JP2007505320A - ネコ免疫不全ウイルスの検出のための方法と装置 - Google Patents
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Abstract
Description
本出願は、2004年6月30日に出願された米国特許仮出願60/584,106および2003年9月11日に出願された米国特許仮出願60/501,982に基づく優先権を主張する。
本発明はネコ免疫不全ウイルスに対する抗体の検出に関するものである。
従来ネコTリンパ球レンチウイルスと呼ばれていたネコ免疫不全ウイルス(FIV)は、1986年にカリフォルニア州ペタルマ(Petaluma)の大きな飼いネコ集団から初めて発見された(Pederson et al., Science (1987) 235: 790)。ネコがFIVに感染するとエイズ様症候群を呈する。FIVは形態的および病理学的にヒト免疫不全ウイルス(HIV)と似ているが、抗原性ではHIVと明確に区別される。HIVと同様、ネコが一旦FIVに感染すると初期感染期(ウイルス血症、発熱、一般的なリンパ節炎)から長期の無症候期を経てCD4リンパ球の減少による極めて難治性の免疫機能障害が出現し、二次感染を併発して遂には死に至る。
1つの面として、ここに示す発明はFIV envポリペプチドのようなFIVポリペプチドに対するネコの免疫反応を調べることにより、ネコがFIVのワクチン接種を受けたことがあるのか、またはFIVに自然感染しているのかを判定する方法を提供する。
ここに記載する発明を詳細に説明する前に、いくつかの用語の定義を記す。ここでの使用では、単数形の“a”、“an”、および“the”は文脈が明らかに示しているのでない限り複数形の関係項も含めるものとする。
ELGSNQNQFFSKVPPELWKRYNKSKSKSKSKNRWEWRPDFESEKC
[配列番号1]
CNRWEWRPDFESEKSKSKSKSMQELGSNQNQFFSKVPPELWKRYN
[配列番号2]
配列番号1はトリメリックな配列であって最初のモノマーは元来のFIV env配列(アミノ酸696〜717でCからS、IからV、LからP、TからKに置換)、2 つ目のモノマー(下線)はKSリンカー、3つ目のモノマーは元来のFIV表面envタンパク質(アミノ酸396〜408でC末端にC追加)である。本発明の1つの面は、KSリンカーの長さがアミノ酸2〜20個と多様であることである。
ELGSNQNQFFSKVPPELWKRYN [配列番号11]、
MQELGSNQNQFFSPPELWKRYN [配列番号12]、
ELGSNQNQFFSK [配列番号13]、
LGSNQNQFFS [配列番号14]、および
TAFAMQELGSNQNQFFSKIPLELWTR [配列番号15]
の1つであり、
P2は例えば
NRWEWRPDFESEKC [配列番号16]、
CNRWEWRPDFESEK [配列番号17]、
CWEWRPDFESER [配列番号18]、および
CNRWDWRPDFESKK [配列番号19]
の1つであり、
ここでP1および/またはP2のいずれかは逆位である。L1はSペプチドとKペプチドが2〜20回交互に繰り返しているリンカー・ポリペプチドであり、SかKのいずれかで始まり終わっている。ここでa、c、nは、独立して、1〜3の整数であり、bは0または1の整数である。
SNAP(登録商標) FeLV Ag/FIV Ab 試験キットでFIVが陰性結果となった8匹のネコに、Fel-O-Vax(登録商標)FIVワクチン(Fort Dodge Animal Health, Fort Dodge Iowa)でワクチン接種した。このワクチンは多数のFIVウイルス株の死滅物全体から生成されている。製造元の使用法に従って、ネコに試験0日、14日、および28日にワクチンを接種した。FIV試験で陰性結果が出た2匹のネコにはワクチン接種を行わず、本試験の対照群に含めた。
FIV陰性の感染ネコおよびFEL-O-VAX(登録商標) FIVワクチンを接種されたネコから採取した血清サンプルに対して、固相上の個々の動物のFIVポリペプチドと抗ネコIgG-ペルオキシダーゼ抱合体を用いた間接測定法によりマイクロプレートELISA解析を実施した。FIV envに対する抗体は、以下のペプチドを抗原試薬として用いて検出した。
ELGSNQNQFFSKVPPELWKRYNKSKSKSKSKNRWEWRPDFESEKC [配列番号1]
CNRWEWRPDFESEKSKSKSKSMQELGSNQNQFFSKVPPELWKRYN [配列番号2]
CWEWRPDFESERELGSNQNQFFSKSFFQNQNSGLELGSNQNQFFSK [配列番号3]
CNRWDWRPDFESKKSKTAFAMQELGSNQNQFFSKIPLELWTR [配列番号4]
CNRWEWRPDFESEKMQELGSNQNQFFSKVPPELWKRYN [配列番号5]
CEGSNQNQFFSK [配列番号10]
実施例2に示した方法において、FIVが陰性と確認された感染ネコおよびFEL-O-VAX(登録商標) FIVワクチンを接種されたネコから採取した血清サンプルについてマイクロプレートELISA解析を実施した。FIV envに対する抗体は、以下のペプチドを抗原試薬として用いて検出した。
CNRWEWRPDFESEKSKSKSKSMQELGSNQNQFFSKVPPELWKRYN [配列番号2]
TAFAMQELGSNQNQFFSK [配列番号6]
TAFAMQELGCNQQQFFCA [配列番号7]
YTAFAMQEIGCNQNQFFCA [配列番号8]
ELGCNQNQFFCK [配列番号9]
Claims (38)
- FIVに自然感染した動物と、FIV未感染動物またはFIV感染に対するワクチンを接種された動物とを鑑別する方法であって、
動物の生体サンプルを、FIVワクチンに対する動物の免疫反応の重要な要素であるFIV抗体に実質的に結合しないFIVポリペプチドと接触させ、
サンプル中のFIV抗体が実質的にポリペプチドに結合するか否かを検出し、
サンプル中の抗体がFIVポリペプチドに実質的に結合することを検出することによりその動物が自然感染していると判定し、サンプル中の抗体がFIVポリペプチドに実質的に結合しないことを検出することによりその動物がワクチンを接種されているか未感染であると判定する、
ことを含む方法。 - 生体サンプルを、過去約12週間以内にFIVワクチンを接種されていない動物から得る、請求項1記載の方法。
- ポリペプチドはFIV envである請求項1記載の方法。
- FIVポリペプチドは、配列番号1、配列番号2、配列番号3、配列番号4、配列番号5からなる群から選択される請求項1記載の方法。
- ネコがFIVに対するワクチンを接種されたことがあるか、またはFIVに自然感染しているかを判定する方法であって、
(a) ワクチン接種後、FIVワクチンに対する動物の免疫反応の重要な要素ではない抗体がネコから実質的に排除されるのに十分な期間が過ぎる前に、ネコがFIVペプチドに対する抗体を有するか否かを検出し、
(b) ワクチン接種後、ワクチンに対する動物の免疫反応の重要な要素ではない抗体がネコから実質的に排除されるのに十分な期間が過ぎた後に、ネコがFIVポリペプチドに対する抗体を有するか否かを検出し
(c) ステップaで抗体が検出され、ステップbで検出されないことにより、ネコが成功裏にワクチン接種されていると判定し、
(d) ステップaとステップbで抗体が検出されることにより、ネコが自然感染していると判定する、
ことを含む方法。 - FIVポリペプチドはFIV envである請求項5記載の方法。
- FIVポリペプチドは、配列番号1、配列番号2、配列番号3、配列番号4、配列番号5からなる群から選択される請求項5記載の方法。
- ネコがFIVに感染したことがないか、またはFIVに対するワクチンを接種されたことがあるかを判定する方法であって、
ネコの生体サンプルを分析して、FIV envに対する抗体が存在するか否かを検出し、
そのような抗体が存在しないと判定することにより、動物が感染したことがないか、またはワクチンを接種されたことがあると判定する、
ことを含む方法。 - ネコがFIVに対するワクチンを接種されたことがあるか否か、またはFIVに自然感染しているか否かを判定する方法であって、
FIV envポリペプチドを含む試験装置を提供し、
ネコから生体サンプルを得、
サンプルがポリペプチドと接触するように試験装置上に生体サンプルを流し、
試験装置の結果を読み取り、ここで陽性の結果はネコがFIVに自然感染したことがあるかまたはFIVに対するワクチンを接種されたことがあることを示し、陰性の結果はネコがFIVに自然感染したことがないかまたはFIVに対するワクチンを接種されたことがないことを示す、
ことを含む方法。 - 自然にFIV感染しているか、またはFIVに対するワクチンを接種されたことがあることが疑われる動物から得られた生体サンプル中のFIVポリペプチドの由来を判定する方法であって、
過去約12週間以内にFIVワクチンを接種されたことがない動物から生体サンプルを得、
動物から得られた生体サンプルを以下のものと接触させ;
(a) FIVワクチンに対する動物の抗体反応の重要な要素に実質的に結合する第1のポリペプチド、および
(b) FIVワクチンに対する抗体反応の重要な要素に実質的に結合しない第2のポリペプチド、
サンプル中の抗体がそれらポリペプチドの一つまたは両方に実質的に結合するか否かを検出し、
抗体が実質的に (a) および (b) の両方のペプチドに結合した場合に動物が自然感染していると判定し、抗体が (a) のペプチドのみに結合した場合に動物がワクチンを接種されたことがあると判定する、
ことを含む方法。 - 第2のポリペプチドはFIV envである請求項10記載の方法。
- 第2のポリペプチドは配列番号1、配列番号2、配列番号3、配列番号4、配列番号5からなる群から選択される請求項10記載の方法。
- 第2のポリペプチドはFIV p15およびFIV p24からなる群から選択される請求項10記載の方法。
- 乾燥した有孔キャリアー;
有孔キャリアー上に固定化された第1の検出試薬、ここで、第1の検出試薬はFIV自然感染またはFIVワクチン接種に反応して動物が産生したFIV抗体を捕捉するタンパク質を含み、および
有孔キャリアー上に固定化された第2の検出試薬、ここで、第2の検出試薬はFIV自然感染に反応して動物が産生したFIV抗体を捕捉するがFIVワクチン接種に反応して動物が産生した抗体とは実質的に結合しないタンパク質を含む、
を含む診断装置。 - 第1の検出試薬はFIV p15およびFIV p24からなる群から選択される請求項14記載の診断装置。
- 第2の検出試薬はFIV envである請求項14記載の診断装置。
- FIV envは合成タンパク質である請求項14記載の診断装置。
- 第2の検出試薬は、配列番号1、配列番号2、配列番号3、配列番号4、配列番号5からなる群から選択されるアミノ酸配列である請求項14記載の診断装置。
- ネコがFIVワクチンを接種されたことがあるか否か、またはFIVに自然感染しているか否かを判定する方法であって、生体サンプルを請求項13記載の診断装置と接触させ、サンプル中の抗体が第1の検出試薬および第2の検出試薬の一方または両方と実質的に結合するか否かを検出する、ことを含む方法。
- 第1の検出試薬が固定化されている第一有孔キャリアー、ここで前記第1の検出試薬は、FIVの自然感染またはFIVワクチン接種に反応して動物が産生したFIV抗体を捕捉するポリペプチドを含み、
第2の検出試薬が固定化されている第二有孔キャリアー、ここで前記第2の検出試薬はFIVの自然感染に反応して動物が産生したFIV抗体を捕捉するがFIVワクチン接種に反応して動物が産生した抗体には実質的に結合しないポリペプチドを含む、
を含む診断装置。 - 第1の検出試薬はFIV p15およびFIV p24からなる群から選択される請求項20記載の診断装置。
- 第2の検出試薬はFIV envである請求項20記載の診断装置。
- FIV envは合成タンパク質である請求項22記載の診断装置。
- 第2の検出試薬は、配列番号1、配列番号2、配列番号3、配列番号4、配列番号5からなる群から選択されるアミノ酸配列である請求項20記載の診断装置。
- ネコのワクチン接種状態を判定する方法であって、
FIV自然感染に反応してネコが産生するFIV抗体に実質的に結合するが、FIVワクチン接種に反応してネコが産生する抗体には実質的に結合しないポリペプチドを提供し、
ネコからの生体サンプルとポリペプチドを接触させて、ポリペプチド/抗体複合体を形成させ、そして
ポリペプチド/抗体複合体の存在の有無を判定し、ここで、複合体が存在することは自然感染を表し、複合体が存在しないことはワクチンを接種されているか未感染のいずれかを表す、
ことを含む方法。 - 生体サンプルは過去約12週間以内にFIVワクチンを接種されていない動物から得る請求項25記載の方法。
- ポリペプチドはFIV envである請求項25記載の方法。
- ポリペプチドは、配列番号1、配列番号2、配列番号3、配列番号4、配列番号5からなる群から選択される請求項25記載の方法。
- ネコがFIVに対するワクチンを接種されたことがあるか、またはFIVに自然感染したかを判定する方法であって、FIV envポリペプチドに対するネコの免疫反応を判定することを含む方法。
- ネコがFIVに対するワクチンを接種されたことがあるか否かを診断するためのキットの製造におけるFIV envに由来するポリペプチドの使用。
- 該方法が、ネコがFIVに感染したことがあるかを判定することをも含む、請求項30記載の使用。
- 配列番号1、配列番号2、配列番号3、配列番号4、配列番号5からなる群から選択されるポリペプチド。
- 化学式
(P1)−(L1)−(P2)
[式中、
P1はELGSNQNQFFSKVPPELWKRYN [配列番号11]であり、
P2はNRWEWRPDFESEKC [配列番号16]であり、
L1は2〜20回交互に繰り返すS残基とK残基からなり、SかKのいずれかで始まり終わるポリペプチドである]
を有するポリペプチド。 - 化学式
(P1)−(L1)−(P2)
[式中、
P1はCNRWEWRPDFESEK [配列番号17]であり、
P2はMQELGSNQNQFFSKVPPELWKRYN [配列番号12]であり、
L1は2〜20回交互に繰り返すS残基とK残基からなり、SかKのいずれかで始まり終わるポリペプチドである]
を有するポリペプチド。 - 配列番号1、配列番号2、配列番号3、配列番号4、配列番号5の抗原性断片および機能的に同等な変異体からなる群から選択されるポリペプチド。
- 化学式
[(P1)a−(L1)b−(P2)c]n
[式中、
P1は元来のFIV env配列(アミノ酸696〜717)、またはその抗原性断片および機能的に同等の変異体であるポリペプチドであり、P1は逆位でもよく、
L1は2〜20回交互に繰り返すS残基とK残基からなり、SかKのいずれかで始まり終わるポリペプチドであり、
P2は元来のFIV表面envタンパク質(アミノ酸396〜408)、またはその抗原性断片および機能的に同等の変異体であるポリペプチドであり、P2は逆位でもよく、
a、c、nは、独立して、1〜3の整数であり、
bは0から1の整数である]
を有するポリペプチド。 - P1はELGSNQNQFFSKVPPELWKRYN [配列番号11]、
MQELGSNQNQFFSPPELWKRYN [配列番号12]、
ELGSNQNQFFSK [配列番号13]、
LGSNQNQFFS [配列番号14]、および
TAFAMQELGSNQNQFFSKIPLELWTR [配列番号15]
からなる群から選択される、請求項36記載のポリペプチド。 - P2は、NRWEWRPDFESEKC [配列番号16]、
CNRWEWRPDFESEK [配列番号NO:17]、
CWEWRPDFESER [配列番号18]、および
CNRWDWRPDFESKK [配列番号19]
からなる群から選択される、請求項36記載のポリペプチド。
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