JP2007513138A - 鳥類におけるカンピロバクターの卵内接種 - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、卵内に生きたカンピロバクター細胞を投与することによる、カンピロバクターに対する鳥類の免疫応答を誘発する方法を提供する。
驚くべきことに、本発明によって、カンピロバクターの生きた細胞が卵内、鳥類の卵に、安全に投与されることができ、有効にコロニー形成し、そしてカンピロバクターに対する免疫応答を鳥類において誘発することが発見された。
ブロイラーニワトリの卵に、孵卵の18日目に106コロニー形成単位(CFU)のカンピロバクター・ジェジュニUA535を卵内注入した。これは、もともとカンピロバクター症のヒト臨床ケースから単離された、野生型のC.ジェジュニの未改変菌株である。卵の第2群は、孵化の日まで未接種のままであり、孵化時にこの群のヒヨコに106CFUのC.ジェジュニUA535を経口接種した。孵化時に、各処置における生きたヒヨコ及び未孵化卵の数を記録し、1つの処理あたり、トリ20羽を入れたわらくずをしいた囲いを3つ反復して、すべてのヒヨコを入れた。
C.ジェジュニの卵内接種後のコロニー形成がUA535菌株特有のものでないことを実証するために、他のヒト臨床単離物、C.ジェジュニ81-176、によるトリのコロニー形成を評価した。胚の孵卵の18日目に、1.8×105または1.4×107CFUのC.ジェジュニ81-176をブロイラー卵の群に注入した。卵の第3の群は、未接種のままであった。孵化時に、未接種卵からのヒヨコの1群を未接種の対照トリとして保持し、これらの卵からのヒヨコの第2の群に8.3×106CFUのC.ジェジュニ81-176を経口で与えた。
胚の孵卵の18日目に、ブロイラーニワトリの卵の群に、7×107CFUのC. ジェジュニCsrAを卵内接種した。この菌株は、炭素貯蔵の全体的制御に関与するタンパク質であるCsrA内に突然変異を有する。卵の第2の群は、未接種対照として保持した。孵化時に、未接種卵からのヒヨコの1群に3×108CFUのC.ジェジュニCsrAを経口で与えた。未接種卵から孵化した他の群のヒヨコは対照として保持した。
胚の孵卵の18日目に、ブロイラーニワトリの卵の群に、9×106CFUのC.ジェジュニHspR、8×107CFUのC.ジェジュニHtrAまたは6×107CFUのC.ジェジュニDpsを卵内接種した。HspR菌株は熱ショックタンパク質に突然変異を有し;HtrA菌株はセリンプロテアーゼ遺伝子に突然変異を有し;そしてDps菌株は鉄の獲得に関与する遺伝子に突然変異を有する。他の群の卵は未接種対照として保持した。孵化時に未接種卵からのヒヨコの群に、4×106CFUのC.ジェジュニHspR、1×108CFUのC。ジェジュニHtrA、または1×108CFUのC.ジェジュニDpsを経口で与えた。未接種卵から孵化したヒヨコのもう1つの群は対照として保持した。
胚の孵卵の18日目にブロイラーニワトリの卵の群に7.3×107CFUのC.ジェジュニflbA、1.1×108CFUのC.ジェジュニPnp、または1.2×108CFUのC.ジェジュニSurEを卵内接種した。FlbA菌株は、鞭毛の構造タンパク質をコードする遺伝子において突然変異しており;Pnp菌株はヌクレオチジルトランスフェラーゼをコードする遺伝子において突然変異しており;そしてSurE菌株はホスファターゼをコードする遺伝子において突然変異している。卵のもう1つの群は、未接種対照として保持した。孵化時に、未接種卵からのヒヨコの群に9.3×107CFUのC.ジェジュニflbA、1.6×108CFUのC.ジェジュニPnp、または8×107CFUのC.ジェジュニSurEを経口で与えた。未接種卵からかえったヒヨコのもう1つの群は対照として保持した。
孵卵の18日目において、ブロイラーニワトリの卵の群に2×106細胞の野生型C.ジェジュニ菌株UA535を卵内注入した。第2の卵の群は未接種対照として保持した。孵化時において、未接種卵からのトリの1群に2×106細胞のC.ジェジュニUA535を経口で接種した。未接種卵からかえった残りのトリを対照として保持した。孵化後の27日目に、各群の半数のトリを100mg/Lカナマイシンを含む薬用の水の上において、免疫化用のC.ジェジュニ菌株を除去した。したがって、これらの感染/除去されたトリは「免疫化された」と考える。
Claims (18)
- 孵卵の最終四半期の間に、カンピロバクター種の生きた細胞の免疫化有効量を卵内投与することを含む、トリにおいてカンピロバクターに対する免疫応答を誘発する方法。
- 前記トリが家禽である、請求項1に記載の方法。
- 前記家禽が、以下の:ニワトリ、七面鳥、及びアヒルから成る群から選ばれる、請求項2に記載の方法。
- 前記投与において使用されるカンピロバクターの前記種が、以下の:C.ジェジュニ、C.コリ、及びC.ラリから成る群から選ばれる、請求項1に記載の方法。
- 前記投与において使用される前記生きた細胞が、1種以上のカンピロバクターの生きた細胞を含む、請求項1に記載の方法。
- 前記生きた細胞が野生型であるか、又は遺伝的に改変されている、請求項1に記載の方法。
- 異種性ポリヌクレオチド配列がカンピロバクターの前記生きた細胞中に導入されている、請求項6に記載の方法。
- 前記異種性ポリヌクレオチド配列が、家禽におけるカンピロバクターによるコロニー形成に必須のタンパク質をコードする、請求項7に記載の方法。
- 前記異種性ポリヌクレオチド配列が、家禽において病気を引き起こすウイルス、細菌、又は寄生生物からの抗原をコードする、請求項7に記載の方法。
- 前記異種性ポリヌクレオチド配列が、食品由来の病気をヒトにおいて引き起こす生物体からの抗原をコードする、請求項7に記載の方法。
- 前記異種性ポリヌクレオチド配列が、家禽の成長又は飼料効率を促進するタンパク質をコードする、請求項7に記載の方法。
- 前記異種性ポリヌクレオチド配列が、トリの免疫系を刺激するタンパク質をコードする、請求項7に記載の方法。
- さらに、獣医学的に許容可能な担体を投与することを含む、請求項1に記載の方法。
- 前記獣医学的に許容可能な担体が、卵内投与の前にカンピロバクターの生きた細胞と併合される、請求項13に記載の方法。
- 前記獣医学的に許容可能な担体が、飼料又は水中で、或いはエアロゾルスプレーによって、孵化後のいずれかの時に上記トリに投与される、請求項13に記載の方法。
- 前記獣医学的に許容可能な担体がアジュバントである、請求項14又は15に記載の方法。
- 前記アジュバントが免疫刺激活性を有する、請求項14又は15に記載の方法。
- カンピロバクターの生きた細胞が、以下の:ウイルス、細菌、又は原虫免疫原から選ばれる少なくとも1つの他の免疫原と併合される、請求項1に記載の方法。
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