JP2007326871A - ビタミンｄ化合物類 - Google Patents

Abstract

【課題】選択的な生物学的性質を有し、容易に入手可能または接近可能な出発物質からの接近性が良好である、新規なビタミンＤ類化合物の提供。
【解決手段】式Ｉ

（式中、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ａ、ＢおよびＸは特定の有機基であり、ｎは２または３である）で示されるビタミンＤ化合物。これらの化合物の製造方法、これらの化合物の製造方法における貴重な中間体の製造方法およびそれらの薬物療法および化粧品での使用。
【選択図】なし

Description

本発明は新規のビタミンＤ化合物、さらに貴重な新規の中間体に関する。

ビタミンＤ化合物またはビタミンＤ関連化合物（「ビタミンＤ化合物」）は強力の生物学的活性を有し、そしてカルシウム代謝の問題点が役割を果たす症例のすべてにおいて使用することができることは一般的に知られている。数年前、種々の活性ビタミンＤ化合物が他の薬物療法的活性を有し、そして例えば、ある種の皮膚および骨疾患の治療、化粧品用途、並びに真性糖尿病、高血圧症およびリウマチ様関節炎と喘息のような炎症性疾患を含む、細胞分化、細胞増殖、または免疫系の平衡失調に関連する疾病の治療に使用して成功することができることが見出された。さらに、これらの化合物は種々の獣医学的用途および診断目的に使用することができる。

上記の用途に重要であるビタミンＤ化合物はヒドロキシル化ビタミンＤ、特に１α−，２４および／または２５−位置でヒドロキシル化されたビタミンＤ化合物である。活性ビタミンＤ化合物の分野での最近の発展は１９−ノル−ビタミンＤ化合物（特許文献１）およびＣ_１８−修飾ビタミンＤ化合物（特許文献２）であり、好適には１α−位置で、場合によりＣ_１７−側鎖でヒドロキシル化されたビタミンＤ化合物である。所期の活性を向上させ、そして有害な副作用を抑制するために、Ｃ_１７−側鎖の他の修飾が提案されていた。Ｃ_１７−側鎖の修飾の例は２２−オキサ修飾（例えば、特許文献３）、フルオロ置換、エポキシ基（例えば、特許文献４）などである。さらに、長い側鎖を持つある種の化合物（ホモ化合物）が、文献中例えば、特許文献５、特許文献６および特許文献７、並びに非特許文献１および非特許文献８による報文中に開示されている。非特許文献１はトランス二重結合を２４−同族化された類似体のＣ−２２に挿入することを記載している。しかし、この二重結合の挿入は、飽和側鎖を持つ各類似体と比較して、活性に顕著には影響しない。しかし、非特許文献２が記載しているように、天然のＣ−２２位置の二重結合のＣ−２４位置への転位によっても選択性の所期の改善は得られない。一般的に、上記のＣ_１７−側鎖修飾ビタミンＤ化合物は、それの選択的活性、即ち、有害な副作用のない所期の活性という点に関して、まだ完全には満足できるものではない。

さらに、Ｃ_１７−側鎖修飾ビタミンＤ化合物の接近容易性はしばしば不十分または不良である。前記のＣ_１７−側鎖修飾ビタミンＤ化合物の合成においては、しばしば多数の困難な合成工程が含まれ、そして出発物質もしばしば容易には入手できない。

欧州特許出願公開第０３８７０７７号明細書 欧州特許出願公開第０５２１５５０号明細書 国際公開第９０／０９９９１号明細書 国際公開第９２／２１６９５号明細書 米国特許第５，０３０，７７２号明細書 米国特許第５，２０６，２２９号明細書 米国特許第５，２５０，５２３明細書 Ｐｅｒｌｍａｎ等（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９９０，２９，１９０−６） ＣｈｏｄｙｎｓｋｉとＫｕｔｎｅｒ（Ｓｔｅｒｏｉｄｓ，１９９１，５６，３１１−５）

実際のところ、かかるビタミンＤ化合物の製造のための両出発物質は容易に入手可能または接近可能なものでなければならない。また、多工程の製造方法によって、十分な選択性および効率を目指す所期の目的が達成されなければならない。

それ故、本発明の目的は、選択的な生物学的性質を有し、容易に入手可能または接近可能な出発物質からの接近性が良好である、新規な種類のビタミンＤ化合物を提供することである。

本発明によれば、この目的は、一般式

（式中、
Ｒ_１は水素原子またはヒドロキシ基であり、
Ｒ_２は水素原子であるか、または（Ｃ_１−Ｃ_３）アルキル、フェニルおよびトリフロロメチルからなる群から選択された置換基であり、
Ｒ_３は分枝鎖状もしくは非分枝鎖状（Ｃ_１−Ｃ_４）アルキル基、シクロプロピル基またはＣＦ_３基であり、
ＡとＢは各々独立して水素原子もしくはメチル基であるか、またはＡとＢは一緒になってメチレン基を形成し、
ＸはＣＨ_２または酸素であり、
ｎは２または３である）
で示される新規のビタミンＤ化合物によって達成することができる。

一般式Ｉで示される、本発明の上記の新規ビタミンＤ化合物は貴重な物質である。実施例で示されるように、生物学的結果から、これらの化合物は生物学的活性物質として有望であり、そして上記のすべての薬物療法の指示中で、特に骨粗鬆症、腎性骨形成異常症、骨軟化症、乾癬（および他の過増殖性皮膚疾患）、湿疹および皮膚炎のような皮膚障害、筋障害、白血症、乳房癌と結腸癌、骨肉腫、鱗状細胞癌、黒色腫、ある種の免疫学的障害並びに移植拒絶の治療に使用することができる。ＣｈｏｄｙｎｓｋｉとＫｕｔｎｅｒ（Ｓｔｅｒｏｉｄｓ，１９９１，５６，３１１−５）による記載にように、化学的に関連する（２４Ｅ）−２４，２４ａ−デヒドロ−２４，２４−ジホモ化合物と比較して、本発明の化合物は優れた生物学的活性、特に上記の薬物療法の指示のための活性を有する。

さらに、本発明の新規ビタミンＤ化合物は創傷治療に使用することができ、そして皮膚を保存、調節および／または保護するために、そしてしわ、乾燥皮膚、皮膚のたるみおよび不十分な皮脂分泌のような種々の皮膚異常を改善するために、クリーム剤、ローション剤、軟膏剤などのような化粧組成物中に取り込むことができる。新規のビタミンＤ化合物
はまた診断目的に使用することができる。

上記の置換基Ｒ_３の適切な例はメチル、トリフルオロメチル、エチル、イソプロピルおよびシクロプロピルである。

一般式Ｉ
（式中、
Ｒ_１がヒドロキシ基であり、
Ｒ_２が水素またはメチルであり、
Ｒ_３がメチル、エチル、イソプロピルまたはシクロプロピルであり、
ＸがＣＨ_２であり、
ＡとＢが各々独立して水素原子であるか、またはＡとＢが一緒になってメチレン基を形成し、
ｎは２である）
を有するビタミンＤ化合物は好適である。

本発明の上記の新規ビタミンＤ化合物が、容易に入手できる出発物質から容易に製造することができることは本発明の特別の長所である。特に、適切な置換基をＣ_２５に所望通り結合させることが、容易に接近できるエステル化合物から出発することによって容易に達成できることが見出された。

従って、本発明はまた、一般式

（式中、
Ｒ_１′は水素原子または保護されたヒドロキシ基であり、
Ｒ_２、Ａ、Ｂ、Ｘおよびｎは上記の意味を有し、
Ｒ_４は保護されたヒドロキシ基であり、そして
Ｒ_５は（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル基である）
で示されるエステル化合物を、一般式
Ｒ_３Ｍ(Ｘ)_ｐ （ＩＩＩ）
（式中、
Ｒ_３は上記の意味を有し、
Ｘは塩素、臭素またはヨウ素であり、
Ｍはリチウムおよびマグネシウムから選択された金属であり、
ｐはＭの原子価に依存して０または１である）
で示される有機金属化合物と反応させ、次いで脱保護することを、本発明によって特徴とする、一般式Ｉで示される上記のビタミンＤ化合物の製造方法に関する。

上記の一般式ＩＩＩで示される有機金属化合物の適切な例は、イソプロピルリチウム、シクロプロピルリチウムおよびエチルリチウムのようなリチウム化合物並びにイソプロピルマグネシウムクロリド、シクロプロピルマグネシウムクロリドとメチルマグネシウムクロリドおよび対応するブロミドとヨウジドのようなグリニャール試薬である。

同様に興味ある方法では、式Ｉで示される化合物は、最終化されたＣ_１７−側鎖を持つＣＤ環部分から出発して、所望のジエンまたはトリエン系が生成するようにＡ環部分を結合させることによって組立てることができる。それ故、本発明はまた、
一般式

（式中、
Ｒ_２、Ｒ_５、Ｘおよびｎは上記の意味を有し、
Ｒ_４′は場合により保護されたヒドロキシ基である）
で示されるエステル化合物を一般式
Ｒ_３Ｍ(Ｘ)_ｐ （ＩＩＩ）
（式中、記号は上記の意味を有する）
で示される有機金属化合物と反応させた後、得られた、一般式

を有するヒドリンダン（ｈｙｄｒｉｎｄａｎｅ）化合物を、Ｒ_４′が保護されたヒドロキシ基である場合、脱保護して、次いで一般式

で示される対応するヒドリンダン−４−オン化合物に酸化して、式ＶＩで示される化合物を、必要に応じてヒドロキシ基を保護した後、
（ａ）一般式

（式中、Ｒ_１′、Ｒ_４、ＡおよびＢは上記の意味を有し）
で示されるウィッティッヒ試薬か、または
（ｂ）エノール化およびエノール形ヒドロキシ基の誘導体化の後、一般式

（式中、Ｒ_１′とＲ_４は上記の意味を有する）
で示されるエニン化合物、
と転化させ、次いで水素化および異性化して、一般式Ｉ（式中、ＡとＢは一緒になってメチレン基を形成する）で示される化合物を生成し、次いで脱保護することを本発明によって特徴とする、上記のビタミンＤの製造方法に関する。

出発化合物または反応物中のヒドロキシ基は適切なエステル化またはエーテル化試剤による反応によって保護することができる。適切なエステル化試剤は、２〜５個の炭素原子を有するアルキルクロロ炭酸エステル、または安息香酸のような芳香族カルボン酸もしくは１〜４個の炭素原子を有する飽和脂肪族カルボン酸或いはエステル化反応に適したかかる酸の誘導体である。エーテルの形態にあるヒドロキシ基を保護するためには、主として、この目的のために知られているものであればどのようなエステル化試剤でも適切であり、例えば、トリアルキルシリルイミダゾール、トリアルキルシリルハリド、トリアルキルシリルトリフラート（−トリフルオロメタンスルホネート）、ジフェニルアルキルシリルハリド、メトキシメチルクロリドもしくはジフェニルアルキルシリルトリフラート、またはそれらの誘導体（アルキル基は１〜６個の炭素原子を有する）が適切である。

トリメチルシリルクロリド、ｔ−ブチルジメチルシリルクロリド、ジメチル−（１，１，２−トリメチルプロピル）−シリルクロリド、ｔ−ブチルジメチルシリルトリフラート、またはトリメチルシリル−イミダゾールはこの目的に特に適切である。その理由は、これらのエステル化剤が、保護されるヒドロキシ基と容易に反応してエーテル官能基を形成し、それらが一方では反応または考慮中の反応の条件下で十分安定であるが、他方では容易に除去（脱保護）されて元のヒドロキシ基に回復することができるからである。ｔ−ブチルジメチルシリルクロリドまたはトリフラートは、これらの基が保護基として優れて適切であることが見出されているから、好適である得る。

エノール化化合物ＶＩのエノール性ヒドロキシ基は好適にはＮ−アリールトリフルイミドとの反応によって誘導体化されて、トリフラートを生成する。アリール基の適切な例はフェニルおよびクロロピリジルである。

ヒドリンダン−４−オン化合物ＶＩは、ヒドリンダン化合物Ｖを、好適にはピリジニウムクロロクロメートまたはプリジニウムジクロメートのようなクロム含有酸化剤およびルテニウムテトラオキシドから選択された酸化剤によって酸化することによって製造される。

上記の一般式ＩＩで示される中間体エステル化合物は新規である。それ故、本発明はまたこの中間体並びにこの化合物の製造方法に関する。

一般式ＩＩ（式中、ＡとＢは一緒になってメチレン基を形成する）で示されるエステル化合物は好都合には、一般式

（式中、
Ｒ_２、Ｒ_５、Ｘおよびｎは上記の意味を有し、
Ｒ_６は誘導体化されたヒドロキシ基である）
で示されるエステル化合物を一般式

（式中、Ｒ_１′とＲ_４は上記の意味を有する）
で示されるエニン化合物と反応させ、次いで水素化および異性化することによって製造することができる。

この反応は好適には、２つの反応工程、即ち最初にトリエチルアミンのような有機塩基の影響下および（ＰＰｈ_３）_２ＰｄＣｌ_２のようなパラジウム触媒の存在下で成分を反応させること、および次いで得られた生成物をリンドラー触媒（Ｐｄ−ＣａＣＯ_３、鉛で被毒処理された）のような適切な触媒の影響下で水素による水素化を行った後、得られたプレビタミン配置を一般式ＩＩで示されるビタミン構造に異性化することによって実施することができる。

別法として、一般式ＩＸで示される前記エステル化合物は、一般式

（式中、Ｒ_２、Ｒ_５、Ｘおよびｎは上記の意味を有する）
で示される修飾されたウィンダウス・グランドマンのケトンを、一般式

（式中、
Ｒ_１′、Ｒ_４、ＡおよびＢは上記の意味を有する）
で示されるウィッティッヒ試薬と反応させることによって容易に合成することができる。

一般式ＩＩで示される中間体エステル化合物の製造方法のさらなる別法においては、一般式

で示される化合物を還元剤と反応させた後、得られた、一般式

を有する化合物を一般式

（式中、
Ｒ_２およびＲ_５は上記の意味を有し、
Ｒ_７は分枝鎖状または非分枝鎖状（Ｃ_１−Ｃ_４）アルコキシ、フェノキシ、フェニルおよびジ（Ｃ_１−Ｃ_４）アルキルアミノからなる群から選択された置換基であり、そして
ｑはｎが１である場合０または１であり、そしてｑはｎが２である場合０である）
で示される化合物で転化させる。

化合物ＸＩの還元は金属アルキルヒドリドのような種々の還元剤で行うことができる。好適な還元剤はジイソブチルアルミニウムヒドリドである。

式ＸＩで示される出発化合物は好都合には、容易に入手できる物質から、例えば、ビタミンＤ化合物（Ｘ＝ＣＨ_２、ｎ＝２およびＡとＢは一緒になってメチレン基を形成する）の合成の場合、反応の概要１に示されるように、容易に入手できるヒオデオキシコール酸１から当業界で既知の方法によって製造することができ、脱水によるΔ_５結合の導入から始めて、側鎖の炭素１個のホモログ化（例えば、アルント−アイステルトのジアゾ−ケトン合成によって）、エステル化、臭素化／脱臭化水素によるΔ_５,_７系の導入、およびＵＶ照射によるセコステロイドの形成を行って化合物６を得ることができる。化合物６はＲｙｚｎａｒ（Ａｃｔａ Ｐｏｌ．Ｐｈａｒｍ．１９８８，４５，２１４−８）によって記載された方法に従って化合物１０に転化することができる。

反応の概要１

式ＸＩＩＩで示されるウィッティッヒ試薬は当業界で既知の方法に従って製造することができる。好適な置換基Ｒ_７はエトキシ基である。

一般式ＩＩで示される中間体エステル化合物の製造方法にためのさらなる別法においては、一般式

で示される化合物を還元剤と反応させた後、得られた、一般式

を有する化合物を、一般式

（式中、Ｒ_５は上記の意味を有する）
で示される化合物と転化させる。

上記の薬物療法の指示のための新規ビタミンＤ化合物の適用範囲を改善するために、化合物は通常、薬学的に許容される担体および／または少なくとも１種の薬学的に許容される補助物質の外に、活性成分として有効量の前記ビタミンＤ化合物を含む医薬組成物に加工される。かかる組成物は、単位用量当たり約０．１μｇ〜約０．１ｍｇの活性成分を含む、経口、局所（皮膚）または非経口投与のための単位剤形で送達することができる。

診断目的のための組成物は、本発明のビタミンＤ化合物の外に、相溶性で無毒性の担体および／または少なくとも１種の補助物質を含むことができる。

化粧組成物は、本発明の有効量（単位剤形中で単位用量当たり約０．１μｇ〜約０．１ｍｇの範囲内）のビタミンＤ化合物の外に、化粧品的に許容される無毒性の担体および／または少なくとも１種の補助物質を含むことができる。

最後に、本発明は、温血生物での自己免疫疾患（真性糖尿病を含めて）、アクネ、脱毛症、皮膚老化（光老化を含めて）、免疫系の平衡失調、リウマチ様関節炎および喘息のような炎症性疾患、並びに異常細胞分化および／または異常細胞増殖に関連する疾患を含む多くの疾病状態を治療および予防する方法において、上記の医薬組成物を所期の目的に有効な量で前記生物に投与することまたは前記生物を治療することを含んでなる、多くの疾病状態の治療および予防方法に関する。

本発明はまた、固形、皮膚および血液癌、特に白血症のような血液癌、乳房癌、並びに黒色腫および鱗状細胞癌のような皮膚癌の治療のための医薬組成物の使用に関する。

特にクリーム剤、ローション剤、軟膏、リポソームおよびゲル剤よりなる群から選択される上記の化粧組成物は、不十分な皮膚の硬度または構造、不十分な皮膚の水和、しわ、
および不十分な皮脂分泌の治療および予防に使用することができる。

次の特定の実施例を参照して本発明について詳細に説明する。
実施例では次の略語を使用する。
ＴＨＧ＝テトラヒドロフラン
ＴＢＤＭＳ＝ｔ−ブチルジメチルシリル
ＤＭＦ＝Ｎ，Ｎ−ジメチルフォルムアミド
Ａｃ＝アセチル

＜実施例Ｉ＞
（５Ｚ，７Ｅ）（１Ｓ，３Ｒ）−９，１０−セコ−２４ａ，２４ｂ−ジホモ−（２４ａＥ）−５，７，１０（１９），２４ａ−コレスタテトラエン−１，３，２５ートリオール １６
反応式は次の合成反応の概要Ａに示す。

合成反応の概要Ａ

（ａ）化合物１１の製造
１０８ｍｌのＴＨＦ中の１．８ｇ（３．９ミリモル）のエステル１０の溶液に、１０８ｍｌの０．１Ｎ ＫＯＨメタノール性溶液を添加する。ＴＬＣ（約３時間）上で物質が観察されなくなるまで、混合物を室温で撹拌する。混合物を１０ｍｌの１Ｎ ＨＣｌで中和する。溶媒を除去し、酢酸エチルで抽出して、１．５７ｇ（９６％収率）のジヒドロキシエステル１１を無色の油の形態で得る。生成物１１をＩＲおよび^１Ｈ−ＮＭＲによって同定する。
ＩＲ（ＣＨＣｌ_３）：３４５０、２９５０、２８９０、１７０５ｃｍ^−１。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，δ）：０．５４（３Ｈ，ｓ，１８−ＣＨ_３）、３．６６（３Ｈ，ｓ，ＣＯＯＣＨ_３）、４．１７（１Ｈ，ｍ，３−Ｈ）、４．４０（１Ｈ，ｍ，１−Ｈ）、４．９９（１Ｈ，ｓ，１９Ｚ−Ｈ）、５．３２（１Ｈ，ｓ，１９Ｅ−Ｈ）、６．０４（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１１ Ｈｚ，７−Ｈ）、６．３５（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１１ Ｈｚ，６−Ｈ）ｐｐｍ。

（ｂ）化合物１２の製造
イミダゾール（１．３ｇ、２２．８ミリモル）および１．３ｇ（８．７ミリモル）のｔ−ブチルジメチルシリルクロリドを、１０ｍｌのＤＭＦ中の１．５ｇ（３．６ミリモル）のジヒドロキシエステル１１の溶液に添加する。ＴＬＣ（約２．５時間）上で物質が観察されなくなるまで、混合物を室温で撹拌する。ヘキサン／酢酸エチル４／１を用いて抽出し、ゲル濾過を行って、２．１５ｇ（９３％収率）のジシリル化エステル１２を無色の油の形態で得る。生成物１２をＵＶ、ＩＲおよび^１Ｈ−ＮＭＲによって同定する。
ＵＶ（ヘキサン）：λ_ｍａｘ＝２６４．８ｎｍ。
ＩＲ（ＣＨＣｌ_３）：２９５０、２８６０、１７０５ｃｍ^−１。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，δ）：０．０６（１２Ｈ，ｂ ｓ，Ｓｉ−ＣＨ_３）、０．５３（３Ｈ，ｓ，１８−ＣＨ_３）、０．８７（１８Ｈ，ｂ ｓ，Ｃ−ＣＨ_３）、３．６６（３Ｈ，ｓ，−ＣＯＯＣＨ_３）、４．１７（１Ｈ，ｍ，３−Ｈ）、４．４（１Ｈ，ｍ，１−Ｈ）、４．８６（１Ｈ，ｂ ｓ，Ｊ_ｇｅｍ＝１．８ Ｈｚ，１９Ｚ−Ｈ）、５．１８（１Ｈ，ｂ ｓ，Ｊ_ｇｅｍ＝１．８ Ｈｚ，１９Ｅ−Ｈ）、６．０２（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１１ Ｈｚ，７−Ｈ）、６．３５（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１１ Ｈｚ，６−Ｈ）ｐｐｍ。

（ｃ）化合物１３の製造
ジイソブチルアルミニウムヒドリド（１Ｍ、７５０μｌ、０．７５ミリモル）を、アルゴン下で２．５ｍｌのトルエン中の５００ｍｇ（０．７７ミリモル）のジシリル化エステル１２の溶液に−７０℃で滴々に添加し、温度を−６０℃以下に保持する。ＴＬＣ（約３時間）上で物質が観察されなくなるまで、混合物を−６５℃で撹拌する。反応混合物の後処理、セライト濾過およびシリカゲル・クロマトグラフィーを行って、３３０ｍｇ（６９％収率）のアルデヒド１３を無色の油の形態で得て、５０ｍｇ（１１％収率）のＣ−２４ａアルコールを副生成物を得た。生成物１３をＵＶ、ＩＲ、^１Ｈ−ＮＭＲ、_１３Ｃ−ＮＭＲおよびＥＩＭＳによって同定する。
ＵＶ（ヘキサン）：λ_ｍａｘ＝２６４．６ｎｍ。
ＩＲ（ＣＨＣｌ_３）：２９３０、１７２２、１６４５ｃｍ^−１。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，δ）：０．０４９（１２Ｈ，ｂ ｓ，ＳｉＣＨ_３）、０．５１（３Ｈ，ｓ，１８−ＣＨ_３）、０．８７（１８Ｈ，ｂ ｓ，Ｃ−ＣＨ_３）、４．２（１Ｈ，ｍ，３−Ｈ）、４．３（１Ｈ，ｍ，１−Ｈ）、４．８４（１Ｈ，ｂ ｓ，Ｊ_ｇｅｍ＝２．３ Ｈｚ，１９Ｚ−Ｈ）、５．１５（１Ｈ，ｂ ｓ，Ｊ_ｇｅｍ＝２．３ Ｈｚ，１９Ｅ−Ｈ）、６．０２（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１１ Ｈｚ，７−Ｈ）、６．３５（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１１ Ｈｚ，６−Ｈ）、９．７４（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝１．８ Ｈｚ，ＣＨＯ）ｐｐｍ。
^１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，δ）：−５．０９、−４．８０、−４．６９、１１．９４、１８．１５、１８．２２、１８．６９、２２．１１、２３．３６、２５．７９、２５．８４、２７．６８、２８．８４、３５．３９、３５．９７、４０．５６、４４．３２、４４．７８、４５．７５、４６．０１、５６．１９、５６．２８、６７．４９、７２．０４
、７７．２１、１１１．２２、１１７．９０、１２３．１２、１３４．９９、１４０．９１、１４８．２５、２０２．９７ｐｐｍ。
ＥＩＭＳ（ｍ／ｚ）：６１４（Ｍ^＋）、４８２（１００）、２４８（９５）；
理論値（Ｃ_３７Ｈ_６６Ｏ_３Ｓｉ_２） ６１４．４５４６、実測値 ６１４．４５５１。

（ｄ）化合物１４の製造
２ｍｌのＴＨＦ中の８９ｍｇ（０．１４５ミリモル）のアルデヒド１３の溶液を、アルゴン下で２ｍｌのＴＨＦ中の７０ｍｇ（０．２ミリモル）のエトキシカルボニルメチレントリフェニルホスホランの溶液に室温で添加する。混合物を室温で１６時間撹拌する。シリカゲル・クロマトグラフィーを行って、１０２ｍｇ（９１％収率）のエステル１４を無色の油として得る。化合物１４をＵＶ、ＩＲ、^１Ｈ−ＮＭＲおよび_１３Ｃ−ＮＭＲによって同定する。
ＵＶ（ヘキサン）：λ_ｍａｘ＝２６４．６ｎｍ。
ＩＲ（ＣＨＣｌ_３）：２９５１、１７０８、１６５２ｃｍ^−１。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，δ）：０．０４９（１２Ｈ，ｂ ｓ，Ｓｉ−ＣＨ_３）、０．５２（３Ｈ，ｓ，１８−ＣＨ_３）、０．８９（１８Ｈ，ｂ ｓ，Ｃ−ＣＨ_３）、１．２７（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．１ Ｈｚ，−ＣＨ_２ＣＨ_３）、４．２（１Ｈ，ｍ，３−Ｈ）、４．３（１Ｈ，ｍ，１−Ｈ）、４．８４（１Ｈ，ｂ ｓ，Ｊ_ｇｅｍ＝２．４ Ｈｚ，１９Ｚ−Ｈ）、５．１５（１Ｈ，ｂ ｓ，Ｊ_ｇｅｍ＝２．４ Ｈｚ，１９Ｅ−Ｈ）、５．７８（１Ｈ，ｄ ｔ，Ｊ_{ｔｒａｎｓ}＝１５．７ Ｈｚ，Ｊ_ｖｉｃ＝１．４ Ｈｚ、２４ｂ−Ｈ）、６．０２（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１１ Ｈｚ，７−Ｈ）、６．３５（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１１ Ｈｚ，６−Ｈ）、６．９０（１Ｈ，ｄ ｔ，Ｊ_{ｔｒａｎｓ}＝１５．８ Ｈｚ，Ｊ_ｖｉｃ＝７．２ Ｈｚ，２４ａ−Ｈ）ｐｐｍ。
^１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，δ）：−５．０５、−４．７７、−４．６６、１１．９８、１４．２７、１８．１３、１８．２３、１８．７９、２２．１７、２３．５０、２４．７６、２５．８４、２７．６９、２８．８９、３２．６４、３５．５１、３５．９８、４０．６７、４４．９０、４５．８１、４６．１０、５６．３７、５６．５２、６０．０６、６７．５７、７２．１１、１１１．１５、１１７．９７、１２１．３０、１２３．１７、１３５．０６、１４０．９３、１４８．４４、１４９．３７ｐｐｍ。

（ｅ）化合物１５の製造
１ｍｌのＴＨＦ中のエステル１４（６０ｍｇ、０．０８８ミリモル）を、アルゴン下で０．７５ｍｌのＴＨＦで希釈したジエチルエーテル中のメチルマグネシウムブロミド（０．１ｍｌ、０．３ミリモル）の溶液に室温で添加する。混合物を室温で２４時間撹拌する。シリカゲル・クロマトグラフィーを行って３１．３ｍｇ（５４％収率）のアルコール１５を無色の油として得る。

（ｆ）化合物１６の製造
１ｍｌのＴＨＦ中の３１ｍｇ（０．０４６ミリモル）のアルコール１５の溶液を、アルゴン下で１ｍｌのＴＨＦ中の３１５ｍｇ（１ミリモル）のテトラブチルアンモニウムフルオリドの溶液に添加する。ＴＬＣ（約１６時間）上で物質が観察されなくなるまで、混合物を室温で撹拌する。酢酸エチルを用いて抽出し、次いでシリカゲル・クロマトグラフィーを行って、１９．３ｍｇ（９４％収率）のトリオール１６を無色の油として得る。生成物１６をＵＶ、^１Ｈ−ＮＭＲおよびＥＩＭＳによって同定する。
ＵＶ（ヘキサン）：λ_ｍａｘ＝２６３．８ｎｍ。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，δ）：０．５４（３Ｈ，ｓ，１８−ＣＨ_３）、１．３１（６Ｈ，ｓ，２６，２７−ＣＨ_３）、４．２（１Ｈ，ｍ，３−Ｈ）、４．４（１Ｈ，ｍ，１−Ｈ）、５．０（１Ｈ，ｂ ｓ，１９Ｚ−Ｈ）、５．３（１Ｈ，ｔ，Ｊ_ｇｅｍ＝１．７ Ｈｚ，１９Ｅ−Ｈ）、５．８５（１Ｈ，ｄ，Ｊ_{ｔｒａｎｓ}＝１６．０ Ｈｚ，２４ｂ−Ｈ）、６．０２（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１１ Ｈｚ，７−Ｈ）、６．３５（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１１ Ｈ
ｚ，６−Ｈ）、７．１（１Ｈ，ｍ，Ｊ_{ｔｒａｎｓ}＝１６ Ｈｚ，２４ｂ−Ｈ）ｐｐｍ。
ＥＩＭＳ（ｍ／ｚ）：４４２（Ｍ^＋，３９）、４２４（Ｍ^＋−Ｈ_２Ｏ，９５）、４０６（Ｍ^＋−２Ｈ_２Ｏ，９３）、３８８（Ｍ^＋−３Ｈ_２Ｏ，１００）、２８５（１００）；理論値（Ｃ_２９Ｈ_４６Ｏ_３）４４２．３４４７、実測値 ４４２．３４４０。

＜実施例ＩＩ＞ 細胞内ビタミンＤ受容体に対する親和性
本発明によるビタミンＤ化合物をエタノール中に１０^−１３〜１０^−７Ｍの範囲内の濃度で溶解させる。子ウシ胸腺の細胞内ビタミンＤ受容体（ＶＤＲ）に対する親和性を生物学的検定法で決定する。この検定法では、ＶＤＲに特異的に結合する^３Ｈ−１α，２５−ジヒドロキシコレカルシフェロール（^３Ｈ−１α，２５−ＤＨＣＣ）は試験化合物によって置き換えられる。既知の２４，２４−ジホモ−Δ（２４−２４ａ）カルシトリオールはカルシトリオールよりもＶＤＲに対し実質的に低い親和性（１％以下）を有するが、２４，２４−ジホモ−Δ（２４ａ−２４ｂ）カルシトリオール（実施例Ｉの化合物１６）は驚くべきことには、カルシトリオールより９倍もＶＤＲに対し高い親和性を有する。ＶＤＲに対する高い親和性は生物学的に活性な化合物であることを示す。

＜実施例ＩＩＩ＞ ビタミンＤ結合タンパク質に対する親和性
ビタミンＤ結合タンパク質（ＤＢＰ）はビタミンＤおよびその血中代謝物の特異的な担体である。ＤＢＰに対する結合が強いと細胞内でのＶＤＲへの接近が減少するから、ビタミンＤ化合物の生物学的活性はそれらのＤＢＰに対する結合に依存する。ＤＢＰに対する結合はまた循環中のビタミンＤ誘導体の半減期に影響する。弱い結合物質は急速に代謝され、このことは局所適用では好都合な側面である。

検定法では、ＤＢＰを^３Ｈ−１α，２５−ＤＨＣＣおよび１α，２５−ＤＨＣＣと共にか、または研究するビタミンＤ化合物と共にインキュベートする。この目的のために、ビタミン化合物をエタノール中に１０^−１１〜２．５×１０^−６Ｍの範囲内の濃度で溶解させる。次いで、結合／非結合^３Ｈ−１α，２５−ＤＨＣＣのパーセントを算出する。ＤＢＰはヒトの全血清から精製される。２４，２４−ジホモ−Δ（２４−２４ａ）−カルシトリオールおよび２４，２４−ジホモ−Δ（２４ａ−２４ｂ）カルシトリオールは両方ともカルシトリオールよりもＤＢＰに対しずっと弱い結合物質である（夫々、２％および３．５％）。

＜実施例ＩＶ＞ 細胞分化
研究するビタミンＤ化合物をエタノール中に１０^−１２〜１０^−６Ｍの範囲内の濃度で溶解させ、ＨＬ−６０検定法で細胞分化を誘発する能力について試験する。この検定法では、細胞分化が起っているかどうかを確認するために、ヒトの白血病細胞株ＨＬ−６０の生化学的検査を行う。

分化は、成熟パラターであるニトロブルーテトラゾリウム（ＮＢＴ）還元として示される。既知のカルシトリオールまたは研究するビタミンＤ化合物と共に培養した後、黒色ホルマザン沈着物を含有するパーセントを決定する。ＮＢＴ還元細胞のパーセントが増加することは細胞分化の増加を示す。

細胞培養物の増殖および活力は、細胞数の計測によって、およびトリパンブルー排除法によって確認される。ＨＬ−６０培養物中の細胞の活力および増殖はすべての試験において良好であった。カルシトリオール（既知）および２４，２４−ジホモ−Δ（２４ａ−２４ｂ）−カルシトリオールは、Ｈｌ−６０細胞の分化および成熟を誘発する活性が同等であり、他方既知の２４，２４−ジホモ−Δ（２４−２４ａ）−カルシトリオールは４倍活性が低い。最適効果は１０^−７〜１０^−６Ｍの範囲内の濃度に見出される。

Claims (3)

1. 一般式
   

   

   （式中、
   Ｒ₁は水素原子またはヒドロキシ基であり、
   Ｒ₂は水素原子であるか、または（Ｃ₁−Ｃ₃）アルキル、フェニルおよびトリフロロメチルからなる群から選択された置換基であり、
   Ｒ₃は分枝鎖状もしくは非分枝鎖状（Ｃ₁−Ｃ₄）アルキル基、シクロプロピル基またはＣＦ₃基であり、
   ＡとＢは各々独立して水素原子もしくはメチル基であるか、またはＡとＢは一緒になってメチレン基を形成し、
   ＸはＣＨ₂または酸素であり、
   ｎは２または３である）
   で示されるが、（５Ｚ，７Ｅ）（１Ｓ，３Ｒ）−９，１０−セコ−２４ａ，２４ｂ−ジホモ−（２４ａＥ）−５，７，１０（１９），２４ａ−コレスタテトラエン−１，３，２５−トリオールを除く、ビタミンＤ化合物。
2. 請求項１に記載の一般式Ｉにおいて、
   Ｒ₁がヒドロキシ基であり、
   Ｒ₂が水素またはメチルであり、
   Ｒ₃がメチル、エチル、イソプロピルまたはシクロプロピルであり、
   ＸがＣＨ₂であり、ＡとＢが各々独立して水素原子であるか、またはＡとＢは一緒になってメチレン基を形成し、そして
   ｎは２である、の請求項１に記載のビタミンＤ化合物。
3. 一般式
   

   

   （式中、
   Ｒ₁′は水素原子または保護されたヒドロキシ基であり、
   Ｒ₂、Ａ、Ｂ、Ｘおよびｎは請求項１に記載の一般式Ｉについて定義した意味を有し、
   Ｒ₄は保護されたヒドロキシ基であり、そして
   Ｒ₅は（Ｃ₁−Ｃ₆）アルキル基である）
   で示される化合物。