JP2007507543A - 樹状細胞治療によって誘導されるｔ細胞アネルギーを予防するためのｃｏｘ−２インヒビターの使用 - Google Patents

Abstract

本発明は、癌の処置において有用な方法および併用療法に関する。より具体的には、本発明は、癌を処置するために治療用樹状細胞ワクチンと組合わせた、ＣＯＸ−２インヒビターの使用に関する。本発明のＣＯＸ−２インヒビターは、プロスタグランジンＥ_２（ＰＧＥ_２）の酵素活性を阻害し、それによって、ＣＯＸ−２過剰発現腫瘍が、抗原特異的細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）による免疫監視機構から逃れるのを防ぐと考えられる。ＣＯＸ−２インヒビターは、ＣＯＸ−２過剰発現神経膠細胞腫が生成するＰＧＥ_２を抑制して、腫瘍浸潤性ＤＣがＴｈ細胞をＴｈサブセット１（Ｔｈ１）に対して極化させると、考えられる。

Description

（発明の分野）
本発明の方法および試薬は、細胞増殖に関連する疾患または状態（例えば、癌）を処置または予防するために使用される。

（発明の背景）
癌は、米国において２番目に多い死亡原因であり、毎年、１００万人よりも多くの人が、癌と診断される。およそ２人の米国男性のうちの１人および３人の米国女性のうちの１人は、その生涯の間に何らかの型の癌を有するだろう。しかし、可能性が高い癌の環境原因および遺伝原因のうちのいくつかを同定することにおいて、かなりの進歩がなされたが、この疾患に関連する罹患率は、癌ならびに関連する疾患および障害についての治療介入においてかなりの改善が必要であることを示す。

身体による有効な免疫応答（これは、癌細胞を認識して根絶させる）に対する手がかりは、抗原特異的ＣＤ８+細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）の活性化を含む（非特許文献１；非特許文献２；非特許文献３）。そのような免疫応答に関するコンセンサスはまた、クラスＩ主要組織適合遺伝子分子に複合体（ＭＨＣ）化された抗原性ペプチドが、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）として観察された（非特許文献４；非特許文献５；非特許文献６；非特許文献７）という証拠によっても支持される。研究によって、腫瘍特異的ＣＴＬは、同族様式でＣＤ４+ヘルパーＴ（Ｔｈ）細胞エピトープに交差提示する同じ抗原提示細胞（ＡＰＣ）上にある、ＴＡＡを認識するに違いないことが示されている。このことは、強力な抗腫瘍免疫応答の誘導のための、Ｔｈ細胞とＣＴＬとの間のエピトープの関連についての必要条件（非特許文献７；非特許文献８：非特許文献９）をさらに示す。抗腫瘍免疫におけるＴｈ細胞応答の重要性を考慮すると、ＡＰＣが腫瘍特異的Ｔｈ細胞をＴｈサブセット１（Ｔｈ１）活性化状態へと偏向させる能力は、全身に誘発されたあらゆる殺腫瘍性免疫応答の効力を増強する際に重大な役割を果たし得る。Ｔリンパ球および細胞媒介性免疫への誘導は、非特許文献１０およびその中で引用される参考文献において見出される。

１つの有望な癌治療は、免疫の誘導のための樹状細胞（ＤＣ）の使用を含む。ＤＣは、死んだ癌細胞を介してＴＡＡを捕捉して処理するために備えられた中心的ＡＰＣであり（非特許文献７）、副刺激分子（例えば、ＣＤ５４、ＣＤ８０、およびＣＤ８６）を同時発現して、高レベルのクラスＩ ＭＨＣ−抗原性ペプチド複合体およびクラスＩＩ ＭＨＣ−抗原性ペプチド複合体を提示し（非特許文献１１）、ＤＣは、Ｔｈ細胞をＴｈ１に対して極化させる大量のインターロイキン（ＩＬ）−１２を生成することができる（非特許文献１２；非特許文献１３；非特許文献１４）。さらに、ＤＣは、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）ファミリーリガンド（例えば、ＴＮＦ、リンホトキシンα_１β_１、Ｆａｓリガンド、およびＴＮＦ関連アポトーシス誘導リガンド（ＴＲＡＩＬ））を発現し、そして癌細胞の効率的な直接的アポトーシス死滅のために完全に準備されている（非特許文献１５）ことが、示された。

臨床状況において、天然かつ／または治療誘導性の、高頻度の腫瘍浸潤性ＤＣが、疾患の良好な予後および／または後退に関連があり（非特許文献１６；非特許文献１７；非特許文献１８）、このことは、免疫監視機構におけるそれらのＤＣの役割についての証拠を提供する。しかし、癌が、ＤＣによる免疫監視機構を回避し得るという証拠が存在し、そしてその回避機構は、完全には理解されていない。

ＤＣは、抗原特異的ＣＴＬを活性化すると同時にＣＴＬ寛容を維持することによって、免疫系において２つの重要な役割を果たす（非特許文献１９；非特許文献２０）。このＤＣの二重の役割についての１つの説明は、ＤＣ媒介性ＣＴＬ寛容の機構が、未成熟ＤＣによって引き起こされ、その場合、ＤＣにおける成熟停止が、ＤＣによるアポトーシス細胞の取り込みによって引き起こされる（非特許文献１９；非特許文献２０；非特許文献２１）。しかし、脳（脳は、リンパ排液がないことおよび血液脳関門（ＢＢＢ）の性質に起因して、免疫学的に特別な部位であると考えられる（非特許文献２２））に接種されたＤＣは、リンパ節へと移動し、ＣＴＬ活性の刺激に起因して、脳腫瘍に対する抗腫瘍免疫を誘導した（非特許文献１７；非特許文献１８）。末梢からリンパ系器官へのＤＣの移動は、ＤＣの成熟マーカーのうちの１つであるケモカインレセプター７（ＣＣＲ７）の発現に関係し（非特許文献２３）、このことは、少なくともいくつかの腫瘍浸潤性ＤＣは、そのＤＣがアポトーシス腫瘍細胞を貪食した後に、成熟停止しないことを示す。さらに、ＣＴＬ寛容は、プロスタグランジンＥ_２（ＰＧＥ_２）刺激によって誘導されるＣＤ８３＋成熟ＤＣによって媒介され、その成熟ＤＣとＣＤ４＋Ｔｈ細胞との間の境界面が、重要なチェックポイントであることが、示された（非特許文献２４；非特許文献２５）。

腫瘍細胞を含むＤＣは、ＣＤ８６のような副刺激分子の発現をダウンレギュレートする。ＤＣに対する副刺激分子のダウンレギュレーションは、抗腫瘍免疫の限定された効力に関連し得るが、この事実だけによっては、ＤＣ媒介性免疫監視機構からの腫瘍により生じる回避機構を説明することは困難である。腫瘍培養上清に暴露されたＤＣは、ＩＬ−１２を生成する能力を欠き、完全なアロ刺激活性を獲得できなかったことが、報告されている（非特許文献２６；非特許文献２７）。ＤＣについての腫瘍培養上清における抑制因子の１つは、ＰＧＥ_２であり得る。その理由は、ＰＧＥ_２により誘導された成熟ＤＣは、ＩＬ−１２生成が損なわれており、それらのＤＣはまた、抗原特異的ＣＴＬ寛容と関連があるという証拠からである（非特許文献２４；非特許文献２５）。

ＰＧＥ_２は、細胞性免疫抑制に寄与する神経膠腫関連可溶性因子である（非特許文献２８；非特許文献２９；非特許文献３０）が、その正確な機構は、不明である。ＰＧＥ_２は、アラキドン酸（ＡＡ）から合成される。ＰＧＥ_２形成における重要な段階は、シクロオキシゲナーゼ（ＣＯＸ）酵素による遊離ＡＡの酸素添加である。ＣＯＸ酵素について同定された２つのアイソフォームＣＯＸ−１およびＣＯＸ−２が存在する（非特許文献３１）。ＣＯＸ−１は、多くの細胞型において構成的に存在するが、ＣＯＸ−２酵素は、いくつかの刺激（例えば、インターロイキン（ＩＬ）−１−βおよびＴＮＦ−αによって誘導可能である（非特許文献３２；非特許文献３３；非特許文献３４；非特許文献３５）。

多くのヒト悪性腫瘍は、ＣＯＸ−２を過剰発現すると報告されており、そのような悪性腫瘍としては、結腸直腸癌（非特許文献３６）、肺癌（非特許文献３７）、膀胱癌（非特許文献３８）、および悪性神経膠腫（非特許文献３９）が挙げられる。さらに、神経膠腫細胞におけるＣＯＸ−２過剰発現は、より臨床的に悪い予後と関連があることもまた示された（非特許文献４０）。
Ｄｅ Ｐｌａｅｎ，Ｅ．ら「Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃ（ｔｕｍ−） ｖａｒｉａｎｔｓ ｏｆ ｍｏｕｓｅ ｔｕｍｏｒ Ｐ８１５：ｃｌｏｎｉｎｇ ｏｆ ｔｈｅ ｇｅｎｅ ｏｆ ｔｕｍ− ａｎｔｉｇｅｎ Ｐ９１Ａ ａｎｄ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｔｕｍ− ｍｕｔａｔｉｏｎ」Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ （１９８８），Ｖｏｌ．８５．ｐｐ．２２７４〜２２７８ Ｖａｎ ｄｅｎ Ｅｙｎｄｅ，Ｂ．ら「Ｔｈｅ ｇｅｎｅ ｃｏｄｉｎｇ ｆｏｒ ａ ｍａｊｏｒ ｔｕｍｏｒ ｒｅｊｅｃｔｉｏｎ ａｎｔｉｇｅｎ ｏｆ ｔｕｍｏｒ Ｐ８１５ ｉｓ ｉｄｅｎｔｉｃａｌ ｔｏ ｔｈｅ ｎｏｒｍａｌ ｇｅｎｅ ｏｆ ｓｙｎｇｅｎｅｉｃ ＤＢＡ／２ ｍｉｃｅ」Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．（１９９１）Ｖｏｌ．１７３，ｐｐ．１３７３〜１３８４ ｖａｎ ｄｅｒ Ｂｒｕｇｇｅｎ，Ｐ．ら「Ａ ｇｅｎｅ ｅｎｃｏｄｉｎｇ ａｎ ａｎｔｉｇｅｎ ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ ｂｙ ｃｙｔｏｌｙｔｉｃ Ｔ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ ｏｎ ａ ｈｕｍａｎ ｍｅｌａｎｏｍａ」Ｓｃｉｅｎｃｅ（１９９１）Ｖｏｌ．２５４，ｐｐ．１６４３〜１６４７ Ｓｌｉｎｇｌｕｆｆ，Ｃ．Ｌ．ら「Ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｍｅｌａｎｏｍａ ｃｅｌｌｓ ｂｙ ＨＬＡ−Ａ２．１−ｒｅｓｔｒｉｃｔｅｄ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ｔ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ ｉｓ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｂｙ ａｔ ｌｅａｓｔ ｓｉｘ ｓｈａｒｅｄ ｐｅｐｔｉｄｅ ｅｐｉｔｏｐｅｓ」Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９９３）Ｖｏｌ．１５０，ｐｐ．２９５５〜２９６３ Ｂｏｏｎ，Ｔ．ら「Ｔｕｍｏｒ ａｎｔｉｇｅｎｓ ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ ｂｙ Ｔ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ」Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９９４）Ｖｏｌ．１２，ｐｐ．３３７〜３６５ Ｆｉｓｋ，Ｂ．ら「Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ａｎ ｉｍｍｕｎｏｄｏｍｉｎａｎｔ ｐｅｐｔｉｄｅ ｏｆ ＨＥＲ２／ｎｅｕ ｐｒｏｔｏｏｎｃｏｇｅｎｅ ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ ｂｙ ｏｖａｒｉａｎ ｔｕｍｏｒ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ｔ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ｌｉｎｅｓ」Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．（１９９５）Ｖｏｌ．１８１，ｐｐ．２１０９〜２１１７ Ｂｅｎｎｅｔｔ，Ｓ．Ｒ．ら「Ｈｅｌｐ ｆｏｒ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ−Ｔ−ｃｅｌｌ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｉｓ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｂｙ ＣＤ４０ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ」Ｎａｔｕｒｅ（１９９８）Ｖｏｌ．３９３，ｐｐ．４７８〜４８０ Ｒｉｄｇｅ，Ｊ．Ｐ．ら「Ａ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｅｄ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌ ｃａｎ ｂｅ ａ ｔｅｍｐｏｒａｌ ｂｒｉｄｇｅ ｂｅｔｗｅｅｎ ａ ＣＤ４+ Ｔ−ｈｅｌｐｅｒ ａｎｄ ａ Ｔ−ｋｉｌｌｅｒ ｃｅｌｌ」Ｎａｔｕｒｅ（１９９８）Ｖｏｌ．３９３，ｐｐ．４７４〜４７８ Ｓｃｈｏｅｎｂｅｒｇｅｒ，Ｓ．Ｐ．ら「Ｔ−ｃｅｌｌ ｈｅｌｐ ｆｏｒ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ｔ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ ｉｓ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｂｙ ＣＤ４０−ＣＤ４０Ｌ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ」Ｎａｔｕｒｅ（１９９８）Ｖｏｌ．３９３，ｐｐ．４８０〜４８３ Ｐａｕｌ，Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ３ｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，１９９３，Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ（Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．） Ｂａｎｃｈｅｒｅａｕ，Ｊ．ら「Ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ ｉｍｍｕｎｉｔｙ」Ｎａｔｕｒｅ（１９９８）Ｖｏｌ．３９２，ｐｐ．２４５〜２５２） Ｋｏｃｈ，Ｆ．ら「Ｈｉｇｈ ｌｅｖｅｌ ＩＬ−１２ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｂｙ ｍｕｒｉｎｅ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ：ｕｐｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｖｉａ ＭＨＣ ｃｌａｓｓ ＩＩ ａｎｄ ＣＤ４０ ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ａｎｄ ｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｂｙ ＩＬ−４ ａｎｄ ＩＬ−１０」Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．（１９９６）Ｖｏｌ．１８４，ｐｐ．７４１〜７４６ Ｍａｃａｔｏｎｉａ，Ｓ．Ｅ．ら「Ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ ｐｒｏｄｕｃｅ ＩＬ−１２ ａｎｄ ｄｉｒｅｃｔ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ Ｔｈ１ ｃｅｌｌｓ ｆｒｏｍ ｎａｉｖｅ ＣＤ４＋ Ｔ ｃｅｌｌｓ」Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９９５）Ｖｏｌ．１５４，ｐｐ．５０７１〜５０７９ Ｒｉｓｓｏａｎ，Ｍ．Ｃ．ら「Ｒｅｃｉｐｒｏｃａｌ ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ Ｔ ｈｅｌｐｅｒ ｃｅｌｌ ａｎｄ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ」Ｓｃｉｅｎｃｅ（１９９９）Ｖｏｌ．２８３，ｐｐ．１１８３〜１１８６ Ｌｕ，Ｇ．ら「Ｉｎｎａｔｅ ｄｉｒｅｃｔ ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ ｅｆｆｅｃｔｏｒ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｉｍｍａｔｕｒｅ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ．ＩＩ．Ｒｏｌｅ ｏｆ ＴＮＦ，ｌｙｍｐｈｏｔｏｘｉｎ−ａｌｐｈａ（１）ｂｅｔａ（２），Ｆａｓ ｌｉｇａｎｄ，ａｎｄ ＴＮＦ−ｒｅｌａｔｅｄ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ−ｉｎｄｕｃｉｎｇ ｌｉｇａｎｄ」Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２００２）Ｖｏｌ．１６８，ｐｐ．１８３１〜１８３９ Ｌｙｎｃｈ，Ｄ．Ｈ．ら「Ｆｌｔ３ ｌｉｇａｎｄ ｉｎｄｕｃｅｓ ｔｕｍｏｒ ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ａｎｔｉｔｕｍｏｒ ｉｍｍｕｎｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｉｎ ｖｉｖｏ」Ｎａｔ．Ｍｅｄ．（１９９７）Ｖｏｌ．３，ｐｐ．６２５〜６３１ Ｋｉｋｕｃｈｉ，Ｔ．ら「Ｉｎｔｒａｔｕｍｏｒａｌ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ａｎｄ ｉｒｒａｄｉａｔｅｄ ｇｌｉｏｍａ ｃｅｌｌｓ ｉｎｄｕｃｅｓ ａｎｔｉ−ｔｕｍｏｒ ｅｆｆｅｃｔｓ ｉｎ ａ ｍｏｕｓｅ ｂｒａｉｎ ｔｕｍｏｒ ｍｏｄｅｌ」Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．（２００２）Ｖｏｌ．５１，ｐｐ．４２４〜４３０ Ｅｈｔｅｓｈａｍ，Ｍ．ら「Ｉｎｔｒａｔｕｍｏｒａｌ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌ ｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎ ｅｌｉｃｉｔｓ ｐｏｔｅｎｔ ｔｕｍｏｒｉｃｉｄａｌ ｉｍｍｕｎｉｔｙ ａｇａｉｎｓｔ ｍａｌｉｇｎａｎｔ ｇｌｉｏｍａ ｉｎ ｒａｔｓ」Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．（２００３）Ｖｏｌ．２６，ｐｐ．１０７〜１１６ Ｓｔｅｉｎｍａｎ，Ｒ．Ｍ．ら「Ｔｈｅ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ｂｙ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ ｔｈａｔ ｈａｖｅ ｃａｐｔｕｒｅｄ ａｐｏｐｔｏｔｉｃ ｃｅｌｌｓ」Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．（２０００）Ｖｏｌ．１９１，ｐｐ．４１１〜４１６ Ｖｅｒｂｏｖｅｔｓｋｉ，Ｉ．ら「Ｏｐｓｏｎｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ａｐｏｐｔｏｔｉｃ ｃｅｌｌｓ ｂｙ ａｕｔｏｌｏｇｏｕｓ ｉＣ３ｂ ｆａｃｉｌｉｔａｔｅｓ ｃｌｅａｒａｎｃｅ ｂｙ ｉｍｍａｔｕｒｅ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ，ｄｏｗｎ−ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ＤＲ ａｎｄ ＣＤ８６，ａｎｄ ｕｐ−ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ＣＣ ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ７」Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．（２００２）Ｖｏｌ．１９６，ｐｐ．１５５３〜１５６１ Ｓａｕｔｅｒ，Ｂ．ら「Ｃｏｎｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｃｅｌｌ ｄｅａｔｈ：ｅｘｐｏｓｕｒｅ ｔｏ ｎｅｃｒｏｔｉｃ ｔｕｍｏｒ ｃｅｌｌｓ，ｂｕｔ ｎｏｔ ｐｒｉｍａｒｙ ｔｉｓｓｕｅ ｃｅｌｌｓ ｏｒ ａｐｏｐｔｏｔｉｃ ｃｅｌｌｓ，ｉｎｄｕｃｅｓ ｔｈｅ ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ」Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．（２０００）Ｖｏｌ．１９１，ｐｐ．４２３〜４３４ Ｃｓｅｒｒ，Ｈ．Ｆ．ら「Ｃｅｒｖｉｃａｌ ｌｙｍｐｈａｔｉｃｓ，ｔｈｅ ｂｌｏｏｄ−ｂｒａｉｎ ｂａｒｒｉｅｒ ａｎｄ ｔｈｅ ｉｍｍｕｎｏｒｅａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ ｂｒａｉｎ：ａ ｎｅｗ ｖｉｅｗ」Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ（１９９２）Ｖｏｌ．１３，ｐｐ．５０７〜５１２ Ｙａｎａｇｉｈａｒａ，Ｓ．ら「ＥＢＩ１／ＣＣＲ７ ｉｓ ａ ｎｅｗ ｍｅｍｂｅｒ ｏｆ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌ ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｔｈａｔ ｉｓ ｕｐ−ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｕｐｏｎ ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ」Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９９８）Ｖｏｌ．１６１，ｐｐ．３０９６〜３１０２ Ａｌｂｅｒｔ，Ｍ．Ｌ．ら「Ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌ ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ ｉｓ ｒｅｑｕｉｒｅｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｃｒｏｓｓ−ｔｏｌｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ＣＤ８＋ Ｔ ｃｅｌｌｓ」Ｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２００１）Ｖｏｌ．２，ｐｐ．１０１０〜１０１７ Ｋａｌｉｎｓｋｉ，Ｐ．ら「Ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎ Ｅ２ ｉｎｄｕｃｅｓ ｔｈｅ ｆｉｎａｌ ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ ｏｆ ＩＬ−１２−ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ ＣＤ１ａ＋ＣＤ８３＋ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ：ｔｈｅ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ＩＬ−１２ ａｒｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｄｕｒｉｎｇ ｔｈｅ ｆｉｎａｌ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌ ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ａｒｅ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｔｏ ｆｕｒｔｈｅｒ ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ」Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９９８）Ｖｏｌ．１６１，ｐｐ．２８０４〜２８０９ Ｋｉｅｒｔｓｃｈｅｒ，Ｓ．Ｍ．ら「Ｔｕｍｏｒｓ ｐｒｏｍｏｔｅ ａｌｔｅｒｅｄ ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｅａｒｌｙ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｏｆ ｍｏｎｏｃｙｔｅ−ｄｅｒｉｖｅｄ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ」Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２０００）Ｖｏｌ．１６４，ｐｐ．１２６９〜１２７６ Ｐｉｒｔｓｋｈａｌａｉｓｈｖｉｌｉ，Ｇ．ら「Ｃｙｔｏｋｉｎｅ−ｍｅｄｉａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ ｆｒｏｍ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃａｎｃｅｒ−ｉｎｄｕｃｅｄ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｉｓ ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｂｙ ｔｈｅ Ｂｃｌ−２ ｆａｍｉｌｙ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎｓ」Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ（２０００）Ｖｏｌ．８３，ｐｐ．５０６〜５１３ Ｋｕｐｐｎｅｒ，Ｍ．Ｃ．ら「Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏｆ ＰＧ２− ａｎｄ ｃＡＭＰ−ｍｏｄｕｌａｔｉｎｇ ａｇｅｎｔｓ ｏｎ ｈｕｍａｎ ｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａ ｃｅｌｌ ｋｉｌｌｉｎｇ ｂｙ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−２−ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ」Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．（１９９０）Ｖｏｌ．７２，ｐｐ．６１９〜６２５ Ｓａｗａｍｕｒａ，Ｙ．ら「Ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎ Ｅ２ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｂｙ ｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｉｔｓ ｅｆｆｅｃｔ ｏｎ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−２ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｏｎｃｏｌｙｔｉｃ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ」Ｊ．Ｎｅｕｒｏｏｎｃｏｌ．（２０００）Ｖｏｌ．９．ｐｐ．１２５〜１３０ Ｋｏｋｏｇｌｕ，Ｅ．ら「Ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎ Ｅ２ ｌｅｖｅｌｓ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｂｒａｉｎ ｔｕｍｏｒ ｔｉｓｓｕｅｓ ａｎｄ ａｒａｃｈｉｄｏｎｉｃ ａｃｉｄ ｌｅｖｅｌｓ ｉｎ ｔｈｅ ｐｌａｓｍａ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｂｒａｉｎ ｔｕｍｏｒｓ」Ｃａｎｃｅｒ Ｌｅｔｔ．（１９９８）Ｖｏｌ．１３２，ｐｐ．１７〜２１ Ｌｅｓｌｉｅ，Ｃ．Ｃ．「Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ａｎｄ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｙｔｏｓｏｌｉｃ ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅ Ａ２」Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（１９９７）Ｖｏｌ．２７２，ｐｐ．１６７０９〜１６７１２ Ｓｍｉｔｈ，Ｗ．Ｌ．ら「Ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎ ｅｎｄｏｐｅｒｏｘｉｄｅ Ｈ ｓｙｎｔｈａｓｅｓ（ｃｙｃｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅｓ）−１ ａｎｄ −２」Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（１９９６）Ｖｏｌ．２７１，ｐｐ．３３１５７〜３３１６０ ＤｕＢｏｉｓ，Ｒ．Ｎ．ら「Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｅｉｃｏｓａｎｏｉｄ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｍｉｔｏｇｅｎｅｓｉｓ ｉｎ ｒａｔ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ ｂｙ ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ−ａｌｐｈａ ａｎｄ ｐｈｏｒｂｏｌ ｅｓｔｅｒ」Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．（１９９４）Ｖｏｌ．９３，ｐｐ．４９３〜４９８ Ｆｅｎｇ，Ｌ．ら「Ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ ｏｆ ｒｅａｃｔｉｖｅ ｏｘｙｇｅｎ ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅｓ ｉｎ ｃｙｃｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ−２ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１，ｔｕｍｏｒ ｎｅｃｒｏｓｉｓ ｆａｃｔｏｒ−ａｌｐｈａ，ａｎｄ ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ」Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ，（１９９５）Ｖｏｌ．９５，ｐｐ．１６６９〜１６７５ Ｔａｍｕｒａ，Ｍ．ら「Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１ ｂｅｔａ ｅｌｅｖａｔｅｓ ｃｙｃｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ−２ ｐｒｏｔｅｉｎ ｌｅｖｅｌ ａｎｄ ｅｎｚｙｍｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｖｉａ ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ ｉｔｓ ｍＲＮＡ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｅｎｄｏｍｅｔｒｉａｌ ｓｔｒｏｍａｌ ｃｅｌｌｓ：ａｎ ｅｆｆｅｃｔ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｂｙ ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｌｙ ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｋｉｎａｓｅｓ １ ａｎｄ ２」Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．（２００２）Ｖｏｌ．８７，ｐｐ．３２６３〜３２７３ Ｅｂｅｒｈａｒｔ，Ｃ．Ｅ．ら「Ｕｐ−ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｙｃｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ ２ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ａｄｅｎｏｍａｓ ａｎｄ ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａｓ」Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ（１９９４）Ｖｏｌ．１０７，ｐｐ．１１８３〜１１８８ Ｗｏｌｆｆ，Ｈ．ら「Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｃｙｃｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ−２ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｌｕｎｇ ｃａｒｃｉｎｏｍａ」Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．（１９９８）Ｖｏｌ．５８，ｐｐ．４９９７〜５００１ Ｍｏｈａｍｍｅｄ，Ｓ．Ｉ．ら「Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｃｙｃｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ−２（ＣＯＸ−２）ｉｎ ｈｕｍａｎ ｉｎｖａｓｉｖｅ ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎａｌ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ（ＴＣＣ）ｏｆ ｔｈｅ ｕｒｉｎａｒｙ ｂｌａｄｄｅｒ」Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．（１９９９）Ｖｏｌ．５９，ｐｐ．５６４７〜５６５０ Ｊｏｋｉ，Ｔ．ら「Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｃｙｃｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ ２（ＣＯＸ−２）ｉｎ ｈｕｍａｎ ｇｌｉｏｍａ ａｎｄ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｂｙ ａ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ＣＯＸ−２ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ，ＮＳ−３９８」Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．（２０００）Ｖｏｌ．６０，ｐｐ．４９２６〜４９３１ Ｓｈｏｎｏ，Ｔ．ら「Ｃｙｃｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ−２ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｇｌｉｏｍａｓ：ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ ａｎｄ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｓ」Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．（２００１）Ｖｏｌ．６１，ｐｐ．４３７５〜４３８１

治療処置の進歩（ＤＣ治療を含む）にも関わらず、免疫監視機構を回避する機構を理解する必要性が、当該分野に存在する。進行性癌に対する免疫学的寛容の機構を解明することが、有効な抗癌免疫の誘導のためには必要であり、必須の機構のうちの１つは、癌におけるＣＯＸ−２過剰発現である。

（発明の要旨）
本明細書中に記載されるのは、疾患状態（癌を含む）の処置において使用される治療ＤＣワクチンの効果を増強するための方法である。その方法は、被験体に、ＤＣワクチンおよびＣＯＸ−２阻害化合物を投与する工程を包含する。

本発明の種々の他の実施形態において、疾患状態を処置するための方法が、包含される。そのような疾患状態を処置する方法は、ＤＣワクチンおよびＣＯＸ−２阻害化合物を投与する工程を包含する。

本発明のなお他の実施形態において、ＰＧＥ_２の発現を阻害する方法が、癌の処置のための併用療法の一部として包含される。ＰＧＥ_２の発現を阻害する方法は、ＤＣワクチンとの併用療法において、ＣＯＸ−２阻害化合物を投与する工程を包含する。

（発明の詳細な説明）
（Ａ．定義）
他のように定義されない限り、本明細書中で使用される技術用語および科学用語は、本発明が属する分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。Ｓｉｎｇｌｅｔｏｎら、Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，２ｎｄ ｅｄ．，Ｊ．Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ（Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ １９９４）；Ｍａｒｃｈ，Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ，Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ４ｔｈ ｅｄ．，Ｊ．Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ（Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ，１９９２）は、本出願において使用される用語の多くに対する一般的案内を、当業者に提供する。

当業者は、本明細書中に記載される方法および材料と類似するかまたは等価である、多くの方法および材料を認識し、それは、本発明の実施において使用され得る。実際、本発明は、記載される方法および材料には決して限定されない。本発明の目的のためには、以下の用語が、以下に定義される。

特定の癌および／またはその病理を「軽減する（ａｌｌｅｖｉａｔｉｎｇ）」とは、腫瘍を分解（例えば、腫瘍の構造的完全性または結合組織を分解）して、腫瘍サイズが、処置前の腫瘍サイズと比較して減少するようにすることを包含する。癌の転移を「軽減する」とは、その癌が他の器官へと伝播する速度を減少させることを包含する。

「有益な結果」としては、疾患状態の重篤度を減少または軽減すること、疾患状態が悪化するのを防ぐこと、疾患状態を治癒すること、および患者の生命または生命予測を延長することが挙げられ得るが、これらに限定されない。上記疾患状態は、中枢神経系に関連し得るか、または中枢神経系によって調節され得る。

「癌」および「癌性」とは、調節制御されていない細胞増殖によって代表的には特徴付けられる、哺乳動物における生理状態を指すかまたは記載する。癌の例としては、乳癌、結腸癌、肺癌、前立腺癌、肝細胞癌、胃癌、膵臓癌、子宮頚部癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、尿路の癌、甲状腺癌、腎臓癌、癌腫、黒色腫、頭部および頚部の癌、ならびに脳の癌（神経膠腫、神経膠星状細胞腫、上衣腫（ｅｐｅｎｄｙｍａｌ ｔｕｍｏｒ）、多形性神経膠芽細胞腫、および未分化神経外胚葉性腫瘍が、挙げられるが、これらに限定されない）が挙げられるが、これらに限定されない。

本明細書中で使用される「状態」および「疾患状態」は、任意の形態の癌を包含し得るが、決してその癌には限定されない。

癌を「治癒する（ｃｕｒｉｎｇ）」とは、腫瘍を分解して、処置後に腫瘍が検出され得ないようにすることを包含する。その腫瘍は、例えば、血液供給の欠如から萎縮することによって、または本発明に従って投与される１種以上の成分によって攻撃もしくは分解されることによって、サイズが減少し得るかまたは検出不能になり得る。

「サイトカイン」とは、別の細胞に対して細胞間媒介因子として作用する細胞集団によって放出されるタンパク質についての、一般的用語である。そのようなサイトカインの例は、リンホカイン、モノカイン、および従来のポリペプチドホルモンである。このサイトカインに包含されるのは、成長ホルモン（例えば、ヒト成長ホルモン、Ｎ−メチオニルヒト成長ホルモン、およびウシ成長ホルモン）；副甲状腺ホルモン；サイロキシン；インスリン；プロインスリン；レラキシン；プロレラキシン；糖タンパク質ホルモン（例えば、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）、および黄体化ホルモン（ＬＨ））；肝臓増殖因子；線維芽細胞増殖因子；プロラクチン；胎盤ラクトゲン；腫瘍壊死因子αおよび腫瘍壊死因子β；ミューラー阻害物質；マウスゴナドトロピン関連ペプチド；インヒビン；アクチビン；脈管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）；インテグリン；トロンボポエチン（ＴＰＯ）；神経成長因子（ＮＧＦ）（例えば、ＮＧＦ−β）；血小板増殖因子；トランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦ）（例えば、ＴＧＦ−αおよびＴＧＦ−β）；インスリン様増殖因子Ｉおよびインスリン様増殖因子ＩＩ；エリスロポエチン（ＥＰＯ）；骨誘導因子（ｏｓｔｅｏｉｎｄｕｃｔｉｖｅ ｆａｃｔｏｒ）；インターフェロン（例えば、インターフェロンα、インターフェロンβ、およびインターフェロンγ）；コロニー刺激因子（ＣＳＦ）（例えば、マクロファージ−ＣＳＦ（Ｍ−ＣＳＦ）、顆粒球−マクロファージ−ＣＳＦ（ＧＭ−ＣＳＦ）、および顆粒球−ＣＳＦ（Ｇ−ＣＳＦ））；インターロイキン（ＩＬ）（例えば、ＩＬ−１、ＩＬ−１α、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、およびＩＬ−１３）；腫瘍壊死因子（例えば、ＴＮＦ−αまたはＴＮＦ−β）；ならびに他のポリペプチド因子（ＬＩＦおよびｋｉｔリガンド（ＫＬ）が挙げられる）である。本明細書中で使用される場合、用語サイトカインとは、天然供給源由来タンパク質、または組換え細胞培養物由来タンパク質、ならびにネイティブ配列サイトカインの生物学的に活性な等価物を包含する。

「樹状細胞（ＤＣ）」は、いくつかの方向に樹状細胞体から延びるラメリポディウムを含む特徴的形態を備える、抗原提示細胞（ＡＰＣ）である。いくつかの表現型の基準もまた、典型的である（高レベルのＭＨＣ分子および副刺激分子、ならびに顆粒球特異的マーカーの欠如、ＮＫ細胞特異的マーカーの欠如、Ｂリンパ球特異的マーカーの欠如、およびＴリンパ球特異的マーカーの欠如を含む）が、その樹状細胞の供給源に依存して変化し得る。ＤＣは、抗原特異的一次Ｔリンパ球応答をインビトロおよびインビボで開始することが可能であり、末梢血白血球、脾細胞、Ｂ細胞、および単球と比較して、強力な混合白血球反応（ＭＬＲ）を指向する。一般的には、ＤＣは、貪食作用または飲細胞運動によって抗原を消化し、それらを分解し、その表面にその抗原のフラグメントを提示し、そしてサイトカインを分泌する。

「示す（ｅｘｈｉｂｉｔ）」または「示している」とは、一般的には、外側に向う何かの存在または提示を指す。例えば、この用語は、細胞表面マーカーまたは膜貫通マーカーの存在もしくは提示を指し得る。

本明細書中で使用される「単離された」とは、他の細胞物質も培養培地も実質的に含まない、精製されたＤＣを包含する。

本明細書中で使用される「哺乳動物」とは、哺乳綱の任意のメンバーを指し、そのメンバーとしては、ヒトおよび非ヒト霊長類（例えば、チンパンジーおよび他の類人猿種およびサル種）；家畜（例えば、ウシ、ヒツジ、ブタ、ヤギ、およびウマ）；家畜哺乳動物（例えば、イヌおよびネコ）；実験動物（齧歯類（例えば、マウス、ラット、モルモットなど）を含む）が挙げられるが、これらに限定されない。この用語は、特定の年齢も性別も意味しない。従って、成体対象物および新生対象物、ならびに胎仔（雄または雌に関わらない）は、この用語の範囲内に包含されることが意図される。

癌の「病理」とは、患者の健康を含む全ての現象を包含する。これには、異常な細胞増殖もしくは制御不能な細胞増殖、転移、近隣細胞の正常な機能の妨害、異常なレベルでのサイトカインもしくは他の分泌産物の放出、炎症応答もしくは免疫応答の抑制もしくは悪化、新形成、前悪性腫瘍、悪性腫瘍、周囲もしくは遠位の組織もしくは器官（例えば、リンパ節など）の浸潤が挙げられるが、これらに限定されない。

本明細書中で使用される「治療（性）（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ）」とは、治癒または回避して健康にする傾向がある何かを指す。例えば、特定の疾患または医学的状態を処置するために使用される治療剤または方法および化合物による、疾患または状態の処置に関連する何かである。

本明細書中で使用される「処置」および「処置する」とは、治療処置および予防（ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ）手段もしくは予防（ｐｒｅｖｅｎｔａｔｉｖｅ）手段の両方を指し、その対象は、その処置が最終的には不首尾であった場合でさえ、標的として病理状態または障害を予防するかまたは遅延（軽減）することである。処置が必要な対象としては、その障害を既に有する対象、ならびにその障害を有する傾向がある対象、またはその障害を予防されるべき対象が、挙げられる。腫瘍（例えば、癌）の処置において、治療因子は、腫瘍細胞の病理を直接減少し得るか、または他の治療因子（例えば、放射線および／または化学療法）による処置に対して腫瘍細胞をより感受性にし得る。

本明細書中で使用される「腫瘍」とは、全ての新形成性の細胞成長および増殖（悪性または良性に関わらない）および全ての前癌性および癌性の細胞および組織を指す。

（Ｂ．詳細な説明）
本発明は、ＣＯＸ−２過剰発現神経膠腫へと浸潤するＤＣにより誘導される、腫瘍特異的ＣＴＬ寛容機構の驚くべき発見に基づく。ヒト神経膠腫細胞株Ｕ−８７ＭＧ、ＬＮ−１８、および初代培養神経膠腫（ＭＧ−３７７）を、ヒトインビトロモデルとしてＤＣとともに共培養して、腫瘍浸潤性ＤＣを研究した。ＤＣは、アポトーシス神経膠腫細胞を効率的に貪食した。ＤＣは、ＴＮＦ−α刺激によって成熟した。しかし、ＣＯＸ−２過剰発現神経膠腫からの余剰のＰＧＥ_２は、ＤＣがＩＬ−１０発現を増強することおよびＩＬ−１２発現を抑制することを引き起こし、これによって、腫瘍浸潤性ＤＣによって、Ｔｈ２に対する未刺激ＣＤ４＋Ｔｈ細胞発達の偏向が生じた。ＣＯＸ−２インヒビターは、ＰＧＥ_２を抑制し、腫瘍浸潤性ＤＣは、Ｔｈ細胞をＴｈサブセット１（Ｔｈ１）に向って極化させた。このことは、ＰＧＥ_２が、神経膠腫によって生じるＣＴＬ寛容において主要な役割を果たすことを示す。

腫瘍浸潤性ＤＣのＴＮＦ−α刺激は、ＤＣがアポトーシス神経膠腫細胞を貪食した後に、ＣＤ８３＋／ＣＣＲ７＋成熟ＤＣを誘導した。このことは、ＤＣが、リンパ節に移動してＴＡＡをＴ細胞に対して提示し得るという考えを支持する。しかし、ＴＮＦ−αおよびＴＲＡＩＬ（これらは、それぞれ、ＤＣ成熟および腫瘍細胞アポトーシスを誘導する。両方とも、ＤＣによって準備される）は、神経膠腫細胞におけるＣＯＸ−２発現をアップレギュレートした。従って、ＴＮＦ−αおよびＴＲＡＩＬは、ＣＯＸ−２過剰発現神経膠腫からのＰＧＥ_２過剰生成を必ず誘導した。

ＴＮＦ−α／ＴＲＡＩＬで処理した神経膠腫中へのＤＣの浸潤によって、ＤＣは、ＩＬ−１０を増強しＩＬ−１２を抑制した。これによって、未刺激ＣＤ４＋Ｔｈ細胞の発達を、同種異系モデルおよび自系モデルの両方においてＴｈ２に向かって効果的に偏向させるＤＣが生じた。さらに、この傾向は、Ｕ−８７ＭＧ神経膠腫細胞株において最も強かった。このＵ−８７ＭＧ神経膠腫細胞株は、最高量のＰＧＥ_２を生成する。自系モデルは、神経膠腫患者が、自系腫瘍と共培養されたＤＣによって誘導され得るのと類似する、その腫瘍に対するＴｈ２応答をすでに有したことを示した。対照的に、ＣＯＸ−２により阻害された神経膠腫中に浸潤するＤＣは、そのＴｈ細胞をＴｈ１に対して極化させた。さらに、ＣＯＸ−２過剰発現神経膠腫細胞を組換えＩＬ−１２を用いて抑制することのみによって、強力な治療効果が、ＣＯＸ−２インヒビターの非存在下でＤＣベースの神経膠腫免疫療法に関して気付かれた（Ａｋａｓａｋｉ，Ｙ．ら「Ａｎｔｉｔｕｍｏｒ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎｓ Ｗｉｔｈ Ｆｕｓｉｏｎｓ ｏｆ Ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ａｎｄ Ｇｌｉｏｍａ Ｃｅｌｌｓ ｉｎ ａ Ｍｏｕｓｅ Ｂｒａｉｎ Ｔｕｍｏｒ Ｍｏｄｅｌ」Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．，Ｖｏｌ．２４，ｐｐ．１０６〜１１３（２００１））。腫瘍が、その腫瘍に特異的なＴｈ細胞をＴｈ２極化に対して偏らせる能力は、ＣＴＬベースの殺腫瘍免疫応答の効力を制限する際に重要な役割を果たし、ＩＬ−１２は、腫瘍を保有する宿主のＤＣ浸潤性免疫において、Ｔｈ１に向かうＴｈ極化のために重要な役割を果たす。

神経膠腫におけるＰＧＥ_２と、腫瘍浸潤性ＤＣにより媒介されるＴｈ細胞極化との間の関係を、ｐＴｒａｃｅｒ−ＣＯＸ−２安定トランスフェクト体（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）から入手可能）、ＬＮ−１８−ＣＯＸ−２およびｐＴｒａｃｅｒ−ＣＭＶ２安定トランスフェクト体、およびＬＮ−１８−ＥＰ（ＬＮ−１８−ＥＰは、ＬＮ−１８−ＣＯＸ−２と比較して、ＰＧＥ_２以外の同じ免疫抑制因子を生成すると予測される）を使用して、確認した。

ＬＮ−１８−ＣＯＸ−２は、ＰＧＥ_２を高度に生成し、ＤＣがＴｈ細胞発達をＴｈ２に対して偏向させるように完全に影響を与えた。ＬＮ−１８−ＥＰの培養上清中に可溶性ＰＧＥ_２を添加すると、Ｔｈ２極化に対して、ＬＮ−１８−ＣＯＸ−２と同じ効果を有した。さらに、ＣＯＸ−２インヒビターは、ＬＮ−１８−ＣＯＸ−２が生成したＰＧＥ_２を抑制し、それによって、Ｔｈ細胞をＴｈ１に向かって極化させる腫瘍浸潤性ＤＣをもたらした。このことは、さらに、神経膠腫産物中のＰＧＥ_２が、神経膠腫浸潤性ＤＣによって媒介される、神経膠腫により生じる腫瘍特異的ＣＴＬ寛容において主要な役割を果たすことを示した。

哺乳動物における癌または癌性腫瘍の処置が、ＤＣワクチンおよびＣＯＸ−２インヒビターを使用して方法および組み合わせによって提供される。この方法は、哺乳動物を、ＣＯＸ−２インヒビターとＤＣワクチンとの組み合わせの治療有効量で処置する工程を包含する。特定のいかなる理論によっても拘束されることは望まないが、ＣＯＸ−２の特定のインヒビターは、ＤＣに対する腫瘍応答を増加し得、それによってその効力を改善すると考えられる。特に、本発明の方法は、癌の処置には限定されない。代わりに、本発明の方法によって除去される生体分子経路は、他の疾患状態の処置において適用が見出され得ることが、容易に理解される。従って、ＤＣワクチンおよびＣＯＸ−２インヒビターでの処置が患者にとって有益な結果を引き起こし得る任意の疾患状態が、本発明の範囲に含まれる。

本発明の一実施形態において、哺乳動物被験体において疾患状態を処置するための方法は、ＤＣベースの癌ワクチンを、治療有効量のＣＯＸ−２インヒビターまたはその薬学的に受容可能な塩もしくは誘導体と組み合わせて用いる少なくとも１回の治療ワクチン接種によって、その被験体を処置する工程を包含する。当業者によって容易に認識されるように、ＤＣベースの癌ワクチンおよびＣＯＸ−２インヒビター（またはその塩もしくは誘導体）は、同時に投与され得る。あるいは、ＣＯＸ−２インヒビターは、ＤＣベースのワクチンによる少なくとも１回の治療ワクチン接種の前および／または治療ワクチンと同時および／または治療ワクチン接種後に、投与され得る。本発明の一実施形態において、哺乳動物被験体に、ＤＣベースの癌ワクチンを用いる少なくとも１回の治療ワクチン接種の投与の前および／または治療ワクチン接種と同時および／または治療ワクチン接種の後に、ＣＯＸ−２インヒビターの規則的な投与レジメン（例えば、毎日、隔日、毎週など）が投与される。この二重処置は、疾患状態（特に、癌、より具体的には、肺癌、膀胱癌、結腸直腸癌、または多形性神経膠芽細胞腫および他の形態の脳の癌）の宿主を軽減し、可能ならば治癒するために、哺乳動物に投与され得る。

本発明の種々の実施形態において、ＤＣワクチンおよびＣＯＸ−２インヒビターが、組成物中に互いに含まれ得る。あるいは、ＤＣワクチンおよびＣＯＸ−２インヒビターは、単一薬剤としておよび／またはさらなるＣＯＸ−２インヒビターもしくは当業者によって容易に認識されるような治療剤とともに使用するために、処方され得る。

本発明のＤＣワクチンおよびＣＯＸ−２インヒビターの両方をともに含む組成物を投与することを望み得る種々の理由、またはこれらの成分を別個に投与することを望み得る種々の理由が、存在する。使用する特定のＤＣワクチンおよびＣＯＸ−２インヒビターに依存して、組み合わせまたは別個の投与のレジメンは、臨床効力、可溶性、吸収、安定性、毒性、および／または患者の受容性が考慮される限り、優れた特徴を有し得る。本発明のＤＣワクチンおよびＣＯＸ−２インヒビターの多数の組み合わせのいずれかの併用組成物を処方し得る方法、または別個の投与のレジメンを確立し得る方法は、当業者にとって容易に明らかである。いずれかを行うための多くのストラテジーが、存在しており、そのうちのいずれか１つは、薬物速度論および他の要因に基づいて、慣用的な実験によって実施され得る。

本発明の種々の実施形態において使用される癌ワクチンは、任意のＤＣベース癌ワクチンから選択され得、そして慣用的方法によって投与され得る。ＤＣは、従来の方法によってエキソビボで「刺激（ｐｒｉｍｅ）」」される自系腫瘍抗原により提示されるＤＣであり得る。例えば、ＤＣは、培養された腫瘍細胞または自系腫瘍溶解物由来のＨＬＡ溶出エピトープを、負荷され得る。あるいは、ＤＣは、２００２年９月２０日に出願された米国特許出願番号１０／２５１，１４８（その開示は、その全体が参考として本明細書中に援用される）に記載されるように、「未刺激（ｕｎｐｒｉｍｅｄ）」状態で送達され得、基本的にインビボで刺激され得る。「未刺激」ＤＣの使用は、腫瘍が外科的に手術不能である場合、手術が望ましくない場合、またはその腫瘍のどの部分もその腫瘍に対してエキソビボでＤＣを刺激するために回収され得ない場合に、特に有利であり得る。

簡単に述べると、「未刺激」ＤＣは、腫瘍組織をタンパク質源として取得することおよびその後それを培養することに依存しない、ＤＣを包含する。従来の方法において、ＤＣが、エキソビボで刺激される。この様式での刺激は、代表的には、ＤＣを、そのＤＣが後で使用される腫瘍細胞とともに培養することを含み、それによってその腫瘍タンパク質に対するＤＣの接近を提供し、そしてそのＤＣに、患者への投与の際にＴ細胞に対して消化された抗原の提示のための調製において結合した抗原をプロセシングさせる。しかし、本発明の種々の実施形態において、ＤＣは、最初にエキソビボで刺激されることなく、腫瘍床または腫瘍領域中へと直接送達され得る。ＤＣは、インビボでのみ腫瘍抗原をプロセシングする。

本発明の種々の実施形態に従う使用に適したＤＣは、そのような細胞が見出されるあらゆる組織から単離もしくは取得され得るか、または他の方法で培養されて提供され得る。例えば、ＤＣは、結合組織（例えば、心臓、腎臓、腸、および肺）に由来し得る。ＤＣは、ランゲルハンス島（例えば、皮膚および粘膜）に由来し得る。ＤＣは、指状嵌入（ｉｎｔｅｒｄｉｇｉｔａｔｉｎｇ）樹状組織（例えば、胸腺髄質および二次リンパ組織）に由来し得る。ＤＣは、リンパおよび血液のベール細胞に由来し得る。特に、抗原提示ＤＣは、本発明に従って使用され得る。そのようなＤＣは、例えば、哺乳動物の骨髄もしくはヒト末梢血単核球（ＰＢＭＣ）において、哺乳動物の脾臓において、または哺乳動物の皮膚において、見出され得る（すなわち、ランゲルハンス島（これは、ＤＣの量と同様の特定の量を有する）は、皮膚において見出され得、本発明とともにさらに使用され得、そして本明細書中で使用されるＤＣの範囲内に包含される）。例えば、本発明の一実施形態において、骨髄が、哺乳動物から収集され得、そしてＤＣの増殖を促進する培地において培養され得る。ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−４、および／または他のサイトカイン、増殖因子、および上清が、この培地中に含まれ得る。適切な時間の後、一団のＤＣが、収集され得、そして／または継体された後に癌ワクチンにおける使用のために収集され得る。

他の種々の方法が、当業者によって認識されるように、本発明のＤＣを単離するために使用され得る。例えば、ＤＣは、ＤＣが存在するすべての組織において少数で存在する。これによって、ＤＣの単離および濃縮が必要となる。反復性密度勾配分離、蛍光活性化細胞分離技術、陽性選択、陰性選択、またはこれらの組み合わせを含む多数の手順が、単離されたＤＣの濃縮集団を得るために慣用的に使用される。ＤＣを単離するためのそのような方法に関する指針は、Ｏ’Ｄｏｈｅｒｔｙ，Ｕ．ら「Ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ ｆｒｅｓｈｌｙ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｈｕｍａｎ ｂｌｏｏｄ ｅｘｐｒｅｓｓ ＣＤ４ ａｎｄ ｍａｔｕｒｅ ｉｎｔｏ ｔｙｐｉｃａｌ ｉｍｍｕｎｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ ａｆｔｅｒ ｃｕｌｔｕｒｅ ｉｎ ｍｏｎｏｃｙｔｅ−ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｅｄ ｍｅｄｉｕｍ」Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．、Ｖｏｌ．１７８．ｐｐ．１０６７〜１０７８（１９９３）；Ｙｏｕｎｇ，Ｊ．Ｗ．およびＲ．Ｍ．Ｓｔｅｉｎｍａｎ「Ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ ｓｔｉｍｕｌａｔｅ ｐｒｉｍａｒｙ ｈｕｍａｎ ｃｙｔｏｌｙｔｉｃ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ａｂｓｅｎｃｅ ｏｆ ＣＤ４^＋ ｈｅｌｐｅｒ Ｔ ｃｅｌｌｓ」Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．Ｖｏｌ．１７１，ｐｐ．１３１５〜１３３２（１９９０）；Ｆｒｅｕｄｅｎｔｈａｌ，Ｐ．Ｓ．およびＲ．Ｍ．Ｓｔｅｉｎｍａｎ「Ｔｈｅ Ｄｉｓｔｉｎｃｔ Ｓｕｒｆａｃｅ ｏｆ Ｈｕｍａｎ Ｂｌｏｏｄ Ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ Ｃｅｌｌｓ，ａｓ Ｏｂｓｅｒｖｅｄ Ａｆｔｅｒ ａｎ Ｉｍｐｒｏｖｅｄ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ Ｍｅｔｈｏｄ」Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，Ｖｏｌ．５７，ｐｐ．７６９８〜７７０２（１９９０）；Ｍａｃａｔｏｎｉａ，Ｓ．Ｅ．ら「Ｓｕｐｐｒｅｓｓｓｉｏｎ ｏｆ ｉｍｍｕｎｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｂｙ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ ｉｎｆｅｃｔｅｄ ｗｉｔｈ ＨＩＶ」Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｖｏｌ．６７，ｐｐ．２８５〜２８９（１９８９）；Ｍａｒｋｏｗｉｃｚ，Ｓ．およびＥ．Ｇ．Ｅｎｇｌｅｍａｎ「Ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ−ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ ｃｏｌｏｎｙ−ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ ｆａｃｔｏｒ ｐｒｏｍｏｔｅｓ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ａｎｄ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｖｉｔｒｏ」Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，ｖｏｌ．８５，ｐｐ．９５５〜９６１（１９９０）；Ｍｅｈｔａ−Ｄａｍａｎｉら「Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ａｎｔｉｇｅｎ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ ＣＤ８＋ＣＴＬ ｆｒｏｍ ｎａｉｖｅ ｐｒｅｃｕｒｓｏｒｓ」Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｖｏｌ．１５３，ｐｐ．９９６〜１００３（１９９４）；ならびにＴｈｏｍａｓ，Ｒ．ら「Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ ａｃｃｅｓｓｏｒｙ ｃｅｌｌ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｍｏｎｏｃｙｔｅｓ」Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，Ｖｏｌ．１５１，ｐｐ．６８４０〜６８５２（１９９３）において見出され得る。ヒト末梢血からＤＣを単離するための一方法が、米国特許第５，６４３，７８６号に記載されている。上記の参考文献の各々は、完全に示されたかのように、その全体が本明細書中に援用される。

ＤＣベースの癌ワクチンが、適切な任意の送達経路によってレシピエントに送達され得る。この経路としては、注射、注入、接種、直接的外科送達、またはそれらの任意の組み合わせが挙げられ得るが、これらに限定されない。本発明の一実施形態において、ＤＣベースの癌ワクチンが、定位手術（神経外科の当業者にとって公知である標準的接種手順）を介して、直接接種によって哺乳動物に投与され得る。さらに、このワクチンは、腫瘍自体に投与され得るか、腫瘍に近接した生理領域に投与され得るか、または哺乳動物内の標的腫瘍に対して遠い位置に投与され得る。

本発明のＤＣベースの癌ワクチンは、薬学的キャリア中にある「刺激された（ｐｒｉｍｅｄ）」ＤＣまたは「未刺激（ｕｎｐｒｉｍｅｄ）」ＤＣを含み得る。従来の任意の薬学的キャリアが、本発明に従って使用され得る。適切なキャリアが、慣用的技術によって当業者によって選択され得る。本発明の一実施形態において、その薬学的キャリアは、生理食塩水であるが、他のキャリアが、その癌ワクチンの望ましい特徴に依存して利用され得る。例えば、そのワクチンのための種々の送達技術、患者間での生理的差異（例えば、性別、重量、年齢など）、または種々の腫瘍型（例えば、脳、乳房、肺など）をとりわけ考慮するために、差次的に癌ワクチンを処方し得る。本発明に従って哺乳動物に投与されるＤＣベースの癌ワクチンは、種々のさらなる物質および化合物（例えば、適切な任意のキャリア、ビヒクル、添加剤、賦形剤、薬学的アジュバント、または他の適切な生成物）のいずれかと組み合わせて送達され得る。

本発明の方法を行うための癌ワクチンとして患者に投与するために適切なＤＣの量およびそのような投与の最も簡便な経路は、種々の要因に基づき得、そのワクチン自体の処方も、同様に種々の要因に基づき得る。これらの要因のうちのいくつかとしては、患者の生理的特徴（例えば、年齢、体重、性別など）、腫瘍の生理的特徴（例えば、位置、大きさ、増殖速度、接近しやすさなど）、ならびに他の治療方法（例えば、化学療法、ビーム放射線療法）が全体的処置レジメンと組み合わせて実施される程度が挙げられ得るが、これらに限定されない。疾患状態を処置するために本発明の方法を実施する際に考慮すべき種々の要因に関わらず、哺乳動物には、本発明の一実施形態においては、単回投与において、約０．０５ｍＬ〜約０．３０ｍＬの生理食塩水中で約１０^５個〜約１０^７個のＤＣが投与され得る。さらなる投与が、上記の要因および他の要因（例えば、腫瘍病理の重篤性）に依存して行われ得る。本発明の一実施形態において、約１０^６個のＤＣの約１回〜約５回の投与が、２週間間隔で実施される。

本発明の種々の実施形態と組み合わせて使用されるＣＯＸ−２インヒビターは、抗癌特性を示し得る。ＣＯＸ−２インヒビターとしては、ＮＳ−３９８（Ｃａｙｍａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ（Ａｎｎ Ａｒｂｏｒ，ＭＩ）から入手可能）、セレコキシブ（商標名「ＣＥＬＥＢＲＥＸ」にてＰｆｉｚｅｒ（Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ）から入手可能）、ロフェコキシブ（商標名「ＶＩＯＸＸ」にてＭｅｒｃｋ（Ｗｈｉｔｅｈｏｕｓｅ Ｓｔａｔｉｏｎ，ＮＪ）から入手可能）、バルデコキシブ（商標名「ＢＥＸＴＲＡ」にてＰｆｉｚｅｒから入手可能）、メロキシカム（商標名「ＭＯＢＩＣＯＸ」にてＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ（Ｂｕｒｌｉｎｇｔｏｎ，Ｏｎｔａｒｉｏ）から入手可能）、ならびに薬学的等価物、誘導体および塩、ならびに当業者によって容易に認識される他の機能的に関連する化合物が挙げられ得るが、これらに決して限定されない。さらなるＣＯＸ−２インヒビターに関する指針は、文献に提供されており、一般的に、当業者が利用可能である。例えば、米国特許第６，６４９，６４５号（癌の処置のためにＣＯＸ−２インヒビターを伴う放射線の使用を記載する）（これは、本明細書中に参考として援用される）を参照のこと。あるいは、非選択的ＣＯＸインヒビターが、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）の形態で、本発明の種々の実施形態において使用され得る。本発明のＮＳＡＩＤとしては、Ｒ−エトドラク、アスピリン、ジクロフェナク、ジフルニサル、エトドラク、フェノプロフェン、フロクタフェニン、フルルビプロフェン、イブプロフェン、インドメタシン、ケトプロフェン、メクロフェナメート、メファナミン酸、メロキシカム、ナブメトン、ナプロキセン、オキサプロジン、ピロキシカム、スンリンダク（ｓｕｎｌｉｎｄａｃ）、テノキシカム、チアプロフェン酸、トルメチン、ならびに薬学的等価物、誘導体および塩、ならびに他の機能的に関連する化合物が挙げられ得るが、決してこれらに限定されず、他の多数のＮＳＡＩＤが、当業者によって容易に認識されるように、使用され得る。例えば、特定のＮＳＡＩＤに関する指針が、文献において提供され、一般的に当業者が利用可能である。例えば、米国特許第６，７６１，９１３号（炎症の処置のためのセロリ種子抽出物およびさらなるＮＳＡＩＤの使用を記載する）および米国特許第６，７５９，０５６号（多数のＮＳＡＩＤを組み込んだ経皮送達系を記載する）（これらの両方が、参考として援用される）を参照のこと。

本発明の種々の実施形態において、ＣＯＸ−２インヒビターは、薬学的組成物において処方され得る。そのような組成物は、従来の非毒性の薬学的に受容可能なキャリア、アジュバント、およびビヒクルを望ましくは含む投与単位処方物の状態で、経口投与、非経口投与、吸入スプレーにより、直腸に、または局所に、投与され得る。他の投与経路は、充分に当業者のレベルの範囲内にあり、そのような経路は、本発明の範囲内にあると考えられる。さらに、局所投与はまた、経皮投与（例えば、経皮パッチまたはイオン浸透デバイス）の使用を含み得る。用語「非経口」とは、本明細書中で使用される場合、皮下注射、静脈内注射技術もしくは静脈内注入技術、筋肉内注射技術もしくは筋肉内注入技術、胸骨内注射技術もしくは胸骨内注入技術が挙げられる。当業者は、さらなる多くの処方物または上記の処方物の等価物を認識し、これらは、本発明の実施において使用され得る。

注射可能調製物（例えば、滅菌注射可能な、水性または油性の懸濁物）が、適切な分散剤もしくは湿潤剤と懸濁剤とを使用して、処方され得る。受容可能な非毒性の希釈剤もしくは溶媒が、非経口投与のための溶液もしくは懸濁物として（例えば、１，３−ブタンジオール中の溶液として）滅菌注射可能調製物において使用され得る。例示的な希釈剤および溶媒としては、水、リンガー溶液、および等張性塩化ナトリウム溶液が挙げられるが、これらに決して限定されない。不揮発性油もまた、滅菌溶媒または滅菌懸濁媒体として使用される（例えば、合成モノグリセリドまたは合成ジグリセリドである）。さらに、脂肪酸（例えば、オレイン酸）、ならびにジメチルアセトアミド、界面活性剤（イオン性界面活性剤および非イオン性界面活性剤を含む）、およびポリエチレングリコールが、注射可能物質の調製において使用され得る。さらに、上記に列挙された要素のいずれかの混合物が、薬学的組成物の調製において使用され得る。

経口投与は、カプセル、錠剤、丸剤、散剤、および顆粒を含み得る。さらに、経口投与のための液体投与形態は、当該分野で一般的に使用される不活性希釈剤（例えば、水）を含む、薬学的に受容可能なエマルジョン、溶液、懸濁物、シロップ剤、およびエリキシル剤を含み得る。１種以上のアジュバント（例えば、湿潤剤、乳化剤、および懸濁剤、および甘味剤、矯味矯臭剤、および香料）が、示された投与経路のために適切である。例えば、経口投与される場合、ＣＯＸ２−インヒビターは、ラクトース、スクロース、デンプン粉末、アルカン酸のセルロースエステル、セルロースアルキルエステル、滑石、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、酸化マグネシウム、リン酸のナトリウム塩およびカルシウム塩、硫酸のナトリウム塩およびカルシウム塩、ゼラチン、アカシアゴム、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、および／またはポリビニルアルコールと混合され得、その後、簡便な投与のために錠剤化またはカプセル化され得る。そのようなカプセルまたは錠剤は、ヒドロキシプロピルメチルセルロース中の活性化合物の分散物の状態で提供され得る、徐放性処方物を含み得る。カプセル剤、錠剤、および丸剤の場合、投与形態はまた、緩衝剤（例えば、クエン酸ナトリウム、炭酸マグネシウムもしくは炭酸カルシウム、炭酸水素マグネシウムもしくは炭酸水素カルシウム）を含み得る。錠剤および丸剤は、腸溶性コーティング剤を用いてさらに調製され得る。

非経口投与のための処方物は、水性もしくは非水性の、等張性の滅菌注射用の、溶液もしくは懸濁物の形態であり得る。これらの溶液および懸濁物は、経口投与のための処方物における使用のために言及されたキャリアまたは希釈剤のうちの１つ以上を有する滅菌粉末もしくは滅菌顆粒から調製され得る。企図されるＣＯＸ−２インヒビター化合物は、水、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、エタノール、トウモロコシ油、綿実油、落花生油、ゴマ油、ベンジルアルコール、塩化ナトリウム、および／または種々の緩衝剤中に溶解され得る。他のアジュバントおよび投与様式は、周知であり、そして当業者によって認識される。

本発明の実施形態のいずれかにおいて、ＤＣワクチンおよびＣＯＸ−２インヒビターは、他の適切な治療処置と組合わせて投与され得る。例えば、本発明のＤＣワクチンおよびＣＯＸ−２インヒビターは、確立された治療（例えば、化学療法、放射線処置、または疾患状態を処置するための当該分野で公知である他の任意の治療）に加えて、投与され得る。併用療法における使用のために適切な因子の選択は、従来の薬学的原理に従って、当業者によってなされ得る。治療因子の組み合わせは、上記の種々の障害の処置または予防を行うために相乗的に作用し得る。このアプローチを使用して、各因子のより低投与量で治療効力を達成し、それによって有害な副作用の可能性を減少することが可能であり得る。

治療上有効な用量の決定は、充分に当業者の能力の範囲内にある。「治療上有効な」用量とは、その治療上有効な用量が存在しない場合に生じる場合と比較して疾患状態の影響を増加または減少する、活性成分の量を指す。治療効力および毒性（例えば、ＥＤ_５０（集団の５０％において治療上有効な用量）およびＬＤ_５０（集団の５０％に対して致死的な用量）は、細胞培養または実験動物において標準的な薬学的手順によって決定され得る。毒性効果対治療効果の用量比は、治療指標であり、これは、比ＬＤ_５０／ＥＤ_５０として表され得る。さらに、細胞培養アッセイおよび動物研究から得られたデータは、ヒト用途のための一定範囲の投与量を処方する際に使用され、この投与量は、過度の実験を伴わずに、当業者によって容易に推定され得る。そのような組成物中に含まれる投与量は、毒性をほとんど伴わないかまたは全く伴わずに、一定範囲の循環濃度（ＥＤ_５０を含む）内に存在するように選択され得る。この投与量は、使用される投与形態、患者の感受性、および投与経路に依存して、この範囲内で変動する。

本発明のＣＯＸ−２インヒビターの適切な投与量は、種々の要因に依存し得る。そのような要因としては、患者の身体的特徴（例えば、年齢、体重、性別）、ＣＯＸ−２インヒビターが一組成物中で投与されるかまたは併用療法の一部として投与されるか、処置される疾患状態の型、上記癌または他の疾患状態の進行（すなわち、病理状態）、ならびに当業者によって認識され得る他の要因が挙げられるが、これらに決して限定されない。さらに、治療上有効な用量は、細胞培養アッセイまたは動物モデル（通常は、マウス、ウサギ、イヌ、もしくはブタ）のいずれかにおいて、まず推定され得る。その動物モデルはまた、適切な濃度範囲および投与経路を決定するためにも使用され得る。その後、そのような情報は、ヒトにおける投与のために有用な用量および経路を決定するために使用され得る。しかし、正確な投与量は、処置を必要とする被験体に関連する要因を考慮して、実施者によって決定される。疾患状態を処置するために本発明の方法を実施する際に考慮すべき種々の要因にも関わらず、哺乳動物には、本発明の一実施形態において、１日当たり約０．１ｍｇ〜約１０，０００ｍｇのＣＯＸ−２インヒビターが投与され得る。本発明の一実施形態において、１日当たり約１回〜約３回の約１．０ｍｇ〜約１，０００ｍｇのＣＯＸ−２インヒビターの投与が、毎日実施される。あるいは、ＣＯＸ−２インヒビターは、当業者によって容易に認識されるように、隔日で、毎週、または他の適切な任意の間隔に基づいて、他の任意の用量で、投与され得る。

本発明の別の実施形態において、一定量の少なくとも１つの治療ＤＣワクチンと、少なくとも１つの治療ＣＯＸ−２インヒビターと、疾患状態を処置する際にそれらを使用するための指示書とを備えた、キットが包含される。本発明のキット中に設定される成分の正確な性質は、その意図される目的および使用される特定の方法に依存する。例えば、そのキットのいくつかの実施形態は、被験体において癌を軽減、治癒、または処理するために構成される。一実施形態において、そのキットは、特に、ヒト被験体における神経膠腫に対して治療処置を送達するために構成される。

使用のための指示書が、そのキット中に含まれ得る。「使用のための指示書」とは、代表的には、被験体にＤＣを接種し、ＣＯＸ−２インヒビターを投与する工程、および／またはそれらを治療システムにおいて使用する工程を記載する、明白な表現を含む。必要に応じて、そのキットはまた、他の有用な成分（例えば、希釈剤、緩衝剤、薬学的に受容可能なキャリア、標本容器、シリンジ、ステント、カテーテル、ピペット用具または測定用具など）も含む。

そのキット中に集められた材料または成分は、その作業性および有用性を保持する簡便かつ適切な任意の様式で保存されて、実施者に提供され得る。例えば、その成分は、溶解形態、脱水形態、または凍結乾燥形態であり得る。その成分は、室温、冷蔵温度、または凍結温度で、提供され得る。

その成分は、代表的には、適切な包装材料中に含まれる。本明細書中で使用される場合、句「包装材料」とは、そのキットの内容物を収容するために使用される１つ以上の物理的構造体を指す。その包装材料は、周知の方法によって構築されて、好ましくは、滅菌され混入物のない環境を提供する。上記キットにおいて使用される包装材料は、当該分野で通例使用される材料である。本明細書中で使用される場合、用語「包装」とは、個々のキット成分を収容可能な適切な固体のマトリックスまたは材料（例えば、ガラス、プラスチック、紙、箔など）を指す。従って、例えば、包装は、適切な量のＤＣおよびＣＯＸ−２インヒビターを含むために使用されるガラスバイアルであり得る。その包装材料は、一般的には、そのキットの内容物および／もしくは目的ならびに／またはその成分を示す、外部標識を有する。

上記の開示は、本発明を一般的に記載する。本開示において引用される全ての特許および特許出願および刊行物は、本明細書中に参考として明示的に援用される。より完全な理解が、以下の実施例を参照することによって得られ得る。以下の実施例は、例示のためだけに提供される。以下の実施例は、本発明の範囲を限定することは意図されない。

以下の実施例は、癌の処置のためのＤＣとＣＯＸ−２インヒビターとの併用療法を投与するために使用され得る手順の代表である。これらの実施例の改変は、本明細書中に記載される状態とは状態が異なる患者を処置することを望む当業者によって容易に明らかである。統計的結果は、スチューデントｔ検定を使用して分析した。

（実施例１）
（腫瘍細胞、培地、および試薬）
腫瘍細胞（Ｕ−８７ＭＧヒト神経膠腫細胞株（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）より取得）、ＬＮ−１８細胞株（Ｅｒｗｉｎ Ｖａｎ Ｍｅｉｅｒ博士（Ｅｍｏｒｙ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ；Ａｔｌａｎｔａ，ＧＡ）より取得）、および初代培養ヒト神経膠腫ＭＧ−３７７（神経外科研究所であるＣｅｄａｒｓ−Ｓｉｎａｉ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｅｎｔｅｒ（Ｌｏｓ Ａｎｇｅｌｅｓ，ＣＡ）の神経膠芽細胞腫患者の外科標本から取得）を含む）を、１０％熱不働体化ウシ胎仔血清（Ｓｉｇｍａから入手可能；本明細書中で以後「ＦＢＳ」）と、２ｍＭグルタミン酸と、１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ（Ｓｉｇｍａから入手可能）と、１００Ｕ／ｍｌペニシリン（Ｓｉｇｍａから入手可能）と、１００μｇ／ｍｌストレプトマイシン（Ｓｉｇｍａから入手可能）とを補充した、ダルベッコ改変イーグル培地（Ｓｉｇｍａ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）から入手可能；本明細書中で以後「ＤＭＥＭ」）中にて、３７℃かつ５％ ＣＯ_２にて維持した。１００％ジメチルスルホキシド（Ｓｉｇｍａから入手可能；本明細書中で以後「ＤＭＳＯ」）に溶解したＮＳ−３９８（選択的ＣＯＸ−２インヒビター；Ｃａｙｍａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌから取得）を、１０μＭ濃度にて使用した。組換えヒトＴＮＦ−α（ＢｉｏＳｏｕｒｃｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ（Ｃａｍａｒｉｌｌｏ，ＣＡ）から取得）を、２０ｎｇ／ｍｌ濃度にて使用し、ＴＲＡＩＬ（Ｐｅｐｒｏ Ｔｅｃｈ Ｉｎｃ．（Ｒｏｃｋｙ Ｈｉｌｌ，ＮＪ）から取得）を、３００ｎｇ／ｍｌ濃度にて使用した。

（実施例２）
（ＣＯＸ−２ ｃＤＮＡプラスミドおよびトランスフェクション）
ＣＯＸ−２ ｃＤＮＡを、ＥｃｏＲＩおよびＸｂａＩでの消化によって、ｐＳＧ５−ＣＯＸ−２プラスミドから単離した。このプラスミドは、ｐＳＧ発現ベクター中に全長ＣＯＸ−２ ｃＤＮＡを含む（Ｒｉｃｈａｒｄ Ｋｕｌｍａｃｚ博士（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｔｅｘａｓ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｈｏｏｌ（Ｈｏｕｓｔｏｎ，ＴＸ）から取得）。ＣＯＸ−２発現プラスミド（ｐＴｒａｃｅｒ−ＣＯＸ−２と命名した）を、ｐＴｒａｃｅｒ−ＣＭＶ２発現ベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎから取得）のＥｃｏＲＩ部位とＸｂａＩ部位との間にＣＯＸ−２ ｃＤＮＡを挿入することによって構築した。この発現ベクターは、選択マーカーであるゼオシンに融合した緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）を発現するために利用可能である。Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ２０００（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎから取得）およびＰｌｕｓ Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎから取得）を、製造御者のプロトコルに従って、ＬＮ−１８に対するトランスフェクションのために使用した。ｐＴｒａｃｅｒ−ＣＯＸ−２のトランスフェクトされた細胞と、空のプラスミド（ｐＴｒａｃｅｒ−ＣＭＶ２）とを、ゼオシン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎから取得した）によって選択した。安定なトランスフェクト体を、確立した（ＬＮ−１８−ＣＯＸ−２、ＬＮ−１８−ＥＰ）。

（実施例３）
（アポトーシス細胞死の検出）
腫瘍細胞を、ＴＮＦ−αおよびＴＲＡＩＬで２４時間処理した。アポトーシス死を、Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ−ＦＩＴＣ Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ｋｉｔ Ｉ（Ｐｈａｍｉｎｇｅｎ（Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）から取得）を使用して検出した。細胞を、Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ−ＦＩＴＣ（Ａｎｎ Ｖ）とヨウ化プロピジウム（ＰＩ）とを製造業者のプロトコルに従って染色した。初期段階のアポトーシスを、蛍光多色フローサイトメトリー（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｃｙｔｏｍｅｔｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｓａｎ Ｊｏｓｅ，ＣＡ）から取得；本明細書中で以後「ＦＡＣＳｃａｎ」）によって分析して、Ａｎｎ Ｖ^＋／ＰＩ⁻染色によって規定した。

（実施例４）
（ウェスタンブロットのための細胞サンプルの抽出）
サンプルを、１％ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００と、１５０ｍＭ ＮａＣｌと、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ（ヒドロキシメチルアミノメタン）（ｐＨ７．５）と、１ｍＭ フェニルメチルスルホニルフルオリド（ＰＭＳＦ）とを含む緩衝液を用いて、抽出した。細胞破片を、１４，０００ｇにて２０分間遠心分離することによって除去した。その上清を、ＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）に供し、７．５％ポリアクリルアミドゲル（Ｂｉｏ−Ｒａｄ（Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）から取得）上にローディングした。ニトロセルロース膜（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）から取得）への電気泳動的移動を、マウスＩｇＧ１抗ＣＯＸ−２抗体（Ｐｈａｍｉｎｇｅｎから取得）またはマウスＩｇＧ１抗βチューブリン（Ｓｉｇｍａから取得した）を用いるイムノブロッティングによって追跡した。この後、ペルオキシダーゼ結合体化抗マウスＩｇＧ抗体（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅから取得）を用いてハイブリダイゼーションを行った。そのシグナルを、ＥＣＬ検出システム（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅから取得）およびＨｙｐｅｒｆｉｌｍ ＥＣＬ（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅから取得）を使用する化学ルミネッセンスによって検出した。

（実施例５）
（樹状細胞およびリンパ球の単離および濃縮）
ヒトＰＢＭＣを、健常ドナーおよび上記の神経膠芽細胞腫患者の末梢血から、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｈｙｐａｑｕｅ密度遠心分離を使用して分離した。ＰＢＭＣを、Ｘ−Ｖｉｖｏ １５無血清培地（Ｃａｍｂｒｅｘ（Ｓａｎｔａ Ｒｏｓａ，ＣＡ）から取得）中に再懸濁し、３７℃にて２４ウェル培養プレートに接着させた。非接着細胞を、２時間後に除去した。ＣＤ４＋細胞およびＣＤ８＋細胞を、ＭｉｎｉＭＡＣＳ細胞分離ユニット（Ｍｉｌｅｎｙｌ Ｂｉｏｔｅｃ（Ａｕｂｕｒｎ，ＣＡ）から取得）と、マイクロビーズ結合体化マウスモノクローナル抗ヒトＣＤ４およびＣＤ８抗体（Ｍｉｌｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃから取得）とを用いて、これらの非接着細胞から単離した。ＣＤ４＋細胞およびＣＤ８＋細胞を、下記の混合リンパ球反応（ＭＬＲ）のために使用した。接着細胞を、その後、Ｘ−Ｖｉｖｏ １５無血清培地中で培養した。２０ｎｇ／ｍｌ ＧＭ−ＣＳＦ（ＢｉｏＳｏｕｒｃｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎｌから取得）および１０ｎｇ／ｍｌ ＩＬ−４（ＢｉｏＳｏｕｒｃｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌから取得）を、０日目、２日目、および４日目にその培養物に添加した。７日間の培養後、浮遊細胞を、新たなＸ−Ｖｉｖｏ １５倍地を含む新しいプレートに、未成熟ＤＣ（ｉＤＣ）として移した。いくつかのｉＤＣを、３００ｎｇ／ｍｌ ＴＲＡＩＬおよび／または０．１μＭ ＰＧＥ_２（Ｓｉｇｍａから取得）および／または２０ｎｇ／ｍｌ ＴＮＦ−αとともに１６時間培養した（ＴＲＡＩＬ−ＤＣ、ＰＧＥ_２−ＤＣ、ＴＲＡＩＬ／ＰＧＥ_２−ＤＣ、ＴＲＡＩＬ／ＴＮＦ−α−ＤＣ、ＴＲＡＩＬ／ＴＮＦ−α／ＰＧＥ_２−ＤＣ）。

（実施例６）
（樹状細胞および神経膠腫細胞の共培養）
神経膠腫細胞を、新たなＸ−Ｖｉｖｏ １５培地を１を含む６ウェル培養プレートに、１×１０^６細胞／ウェル／２ｍｌの密度にてプレーティングした。いくつかの神経膠腫細胞を、ＣＯＸ−２インヒビターであるＮＳ−３９８で８時間前処理した。ＮＳ−３９８処理した神経膠腫細胞を、ＴＮＦ−α、ＴＲＡＩＬ、およびＮＳ−３９８とともに培養した。他の細胞を、ＴＮＦ−αおよびＴＲＡＩＬとともに培養した。これらの因子とともに２４時間培養した後、ｉＤＣを、３×１０^５細胞／ウェルの密度でウェルに配置し、神経膠細胞とともに１６時間共培養した。いくつかのｉＤＣを、腫瘍細胞を伴わずに、ＴＮＦ−α／ＴＲＡＩＬ、またはＴＮＦ−α／ＴＲＡＩＬ／ＮＳ−３９８とともに培養した。ヒト神経膠腫細胞株（Ｕ−８７ＭＧおよびＬＮ−１８）ならびに安定なトランスフェクト体（ＬＮ−１８−ＣＯＸ−２およびＬＮ−１８−ＥＰ）を、健常ドナーのｉＤＣとともに共培養した。ＭＧ−３７７を、自系ｉＤＣとともに共培養した。

（実施例７）
（フローサイトメトリー分析）
ＰＥ結合体化ＣＤ８３に対するモノクローナルマウス抗ヒト抗体、ＰＥ結合体化ＣＤ８６に対するモノクローナルマウス抗ヒト抗体、ＰＥ結合体化ＨＬＡ−ＤＲに対するモノクローナルマウス抗ヒト抗体（Ｐｈａｍｉｎｇｅｎから取得）、ＦＩＴＣ結合体化ＣＤ１１ｃに対するモノクローナルマウス抗ヒト抗体（ＢｉｏＳｏｕｒｃｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌから取得）、および非結合体化ＣＣＲ７に対するモノクローナルマウス抗ヒト抗体（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ；Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）を、ＤＣの細胞表面分析のために使用した。ＰＥ結合体化Ｆ（ａｂ’）_２ヤギ抗マウス免疫グロブリン（ＤＡＫＯ Ｃｙｔｏｍａｔｉｏｎ（Ｃａｒｐｉｎｔｅｒｉａ，ＣＡ）から取得）を、二次抗体として使用した。マウスＩｇＧ１およびマウスＩｇＧ２ａ（Ｐｈａｍｉｎｇｅｎから取得）を、アイソタイプコントロールとして使用した。ＤＣを、抗ＣＤ１１ｃ抗体で染色する前に、抗ＣＤ８６抗体、抗ＨＬＡ−ＤＲ抗体、抗ＣＤ８３抗体、および抗ＣＣＲ７抗体で染色した。ＣＤ１１ｃ＋ ＤＣを、ＭｉｎｉＭＡＣＳ細胞分離ユニットとマイクロビーズ結合体化抗ＦＩＴＣ抗体（Ｍｉｌｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃから取得）とを用いて単離した。

腫瘍細胞を、ｉＤＣとともに共培養する前に、ＰＫＨ−２６（Ｓｉｇｍａから取得）を用いて赤色に染色した。ＤＣを、１６時間の共培養の前に抗ＣＤ１１ｃ−ＦＩＴＣ抗体で染色し、上記のように単離した。単離されたＣＤ１１ｃ＋ ＤＣを、ＦＡＣＳｃａｎによって分析した。ＦＡＣＳｃａｎにおいて、二重陽性細胞は、ＤＣによる腫瘍細胞の取り込みを示す。

（実施例８）
（ＥＬＩＳＡ分析）
ＰＧＥ_２ ＥＬＩＳＡキット（Ｃｙｍａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ（Ａｎｎ Ａｒｂｏｒ，ＭＩ）から取得）を、神経膠腫細胞培養の上清における測定のために、製造業者のプロトコルに従って使用した。ＩＬ−１０ ＥＬＩＳＡキットおよびＩＬ−１２ ｐ７０ ＥＬＩＳＡキット（Ｐｈａｍｉｎｇｅｎから取得）を、腫瘍細胞または単離ＣＤ１１ｃ＋ ＤＣの培養上清における測定のために、製造業者のプロトコルに従って使用した。ＣＤ４０−ＣＤ４０Ｌ相互作用は、ＤＣによるＩＬ−１２生成の主要誘発要因である（Ｃｅｌｌａ，Ｍ．ら「Ｌｉｇａｔｉｏｎ ｏｆ ＣＤ４０ ｏｎ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ ｔｒｉｇｇｅｒｓ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｈｉｇｈ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１２ ａｎｄ ｅｎｈａｎｃｅｓ Ｔ ｃｅｌｌ ｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ ｃａｐａｃｉｔｙ：Ｔ−Ｔ ｈｅｌｐ ｖｉａ ＡＰＣ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ」Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，Ｖｏｌ．１８４，ｐｐ．７４７〜７５２（１９９６））。この証拠に基づいて、細胞を、ＮＩＨ−ＣＤ４０Ｌ細胞（Ｇａｎｇ Ｚｅｎｇ博士（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，ＮＩＨ，ＭＤ）から取得した）とともに１６時間共培養した（ＮＩＨ−ＣＤ４０Ｌ：ＤＣの比＝１：１）。共培養物の上清を、サンプルとして使用した。各キットの検出下限は、７．８ｐｇ／ｍｌであった。すべてのサンプルおよび標準物を、二連で実施した。

（実施例９）
（混合リンパ球反応およびＥＬＩＳＰＯＴ分析）
ＣＤ１１ｃ＋ ＤＣを、自系ＣＤ４＋リンパ球および自系ＣＤ８＋リンパ球とともに、新たなＸ−Ｖｉｖｏ １５培地を用いて７日間、６ウェル培養プレート中で共培養した（初回刺激；ＤＣ：リンパ球の比＝１：４０〜５０）。そのリンパ球を、新たなＸ−Ｖｉｖｏ １５培地を含む新たなプレートに移し、１×１０^５個の神経膠腫細胞を用いて４８時間再刺激した。再刺激後に、ＣＤ４＋細胞のみを、上記のように再度単離し、新たなＸ−Ｖｉｖｏ １５培地中で再懸濁した。

Ｄｕａｌ ｈｕｍａｎ ＩＮＦ−γ／ＩＬ−１０ ＥＬＩＳＰＯＴ ＰＶＤＦ−ｅｎｚｙｍａｔｉｃキット（Ｃｅｌｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｎｏｒｗｏｏｄ，ＭＡ）から取得）およびＰＶＤＦ底９６ウェルプレート（Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｃｌｅｖｅｌａｎｄ，ＯＨ）から取得）を、単離ＣＤ４＋ Ｔ細胞のＥＬＩＳＰＯＴアッセイのために使用した。ＣＤ４＋ Ｔ細胞（１×１０^５細胞／１００μｌ／ウェル）を、ＩＮＦ−γ捕捉抗体またはＩＬ−１０捕捉抗体でコーティングしたウェルにプレーティングし、３７℃かつ５％ ＣＯ_２にて２０時間培養した。すべてのサンプルを、二連で実施した。スポットの形成を、Ａｌｐｈａ Ｉｍａｇｅｒ Ｓｐｏｔ−ｒｅａｄｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍ（Ａｌｐｈａ Ｉｎｎｏｔｅｃｈ（Ｓａｎ Ｌｅａｎｄｒｏ，ＣＡ）から取得）によって分析した。

（実施例１０）
（ヒト神経膠腫細胞は、ＣＯＸ−２タンパク質を過剰発現し、ＰＧＥ_２を高度に生成する）
ヒト神経膠細胞におけるＣＯＸ−２タンパク質の発現を、ウェスタンブロットによって試験した（図１Ａ）。ＣＯＸ−２タンパク質を、Ｕ−８７ＭＧ、ＬＮ−１８、およびＭＧ−３７７において検出した。ＴＲＡＩＬおよびＴＮＦ−αによる処置は、Ｕ−８７ＭＧおよびＭＧ−３７７におけるＣＯＸ−２発現を高度に誘導した。ＣＯＸ−２インヒビターは、そのＣＯＸ−２発現を消滅させなかった。各ＬＮ−１８群においてＣＯＸ−２発現に大きな差は存在しなかった。

培養上清中のＰＧＥ_２を、ＥＬＩＳＡによって測定した（図１Ｂ）。ＴＲＡＩＬおよびＴＮＦ−αによる処理は、ＣＯＸ−２過剰発現細胞であるＵ−８７ＭＧおよびＭＧ−３７７の上清において、各コントロールと比較してＰＧＥ_２の有意な増加を引き起こした（ｐ＜０．０１）。それらの培養物中にＮＳ−３９８を添加すると、その増加を有意に減少させた（ｐ＜０．０１）。ＰＧＥ_２は、ＬＮ−１８の上清において検出可能であったが、各群において有意な差は存在しなかった。

（実施例１１）
（ＤＣは、アポトーシス神経膠腫細胞を効率的に貪食する）
アポトーシス死を、Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ−ＦＩＴＣ Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ＫｉｔとＦＡＣＳｃａｎとを使用して分析した。この場合、Ａｎｎ Ｖ^＋／ＰＩ⁻細胞は、初期アポトーシス段階を示し、Ａｎｎ Ｖ^＋／ＰＩ^＋細胞はまた、死細胞を示す。ＴＲＡＩＬおよびＴＮＦ−αで神経膠腫細胞を処理すると、各群においてコントロールと比較して、アポトーシス死（ｐ＜０．０１）およびＡｎｎ Ｖ^＋／ＰＩ^＋死（ｐ＜０．０１）の比において有意な増加を引き起こした（図２Ａ）。ｉＤＣをＴＲＡＩＬおよびＴＮＦ−αで処理すると、ｉＤＣの死を誘導しなかった（データは示さない）。ＮＳ−３９８処理は、各神経膠腫における死亡比率の変化を引き起こさなかった（データは、示さない）。

神経膠腫細胞を、ｉＤＣとともに共培養する前にＰＫＨ−２６で赤色に染色した。ＤＣを、１６時間の共培養の後に抗ＣＤ１１ｃ−ＦＩＴＣ抗体で染色した。単離ＣＤ１１ｃ＋ ＤＣを、ＦＡＣＳｃａｎによって分析した。この場合、二重陽性細胞は、ＤＣにより貪食された神経膠腫細胞を示す。ＤＣは、Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖによって検出され得るホスファチジルセリンの認識によってアポトーシス細胞を貪食し得ることが、示されている（Ａｌｂｅｒｔ，Ｍ．Ｌ．ら「Ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ ａｃｑｕｉｒｅ ａｎｔｉｇｅｎ ｆｒｏｍ ａｐｏｐｔｏｔｉｃ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｉｎｄｕｃｅ ｃｌａｓｓ Ｉ−ｒｅｓｔｒｉｃｔｅｄ ＣＴＬｓ」Ｎａｔｕｒｅ，Ｖｏｌ．３９２，ｐｐ．８６〜８９（１９９８）；Ａｌｂｅｒｔ，Ｍ．Ｌ．ら「Ｉｍｍａｔｕｒｅ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ ｐｈａｇｏｃｙｔｏｓｅ ａｐｏｐｔｏｔｉｃ ｃｅｌｌｓ ｖｉａ ａｌｐｈａｂｅｔａ５ ａｎｄ ＣＤ３６，ａｎｄ ｃｒｏｓｓ−ｐｒｅｓｅｎｔ ａｎｔｉｇｅｎｓ ｔｏ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ｔ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ」Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，Ｖｏｌ．１８８，ｐｐ．１３５９〜１３６８（１９９８））。実際、神経膠腫におけるＡｎｎ Ｖ^＋死の有意な増加は、各コントロールと比較して、神経膠腫細胞を貪食したＤＣの比率の有意な増加（ｐ＜０．０１）を引き起こした（図２Ｂ）。

（実施例１２）
（ＤＣは、神経膠腫細胞の貪食の後に、ＴＮＦ−α処理によって成熟し得る）
ＤＣを、抗ＣＤ８６抗体、抗ＨＬＡ−ＤＲ抗体、抗ＣＤ８３抗体、抗ＣＣＲ７抗体、および抗ＣＤ１１ｃ抗体で染色した。ＣＤ１１ｃ＋ ＤＣを、細胞分離ユニットとマイクロビーズ結合体化抗ＦＩＴＣ抗体とを用いて単離した。単一培養したｉＤＣは、ＣＤ８６およびＨＬＡ−ＤＲを高度に発現していたが、ＤＣの成熟マーカーであるＣＤ８３もＣＣＲ７も発現しなかった（図３）。単一培養したｉＤＣに対するＴＲＡＩＬおよび／またはＰＧＥ_２での副刺激は、ＣＤ８６発現をアップレギュレートした（幾何平均；ｉＤＣ：６４７、ＴＲＡＩＬ−ＤＣ：１０８６、ＰＧＥ_２−ＤＣ：２７７９、ＴＲＡＩＬ／ＰＧＥ_２−ＤＣ：１１７６）が、これらは、ＣＤ８３発現もＣＣＲ７発現も誘導しなかった（図３）。単一培養したｉＤＣに対するＴＮＦαによる副刺激は、ＣＤ８３発現およびＣＣＲ７発現の両方を誘導した。ＴＮＦ−αおよびＰＧＥ_２による副刺激は、これらの成熟マーカーを強力にアップレギュレートした（図３）。これらのデータは、ＴＮＦ−αの刺激が、未成熟ＤＣの成熟のために必要であることを示す。

神経膠腫細胞を含むＤＣにおけるＣＤ８６の発現は、単一培養したｉＤＣと比較して有意にダウンレギュレートした（幾何平均；共培養したＤＣ：３１７〜４８０、単一培養したＤＣ：６４７〜４７２０；ｐ＜０．０１）が、ＣＤ８６陽性細胞の比率に関して有意な差は存在しなかった（共培養したＤＣ：９５〜９８％、単一培養したＤＣ：９６〜９８％）（図３）。重要なことには、共培養したＤＣにおけるＣＤ８３発現およびＣＣＲ７発現、ならびに単一培養したＴＲＡＩＬ／ＴＮＦ−α／ＰＧＥ_２−ＤＣにおけるＣＤ８３発現およびＣＣＲ７発現の両方が、高度に発現された（図３）。共培養した神経膠腫細胞またはＮＳ−３９８処理の変化において、発現マーカーの幾何平均に関して統計学的差は存在しなかった（図３）。これらのデータは、ＤＣがアポトーシス神経膠腫細胞を含む場合でさえも、ＤＣがＴＮＦ−α刺激の効果によって完全に成熟し得ることを示す。

（実施例１３）
（神経膠腫におけるＣＯＸ−２タンパク質の阻害は、腫瘍浸潤性ＤＣにおけるＩＬ−１０の減少およびＩＬ−１２ｐ７０増強において有効である）
培養上清中のＩＬ−１０およびＩＬ−１２ｐ７０を、ＥＬＩＳＡによって測定した。その結果を、ＮＳ−３９８（−）単一培養ＤＣと統計学的に比較した（図４）。単一培養ＤＣに対するＣＯＸ−２インヒビターは、ＩＬ−１０生成もＩＬ−１２ｐ７０生成も変化するように影響を及ぼさなかった。Ｕ−８７ＭＧ（ｐ＜０．０１）、ＬＮ−１８（ｐ＜０．０５）およびＭＧ−３７７（ｐ＜０．０５）は、共培養したＤＣがＩＬ−１０を増強するように影響し、そしてまたＵ−８７ＭＧ（ｐ＜０．０１）およびＬＮ−１８（ｐ＜０．０５）は、ＩＬ−１２ｐ７０を抑制するように影響した。神経膠腫におけるＣＯＸ−２阻害は、共培養したＤＣにおけるＩＬ−１０過剰およびＩＬ−１２欠乏を改善した。神経膠腫細胞培養物の上清において、検出可能なＩＬ−１０もＩＬ−１２ｐ７０も存在しなかった（データは示さない）。これらのデータは、神経膠腫細胞におけるＣＯＸ−２発現が、共培養したＤＣにおけるＩＬ−１０増強および／またはＩＬ−１２減少に関連することを示す。

（実施例１４）
（神経膠腫におけるＣＯＸ−２インヒビターは、ＤＣ媒介性Ｔｈ極化をＴｈ１に向かって偏向させる能力を有する）
ＣＤ４＋リンパ球およびＣＤ８＋リンパ球ならびに自系ＤＣを共培養することにより、ＭＬＲを実施した。Ｔｈ細胞極化を、ＥＬＩＳＰＯＴアッセイによって確認した（図５Ａ〜図５Ｆ）。その結果を、ＮＳ−３９８（−）単一培養ＤＣによって最初に刺激したリンパ球と統計学的に比較した。神経膠腫細胞とともに共培養したＤＣは、Ｔｈ２に向かって極化した腫瘍特異的Ｔｈ応答を誘導した。神経膠腫におけるＣＯＸ−２の阻害は、Ｔｈ１に向かう極化を生じた（図５Ａ〜図５Ｄ）。

自系腫瘍（ＭＧ−３７７）とともに共培養したＤＣは、その単一培養ＤＣと比較して、腫瘍特異的Ｔｈ応答を変化させなかった（図５Ｅ、図５Ｆ）。このことは、神経膠腫患者が、腫瘍浸潤性ＤＣにより誘導され得る彼らの腫瘍に対する同様のＴｈ応答をすでに有することを示す。しかし、このＴｈ応答は、Ｔｈ２に向かって極化された。ＣＯＸ−２阻害された神経膠腫細胞とともに共培養したＤＣは、Ｔｈ極化をＴｈ１に向かって変化させた（図５Ｅ、図５Ｆ）。これらのデータは、神経膠腫におけるＣＯＸ−２インヒビターは、ＤＣ媒介性Ｔｈ極化をＴｈ１に向かって偏向させる能力を有することを示す。

上記の説明は、本発明の特定の実施形態を参照するが、本発明の趣旨から逸脱することなく多くの改変がなされ得ることが、理解される。添付の特許請求の範囲は、本発明の真の範囲および趣旨の範囲内にあるそのような改変を網羅することが意図される。従って、現在開示される実施形態は、すべての点において例示として考えられるべきであり限定的であるとは考えられるべきではない。本発明の範囲は、上記の説明によってではなく、添付の特許請求の範囲によって示される。従って、特許請求の範囲の意味およびその等価な範囲に入るすべての変更が、特許請求の範囲に包含されるべきことが意図される。

図１は、本発明の実施形態に従う、ヒト神経膠腫細胞株（Ｕ−８７ＭＧヒト神経膠腫細胞株およびＬＮ−１８ヒト神経膠腫細胞株ならびに初代培養ヒト神経膠腫ＭＧ−３７７を含む）における相対的なＣＯＸ−２レベルおよびＰＧＥ_２レベルを示す。図１Ａは、ヒト神経膠腫におけるＣＯＸ−２発現のウェスタンブロット分析を示す。この分析は、ＴＮＦファミリーリガンドに暴露した際のＣＯＸ−２発現レベルの増加と、ＣＯＸ−２インヒビターの存在下でＣＯＸ−２発現変化がないことを示す。 図１は、本発明の実施形態に従う、ヒト神経膠腫細胞株（Ｕ−８７ＭＧヒト神経膠腫細胞株およびＬＮ−１８ヒト神経膠腫細胞株ならびに初代培養ヒト神経膠腫ＭＧ−３７７を含む）における相対的なＣＯＸ−２レベルおよびＰＧＥ_２レベルを示す。図１Ｂは、ＴＮＦファミリーリガンドに暴露した際のＣＯＸ−２インヒビターの存在下でのヒト神経膠腫上清におけるＰＧＥ_２に対するＥＬＩＳＡの結果を示す。 図２は、本発明の実施形態に従う、ＤＣで処理した後にＡｎｎｅｘｉｎ Ｖ−ＦＩＴＣ Ａｐｏｐｔｏｔｉｓ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ｋｉｔを使用した神経膠腫細胞におけるアポトーシス細胞死の分析を示す。図２Ａは、ＴＲＡＩＬおよびＴＮＦ−αを補充した後のアポトーシス死および細胞死の増加を示す、ＦＡＣＳｃａｎ分析を示す。 図２は、本発明の実施形態に従う、ＤＣで処理した後にＡｎｎｅｘｉｎ Ｖ−ＦＩＴＣ Ａｐｏｐｔｏｔｉｓ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ｋｉｔを使用した神経膠腫細胞におけるアポトーシス細胞死の分析を示す。図２Ｂは、神経膠腫における細胞死の増加が、各コントロールと比較したＤＣによる貪食作用の増加を示す、ＦＡＣＳｃａｎ分析を示す。 図３は、本発明の実施形態に従う、ＴＮＦリガンドおよびＣＯＸ−２インヒビターで処理した後の、単一培養中、ならびにＵ−８７ＭＧ、ＬＮ−１８、，およびＭＧ−３７７との共培養中での、ＤＣ成熟マーカーの相対発現を示す。このデータは、単一培養中でＴＮＦリガンドでＤＣを刺激した際の成熟マーカーであるＣＤ８３およびＣＣＲ７のアップレギュレーションと、神経膠腫の共培養および貪食作用の後の同じ結果を示す。 図４は、本発明の実施形態に従う、神経膠腫におけるＣＯＸ−２タンパク質の阻害と、ＩＬ−１０およびＩＬ−１２の比に対するその相対的影響とのＥＬＩＳＡ分析を示す。ＮＳ−３９８を使用するＣＯＸ−２の阻害は、ＩＬ−１０のダウンレギュレーションおよびＩＬ−１２の増強を生じた。 図５は、本発明の実施形態に従う、神経膠腫におけるＣＯＸ−２インヒビターが、ＤＣ媒介性Ｔｈ極化をＴｈ１に対して偏向する能力を示す。図５Ａは、ＮＳ−３９８で処理した後の共培養したＤＣおよび神経膠腫におけるＩＬ−１０発現の減少を示すＥＬＩＳＰＯＴアッセイの結果を示す。 図５は、本発明の実施形態に従う、神経膠腫におけるＣＯＸ−２インヒビターが、ＤＣ媒介性Ｔｈ極化をＴｈ１に対して偏向する能力を示す。図５Ｂは、ＮＳ−３９８で処理した後の共培養したＤＣおよび神経膠腫におけるＩＬ−１０発現の減少を示すＥＬＩＳＰＯＴアッセイの結果を示す。 図５は、本発明の実施形態に従う、神経膠腫におけるＣＯＸ−２インヒビターが、ＤＣ媒介性Ｔｈ極化をＴｈ１に対して偏向する能力を示す。図５Ｃは、ＮＳ−３９８で処理した後の共培養したＤＣおよび神経膠腫におけるインターフェロンγ発現の増加を示す、ＥＬＩＳＰＯＴアッセイの結果を示す。 図５は、本発明の実施形態に従う、神経膠腫におけるＣＯＸ−２インヒビターが、ＤＣ媒介性Ｔｈ極化をＴｈ１に対して偏向する能力を示す。図５Ｄは、ＮＳ−３９８で処理した後の共培養したＤＣおよび神経膠腫におけるインターフェロンγ発現の増加を示す、ＥＬＩＳＰＯＴアッセイの結果を示す。 図５は、本発明の実施形態に従う、神経膠腫におけるＣＯＸ−２インヒビターが、ＤＣ媒介性Ｔｈ極化をＴｈ１に対して偏向する能力を示す。図５Ｅは、ＮＳ−３９８で処理した後の、初代神経膠腫とＤＣとの共培養における類似するＩＬ−１０発現およびＩＬ−１０の減少を示す、ＥＬＩＳＰＯＴアッセイの結果を示す。 図５は、本発明の実施形態に従う、神経膠腫におけるＣＯＸ−２インヒビターが、ＤＣ媒介性Ｔｈ極化をＴｈ１に対して偏向する能力を示す。図５Ｆは、ＮＳ−３９８で処理した後の、初代神経膠腫とＤＣとの共培養における類似するインターフェロンγ発現とインターフェロンγの減少を示す、ＥＬＩＳＰＯＴアッセイの結果を示す。

Claims (11)

1. 哺乳動物における疾患状態を処置するための方法であって、該方法は、
   該哺乳動物に対して少なくとも１回の樹状細胞（ＤＣ）ワクチン接種を投与する工程；および
   該少なくとも１回のＤＣワクチン接種の効果を増強するために、該哺乳動物に対してシクロオキシゲナーゼ（ＣＯＸ）−２阻害化合物を投与する工程；
   を包含する、方法。
2. 請求項１に記載の方法であって、前記少なくとも１回のＤＣワクチン接種の各々は、約１０^５個〜約１０^７個のＤＣを含む、方法。
3. 請求項１に記載の方法であって、
   １日当たり約０．１ｍｇ〜約１０，０００ｍｇの用量で、前記ＣＯＸ−２阻害化合物を投与する工程；
   をさらに包含する、方法。
4. 請求項１に記載の方法であって、
   １日当たり約１．０ｍｇ〜約１，０００ｍｇの用量で、前記ＣＯＸ−２阻害化合物を投与する工程；
   をさらに包含する、方法。
5. 請求項１に記載の方法であって、前記ＣＯＸ−２阻害化合物は、ＮＳ−３９８である、方法。
6. 請求項１に記載の方法であって、前記疾患状態は、肺癌、膀胱癌、結腸直腸癌、および脳の癌からなる群より選択される、方法。
7. 請求項１に記載の方法であって、前記疾患状態は、脳の癌、神経膠腫、神経膠星状細胞腫、上衣腫、多形性神経膠芽細胞腫、および未分化神経外胚葉性腫瘍からなる群より選択される、方法。
8. 哺乳動物においてプロスタグランジンＥ_２（ＰＧＥ_２）活性を選択的に阻害するための方法であって、
   該哺乳動物に対して、少なくとも１回の樹状細胞（ＤＣ）ワクチン接種を投与する工程；および
   ＰＧＥ_２活性を選択的に阻害するために、該哺乳動物に対して、シクロオキシゲナーゼ（ＣＯＸ）−２阻害化合物を投与する工程；
   を包含する、方法。
9. 請求項８に記載の方法であって、前記ＣＯＸ−２阻害化合物は、ＰＧＥ_２の酵素活性を阻害する、方法。
10. 請求項８に記載の方法であって、前記疾患状態は、肺癌、膀胱癌、結腸直腸癌、および脳の癌からなる群より選択される、方法。
11. 請求項８に記載の方法であって、前記疾患状態は、脳の癌、神経膠腫、神経膠星状細胞腫、上衣腫、多形性神経膠芽細胞腫、および未分化神経外胚葉性腫瘍からなる群より選択される、方法。

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