｃｇａｇｇｔｇｔｇｇｇｔｇｇｔｇｇｇｃａｔｇｇｇｃａｔｃｇｔｃａｔｇｔｃｔｃｔｃａｔｃｇｔｃｃｔ −３′（４９ｍｅｒ）
５′− ｇａｃｇａｇｇｔｇｔｇｇｇｔｇｇｔｇｇｇｃａｔｇｇｇｃａｔｃｇｔｃａｔｇｔｃｔｃｔｃａｔｃｇｔｃｃｔ −３′（５０ｍｅｒ）
５′− ｇｇａｃｇａｇｇｔｇｔｇｇｇｔｇｇｔｇｇｇｃａｔｇｇｇｃａｔｃｇｔｃａｔｇｔｃｔｃｔｃａｔｃｇｔｃｃｔ −３′（５１ｍｅｒ）
５′−ｇｇｇａｃｇａｇｇｔｇｔｇｇｇｔｇｇｔｇｇｇｃａｔｇｇｇｃａｔｃｇｔｃａｔｇｔｃｔｃｔｃａｔｃｇｔｃｃｔ −３′（５２ｍｅｒ）
５′− ａｃｇａｇｇｔｇｔｇｇｇｔｇｇｔｇｇｇｃａｔｇｇｇｃａｔｃｇｔｃａｔｇｔｃｔｃｔｃａｔｃｇｔｃｃｔ −３′（４９ｍｅｒ）
５′− ｇａｃｇａｇｇｔｇｔｇｇｇｔｇｇｔｇｇｇｃａｔｇｇｇｃａｔｃｇｔｃａｔｇｔｃｔｃｔｃａｔｃｇｔｃｃｔ −３′（５０ｍｅｒ）
５′− ｇｇａｃｇａｇｇｔｇｔｇｇｇｔｇｇｔｇｇｇｃａｔｇｇｇｃａｔｃｇｔｃａｔｇｔｃｔｃｔｃａｔｃｇｔｃｃｔ −３′（５１ｍｅｒ）
５′−ｇｇｇａｃｇａｇｇｔｇｔｇｇｇｔｇｇｔｇｇｇｃａｔｇｇｇｃａｔｃｇｔｃａｔｇｔｃｔｃｔｃａｔｃｇｔｃｃｔ −３′（５２ｍｅｒ）
５′− ｃｇａｇｇｔｇｔｇｇｇｔｇｇｔｇｇｇｃａｔｇｇｇｃａｔｃｇｔｃａｔｇｔｃｔｃｔｃａｔｃｇｔｃｃｔｇ−３′（４９ｍｅｒ）
５′− ａｃｇａｇｇｔｇｔｇｇｇｔｇｇｔｇｇｇｃａｔｇｇｇｃａｔｃｇｔｃａｔｇｔｃｔｃｔｃａｔｃｇｔｃｃｔｇ−３′（５０ｍｅｒ）
５′− ｇａｃｇａｇｇｔｇｔｇｇｇｔｇｇｔｇｇｇｃａｔｇｇｇｃａｔｃｇｔｃａｔｇｔｃｔｃｔｃａｔｃｇｔｃｃｔｇ−３′（５１ｍｅｒ）
５′− ｇｇａｃｇａｇｇｔｇｔｇｇｇｔｇｇｔｇｇｇｃａｔｇｇｇｃａｔｃｇｔｃａｔｇｔｃｔｃｔｃａｔｃｇｔｃｃｔｇ−３′（５２ｍｅｒ）
５′−ｇｇｇａｃｇａｇｇｔｇｔｇｇｇｔｇｇｔｇｇｇｃａｔｇｇｇｃａｔｃｇｔｃａｔｇｔｃｔｃｔｃａｔｃｇｔｃｃｔｇ−３′（５３ｍｅｒ）
５′− ａｃｇａｇｇｔｇｔｇｇｇｔｇｇｔｇｇｇｃａｔｇｇｇｃａｔｃｇｔｃａｔｇｔｃｔｃｔｃａｔｃｇｔｃｃｔｇ−３′（５０ｍｅｒ）
５′− ｇａｃｇａｇｇｔｇｔｇｇｇｔｇｇｔｇｇｇｃａｔｇｇｇｃａｔｃｇｔｃａｔｇｔｃｔｃｔｃａｔｃｇｔｃｃｔｇ−３′（５１ｍｅｒ）
５′− ｇｇａｃｇａｇｇｔｇｔｇｇｇｔｇｇｔｇｇｇｃａｔｇｇｇｃａｔｃｇｔｃａｔｇｔｃｔｃｔｃａｔｃｇｔｃｃｔｇ−３′（５２ｍｅｒ）
５′−ｇｇｇａｃｇａｇｇｔｇｔｇｇｇｔｇｇｔｇｇｇｃａｔｇｇｇｃａｔｃｇｔｃａｔｇｔｃｔｃｔｃａｔｃｇｔｃｃｔｇ−３′（５３ｍｅｒ）
このプローブには、緑色の発色色素が混合・結合・標識されて発色される。このプローブ、発色色素、増幅した上記対象遺伝子の混合物が加熱されると、このプローブは、対象遺伝子から剥がれ、蛍光共鳴エネルギー転移による緑色の励起光（発色色素の発色）は消える。上記端の糖「５′−」と「−３′」とは入れ替わって逆向きでもよい。
この５′−ｇｇｇａｃｇａｇｇｔｇｔｇｇｇｔｇｇｔｇｇｇｃａｔｇｇｇｃａｔｃｇｔｃａｔｇｔｃｔｃｔｃａｔｃｇｔｃｃｔｇ−３′のプローブの塩基配列部分の端に塩基がさらに付加されて５７ｍｅｒまで長くなってもよい。この場合、図６の塩基配列に沿った塩基または相補的に置き換えられた塩基が付加されていく。
上述のβ２ＡＤＲＬＣ−Ｒｅｄ６４０赤標識プローブの塩基配列のうち、１つ、２つまたは３つの塩基が別の異なる塩基に置き換えられても良い。これを変異β２ＡＤＲＬＣ−Ｒｅｄ６４０赤標識プローブという。このように置き換えられた塩基のみは、上記対象遺伝子の対応する塩基に結合していないことになる。このように意図的に塩基を置き換えて一部結合しないようにすると、プローブが剥がれ易くなって、プローブが剥がれる温度が低くなり、対象遺伝子の変異の検出が早くなって容易になるし、後述するプローブが剥がれる温度のピーク特性がより明確になる。
上述のβ２ＡＤＲＬＣ−Ｒｅｄ６４０赤標識プローブまたは変異β２ＡＤＲＬＣ−Ｒｅｄ６４０赤標識プローブにつき、図１に対して図３に示すように、各塩基配列を相補的／逆相補的にしたプローブも含まれる。この相補的／逆相補的な置き換えは、両方のプローブにつき行なわれてもよいし、片方のプローブにつき行なわれてもよい。
このプローブは、β２ＡＤＲＬＣ−Ｒｅｄ６４０赤標識プローブのａ（アデニン）、ｔ（チミン）、ｃ（シトシン）、ｇ（グアニン）が、ａ→ｔ、ｔ→ａ、ｃ→ｇ、ｇ→ｃに入れ換えられ、「５′−」と「−３′」との向きが入れ替わり、上記発色成分（蛍光色素）の標識位置が変わり、相補的β２ＡＤＲＬＣ−Ｒｅｄ６４０赤標識プローブと呼ばれる。
（５）プローブ（β３）
（β３ＡＤＲＦＩＴＣ緑標識プローブ）配列番号１２０〜１４４、３３０〜３５４
上記β３遺伝子及びその周辺に結合（ハイブリダイゼーション）させられる一対のプローブの一方、つまりβ３ＡＤＲＦＩＴＣ緑標識プローブの塩基配列は以下の通りである。この緑標識プローブは対象遺伝子の変異箇所及びその周辺には結合しないアンカープローブである。
（β３ＡＤＲＦＩＴＣ緑標識プローブ）配列番号１２０〜１４４、３３０〜３５４
上記β３遺伝子及びその周辺に結合（ハイブリダイゼーション）させられる一対のプローブの一方、つまりβ３ＡＤＲＦＩＴＣ緑標識プローブの塩基配列は以下の通りである。この緑標識プローブは対象遺伝子の変異箇所及びその周辺には結合しないアンカープローブである。
このβ３ＡＤＲＦＩＴＣ緑標識プローブは、少なくとも「ｃｃａｃｃｇｔｇｇｇａｇｇｃａａｃｃｔｇｃｔｇｇｔｃａｔｃｇｔ」の塩基配列（３１ｍｅｒ乃至３９ｍｅｒ）を含むプローブである。配列番号３３０〜３５４は配列番号１２０〜１４４の塩基配列を相補的または逆相補的にしたものである。
５′− ｃｃａｃｃｇｔｇｇｇａｇｇｃａａｃｃｔｇｃｔｇｇｔｃａｔｃｇｔ −３′（３１ｍｅｒ）
５′− ｇｃｃａｃｃｇｔｇｇｇａｇｇｃａａｃｃｔｇｃｔｇｇｔｃａｔｃｇｔ −３′（３２ｍｅｒ）
５′− ｇｇｃｃａｃｃｇｔｇｇｇａｇｇｃａａｃｃｔｇｃｔｇｇｔｃａｔｃｇｔ −３′（３３ｍｅｒ）
５′− ｔｇｇｃｃａｃｃｇｔｇｇｇａｇｇｃａａｃｃｔｇｃｔｇｇｔｃａｔｃｇｔ −３′（３４ｍｅｒ）
５′−ｃｔｇｇｃｃａｃｃｇｔｇｇｇａｇｇｃａａｃｃｔｇｃｔｇｇｔｃａｔｃｇｔ −３′（３５ｍｅｒ）
５′− ｇｃｃａｃｃｇｔｇｇｇａｇｇｃａａｃｃｔｇｃｔｇｇｔｃａｔｃｇｔ −３′（３２ｍｅｒ）
５′− ｇｇｃｃａｃｃｇｔｇｇｇａｇｇｃａａｃｃｔｇｃｔｇｇｔｃａｔｃｇｔ −３′（３３ｍｅｒ）
５′− ｔｇｇｃｃａｃｃｇｔｇｇｇａｇｇｃａａｃｃｔｇｃｔｇｇｔｃａｔｃｇｔ −３′（３４ｍｅｒ）
５′−ｃｔｇｇｃｃａｃｃｇｔｇｇｇａｇｇｃａａｃｃｔｇｃｔｇｇｔｃａｔｃｇｔ −３′（３５ｍｅｒ）
５′− ｃｃａｃｃｇｔｇｇｇａｇｇｃａａｃｃｔｇｃｔｇｇｔｃａｔｃｇｔｇ −３′（３２ｍｅｒ）
５′− ｇｃｃａｃｃｇｔｇｇｇａｇｇｃａａｃｃｔｇｃｔｇｇｔｃａｔｃｇｔｇ −３′（３３ｍｅｒ）
５′− ｇｇｃｃａｃｃｇｔｇｇｇａｇｇｃａａｃｃｔｇｃｔｇｇｔｃａｔｃｇｔｇ −３′（３４ｍｅｒ）
５′− ｔｇｇｃｃａｃｃｇｔｇｇｇａｇｇｃａａｃｃｔｇｃｔｇｇｔｃａｔｃｇｔｇ −３′（３５ｍｅｒ）
５′−ｃｔｇｇｃｃａｃｃｇｔｇｇｇａｇｇｃａａｃｃｔｇｃｔｇｇｔｃａｔｃｇｔｇ −３′（３６ｍｅｒ）
５′− ｇｃｃａｃｃｇｔｇｇｇａｇｇｃａａｃｃｔｇｃｔｇｇｔｃａｔｃｇｔｇ −３′（３３ｍｅｒ）
５′− ｇｇｃｃａｃｃｇｔｇｇｇａｇｇｃａａｃｃｔｇｃｔｇｇｔｃａｔｃｇｔｇ −３′（３４ｍｅｒ）
５′− ｔｇｇｃｃａｃｃｇｔｇｇｇａｇｇｃａａｃｃｔｇｃｔｇｇｔｃａｔｃｇｔｇ −３′（３５ｍｅｒ）
５′−ｃｔｇｇｃｃａｃｃｇｔｇｇｇａｇｇｃａａｃｃｔｇｃｔｇｇｔｃａｔｃｇｔｇ −３′（３６ｍｅｒ）
５′− ｃｃａｃｃｇｔｇｇｇａｇｇｃａａｃｃｔｇｃｔｇｇｔｃａｔｃｇｔｇｇ −３′（３３ｍｅｒ）
５′− ｇｃｃａｃｃｇｔｇｇｇａｇｇｃａａｃｃｔｇｃｔｇｇｔｃａｔｃｇｔｇｇ −３′（３４ｍｅｒ）
５′− ｇｇｃｃａｃｃｇｔｇｇｇａｇｇｃａａｃｃｔｇｃｔｇｇｔｃａｔｃｇｔｇｇ −３′（３５ｍｅｒ）
５′− ｔｇｇｃｃａｃｃｇｔｇｇｇａｇｇｃａａｃｃｔｇｃｔｇｇｔｃａｔｃｇｔｇｇ −３′（３６ｍｅｒ）
５′−ｃｔｇｇｃｃａｃｃｇｔｇｇｇａｇｇｃａａｃｃｔｇｃｔｇｇｔｃａｔｃｇｔｇｇ −３′（３７ｍｅｒ）
５′− ｇｃｃａｃｃｇｔｇｇｇａｇｇｃａａｃｃｔｇｃｔｇｇｔｃａｔｃｇｔｇｇ −３′（３４ｍｅｒ）
５′− ｇｇｃｃａｃｃｇｔｇｇｇａｇｇｃａａｃｃｔｇｃｔｇｇｔｃａｔｃｇｔｇｇ −３′（３５ｍｅｒ）
５′− ｔｇｇｃｃａｃｃｇｔｇｇｇａｇｇｃａａｃｃｔｇｃｔｇｇｔｃａｔｃｇｔｇｇ −３′（３６ｍｅｒ）
５′−ｃｔｇｇｃｃａｃｃｇｔｇｇｇａｇｇｃａａｃｃｔｇｃｔｇｇｔｃａｔｃｇｔｇｇ −３′（３７ｍｅｒ）
５′− ｃｃａｃｃｇｔｇｇｇａｇｇｃａａｃｃｔｇｃｔｇｇｔｃａｔｃｇｔｇｇｃ −３′（３４ｍｅｒ）
５′− ｇｃｃａｃｃｇｔｇｇｇａｇｇｃａａｃｃｔｇｃｔｇｇｔｃａｔｃｇｔｇｇｃ −３′（３５ｍｅｒ）
５′− ｇｇｃｃａｃｃｇｔｇｇｇａｇｇｃａａｃｃｔｇｃｔｇｇｔｃａｔｃｇｔｇｇｃ −３′（３６ｍｅｒ）
５′− ｔｇｇｃｃａｃｃｇｔｇｇｇａｇｇｃａａｃｃｔｇｃｔｇｇｔｃａｔｃｇｔｇｇｃ −３′（３７ｍｅｒ）
５′−ｃｔｇｇｃｃａｃｃｇｔｇｇｇａｇｇｃａａｃｃｔｇｃｔｇｇｔｃａｔｃｇｔｇｇｃ −３′（３８ｍｅｒ）
５′− ｇｃｃａｃｃｇｔｇｇｇａｇｇｃａａｃｃｔｇｃｔｇｇｔｃａｔｃｇｔｇｇｃ −３′（３５ｍｅｒ）
５′− ｇｇｃｃａｃｃｇｔｇｇｇａｇｇｃａａｃｃｔｇｃｔｇｇｔｃａｔｃｇｔｇｇｃ −３′（３６ｍｅｒ）
５′− ｔｇｇｃｃａｃｃｇｔｇｇｇａｇｇｃａａｃｃｔｇｃｔｇｇｔｃａｔｃｇｔｇｇｃ −３′（３７ｍｅｒ）
５′−ｃｔｇｇｃｃａｃｃｇｔｇｇｇａｇｇｃａａｃｃｔｇｃｔｇｇｔｃａｔｃｇｔｇｇｃ −３′（３８ｍｅｒ）
５′− ｃｃａｃｃｇｔｇｇｇａｇｇｃａａｃｃｔｇｃｔｇｇｔｃａｔｃｇｔｇｇｃｃ−３′（３５ｍｅｒ）
５′− ｇｃｃａｃｃｇｔｇｇｇａｇｇｃａａｃｃｔｇｃｔｇｇｔｃａｔｃｇｔｇｇｃｃ−３′（３６ｍｅｒ）
５′− ｇｇｃｃａｃｃｇｔｇｇｇａｇｇｃａａｃｃｔｇｃｔｇｇｔｃａｔｃｇｔｇｇｃｃ−３′（３７ｍｅｒ）
５′− ｔｇｇｃｃａｃｃｇｔｇｇｇａｇｇｃａａｃｃｔｇｃｔｇｇｔｃａｔｃｇｔｇｇｃｃ−３′（３８ｍｅｒ）
５′−ｃｔｇｇｃｃａｃｃｇｔｇｇｇａｇｇｃａａｃｃｔｇｃｔｇｇｔｃａｔｃｇｔｇｇｃｃ−３′（３９ｍｅｒ）
５′− ｇｃｃａｃｃｇｔｇｇｇａｇｇｃａａｃｃｔｇｃｔｇｇｔｃａｔｃｇｔｇｇｃｃ−３′（３６ｍｅｒ）
５′− ｇｇｃｃａｃｃｇｔｇｇｇａｇｇｃａａｃｃｔｇｃｔｇｇｔｃａｔｃｇｔｇｇｃｃ−３′（３７ｍｅｒ）
５′− ｔｇｇｃｃａｃｃｇｔｇｇｇａｇｇｃａａｃｃｔｇｃｔｇｇｔｃａｔｃｇｔｇｇｃｃ−３′（３８ｍｅｒ）
５′−ｃｔｇｇｃｃａｃｃｇｔｇｇｇａｇｇｃａａｃｃｔｇｃｔｇｇｔｃａｔｃｇｔｇｇｃｃ−３′（３９ｍｅｒ）
このプローブには、緑色の発色色素が混合・結合・標識されて発色される。このプローブ、発色色素、増幅した上記対象遺伝子の混合物が加熱されると、このプローブは、対象遺伝子から剥がれ、蛍光共鳴エネルギー転移による緑色の励起光（発色色素の発色）は消える。上記端の糖「５′−」と「−３′」とは入れ替わって逆向きでもよい。
この５′−ｃｔｇｇｃｃａｃｃｇｔｇｇｇａｇｇｃａａｃｃｔｇｃｔｇｇｔｃａｔｃｇｔｇｇｃｃ−３′のプローブの塩基配列部分の端に塩基がさらに付加されて４３ｍｅｒまで長くなってもよい。この場合、図７の塩基配列に沿った塩基または相補的に置き換えられた塩基が付加されていく。
上述のβ３ＡＤＲＦＩＴＣ緑標識プローブの塩基配列のうち、１つ、２つまたは３つの塩基が別の異なる塩基に置き換えられても良い。これを変異β３ＡＤＲＦＩＴＣ緑標識プローブという。このように置き換えられた塩基のみは、上記対象遺伝子の対応する塩基に結合していないことになる。このように意図的に塩基を置き換えて一部結合しないようにすると、プローブが剥がれ易くなって、プローブが剥がれる温度が低くなり、対象遺伝子の変異の検出が早くなって容易になるし、後述するプローブが剥がれる温度のピーク特性がより明確になる。
上述のβ３ＡＤＲＦＩＴＣ緑標識プローブまたは変異β３ＡＤＲＦＩＴＣ緑標識プローブにつき、図１に対して図３に示すように、各塩基配列を相補的／逆相補的にしたプローブも含まれる。この相補的／逆相補的な置き換えは、緑標識プローブ及び赤標識プローブの両方のプローブにつき行なわれてもよいし、片方のプローブにつき行なわれてもよい。この場合、発色成分は、緑標識プローブ及び赤標識プローブに蛍光共鳴エネルギー転移の相関性のないものが用いられる。
この相補的／逆相補的なプローブは、β３ＡＤＲＦＩＴＣ緑標識プローブのａ（アデニン）、ｔ（チミン）、ｃ（シトシン）、ｇ（グアニン）が、ａ→ｔ、ｔ→ａ、ｃ→ｇ、ｇ→ｃに入れ換えられ、「５′−」と「−３′」との向きが入れ替わり、上記発色成分（蛍光色素）の標識位置が変わり、相補的β３ＡＤＲＦＩＴＣ緑標識プローブと呼ばれる。
（β３ＡＤＲＬＣ−Ｒｅｄ６４０赤標識プローブ）配列番号１４５〜１６２、３５５〜３７２
上記β３遺伝子及びその周辺に結合（ハイブリダイゼーション）させられる一対のプローブの他方、つまりβ３ＡＤＲＬＣ−Ｒｅｄ６４０赤標識プローブの塩基配列は以下の通りである。この赤標識プローブは対象遺伝子の変異箇所及びその周辺に結合するセンサープローブである。このβ３ＡＤＲＬＣ−Ｒｅｄ６４０赤標識プローブは、少なくとも「ａｔｃｇｃｃｔｇｇａｃｔｃｃｇ」または「ａｔｃｇｃｃｃｇｇａｃｔｃｃｇ」の塩基配列（１５ｍｅｒ乃至１９ｍｅｒ）を含むプローブである。
上記β３遺伝子及びその周辺に結合（ハイブリダイゼーション）させられる一対のプローブの他方、つまりβ３ＡＤＲＬＣ−Ｒｅｄ６４０赤標識プローブの塩基配列は以下の通りである。この赤標識プローブは対象遺伝子の変異箇所及びその周辺に結合するセンサープローブである。このβ３ＡＤＲＬＣ−Ｒｅｄ６４０赤標識プローブは、少なくとも「ａｔｃｇｃｃｔｇｇａｃｔｃｃｇ」または「ａｔｃｇｃｃｃｇｇａｃｔｃｃｇ」の塩基配列（１５ｍｅｒ乃至１９ｍｅｒ）を含むプローブである。
「ａｔｃｇｃｃｔｇｇａｃｔｃｃｇ」の塩基はβ３ＡＤＲ遺伝子が変異していない場合におけるもので、「ａｔｃｇｃｃｃｇｇａｃｔｃｃｇ」の塩基はβ３ＡＤＲ遺伝子が変異している場合におけるものである。配列番号３５５〜３７２は配列番号１４５〜１６２の塩基配列を相補的または逆相補的にしたものである。
５′− ａｔｃｇｃｃｔｇｇａｃｔｃｃｇ −３′（１５ｍｅｒ）
５′− ｃａｔｃｇｃｃｔｇｇａｃｔｃｃｇ −３′（１６ｍｅｒ）
５′−ｃｃａｔｃｇｃｃｔｇｇａｃｔｃｃｇ −３′（１７ｍｅｒ）
５′− ｃａｔｃｇｃｃｔｇｇａｃｔｃｃｇ −３′（１６ｍｅｒ）
５′−ｃｃａｔｃｇｃｃｔｇｇａｃｔｃｃｇ −３′（１７ｍｅｒ）
５′− ａｔｃｇｃｃｔｇｇａｃｔｃｃｇａ −３′（１６ｍｅｒ）
５′− ｃａｔｃｇｃｃｔｇｇａｃｔｃｃｇａ −３′（１７ｍｅｒ）
５′−ｃｃａｔｃｇｃｃｔｇｇａｃｔｃｃｇａ −３′（１８ｍｅｒ）
５′− ｃａｔｃｇｃｃｔｇｇａｃｔｃｃｇａ −３′（１７ｍｅｒ）
５′−ｃｃａｔｃｇｃｃｔｇｇａｃｔｃｃｇａ −３′（１８ｍｅｒ）
５′− ａｔｃｇｃｃｔｇｇａｃｔｃｃｇａｇ−３′（１７ｍｅｒ）
５′− ｃａｔｃｇｃｃｔｇｇａｃｔｃｃｇａｇ−３′（１８ｍｅｒ）
５′−ｃｃａｔｃｇｃｃｔｇｇａｃｔｃｃｇａｇ−３′（１９ｍｅｒ）
５′− ｃａｔｃｇｃｃｔｇｇａｃｔｃｃｇａｇ−３′（１８ｍｅｒ）
５′−ｃｃａｔｃｇｃｃｔｇｇａｃｔｃｃｇａｇ−３′（１９ｍｅｒ）
５′− ａｔｃｇｃｃｃｇｇａｃｔｃｃｇ −３′（１５ｍｅｒ）
５′− ｃａｔｃｇｃｃｃｇｇａｃｔｃｃｇ −３′（１６ｍｅｒ）
５′−ｃｃａｔｃｇｃｃｃｇｇａｃｔｃｃｇ −３′（１７ｍｅｒ）
５′− ｃａｔｃｇｃｃｃｇｇａｃｔｃｃｇ −３′（１６ｍｅｒ）
５′−ｃｃａｔｃｇｃｃｃｇｇａｃｔｃｃｇ −３′（１７ｍｅｒ）
５′− ａｔｃｇｃｃｃｇｇａｃｔｃｃｇａ −３′（１６ｍｅｒ）
５′− ｃａｔｃｇｃｃｃｇｇａｃｔｃｃｇａ −３′（１７ｍｅｒ）
５′−ｃｃａｔｃｇｃｃｃｇｇａｃｔｃｃｇａ −３′（１８ｍｅｒ）
５′− ｃａｔｃｇｃｃｃｇｇａｃｔｃｃｇａ −３′（１７ｍｅｒ）
５′−ｃｃａｔｃｇｃｃｃｇｇａｃｔｃｃｇａ −３′（１８ｍｅｒ）
５′− ａｔｃｇｃｃｃｇｇａｃｔｃｃｇａｇ−３′（１７ｍｅｒ）
５′− ｃａｔｃｇｃｃｃｇｇａｃｔｃｃｇａｇ−３′（１８ｍｅｒ）
５′−ｃｃａｔｃｇｃｃｃｇｇａｃｔｃｃｇａｇ−３′（１９ｍｅｒ）
５′− ｃａｔｃｇｃｃｃｇｇａｃｔｃｃｇａｇ−３′（１８ｍｅｒ）
５′−ｃｃａｔｃｇｃｃｃｇｇａｃｔｃｃｇａｇ−３′（１９ｍｅｒ）
このプローブには、赤色の発色色素が混合・結合・標識されて発色される。このプローブ、発色色素、増幅した上記対象遺伝子の混合物が加熱されると、このプローブは、対象遺伝子から剥がれ、蛍光共鳴エネルギー転移による赤色の励起光（発色色素の発色）は消える。上記端の糖「５′−」と「−３′」とは入れ替わって逆向きでもよい。
この５′−ｃｃａｔｃｇｃｃｔｇｇａｃｔｃｃｇａｇ−３′または５′−ｃｃａｔｃｇｃｃｃｇｇａｃｔｃｃｇａｇ−３′のプローブの塩基配列部分の端に塩基がさらに付加されて２３ｍｅｒまで長くなってもよい。この場合、図７の塩基配列に沿った塩基または相補的に置き換えられた塩基が付加されていく。
上述のβ３ＡＤＲＬＣ−Ｒｅｄ６４０赤標識プローブの塩基配列のうち、１つ、２つまたは３つの塩基が別の異なる塩基に置き換えられても良い。これを変異β３ＡＤＲＬＣ−Ｒｅｄ６４０赤標識プローブという。このように置き換えられた塩基のみは、上記対象遺伝子の対応する塩基に結合していないことになる。このように意図的に塩基を置き換えて一部結合しないようにすると、プローブが剥がれ易くなって、プローブが剥がれる温度が低くなり、対象遺伝子の変異の検出が早くなって容易になるし、後述するプローブが剥がれる温度のピーク特性がより明確になる。
上述のβ３ＡＤＲＬＣ−Ｒｅｄ６４０赤標識プローブまたは変異β３ＡＤＲＬＣ−Ｒｅｄ６４０赤標識プローブにつき、図１に対して図３に示すように、各塩基配列を相補的／逆相補的にしたプローブも含まれる。この相補的／逆相補的な置き換えは、緑標識プローブ及び赤標識プローブの両方のプローブにつき行なわれてもよいし、片方のプローブにつき行なわれてもよい。この場合、発色成分は、緑標識プローブ及び赤標識プローブに蛍光共鳴エネルギー転移の相関性のないものが用いられる。
この相補的／逆相補的なプローブは、β３ＡＤＲＦＩＴＣ緑標識プローブのａ（アデニン）、ｔ（チミン）、ｃ（シトシン）、ｇ（グアニン）が、ａ→ｔ、ｔ→ａ、ｃ→ｇ、ｇ→ｃに入れ換えられ、「５′−」と「−３′」との向きが入れ替わり、上記発色成分（蛍光色素）の標識位置が変わり、相補的β３ＡＤＲＦＩＴＣ緑標識プローブと呼ばれる。
以上のような緑標識プローブと赤標識プローブとの隙間は、塩基数で「０乃至１５」、望ましくは「０乃至１０」、より望ましくは「０乃至５」、さらに望ましくは「０乃至４」、よりさらに望ましくは「１乃至３」、さらにより望ましくは「１乃至２」、またさらにより望ましくは「１」であり、あまり離れない方がよい。この理由は、緑標識プローブと赤標識プローブとの間で蛍光共鳴エネルギー転移を起こす必要があるからである。
（６）プライマー（ＵＣＰ１）
（ＵＣＰ１フォワードプライマー）配列番号１６３〜１７１、３７３〜３８１
上記対象遺伝子のＵＣＰ１遺伝子は、以下の一対のプライマーの一方、つまりＵＣＰ１フォワードプライマーによって増幅される。このＵＣＰ１フォワードプライマーは、少なくとも「ｇａｔｔｃｔｔｃｔｇｔｃａｔｔｔｇｃａ」の塩基配列（１９ｍｅｒ乃至２３ｍｅｒ）を含むプライマーである。配列番号３７３〜３８１は配列番号１６３〜１７１の塩基配列を相補的または逆相補的にしたものである。
（ＵＣＰ１フォワードプライマー）配列番号１６３〜１７１、３７３〜３８１
上記対象遺伝子のＵＣＰ１遺伝子は、以下の一対のプライマーの一方、つまりＵＣＰ１フォワードプライマーによって増幅される。このＵＣＰ１フォワードプライマーは、少なくとも「ｇａｔｔｃｔｔｃｔｇｔｃａｔｔｔｇｃａ」の塩基配列（１９ｍｅｒ乃至２３ｍｅｒ）を含むプライマーである。配列番号３７３〜３８１は配列番号１６３〜１７１の塩基配列を相補的または逆相補的にしたものである。
５′− ｇａｔｔｃｔｔｃｔｇｔｃａｔｔｔｇｃａ −３′（１９ｍｅｒ）
５′− ｔｇａｔｔｃｔｔｃｔｇｔｃａｔｔｔｇｃａ −３′（２０ｍｅｒ）
５′−ｔｔｇａｔｔｃｔｔｃｔｇｔｃａｔｔｔｇｃａ −３′（２１ｍｅｒ）
５′− ｔｇａｔｔｃｔｔｃｔｇｔｃａｔｔｔｇｃａ −３′（２０ｍｅｒ）
５′−ｔｔｇａｔｔｃｔｔｃｔｇｔｃａｔｔｔｇｃａ −３′（２１ｍｅｒ）
５′− ｇａｔｔｃｔｔｃｔｇｔｃａｔｔｔｇｃａｃ −３′（２０ｍｅｒ）
５′− ｔｇａｔｔｃｔｔｃｔｇｔｃａｔｔｔｇｃａｃ −３′（２１ｍｅｒ）
５′−ｔｔｇａｔｔｃｔｔｃｔｇｔｃａｔｔｔｇｃａｃ −３′（２２ｍｅｒ）
５′− ｔｇａｔｔｃｔｔｃｔｇｔｃａｔｔｔｇｃａｃ −３′（２１ｍｅｒ）
５′−ｔｔｇａｔｔｃｔｔｃｔｇｔｃａｔｔｔｇｃａｃ −３′（２２ｍｅｒ）
５′− ｇａｔｔｃｔｔｃｔｇｔｃａｔｔｔｇｃａｃａ−３′（２１ｍｅｒ）
５′− ｔｇａｔｔｃｔｔｃｔｇｔｃａｔｔｔｇｃａｃａ−３′（２２ｍｅｒ）
５′−ｔｔｇａｔｔｃｔｔｃｔｇｔｃａｔｔｔｇｃａｃａ−３′（２３ｍｅｒ）
５′− ｔｇａｔｔｃｔｔｃｔｇｔｃａｔｔｔｇｃａｃａ−３′（２２ｍｅｒ）
５′−ｔｔｇａｔｔｃｔｔｃｔｇｔｃａｔｔｔｇｃａｃａ−３′（２３ｍｅｒ）
この５′−ｔｔｇａｔｔｃｔｔｃｔｇｔｃａｔｔｔｇｃａｃａ−３′のプライマーの塩基配列部分の端に塩基がさらに付加されて２７ｍｅｒまで長くなってもよい。この場合、図５の塩基配列に沿った塩基または相補的に置き換えられた塩基が付加されていく。
（ＵＣＰ１リバースプライマー）配列番号１７２〜１８０、３８２〜３９０
上記対象遺伝子のＵＣＰ１遺伝子は、以下の一対のプライマーの他方、つまりＵＣＰ１リバースプライマーによって増幅される。このＵＣＰ１リバースプライマーは、少なくとも「ｇｇｃａａｃｔｇａｃｃｃｔｔｔａｔｇ」の塩基配列（１８ｍｅｒ乃至２２ｍｅｒ）を含むプライマーである。配列番号３８２〜３９０は配列番号１７２〜１８０の塩基配列を相補的または逆相補的にしたものである。
上記対象遺伝子のＵＣＰ１遺伝子は、以下の一対のプライマーの他方、つまりＵＣＰ１リバースプライマーによって増幅される。このＵＣＰ１リバースプライマーは、少なくとも「ｇｇｃａａｃｔｇａｃｃｃｔｔｔａｔｇ」の塩基配列（１８ｍｅｒ乃至２２ｍｅｒ）を含むプライマーである。配列番号３８２〜３９０は配列番号１７２〜１８０の塩基配列を相補的または逆相補的にしたものである。
５′− ｇｇｃａａｃｔｇａｃｃｃｔｔｔａｔｇ −３′（１８ｍｅｒ）
５′− ｇｇｇｃａａｃｔｇａｃｃｃｔｔｔａｔｇ −３′（１９ｍｅｒ）
５′−ａｇｇｇｃａａｃｔｇａｃｃｃｔｔｔａｔｇ −３′（２０ｍｅｒ）
５′− ｇｇｇｃａａｃｔｇａｃｃｃｔｔｔａｔｇ −３′（１９ｍｅｒ）
５′−ａｇｇｇｃａａｃｔｇａｃｃｃｔｔｔａｔｇ −３′（２０ｍｅｒ）
５′− ｇｇｃａａｃｔｇａｃｃｃｔｔｔａｔｇａ −３′（１９ｍｅｒ）
５′− ｇｇｇｃａａｃｔｇａｃｃｃｔｔｔａｔｇａ −３′（２０ｍｅｒ）
５′−ａｇｇｇｃａａｃｔｇａｃｃｃｔｔｔａｔｇａ −３′（２１ｍｅｒ）
５′− ｇｇｇｃａａｃｔｇａｃｃｃｔｔｔａｔｇａ −３′（２０ｍｅｒ）
５′−ａｇｇｇｃａａｃｔｇａｃｃｃｔｔｔａｔｇａ −３′（２１ｍｅｒ）
５′− ｇｇｃａａｃｔｇａｃｃｃｔｔｔａｔｇａｃ−+３′（２０ｍｅｒ）
５′− ｇｇｇｃａａｃｔｇａｃｃｃｔｔｔａｔｇａｃ−３′（２１ｍｅｒ）
５′−ａｇｇｇｃａａｃｔｇａｃｃｃｔｔｔａｔｇａｃ−３′（２２ｍｅｒ）
５′− ｇｇｇｃａａｃｔｇａｃｃｃｔｔｔａｔｇａｃ−３′（２１ｍｅｒ）
５′−ａｇｇｇｃａａｃｔｇａｃｃｃｔｔｔａｔｇａｃ−３′（２２ｍｅｒ）
この５′−ａｇｇｇｃａａｃｔｇａｃｃｃｔｔｔａｔｇａｃ−３′のプライマーの塩基配列部分の端に塩基がさらに付加されて２６ｍｅｒまで長くなってもよい。この場合、図５の塩基配列に沿った塩基または相補的に置き換えられた塩基が付加されていく。
図１に対して図４に示すように、上述の一対のプライマーにつき、各塩基配列を相補的／逆相補的にした一対のプライマーも含まれる。このプライマーは、上記プライマーのａ（アデニン）、ｔ（チミン）、ｃ（シトシン）、ｇ（グアニン）が、ａ→ｔ、ｔ→ａ、ｃ→ｇ、ｇ→ｃに入れ換えられ、相補的プライマーと呼ばれる。
（７）プライマー（β２）
（β２ＡＤＲフォワードプライマー）配列番号１８１〜１８９、３９１〜３９９
上記対象遺伝子のβ２ＡＤＲ遺伝子は、以下の一対のプライマーの一方、つまりβ２ＡＤＲフォワードプライマーによって増幅される。このβ２ＡＤＲフォワードプライマーは、少なくとも「ｔｔｃｔｔｇｃｔｇｇｃａｃｃｃａａ」の塩基配列（１７ｍｅｒ乃至２１ｍｅｒ）を含むプライマーである。配列番号３９１〜３９９は配列番号１８１〜１８９の塩基配列を相補的または逆相補的にしたものである。
（β２ＡＤＲフォワードプライマー）配列番号１８１〜１８９、３９１〜３９９
上記対象遺伝子のβ２ＡＤＲ遺伝子は、以下の一対のプライマーの一方、つまりβ２ＡＤＲフォワードプライマーによって増幅される。このβ２ＡＤＲフォワードプライマーは、少なくとも「ｔｔｃｔｔｇｃｔｇｇｃａｃｃｃａａ」の塩基配列（１７ｍｅｒ乃至２１ｍｅｒ）を含むプライマーである。配列番号３９１〜３９９は配列番号１８１〜１８９の塩基配列を相補的または逆相補的にしたものである。
５′− ｔｔｃｔｔｇｃｔｇｇｃａｃｃｃａａ −３′（１７ｍｅｒ）
５′− ｃｔｔｃｔｔｇｃｔｇｇｃａｃｃｃａａ −３′（１８ｍｅｒ）
５′−ｃｃｔｔｃｔｔｇｃｔｇｇｃａｃｃｃａａ −３′（１９ｍｅｒ）
５′− ｃｔｔｃｔｔｇｃｔｇｇｃａｃｃｃａａ −３′（１８ｍｅｒ）
５′−ｃｃｔｔｃｔｔｇｃｔｇｇｃａｃｃｃａａ −３′（１９ｍｅｒ）
５′− ｔｔｃｔｔｇｃｔｇｇｃａｃｃｃａａｔ −３′（１８ｍｅｒ）
５′− ｃｔｔｃｔｔｇｃｔｇｇｃａｃｃｃａａｔ −３′（１９ｍｅｒ）
５′−ｃｃｔｔｃｔｔｇｃｔｇｇｃａｃｃｃａａｔ −３′（２０ｍｅｒ）
５′− ｃｔｔｃｔｔｇｃｔｇｇｃａｃｃｃａａｔ −３′（１９ｍｅｒ）
５′−ｃｃｔｔｃｔｔｇｃｔｇｇｃａｃｃｃａａｔ −３′（２０ｍｅｒ）
５′− ｔｔｃｔｔｇｃｔｇｇｃａｃｃｃａａｔｇ−３′（１９ｍｅｒ）
５′− ｃｔｔｃｔｔｇｃｔｇｇｃａｃｃｃａａｔｇ−３′（２０ｍｅｒ）
５′−ｃｃｔｔｃｔｔｇｃｔｇｇｃａｃｃｃａａｔｇ−３′（２１ｍｅｒ）
５′− ｃｔｔｃｔｔｇｃｔｇｇｃａｃｃｃａａｔｇ−３′（２０ｍｅｒ）
５′−ｃｃｔｔｃｔｔｇｃｔｇｇｃａｃｃｃａａｔｇ−３′（２１ｍｅｒ）
この５′−ｃｃｔｔｃｔｔｇｃｔｇｇｃａｃｃｃａａｔｇ−３′のプライマーの塩基配列部分の端に塩基がさらに付加されて２５ｍｅｒまで長くなってもよい。この場合、図６の塩基配列に沿った塩基または相補的に置き換えられた塩基が付加されていく。
（β２ＡＤＲリバースプライマー）配列番号１９０〜１９８、４００〜４０８
上記対象遺伝子のβ２ＡＤＲ遺伝子は、以下の一対のプライマーの他方、つまりβ２ＡＤＲリバースプライマーによって増幅される。このβ２ＡＤＲリバースプライマーは、少なくとも「ａｇｇｃｃａｇｔｇａａｇｔｇａｔｇａ」の塩基配列（１８ｍｅｒ乃至２２ｍｅｒ）を含むプライマーである。配列番号４００〜４０８は配列番号１９０〜１９８の塩基配列を相補的または逆相補的にしたものである。
上記対象遺伝子のβ２ＡＤＲ遺伝子は、以下の一対のプライマーの他方、つまりβ２ＡＤＲリバースプライマーによって増幅される。このβ２ＡＤＲリバースプライマーは、少なくとも「ａｇｇｃｃａｇｔｇａａｇｔｇａｔｇａ」の塩基配列（１８ｍｅｒ乃至２２ｍｅｒ）を含むプライマーである。配列番号４００〜４０８は配列番号１９０〜１９８の塩基配列を相補的または逆相補的にしたものである。
５′− ａｇｇｃｃａｇｔｇａａｇｔｇａｔｇａ −３′（１８ｍｅｒ）
５′− ｃａｇｇｃｃａｇｔｇａａｇｔｇａｔｇａ −３′（１９ｍｅｒ）
５′−ａｃａｇｇｃｃａｇｔｇａａｇｔｇａｔｇａ −３′（２０ｍｅｒ）
５′− ｃａｇｇｃｃａｇｔｇａａｇｔｇａｔｇａ −３′（１９ｍｅｒ）
５′−ａｃａｇｇｃｃａｇｔｇａａｇｔｇａｔｇａ −３′（２０ｍｅｒ）
５′− ａｇｇｃｃａｇｔｇａａｇｔｇａｔｇａａ −３′（１９ｍｅｒ）
５′− ｃａｇｇｃｃａｇｔｇａａｇｔｇａｔｇａａ −３′（２０ｍｅｒ）
５′−ａｃａｇｇｃｃａｇｔｇａａｇｔｇａｔｇａａ −３′（２１ｍｅｒ）
５′− ｃａｇｇｃｃａｇｔｇａａｇｔｇａｔｇａａ −３′（２０ｍｅｒ）
５′−ａｃａｇｇｃｃａｇｔｇａａｇｔｇａｔｇａａ −３′（２１ｍｅｒ）
５′− ａｇｇｃｃａｇｔｇａａｇｔｇａｔｇａａｇ−３′（２０ｍｅｒ）
５′− ｃａｇｇｃｃａｇｔｇａａｇｔｇａｔｇａａｇ−３′（２１ｍｅｒ）
５′−ａｃａｇｇｃｃａｇｔｇａａｇｔｇａｔｇａａｇ−３′（２２ｍｅｒ）
５′− ｃａｇｇｃｃａｇｔｇａａｇｔｇａｔｇａａｇ−３′（２１ｍｅｒ）
５′−ａｃａｇｇｃｃａｇｔｇａａｇｔｇａｔｇａａｇ−３′（２２ｍｅｒ）
この５′−ａｃａｇｇｃｃａｇｔｇａａｇｔｇａｔｇａａｇ−３′のプライマーの塩基配列部分の端に塩基がさらに付加されて２６ｍｅｒまで長くなってもよい。この場合、図６の塩基配列に沿った塩基または相補的に置き換えられた塩基が付加されていく。
図１に対して図４に示すように、上述の一対のプライマーにつき、各塩基配列を相補的／逆相補的にした一対のプライマーも含まれる。このプライマーは、上記プライマーのａ（アデニン）、ｔ（チミン）、ｃ（シトシン）、ｇ（グアニン）が、ａ→ｔ、ｔ→ａ、ｃ→ｇ、ｇ→ｃに入れ換えられ、相補的プライマーと呼ばれる。
（８）プライマー（β３）配列番号１９９〜２１６、４０９〜４２６
上記対象遺伝子のβ３ＡＤＲ遺伝子は、以下の一対のプライマーの一方、つまりβ３ＡＤＲフォワードプライマーによって増幅される。このβ３ＡＤＲフォワードプライマーは、少なくとも「ｃｔｔｃｃｔｔｃｔｔｔｃｃｃｔａｃｃ」の塩基配列（１８ｍｅｒ乃至２２ｍｅｒ）を含むプライマーである。配列番号４０９〜４２６は配列番号１９９〜２１６の塩基配列を相補的または逆相補的にしたものである。
上記対象遺伝子のβ３ＡＤＲ遺伝子は、以下の一対のプライマーの一方、つまりβ３ＡＤＲフォワードプライマーによって増幅される。このβ３ＡＤＲフォワードプライマーは、少なくとも「ｃｔｔｃｃｔｔｃｔｔｔｃｃｃｔａｃｃ」の塩基配列（１８ｍｅｒ乃至２２ｍｅｒ）を含むプライマーである。配列番号４０９〜４２６は配列番号１９９〜２１６の塩基配列を相補的または逆相補的にしたものである。
５′− ｃｔｔｃｃｔｔｃｔｔｔｃｃｃｔａｃｃ −３′（１８ｍｅｒ）
５′− ｃｃｔｔｃｃｔｔｃｔｔｔｃｃｃｔａｃｃ −３′（１９ｍｅｒ）
５′−ｔｃｃｔｔｃｃｔｔｃｔｔｔｃｃｃｔａｃｃ −３′（２０ｍｅｒ）
５′− ｃｃｔｔｃｃｔｔｃｔｔｔｃｃｃｔａｃｃ −３′（１９ｍｅｒ）
５′−ｔｃｃｔｔｃｃｔｔｃｔｔｔｃｃｃｔａｃｃ −３′（２０ｍｅｒ）
５′− ｃｔｔｃｃｔｔｃｔｔｔｃｃｃｔａｃｃｇ −３′（１９ｍｅｒ）
５′− ｃｃｔｔｃｃｔｔｃｔｔｔｃｃｃｔａｃｃｇ −３′（２０ｍｅｒ）
５′−ｔｃｃｔｔｃｃｔｔｃｔｔｔｃｃｃｔａｃｃｇ −３′（２１ｍｅｒ）
５′− ｃｃｔｔｃｃｔｔｃｔｔｔｃｃｃｔａｃｃｇ −３′（２０ｍｅｒ）
５′−ｔｃｃｔｔｃｃｔｔｃｔｔｔｃｃｃｔａｃｃｇ −３′（２１ｍｅｒ）
５′− ｃｔｔｃｃｔｔｃｔｔｔｃｃｃｔａｃｃｇｃ−３′（２０ｍｅｒ）
５′− ｃｃｔｔｃｃｔｔｃｔｔｔｃｃｃｔａｃｃｇｃ−３′（２１ｍｅｒ）
５′−ｔｃｃｔｔｃｃｔｔｃｔｔｔｃｃｃｔａｃｃｇｃ−３′（２２ｍｅｒ）
５′− ｃｃｔｔｃｃｔｔｃｔｔｔｃｃｃｔａｃｃｇｃ−３′（２１ｍｅｒ）
５′−ｔｃｃｔｔｃｃｔｔｃｔｔｔｃｃｃｔａｃｃｇｃ−３′（２２ｍｅｒ）
この５′−ｔｃｃｔｔｃｃｔｔｃｔｔｔｃｃｃｔａｃｃｇｃ−３′のプライマーの塩基配列部分の端に塩基がさらに付加されて２６ｍｅｒまで長くなってもよい。この場合、図７の塩基配列に沿った塩基または相補的に置き換えられた塩基が付加されていく。
上記対象遺伝子のβ３ＡＤＲ遺伝子は、以下の一対のプライマーの他方、つまりβ３ＡＤＲリバースプライマーによって増幅される。このβ３ＡＤＲリバースプライマーは、少なくとも「ｇｔｃａｔｇｇｔｃｔｇｇａｇｔｃｔｃ」の塩基配列（１８ｍｅｒ乃至２２ｍｅｒ）を含むプライマーである。
５′− ｇｔｃａｔｇｇｔｃｔｇｇａｇｔｃｔｃ −３′（１８ｍｅｒ）
５′− ｇｇｔｃａｔｇｇｔｃｔｇｇａｇｔｃｔｃ −３′（１９ｍｅｒ）
５′−ｔｇｇｔｃａｔｇｇｔｃｔｇｇａｇｔｃｔｃ −３′（２０ｍｅｒ）
５′− ｇｇｔｃａｔｇｇｔｃｔｇｇａｇｔｃｔｃ −３′（１９ｍｅｒ）
５′−ｔｇｇｔｃａｔｇｇｔｃｔｇｇａｇｔｃｔｃ −３′（２０ｍｅｒ）
５′− ｇｔｃａｔｇｇｔｃｔｇｇａｇｔｃｔｃｇ −３′（１９ｍｅｒ）
５′− ｇｇｔｃａｔｇｇｔｃｔｇｇａｇｔｃｔｃｇ −３′（２０ｍｅｒ）
５′−ｔｇｇｔｃａｔｇｇｔｃｔｇｇａｇｔｃｔｃｇ −３′（２１ｍｅｒ）
５′− ｇｇｔｃａｔｇｇｔｃｔｇｇａｇｔｃｔｃｇ −３′（２０ｍｅｒ）
５′−ｔｇｇｔｃａｔｇｇｔｃｔｇｇａｇｔｃｔｃｇ −３′（２１ｍｅｒ）
５′− ｇｔｃａｔｇｇｔｃｔｇｇａｇｔｃｔｃｇｇ−３′（２０ｍｅｒ）
５′− ｇｇｔｃａｔｇｇｔｃｔｇｇａｇｔｃｔｃｇｇ−３′（２１ｍｅｒ）
５′−ｔｇｇｔｃａｔｇｇｔｃｔｇｇａｇｔｃｔｃｇｇ−３′（２２ｍｅｒ）
５′− ｇｇｔｃａｔｇｇｔｃｔｇｇａｇｔｃｔｃｇｇ−３′（２１ｍｅｒ）
５′−ｔｇｇｔｃａｔｇｇｔｃｔｇｇａｇｔｃｔｃｇｇ−３′（２２ｍｅｒ）
この５′−ｔｇｇｔｃａｔｇｇｔｃｔｇｇａｇｔｃｔｃｇｇ−３′のプライマーの塩基配列部分の端に塩基がさらに付加されて２６ｍｅｒまで長くなってもよい。この場合、図７の塩基配列に沿った塩基または相補的に置き換えられた塩基が付加されていく。
図１に対して図４に示すように、上述の一対のプライマーにつき、各塩基配列を相補的／逆相補的にした一対のプライマーも含まれる。この相補的／逆相補的なプライマーは、上記プライマーのａ（アデニン）、ｔ（チミン）、ｃ（シトシン）、ｇ（グアニン）が、ａ→ｔ、ｔ→ａ、ｃ→ｇ、ｇ→ｃに入れ換えられ、相補的プライマーと呼ばれる。
（９）反応液と反応条件（ＵＣＰ１）
上記対象遺伝子のＵＣＰ１遺伝子の変異の検出は、以下の反応液で以下の反応条件で実行される。
上記対象遺伝子のＵＣＰ１遺伝子の変異の検出は、以下の反応液で以下の反応条件で実行される。
（反応液キット）
（Ｕａ）ＤＮＡ溶液 ２０〜５０ｎｇ
（Ｕｂ）調整済みライトサイクラーファストスタート反応ミックス ２．０μＬ
（Ｕｃ）塩化マグネシウム溶液（２５ｍＭ） １．６μＬ
（Ｕｄ）ＵＣＰ１フォワードプライマー（１０μＭ） １．０μＬ
（Ｕｅ）ＵＣＰ１リバースプライマー（１０μＭ） １．０μＬ
（Ｕｆ）ＵＣＰ１ＦＩＴＣ緑標識プローブＮｏ１（１０μＭ） ０．２μＬ
（Ｕｇ）ＵＣＰ１ＬＣ−Ｒｅｄ６４０赤標識プローブ（１０μＭ） ０．２μＬ
（Ｕｈ）蒸留水 約１４μＬ
（Ｕａ）ＤＮＡ溶液 ２０〜５０ｎｇ
（Ｕｂ）調整済みライトサイクラーファストスタート反応ミックス ２．０μＬ
（Ｕｃ）塩化マグネシウム溶液（２５ｍＭ） １．６μＬ
（Ｕｄ）ＵＣＰ１フォワードプライマー（１０μＭ） １．０μＬ
（Ｕｅ）ＵＣＰ１リバースプライマー（１０μＭ） １．０μＬ
（Ｕｆ）ＵＣＰ１ＦＩＴＣ緑標識プローブＮｏ１（１０μＭ） ０．２μＬ
（Ｕｇ）ＵＣＰ１ＬＣ−Ｒｅｄ６４０赤標識プローブ（１０μＭ） ０．２μＬ
（Ｕｈ）蒸留水 約１４μＬ
この反応には、ロシュ・ダイアグノスティックス株式会社のザライトサイクラーシステム（The Light Cycler System）、ライトサイクラーシステム（Light Cycler System）３３０またはライトサイクラークイックシステム（Light Cycler Quick System）３３０を用い、プログラムとしてライトサイクラーソフトウエア（Light Cycler Software Ver3.30またはVer1.20）を用い、ライトサイクラーファストスタートＤＮＡマスターハイブリダイゼーションプローブを使って、上記（Ｕｂ）の調整済みライトサイクラーファストスタート反応ミックスはこの能書に基づいて作成される。
上記プローブには、蛍光共鳴エネルギー移動などのための蛍光色素・発色酵素などの発色成分（供与体色素／ドナーフルオレッセン）が予めまたは事前に若しくは後でまたは事後に混合され、この発色成分は上記各プローブに結合・標識される。このような発色成分が結合したプローブまたは発色成分は公知であり、特開２００４−３１３２０号明細書などにも示される。
このプローブ（センサープローブ）に結合した発色成分にレーザー光線または青色光線が照射されると、対象遺伝子に結合したＵＣＰ１ＦＩＴＣ緑標識プローブＮｏ１からは緑の蛍光が発光され、対象遺伝子に結合したＵＣＰ１ＬＣ−Ｒｅｄ６４０赤標識プローブからは蛍光共鳴エネルギー転移によって赤の蛍光が発光される。加熱されてこのプローブが対象遺伝子から順次剥れると、この蛍光共鳴エネルギー転移による励起光（蛍光）は減少または消える。
上記（Ｕａ）のＤＮＡ溶液は、検査する対象遺伝子ＤＮＡのサンプルである。なお、（Ｕｆ）のＵＣＰ１ＦＩＴＣ緑標識プローブＮｏ１は、上記変異ＵＣＰ１ＦＩＴＣ緑標識プローブＮｏ２に置き換えられても良い。変異ＵＣＰ１ＦＩＴＣ緑標識プローブＮｏ２の容量は同じく０．２μＬである。（Ｕｄ）（Ｕｅ）のプライマー、（Ｕｆ）（Ｕｇ）のプローブは上述したとおりである。場合によって塩化マグネシウム溶液はなくてもよい。
（反応条件）
上記の反応液を、例えばディネイチャーし、ＰＣＲ（遺伝子増幅反応 Polymerase Chain Reaction）を施し、メルティングアナライシスを行い、冷却する。ディネイチャーでは、対象遺伝子のＤＮＡサンプルがほどかれて分離され、例えば約１０分間約９５℃に加熱される。
上記の反応液を、例えばディネイチャーし、ＰＣＲ（遺伝子増幅反応 Polymerase Chain Reaction）を施し、メルティングアナライシスを行い、冷却する。ディネイチャーでは、対象遺伝子のＤＮＡサンプルがほどかれて分離され、例えば約１０分間約９５℃に加熱される。
上記ＰＣＲでは、例えばディネイチャー→アニーリング→エクステンションのサーマルサイクルが所定回数例えば４０回繰り返され、理論上、対象遺伝子ＤＮＡサンプルが２ 40 倍に増幅される。ＰＣＲのディネイチャーでは、上記対象遺伝子のＤＮＡサンプルがほどかれて分離され、例えば約１０秒間約９５℃に加熱される。
ＰＣＲのアニーリングでは、上記プライマーが上記対象遺伝子に結合され、例えば約１０秒間約６７℃に冷却される。ＰＣＲのエクステンションでは、この結合されたプライマーから上記対象遺伝子ＤＮＡが相補的／逆相補的に複製され、例えば約９秒間約７２℃に加熱される。上記ＰＣＲの増幅のアニーリング温度は６４℃乃至７０℃、望ましくは６５℃乃至６９℃、より望ましくは６６℃乃至６８℃、さらに望ましくは約６７℃である。
上記メルティングアナライシス（加熱）では、上記遺伝子の変異箇所に結合している上記（Ｕｆ）のＵＣＰ１ＦＩＴＣ緑標識プローブＮｏ１が、異なる温度で上記対象遺伝子のＵＣＰ１遺伝子及びその周辺から剥がれ、上記発色成分の発色（励起光）が低下し、この低下するときの温度の違いに基づいて、上記対象遺伝子のＵＣＰ１遺伝子の差異・変異が検出される。
上記メルティングアナライシスでは、例えば約０．０００１乃至０．０１秒間約９５℃に加熱され、約１２０秒間約４０℃に加温され、毎秒約０．２℃の上昇レートで、キャピラリー内の温度が約８０℃まで上昇され、これが例えば１サイクル行なわれる。上記メルティングアナライシスにおける、上記プローブを上記対象遺伝子から剥がすときの加熱は、上記約４０℃から上記約８０℃に向かって、０．０１℃／秒乃至０．５℃／秒、例えば約０．１℃／秒の割合で加熱される。
（１０）反応液と反応条件（β２）
上記対象遺伝子のβ２ＡＤＲ遺伝子の変異の検出は、以下の反応液で以下の反応条件で実行される。
上記対象遺伝子のβ２ＡＤＲ遺伝子の変異の検出は、以下の反応液で以下の反応条件で実行される。
（反応液キット）
（β２ａ）ＤＮＡ溶液 ２０〜５０ｎｇ
（β２ｂ）調整済みライトサイクラーファストスタート反応ミックス ２．０μＬ
（β２ｃ）塩化マグネシウム溶液（２５ｍＭ） １．６μＬ
（β２ｄ）β２ＡＤＲフォワードプライマー（１０μＭ） １．０μＬ
（β２ｅ）β２ＡＤＲリバースプライマー（１０μＭ） １．０μＬ
（β２ｆ）β２ＡＤＲＦＩＴＣ緑標識プローブ（１０μＭ） ０．２μＬ
（β２ｇ）β２ＡＤＲＬＣ−Ｒｅｄ６４０赤標識プローブ（１０μＭ） ０．２μＬ
（β２ｈ）蒸留水 約１４μＬ
（β２ａ）ＤＮＡ溶液 ２０〜５０ｎｇ
（β２ｂ）調整済みライトサイクラーファストスタート反応ミックス ２．０μＬ
（β２ｃ）塩化マグネシウム溶液（２５ｍＭ） １．６μＬ
（β２ｄ）β２ＡＤＲフォワードプライマー（１０μＭ） １．０μＬ
（β２ｅ）β２ＡＤＲリバースプライマー（１０μＭ） １．０μＬ
（β２ｆ）β２ＡＤＲＦＩＴＣ緑標識プローブ（１０μＭ） ０．２μＬ
（β２ｇ）β２ＡＤＲＬＣ−Ｒｅｄ６４０赤標識プローブ（１０μＭ） ０．２μＬ
（β２ｈ）蒸留水 約１４μＬ
この反応には、ロシュ・ダイアグノスティックス株式会社のザライトサイクラーシステム（The Light Cycler System）、ライトサイクラーシステム（Light Cycler System）３３０またはライトサイクラークイックシステム（Light Cycler Quick System）３３０を用い、プログラムとしてライトサイクラーソフトウエア（Light Cycler Software Ver3.30またはVer1.20）を用い、ライトサイクラーファストスタートＤＮＡマスターハイブリダイゼーションプローブを使って、上記（β２ｂ）の調整済みライトサイクラーファストスタート反応ミックスはこの能書に基づいて作成される。
上記プローブには、蛍光共鳴エネルギー移動などのための蛍光色素・発色酵素などの発色成分（供与体色素／ドナーフルオレッセン）が予めまたは事前に若しくは後でまたは事後に混合され、この発色成分は上記各プローブに結合・標識される。このような発色成分が結合したプローブまたは発色成分は公知であるし、特開２００４−３１３２０号明細書などに示される。
このプローブ（センサープローブ）に結合した発色成分にレーザー光線または青色光線が照射されると、β２ＡＤＲＦＩＴＣ緑標識プローブからは緑の蛍光が発光され、β２ＡＤＲＬＣ−Ｒｅｄ６４０赤標識プローブからは蛍光共鳴エネルギー転移によって赤の蛍光が発光される。加熱されてこのプローブが対象遺伝子から順次剥れると、この蛍光共鳴エネルギー転移による励起光（蛍光）は減少または消える。
上記（β２ａ）のＤＮＡ溶液は、検査する対象遺伝子ＤＮＡのサンプルである。（β２ｄ）のβ２ＡＤＲフォワードプライマー、（β２ｅ）のβ２ＡＤＲリバースプライマー、（β２ｆ）のβ２ＡＤＲＦＩＴＣ緑標識プローブ、（β２ｇ）のβ２ＡＤＲＬＣ−Ｒｅｄ６４０赤標識プローブは上述したとおりである。場合によって塩化マグネシウム溶液はなくてもよい。
（反応条件）
上記の反応液を、例えばディネイチャーし、ＰＣＲ（遺伝子増幅反応 Polymerase Chain Reaction）を施し、メルティングアナライシスを行い、冷却する。ディネイチャーでは、対象遺伝子のＤＮＡサンプルがほどかれて分離され、例えば約１０分間約９５℃に加熱される。
上記の反応液を、例えばディネイチャーし、ＰＣＲ（遺伝子増幅反応 Polymerase Chain Reaction）を施し、メルティングアナライシスを行い、冷却する。ディネイチャーでは、対象遺伝子のＤＮＡサンプルがほどかれて分離され、例えば約１０分間約９５℃に加熱される。
上記ＰＣＲでは、例えばディネイチャー→アニーリング→エクステンションのサーマルサイクルが所定回数例えば４０回繰り返され、理論上、対象遺伝子ＤＮＡサンプルが２ 40 倍に増幅される。ＰＣＲのディネイチャーでは、上記対象遺伝子のＤＮＡサンプルがほどかれて分離され、例えば約１０秒間約９５℃に加熱される。
ＰＣＲのアニーリングでは、上記プライマーが上記対象遺伝子に結合され、例えば約５秒間約６４℃に冷却される。ＰＣＲのエクステンションでは、この結合されたプライマーから上記対象遺伝子ＤＮＡが相補的／逆相補的に複製され、例えば約７秒間約７２℃に加熱される。上記ＰＣＲの増幅のアニーリング温度は６１℃乃至６７℃、望ましくは６２℃乃至６６℃、より望ましくは６３℃乃至６５℃、さらに望ましくは約６４℃である。
上記メルティングアナライシス（加熱）では、上記遺伝子の変異箇所に結合している上記（β２ｆ）のβ２ＡＤＲＦＩＴＣ緑標識プローブが異なる温度で上記対象遺伝子のβ２ＡＤＲ遺伝子及びその周辺から剥がれ、上記発色成分の発色（励起光）が低下し、この低下するときの温度の違いに基づいて、上記対象遺伝子の差異・変異が検出される。
上記メルティングアナライシスでは、例えば約０．０００１乃至０．０１秒間約９５℃に加熱され、約１２０秒間約４０℃に加温され、毎秒約０．２℃の上昇レートで、キャピラリー内の温度が約８０℃まで上昇され、これが例えば１サイクル行なわれる。上記メルティングアナライシスにおける、上記プローブを上記対象遺伝子から剥がすときの加熱は、上記約４０℃から上記約８０℃に向かって、０．０１℃／秒乃至０．５℃／秒、例えば約０．２℃／秒の割合で加熱される。
（１１）反応液と反応条件（β３）
上記対象遺伝子のβ３ＡＤＲ遺伝子の変異の検出は、以下の反応液で以下の反応条件で実行される。
上記対象遺伝子のβ３ＡＤＲ遺伝子の変異の検出は、以下の反応液で以下の反応条件で実行される。
（反応液キット）
（β３ａ）ＤＮＡ溶液 ２０〜５０ｎｇ
（β３ｂ）調整済みライトサイクラーファストスタート反応ミックス ２．０μＬ
（β３ｃ）塩化マグネシウム溶液（２５ｍＭ） １．６μＬ
（β３ｄ）β３ＡＤＲフォワードプライマー（１０μＭ） １．０μＬ
（β３ｅ）β３ＡＤＲリバースプライマー（１０μＭ） １．０μＬ
（β３ｆ）β３ＡＤＲＦＩＴＣ緑標識プローブ（１０μＭ） ０．２μＬ
（β３ｇ）β３ＡＤＲＬＣ−Ｒｅｄ６４０赤標識プローブ（１０μＭ） ０．２μＬ
（β３ｈ）蒸留水 約１４μＬ
（β３ａ）ＤＮＡ溶液 ２０〜５０ｎｇ
（β３ｂ）調整済みライトサイクラーファストスタート反応ミックス ２．０μＬ
（β３ｃ）塩化マグネシウム溶液（２５ｍＭ） １．６μＬ
（β３ｄ）β３ＡＤＲフォワードプライマー（１０μＭ） １．０μＬ
（β３ｅ）β３ＡＤＲリバースプライマー（１０μＭ） １．０μＬ
（β３ｆ）β３ＡＤＲＦＩＴＣ緑標識プローブ（１０μＭ） ０．２μＬ
（β３ｇ）β３ＡＤＲＬＣ−Ｒｅｄ６４０赤標識プローブ（１０μＭ） ０．２μＬ
（β３ｈ）蒸留水 約１４μＬ
この反応には、ロシュ・ダイアグノスティックス株式会社のザライトサイクラーシステム（The Light Cycler System）、ライトサイクラーシステム（Light Cycler System）３３０またはライトサイクラークイックシステム（Light Cycler Quick System）３３０を用い、プログラムとしてライトサイクラーソフトウエア（Light Cycler Software Ver3.30またはVer1.20）を用い、ライトサイクラーファストスタートＤＮＡマスターハイブリダイゼーションプローブを使って、上記（β３ｂ）の調整済みライトサイクラーファストスタート反応ミックスはこの能書に基づいて作成される。
上記プローブには、蛍光共鳴エネルギー移動などのための蛍光色素・発色酵素などの発色成分（供与体色素／ドナーフルオレッセン）が予めまたは事前に若しくは後でまたは事後に混合され、この発色成分は上記各プローブに結合・標識される。このような発色成分が結合したプローブまたは発色成分は公知であるし、特開２００４−３１３２０号明細書などに示される。
このプローブ（センサープローブ）に結合した発色成分にレーザー光線または青色光線が照射されると、β３ＡＤＲＦＩＴＣ緑標識プローブからは緑の蛍光が発光され、β３ＡＤＲＬＣ−Ｒｅｄ６４０赤標識プローブからは蛍光共鳴エネルギー転移によって赤の蛍光が発光される。加熱されてこのプローブが対象遺伝子から順次剥れると、この蛍光共鳴エネルギー転移による励起光（蛍光）は減少または消える。
上記（β３ａ）のＤＮＡ溶液は、検査する対象遺伝子ＤＮＡのサンプルである。（β３ｄ）のβ３ＡＤＲフォワードプライマー、（β３ｅ）のβ３ＡＤＲリバースプライマー、（β３ｆ）のβ３ＡＤＲＦＩＴＣ緑標識プローブ、（β３ｇ）のβ３ＡＤＲＬＣ−Ｒｅｄ６４０赤標識プローブは上述したとおりである。場合によって塩化マグネシウム溶液はなくてもよい。
（反応条件）
上記の反応液を、例えばディネイチャーし、ＰＣＲ（遺伝子増幅反応 Polymerase Chain Reaction）を施し、メルティングアナライシスを行い、冷却する。ディネイチャーでは、対象遺伝子のＤＮＡサンプルがほどかれて分離され、例えば約１０分間約９５℃に加熱される。
上記の反応液を、例えばディネイチャーし、ＰＣＲ（遺伝子増幅反応 Polymerase Chain Reaction）を施し、メルティングアナライシスを行い、冷却する。ディネイチャーでは、対象遺伝子のＤＮＡサンプルがほどかれて分離され、例えば約１０分間約９５℃に加熱される。
上記ＰＣＲでは、例えばディネイチャー→アニーリング→エクステンションのサーマルサイクルが所定回数例えば４０回繰り返され、理論上、対象遺伝子ＤＮＡサンプルが２ 40 倍に増幅される。ＰＣＲのディネイチャーでは、上記対象遺伝子のＤＮＡサンプルがほどかれて分離され、例えば約１０秒間約９５℃に加熱される。
ＰＣＲのアニーリングでは、上記プライマーが上記対象遺伝子に結合され、例えば約１０秒間約６８℃に冷却される。ＰＣＲのエクステンションでは、この結合されたプライマーから上記対象遺伝子ＤＮＡが相補的／逆相補的に複製され、例えば約７秒間約７２℃に加熱される。上記ＰＣＲの増幅のアニーリング温度は６５℃乃至７１℃、望ましくは６６℃乃至７０℃、より望ましくは６７℃乃至６９℃、さらに望ましくは約６８℃である。
上記メルティングアナライシス（加熱）では、上記遺伝子の変異箇所に結合している上記（β３ｇ）のβ３ＡＤＲＬＣ−Ｒｅｄ６４０赤標識プローブが、異なる温度で上記対象遺伝子のβ３ＡＤＲ遺伝子及びその周辺から剥がれ、上記発色成分の発色（励起光）が低下し、この低下するときの温度の違いに基づいて、上記対象遺伝子のβ３ＡＤＲ遺伝子の差異・変異が検出される。
このメルティングアナライシスでは、例えば約０．０００１乃至０．０１秒間約９５℃に加熱され、約１２０秒間約４０℃に加温され、毎秒約０．２℃の上昇レートで、キャピラリー内の温度が約８０℃まで上昇され、これが例えば１サイクル行なわれる。上記メルティングアナライシスにおける、上記プローブを上記対象遺伝子から剥がすときの加熱は、上記約４０℃から上記約８０℃に向かって、０．０１℃／秒乃至０．５℃／秒、例えば約０．２℃／秒の割合で加熱される。
（１２）遺伝子検査結果（ＵＣＰ１Ｎｏ．１）
図１１は、上記ＵＣＰ１ＦＩＴＣ緑標識プローブＮｏ１を用いたＵＣＰ１遺伝子についての変異の遺伝子検査結果を示す。この遺伝子検査結果は、上記プローブが加熱によって剥れて発色が低下し、この発色の低下特性が微分されたものである。この発色の低下特性の微分特性がピークとなった温度が、上記プローブが剥れた温度となり、この微分特性に基づいて上記対象遺伝子の差異が検出される。
図１１は、上記ＵＣＰ１ＦＩＴＣ緑標識プローブＮｏ１を用いたＵＣＰ１遺伝子についての変異の遺伝子検査結果を示す。この遺伝子検査結果は、上記プローブが加熱によって剥れて発色が低下し、この発色の低下特性が微分されたものである。この発色の低下特性の微分特性がピークとなった温度が、上記プローブが剥れた温度となり、この微分特性に基づいて上記対象遺伝子の差異が検出される。
ＵＣＰ１遺伝子がともに「ａ」「ａ」であってともに変異していなければ、ＵＣＰ１ＦＩＴＣ緑標識プローブＮｏ１及びＵＣＰ１ＬＣ−Ｒｅｄ６４０赤標識プローブは加熱しても剥れにくく、ＵＣＰ１ＦＩＴＣ緑標識プローブＮｏ１が剥れる温度は４９．０℃付近となる。
一方、ＵＣＰ１遺伝子がともに「ｇ」「ｇ」であってともに変異していれば、ＵＣＰ１ＦＩＴＣ緑標識プローブＮｏ１及びＵＣＰ１ＬＣ−Ｒｅｄ６４０赤標識プローブが加熱で剥れ易く、ＵＣＰ１ＦＩＴＣ緑標識プローブＮｏ１が剥れる温度は４５．０℃付近となる。
他方、ＵＣＰ１遺伝子の一方が「ａ」で、他方が「ｇ」であって、片方のみが変異していれば、ＵＣＰ１ＦＩＴＣ緑標識プローブＮｏ１及びＵＣＰ１ＬＣ−Ｒｅｄ６４０赤標識プローブが剥れる発色の低下特性は、上記両特性のヘテロ特性（中間特性）となって、４９．０℃付近と４５．０℃付近とに二つのピークが表れる。
検査を受けるサンプルの対象遺伝子につき、図１１のどの特性となるかまたは近似するかによって、検査サンプルのＵＣＰ１遺伝子が、野生型（無変異型）「ａａ型」、変異型「ｇｇ型」、ヘテロ型（中間型）「ａｇ型」のいずれであるかがわかる。
（１３）遺伝子検査結果（ＵＣＰ１Ｎｏ．２）
図１２は、上記変異ＵＣＰ１ＦＩＴＣ緑標識プローブＮｏ２を用いたＵＣＰ１遺伝子についての変異の遺伝子検査結果を示す。この遺伝子検査結果は、上記プローブが加熱によって剥れて発色が低下し、この発色の低下特性が微分されたものである。この発色の低下特性の微分特性がピークとなった温度が、上記プローブが剥れた温度となり、この微分特性に基づいて上記対象遺伝子の差異が検出される。
図１２は、上記変異ＵＣＰ１ＦＩＴＣ緑標識プローブＮｏ２を用いたＵＣＰ１遺伝子についての変異の遺伝子検査結果を示す。この遺伝子検査結果は、上記プローブが加熱によって剥れて発色が低下し、この発色の低下特性が微分されたものである。この発色の低下特性の微分特性がピークとなった温度が、上記プローブが剥れた温度となり、この微分特性に基づいて上記対象遺伝子の差異が検出される。
ＵＣＰ１遺伝子がともに「ａ」「ａ」であってともに変異していなければ、変異ＵＣＰ１ＦＩＴＣ緑標識プローブＮｏ２は加熱しても剥れにくく、変異ＵＣＰ１ＦＩＴＣ緑標識プローブＮｏ２が剥れる温度は５６．０℃乃至５７．０℃付近となる。
一方、ＵＣＰ１遺伝子がともに「ｇ」「ｇ」であってともに変異していれば、変異ＵＣＰ１ＦＩＴＣ緑標識プローブＮｏ２は加熱で剥れ易く、変異ＵＣＰ１ＦＩＴＣ緑標識プローブＮｏ２が剥れる温度は５２．０℃乃至５３．０℃付近となる。
他方、ＵＣＰ１遺伝子の一方が「ａ」で、他方が「ｇ」であって、片方のみが変異していれば、変異ＵＣＰ１ＦＩＴＣ緑標識プローブＮｏ２が剥れる発色の低下特性は、上記両特性のヘテロ特性（中間特性）となって、５６．０℃乃至５７．０℃付近と５２．０℃乃至５３．０℃付近とに二つのピークが表れる。なお、ＵＣＰ１ＬＣ−Ｒｅｄ６４０赤標識プローブの剥がれる温度は変異の有無にかかわらずほぼ一定である。
検査を受けるサンプルの対象遺伝子につき、図１２のどの特性となるかまたは近似するかによって、検査サンプルのＵＣＰ１遺伝子が、野生型（無変異型）「ａａ型」、変異型「ｇｇ型」、ヘテロ型（中間型）「ａｇ型」のいずれであるかがわかる。
このようにＵＣＰ１ＦＩＴＣ緑標識プローブＮｏ２の代わりに、塩基１つを対象遺伝子ＵＣＰ１に結合しない塩基に意図的に置き換えた変異ＵＣＰ１ＦＩＴＣ緑標識プローブＮｏ１を使っても、検出温度は上昇するものの、同様にＵＣＰ１遺伝子について、変異を検出することができる。
（１４）遺伝子検査結果（β２ＡＤＲ）
図１３は、β２ＡＤＲ遺伝子についての変異の遺伝子検査結果を示す。この遺伝子検査結果は、上記プローブが加熱によって剥れて発色が低下し、この発色の低下特性が微分されたものである。この発色の低下特性の微分特性がピークとなった温度が、上記プローブが剥れた温度となり、この微分特性に基づいて上記対象遺伝子の差異が検出される。
図１３は、β２ＡＤＲ遺伝子についての変異の遺伝子検査結果を示す。この遺伝子検査結果は、上記プローブが加熱によって剥れて発色が低下し、この発色の低下特性が微分されたものである。この発色の低下特性の微分特性がピークとなった温度が、上記プローブが剥れた温度となり、この微分特性に基づいて上記対象遺伝子の差異が検出される。
β２ＡＤＲ遺伝子がともに「ｃ」「ｃ」であってともに変異していなければ、β２ＡＤＲＦＩＴＣ緑標識プローブは加熱しても剥れにくく、β２ＡＤＲＦＩＴＣ緑標識プローブが剥れる温度は５９．０℃付近となる。
一方、β２ＡＤＲ遺伝子がともに「ｇ」「ｇ」であってともに変異していれば、β２ＡＤＲＦＩＴＣ緑標識プローブは加熱で剥れ易く、β２ＡＤＲＦＩＴＣ緑標識プローブが剥れる温度は４９．０℃付近となる。
他方、β２ＡＤＲ遺伝子の一方が「ｃ」で、他方が「ｇ」であって、片方のみが変異していれば、β２ＡＤＲＦＩＴＣ緑標識プローブが剥れる発色の低下特性は、上記両特性のヘテロ特性（中間特性）となって、５９．０℃付近乃至４９．０℃付近とに二つのピークが表れる。なお、β２ＡＤＲＬＣ−Ｒｅｄ６４０赤標識プローブの剥がれる温度は変異の有無にかかわらずほぼ一定である。
検査を受けるサンプルの対象遺伝子につき、図１３のどの特性となるかまたは近似するかによって、検査サンプルのβ２ＡＤＲ遺伝子が、野生型（無変異型）「ｃｃ型」、変異型「ｇｇ型」、ヘテロ型（中間型）「ｃｇ型」のいずれであるかがわかる。なお、図１３では、β２ＡＤＲ遺伝子に続く「ａａ」を含めてグルタミン「Ｇｌｎ（ｃａａ）型」かグルタミン酸「Ｇｌｕ（ｇａａ）型」かで示してある。
（１５）遺伝子検査結果（β３ＡＤＲ）
図１４は、β３ＡＤＲ遺伝子についての変異の遺伝子検査結果を示す。この遺伝子検査結果は、上記プローブが加熱によって剥れて発色が低下し、この発色の低下特性が微分されたものである。この発色の低下特性の微分特性がピークとなった温度が、上記プローブが剥れた温度となり、この微分特性に基づいて上記対象遺伝子の差異が検出される。
図１４は、β３ＡＤＲ遺伝子についての変異の遺伝子検査結果を示す。この遺伝子検査結果は、上記プローブが加熱によって剥れて発色が低下し、この発色の低下特性が微分されたものである。この発色の低下特性の微分特性がピークとなった温度が、上記プローブが剥れた温度となり、この微分特性に基づいて上記対象遺伝子の差異が検出される。
β３ＡＤＲ遺伝子がともに「ｔ」「ｔ」であってともに変異していなければ、β３ＡＤＲＦＩＴＣ緑標識プローブは加熱しても剥れにくく、β３ＡＤＲＦＩＴＣ緑標識プローブが剥れる温度は５９．０℃付近となる。
一方、β３ＡＤＲ遺伝子がともに「ｃ」「ｃ」であってともに変異していれば、β３ＡＤＲＦＩＴＣ緑標識プローブは加熱で剥れ易く、β３ＡＤＲＦＩＴＣ緑標識プローブが剥れる温度は４９．０℃付近となる。
他方、β３ＡＤＲ遺伝子の一方が「ｔ」で、他方が「ｃ」であって、片方のみが変異していれば、β３ＡＤＲＦＩＴＣ緑標識プローブが剥れる発色の低下特性は、上記両特性のヘテロ特性（中間特性）となる。なお、β３ＡＤＲＬＣ−Ｒｅｄ６４０赤標識プローブの剥がれる温度は変異の有無にかかわらずほぼ一定である。
検査を受けるサンプルの対象遺伝子につき、図１４のどの特性となるかまたは近似するかによって、検査サンプルのβ３ＡＤＲ遺伝子が、野生型（無変異型）「ｔｔ型」、変異型「ｃｃ型」、ヘテロ型（中間型）「ｔｃ型」のいずれであるかがわかる。なお、図１４では、β３ＡＤＲ遺伝子に続く「ｇｇ」を含めてトリプトファン「Ｔｒｐ（ｔｇｇ）型」かアルギニン「Ａｒｇ（ｃｇｇ）型」かで示してある。
（１６）遺伝子検査結果（３つの対象遺伝子の同時多重）
上記ＵＣＰ１遺伝子、β２ＡＤＲ遺伝子、β３ＡＤＲ遺伝子の遺伝子検査結果によって、以下のことがわかる。
上記ＵＣＰ１遺伝子、β２ＡＤＲ遺伝子、β３ＡＤＲ遺伝子の遺伝子検査結果によって、以下のことがわかる。
ＵＣＰ１遺伝子が「ａ→ｇ」に変異していると、一日あたりの安静時代謝量が所定量例えば８０〜１００ｋｃａｌほど低くなり、臀部や下腹部に脂肪が蓄積され易くなり、洋ナシ型肥満になり易くなる。
β２ＡＤＲ遺伝子が「ｃ→ｇ」に変異していると、一日あたりの安静時代謝量が所定量例えば２００ｋｃａｌほど高くなり、痩せ易くなり、筋肉が付きにくく、バナナ型肥満になり易くなる。
β３ＡＤＲ遺伝子が「ｔ→ｃ」に変異していると、一日あたりの安静時代謝量が所定量例えば２００ｋｃａｌほど低くなり、腹部に脂肪が蓄積され易くなり、リンゴ型肥満になり易くなる。
β２ＡＤＲ遺伝子が「ｃ→ｇ」に変異していると、一日あたりの安静時代謝量が所定量例えば２００ｋｃａｌほど高くなり、痩せ易くなり、筋肉が付きにくく、バナナ型肥満になり易くなる。
β３ＡＤＲ遺伝子が「ｔ→ｃ」に変異していると、一日あたりの安静時代謝量が所定量例えば２００ｋｃａｌほど低くなり、腹部に脂肪が蓄積され易くなり、リンゴ型肥満になり易くなる。
以上の３つの対象遺伝子の差異を同時に多重的に検出すると、肥満対策を総合的に行なうことができる。
ＵＣＰ１遺伝子が変異し、β２ＡＤＲ遺伝子が変異していなければ、脂肪分より炭水化物・糖分の摂取を減らすのがよいことになる。β３ＡＤＲ遺伝子が変異し、β２ＡＤＲ遺伝子が変異していなければ、炭水化物・糖分より脂肪分の摂取を減らすのがよいことになる。ＵＣＰ１遺伝子及びβ３ＡＤＲ遺伝子が変異していれば、炭水化物・糖分及び脂肪分の両方の摂取を減らすのがよいことになる。
ＵＣＰ１遺伝子が変異し、β２ＡＤＲ遺伝子が変異していなければ、脂肪分より炭水化物・糖分の摂取を減らすのがよいことになる。β３ＡＤＲ遺伝子が変異し、β２ＡＤＲ遺伝子が変異していなければ、炭水化物・糖分より脂肪分の摂取を減らすのがよいことになる。ＵＣＰ１遺伝子及びβ３ＡＤＲ遺伝子が変異していれば、炭水化物・糖分及び脂肪分の両方の摂取を減らすのがよいことになる。
ＵＣＰ１遺伝子及びβ２ＡＤＲ遺伝子が変異していれば、運動を増やし、脂肪分より炭水化物・糖分の摂取を減らすのがよいことになる。β３ＡＤＲ遺伝子及びβ２ＡＤＲ遺伝子が変異していなければ、運動を増やし、炭水化物・糖分より脂肪分の摂取を減らすのがよいことになる。ＵＣＰ１遺伝子、β３ＡＤＲ遺伝子及びβ２ＡＤＲ遺伝子が変異していれば、運動を増やし、炭水化物・糖分及び脂肪分の両方の摂取を減らすのがよいことになる。
（１７）プライマーまたはプローブの塩基数の増減
上述の各プライマーまたは各プローブの塩基数を増減すると、上述の各プライマーのアニーリング温度、各プローブの剥がれる温度は変化する。塩基数が１つ増えると、各プライマーのアニーリング温度または各プローブの剥がれる温度は０．１℃乃至２．０℃ほど上昇し、塩基数が１つ減ると、各プライマーのアニーリング温度または各プローブの剥がれる温度は０．１℃乃至２．０℃ほど下降する。
上述の各プライマーまたは各プローブの塩基数を増減すると、上述の各プライマーのアニーリング温度、各プローブの剥がれる温度は変化する。塩基数が１つ増えると、各プライマーのアニーリング温度または各プローブの剥がれる温度は０．１℃乃至２．０℃ほど上昇し、塩基数が１つ減ると、各プライマーのアニーリング温度または各プローブの剥がれる温度は０．１℃乃至２．０℃ほど下降する。
また、上記各プローブの塩基配列のうち、１つ、２つまたは３つの塩基が別の異なる塩基に結合しないように置き換えられると、この塩基のみは上記対象遺伝子ＤＮＡに結合しないので、上述の塩基数が減ったときと同様の温度変化が起きる。塩基数が１つ結合しないように置き換えられると、各プライマーのアニーリング温度または各プローブの剥がれる温度は０．１℃乃至２．０℃ほど下降する。
（１８）遺伝子検査の技術的効果及び留意事項
本発明の遺伝子検査方法及びＰＣＲ法では、上述の検査実験より、上述の問題点はなく、かつ、従来の方法と比較・検討し優れた結果が得られた。特に肥満関連遺伝子の変異・差異の検出時間がかなり短くなった。そして、蛍光変化も客観的かつ容易に判断できた。このことより、上記プローブ及びプライマーを設計するにあたり一般的な留意事項において、本発明のプローブ及びプライマーは問題ないといえる。
本発明の遺伝子検査方法及びＰＣＲ法では、上述の検査実験より、上述の問題点はなく、かつ、従来の方法と比較・検討し優れた結果が得られた。特に肥満関連遺伝子の変異・差異の検出時間がかなり短くなった。そして、蛍光変化も客観的かつ容易に判断できた。このことより、上記プローブ及びプライマーを設計するにあたり一般的な留意事項において、本発明のプローブ及びプライマーは問題ないといえる。
本件発明のプローブ及びプライマーおよび反応条件は多くの実験を経た上で最適化されている。上述の実験で検証していない別発明の配列のプローブまたはプライマーを用いて、本件発明の遺伝子検査方法及びＰＣＲ法と同等あるいはそれ以上の結果が得られるという可能性を完全に否定できるものではないが、対象とする試料、反応液キット、前提となる遺伝子変異箇所周辺の配列状況という測定条件からすると、本件発明の遺伝子検査方法及びプローブ並びにＰＣＲ法及びプライマーは極めて完成度が高いといえる。
なお、上記対象遺伝子に結合したときの緑標識プローブと同じく対象遺伝子に結合したときの赤標識プローブとの間隔塩基数は「１」が最も望ましい。これは、蛍光共鳴エネルギー転移が最も有効に発揮できるのは、間隔塩基数「１」だからである。しかし、緑と赤の発色が弱く薄くても増幅処理／増感処理または照射光を強くするなどによって、発色の変化を検出できれば、間隔塩基数が「２」「３」「４」「５」「０」でもよいし、両プローブの端が重なっていてもよい。よって、両プローブの間隔塩基数は「０乃至１５」、望ましくは「０乃至１０」、より望ましくは「０乃至５」、さらに望ましくは「０乃至４」、よりさらに望ましくは「１乃至３」、さらにより望ましくは「１乃至２」、またさらにより望ましくは「１」となる。
上記一対の赤標識プローブと緑標識プローブのうち、上記対象遺伝子から剥がれる温度が変化するのは、遺伝子の変異箇所に結合するプローブのほうで、遺伝子の変異箇所以外に結合するプローブの剥がれる温度は変化しない。したがって、この剥がれる温度の変化しないプローブが剥がれる温度を基準として、剥がれる温度の変化するプローブが剥がれる温度の変化を正確に判別できる。なお、場合によって、この遺伝子の変異箇所以外に結合するプローブを省略することもできる。
また、上記プローブまたはプライマーを設計するにあたり一般的な留意事項として、その配列は対象となるＤＮＡの塩基配列から特異性の高い箇所を選択する必要がある。プローブまたはプライマーの配列と相補的／逆相補的／同じかまたはこれと類似の箇所が遺伝子ＤＮＡの別の箇所にあると、遺伝子検査の結果、誤った検査結果が得られてしまい、ＰＣＲの結果、目的の反応産物以外に複数の産物が形成されてしまい、十分なメルティングカーブ（特性）が得られず、誤った検査結果となってしまうからである。
したがって、上記プローブまたはプライマーを短くしての塩基数を少なくすると、遺伝子ＤＮＡの他の塩基配列箇所に同じ塩基配列箇所が現れる可能性は高くなり、遺伝子ＤＮＡの変異の検出に誤差／不正確さが生じる可能性がある。
上記プローブまたはプライマーの塩基配列、各対象遺伝子ＤＮＡの部分配列は、正確な変異検出に必要な最低限の配列長であり、これらの各対象遺伝子ＤＮＡの両側の塩基または相補的塩基をさらに含む事は可能である。この場合、対象遺伝子ＤＮＡの変異検出のための検査時間／実験時間／反応時間は長くなる可能性があるが、遺伝子ＤＮＡの他の塩基配列箇所に同じ塩基配列箇所が現れる可能性は低くなり、変異の検出の誤差／不正確さが少なくなり、変異検出／変異検査がより正確になる。ただし、あまり長くなると、プローブまたはプライマーが自分自身に結合してしまう恐れがでてくるので、あまり長くしない方がよい。
また、プローブまたはプライマーの設計においてＧ（グアニン）とＣ（シトシン）の含有割合が高すぎる場合、プローブまたはプライマー同士が結合してしまうか、またはプローブまたはプライマー自体が立体構造を作ってしまうと、十分な反応が得られないため、ＧとＣの含有割合の低いプローブまたはプライマー、望ましくはＧとＣの含有率が４０乃至６０％のプローブまたはプライマーが選ばれる。
以上のような遺伝子検査によって、個々人の遺伝子の差異に応じた、診断及び治療を行なうことができ、画一的な診断／治療ではなく、個人差に応じたオーダーメイドな診断／治療が可能となる。これは肥満関連遺伝子検査でも同様で、個々人の肥満関連遺伝子の差異に応じたオーダーメイドな肥満診断／肥満治療が可能となる。特に最近注目を集めるメタボリックシンドロームに対する、個々人の遺伝子の差異に応じたオーダーメイドな診断／治療が可能となる。
（１９）他の実施の形態
本発明は、上記実施例に限定されず、種々変更可能である。例えば、上記相補的／逆相補的なプローブ、相補的／逆相補的なプライマーと、相補的／逆相補的でないプローブ、相補的／逆相補的でないプライマーとは、両方が共に加えられ使用されてもよい。これにより、対象遺伝子ＤＮＡの変異検出のための検査時間／実験時間／反応時間は短くなる。
本発明は、上記実施例に限定されず、種々変更可能である。例えば、上記相補的／逆相補的なプローブ、相補的／逆相補的なプライマーと、相補的／逆相補的でないプローブ、相補的／逆相補的でないプライマーとは、両方が共に加えられ使用されてもよい。これにより、対象遺伝子ＤＮＡの変異検出のための検査時間／実験時間／反応時間は短くなる。
また、上記のプライマーのセット、及び／または上記プローブのセットは、これらのプライマーまたはプローブの塩基配列と相補的または逆相補的なものとしてもよい。これでも同様に、対象遺伝子ＤＮＡの事前複製・事前増幅・変異検出・差異検出を行うことができる。
上記緑と赤の発色成分は、上記結合するプローブがそれぞれ入れ換えられて、緑と赤の標識が逆にされ、上記各一対のプローブの他方のプローブに付け替えられてもよい。これでも、緑の発光特性と赤の発光特性が入れ替わるが、同様の検出が可能となる。またこのような発色成分として、ＦＩＴＣによる緑やＬＣＲｅｄ６４０による赤以外に、ＬＣＲｅｄ７０５による赤、その他、青、黄、橙、紫などの発色成分が使用されてもよい。この場合、センサープローブとアンカープローブとは入れ替わらない。
本発明のＰＣＲ法によって検出される対象遺伝子ＤＮＡの変異は、塩基の欠損、挿入、置換、ＳＮＰ（一塩基多型）など、遺伝子ＤＮＡの異常と正常との違いまたは正常であっても個人差による違いであってもよい。
また、本発明のＰＣＲ法によって検出される遺伝子ＤＮＡはヒトのものであるが、家畜その他の動物・植物・菌・微生物におけるものであってもよい。さらに、本発明の遺伝子検査方法またはＰＣＲ法によって検出される対象遺伝子ＤＮＡは、対象遺伝子ＤＮＡの情報が写し取られたｍＲＮＡでもよいし、ＲＮＡであってもよい。
（２０）他の発明の効果
［１］増幅した対象遺伝子に対して、 少なくとも「ｃａｃｔｔｇａｔｔａａａｃｔｇ」または「ｃａｃｔｃｇａｔｔａａａｃｔｇ」の塩基配列（１５ｍｅｒ乃至１９ｍｅｒ）またはこれらの塩基配列のうち１つ、２つまたは３つの塩基が別の異なる塩基に置き換えられた塩基配列を含むプローブ、 及び少なくとも「ｃａａｔｃａｇａａａｔｃｇｃｔｇｃａｃａａａａｔｇｔｃｔｔｃｃｔａｔｔａａａｔａａａａａｔ」の塩基配列（４５ｍｅｒ乃至５３ｍｅｒ）またはこれらの塩基配列のうち１つ、２つまたは３つの塩基が別の異なる塩基に置き換えられた塩基配列を含むプローブ、 またはこれらのプローブの塩基配列と相補的／逆相補的な塩基配列、この塩基配列のうち１つ、２つまたは３つの塩基が別の異なる塩基に置き換えられた塩基配列を含むプローブ、を混合して結合させ、 これらの各プローブに対して、結合することによって発色する成分をそれぞれして結合させて発色させ、 上記混合物を加熱することによって、上記プローブを上記対象遺伝子から剥がし、これにより上記発色する成分による発色を低下させ、この低下するときの温度の違いに基づいて、上記対象遺伝子の差異を検出することを特徴とする遺伝子検査方法。
［１］増幅した対象遺伝子に対して、 少なくとも「ｃａｃｔｔｇａｔｔａａａｃｔｇ」または「ｃａｃｔｃｇａｔｔａａａｃｔｇ」の塩基配列（１５ｍｅｒ乃至１９ｍｅｒ）またはこれらの塩基配列のうち１つ、２つまたは３つの塩基が別の異なる塩基に置き換えられた塩基配列を含むプローブ、 及び少なくとも「ｃａａｔｃａｇａａａｔｃｇｃｔｇｃａｃａａａａｔｇｔｃｔｔｃｃｔａｔｔａａａｔａａａａａｔ」の塩基配列（４５ｍｅｒ乃至５３ｍｅｒ）またはこれらの塩基配列のうち１つ、２つまたは３つの塩基が別の異なる塩基に置き換えられた塩基配列を含むプローブ、 またはこれらのプローブの塩基配列と相補的／逆相補的な塩基配列、この塩基配列のうち１つ、２つまたは３つの塩基が別の異なる塩基に置き換えられた塩基配列を含むプローブ、を混合して結合させ、 これらの各プローブに対して、結合することによって発色する成分をそれぞれして結合させて発色させ、 上記混合物を加熱することによって、上記プローブを上記対象遺伝子から剥がし、これにより上記発色する成分による発色を低下させ、この低下するときの温度の違いに基づいて、上記対象遺伝子の差異を検出することを特徴とする遺伝子検査方法。
[２]上記対象遺伝子は、 少なくとも「ｇａｔｔｃｔｔｃｔｇｔｃａｔｔｔｇｃａ」の塩基配列（１９ｍｅｒ乃至２３ｍｅｒ）を含むプライマー、 及び少なくとも「ｇｇｃａａｃｔｇａｃｃｃｔｔｔａｔｇ」の塩基配列（１８ｍｅｒ乃至２２ｍｅｒ）を含むプライマーによって増幅されることを特徴とする請求項１記載の遺伝子検査方法。これにより、対象遺伝子ＤＮＡの周辺だけを他の遺伝子ＤＮＡ部分に比べてプライマーで十分に複製・増幅しておき、遺伝子ＤＮＡの野生／変異／正常／異常を正確に識別することができる。
[３]上記増幅のアニーリング温度は６４℃乃至７０℃、望ましくは６５℃乃至６９℃、より望ましくは６６℃乃至６８℃、さらに望ましくは約６７℃であることを特徴とする請求項２記載の遺伝子検査方法。これにより、加熱速度が速くなれば対象遺伝子の増幅速度が速くなって遺伝子検査時間が短くなり、加熱速度が遅くなれば対象遺伝子の差異がより明確になり遺伝子検査がより正確になる。
[４]増幅した対象遺伝子に対して、 少なくとも「ｃｇｔｃａｃｇｃａｇｃａａａ」または「ｃｇｔｃａｃｇｃａｇｇａａａ」の塩基配列（１４ｍｅｒ乃至１８ｍｅｒ）またはこれらの塩基配列のうち１つ、２つまたは３つの塩基が別の異なる塩基に置き換えられた塩基配列を含むプローブ、 及び少なくとも「ｃｇａｇｇｔｇｔｇｇｇｔｇｇｔｇｇｇｃａｔｇｇｇｃａｔｃｇｔｃａｔｇｔｃｔｃｔｃａｔｃｇｔ」の塩基配列（４５ｍｅｒ乃至５３ｍｅｒ）またはこれらの塩基配列のうち１つ、２つまたは３つの塩基が別の異なる塩基に置き換えられた塩基配列を含むプローブ、 またはこれらのプローブの塩基配列と相補的／逆相補的な塩基配列、この塩基配列のうち１つ、２つまたは３つの塩基が別の異なる塩基に置き換えられた塩基配列を含むプローブ、を混合して結合させ、 これらの各プローブに対して、結合することによって発色する成分をそれぞれして結合させて発色させ、 上記混合物を加熱することによって、上記プローブを上記対象遺伝子から剥がし、これにより上記発色する成分による発色を低下させ、この低下するときの温度の違いに基づいて、上記対象遺伝子の差異を検出することを特徴とする遺伝子検査方法。
[５]上記対象遺伝子は、 少なくとも「ｔｔｃｔｔｇｃｔｇｇｃａｃｃｃａａ」の塩基配列（１７ｍｅｒ乃至２１ｍｅｒ）を含むプライマー、 及び少なくとも「ａｇｇｃｃａｇｔｇａａｇｔｇａｔｇａ」の塩基配列（１８ｍｅｒ乃至２２ｍｅｒ）を含むプライマーによって増幅されることを特徴とする請求項４記載の遺伝子検査方法。これにより、対象遺伝子ＤＮＡの周辺だけを他の遺伝子ＤＮＡ部分に比べてプライマーで十分に複製・増幅しておき、遺伝子ＤＮＡの野生／変異／正常／異常を正確に識別することができる。
[６]上記増幅のアニーリング温度は６１℃乃至６７℃、望ましくは６２℃乃至６６℃、より望ましくは６３℃乃至６５℃、さらに望ましくは約６４℃であることを特徴とする請求項５記載の遺伝子検査方法。これにより、加熱速度が速くなれば対象遺伝子の増幅速度が速くなって遺伝子検査時間が短くなり、加熱速度が遅くなれば対象遺伝子の差異がより明確になり遺伝子検査がより正確になる。
[７]増幅した対象遺伝子に対して、 少なくとも「ｃｃａｃｃｇｔｇｇｇａｇｇｃａａｃｃｔｇｃｔｇｇｔｃａｔｃｇｔ」の塩基配列（３１ｍｅｒ乃至３９ｍｅｒ）またはこれらの塩基配列のうち１つ、２つまたは３つの塩基が別の異なる塩基に置き換えられた塩基配列を含むプローブ、 及び少なくとも「ａｔｃｇｃｃｔｇｇａｃｔｃｃｇ」または「ａｔｃｇｃｃｃｇｇａｃｔｃｃｇ」の塩基配列（１５ｍｅｒ乃至１９ｍｅｒ）またはこれらの塩基配列のうち１つ、２つまたは３つの塩基が別の異なる塩基に置き換えられた塩基配列を含むプローブ、 またはこれらのプローブの塩基配列と相補的／逆相補的な塩基配列、この塩基配列のうち１つ、２つまたは３つの塩基が別の異なる塩基に置き換えられた塩基配列を含むプローブ、を混合して結合させ、 これらの各プローブに対して、結合することによって発色する成分をそれぞれして結合させて発色させ、 上記混合物を加熱することによって、上記プローブを上記対象遺伝子から剥がし、これにより上記発色する成分による発色を低下させ、この低下するときの温度の違いに基づいて、上記対象遺伝子の差異を検出することを特徴とする遺伝子検査方法。
[８]上記対象遺伝子は、 少なくとも「ｃｔｔｃｃｔｔｃｔｔｔｃｃｃｔａｃｃ」の塩基配列（１８ｍｅｒ乃至２２ｍｅｒ）を含むプライマー、 及び少なくとも「ｇｔｃａｔｇｇｔｃｔｇｇａｇｔｃｔｃ」の塩基配列（１８ｍｅｒ乃至２２ｍｅｒ）を含むプライマーによって増幅されることを特徴とする請求項７記載の遺伝子検査方法。これにより、対象遺伝子ＤＮＡの周辺だけを他の遺伝子ＤＮＡ部分に比べてプライマーで十分に複製・増幅しておき、遺伝子ＤＮＡの野生／変異／正常／異常を正確に識別することができる。
[９]上記増幅のアニーリング温度は６５℃乃至７１℃、望ましくは６６℃乃至７０℃、より望ましくは６７℃乃至６９℃、さらに望ましくは約６８℃であることを特徴とする請求項８記載の遺伝子検査方法。これにより、加熱速度が速くなれば対象遺伝子の増幅速度が速くなって遺伝子検査時間が短くなり、加熱速度が遅くなれば対象遺伝子の差異がより明確になり遺伝子検査がより正確になる。
[１０]上記プローブを上記対象遺伝子から剥がすときの加熱は、約４０℃から約８０℃に向かって、約０．０１℃／秒乃至０．５℃／秒の割合で加熱であることを特徴とする請求項１、２、３、４、５、６、７、８または９記載の遺伝子検査方法。これにより、加熱速度が速くなれば遺伝子検査時間が短くなり、加熱速度が遅くなれば対象遺伝子の差異がより明確になり遺伝子検査がより正確になる。
[１１]上記発色する成分の発色の低下特性を微分し、この微分特性に基づいて上記対象遺伝子の差異を検出することを特徴とする請求項１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０記載の遺伝子検査方法。これにより、発色する成分の発色の低下部分でピーク特性、凸特性または凹特性を得ることができ、遺伝子検査がし易くなる。
[１２]請求項１、２または３の遺伝子検査方法と、請求項４、５または６の遺伝子検査方法と、請求項７、８または９の遺伝子検査方法とを、共に行なって、複数の対象遺伝子の差異を同時に多重的に検出することを特徴とする遺伝子検査方法。複数の対象遺伝子の差異を同時に多重的に検出すると、治療対策・健康対策を抜けなく総合的に行なうことができる。
[１３]上記増幅した対象遺伝子に結合した各プローブの間隔塩基数は０乃至１５であることを特徴とする請求項１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２記載の遺伝子検査方法。これにより、緑標識プローブ及び赤標識プローブの間に蛍光共鳴エネルギー転移が円滑に行なわれる。
[１４] 上記請求項１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２または１３記載の遺伝子検査方法に使用される上記プローブ及び上記発色する成分または上記プライマーのキット。これにより、遺伝子検査の準備でキットを用意すればよく、遺伝子検査の準備が容易になる。
対象遺伝子の差異を、簡易にまたは迅速に検出する。対象遺伝子ＵＣＰ１（β２、β３）に対し、「ｃａｃｔｔｇａｔｔａａａｃｔｇ」または「ｃａｃｔｃｇａｔｔａａａｃｔｇ」の塩基配列（１５ｍｅｒ乃至１９ｍｅｒ）を含むプローブ（緑発光）と「ｃａａｔｃａｇａａａｔｃｇｃｔｇｃａｃａａａａｔｇｔｃｔｔｃｃｔａｔｔａａａｔａａａａａｔ」の塩基配列（４５ｍｅｒ乃至５３ｍｅｒ）を含むプローブ（赤発光）が結合され、このプローブには発色する成分が予め混合・結合・標識されていて発色される。
これが加熱されて、上記プローブが上記対象遺伝子から剥がれると、発色が低下し、この低下するときの温度の違いに基づいて、上記対象遺伝子の差異「ａａ型」「ｇｇ型」「ａｇ型」が検出される。
（２１）配列表
SEQUENCE LISTING
Iryo-hojin Daiyukai
Genetic checking method and Kit
P9G-109
JP 2006-000000
2006-08-24
426
SEQUENCE LISTING
Iryo-hojin Daiyukai
Genetic checking method and Kit
P9G-109
JP 2006-000000
2006-08-24
426
1
477
DNA
Human
1
cttgggtagt gacaaagtat taatttatta 30
ggtgaagtat atgctttttt attagtgata 60
ataaatatat cctctctccc attataaaag 90
tttgtatttc ttcttttaga aattgattct 120
tctgtcattt gcacatttat ctgtataatt 150
ataacagggt atttcccagt ggtggctaat 180
gagagaatta tgggaaagta tagaacacta 210
ttcaaatgca aagcactgta tgatttttat 240
ttaataggaa gacattttgt gcagcgattt 270
ctgattgacc acagtttgat caagtgcatt 300
tgttaatgtg ttctacattt tcaaaaagga 330
aaggagaatt tgttacattc agaacttgct 360
gccactcctt tgctacgtca taaagggtca 390
gttgcccttg ctcatactga cctattcttt 420
accctctctg cttcttcttt gtgccagaag 450
agtagaaatc tgaccctttg gg 477
477
DNA
Human
1
cttgggtagt gacaaagtat taatttatta 30
ggtgaagtat atgctttttt attagtgata 60
ataaatatat cctctctccc attataaaag 90
tttgtatttc ttcttttaga aattgattct 120
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ataacagggt atttcccagt ggtggctaat 180
gagagaatta tgggaaagta tagaacacta 210
ttcaaatgca aagcactgta tgatttttat 240
ttaataggaa gacattttgt gcagcgattt 270
ctgattgacc acagtttgat caagtgcatt 300
tgttaatgtg ttctacattt tcaaaaagga 330
aaggagaatt tgttacattc agaacttgct 360
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accctctctg cttcttcttt gtgccagaag 450
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2
420
DNA
Human
2
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atgtctctca tcgtcctggc catcgtgttt 270
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420
DNA
Human
2
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3
480
DNA
Human
3
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480
DNA
Human
3
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4
477
DNA
Human
4
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aaacataaag aagaaaatct ttaactaaga 120
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477
DNA
Human
4
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5
420
DNA
Human
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gaccagtacc cggatcgtca ccacgggaaa 390
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420
DNA
Human
5
tgtgggtgtg gtgtcggcga cttactccga 30
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6
450
DNA
Human
6
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450
DNA
Human
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50
Probe
Artificial sequence
73
tcaatcagaaatcgctgcacaaaatgtcttcctattaaataaaaatcata 50
50
Probe
Artificial sequence
73
tcaatcagaaatcgctgcacaaaatgtcttcctattaaataaaaatcata 50
74
51
Probe
Artificial sequence
74
gtcaatcagaaatcgctgcacaaaatgtcttcctattaaataaaaatcata 51
51
Probe
Artificial sequence
74
gtcaatcagaaatcgctgcacaaaatgtcttcctattaaataaaaatcata 51
75
52
Probe
Artificial sequence
75
ggtcaatcagaaatcgctgcacaaaatgtcttcctattaaataaaaatcata 52
52
Probe
Artificial sequence
75
ggtcaatcagaaatcgctgcacaaaatgtcttcctattaaataaaaatcata 52
76
53
Probe
Artificial sequence
76
tggtcaatcagaaatcgctgcacaaaatgtcttcctattaaataaaaatcata 53
53
Probe
Artificial sequence
76
tggtcaatcagaaatcgctgcacaaaatgtcttcctattaaataaaaatcata 53
77
14
Probe
Artificial sequence
77
cgtcacgcagcaaa 14
14
Probe
Artificial sequence
77
cgtcacgcagcaaa 14
78
15
Probe
Artificial sequence
78
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15
Probe
Artificial sequence
78
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79
16
Probe
Artificial sequence
79
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16
Probe
Artificial sequence
79
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15
Probe
Artificial sequence
80
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15
Probe
Artificial sequence
80
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16
Probe
Artificial sequence
81
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16
Probe
Artificial sequence
81
acgtcacgcagcaaag 16
82
17
Probe
Artificial sequence
82
gacgtcacgcagcaaag 17
17
Probe
Artificial sequence
82
gacgtcacgcagcaaag 17
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16
Probe
Artificial sequence
83
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16
Probe
Artificial sequence
83
cgtcacgcagcaaagg 16
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17
Probe
Artificial sequence
84
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17
Probe
Artificial sequence
84
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18
Probe
Artificial sequence
85
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18
Probe
Artificial sequence
85
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Probe
Artificial sequence
86
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14
Probe
Artificial sequence
86
cgtcacgcaggaaa 14
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15
Probe
Artificial sequence
87
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15
Probe
Artificial sequence
87
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Probe
Artificial sequence
88
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16
Probe
Artificial sequence
88
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Probe
Artificial sequence
89
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15
Probe
Artificial sequence
89
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16
Probe
Artificial sequence
90
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16
Probe
Artificial sequence
90
acgtcacgcaggaaag 16
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Probe
Artificial sequence
91
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17
Probe
Artificial sequence
91
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Probe
Artificial sequence
92
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16
Probe
Artificial sequence
92
cgtcacgcaggaaagg 16
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17
Probe
Artificial sequence
93
acgtcacgcaggaaagg 17
17
Probe
Artificial sequence
93
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18
Probe
Artificial sequence
94
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18
Probe
Artificial sequence
94
gacgtcacgcaggaaagg 18
95
45
Probe
Artificial sequence
95
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45
Probe
Artificial sequence
95
cgaggtgtgggtggtgggcatgggcatcgtcatgtctctcatcgt 45
96
46
Probe
Artificial sequence
96
acgaggtgtgggtggtgggcatgggcatcgtcatgtctctcatcgt 46
46
Probe
Artificial sequence
96
acgaggtgtgggtggtgggcatgggcatcgtcatgtctctcatcgt 46
97
47
Probe
Artificial sequence
97
gacgaggtgtgggtggtgggcatgggcatcgtcatgtctctcatcgt 47
47
Probe
Artificial sequence
97
gacgaggtgtgggtggtgggcatgggcatcgtcatgtctctcatcgt 47
98
48
Probe
Artificial sequence
98
ggacgaggtgtgggtggtgggcatgggcatcgtcatgtctctcatcgt 48
48
Probe
Artificial sequence
98
ggacgaggtgtgggtggtgggcatgggcatcgtcatgtctctcatcgt 48
99
49
Probe
Artificial sequence
99
gggacgaggtgtgggtggtgggcatgggcatcgtcatgtctctcatcgt 49
49
Probe
Artificial sequence
99
gggacgaggtgtgggtggtgggcatgggcatcgtcatgtctctcatcgt 49
100
46
Probe
Artificial sequence
100
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46
Probe
Artificial sequence
100
cgaggtgtgggtggtgggcatgggcatcgtcatgtctctcatcgtc 46
101
47
Probe
Artificial sequence
101
acgaggtgtgggtggtgggcatgggcatcgtcatgtctctcatcgtc 47
47
Probe
Artificial sequence
101
acgaggtgtgggtggtgggcatgggcatcgtcatgtctctcatcgtc 47
102
48
Probe
Artificial sequence
102
gacgaggtgtgggtggtgggcatgggcatcgtcatgtctctcatcgtc 48
48
Probe
Artificial sequence
102
gacgaggtgtgggtggtgggcatgggcatcgtcatgtctctcatcgtc 48
103
49
Probe
Artificial sequence
103
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49
Probe
Artificial sequence
103
ggacgaggtgtgggtggtgggcatgggcatcgtcatgtctctcatcgtc 49
104
50
Probe
Artificial sequence
104
gggacgaggtgtgggtggtgggcatgggcatcgtcatgtctctcatcgtc 50
50
Probe
Artificial sequence
104
gggacgaggtgtgggtggtgggcatgggcatcgtcatgtctctcatcgtc 50
105
47
Probe
Artificial sequence
105
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47
Probe
Artificial sequence
105
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106
48
Probe
Artificial sequence
106
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48
Probe
Artificial sequence
106
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107
49
Probe
Artificial sequence
107
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49
Probe
Artificial sequence
107
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108
50
Probe
Artificial sequence
108
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50
Probe
Artificial sequence
108
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109
51
Probe
Artificial sequence
109
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51
Probe
Artificial sequence
109
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110
48
Probe
Artificial sequence
110
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48
Probe
Artificial sequence
110
cgaggtgtgggtggtgggcatgggcatcgtcatgtctctcatcgtcct 48
111
49
Probe
Artificial sequence
111
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49
Probe
Artificial sequence
111
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112
50
Probe
Artificial sequence
112
gacgaggtgtgggtggtgggcatgggcatcgtcatgtctctcatcgtcct 50
50
Probe
Artificial sequence
112
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113
51
Probe
Artificial sequence
113
ggacgaggtgtgggtggtgggcatgggcatcgtcatgtctctcatcgtcct 51
51
Probe
Artificial sequence
113
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114
52
Probe
Artificial sequence
114
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52
Probe
Artificial sequence
114
gggacgaggtgtgggtggtgggcatgggcatcgtcatgtctctcatcgtcct 52
115
49
Probe
Artificial sequence
115
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49
Probe
Artificial sequence
115
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116
50
Probe
Artificial sequence
116
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50
Probe
Artificial sequence
116
acgaggtgtgggtggtgggcatgggcatcgtcatgtctctcatcgtcctg 50
117
51
Probe
Artificial sequence
117
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51
Probe
Artificial sequence
117
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118
52
Probe
Artificial sequence
118
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52
Probe
Artificial sequence
118
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119
53
Probe
Artificial sequence
119
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53
Probe
Artificial sequence
119
gggacgaggtgtgggtggtgggcatgggcatcgtcatgtctctcatcgtcctg 53
120
31
Probe
Artificial sequence
120
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31
Probe
Artificial sequence
120
ccaccgtgggaggcaacctgctggtcatcgt 31
121
32
Probe
Artificial sequence
121
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32
Probe
Artificial sequence
121
gccaccgtgggaggcaacctgctggtcatcgt 32
122
33
Probe
Artificial sequence
122
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33
Probe
Artificial sequence
122
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123
34
Probe
Artificial sequence
123
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34
Probe
Artificial sequence
123
tggccaccgtgggaggcaacctgctggtcatcgt 34
124
35
Probe
Artificial sequence
124
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35
Probe
Artificial sequence
124
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125
32
Probe
Artificial sequence
125
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32
Probe
Artificial sequence
125
ccaccgtgggaggcaacctgctggtcatcgtg 32
126
33
Probe
Artificial sequence
126
gccaccgtgggaggcaacctgctggtcatcgtg 33
33
Probe
Artificial sequence
126
gccaccgtgggaggcaacctgctggtcatcgtg 33
127
34
Probe
Artificial sequence
127
ggccaccgtgggaggcaacctgctggtcatcgtg 34
34
Probe
Artificial sequence
127
ggccaccgtgggaggcaacctgctggtcatcgtg 34
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35
Probe
Artificial sequence
128
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35
Probe
Artificial sequence
128
tggccaccgtgggaggcaacctgctggtcatcgtg 35
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36
Probe
Artificial sequence
129
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36
Probe
Artificial sequence
129
ctggccaccgtgggaggcaacctgctggtcatcgtg 36
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33
Probe
Artificial sequence
130
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33
Probe
Artificial sequence
130
ccaccgtgggaggcaacctgctggtcatcgtgg 33
131
34
Probe
Artificial sequence
131
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34
Probe
Artificial sequence
131
gccaccgtgggaggcaacctgctggtcatcgtgg 34
132
35
Probe
Artificial sequence
132
ggccaccgtgggaggcaacctgctggtcatcgtgg 35
35
Probe
Artificial sequence
132
ggccaccgtgggaggcaacctgctggtcatcgtgg 35
133
36
Probe
Artificial sequence
133
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36
Probe
Artificial sequence
133
tggccaccgtgggaggcaacctgctggtcatcgtgg 36
134
37
Probe
Artificial sequence
134
ctggccaccgtgggaggcaacctgctggtcatcgtgg 37
37
Probe
Artificial sequence
134
ctggccaccgtgggaggcaacctgctggtcatcgtgg 37
135
34
Probe
Artificial sequence
135
ccaccgtgggaggcaacctgctggtcatcgtggc 34
34
Probe
Artificial sequence
135
ccaccgtgggaggcaacctgctggtcatcgtggc 34
136
35
Probe
Artificial sequence
136
gccaccgtgggaggcaacctgctggtcatcgtggc 35
35
Probe
Artificial sequence
136
gccaccgtgggaggcaacctgctggtcatcgtggc 35
137
36
Probe
Artificial sequence
137
ggccaccgtgggaggcaacctgctggtcatcgtggc 36
36
Probe
Artificial sequence
137
ggccaccgtgggaggcaacctgctggtcatcgtggc 36
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37
Probe
Artificial sequence
138
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37
Probe
Artificial sequence
138
tggccaccgtgggaggcaacctgctggtcatcgtggc 37
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38
Probe
Artificial sequence
139
ctggccaccgtgggaggcaacctgctggtcatcgtggc 38
38
Probe
Artificial sequence
139
ctggccaccgtgggaggcaacctgctggtcatcgtggc 38
140
35
Probe
Artificial sequence
140
ccaccgtgggaggcaacctgctggtcatcgtggcc 35
35
Probe
Artificial sequence
140
ccaccgtgggaggcaacctgctggtcatcgtggcc 35
141
36
Probe
Artificial sequence
141
gccaccgtgggaggcaacctgctggtcatcgtggcc 36
36
Probe
Artificial sequence
141
gccaccgtgggaggcaacctgctggtcatcgtggcc 36
142
37
Probe
Artificial sequence
142
ggccaccgtgggaggcaacctgctggtcatcgtggcc 37
37
Probe
Artificial sequence
142
ggccaccgtgggaggcaacctgctggtcatcgtggcc 37
143
38
Probe
Artificial sequence
143
tggccaccgtgggaggcaacctgctggtcatcgtggcc 38
38
Probe
Artificial sequence
143
tggccaccgtgggaggcaacctgctggtcatcgtggcc 38
144
39
Probe
Artificial sequence
144
ctggccaccgtgggaggcaacctgctggtcatcgtggcc 39
39
Probe
Artificial sequence
144
ctggccaccgtgggaggcaacctgctggtcatcgtggcc 39
145
15
Probe
Artificial sequence
145
atcgcctggactccg 15
15
Probe
Artificial sequence
145
atcgcctggactccg 15
146
16
Probe
Artificial sequence
146
catcgcctggactccg 16
16
Probe
Artificial sequence
146
catcgcctggactccg 16
147
17
Probe
Artificial sequence
147
ccatcgcctggactccg 17
17
Probe
Artificial sequence
147
ccatcgcctggactccg 17
148
16
Probe
Artificial sequence
148
atcgcctggactccga 16
16
Probe
Artificial sequence
148
atcgcctggactccga 16
149
17
Probe
Artificial sequence
149
catcgcctggactccga 17
17
Probe
Artificial sequence
149
catcgcctggactccga 17
150
18
Probe
Artificial sequence
150
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18
Probe
Artificial sequence
150
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151
17
Probe
Artificial sequence
151
atcgcctggactccgag 17
17
Probe
Artificial sequence
151
atcgcctggactccgag 17
152
18
Probe
Artificial sequence
152
catcgcctggactccgag 18
18
Probe
Artificial sequence
152
catcgcctggactccgag 18
153
19
Probe
Artificial sequence
153
ccatcgcctggactccgag 19
19
Probe
Artificial sequence
153
ccatcgcctggactccgag 19
154
15
Probe
Artificial sequence
154
atcgcccggactccg 15
15
Probe
Artificial sequence
154
atcgcccggactccg 15
155
16
Probe
Artificial sequence
155
catcgcccggactccg 16
16
Probe
Artificial sequence
155
catcgcccggactccg 16
156
17
Probe
Artificial sequence
156
ccatcgcccggactccg 17
17
Probe
Artificial sequence
156
ccatcgcccggactccg 17
157
16
Probe
Artificial sequence
157
atcgcccggactccga 16
16
Probe
Artificial sequence
157
atcgcccggactccga 16
158
17
Probe
Artificial sequence
158
catcgcccggactccga 17
17
Probe
Artificial sequence
158
catcgcccggactccga 17
159
18
Probe
Artificial sequence
159
ccatcgcccggactccga 18
18
Probe
Artificial sequence
159
ccatcgcccggactccga 18
160
17
Probe
Artificial sequence
160
atcgcccggactccgag 17
17
Probe
Artificial sequence
160
atcgcccggactccgag 17
161
18
Probe
Artificial sequence
161
catcgcccggactccgag 18
18
Probe
Artificial sequence
161
catcgcccggactccgag 18
162
19
Probe
Artificial sequence
162
ccatcgcccggactccgag 19
19
Probe
Artificial sequence
162
ccatcgcccggactccgag 19
163
19
Primer
Artificial sequence
163
gattcttctgtcatttgca 19
19
Primer
Artificial sequence
163
gattcttctgtcatttgca 19
164
20
Primer
Artificial sequence
164
tgattcttctgtcatttgca 20
20
Primer
Artificial sequence
164
tgattcttctgtcatttgca 20
165
21
Primer
Artificial sequence
165
ttgattcttctgtcatttgca 21
21
Primer
Artificial sequence
165
ttgattcttctgtcatttgca 21
166
20
Primer
Artificial sequence
166
gattcttctgtcatttgcac 20
20
Primer
Artificial sequence
166
gattcttctgtcatttgcac 20
167
21
Primer
Artificial sequence
167
tgattcttctgtcatttgcac 21
21
Primer
Artificial sequence
167
tgattcttctgtcatttgcac 21
168
22
Primer
Artificial sequence
168
ttgattcttctgtcatttgcac 22
22
Primer
Artificial sequence
168
ttgattcttctgtcatttgcac 22
169
21
Primer
Artificial sequence
169
gattcttctgtcatttgcaca 21
21
Primer
Artificial sequence
169
gattcttctgtcatttgcaca 21
170
22
Primer
Artificial sequence
170
tgattcttctgtcatttgcaca 22
22
Primer
Artificial sequence
170
tgattcttctgtcatttgcaca 22
171
23
Primer
Artificial sequence
171
ttgattcttctgtcatttgcaca 23
23
Primer
Artificial sequence
171
ttgattcttctgtcatttgcaca 23
172
18
Primer
Artificial sequence
172
ggcaactgaccctttatg 18
18
Primer
Artificial sequence
172
ggcaactgaccctttatg 18
173
19
Primer
Artificial sequence
173
gggcaactgaccctttatg 19
19
Primer
Artificial sequence
173
gggcaactgaccctttatg 19
174
20
Primer
Artificial sequence
174
agggcaactgaccctttatg 20
20
Primer
Artificial sequence
174
agggcaactgaccctttatg 20
175
19
Primer
Artificial sequence
175
ggcaactgaccctttatga 19
19
Primer
Artificial sequence
175
ggcaactgaccctttatga 19
176
20
Primer
Artificial sequence
176
gggcaactgaccctttatga 20
20
Primer
Artificial sequence
176
gggcaactgaccctttatga 20
177
21
Primer
Artificial sequence
177
agggcaactgaccctttatga 21
21
Primer
Artificial sequence
177
agggcaactgaccctttatga 21
178
20
Primer
Artificial sequence
178
ggcaactgaccctttatgac 20
20
Primer
Artificial sequence
178
ggcaactgaccctttatgac 20
179
21
Primer
Artificial sequence
179
gggcaactgaccctttatgac 21
21
Primer
Artificial sequence
179
gggcaactgaccctttatgac 21
180
22
Primer
Artificial sequence
180
agggcaactgaccctttatgac 22
22
Primer
Artificial sequence
180
agggcaactgaccctttatgac 22
181
17
Primer
Artificial sequence
181
ttcttgctggcacccaa 17
17
Primer
Artificial sequence
181
ttcttgctggcacccaa 17
182
18
Primer
Artificial sequence
182
cttcttgctggcacccaa 18
18
Primer
Artificial sequence
182
cttcttgctggcacccaa 18
183
19
Primer
Artificial sequence
183
ccttcttgctggcacccaa 19
19
Primer
Artificial sequence
183
ccttcttgctggcacccaa 19
184
18
Primer
Artificial sequence
184
ttcttgctggcacccaat 18
18
Primer
Artificial sequence
184
ttcttgctggcacccaat 18
185
19
Primer
Artificial sequence
185
cttcttgctggcacccaat 19
19
Primer
Artificial sequence
185
cttcttgctggcacccaat 19
186
20
Primer
Artificial sequence
186
ccttcttgctggcacccaat 20
20
Primer
Artificial sequence
186
ccttcttgctggcacccaat 20
187
19
Primer
Artificial sequence
187
ttcttgctggcacccaatg 19
19
Primer
Artificial sequence
187
ttcttgctggcacccaatg 19
188
20
Primer
Artificial sequence
188
cttcttgctggcacccaatg 20
20
Primer
Artificial sequence
188
cttcttgctggcacccaatg 20
189
21
Primer
Artificial sequence
189
ccttcttgctggcacccaatg 21
21
Primer
Artificial sequence
189
ccttcttgctggcacccaatg 21
190
18
Primer
Artificial sequence
190
aggccagtgaagtgatga 18
18
Primer
Artificial sequence
190
aggccagtgaagtgatga 18
191
19
Primer
Artificial sequence
191
caggccagtgaagtgatga 19
19
Primer
Artificial sequence
191
caggccagtgaagtgatga 19
192
20
Primer
Artificial sequence
192
acaggccagtgaagtgatga 20
20
Primer
Artificial sequence
192
acaggccagtgaagtgatga 20
193
19
Primer
Artificial sequence
193
aggccagtgaagtgatgaa 19
19
Primer
Artificial sequence
193
aggccagtgaagtgatgaa 19
194
20
Primer
Artificial sequence
194
caggccagtgaagtgatgaa 20
20
Primer
Artificial sequence
194
caggccagtgaagtgatgaa 20
195
21
Primer
Artificial sequence
195
acaggccagtgaagtgatgaa 21
21
Primer
Artificial sequence
195
acaggccagtgaagtgatgaa 21
196
20
Primer
Artificial sequence
196
aggccagtgaagtgatgaag 20
20
Primer
Artificial sequence
196
aggccagtgaagtgatgaag 20
197
21
Primer
Artificial sequence
197
caggccagtgaagtgatgaag 21
21
Primer
Artificial sequence
197
caggccagtgaagtgatgaag 21
198
22
Primer
Artificial sequence
198
acaggccagtgaagtgatgaag 22
22
Primer
Artificial sequence
198
acaggccagtgaagtgatgaag 22
199
18
Primer
Artificial sequence
199
cttccttctttccctacc 18
18
Primer
Artificial sequence
199
cttccttctttccctacc 18
200
19
Primer
Artificial sequence
200
ccttccttctttccctacc 19
19
Primer
Artificial sequence
200
ccttccttctttccctacc 19
201
20
Primer
Artificial sequence
201
tccttccttctttccctacc 20
20
Primer
Artificial sequence
201
tccttccttctttccctacc 20
202
19
Primer
Artificial sequence
202
cttccttctttccctaccg 19
19
Primer
Artificial sequence
202
cttccttctttccctaccg 19
203
20
Primer
Artificial sequence
203
ccttccttctttccctaccg 20
20
Primer
Artificial sequence
203
ccttccttctttccctaccg 20
204
21
Primer
Artificial sequence
204
tccttccttctttccctaccg 21
21
Primer
Artificial sequence
204
tccttccttctttccctaccg 21
205
20
Primer
Artificial sequence
205
cttccttctttccctaccgc 20
20
Primer
Artificial sequence
205
cttccttctttccctaccgc 20
206
21
Primer
Artificial sequence
206
ccttccttctttccctaccgc 21
21
Primer
Artificial sequence
206
ccttccttctttccctaccgc 21
207
22
Primer
Artificial sequence
207
tccttccttctttccctaccgc 22
22
Primer
Artificial sequence
207
tccttccttctttccctaccgc 22
208
18
Primer
Artificial sequence
208
gtcatggtctggagtctc 18
18
Primer
Artificial sequence
208
gtcatggtctggagtctc 18
209
19
Primer
Artificial sequence
209
ggtcatggtctggagtctc 19
19
Primer
Artificial sequence
209
ggtcatggtctggagtctc 19
210
20
Primer
Artificial sequence
210
tggtcatggtctggagtctc 20
20
Primer
Artificial sequence
210
tggtcatggtctggagtctc 20
211
19
Primer
Artificial sequence
211
gtcatggtctggagtctcg 19
19
Primer
Artificial sequence
211
gtcatggtctggagtctcg 19
212
20
Primer
Artificial sequence
212
ggtcatggtctggagtctcg 20
20
Primer
Artificial sequence
212
ggtcatggtctggagtctcg 20
213
21
Primer
Artificial sequence
213
tggtcatggtctggagtctcg 21
21
Primer
Artificial sequence
213
tggtcatggtctggagtctcg 21
214
20
Primer
Artificial sequence
214
gtcatggtctggagtctcgg 20
20
Primer
Artificial sequence
214
gtcatggtctggagtctcgg 20
215
21
Primer
Artificial sequence
215
ggtcatggtctggagtctcgg 21
21
Primer
Artificial sequence
215
ggtcatggtctggagtctcgg 21
216
22
Primer
Artificial sequence
216
tggtcatggtctggagtctcgg 22
22
Primer
Artificial sequence
216
tggtcatggtctggagtctcgg 22
217
15
Probe
Artificial sequence
217
gtgaactaatttgac 15
15
Probe
Artificial sequence
217
gtgaactaatttgac 15
218
16
Probe
Artificial sequence
218
cgtgaactaatttgac 16
16
Probe
Artificial sequence
218
cgtgaactaatttgac 16
219
17
Probe
Artificial sequence
219
acgtgaactaatttgac 17
17
Probe
Artificial sequence
219
acgtgaactaatttgac 17
220
16
Probe
Artificial sequence
220
gtgaactaatttgaca 16
16
Probe
Artificial sequence
220
gtgaactaatttgaca 16
221
17
Probe
Artificial sequence
221
cgtgaactaatttgaca 17
17
Probe
Artificial sequence
221
cgtgaactaatttgaca 17
222
18
Probe
Artificial sequence
222
acgtgaactaatttgaca 18
18
Probe
Artificial sequence
222
acgtgaactaatttgaca 18
223
17
Probe
Artificial sequence
223
gtgaactaatttgacac 17
17
Probe
Artificial sequence
223
gtgaactaatttgacac 17
224
18
Probe
Artificial sequence
224
cgtgaactaatttgacac 18
18
Probe
Artificial sequence
224
cgtgaactaatttgacac 18
225
19
Probe
Artificial sequence
225
acgtgaactaatttgacac 19
19
Probe
Artificial sequence
225
acgtgaactaatttgacac 19
226
15
Probe
Artificial sequence
226
gtgagctaatttgac 15
15
Probe
Artificial sequence
226
gtgagctaatttgac 15
227
16
Probe
Artificial sequence
227
cgtgagctaatttgac 16
16
Probe
Artificial sequence
227
cgtgagctaatttgac 16
228
17
Probe
Artificial sequence
228
acgtgagctaatttgac 17
17
Probe
Artificial sequence
228
acgtgagctaatttgac 17
229
16
Probe
Artificial sequence
229
gtgagctaatttgaca 16
16
Probe
Artificial sequence
229
gtgagctaatttgaca 16
230
17
Probe
Artificial sequence
230
cgtgagctaatttgaca 17
17
Probe
Artificial sequence
230
cgtgagctaatttgaca 17
231
18
Probe
Artificial sequence
231
acgtgagctaatttgaca 18
18
Probe
Artificial sequence
231
acgtgagctaatttgaca 18
232
17
Probe
Artificial sequence
232
gtgagctaatttgacac 17
17
Probe
Artificial sequence
232
gtgagctaatttgacac 17
233
18
Probe
Artificial sequence
233
cgtgagctaatttgacac 18
18
Probe
Artificial sequence
233
cgtgagctaatttgacac 18
234
19
Probe
Artificial sequence
234
acgtgagctaatttgacac 19
19
Probe
Artificial sequence
234
acgtgagctaatttgacac 19
235
15
Probe
Artificial sequence
235
gtgaactagtttgac 15
15
Probe
Artificial sequence
235
gtgaactagtttgac 15
236
16
Probe
Artificial sequence
236
cgtgaactagtttgac 16
16
Probe
Artificial sequence
236
cgtgaactagtttgac 16
237
17
Probe
Artificial sequence
237
acgtgaactagtttgac 17
17
Probe
Artificial sequence
237
acgtgaactagtttgac 17
238
16
Probe
Artificial sequence
238
gtgaactagtttgaca 16
16
Probe
Artificial sequence
238
gtgaactagtttgaca 16
239
17
Probe
Artificial sequence
239
cgtgaactagtttgaca 17
17
Probe
Artificial sequence
239
cgtgaactagtttgaca 17
240
18
Probe
Artificial sequence
240
acgtgaactagtttgaca 18
18
Probe
Artificial sequence
240
acgtgaactagtttgaca 18
241
17
Probe
Artificial sequence
241
gtgaactagtttgacac 17
17
Probe
Artificial sequence
241
gtgaactagtttgacac 17
242
18
Probe
Artificial sequence
242
cgtgaactagtttgacac 18
18
Probe
Artificial sequence
242
cgtgaactagtttgacac 18
243
19
Probe
Artificial sequence
243
acgtgaactagtttgacac 19
19
Probe
Artificial sequence
243
acgtgaactagtttgacac 19
244
15
Probe
Artificial sequence
244
gtgagctagtttgac 15
15
Probe
Artificial sequence
244
gtgagctagtttgac 15
245
16
Probe
Artificial sequence
245
cgtgagctagtttgac 16
16
Probe
Artificial sequence
245
cgtgagctagtttgac 16
246
17
Probe
Artificial sequence
246
acgtgagctagtttgac 17
17
Probe
Artificial sequence
246
acgtgagctagtttgac 17
247
16
Probe
Artificial sequence
247
gtgagctagtttgaca 16
16
Probe
Artificial sequence
247
gtgagctagtttgaca 16
248
17
Probe
Artificial sequence
248
cgtgagctagtttgaca 17
17
Probe
Artificial sequence
248
cgtgagctagtttgaca 17
249
18
Probe
Artificial sequence
249
acgtgagctagtttgaca 18
18
Probe
Artificial sequence
249
acgtgagctagtttgaca 18
250
17
Probe
Artificial sequence
250
gtgaactagtttgacac 17
17
Probe
Artificial sequence
250
gtgaactagtttgacac 17
251
18
Probe
Artificial sequence
251
cgtgaactagtttgacac 18
18
Probe
Artificial sequence
251
cgtgaactagtttgacac 18
252
19
Probe
Artificial sequence
252
acgtgaactagtttgacac 19
19
Probe
Artificial sequence
252
acgtgaactagtttgacac 19
253
15
Probe
Artificial sequence
253
gtgagctagtttgac 15
15
Probe
Artificial sequence
253
gtgagctagtttgac 15
254
16
Probe
Artificial sequence
254
cgtgagctagtttgac 16
16
Probe
Artificial sequence
254
cgtgagctagtttgac 16
255
17
Probe
Artificial sequence
255
acgtgagctagtttgac 17
17
Probe
Artificial sequence
255
acgtgagctagtttgac 17
256
16
Probe
Artificial sequence
256
gtgagctagtttgaca 16
16
Probe
Artificial sequence
256
gtgagctagtttgaca 16
257
17
Probe
Artificial sequence
257
cgtgagctagtttgaca 17
17
Probe
Artificial sequence
257
cgtgagctagtttgaca 17
258
18
Probe
Artificial sequence
258
acgtgagctagtttgaca 18
18
Probe
Artificial sequence
258
acgtgagctagtttgaca 18
259
17
Probe
Artificial sequence
259
gtgagctagtttgacac 17
17
Probe
Artificial sequence
259
gtgagctagtttgacac 17
260
18
Probe
Artificial sequence
260
cgtgagctagtttgacac 18
18
Probe
Artificial sequence
260
cgtgagctagtttgacac 18
261
19
Probe
Artificial sequence
261
acgtgagctagtttgacac 19
19
Probe
Artificial sequence
261
acgtgagctagtttgacac 19
262
45
Probe
Artificial sequence
262
gttagtctttagcgacgtgttttacagaaggataatttattttta 45
45
Probe
Artificial sequence
262
gttagtctttagcgacgtgttttacagaaggataatttattttta 45
263
46
Probe
Artificial sequence
263
agttagtctttagcgacgtgttttacagaaggataatttattttta 46
46
Probe
Artificial sequence
263
agttagtctttagcgacgtgttttacagaaggataatttattttta 46
264
47
Probe
Artificial sequence
264
cagttagtctttagcgacgtgttttacagaaggataatttattttta 47
47
Probe
Artificial sequence
264
cagttagtctttagcgacgtgttttacagaaggataatttattttta 47
265
48
Probe
Artificial sequence
265
ccagttagtctttagcgacgtgttttacagaaggataatttattttta 48
48
Probe
Artificial sequence
265
ccagttagtctttagcgacgtgttttacagaaggataatttattttta 48
266
49
Probe
Artificial sequence
266
accagttagtctttagcgacgtgttttacagaaggataatttattttta 49
49
Probe
Artificial sequence
266
accagttagtctttagcgacgtgttttacagaaggataatttattttta 49
267
46
Probe
Artificial sequence
267
gttagtctttagcgacgtgttttacagaaggataatttatttttag 46
46
Probe
Artificial sequence
267
gttagtctttagcgacgtgttttacagaaggataatttatttttag 46
268
47
Probe
Artificial sequence
268
agttagtctttagcgacgtgttttacagaaggataatttatttttag 47
47
Probe
Artificial sequence
268
agttagtctttagcgacgtgttttacagaaggataatttatttttag 47
269
48
Probe
Artificial sequence
269
cagttagtctttagcgacgtgttttacagaaggataatttatttttag 48
48
Probe
Artificial sequence
269
cagttagtctttagcgacgtgttttacagaaggataatttatttttag 48
270
49
Probe
Artificial sequence
270
ccagttagtctttagcgacgtgttttacagaaggataatttatttttag 49
49
Probe
Artificial sequence
270
ccagttagtctttagcgacgtgttttacagaaggataatttatttttag 49
271
50
Probe
Artificial sequence
271
accagttagtctttagcgacgtgttttacagaaggataatttatttttag 50
50
Probe
Artificial sequence
271
accagttagtctttagcgacgtgttttacagaaggataatttatttttag 50
272
47
Probe
Artificial sequence
272
gttagtctttagcgacgtgttttacagaaggataatttatttttagt 47
47
Probe
Artificial sequence
272
gttagtctttagcgacgtgttttacagaaggataatttatttttagt 47
273
48
Probe
Artificial sequence
273
agttagtctttagcgacgtgttttacagaaggataatttatttttagt 48
48
Probe
Artificial sequence
273
agttagtctttagcgacgtgttttacagaaggataatttatttttagt 48
274
49
Probe
Artificial sequence
274
cagttagtctttagcgacgtgttttacagaaggataatttatttttagt 49
49
Probe
Artificial sequence
274
cagttagtctttagcgacgtgttttacagaaggataatttatttttagt 49
275
50
Probe
Artificial sequence
275
ccagttagtctttagcgacgtgttttacagaaggataatttatttttagt 50
50
Probe
Artificial sequence
275
ccagttagtctttagcgacgtgttttacagaaggataatttatttttagt 50
276
51
Probe
Artificial sequence
276
accagttagtctttagcgacgtgttttacagaaggataatttatttttagt 51
51
Probe
Artificial sequence
276
accagttagtctttagcgacgtgttttacagaaggataatttatttttagt 51
277
48
Probe
Artificial sequence
277
gttagtctttagcgacgtgttttacagaaggataatttatttttagta 48
48
Probe
Artificial sequence
277
gttagtctttagcgacgtgttttacagaaggataatttatttttagta 48
278
49
Probe
Artificial sequence
278
agttagtctttagcgacgtgttttacagaaggataatttatttttagta 49
49
Probe
Artificial sequence
278
agttagtctttagcgacgtgttttacagaaggataatttatttttagta 49
279
50
Probe
Artificial sequence
279
cagttagtctttagcgacgtgttttacagaaggataatttatttttagta 50
50
Probe
Artificial sequence
279
cagttagtctttagcgacgtgttttacagaaggataatttatttttagta 50
280
51
Probe
Artificial sequence
280
ccagttagtctttagcgacgtgttttacagaaggataatttatttttagta 51
51
Probe
Artificial sequence
280
ccagttagtctttagcgacgtgttttacagaaggataatttatttttagta 51
281
52
Probe
Artificial sequence
281
accagttagtctttagcgacgtgttttacagaaggataatttatttttagta 52
52
Probe
Artificial sequence
281
accagttagtctttagcgacgtgttttacagaaggataatttatttttagta 52
282
49
Probe
Artificial sequence
282
gttagtctttagcgacgtgttttacagaaggataatttatttttagtat 49
49
Probe
Artificial sequence
282
gttagtctttagcgacgtgttttacagaaggataatttatttttagtat 49
283
50
Probe
Artificial sequence
283
agttagtctttagcgacgtgttttacagaaggataatttatttttagtat 50
50
Probe
Artificial sequence
283
agttagtctttagcgacgtgttttacagaaggataatttatttttagtat 50
284
51
Probe
Artificial sequence
284
cagttagtctttagcgacgtgttttacagaaggataatttatttttagtat 51
51
Probe
Artificial sequence
284
cagttagtctttagcgacgtgttttacagaaggataatttatttttagtat 51
285
52
Probe
Artificial sequence
285
ccagttagtctttagcgacgtgttttacagaaggataatttatttttagtat 52
52
Probe
Artificial sequence
285
ccagttagtctttagcgacgtgttttacagaaggataatttatttttagtat 52
286
53
Probe
Artificial sequence
286
accagttagtctttagcgacgtgttttacagaaggataatttatttttagtat 53
53
Probe
Artificial sequence
286
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287
14
Probe
Artificial sequence
287
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14
Probe
Artificial sequence
287
gcagtgcgtcgttt 14
288
15
Probe
Artificial sequence
288
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15
Probe
Artificial sequence
288
tgcagtgcgtcgttt 15
289
16
Probe
Artificial sequence
289
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16
Probe
Artificial sequence
289
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15
Probe
Artificial sequence
290
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15
Probe
Artificial sequence
290
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291
16
Probe
Artificial sequence
291
tgcagtgcgtcgtttc 16
16
Probe
Artificial sequence
291
tgcagtgcgtcgtttc 16
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17
Probe
Artificial sequence
292
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17
Probe
Artificial sequence
292
ctgcagtgcgtcgtttc 17
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16
Probe
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16
Probe
Artificial sequence
293
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17
Probe
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17
Probe
Artificial sequence
294
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18
Probe
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18
Probe
Artificial sequence
295
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14
Probe
Artificial sequence
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14
Probe
Artificial sequence
296
gcagtgcgtccttt 14
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15
Probe
Artificial sequence
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15
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Artificial sequence
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15
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Artificial sequence
299
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16
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16
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Artificial sequence
300
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17
Probe
Artificial sequence
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17
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Artificial sequence
301
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17
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17
Probe
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Probe
Artificial sequence
304
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18
Probe
Artificial sequence
304
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45
Probe
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45
Probe
Artificial sequence
305
gctccacacccaccacccgtacccgtagcagtacagagagtagca 45
306
46
Probe
Artificial sequence
306
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46
Probe
Artificial sequence
306
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307
47
Probe
Artificial sequence
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47
Probe
Artificial sequence
307
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48
Probe
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48
Probe
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308
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49
Probe
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49
Probe
Artificial sequence
309
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46
Probe
Artificial sequence
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46
Probe
Artificial sequence
310
gctccacacccaccacccgtacccgtagcagtacagagagtagcag 46
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47
Probe
Artificial sequence
311
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47
Probe
Artificial sequence
311
tgctccacacccaccacccgtacccgtagcagtacagagagtagcag 47
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48
Probe
Artificial sequence
312
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48
Probe
Artificial sequence
312
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49
Probe
Artificial sequence
313
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49
Probe
Artificial sequence
313
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314
50
Probe
Artificial sequence
314
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50
Probe
Artificial sequence
314
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315
47
Probe
Artificial sequence
315
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47
Probe
Artificial sequence
315
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316
48
Probe
Artificial sequence
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48
Probe
Artificial sequence
316
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49
Probe
Artificial sequence
317
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49
Probe
Artificial sequence
317
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318
50
Probe
Artificial sequence
318
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50
Probe
Artificial sequence
318
cctgctccacacccaccacccgtacccgtagcagtacagagagtagcagg 50
319
51
Probe
Artificial sequence
319
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51
Probe
Artificial sequence
319
ccctgctccacacccaccacccgtacccgtagcagtacagagagtagcagg 51
320
48
Probe
Artificial sequence
320
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48
Probe
Artificial sequence
320
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49
Probe
Artificial sequence
321
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49
Probe
Artificial sequence
321
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322
50
Probe
Artificial sequence
322
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50
Probe
Artificial sequence
322
ctgctccacacccaccacccgtacccgtagcagtacagagagtagcagga 50
323
51
Probe
Artificial sequence
323
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51
Probe
Artificial sequence
323
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324
52
Probe
Artificial sequence
324
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52
Probe
Artificial sequence
324
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49
Probe
Artificial sequence
325
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49
Probe
Artificial sequence
325
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326
50
Probe
Artificial sequence
326
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50
Probe
Artificial sequence
326
tgctccacacccaccacccgtacccgtagcagtacagagagtagcaggac 50
327
51
Probe
Artificial sequence
327
ctgctccacacccaccacccgtacccgtagcagtacagagagtagcaggac 51
51
Probe
Artificial sequence
327
ctgctccacacccaccacccgtacccgtagcagtacagagagtagcaggac 51
328
52
Probe
Artificial sequence
328
cctgctccacacccaccacccgtacccgtagcagtacagagagtagcaggac 52
52
Probe
Artificial sequence
328
cctgctccacacccaccacccgtacccgtagcagtacagagagtagcaggac 52
329
53
Probe
Artificial sequence
329
ccctgctccacacccaccacccgtacccgtagcagtacagagagtagcaggac 53
53
Probe
Artificial sequence
329
ccctgctccacacccaccacccgtacccgtagcagtacagagagtagcaggac 53
330
31
Probe
Artificial sequence
330
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31
Probe
Artificial sequence
330
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331
32
Probe
Artificial sequence
331
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32
Probe
Artificial sequence
331
cggtggcaccctccgttggacgaccagtagca 32
332
33
Probe
Artificial sequence
332
ccggtggcaccctccgttggacgaccagtagca 33
33
Probe
Artificial sequence
332
ccggtggcaccctccgttggacgaccagtagca 33
333
34
Probe
Artificial sequence
333
accggtggcaccctccgttggacgaccagtagca 34
34
Probe
Artificial sequence
333
accggtggcaccctccgttggacgaccagtagca 34
334
35
Probe
Artificial sequence
334
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35
Probe
Artificial sequence
334
gaccggtggcaccctccgttggacgaccagtagca 35
335
32
Probe
Artificial sequence
335
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32
Probe
Artificial sequence
335
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Probe
Artificial sequence
336
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33
Probe
Artificial sequence
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Probe
Artificial sequence
337
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Probe
Artificial sequence
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Probe
Artificial sequence
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35
Probe
Artificial sequence
338
accggtggcaccctccgttggacgaccagtagcac 35
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36
Probe
Artificial sequence
339
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36
Probe
Artificial sequence
339
gaccggtggcaccctccgttggacgaccagtagcac 36
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33
Probe
Artificial sequence
340
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33
Probe
Artificial sequence
340
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341
34
Probe
Artificial sequence
341
cggtggcaccctccgttggacgaccagtagcacc 34
34
Probe
Artificial sequence
341
cggtggcaccctccgttggacgaccagtagcacc 34
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35
Probe
Artificial sequence
342
ccggtggcaccctccgttggacgaccagtagcacc 35
35
Probe
Artificial sequence
342
ccggtggcaccctccgttggacgaccagtagcacc 35
343
36
Probe
Artificial sequence
343
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36
Probe
Artificial sequence
343
accggtggcaccctccgttggacgaccagtagcacc 36
344
37
Probe
Artificial sequence
344
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37
Probe
Artificial sequence
344
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345
34
Probe
Artificial sequence
345
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34
Probe
Artificial sequence
345
ggtggcaccctccgttggacgaccagtagcaccg 34
346
35
Probe
Artificial sequence
346
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35
Probe
Artificial sequence
346
cggtggcaccctccgttggacgaccagtagcaccg 35
347
36
Probe
Artificial sequence
347
ccggtggcaccctccgttggacgaccagtagcaccg 36
36
Probe
Artificial sequence
347
ccggtggcaccctccgttggacgaccagtagcaccg 36
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37
Probe
Artificial sequence
348
accggtggcaccctccgttggacgaccagtagcaccg 37
37
Probe
Artificial sequence
348
accggtggcaccctccgttggacgaccagtagcaccg 37
349
38
Probe
Artificial sequence
349
gaccggtggcaccctccgttggacgaccagtagcaccg 38
38
Probe
Artificial sequence
349
gaccggtggcaccctccgttggacgaccagtagcaccg 38
350
35
Probe
Artificial sequence
350
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35
Probe
Artificial sequence
350
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351
36
Probe
Artificial sequence
351
cggtggcaccctccgttggacgaccagtagcaccgg 36
36
Probe
Artificial sequence
351
cggtggcaccctccgttggacgaccagtagcaccgg 36
352
37
Probe
Artificial sequence
352
ccggtggcaccctccgttggacgaccagtagcaccgg 37
37
Probe
Artificial sequence
352
ccggtggcaccctccgttggacgaccagtagcaccgg 37
353
38
Probe
Artificial sequence
353
accggtggcaccctccgttggacgaccagtagcaccgg 38
38
Probe
Artificial sequence
353
accggtggcaccctccgttggacgaccagtagcaccgg 38
354
39
Probe
Artificial sequence
354
gaccggtggcaccctccgttggacgaccagtagcaccgg 39
39
Probe
Artificial sequence
354
gaccggtggcaccctccgttggacgaccagtagcaccgg 39
355
15
Probe
Artificial sequence
355
tagcggacctgaggc 15
15
Probe
Artificial sequence
355
tagcggacctgaggc 15
356
16
Probe
Artificial sequence
356
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16
Probe
Artificial sequence
356
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17
Probe
Artificial sequence
357
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17
Probe
Artificial sequence
357
ggtagcggacctgaggc 17
358
16
Probe
Artificial sequence
358
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16
Probe
Artificial sequence
358
tagcggacctgaggct 16
359
17
Probe
Artificial sequence
359
gtagcggacctgaggct 17
17
Probe
Artificial sequence
359
gtagcggacctgaggct 17
360
18
Probe
Artificial sequence
360
ggtagcggacctgaggct 18
18
Probe
Artificial sequence
360
ggtagcggacctgaggct 18
361
17
Probe
Artificial sequence
361
tagcggacctgaggctc 17
17
Probe
Artificial sequence
361
tagcggacctgaggctc 17
362
18
Probe
Artificial sequence
362
gtagcggacctgaggctc 18
18
Probe
Artificial sequence
362
gtagcggacctgaggctc 18
363
19
Probe
Artificial sequence
363
ggtagcggacctgaggctc 19
19
Probe
Artificial sequence
363
ggtagcggacctgaggctc 19
364
15
Probe
Artificial sequence
364
tagcgggcctgaggc 15
15
Probe
Artificial sequence
364
tagcgggcctgaggc 15
365
16
Probe
Artificial sequence
365
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16
Probe
Artificial sequence
365
gtagcgggcctgaggc 16
366
17
Probe
Artificial sequence
366
ggtagcgggcctgaggc 17
17
Probe
Artificial sequence
366
ggtagcgggcctgaggc 17
367
16
Probe
Artificial sequence
367
tagcgggcctgaggct 16
16
Probe
Artificial sequence
367
tagcgggcctgaggct 16
368
17
Probe
Artificial sequence
368
gtagcgggcctgaggct 17
17
Probe
Artificial sequence
368
gtagcgggcctgaggct 17
369
18
Probe
Artificial sequence
369
ggtagcgggcctgaggct 18
18
Probe
Artificial sequence
369
ggtagcgggcctgaggct 18
370
17
Probe
Artificial sequence
370
tagcgggcctgaggctc 17
17
Probe
Artificial sequence
370
tagcgggcctgaggctc 17
371
18
Probe
Artificial sequence
371
gtagcgggcctgaggctc 18
18
Probe
Artificial sequence
371
gtagcgggcctgaggctc 18
372
19
Probe
Artificial sequence
372
ggtagcgggcctgaggctc 19
19
Probe
Artificial sequence
372
ggtagcgggcctgaggctc 19
373
19
Primer
Artificial sequence
373
ctaagaagacagtaaacgt 19
19
Primer
Artificial sequence
373
ctaagaagacagtaaacgt 19
374
20
Primer
Artificial sequence
374
actaagaagacagtaaacgt 20
20
Primer
Artificial sequence
374
actaagaagacagtaaacgt 20
375
21
Primer
Artificial sequence
375
aactaagaagacagtaaacgt 21
21
Primer
Artificial sequence
375
aactaagaagacagtaaacgt 21
376
20
Primer
Artificial sequence
376
ctaagaagacagtaaacgtg 20
20
Primer
Artificial sequence
376
ctaagaagacagtaaacgtg 20
377
21
Primer
Artificial sequence
377
actaagaagacagtaaacgtg 21
21
Primer
Artificial sequence
377
actaagaagacagtaaacgtg 21
378
22
Primer
Artificial sequence
378
aactaagaagacagtaaacgtg 22
22
Primer
Artificial sequence
378
aactaagaagacagtaaacgtg 22
379
21
Primer
Artificial sequence
379
ctaagaagacagtaaacgtgt 21
21
Primer
Artificial sequence
379
ctaagaagacagtaaacgtgt 21
380
22
Primer
Artificial sequence
380
actaagaagacagtaaacgtgt 22
22
Primer
Artificial sequence
380
actaagaagacagtaaacgtgt 22
381
23
Primer
Artificial sequence
381
aactaagaagacagtaaacgtgt 23
23
Primer
Artificial sequence
381
aactaagaagacagtaaacgtgt 23
382
18
Primer
Artificial sequence
382
ccgttgactgggaaatac 18
18
Primer
Artificial sequence
382
ccgttgactgggaaatac 18
383
19
Primer
Artificial sequence
383
cccgttgactgggaaatac 19
19
Primer
Artificial sequence
383
cccgttgactgggaaatac 19
384
20
Primer
Artificial sequence
384
tcccgttgactgggaaatac 20
20
Primer
Artificial sequence
384
tcccgttgactgggaaatac 20
385
19
Primer
Artificial sequence
385
ccgttgactgggaaatact 19
19
Primer
Artificial sequence
385
ccgttgactgggaaatact 19
386
20
Primer
Artificial sequence
386
cccgttgactgggaaatact 20
20
Primer
Artificial sequence
386
cccgttgactgggaaatact 20
387
21
Primer
Artificial sequence
387
tcccgttgactgggaaatact 21
21
Primer
Artificial sequence
387
tcccgttgactgggaaatact 21
388
20
Primer
Artificial sequence
388
ccgttgactgggaaatactg 20
20
Primer
Artificial sequence
388
ccgttgactgggaaatactg 20
389
21
Primer
Artificial sequence
389
cccgttgactgggaaatactg 21
21
Primer
Artificial sequence
389
cccgttgactgggaaatactg 21
390
22
Primer
Artificial sequence
390
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Claims (14)
- 増幅した対象遺伝子に対して、
少なくとも「ｃａｃｔｔｇａｔｔａａａｃｔｇ」または「ｃａｃｔｃｇａｔｔａａａｃｔｇ」の塩基配列（１５ｍｅｒ乃至１９ｍｅｒ）またはこれらの塩基配列のうち１つ、２つまたは３つの塩基が別の異なる塩基に置き換えられた塩基配列を含むプローブ、
及び少なくとも「ｃａａｔｃａｇａａａｔｃｇｃｔｇｃａｃａａａａｔｇｔｃｔｔｃｃｔａｔｔａａａｔａａａａａｔ」の塩基配列（４５ｍｅｒ乃至５３ｍｅｒ）またはこれらの塩基配列のうち１つ、２つまたは３つの塩基が別の異なる塩基に置き換えられた塩基配列を含むプローブ、
またはこれらのプローブの塩基配列と相補的な塩基配列、この塩基配列のうち１つ、２つまたは３つの塩基が別の異なる塩基に置き換えられた塩基配列を含むプローブ、
を混合して結合させ、
これらの各プローブに対して、結合することによって発色する成分をそれぞれ結合させて発色させ、
上記混合物を加熱することによって、上記プローブを上記対象遺伝子から剥がし、これにより上記発色する成分による発色を低下させ、この低下するときの温度の違いに基づいて、上記対象遺伝子の差異を検出することを特徴とする遺伝子検査方法。 - 上記対象遺伝子は、
少なくとも「ｇａｔｔｃｔｔｃｔｇｔｃａｔｔｔｇｃａ」の塩基配列（１９ｍｅｒ乃至２３ｍｅｒ）を含むプライマー、
及び少なくとも「ｇｇｃａａｃｔｇａｃｃｃｔｔｔａｔｇ」の塩基配列（１８ｍｅｒ乃至２２ｍｅｒ）を含むプライマーによって増幅されることを特徴とする請求項１記載の遺伝子検査方法。 - 上記増幅のアニーリング温度は６４℃乃至７０℃、望ましくは６５℃乃至６９℃、より望ましくは６６℃乃至６８℃、さらに望ましくは約６７℃であることを特徴とする請求項２記載の遺伝子検査方法。
- 増幅した対象遺伝子に対して、
少なくとも「ｃｇｔｃａｃｇｃａｇｃａａａ」または「ｃｇｔｃａｃｇｃａｇｇａａａ」の塩基配列（１４ｍｅｒ乃至１８ｍｅｒ）またはこれらの塩基配列のうち１つ、２つまたは３つの塩基が別の異なる塩基に置き換えられた塩基配列を含むプローブ、
及び少なくとも「ｃｇａｇｇｔｇｔｇｇｇｔｇｇｔｇｇｇｃａｔｇｇｇｃａｔｃｇｔｃａｔｇｔｃｔｃｔｃａｔｃｇｔ」の塩基配列（４５ｍｅｒ乃至５３ｍｅｒ）またはこれらの塩基配列のうち１つ、２つまたは３つの塩基が別の異なる塩基に置き換えられた塩基配列を含むプローブ、
またはこれらのプローブの塩基配列と相補的な塩基配列、この塩基配列のうち１つ、２つまたは３つの塩基が別の異なる塩基に置き換えられた塩基配列を含むプローブ、
を混合して結合させ、
これらの各プローブに対して、結合することによって発色する成分をそれぞれ結合させて発色させ、
上記混合物を加熱することによって、上記プローブを上記対象遺伝子から剥がし、これにより上記発色する成分による発色を低下させ、この低下するときの温度の違いに基づいて、上記対象遺伝子の差異を検出することを特徴とする遺伝子検査方法。 - 上記対象遺伝子は、
少なくとも「ｔｔｃｔｔｇｃｔｇｇｃａｃｃｃａａ」の塩基配列（１７ｍｅｒ乃至２１ｍｅｒ）を含むプライマー、
及び少なくとも「ａｇｇｃｃａｇｔｇａａｇｔｇａｔｇａ」の塩基配列（１８ｍｅｒ乃至２２ｍｅｒ）を含むプライマーによって増幅されることを特徴とする請求項４記載の遺伝子検査方法。 - 上記増幅のアニーリング温度は６１℃乃至６７℃、望ましくは６２℃乃至６６℃、より望ましくは６３℃乃至６５℃、さらに望ましくは約６４℃であることを特徴とする請求項５記載の遺伝子検査方法。
- 増幅した対象遺伝子に対して、
少なくとも「ｃｃａｃｃｇｔｇｇｇａｇｇｃａａｃｃｔｇｃｔｇｇｔｃａｔｃｇｔ」の塩基配列（３１ｍｅｒ乃至３９ｍｅｒ）またはこれらの塩基配列のうち１つ、２つまたは３つの塩基が別の異なる塩基に置き換えられた塩基配列を含むプローブ、
及び少なくとも「ａｔｃｇｃｃｔｇｇａｃｔｃｃｇ」または「ａｔｃｇｃｃｃｇｇａｃｔｃｃｇ」の塩基配列（１５ｍｅｒ乃至１９ｍｅｒ）またはこれらの塩基配列のうち１つ、２つまたは３つの塩基が別の異なる塩基に置き換えられた塩基配列を含むプローブ、
またはこれらのプローブの塩基配列と相補的な塩基配列、この塩基配列のうち１つ、２つまたは３つの塩基が別の異なる塩基に置き換えられた塩基配列を含むプローブ、
を混合して結合させ、
これらの各プローブに対して、結合することによって発色する成分をそれぞれ結合させて発色させ、
上記混合物を加熱することによって、上記プローブを上記対象遺伝子から剥がし、これにより上記発色する成分による発色を低下させ、この低下するときの温度の違いに基づいて、上記対象遺伝子の差異を検出することを特徴とする遺伝子検査方法。 - 上記対象遺伝子は、
少なくとも「ｃｔｔｃｃｔｔｃｔｔｔｃｃｃｔａｃｃ」の塩基配列（１８ｍｅｒ乃至２２ｍｅｒ）を含むプライマー、
及び少なくとも「ｇｔｃａｔｇｇｔｃｔｇｇａｇｔｃｔｃ」の塩基配列（１８ｍｅｒ乃至２２ｍｅｒ）を含むプライマーによって増幅されることを特徴とする請求項７記載の遺伝子検査方法。 - 上記増幅のアニーリング温度は６５℃乃至７１℃、望ましくは６６℃乃至７０℃、より望ましくは６７℃乃至６９℃、さらに望ましくは約６８℃であることを特徴とする請求項８記載の遺伝子検査方法。
- 上記プローブを上記対象遺伝子から剥がすときの加熱は、約４０℃から約８０℃に向かって、約０．０１℃／秒乃至０．５℃／秒の割合で加熱であることを特徴とする請求項１、２、３、４、５、６、７、８または９記載の遺伝子検査方法。
- 上記発色する成分の発色の低下特性を微分し、この微分特性に基づいて上記対象遺伝子の差異を検出することを特徴とする請求項１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０記載の遺伝子検査方法。
- 請求項１、２または３の遺伝子検査方法と、請求項４、５または６の遺伝子検査方法と、請求項７、８または９の遺伝子検査方法とを、共に行なって、複数の対象遺伝子の差異を同時に多重的に検出することを特徴とする遺伝子検査方法。
- 上記増幅した対象遺伝子に結合した各プローブの間隔塩基数は０乃至１５であることを特徴とする請求項１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２記載の遺伝子検査方法。
- 上記請求項１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２または１３記載の遺伝子検査方法に使用される上記プローブ及び上記発色する成分または上記プライマーのキット。
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Publications (2)
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8076348B2 (en) | 2005-08-08 | 2011-12-13 | Astellas Pharma Inc. | Acylguanidine derivative or salt thereof |
| CN114250224A (zh) * | 2021-12-16 | 2022-03-29 | 福建和瑞基因科技有限公司 | 一种用于提取或检测样本中小分子rna的核酸组合物及其试剂盒和方法 |
-
2006
- 2006-08-24 JP JP2006228498A patent/JP5017552B2/ja active Active
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8076348B2 (en) | 2005-08-08 | 2011-12-13 | Astellas Pharma Inc. | Acylguanidine derivative or salt thereof |
| CN114250224A (zh) * | 2021-12-16 | 2022-03-29 | 福建和瑞基因科技有限公司 | 一种用于提取或检测样本中小分子rna的核酸组合物及其试剂盒和方法 |
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