JP2007526246A - 幹細胞からナチュラルキラー細胞(nk細胞)への分化調節用遺伝子を有効成分として含む分化調節剤 - Google Patents
幹細胞からナチュラルキラー細胞(nk細胞)への分化調節用遺伝子を有効成分として含む分化調節剤 Download PDFInfo
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Abstract
【解決手段】本発明は、幹細胞からナチュラルキラー細胞への分化調節用遺伝子を有効成分として含む細胞分化調節剤に関するものである。より詳細には、幹細胞から前駆ナチュラルキラー細胞への分化調節用遺伝子を有効成分として含む細胞分化調節剤及びSAGE分析方法を通じて前記分化調節遺伝子をスクリーニングする方法に関するものである。本発明の遺伝子は、幹細胞からナチュラルキラー細胞への分化を調節すると知られていない新規遺伝子で、前記遺伝子はSAGE分析方法を通じて手軽にスクリーニングすることができ、前記遺伝子を有効成分として含むナチュラルキラー細胞分化調節剤は抗癌剤として有用に使用することができる。
【選択図】図4
Description
J Immunol.,1986年,第36(10)巻,3910−3915頁 Hematologia,1999年,第84巻,1110−1149頁 Breast Cancer Res Treat.,2003年,第66(3)巻,255−263頁 Melanoma Res.,2003年,第13(4)巻,349−356頁 Lung Cancer,2002年,第35(1)巻,第23−18頁
1)細胞から全RNAを分離してcDNAを合成する工程;
2)工程1のcDNAを切断してタグを分離する工程;
3)工程2で分離したタグ各々を連結した後、その塩基配列を分析する工程;及び
4)工程3で分析した塩基配列をSAGE分析プログラムを使用して発現量を測定する工程を含むことを特徴とする幹細胞からナチュラルキラー細胞への分化調節用遺伝子をスクリーニングする方法を提供する。
a)cDNAをIIS型制限酵素1で切断してタグを製造する工程;
b)IIS型制限酵素1認識部位を一方末端に含む2種のアダプターを前記工程aで製造したタグの切断部位に各々連結させる工程;
c)アダプター連結された前記工程bのタグをIIS型制限酵素2で切断して前記タグからオリゴdT磁石ビードを切断してタグを分離する工程;
d)工程cで製造されたタグ各々を連結して二重タグを製造する工程;
e)工程dで製造された二重タグをIIS型制限酵素1で切断してアダプターを切断することにより二重タグのみを製造する工程を含んで製造することが好ましい。
b)工程aでクローニングしたベクターのタグ塩基配列を分析する工程。
但し、下記の実施例は本発明を例示するだけのものであり、本発明の内容が下記の実施例に限定されるものではない。
6乃至9週齢のC57BL/6マウス(供給源:大韓実験動物)の脛骨と大腿骨を含むすべての骨を粉砕して粉砕物を70ミクロン細胞ストレーナー(strainer)を通過させた後、溶解溶液(Sigma,St.Louse,MO)で処理して赤血球を除去することにより骨髄細胞を得た。骨髄細胞を系統マーカー(CD11b:大食細胞マーカー、Gr−1:顆粒球マーカー、B220:B細胞マーカー、NK1.1:NK細胞マーカー、CD2:T細胞マーカー、TER−119:赤血球マーカー)に対してビオチン(biotin)標識された抗体と反応させた後、洗浄して、ストレプトアビジン(streptavidin)が標識された磁石ビード(Miltenyi Biotec,Auburn,CA)と反応させた。磁石が標識されたLin+細胞は、MACS(Miltenyi Biotec)の磁場中でCSカラム(Miltenyi Biotec)に通過させて除去した。カラムを通過した残りのLin−細胞をc−kitと結合した磁石ビードと反応させてMSカラム(Miltenyi Biotec)を通過させた後、カラムに残留するc−kit+細胞を得た。このようにして得たLin− c−kit+である造血幹細胞(hematopoietic stem cell,以下「HSC細胞」と略称する)の純度は、蛍光流細胞計数器(FACS)(BD Bioscience,Mountainview,CA)で確認した結果、96%以上の純度を有することを確認した。
前記実施例1で骨髄から分離したHSC細胞を2×106細胞数/ウェルの濃度でマウス SCF(30ng/ml,BioSource,Camarillo,CA)、マウスFlt3L(50ng/ml,PeproTech,Rocky Hill,NJ)、マウスIL−7(0.5ng/ml,PeproTech)、インドメタシン(2μg/ml,Sigma)、ゲンタマイシン(20μg/ml)及び10%ウテア血清を含むRPMI完全培地を使用して、6−ウェルプレート(Falcon)に接種した。前記細胞を37℃、5%CO2で6日間培養し、培養3日後培養上澄み液の半分を捨てて前記接種の時と同じ組成のサイトカインが含有された新しい培地に交換した。培養6日後、FITC標識されたCD122抗体と磁石ビード(magnetic beads)が付いた抗FITC抗体を使用してMACSでCD122+であるNK前駆体細胞(prematureNKcell,以下「pNK細胞」と略称する)を分離した。NK前駆体細胞の純度は、蛍光流細胞計数器(FACS)で分析した結果、92%以上だった。
NK細胞の分化工程別特異的細胞を得るため、マウスの骨髄から分離したLin− c−kit+ HSC(>95%)をSCF、Flt−3L、IL−7存在下で6日間培養した後、CD122+であるpNK細胞(95%)を分離して、流細胞計数器で分析した。そして、mNK細胞(−OP9または+OP9)は、IL−15単独またはIL−15とOP9間質細胞を一緒に6日間さらに培養した後、細胞を回収して流細胞計数器で分析した(図1a)。間質細胞と共に培養した時、さらに多いmNK細胞(−OP9;94%及び+OP9;>95%)を得ることができた。mNK細胞表面のLy49受容体は、mNK細胞の機能に重要な役目をし、それらの発現は他の免疫細胞等との相互連関(communication)によるシグナル伝達によって調節される。骨髄から由来したHSCと間質細胞との同時培養が、mNK細胞のLy49受容体発現に必須なのかどうかを調べるためにIL−15の存在下で単独またはOP9細胞と共にmNK細胞を培養してLy49発現を調査した(図1b)。OP9と一緒に培養した時(+OP9)mNK細胞でLy49C/I及びLy49G2の発現が誘導された一方、OP9と一緒に培養しない場合には(−OP9) Ly49C/I及びLy49G2の発現が誘導されなかった。これは、OP9間質細胞との同時培養がNK細胞のその後の成熟(maturation)に必須であることを暗示するものである。NK細胞分化工程別CD122とパーフォリン(perforin)遺伝子発現様相を通じて、分化する間、NK細胞に成熟(maturation)することを確認することができた(図1c)。
前記実施例2で製造したHSC細胞を含むNK分化工程特異的な細胞(pNK及びmNK)から全RNAを分離した後、5μgの全RNAからオリゴ(dT)25磁石ビード(Dynal A.S.,Oslo,Norway)を使用してmRNAを分離精製した。前記オリゴdTビードで分離精製したmRNAを5’−ビオチン化され3’−連結されたオリゴ(dT)プライマーを使用してcDNA合成キット(Invitrogen,Life Technologies)で合成した。製造社の方針(Invitrogen, Life Technologies)にしたがって図2の模式図に例示した方法でcDNAからSAGE分析用タグを製作した。前記cDNAを制限酵素であるNIaIIIで切った後、3’−部分をストレプトアビジンコーティングされた磁石ビード(Dynal)で結合させた。タグは2個の分画に分けて、NIaIII認識部位がある2個のリンカー(Invitrogen,Life Technologies)で各々連結した。リンカーを連結したタグをBsmFIで切断した後、切断によって遊離したタグとリンカーにPfu DNAポリメラーゼを処理してブラント末端にし、ブラント末端を連結して二重タグ(ditag)が形成されるようにした。ビオチン標識されたSAGEプライマー(Invitrogen,Life Technologies)を使用して前記二重タグをPCR増幅した後、二重タグをNIaIIIで切断してリンカーから分離して、T4 DNAリガーゼを処理してコンカテマー(concatemer)形態にした。前記製造したコンカテマーをSph I−切断したpZero−1ベクター(Invitrogen,Carlsbad,CA)にクローニングした(図2)。配列番号1で記載されるM13正方向プライマーと配列番号2で記載されるM13逆方向プライマーを使用して前記クローニング産物をPCR増幅した後、増幅された陽性コロニーを選択してPCR産物を塩基配列分析キット(Big−Dye sequencing kit)と塩基配列分析器機(ABI377 sequencer,Perkin−Elmer Applied Biosystems,Branchburg,NJ)で配列分析した。タグ配列は、SAGE300ソフトウェアで抽出した。
<5−1>生物情報学的分析
参照SAGEタグデータベースは、遺伝子銀行(GenBank)で大部分知られているマウス発現配列を示すユニジンマウスデータベース(UniGene mouse database)から製作した。配列でSAGEタグを決定する条件は、(i)各々転写体の方向性、(ii)ポリ(A)シグナル(AATAAAまたはATTAAA)の存在、(iii)ポリA尾の存在、(iv)配列で最後のCATG切断部位の存在とした。参照配列から抽出されたすべてのSAGEタグは、参照SAGEデータベースを駆逐するのに使用した。参照SAGEデータベース(http://www.hpc1.cs.uchicago.edu/gist)に対して実験的なSAGEタグをマッチして、各々のSAGEタグに対応可能な遺伝子を同定するためにコンピュータープログラム、SAGEmap(Lash A.E等,2000)を使用した。
前記実施例<4−1>で遂行して得たSAGEデータを、NK細胞分化過程の間、それらの他の発現と機能的パターンに基づいてクラスタリング(clustering)するためにクラスターコンピュータープログラム(cluster and treeview computer program, http://rana.1b1.gov)を使用して分析した。簡単に、各々の測定工程にそれらの頻度によって(PERL script available upon request)青、緑、黄色、赤の色を割り当てた。中間値は相応するRGB値に挿入した。このような色相化された可視的な検査によって高くて明確な発現様相を示すいくつかのタグを採択し、それらをパネルでお互いに離れるように配置した。他のタグは、隣合う列が類似の発現様相を見せて全体が漸次的な色相変化を示すようにする方法で再配列した。
<6−1>NK細胞分化工程別SAGEライブラリ製造
前記実施例4を通じてSAGE分析した結果を使用して各分化工程(HSC,pNK,mNK(−OP9),mNK(+OP9))にあるNK細胞から4群の独立的なSAGEライブラリを作った。HSCのSAGEライブラリでは、全体44,998個のタグから19,830個の特異(unique)転写体が同定され、その中で12,899個の特異遺伝子が同定された。pNK細胞のSAGEライブラリでは、全体40,771個のタグから17,745個の特異転写体が同定され、その中で11,684個の特異遺伝子が同定された。同様に、mNK細胞のSAGEライブラリでは、全体42,160個のタグ(mNK(−OP9))と42,535個のタグ(mNK(+OP9))から各々20,803個及び20,791個の特異転写体が同定され、その中で各々3,650個及び14,335個の特異遺伝子が同定された。全体的に、4個のSAGEライブラリから総170,464個のタグが同定され、それから59,657個の特異転写体及びそれから35,385個の特異遺伝子が同定された。59,657個の特異転写体の中で77.9%は単一コピー、16.8%は2乃至4コピー、3.2%は5乃至9コピー、1.9%は10乃至99コピーを示し、わずか0.2%だけが100コピー以上を示した(表1)。
NK分化の各々の工程にはお互いに区別される遺伝子の発現様相が現われることが知られているので、分化工程特異的に誘導される遺伝子を同定した。統計的に有意差を調査するために特定工程で少なくとも4倍以上計数される遺伝子群を表にした。
SAGEデータから他の遺伝子の発現様相を確認するために半正量的(semiquantitative)RT−PCRを遂行した。発現を確認しようとする遺伝子によって下記のようなプライマーを作成してRT−PCRを遂行した。すべてのPCR混合物は、95℃から1分間加熱して、HSCとmNK細胞に対しては95℃1分、55℃で1分、72℃で2分の条件で、NK前駆体細胞に対しては95℃1分、60℃で1分、72℃で2分で28回または32回で PCRを行って、72℃でさらに10分伸張反応させた後、増幅されたPCR産物を電気泳動してエチジウムブロマイド染色で確認した。
フォークヘッド関連転写因子1c(Forkhead−related transcription factor 1c,Foxp1c):配列番号5及び配列番号6、
c−mycタンパク質:配列番号7及び配列番号8、
ケラチンコンプレックス(keratin complex,KC)1:配列番号9及び配列番号10、
PA−フォスファターゼ関連ホスホエステラーゼ(phosphatase related phosphoesterase,PA−PRP):配列番号11及び配列番号12、
インターロイキン1受容体関連キナーゼ(interleukin 1 receptor−associated kinase,IRAK):配列番号13及び配列番号14、
リボソームタンパク質(ribosomal protein)L10A:配列番号15及び配列番号16、
プレプロプロテイナーゼ(pre−pro−proteinase)3:配列番号17及び配列番号18、
マイエロブラストシスオンコゲン(myeloblastosis oncogene):配列番号19及び配列番号20、
カルボハイドレイト結合タンパク質(carbohydrate binding protein,CBP)35:配列番号21及び配列番号22、
IL−7 受容体:配列番号23及び配列番号24、
リポタンパク質リパーゼ(lipoprotein lipase,LPL):配列番号25及び配列番号26、
フェリチンH鎖:配列番号27及び配列番号28、
マトリックスメタロプロテイナーゼ(matrix metalloproteinase,MMP)12:配列番号29及び配列番号30、
G−タンパク質シグナル調節剤(regulator of G−protein signaling,RGS):配列番号31及び配列番号32、
セルピナ3G(Serpina3G):配列番号33及び配列番号34、
ピュリノジック受容体(purinergic receptor)P2Y:配列番号35及び配列番号36、
リンパ球特異的タンパク質チロシンキナーゼ(PTK):配列番号37及び配列番号38、
セマフォリン6A前駆体(semaphorin 6A precursor):配列番号39及び配列番号40、
CD122:配列番号41及び配列番号42、
パーフォリン(perforin):配列番号43及び配列番号44、
βアクチン(actin):配列番号45及び配列番号46。
前記実施例4の結果を通じて、NK細胞分化過程の中で分化工程特異的に発現する遺伝子の中に配列番号47で記載されるリポタンパク質リパーゼ(以下「LPL」と略称する)がNK細胞分化過程中にpNK細胞で過量発現することを確認した。LPLは、NK細胞の増殖を促進させて、自発的な細胞毒性(spontaneous cytotoxicity)とリンフォカイン活性化したキラー(lymphokine−activated killer,LAK)活性を阻害すると知られている。それで、LPLのpNK−特異的な発現がmNK細胞への分化に要求されるかどうかを調べるため、HSCを6日間初期培養した後、OP9間質細胞の不在下でIL−15と共にLPLを処理してNK細胞の割合を測定した。
配列番号1と配列番号2の塩基配列は、実施例3のPCR反応に使用したプライマー配列である。
配列番号3と配列番号4の塩基配列は、実施例6のγパルビンのRT−PCR反応に使用したプライマー配列である。
配列番号5と配列番号6の塩基配列は、実施例6のフォークヘッド関連転写因子1cのRT−PCR反応に使用したプライマー配列である。
配列番号7と配列番号8の塩基配列は、実施例6のc−mycタンパク質のRT−PCR反応に使用したプライマー配列である。
配列番号9と配列番号10の塩基配列は、実施例6のケラチンコンプレックス1のRT−PCR反応に使用したプライマー配列である。
配列番号11と配列番号12の塩基配列は、実施例6のPA−フォスファターゼ関連ホスホエステラーゼのRT−PCR反応に使用したプライマー配列である。
配列番号13と配列番号14の塩基配列は、実施例6のインターロイキン1受容体関連キナーゼのRT−PCR反応に使用したプライマー配列である。
配列番号15と配列番号16の塩基配列は、実施例6のリボソームタンパク質L10AのRT−PCR反応に使用したプライマー配列である。
配列番号17と配列番号18の塩基配列は、実施例6のプレプロプロテイナーゼ3のRT−PCR反応に使用したプライマー配列である。
配列番号19と配列番号20の塩基配列は、施例6のマイエロブラストシスオンコジンのRT−PCR反応に使用したプライマー配列である。
配列番号21と配列番号22の塩基配列は、実施例6のカルボハイドレイト結合タンパク質35のRT−PCR反応に使用したプライマー配列である。
配列番号23と配列番号24の塩基配列は、実施例6のIL−7受容体のRT−PCR反応に使用したプライマー配列である。
配列番号25と配列番号26の塩基配列は、実施例6のリポタンパク質リパーゼのRT−PCR反応に使用したプライマー配列である。
配列番号27と配列番号28の塩基配列は、実施例6のフェリチンH鎖のRT−PCR反応に使用したプライマー配列である。
配列番号29と配列番号30の塩基配列は、実施例6のマトリックスメタロプロテイナーゼ12のRT−PCR反応に使用したプライマー配列である。
配列番号31と配列番号32の塩基配列は、実施例6のG−タンパク質シグナル調節剤のRT−PCR反応に使用したプライマー配列である。
配列番号33と配列番号34の塩基配列は、実施例6のセルピナ3GのRT−PCR反応に使用したプライマー配列である。
配列番号35と配列番号36の塩基配列は、実施例6のピュリノジック受容体P2YのRT−PCR反応に使用したプライマー配列である。
配列番号37と配列番号38の塩基配列は実施例6のリンパ球−特異的タンパク質チロシンキナーゼのRT−PCR反応に使用したプライマー配列である。
配列番号39と配列番号40の塩基配列は、実施例6のセマフォリン6A前駆体のRT−PCR反応に使用したプライマー配列である。
配列番号41と配列番号42の塩基配列は、実施例6のCD122のRT−PCR反応に使用したプライマー配列である。
配列番号43と配列番号44の塩基配列は、実施例6のパーフォリンのRT−PCR反応に使用したプライマー配列である。
配列番号45と配列番号46の塩基配列は、実施例6のβアクチンのRT−PCR反応に使用したプライマー配列である。
配列番号47の塩基配列は、リポタンパク質リパーゼの塩基配列である。
配列番号48のアミノ酸配列は、マウスタンパク質のアミノ酸配列である。
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- ホメオボックスタンパク質MIX(GenBank AF15457,以下GenBank ID)、プレプロ−プロテイナーゼ3(U97073)、骨髄芽球症(Myb)腫瘍遺伝子(M16499)、ケラチンコンプレックス1、酸性、遺伝子13(NM_010662)、PA−フォスファターゼ関連ホスホエステラーゼ(AK002966)、γパルビン(BC011200)、フォークヘッド関連転写因子1C(AF330105)、RIKEN cDNA 5730501N20遺伝子(AK017744)、c−mycタンパク質(X010223)、リボソームタンパク質 L10A(AK002613)、Oct 2b遺伝子(X53654)、雄睾丸遺伝子(AK015601)、ジヒドロリポアミドデヒドロゲナーゼ(BC003368)、トラクル(U81030)、ライソザイム(BC002069)、フェリチンH鎖(BC012314)、ブレビカン(X87096)、マトリックスメタロプロテイナーゼ12(BC019135)、EIA刺激性遺伝子の細胞抑制剤(AF084524)、S100カルシウム結合タンパク質A9(BC027635)、MPS1タンパク質(L20315)、トランスグルタミナーゼ2(BC016492)、血清及びグルココチコイド調節性タンパク質キナーゼ(AF139639)、RIKEN cDNA 5830413L19(BC027496)、インターフェロン誘導性タンパク質(BC003804)、乳脂肪球皮膜タンパク質EGF因子8(BC018577)、細胞表面糖蛋白質p91(U83172)、アルギナーゼ 1(BC050005)、腫瘍壊死因子受容体1(M59378)、レチノイド誘導性セリンカルボキシペプチダーゼ(AF330052)、FLJ11000相同体(BC023802)、インターロイキン−18結合タンパク質d前駆体(AF110803)、クロライドチャネル7(AK009435)、CD36抗原(BC010262)、亜鉛フィンガータンパク質相同体(BC030186)、カルボハイドレイト結合タンパク質35(J03723)、C型カルシウム依存性カルボハイドレイト(BC003218)、リポタンパク質リパーゼ(NM_008509)、v−maf腱膜線維肉腫腫瘍遺伝子(BC038256)、インターロイキン7受容体(NM_008372)、キモカイン(C−C)受容体1(BC011092)、ニューロピリン(MGD|MGI:106206)(AK002673)、SERPINA3G(XM_127137)、GABA−A受容体サブユニット6(X51986)、LAPTm5(U51239)、G−タンパク質シグナル調節剤(BC049968)、崩壊促進因子GPI固定mRNA(L41366)、Yボックスタンパク質3(AK019465)、オステオポンチン前駆体(J04806)、アミロイドベータ(A4)前駆体タンパク質結合ファミリー(AK021331)、T細胞受容体ベータサブユニット類似体(U63547)、免疫関連ヌクレオチド1(BC005577)、上流転写因子1(NM_009480)、嗅覚受容体MOR267−7(NM_146714)、リンパ球特異的タンパク質チロシンキナーゼ(M12056)、破骨細胞腫抑制因子(AB013898)、血小板活性受容体相同体(BC024054)、ナチュラルキラー細胞タンパク質群2−A1(AF016008)、未同定のタンパク質MGC36662(BC023851)、セマフォリン6A前駆体相同体(AK004390)、ニューロフィラメント相同ポリペプチド(BC025872)、コロニン相同アクチン結合タンパク質2A(BC026634)、ソルート伝達ファミリー6(BC015245)、暫定的プリン受容体P2Y10相同体(AK020001)、T細胞受容体ガンマ鎖(X03802)、ポリAポリメラーゼアルファ(NM_011112)、OPA関連タンパク質OIP5類似体(AK017825)、マイトジェン活性化タンパク質キナーゼ1類似体(BC006708)からなる群から選択される一つ以上の遺伝子を有効成分として含む幹細胞からナチュラルキラー細胞への分化調節剤。
- ホメオボックスタンパク質MIX(AF15457)、プレプロ−プロテイナーゼ3(U97073)、骨髄芽球症(Myb)腫瘍遺伝子(M16499)、ケラチンコンプレックス 1、酸性、遺伝子13(NM_010662)、PA−フォスファターゼ関連ホスホエステラーゼ(AK002966)、γパルビン(BC011200)、フォークヘッド関連転写因子1C(AF330105)、RIKEN cDNA 5730501N20遺伝子(AK017744)、c−mycタンパク質(X010223)、リボソームタンパク質 L10A(AK002613)、Oct 2b遺伝子(X53654)、雄睾丸遺伝子(AK015601)、ジヒドロリポアミドデヒドロゲナーゼ(BC003368)、トラクル(U81030)からなる群から選択される一つ以上の遺伝子を含む幹細胞から前駆ナチュラルキラー細胞への分化調節剤。
- ライソザイム(BC002069)、フェリチンH鎖(BC012314)、ブレビカン(X87096)、マトリックスメタロプロテイナーゼ12(BC019135)、EIA刺激性遺伝子の細胞抑制剤(AF084524)、S100カルシウム結合タンパク質A9(BC027635)、MPS1タンパク質(L20315)、トランスグルタミナーゼ2(BC016492)、血清及びグルココチコイド調節性タンパク質キナーゼ(AF139639)、RIKEN cDNA 5830413L19(BC027496)、インターフェロン誘導性タンパク質(BC003804)、乳脂肪球皮膜タンパク質EGF因子8(BC018577)、細胞表面糖蛋白質p91(U83172)、アルギナーゼ 1(BC050005)、腫瘍壊死因子受容体1(M59378)、レチノイド誘導性セリンカルボキシペプチダーゼ(AF330052)、FLJ11000相同体(BC023802)、インターロイキン−18結合タンパク質d前駆体(AF110803)、クロライドチャネル7(AK009435)、CD36抗原(BC010262)、亜鉛フィンガータンパク質相同体(BC030186)、カルボハイドレイト結合タンパク質35(J03723)、C型カルシウム依存性カルボハイドレイト(BC003218)、リポタンパク質リパーゼ(NM_008509)、v−maf腱膜線維肉腫腫瘍遺伝子(BC038256)、インターロイキン7受容体(NM_008372)、キモカイン(C−C)受容体1(BC011092)、ニューロピリン(MGD|MGI:106206)(AK002673)からなる群から選択される一つ以上の遺伝子を有効成分として含む前駆ナチュラルキラー細胞から成熟ナチュラルキラー細胞への分化調節剤。
- SERPINA3G(XM_127137)、GABA−A受容体サブユニット6(X51986)、LAPTm5(U51239)、G−タンパク質シグナル調節剤(BC049968)、崩壊促進因子GPI固定mRNA(L41366)、Yボックスタンパク質3(AK019465)、オステオポンチン前駆体(J04806)、アミロイドベータ(A4)前駆体タンパク質結合ファミリー(AK021331)、T細胞受容体ベータサブユニット類似体(U63547)、免疫関連ヌクレオチド1(BC005577)、上流転写因子1(NM_009480)、嗅覚受容体MOR267−7(NM_146714)、リンパ球特異的タンパク質チロシンキナーゼ(M12056)、破骨細胞腫抑制因子(AB013898)、血小板活性受容体相同体(BC024054)、ナチュラルキラー細胞タンパク質群2−A1(AF016008)、未同定のタンパク質MGC36662(BC023851)、セマフォリン6A前駆体相同体(AK004390)、ニューロフィラメント相同ポリペプチド(BC025872)、コロニン相同アクチン結合タンパク質2A(BC026634)、ソルート伝達ファミリー6(BC015245)、暫定的プリン受容体P2Y10相同体(AK020001)、T細胞受容体ガンマ鎖(X03802)、ポリAポリメラーゼアルファ(NM_011112)、OPA関連タンパク質OIP5類似体(AK017825)、マイトジェン活性化タンパク質キナーゼ1類似体(BC006708)からなる群から選択される一つ以上の遺伝子を有効成分として含む成熟ナチュラルキラー細胞の分化調節剤。
- 前記分化調節剤を、坑癌用に使用することを特徴とする、請求項1乃至4のいずれかに記載の細胞分化調節剤。
- 前記癌が、乳癌、黒色腫癌及び肺癌からなる群から選択されることを特徴とする請求項5に記載の細胞分化調節剤。
- 1)細胞から全RNAを分離してcDNAを合成する工程;
2)工程1のcDNAを切断してタグを分離する工程;
3)工程2で分離したタグ各々を連結した後、塩基配列を分析する工程;及び
4)工程3で分析した塩基配列をSAGE(Serial Analysis of Gene expression)分析プログラムを使用して発現量を測定する工程を含む幹細胞からナチュラルキラー細胞への分化調節用遺伝子をスクリーニングする方法。
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