JP2007533756A - 置換有機硫黄化合物およびその使用方法 - Google Patents
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Abstract
Description
本出願は、2004年4月20日に出願された米国特許仮出願第60/564,151号に関する。この文書の内容は、本明細書中で参考として援用される。
本発明は有機硫黄化合物及びその使用方法に関する。
Williams,L.A.D.,Gardner,T.L.,Fletcher,C.K.,Naravane,A.,Gibbs,N.およびFleischhacker,R."Immunomodulatory activities of Petiveria alliacea.",Phytother.Res.,1997,11,251−253 Williams,L.A.D.,Vasquez,E.,Klaiber,I.,Kraus,W.およびRosner,H."A sulfonic anhydride derivative from dibenzyl trisulphide with agro−chemical activities",Chemosphere,2003,51,701−706 Rosner,H.,Williams,L.A.D.,Jung,A.およびKraus,W"Disassembly of microtubles and inhibition of neurite outgrowth,neuroblastoma cell proliferation,and MAP kinase tyrosine dephosphorylation by dibenzyl trisulphide",.Biochim.Biophy.Acta,2001,1540,166−177 Mata−Greenwood,E.,Ito A.,Westernburg,H.,Cui,B.,Mehta,R.G.,Kinghorn,A.D.およびPezzuto,J.M."Discovery of novel inducers of cellular differentiation using HL−60 promyeolocytic cells"Anticancer Res.2001,21,1763−1770
本発明は、有機硫黄化合物、医薬組成物、及びその使用方法に関する。より詳細には、本発明は、置換ジ−スルフィド化合物、トリ−スルフィド化合物、テトラ−スルフィド化合物及びペンタ−スルフィド化合物に関し、この化合物には、その薬学上許容し得る塩及び部分的に酸化されたスルホン誘導体も含まれる。本発明に記載される化合物は、抗腫瘍活性、抗癌活性、抗炎症活性、抗感染活性、及び/又は抗増殖活性を示す。本発明は有機硫黄化合物の製造及び製剤化方法にも関する。
各Sは酸化物の形態であってもよく;
S1及びS2は、独立して、S、SO又はSO2であり;
各Rは、H、ハロゲン、カルボキシル、シアノ、アミノ、アミド、無機置換基、SR1、OR1又はR1であり、この場合、各R1は、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、炭素環又は複素環であり、それらの各々が置換されていてもよく、又、ヘテロ原子を含んでいてもよく;
m、n及びpは、独立して、0〜3である、化合物;
又は、以下の式(3)若しくは(4)で表される化合物:
Zは(CR1 2)q又は(CR1=CR1)q *であり、この場合、qは0〜3であり、且つ、*は、アルキニル、O、S、NRによって置換されていてもよいC=Cを表し;又は、Zは置換されていてもよいアリール、ヘテロアリール又は複素環であり;
式中、AとBは一緒に環状環系を形成してもよい、化合物;
但し、前記化合物が、ジベンジルトリスルフィド、ジ(p−クロロベンジル)トリスルフィド、(p−クロロベンジル)ベンジルトリスルフィド、ジ(p−ニトロベンジル)トリスルフィド、ジ(3−フェニル−2−プロペニル)−トリスルフィド、ジフェニルトリスルフィド、又はジ(p−t−ブチルフェニル)トリスルフィドでない、化合物;
及びその薬学上許容し得る塩、エステル、プロドラッグ又は代謝産物;
を提供する。
式中、X及びWは、独立して、S、O、NR7、CR7であるか;
又は、6員の単環若しくは二環において1つのWは結合であってもよく;且つ、
各R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7は、H、ハロゲン、カルボキシル、シアノ、アミノ、アミド、無機置換基、SR1、OR1又はR1であり、この場合、各R1は、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、炭素環又は複素環であって、それらの各々が置換されていてもよく、又、ヘテロ原子を含んでいてもよい。例えば、各R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7は、独立して、H、ハロ、OR1、SR1、CO2R1、CONR1 2、C=O、CN、CF3、OCF3、NO2、NR1R1、OCOR1であるか;又は、各R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7は、それらの各々がヘテロ原子を含んでいてもよい、C1−10アルキル、C3−10環状アルキル、C2−10アルケニル、C2−10アルキニル、アリール、ヘテロアリール、炭素環又は複素環であることができる。
限定のためでなく、開示の明確さのために、本発明の詳細な説明を以下の小節に分けて記載する。
特に明記しないかぎり、本明細書中で使用される全ての技術的及び科学的用語は、本発明が属する技術分野における当業者により通常理解されているものと同一の意味を有する。本明細書中で参照されている全ての特許、特許出願、公開された出願及びその他の刊行物は、参照によりその全体を組み入れるものとする。本節において示されている定義が、参照によって本明細書中に組み入れられている特許、特許出願、公開された出願及びその他の刊行物において示されている定義と矛盾する、又はさもなければ一致しない場合は、本節において示されている定義が、参照によって本明細書中に組み入れられている定義よりも優先される。
本発明の化合物は、以下の式で表される化合物
各Sはオキシドの形態であってもよく;
S1及びS2は、独立して、S、SO又はSO2であり;
各Rは、H、ハロゲン、カルボキシル、シアノ、アミノ、アミド、無機置換基、SR1、OR1又はR1であり、この場合、各R1は、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、炭素環又は複素環であり、そのうちの各々が置換されていてもよく、そしてヘテロ原子を含んでいてもよく;
m、n及びpは、独立して、0〜3である、化合物;
又は、以下の式(3)若しくは(4)で表される化合物:
Zは(CR1 2)q又は(CR1=CR1)q *であり、この場合、qは0〜3であり、且つ、*は、アルキニル、O、S、NRによって置換されていてもよいC=Cを表し;又は、Zは置換されていてもよいアリール、ヘテロアリール又は複素環であり;
式中、AとBは一緒に環状環系を形成してもよい、化合物;
及びその薬学上許容し得る塩、エステル、プロドラッグ又は代謝産物;
但し、前記化合物が、ジベンジルトリスルフィド、ジ(p−クロロベンジル)トリスルフィド、(p−クロロベンジル)ベンジルトリスルフィド、ジ(p−ニトロベンジル)トリスルフィド、ジ(3−フェニル−2−プロペニル)−トリスルフィド、ジフェニルトリスルフィド、又はジ(p−t−ブチルフェニル)トリスルフィドでないもの、を提供する。
式中、X及びWは、独立して、S、O、NR7、CR7であるか;
又は、6員の単環若しくは二環において1つのWは結合であってもよく;且つ、
各R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7は前記定義の通りである。
本明細書中に記載される化合物は、癌又はその他のタイプの増殖性疾患を処置する際の細胞傷害性且つ/又は細胞増殖抑制性因子として使用することができる。これらの化合物は、あらゆるタイプの作用機構を通じて機能することができる。例えば、本化合物は、細胞周期のG2/Mの進行を抑制することができ、最終的に、腫瘍細胞においてアポトーシスを誘導することができる(例えば、Weungら、Biochim.Biophys.Res.Comm.1997,263,398−404を参照のこと)。ある化合物はチューブリンの組み立てを妨害することができ、又、別の化合物はチューブリンの分解を妨害することができる。これにより、細胞有糸分裂を抑制することができ、又、細胞アポトーシスを誘導することができる(例えば、Pandaら、Proc.Natl.Acad.Sci.USA,1997,94,10560−10564を参照のこと)。本化合物は内皮細胞増殖及び血管新生の影響も抑制することができる(例えば、Witteら、Cancer Metastasis Rev.1998,17,155−161を参照のこと)。
RT−CESシステムは電子的センサー分析装置、デバイスステーション及び16又は96ウェルのマイクロタイタープレートデバイスの3つの要素を含む。微小電極センサーアレイがスライドガラス上にリソグラフ微細加工法を用いて加工され、電極を含むスライドは電極を含むウェルを形成するためにプラスチック製のトレイへと組み立てられる。RT−CESシステムに使用する16ウェル(又は96ウェル)の各マイクロタイタープレートデバイスは、16(又は96)ウェルまでのこのような電極を含むウェルを含む。デバイスステーションは16又は96ウェルのマイクロタイタープレートデバイスを受け入れ、インピーダンス測定のためウェルの任意のひとつをセンサー分析装置へと電子的に切り替えることができる。操作において、ウェル中で培養された細胞を伴うデバイスは、インキュベーター内部に配置されたデバイスステーションへと配置される。電気的ケーブルがこのデバイスステーションをセンサー分析装置へと連結する。RT−CESソフトウェアの制御下で、センサー分析装置は測定されるウェルを自動的に選択し得、連続的にインピーダンス測定を実施し得る。分析装置から得られたインピーダンスデータはコンピューターへと送られ、統合ソフトウェアにより解析され処理される。
DBTS及びACEA100108(DBTSの誘導体、表33参照)を含む試験化合物のin vivo抗癌効果を評価するため、マウス肉腫S180モデル、マウスルイス肺癌モデル、P388リンパ性白血病モデル、及び免疫欠損ヌードマウスにおける3種のヒト腫瘍異種移植片モデル(Bcap−37ヒト乳癌、HCT−8ヒト結腸癌、ao12/17ヒト卵巣癌)を含む各種マウスモデルを使用した。試験化合物のin vivo抗癌効果における詳細を以下に示す。
DBTS及びACEA100108(DBTSの誘導体、表33参照)の、in vivoにおける急性の、静脈内毒性を評価するために、DBTS又はACEA100108の静脈内注入(i.v.)による単回投与に対するマウスの急性応答をモニタリングすることにより、腫瘍を有さない、正常なKunmingマウスにおける試験を実施した。処置したマウスに関する死亡数をモニタリングし記録した。これらの化合物に対するLD50値を計算した。研究の詳細を以下に示す。
(マウス肉腫S180及びマウスルイス肺癌に対するDBTSの抗癌活性)
試験化合物のin vivoの抗癌効果を評価するため、in vivo評価に関し2つのマウス移植腫瘍モデル:マウス肉腫S180モデル及びマウスルイス肺癌モデルを使用した。試験用のマウスはShanghai Pharmaceutical Industry Instituteの薬理学研究室において維持した。マウスの供給源及び種類は以下のようである。Academic Sinica、Experimental Animal Centerから供給されたマウスC57BL/6及びKunming株、認定番号:Academic Sinica Experimental Animal Certificate、No.5。マウスの体重は18〜20gであった。オス及びメスの両方のマウスを使用した。しかし、試験毎に同性の動物を使用した。試験された動物の数は以下である:試験化合物群に関し、高投与量群について10匹、中投与量群について10匹、及び低投与量群について10匹を含む30匹のマウス;陽性化合物群について10匹のマウス;陰性対照群について、生理食塩水群について10匹及び溶媒のみの群について10匹を含む20匹のマウス。DBTSの高、中及び低投与量はそれぞれ、50、25及び12.5mg/kg/日であった。
腫瘍阻害率%=(陰性対照群における腫瘍重量の平均−化合物処置群における腫瘍重量の平均)/陰性対照群における腫瘍重量の平均 × 100(2)
に従って計算した。
(マウスルイス肺癌に対するDBTSの抗癌活性)
本研究は、実施例1のようなマウスルイス肺癌モデルにおけるジベンジルトリスルフィド(DBTS)のインビボ抗癌効力を評価する。その実験用マウスを、Shanghai Pharmaceutical Industry Instituteの薬理学研究室において維持した。実験用マウスは、Academic Sinica、Experimental Animal Centerから提供されたマウスC57BL/6系統(認定番号:SCXK(Shanghai)2003−0003)であった。マウスの体重は、18g〜20gであった。メスのマウスのみを使用した。試験した動物の数は以下の通りであった:各投与量群に対し10匹、陽性対照群について10匹、および陰性対照群について20匹(生理的対照群について10匹および溶媒対照群について10匹)。
(マウスにおけるルイス肺癌およびP388リンパ性白血病、ならびにヌードマウスにおけるBcap−37ヒト乳癌およびHCT−8ヒト結腸癌に対する、ACEA100108のインビボ抗癌活性)
化合物ACEA100108(DBTS誘導体、表33参照)のインビボ抗癌効力を評価するため、移植された癌を有するマウスモデル(ルイス肺癌モデルおよびP388リンパ性白血病モデル、ならびに免疫不全ヌードマウスにおける2つのヒト腫瘍異種移植片モデル(Bcap−37ヒト乳癌およびHCT−8ヒト結腸癌)が挙げられる)を使用した。すべてのマウスモデルは、Shanghai Pharmaceutical Industry Instituteの薬理学研究室において維持した。ヒト腫瘍異種移植片モデルについては、本研究のためにヌードマウスへと移植する前に、癌細胞を2度、インビボで継代した。フラスコ中の培養ヒト癌細胞を、まず、免疫不全ヌードマウスへと異種移植片移植した。癌細胞がヌードマウス中で一定の大きさの腫瘍にまで増殖した後に、その腫瘍をヌードマウスから取り出し、腫瘍組織を切開した。この切開した腫瘍組織から細胞懸濁液を調製し、免疫不全ヌードマウスへと再び移植し戻した(すなわち、ヒト癌異種移植片移植モデルにおける癌細胞の2度目の継代)。この癌細胞が一定の大きさに増殖した後に、腫瘍をヌードマウスから取り出し、この腫瘍組織を切開した。切開した組織から細胞懸濁液を調製し、本明細書中に記載のヒト癌異種移植片モデルの研究のために使用した。
腫瘍体積=a×b2/2 (3)
に従って計算した。
寿命比%=化合物処置群の平均寿命/陰性対照群の平均寿命 × 100%(4)
に従って計算した。
(ヌードマウスにおけるao10/17ヒト卵巣癌に対するACEA100108のインビボ抗癌活性)
化合物ACEA100108のインビボ抗癌効力を評価するため、免疫不全ヌードマウスにおけるao10/17ヒト卵巣癌異種移植片モデルを使用した。細胞株およびマウスは、Shanghai Pharmaceutical Industry Instituteの薬理学研究室において維持した。ao10/17ヒト卵巣癌異種移植片モデルについては、本研究のためにヌードマウスへと移植する前に、癌細胞を2度、インビボで継代した。言い換えれば、フラスコ中の培養ヒト卵巣癌ao10/17細胞を、まず、免疫不全ヌードマウスへと異種移植片移植した。この癌細胞がこのヌードマウス中で一定の大きさの腫瘍へと増殖した後に、その腫瘍をヌードマウスから取り出し、腫瘍組織を切開した。切開した腫瘍組織から細胞懸濁液を調製し、免疫不全ヌードマウスへと再び移植して戻した(すなわち、ヒト癌異種移植片移植モデルにおける癌細胞の2度目の継代)。その癌細胞が一定の大きさへと増殖した後に、腫瘍をヌードマウスから取り出し、この腫瘍組織を切開した。切開した腫瘍組織から細胞懸濁液を調製し、本明細書中に記載のヒト癌異種移植片移植モデルの研究のために使用した。
(ヌードマウスにおけるBcap−37ヒト乳癌におけるACEA100108の抗癌活性)
化合物ACEA100108のin vivo抗癌効果を評価するため、免疫不全ヌードマウスにおけるBcap−37ヒト乳癌異種移植片モデルを使用した。細胞株及びマウスモデルはShanghai Pharmaceutical Industry Instituteの薬理学研究室において維持した。Bcap−37ヒト乳癌異種移植片モデルについては、試験のため、ヌードマウスへと移植する前に、癌細胞を2度、in vivoで継代した。言い換えれば、フラスコ中で培養されたヒト乳癌Bcap−37細胞を、まず免疫不全ヌードマウスへと異種移植片移植した。癌細胞がこのヌードマウス中で一定の大きさの腫瘍に生長した後に、腫瘍をヌードマウスから除去し、腫瘍を切開した。切開された腫瘍組織から細胞懸濁液を調製し、免疫不全ヌードマウスへと再び戻して移植した(すなわち、ヒト癌異種移植片移植モデルにおける癌細胞の2度目の継代)。癌細胞が一定の大きさに生長した後に腫瘍をヌードマウスから除去し、この腫瘍組織を切開した。切開された腫瘍組織から細胞懸濁液を調製し、本明細書中に記載のヒト癌異種移植片移植モデルの試験に使用した。
陰性対照として、各マウスは、高投与量ACEA100108試験で使用されたものと同様に、同量かつ同濃度の溶媒のみを、1日1回、7日間連続で静脈内投与した。陽性対照群については、抗癌化合物のタキソールが10mg/kg、1日1回、7日間連続で静脈内投与された。
化合物ACEA100108を硬化ヒマシ油(溶媒)中に溶解し、溶媒中20mg/mlのACEA100108濃度となるようにした。毎回使用前に、この溶液を生理食塩水で希釈して、所望のACEA100108濃度を達成した。各マウス(体重約20g)に、この化合物溶液0.5mLを、0.5mL/0.5分に制御された注入速度で静脈内投与した。腫瘍の移植7日後、移植された腫瘍は、その動物に手で触れた時に感じることができる程度に十分に大きく生長した。その時点から化合物溶液の担体マウスへの静脈内注入を1日1回、7日間又は10日間連続して実行した。ACEA100108の高投与量、中高投与量及び低投与量はそれぞれ50mg/kg/日、25mg/kg/日及び8mg/kg/日であった。
ヒト乳癌異種移植片についての腫瘍細胞を調製するために、迅速に成長している腫瘍をまず移植腫瘍マウスから除去した。この腫瘍組織を生理食塩水(腫瘍体積と生理食塩水が1:6)中ですり潰し、細胞濃度が2〜4×107個/mlである腫瘍細胞懸濁液の生理食塩水溶液を調製した。0.2mLの細胞懸濁液を皮下注入により各マウスの腋窩部(右側)に注入した。移植7日後、マウスにおける腫瘍は、その動物に手で触れた時に感じることができる程度に十分に大きく生長した。その時点からマウスに所定の投与量のACEA100108、又は陰性対照として役割を果たす溶媒のみ、あるいは陽性対照として機能する10mg/kgのタキソールを投与した。移植から3〜4週間後、マウスを屠殺し、移植された腫瘍を試験マウスから除去した。除去された各固形腫瘍の重量を測定し、実施例1に記載の式(2)に従って、各投与量群における腫瘍阻害率を計算した。腫瘍の体積に基づき、その他のパラメーター、すなわち腫瘍体積阻害率も、以下の式:
T/C(%)=化合物処置群における平均腫瘍体積/陰性対照群における平均腫瘍重量 × 100% (5)
に従って計算した。
ヌードマウスにおけるBcap−37ヒト乳癌異種移植片モデルにおいて、ACEA100108は、iv×7qdの手順に従い投与した場合、50mg/kg、25mg/kg及び8mg/kgの投与量群についてそれぞれ52.24%、47.31%及び28.21%のin vivo平均腫瘍阻害率を示した。さらに、10qdの手順に従い投与した場合、50mg/kgの投与量群について56.92%のin vivo平均腫瘍阻害率を示した。同様の試験において、タキソールは10mg/kgの投与量群について44.33%のin vivo平均腫瘍阻害率を示した。ヌードマウスに移植されたBcap−37ヒト乳癌異種移植片に対するACEA100108の効果試験を表す表27及び図25に、詳細を示す。図25中、7つの列(それぞれ1−7)は、以下の投与化合物:1)陰性対照;2)溶媒;3)ACEA100108(50mg/kg);4)ACEA100108(20mg/kg);5)ACEA100108(8mg/kg);6)ACEA100108(50mg/kg);及び7)陽性対照(タキソール、10mg/kg)を表す。試験化合物及び対照は、ACEA100108を50mg/kgで、iv×10qdで投与したもの以外は、7qdにおいてivで投与した。腫瘍体積阻害率を表28に示す。腫瘍の大きさの動的な変化を表26にまとめる。担体マウスの体重における動的変化は表27にまとめる。
(DBTS及び化合物ACEA100108の急性毒性試験:マウスにおける静脈内注入のLD50の測定)
DBTS及びACEA100108の急性毒性を試験するための実験をマウスにおいて行った。試験マウスはランダムに6つの群に分けられた(5つの投与量群及び1つの対照群)。各群は20匹のKunming株マウスを含み、それらの中で50%はオス、50%はメスであった。静脈内注入(i.v.)によるDBTS又はACEA100108の単回投与後、DBTS又はACEA100108化合物に対する急性応答、及び、処置されたマウスの最初の2週間での死亡をモニターし、記録した。LD50値はBliss法を用いて計算した。DBTSのマウス単回静脈内投与におけるLD50値は258.53mg/kg(234.96〜284.46mg/kg)であり、ACEA100108のマウス単回静脈内投与におけるLD50値は316mg/kg(284.26〜351.28mg/kg)であった。
試験化学化合物はDBTS及びACEA100108であり、予め加温した湯浴中で硬化ヒマシ油中に溶解し、20mg/mlの溶液とした。この溶液をさらに希釈して、所望の試験濃度にした。マウスあたり0.5mLの静脈内投与量及び注入速度は0.5mL/0.5分であった。
静脈内注入直後、マウスは、跳躍する、走る、けいれん、息切れ(呼吸亢進)を含む異常な反応を示した。高投与量群において、数匹のマウスは、けいれん発作により注入3分以内に死亡した。死亡は投与後1時間以内に起こり、そのピークは投与後12時間目であった。病理解剖により、死亡したマウスの臓器における生理学的異常は見出されなかった。生き残ったマウスは、早期に活動が低下し脱毛する以外の深刻な中毒症状を示さず、それらは徐々に回復し、その後14日の観察の間に遅れて起こる中毒の兆候は見られなかった。生き残ったマウスは健康で、正常な挙動をしたものの、それらのマウスの体重はいくぶん減少した。試験データに基づくと、DBTSのマウス単回静脈内投与のLD50値は258.53mg/kg(234.96〜284.56mg/kg)であり、ACEA100108のマウス単回静脈内投与のLD50値は316mg/kg(284.26〜351.28mg/kg)であった。オスのマウスとメスのマウスの間でLD50値の顕著な差異はみられなかった(p値>0.05)。DBTS及びACEA100108の急性毒性の結果を表31及び32にまとめる。マウスにおける、溶媒の陽性の中毒効果を評価するため、対照群のマウスに同量の溶媒を投与した。溶媒を投与されたマウスは、DBTS及びACEA100108を投与されたマウスよりも軽度の、早期における異常な兆候及び体重減少を示した。このことは、投与マウスにおいてみられる急性毒性は、DBTS又はACEA100108に関連することを示す。
(DBTS、コルセミド及びパクリタキセルによる細胞増殖の阻害)
H460細胞(ヒト肺癌細胞)を16又は96ウェルのマイクロタイタープレート装置(電子プレート、すなわち、プレートのウェル中に電極センサーを有するプレート)のウェル中に、開始時の播種密度が1ウェルあたり8,000個の細胞数となるように播種し、標準的な細胞培養条件下でインキュベーター中で約22時間プレインキュベートした。DMSO中で各種濃度にしたジベンジルトリスルフィド(DBTS)、コルセミド及びパクリタキセルをウェル中に添加し、次いでインキュベートした。RT−CESシステムを用いて、化合物添加前後の細胞の状態をモニターした。化合物添加直前のDBTS及びコルセミド溶液に対する様々なウェルにおける細胞指数は1.7〜1.9であり、パクリタキセルに対しては1.4〜1.9であった。図1A〜Cは、化合物添加前及び添加後の時刻の関数としての正規化した細胞指数を示す。細胞指数は、化合物添加直後の時点(細胞播種後約23時間)における細胞指数値に対し正規化した。
(MV522細胞におけるDBTSによる細胞増殖の阻害)
MV522細胞(ヒト肺癌細胞)を16又は96ウェルのマイクロタイタープレート装置(電子プレート、すなわち、プレートのウェル中に電極センサーを有するプレート)のウェル中に、開始時の播種密度が1ウェルあたり10,000個の細胞数となるように播種し、標準的な細胞培養条件下でインキュベーター中で約22時間プレインキュベートした。ジベンジルトリスルフィドのDMSO溶液をウェル中に添加し、次いでインキュベートした。RT−CESシステムを用いて、化合物添加前後の細胞の状態をモニターした。化合物添加直前の様々なウェルにおける細胞指数は1.0〜1.6であった。図2は、化合物添加前及び添加後の時刻の関数としての正規化した細胞指数を示す。細胞指数は、化合物添加直後の時点(細胞播種後約23時間)における細胞指数値に対し正規化した。
(MCF−7細胞におけるジベンジルトリスルフィドによる細胞増殖の阻害)
MCF−7細胞(ヒト乳癌細胞)を16又は96ウェルのマイクロタイタープレート装置(電子プレート、すなわち、プレートのウェル中に電極センサーを有するプレート)のウェル中に、開始時の播種密度が1ウェルあたり10,000個の細胞数となるように播種し、標準的な細胞培養条件下でインキュベーター中で約44時間プレインキュベートした。ジベンジルトリスルフィドのDMSO溶液をウェル中に添加し、次いでインキュベートした。RT−CESシステムを用いて、化合物添加前後の細胞の状態をモニターした。化合物添加直前の様々なウェルにおける細胞指数は1.2〜1.5であった。図3は、化合物添加前及び添加後の時刻の関数としての正規化した細胞指数を示す。細胞指数は、化合物添加直後の時点(細胞播種後約44.5時間)における細胞指数値に対し正規化した。
(A549細胞におけるジベンジルトリスルフィドによる細胞増殖の阻害)
A549細胞(ヒト肺癌細胞)を16又は96ウェルのマイクロタイタープレート装置(電子プレート、すなわち、プレートのウェル中に電極センサーを有するプレート)のウェル中に、開始時の播種密度が1ウェルあたり8,000個の細胞数となるように播種し、標準的な細胞培養条件下でインキュベーター中で約17時間プレインキュベートした。ジベンジルトリスルフィドのDMSO溶液をウェル中に添加し、次いでインキュベートした。RT−CESシステムを用いて、化合物添加前後の細胞の状態をモニターした。化合物添加直前の様々なウェルにおける細胞指数は0.72〜1.26であった。図4は、化合物添加前及び添加後の時刻の関数としての正規化した細胞指数を示す。細胞指数は、化合物添加直後の時点(細胞播種後約18時間)における細胞指数値に対し正規化した。
(PC3細胞におけるジベンジルトリスルフィドによる細胞増殖の阻害)
PC3細胞(ヒト前立腺癌細胞)を16又は96ウェルのマイクロタイタープレート装置(電子プレート、すなわち、プレートのウェル中に電極センサーを有するプレート)のウェル中に、開始時の播種密度が1ウェルあたり10,000個の細胞数となるように播種し、標準的な細胞培養条件下でインキュベーター中で約22.5時間プレインキュベートした。ジベンジルトリスルフィドのDMSO溶液をウェル中に添加し、次いでインキュベートした。RT−CESシステムを用いて、化合物添加前後の細胞の状態をモニターした。化合物添加直前の様々なウェルにおける細胞指数は0.34〜0.54であった。図5は、化合物添加前及び添加後の時刻の関数としての正規化した細胞指数を示す。細胞指数は、化合物添加直後の時点(細胞播種後約23.5時間)における細胞指数値に対し正規化した。
(A431細胞におけるDBTS及び5−フルオロウラシルによる細胞増殖の阻害)
A431細胞(ヒト扁平上皮癌細胞)をマイクロタイタープレート装置(電子プレート、すなわち、プレートのウェル中に電極センサーを有するプレート)のウェル中に、開始時の播種密度が1ウェルあたり10,000個の細胞数となるように播種し、標準的な細胞培養条件下でインキュベーター中で約22.3時間プレインキュベートした。各種濃度のDBTS及び5−フルオロウラシル溶液をウェル中に添加し、次いでインキュベートした。RT−CESシステムを用いて、化合物添加前後の細胞の状態をモニターした。化合物の添加直前のDBTSに対する様々なウェルにおける細胞指数は0.6〜1.2であり、5−フルオロウラシルに対しては0.6〜1.2であった。図6A〜Bは、化合物添加前及び添加後の時刻の関数としての正規化した細胞指数を示す。細胞指数は、化合物添加直後の時点(細胞播種後約22.6時間)における細胞指数値に対し正規化した。
(HT1080細胞におけるDBTSによる細胞増殖の阻害)
HT1080細胞(ヒト線維肉腫細胞)を16又は96ウェルのマイクロタイタープレート装置(電子プレート、すなわち、プレートのウェル中に電極センサーを有するプレート)のウェル中に、開始時の播種密度が1ウェルあたり4,000個の細胞数となるように播種し、標準的な細胞培養条件下でインキュベーター中で約18.6時間プレインキュベートした。ジベンジルトリスルフィドのDMSO溶液をウェル中に添加し、次いでインキュベートした。RT−CESシステムを用いて、化合物添加前後の細胞の状態をモニターした。化合物の添加直前の様々なウェルにおける細胞指数は0.72〜1.45であった。図7は、化合物添加前及び添加後の時刻の関数としての正規化した細胞指数を示す。細胞指数は、化合物添加直後の時点(細胞播種後約20時間)における細胞指数値に対し正規化した。
(MDA−231細胞におけるDBTSによる細胞増殖の阻害)
MDA−231細胞(ヒト乳癌細胞)を16又は96ウェルのマイクロタイタープレート装置(電子プレート、すなわち、プレートのウェル中に電極センサーを有するプレート)のウェル中に、開始時の播種密度が1ウェルあたり5,000個の細胞数となるように播種し、標準的な細胞培養条件下でインキュベーター中で約18.7時間プレインキュベートした。ジベンジルトリスルフィドのDMSO溶液をウェル中に添加し、次いでインキュベートした。RT−CESシステムを用いて、化合物添加前後の細胞の状態をモニターした。化合物の添加直前の様々なウェルにおける細胞指数は0.65〜0.82であった。図8は、化合物添加前及び添加後の時刻の関数としての正規化した細胞指数を示す。細胞指数は、化合物添加直後の時点(細胞播種後約19.6時間)における細胞指数値に対し正規化した。
(H−29細胞におけるDBTSによる細胞増殖の阻害)
H−29細胞(ヒト結腸癌細胞)を16又は96ウェルのマイクロタイタープレート装置(電子プレート、すなわち、プレートのウェル中に電極センサーを有するプレート)のウェル中に、開始時の播種密度がウェルあたり10,000個の細胞数となるように播種し、標準的な細胞培養条件下でインキュベーター中で約25時間プレインキュベートした。ジベンジルトリスルフィドのDMSO溶液をウェル中に添加し、次いでインキュベートした。RT−CESシステムを用いて、化合物添加前後の細胞の状態をモニターした。化合物の添加直前の様々なウェルにおける細胞指数は0.95〜1.13であった。図9は、化合物添加前及び添加後の時刻の関数としての正規化した細胞指数を示す。細胞指数は、化合物添加直後の時点(細胞播種後約26時間)における細胞指数値に対し正規化した。
(HC−2998細胞におけるDBTSによる細胞増殖の阻害)
HC−2998細胞(ヒト結腸癌細胞)を16又は96ウェルのマイクロタイタープレート装置(電子プレート、すなわち、プレートのウェル中に電極センサーを有するプレート)のウェル中に、開始時の播種密度が1ウェルあたり10,000個の細胞数となるように播種し、標準的な細胞培養条件下でインキュベーター中で約24.7時間プレインキュベートした。ジベンジルトリスルフィドのDMSO溶液をウェル中に添加し、次いでインキュベートした。RT−CESシステムを用いて、化合物添加前後の細胞の状態をモニターした。化合物の添加直前の様々なウェルにおける細胞指数は0.33〜0.68であった。図10は、化合物添加前及び添加後の時刻の関数としての正規化した細胞指数を示す。細胞指数は、化合物添加直後の時点(細胞播種後約25.7時間)における細胞指数値に対し正規化した。
(OVCAR4細胞におけるDBTSによる細胞増殖の阻害)
OVCAR4細胞(ヒト卵巣癌細胞)を16又は96ウェルのマイクロタイタープレート装置(電子プレート、すなわち、プレートのウェル中に電極センサーを有するプレート)のウェル中に、開始時の播種密度が1ウェルあたり10,000個の細胞数となるように播種し、標準的な細胞培養条件下でインキュベーター中で約27時間プレインキュベートした。ジベンジルトリスルフィドのDMSO溶液をウェル中に添加し、次いでインキュベートした。RT−CESシステムを用いて、化合物添加前後の細胞の状態をモニターした。化合物の添加直前の様々なウェルにおける細胞指数は1.4〜1.7であった。図11は、化合物添加前及び添加後の時刻の関数としての正規化した細胞指数を示す。細胞指数は、化合物添加直後の時点(細胞播種後約28時間)における細胞指数値に対し正規化した。
(A2780細胞におけるDBTSによる細胞増殖の阻害)
A2780細胞(ヒト結腸癌細胞)を16又は96ウェルのマイクロタイタープレート装置(電子プレート、すなわち、プレートのウェル中に電極センサーを有するプレート)のウェル中に、開始時の播種密度が1ウェルあたり20,000個の細胞数となるように播種し、標準的な細胞培養条件下でインキュベーター中で約16.4時間プレインキュベートした。ジベンジルトリスルフィドのDMSO溶液をウェル中に添加し、次いでインキュベートした。RT−CESシステムを用いて、化合物添加前後の細胞の状態をモニターした。化合物添加直前の様々なウェルにおける細胞指数は2.2〜3.7であった。図12は、化合物添加前及び添加後の時刻の関数としての正規化した細胞指数を示す。細胞指数は、化合物添加直後の時点(細胞播種後約17.5時間)における細胞指数値に対し正規化した。
(DBTSに対するHepG2細胞の応答)
HepG2細胞(ヒト肝臓肉腫細胞)を16又は96ウェルのマイクロタイタープレート装置(電子プレート、すなわち、プレートのウェル中に電極センサーを有するプレート)のウェル中に、開始時の播種密度が1ウェルあたり15,000個の細胞数となるように播種し、標準的な細胞培養条件下でインキュベーター中で約22時間プレインキュベートした。ジベンジルトリスルフィドのDMSO溶液をウェル中に添加し、次いでインキュベートした。RT−CESシステムを用いて、化合物添加前後の細胞の状態をモニターした。化合物添加直前の様々なウェルにおける細胞指数は0.7〜0.97であった。図13は、化合物添加前及び添加後の時刻の関数としての正規化した細胞指数を示す。細胞指数は、化合物添加直後の時点(細胞播種後約22.7時間)における細胞指数値に対し標準化した。本明細書中に示された細胞指数からは、ジベンジルトリスルフィドがHepG2細胞の増殖に阻害効果を示さず、曝した投与量範囲内においてはHepG2細胞に何ら細胞傷害性の影響を示さないようである。
(DBTS及びその誘導体による細胞増殖の阻害)
RT−CESシステム及びMTTアッセイを使用し、8つの異なるタイプのヒト癌細胞株においてDBTS及びその誘導体の抗癌効果を試験した。この8つの癌細胞株はHT1080(ヒト繊維肉腫細胞株)、H460(ヒト非小細胞肺癌細胞株)、OVCAR4(ヒト卵巣癌細胞株)、MCF7(ヒト乳癌細胞株)MDA−MB231(M231、ヒト乳癌細胞株)A2780(ヒト結腸癌細胞株)Jurkat(ヒトT細胞白血病細胞株)であった。試験用DBTS誘導体としては、ACEA100107、ACEA100108、ACEA100109、ACEA100111、ACEA100115、ACEA100116、ACEA100117、ACEA100118、ACEA100119、およびACEA100120が挙げられる。ACEA100129はHT1080、HELA及びMCF7細胞中でも試験され、それぞれ0.82μM、0.42μM及び2.3μMのIC50値を有していた。誘導体の化学構造を表33及び34に示す。
(ACEA100108による癌細胞増殖の動力学的阻害)
RT−CESシステムにおいて、7つの癌細胞株におけるDBTS誘導体、ACEA100108の抗癌効果を試験した。細胞株はHT1080、H460、OVCAR4、MCF7、MDA−MB231、HepG2、及びA2780であった。癌細胞を16又は96ウェルのマイクロタイタープレート装置(すなわち、電子プレート)のウェル中に、開始時の播種密度がウェルあたり5,000個〜15,000個の細胞数の範囲となるように播き、播かれた細胞を次いで37℃及び5%のCO2においてインキュベートした。癌細胞の増殖を、RT−CESシステム上で、細胞が増殖期にいたるまでの約20時間リアルタイムでモニターした。次いで、細胞を50μM〜0.38μMの濃度範囲で連続的に稀釈したACEA100108で処理した。ACEA100108の癌増殖阻害及びACEA100108に対する各種細胞株の細胞傷害性の応答を、RT−CESシステムにおいてリアルタイムでモニターした。次いで細胞−化合物相互作用の動力学的曲線を記録し、図26に示す。細胞指標曲線は、化合物添加直後の時点(細胞播種後約18〜24時間)における細胞指数値に対し標準化した。
(DBTS誘導体による癌細胞増殖の動力学的阻害)
HT1080癌細胞の動力学的増殖阻害及びHT1080癌細胞におけるDBTS誘導体の細胞傷害性の影響を、RT−CESシステムにおいて測定した。DBTS誘導体は、ACEA100107、ACEA100109、ACEA100111、ACEA100114、ACEA100115、ACEA100116、ACEA100117、ACEA100118、ACEA100119及びACEA100120であった。HT1080細胞(ヒト繊維肉腫)を16又は96ウェルのマイクロタイタープレート装置(電子プレート)のウェル中に、播種密度がウェルあたり5,000個の細胞数となるように播いた。この細胞を増殖期にいたるまでの約20時間、37℃及び5%のCO2においてインキュベートした後、50μM〜0.38μMの濃度範囲で連続的に稀釈したDBTS誘導体を細胞に添加し、DBTS誘導体の細胞応答をRT−CESシステムにおいてリアルタイムで48時間モニターした。図27は異なる濃度における細胞とDBTS誘導体の相互作用の動力学的曲線を示す。細胞指標曲線は、化合物添加直後の時点(細胞播種後約18〜24時間)における細胞指数値に対し標準化した。
(DBTS及びその誘導体化合物であるACEA100108及びACEA100116による微小管動力学抑制の概要)
微小管は、細胞が2個の娘細胞へと分裂する前に、複製された染色体が2つの同一のセットへと分離するときの有糸分裂を含む多数の細胞プロセスにおいて重要である。有糸分裂及び細胞分裂における微小管の重要な役割及びその動態により、微小管は抗癌薬の重要な標的となっている。間期の細胞において微小管は、そのチューブリンを、半減期が3分以内から数時間である細胞質プール中に可溶性のチューブリンに変化させる。有糸分裂の開始に伴い、間期の微小管ネットワークは再組み立てされて、紡錘体を形成し染色体を動かす高度に動的な微小管の集合に置き換えられる。紡錘体微小管は間期細胞中の微小管よりも20〜50倍動的であり、紡錘体微小管には15秒という迅速な半減期を伴ってそのチューブリンを可溶性チューブリンに変化させるものもある。
細胞培養及び免疫細胞化学 COS細胞を非必須アミノ酸、10%のFBS、抗生物質−抗カビ剤(Gibco BRL)を添加したDMEM培地中で37℃、5.5% CO2において生育させた。免疫蛍光顕微鏡観察のために細胞をポリリジン被覆したカバースリップ上に載せ、各種濃度の3種のACEA化合物、パクリタキセル又はビンブラスチンを用いて4又は24時間処理した(任意の所定の試験で使用される濃度については各図を参照されたい)。細胞を次いで温かいPBSで一度洗浄し、冷エタノールで固定し、再度PBSで洗浄してPBT(PBS、1%のBSA、0.5%のTritonX−100)中、1晩4℃でブロックした。全てのその後の染色および洗浄は、別に記載のない限りPBT中で室温において行った。細胞を抗チューブリンマウス抗体DM−1を用いて1:1000にて1時間染色し、各15分間、4回洗浄し、Cy−3コンジュゲートヤギ抗マウス抗体を用いて1:100にて1時間、暗所で染色した。次に、サンプルを各15分間、PBT中で暗所にて4回洗浄し、次いで最後に15分間、PBT中で暗所にて洗浄した。サンプルを次いでレーザー走査共焦点顕微鏡により観察した。
(ACEA100108が癌細胞においてアポトーシスを誘導する)
ACEA100108化合物が癌細胞におけるアポトーシスを誘導するか否かを試験するために、A549ヒト肺癌細胞を1μMのACEA100108及び50nMのパクリタキセル又は10nMのビンブラスチンで処理した。パクリタキセル及びビンブラスチンという2つの微小管動態抑制剤は陽性対照として使用した。A549細胞をチャンバースライド中にウェルあたり10,000個の細胞数となるように撒き、18時間後に指定された濃度の抗有糸分裂化合物ACEA100108、パクリタキセル及びビンブラスチンによって処理した。細胞を薬物とともに24時インキュベートし、次いでPBSで2回、及び結合バッファー(10mM HEPES、pH7.5、140mM NaCl、2.5mM CaCl2)で3回洗浄した。細胞を、1μg/mLのアネキシンV−Cy3コンジュゲート(赤色、アポトーシスの段階を開始した細胞を染色する)及び500μMの6−CFDA(緑色、生存している細胞を染色する)の1×結合バッファー中で20分間染色した。この細胞を1×結合バッファー中で緩やかに3回洗浄し、マウントして、免疫蛍光顕微鏡下で取り付けられたCCDカメラを用いて観察した。生存する細胞が6−CFDAのみで染色され(緑色)、一方壊死している細胞がアネキシンV−Cy3のみで染色される(赤色)ことに留意されたい。アポトーシスの段階を開始した細胞はアネキシンV−Cy3と6−CFDAの両方で染まるであろう。
(ACEA100108は癌細胞においてG2/M細胞周期停止を誘導する)
微小管は、細胞が2個の娘細胞へと分裂する前に、複製された染色体が2つの同一のセットへと分離するときの有糸分裂において極めて重要である。微小管を標的とするパクリタキセル及びビンブラスチン等の化合物は、微小管の動態を抑制し、有糸分裂のプロセスをブロックする。結果として、細胞はG2/M期において停止される。ACEA100108が癌細胞の分裂における有糸分裂のプロセスに影響を及ぼすか否かを試験するために、A549ヒト肺癌細胞を25μMのACEA100108及び7.8nMのパクリタキセルで処理し、この化合物の細胞周期への影響をフローサイトメトリーにより検出した。
(ジ(p−クロロベンジル)トリスルフィド(9)の大規模合成)
N−トリメチルシリルイミダゾール(10.67mL、97%、d=0.956、実重量=9.89g、70.54mmol)を、乾燥した250mL容丸底フラスコ中で70mLの無水ヘキサン中に溶解した。この攪拌溶液に対してゆっくりと(40〜50分)二塩化硫黄のジクロロメタン溶液(35.3mL、1.0M、35.3mmol)を窒素下、室温にて添加した。白色の沈殿が形成された。この反応混合物を50分間攪拌し、次いで窒素下、0℃まで冷却した。4−クロロベンジルメルカプタン(9.5mL、96%、実重量=11.19g、70.53mmol)の無水ヘキサン溶液50mLを、攪拌しながら窒素下で40〜50分間かけて滴下した。得られた反応混合物を0℃、1時間攪拌し、次いで室温にて3時間攪拌した。セライトの詰め物を通過させ、少量のヘキサンで洗浄することにより、白色から淡い黄色の固体を濾過除去した。濾液を、水(200mL、100mL)で洗浄し、次いで飽和塩化ナトリウム溶液(200mL)で洗浄した。有機溶媒相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。乾燥剤を濾過除去し、濾液を減圧下で濃縮した。
(ジ(p−クロロベンジル)トリスルフィド(8)の大規模合成)
N−トリメチルシリルイミダゾール(21.42mL、97%、d=0.956、実重量=19.86g、141.6mmol)を、乾燥した500mL容丸底フラスコ中で140mLの無水ヘキサン中に溶解した。この攪拌溶液に対してゆっくりと(40〜50分)二塩化硫黄のジクロロメタン溶液(70.8mL、1.0M、70.8mmol)を窒素下、室温にて添加した。白色の沈殿が形成された。この反応混合物を50分間攪拌し、次いで窒素下、0℃まで冷却した。4−クロロベンジルメルカプタン(18.04mL、20.86g、96%、実重量=20.0g、140.8mmol)の無水ヘキサン溶液100mLを、攪拌しながら窒素下で40〜50分間かけて滴下した。得られた反応混合物を0℃、1時間攪拌し、次いで室温にて3時間攪拌した。セライトの詰め物を通過させ、少量のヘキサンで洗浄することにより、白色から淡い黄色の固体を濾過除去した。濾液を、水(400mL、300mL)で洗浄し、次いで飽和塩化ナトリウム溶液(400mL)で洗浄した。有機溶媒相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。乾燥剤を濾過除去し、濾液を減圧下で濃縮した。
(純粋な二塩化硫黄を用いたジ(p−クロロベンジル)トリスルフィド(8)の大規模合成)
N−トリメチルシリルイミダゾール(226.6mL、97%、d=0.956、実重量=205.7g、1467mmol)を、乾燥した3000mL容三つ首フラスコ中で1200mLの無水ヘキサン及び560mLの無水ジクロロメタン(分子ふるいタイプ3Aで乾燥)中に溶解した。この攪拌溶液に対してゆっくりと(40〜50分)二塩化硫黄のジクロロメタン溶液(55.9mL、90.63g、880mmol、0.6eq)を窒素下、室温にて添加した。反応は沈殿を伴って迅速に起こった。反応混合物を50分間攪拌し、次いで窒素下で0℃まで冷却した。4−クロロベンジルメルカプタン(176mL、96%、実重量=200.17g、1408mmol)の無水ジクロロメタン溶液250mL及び100mLの無水ヘキサンを、攪拌しながら窒素下で40〜50分間かけて滴下した。得られた反応混合物を0℃、1時間攪拌し、次いで室温にて3時間攪拌した。反応物をヘキサン−酢酸エチル(40:1)を展開溶媒とするシリカゲルTLCでモニターし、その結果反応が正常に完了したことが示された。セライトの詰め物を通過させ、少量のヘキサンで洗浄することにより、白色から淡い黄色の固体を濾過除去した。濾液を、水で2回(1000mL×2)洗浄し、次いで飽和塩化ナトリウム溶液(1000mL)で1回洗浄した。有機溶媒相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。乾燥剤を濾過除去し、濾液を減圧下で濃縮した。粗生成物を、石油エーテル(60〜90℃画分)−酢酸エチル(80:1、60:1、40:1及び次いで20:1)をグラジェント溶出液としたシリカゲルカラム(8×36cm)上のフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。画分を、n−ヘキサン−酢酸エチル(40:1)を展開溶媒とするシリカゲルTLCでモニターした(Rf=0.46)。所望の画分を回収し、溶媒をエバポレーションした。得られた白色の個体生成物を1000mLのヘキサンから再結晶し、131.0gの所望の生成物8を、収率59.2%の白色針状結晶として得た(T収量221.16g)。
Claims (51)
- 以下の式で表される化合物:
各Sは酸化物の形態であってもよく;
S1及びS2は、独立して、S、SO又はSO2であり;
各Rは、H、ハロゲン、カルボキシル、シアノ、アミノ、アミド、無機置換基、SR1、OR1又はR1であり、この場合、各R1は、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、炭素環又は複素環であり、それらの各々が置換されていてもよく、又、ヘテロ原子を含んでいてもよく;
m、n及びpは、独立して、0〜3である、化合物;
又は、以下の式(3)又は(4)で表される化合物:
又は、以下の式(5)で表される化合物:
Zは(CR1 2)q又は(CR1=CR1)q *であり、この場合、qは0〜3であり、且つ、*は、アルキニル、O、S、NRによって置換されていてもよいC=Cを表し;又は、Zは置換されていてもよいアリール、ヘテロアリール又は複素環であり;
式中、AとBは一緒に環状環系を形成してもよい、化合物;
但し、前記化合物が、ジベンジルトリスルフィド、ジ(p−クロロベンジル)トリスルフィド、(p−クロロベンジル)ベンジルトリスルフィド、ジ(p−ニトロベンジル)トリスルフィド、ジ(3−フェニル−2−プロペニル)−トリスルフィド、ジフェニルトリスルフィド、又はジ(p−t−ブチルフェニル)トリスルフィドでない、化合物
及びその薬学上許容し得る塩、エステル、プロドラッグ又は代謝産物。 - 式中、Rが、独立して、H、ハロ、OR1、SR1、CO2R1、CONR1 2、C=O、CN、CF3、OCF3、NO2、NR1R1、OCOR1であるか;又は、Rが、それぞれがヘテロ原子を含んでいてもよい、C1−10アルキル、C3−10環状アルキル、C2−10アルケニル、C2−10アルキニル、アリール、ヘテロアリール、炭素環又は複素環である、請求項1に記載の化合物。
- 式中、A及びBが、独立して、ベンゼン、ピリジン、ピリダジン、ピリミジン、ピラジン、トリアジン、イソオキサゾール、イソチアゾール、オキサジアゾール、[1,2,4]オキサジアゾール、トリアゾール、チアジアゾール、ピラゾール、イミダゾール、チアゾール、オキサゾール、ベンゾオキサゾール、ピロール、フラン、チオフェンインドリジン、インドール、イソインドール、インドリン、ベンゾフラン、ベンゾチオフェン、インダゾール、ベンゾイミダゾール、ベンゾチアゾール、プリン、キノキサリン、キノリン、イソキノリン、シノリン、フタラジン、キナゾリン、キノキサリン、ナフチリジン、プテリジン、アクリジン、フェナジン、フェノチアジン、インデン、ナフタレン、ベンゾオキサジアゾール,又はベンゾ[1,2,5]−オキサジアゾールである、請求項1に記載の化合物。
- 式中、各R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7が、独立して、H、ハロ、OR1、SR1、CO2R1、CONR1 2、C=O、CN、CF3、OCF3、NO2、NR1R1、OCOR1であるか;又は、各R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7が、C1−10アルキル、C3−10環状アルキル、C2−10アルケニル、C2−10アルキニル、アリール、ヘテロアリール、炭素環又は複素環であって、それらの各々がヘテロ原子を含んでいてもよい、請求項5に記載の化合物。
- 前記アリール、ヘテロアリール、又は複素環が、ピペラジン、ピペリジン、モルホリン、チオモルホリン、フェニル、フラニル、チオフェニル、ピリジニル、ピリミジニル、ピラジニル、トリアジニル、キノキサリニル、チアゾリニル、オキサゾリル、イミダゾリル、キノリニル、ナフタレニル、ピリダジニル、ピラゾロピリミジニル、ベンゾイミダゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゼン−チオフェン、ピラゾリル、ピロリル、インドリル、イソインドリル、キノリジニル、キノリニル、イソキノリニル、又はキナゾリニルであり、それらの各々がO、N、S及びハロから選択されるヘテロ原子によって置換されていてもよく;又は、それぞれがヘテロ原子を含んでいてもよい、C1−10アルキル、C3−10環状アルキル、C2−10アルケニル、C2−10アルキニル、アリール、又は複素環によって置換されていてもよい、請求項6に記載の化合物。
- 式中、各Sが、一酸化物又は二酸化物であってもよい、請求項1に記載の化合物。
- 前記化合物が、ジ(フルオロベンジル)トリスルフィド、ジ(o−クロロベンジル)トリスルフィド、ジ(メチルベンジル)トリスルフィド、ジ(トリフルオロメチルベンジル)トリスルフィド、ジ(2−フェニルエチル)トリスルフィド、ジ(2−チオフェン−イル−メチル)トリスルフィド、ジ(4−ピリジン−イル−エチル)トリスルフィド、ジ(2−ピリミジン−イル−エチル)トリスルフィド、又はジ(3−ベンゾチオフェン−イル−メチル)トリスルフィドである、請求項1に記載の化合物。
- 前記化合物が、ジ(p−フルオロベンジル)トリスルフィド、ジ(m−メチルベンジル)トリスルフィド、又はジ−(p−メチルベンジル)トリスルフィドである、請求項1に記載の化合物。
- 神経芽細胞腫を改善又は処置する方法であって、有効量の請求項1に記載される化合物又はその医薬組成物を、任意で抗増殖性物質と一緒に、それらを必要とする系又は対象に投与する工程を含み、それにより、前記神経芽細胞腫が改善又は処置される、方法。
- 神経芽細胞腫以外の細胞増殖性疾患を改善又は処置する方法であって、
以下の式を有する化合物:
各Sは酸化物の形態であってもよく;
S1及びS2は、独立して、S、SO又はSO2であり;
各Rは、H、ハロゲン、カルボキシル、シアノ、アミノ、アミド、無機置換基、SR1、OR1又はR1であり、この場合、各R1は、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、炭素環又は複素環であり、それらの各々が置換されていてもよく、又、ヘテロ原子を含んでいてもよく;
m、n及びpは、独立して、0〜3である、化合物;
又は、以下の式(3)若しくは(4)で表される化合物:
又は、以下の式(5)で表される化合物:
Zは(CR1 2)q又は(CR1=CR1)q *であり、この場合、qは0〜3であり、且つ、*は、アルキニル、O、S、NRによって置換されていてもよいC=Cを表し;又は、Zは置換されていてもよいアリール、ヘテロアリール又は複素環であり;
式中、AとBは一緒に環状環系を形成してもよい、化合物;
で表される有効量の化合物、又はその医薬組成物を、任意で抗増殖性物質と一緒に、それらを必要とする系又は対象に投与する工程を含み、それにより前記の系又は対象における細胞増殖性疾患が改善又は処置される、方法。 - 前記細胞増殖が低減されるか、又は前記細胞死が誘導される、請求項14に記載の方法。
- 前記対象がヒト又は動物であり、且つ、前記系が細胞又は組織である、請求項14に記載の方法。
- 前記細胞増殖性疾患が腫瘍又は癌である、請求項14に記載の方法。
- 前記癌が、白血病、リンパ腫、肺癌、大腸癌、CNS癌、メラノーマ、卵巣癌、腎臓癌、前立腺癌、乳癌、頭頸部癌、膵臓癌、又は腎臓癌である、請求項17に記載の方法。
- 前記化合物が、ジベンジルトリスルフィド、ジ(p−フルオロベンジル)トリスルフィド、ジ(p−メチルベンジル)トリスルフィド又はジ(m−メチルベンジル)トリスルフィドである、請求項14に記載の方法。
- 細胞増殖を低減若しくは抑制するか、又は細胞死を誘導する方法であって、有効量の請求項14に定義される化合物又はその医薬組成物を、任意で抗増殖性物質と一緒に、系又は対象に投与する工程を含み、それにより、前記の系又は対象において細胞増殖を低減若しくは抑制するか、又は前記細胞死が誘導される、方法。
- 細胞アポトーシスが誘導される、請求項20に記載の方法。
- チューブリンの組み立て若しくは分解が妨害されるか、又は前記細胞周期におけるG2/Mの進行、細胞有糸分裂、若しくはこれらの組み合わせが抑制される、請求項20に記載の方法。
- 内皮細胞増殖、血管新生、又はその組み合わせが抑制される、請求項20に記載の方法。
- 前記対象がヒト又は動物であり、且つ、前記系が細胞又は組織である、請求項20に記載の方法。
- 前記化合物が、ジベンジルトリスルフィド、ジ(p−フルオロベンジル)トリスルフィド、ジ(p−メチルベンジル)トリスルフィド又はジ(m−メチルベンジル)トリスルフィドである、請求項20に記載の方法。
- 再狭窄を改善又は処置する方法であって、有効量の請求項14に定義される化合物又はその医薬組成物を、それを必要とする対象に投与する工程を含み、それにより、前記対象の再狭窄が改善又は処置される、方法。
- 前記再狭窄が新生内膜過形成に関連するものである、請求項26に記載される方法。
- 前記投与工程が経口投与若しくは非経口投与であるか、ステントを介して投与される、請求項26に記載の方法。
- 前記化合物が、ジベンジルトリスルフィド、ジ(p−フルオロベンジル)トリスルフィド、ジ(p−メチルベンジル)トリスルフィド又はジ(m−メチルベンジル)トリスルフィドである、請求項26に記載の方法。
- 請求項1に記載される化合物及び薬学上許容し得る賦形剤を含む医薬組成物。
- 以下の式で表される化合物:
各Sは酸化物の形態であってもよく;
S1及びS2は、独立して、S、SO又はSO2であり;
各Rは、H、ハロゲン、カルボキシル、シアノ、アミノ、アミド、無機置換基、SR1、OR1又はR1であり、この場合、各R1は、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、炭素環又は複素環であり、それぞれが置換されていてもよく、又、ヘテロ原子を含んでいてもよく;
m、n及びpは、独立して、0〜3である、化合物;
又は、以下の式(3)又は(4)で表される化合物:
又は、以下の式(5)で表される化合物:
Zは(CR1 2)q又は(CR1=CR1)q *であり、この場合、qは0〜3であり、且つ、*は、アルキニル、O、S、NRによって置換されていてもよいC=Cを表し;又は、Zは置換されていてもよいアリール、ヘテロアリール又は複素環であり;
式中、AとBは一緒に環状環系を形成してもよい、化合物;
及び薬学上許容し得る賦形剤を含む、細胞増殖疾患の処置のための医薬組成物。 - a) N−トリメチルシリルイミダゾールを二塩化硫黄のハロゲン化溶媒溶液と接触させ、ジイミダゾリルスルフィドを得る工程;及び
b) 前記ジイミダゾリルスルフィドをメルカプタンと接触させる工程;
を含む、請求項31に記載される式1−2で表される化合物の調製方法。 - 前記溶媒がジクロロメタンである、請求項32に記載の方法。
- N−トリメチルシリルイミダゾールのヘキサン溶液を、二塩化硫黄のジクロロメタン溶液と接触させる、請求項32に記載の方法。
- ニート化合物としての二塩化硫黄を、N−トリメチルシリルイミダゾールのヘキサン及びジクロロメタン溶液と接触させる、請求項32に記載の方法。
- 前記トリスルフィドを再結晶化する工程をさらに含む、請求項32に記載の方法。
- 前記トリスルフィドを、n−ヘキサン、ヘキサン、ヘプタン、石油エーテル又はこれらの組み合わせの中で再結晶化させる、請求項36に記載の方法。
- a) 溶液を得るために、請求項1に記載の化合物を、水溶性有機溶媒、非イオン性溶媒、水溶性脂質、シクロデキストリン、ビタミン、脂肪酸、脂肪酸エステル、リン脂質、又はこれらの組み合わせの中に溶解させる工程;及び
b) 生理食塩水又は1〜10%の炭水化物溶液を含むバッファーを添加する工程;
を含む、請求項1に記載の化合物を含む組成物を調製する方法。 - 前記有機溶媒が、ポリエチレングリコール(PEG)、アルコール、N−メチル−2−ピロリドン、N,N−ジメチルホルムアミド、N,N−ジメチルアセトアミド、ジメチルスルホキシド、又はこれらの組み合わせである、請求項38に記載の方法。
- 非イオン性の界面活性剤が、ポリオキシエチレングリセロールトリリシノレート35、PEG−コハク酸、ポリソルベート20、ポリソルベート80、ポリエチレングリコール660 12−ヒドロキシステアレート、ソルビタンモノオレイン酸、ポロキサマー、エトキシル化杏仁油、カプリル−カプロイルマクロゴール−8−グリセリド、グリセロールエステル、PEG6カプリルグリセリド、グリセリン、グリコール−ポリソルベート、又はそれらの組み合わせである、請求項38に記載の方法。
- 前記脂質が、植物性油脂、トリグリセリド、植物油又はそれらの組み合わせである、請求項38に記載の方法。
- 前記脂質がヒマシ油、ポリオキシヒマシ油、コーン油、オリーブ油、綿実油、落花生油、ペパーミント油、サフラワー油、ゴマ油、大豆油、硬化植物性油脂、硬化大豆油、ココナツ油のトリグリセリド、ヤシ種子油、及びそれらの硬化形態又はそれらの組み合わせである、請求項41に記載の方法。
- 前記ビタミンがトコフェロールである、請求項38に記載の方法。
- 前記脂肪酸がオレイン酸である、請求項38に記載の方法。
- 前記脂肪酸エステルが、モノグリセリド、ジグリセリド、PEGのモノ−脂肪酸エステル若しくはジ−脂肪酸エステル、又はこれらの組み合わせである、請求項38に記載の方法。
- 前記シクロデキストリンが、α−シクロデキストリン、β−シクロデキストリン、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、又はスルホブチルエーテル−β−シクロデキストリンである、請求項38に記載の方法。
- 前記リン脂質が、大豆ホスファチジルコリン、又はジステアロイルホスファチジルグリセロール及びその硬化形態、又はこれらの組み合わせである、請求項38に記載の方法。
- 前記炭水化物がデキストロースを含む、請求項38に記載の方法。
- アポトーシスの促進方法であって、有効量の請求項14に定義される化合物又はその医薬組成物を、任意で抗増殖性物質と一緒に、それらを必要とする系又は対象に投与することを含み、それにより、前記対象又は系中のアポトーシスが促進される、方法。
- 細胞のチューブリン又は微小チューブリンが誘導される、請求項49に記載の方法。
- 請求項38に記載の方法に従って調製された組成物。
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