JP2007326789A - 内視鏡用組織蛍光染色剤組成物 - Google Patents
内視鏡用組織蛍光染色剤組成物 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2007326789A JP2007326789A JP2006156925A JP2006156925A JP2007326789A JP 2007326789 A JP2007326789 A JP 2007326789A JP 2006156925 A JP2006156925 A JP 2006156925A JP 2006156925 A JP2006156925 A JP 2006156925A JP 2007326789 A JP2007326789 A JP 2007326789A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- tissue
- fluorescence
- staining
- endoscope
- confocal
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Ceased
Links
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 title claims abstract description 23
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 11
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 title abstract description 13
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 14
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 claims abstract description 5
- 150000001340 alkali metals Chemical group 0.000 claims abstract description 5
- 229910052784 alkaline earth metal Inorganic materials 0.000 claims abstract description 5
- 150000001342 alkaline earth metals Chemical group 0.000 claims abstract description 5
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims abstract description 5
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 claims abstract description 4
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 claims abstract description 4
- RZSYLLSAWYUBPE-UHFFFAOYSA-L Fast green FCF Chemical compound [Na+].[Na+].C=1C=C(C(=C2C=CC(C=C2)=[N+](CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=2C(=CC(O)=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=CC=1N(CC)CC1=CC=CC(S([O-])(=O)=O)=C1 RZSYLLSAWYUBPE-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 43
- 239000004214 Fast Green FCF Substances 0.000 claims description 42
- 235000019240 fast green FCF Nutrition 0.000 claims description 42
- SJEYSFABYSGQBG-UHFFFAOYSA-M Patent blue Chemical compound [Na+].C1=CC(N(CC)CC)=CC=C1C(C=1C(=CC(=CC=1)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)=C1C=CC(=[N+](CC)CC)C=C1 SJEYSFABYSGQBG-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 17
- XKTMIJODWOEBKO-UHFFFAOYSA-M Guinee green B Chemical compound [Na+].C=1C=C(C(=C2C=CC(C=C2)=[N+](CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=2C=CC=CC=2)C=CC=1N(CC)CC1=CC=CC(S([O-])(=O)=O)=C1 XKTMIJODWOEBKO-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 11
- DGOBMKYRQHEFGQ-UHFFFAOYSA-L acid green 5 Chemical compound [Na+].[Na+].C=1C=C(C(=C2C=CC(C=C2)=[N+](CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=2C=CC(=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=CC=1N(CC)CC1=CC=CC(S([O-])(=O)=O)=C1 DGOBMKYRQHEFGQ-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 8
- -1 Brilliant Blue FCF Chemical compound 0.000 claims description 6
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 claims description 6
- HKTCVYHTGCMMTJ-UHFFFAOYSA-O benzyl-[4-[[4-[benzyl(ethyl)amino]phenyl]-(5-hydroxy-2,4-disulfophenyl)methylidene]cyclohexa-2,5-dien-1-ylidene]-ethylazanium Chemical compound C=1C=C(C(=C2C=CC(C=C2)=[N+](CC)CC=2C=CC=CC=2)C=2C(=CC(=C(O)C=2)S(O)(=O)=O)S(O)(=O)=O)C=CC=1N(CC)CC1=CC=CC=C1 HKTCVYHTGCMMTJ-UHFFFAOYSA-O 0.000 claims description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 77
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 37
- 210000002429 large intestine Anatomy 0.000 description 29
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 18
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 16
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 239000002344 surface layer Substances 0.000 description 15
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 description 14
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 13
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 13
- SGHZXLIDFTYFHQ-UHFFFAOYSA-L Brilliant Blue Chemical compound [Na+].[Na+].C=1C=C(C(=C2C=CC(C=C2)=[N+](CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=2C(=CC=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=CC=1N(CC)CC1=CC=CC(S([O-])(=O)=O)=C1 SGHZXLIDFTYFHQ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 10
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 10
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 9
- 229960004657 indocyanine green Drugs 0.000 description 8
- MOFVSTNWEDAEEK-UHFFFAOYSA-M indocyanine green Chemical compound [Na+].[O-]S(=O)(=O)CCCCN1C2=CC=C3C=CC=CC3=C2C(C)(C)C1=CC=CC=CC=CC1=[N+](CCCCS([O-])(=O)=O)C2=CC=C(C=CC=C3)C3=C2C1(C)C MOFVSTNWEDAEEK-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 238000000034 method Methods 0.000 description 8
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 8
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 8
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 7
- 235000012745 brilliant blue FCF Nutrition 0.000 description 7
- 239000004161 brilliant blue FCF Substances 0.000 description 7
- 229940055580 brilliant blue fcf Drugs 0.000 description 6
- 238000010226 confocal imaging Methods 0.000 description 6
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 6
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 6
- 238000001839 endoscopy Methods 0.000 description 6
- 238000007654 immersion Methods 0.000 description 6
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 6
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 6
- 239000012064 sodium phosphate buffer Substances 0.000 description 6
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 5
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 5
- 239000012859 tissue stain Substances 0.000 description 5
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 4
- 239000013065 commercial product Substances 0.000 description 4
- 210000001198 duodenum Anatomy 0.000 description 4
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 4
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M Potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 3
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000000695 excitation spectrum Methods 0.000 description 3
- 238000000799 fluorescence microscopy Methods 0.000 description 3
- 238000002189 fluorescence spectrum Methods 0.000 description 3
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 3
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KKAJSJJFBSOMGS-UHFFFAOYSA-N 3,6-diamino-10-methylacridinium chloride Chemical compound [Cl-].C1=C(N)C=C2[N+](C)=C(C=C(N)C=C3)C3=CC2=C1 KKAJSJJFBSOMGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010077544 Chromatin Proteins 0.000 description 2
- 206010009900 Colitis ulcerative Diseases 0.000 description 2
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 2
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000006994 Precancerous Conditions Diseases 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 201000006704 Ulcerative Colitis Diseases 0.000 description 2
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 2
- 229940023020 acriflavine Drugs 0.000 description 2
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 2
- 210000003483 chromatin Anatomy 0.000 description 2
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 238000002073 fluorescence micrograph Methods 0.000 description 2
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 2
- 238000007490 hematoxylin and eosin (H&E) staining Methods 0.000 description 2
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 2
- 230000001678 irradiating effect Effects 0.000 description 2
- 238000001000 micrograph Methods 0.000 description 2
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 2
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 2
- 239000002562 thickening agent Substances 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N (S)-malic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 241000681995 Bruchidius niger Species 0.000 description 1
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000018522 Gastrointestinal disease Diseases 0.000 description 1
- 206010017993 Gastrointestinal neoplasms Diseases 0.000 description 1
- WHXSMMKQMYFTQS-UHFFFAOYSA-N Lithium Chemical compound [Li] WHXSMMKQMYFTQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101100288498 Mus musculus Large1 gene Proteins 0.000 description 1
- 208000008469 Peptic Ulcer Diseases 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 description 1
- 210000001015 abdomen Anatomy 0.000 description 1
- 230000003187 abdominal effect Effects 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 238000000862 absorption spectrum Methods 0.000 description 1
- BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N alpha-hydroxysuccinic acid Natural products OC(=O)C(O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000002583 angiography Methods 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 210000001815 ascending colon Anatomy 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 1
- 239000001045 blue dye Substances 0.000 description 1
- 159000000007 calcium salts Chemical class 0.000 description 1
- 235000011089 carbon dioxide Nutrition 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 210000000038 chest Anatomy 0.000 description 1
- 238000002046 chromoendoscopy Methods 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 239000002872 contrast media Substances 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 210000001731 descending colon Anatomy 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000012631 diagnostic technique Methods 0.000 description 1
- 230000001079 digestive effect Effects 0.000 description 1
- 239000007884 disintegrant Substances 0.000 description 1
- 238000012137 double-staining Methods 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 210000004177 elastic tissue Anatomy 0.000 description 1
- 210000002472 endoplasmic reticulum Anatomy 0.000 description 1
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 1
- 210000003238 esophagus Anatomy 0.000 description 1
- 210000001723 extracellular space Anatomy 0.000 description 1
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 1
- 238000012757 fluorescence staining Methods 0.000 description 1
- 239000000989 food dye Substances 0.000 description 1
- 235000003599 food sweetener Nutrition 0.000 description 1
- 239000003205 fragrance Substances 0.000 description 1
- 230000002439 hemostatic effect Effects 0.000 description 1
- KHLVKKOJDHCJMG-QDBORUFSSA-L indigo carmine Chemical compound [Na+].[Na+].N/1C2=CC=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C(=O)C\1=C1/NC2=CC=C(S(=O)(=O)[O-])C=C2C1=O KHLVKKOJDHCJMG-QDBORUFSSA-L 0.000 description 1
- 229960003988 indigo carmine Drugs 0.000 description 1
- 235000012738 indigotine Nutrition 0.000 description 1
- 239000004179 indigotine Substances 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 1
- 229910052744 lithium Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000007449 liver function test Methods 0.000 description 1
- 210000003750 lower gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 239000001630 malic acid Substances 0.000 description 1
- 235000011090 malic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 125000001434 methanylylidene group Chemical group [H]C#[*] 0.000 description 1
- 210000003470 mitochondria Anatomy 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 231100000299 mutagenicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000007886 mutagenicity Effects 0.000 description 1
- 210000000633 nuclear envelope Anatomy 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 239000003002 pH adjusting agent Substances 0.000 description 1
- 208000011906 peptic ulcer disease Diseases 0.000 description 1
- 230000010412 perfusion Effects 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 235000011118 potassium hydroxide Nutrition 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 239000001044 red dye Substances 0.000 description 1
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- FQENQNTWSFEDLI-UHFFFAOYSA-J sodium diphosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O FQENQNTWSFEDLI-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 1
- 235000011121 sodium hydroxide Nutrition 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000012192 staining solution Substances 0.000 description 1
- 125000000542 sulfonic acid group Chemical group 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 235000019818 tetrasodium diphosphate Nutrition 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 231100000397 ulcer Toxicity 0.000 description 1
- 210000002438 upper gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 239000001043 yellow dye Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K49/00—Preparations for testing in vivo
- A61K49/001—Preparation for luminescence or biological staining
- A61K49/0013—Luminescence
- A61K49/0017—Fluorescence in vivo
- A61K49/0019—Fluorescence in vivo characterised by the fluorescent group, e.g. oligomeric, polymeric or dendritic molecules
- A61K49/0021—Fluorescence in vivo characterised by the fluorescent group, e.g. oligomeric, polymeric or dendritic molecules the fluorescent group being a small organic molecule
- A61K49/0023—Di-or triarylmethane dye
Abstract
【解決手段】次式(1)
[式中、R1は水素原子又はヒドロキシ基を示し、R3はR2cが結合したフェニル基又はメチル基を示し、R2a、R2b及びR2cのうち1〜3個は−SO3M(ここでMはアルカリ金属原子又はアルカリ土類金属原子を示す)又は−SO3NH4を示し、1個は−SO3 -を示し、残余は水素原子を示す]で表される化合物を含有する内視鏡用組織蛍光染色剤組成物。
【選択図】なし
Description
一般に、共焦点撮像システムとは、検出器の前にピンホールを置くことにより、組織内の焦点面のみの反射光を検出し、機械切削なしに組織内部の明確な画像を得ることができる技術である。通常、共焦点撮像システムは蛍光物質により染色された組織にレーザー光を走査してその蛍光像を観察する。一般に共焦点撮像システムでは、蛍光染色剤が必要である。
共焦点撮像システムを採用した共焦点内視鏡は、通常観察光学系と共焦点観察光学系の両者を有しているため、病変部のスクリーニングが可能であり、細胞を切り取らずに光学的な組織薄切による細胞の観察が低侵襲且つその場で可能となる点で有用である。
多田正大、磯 彰格 他(臨消内科、vol.7、no.2、1992) Gastroenterology 2004, vol.127, No.3, p.706-713 Gastrointestinal Endoscopy Clin of N Am, 2005, vol.12, p.715-731
で表される化合物を含有する内視鏡用組織蛍光染色剤組成物を提供するものである。
(2)白色光内視鏡と共焦点内視鏡を併せ持つ内視鏡による観察において、白色光に対しては、深青色のコントラストを組織に付与し、赤色の励起光に対しては蛍光を示す。このため上記の内視鏡の使用時に病変部の発見とその共焦点画像の取得が一つの色素で提供できる。
(3)式(1)の化合物は、蛍光を示し、また、分子にスルホン酸基を持っており、腸などを染色した際には細胞間隙や結合組織を良好に染色する。該色素の染色性はフルオレセインとは異なっており、これらの色素と併用することで、共焦点像観察において組織に関するより多くの情報を得ることができる。
(4)本発明の組織蛍光染色剤が、特に繊維組織の発達した腫瘍に対して、結合組織の状態を直接観察できることは重要である。動脈及び静脈の血管壁も好染され、腫瘍内部の血管を観察することができる。
(5)本発明の組織蛍光染色剤は、赤色に近い波長の蛍光を出すため、深部の焦点面からの蛍光を観察する際に蛍光が通過する組織による蛍光の減衰がフルオレセインと比して少なく、従って、より深部の組織の共焦点像を明瞭に得ることができる。
(6)本発明の組織蛍光染色剤は水に溶解した状態ではいずれの波長に対しても微かな蛍光しか示さない。しかし消化管内腔に撒布すると強い蛍光を発する。撒布による染色時に洗浄が不要且つ低いバックグラウンドの蛍光観察が可能であるという利点を持つ。
(7)従って、本発明の組織蛍光染色剤を用いれば、可視光及び蛍光、共焦点内視鏡観察下において、すなわち組織を採取することなく、病変部の表面及び組織内部の可視化を同時に行うことができ、その染色像が鮮明であることから、消化管疾患等の診断に有用である。
ファストグリーンFCFについて吸光スペクトル及び蛍光励起スペクトル測定を行った。ファストグリーンFCF(和光純薬製)を1.0mg/mLに調整し、分光光度計(島津製作所製、BioSpec−1600)により波長200〜750nmまでの吸光度を連続的に測定し、吸収極大となる波長を決定した。得られた吸収極大波長628nmを励起波長として照射し、その励起光の光軸に対して垂直方向に検出される散乱光の波長を分光蛍光光度計(島津製作所製、RF−1500)により測定し、628nmの励起極大波長及び652nmの蛍光極大波長を得た。図1に蛍光光度計にて測定した励起極大波長及び蛍光極大波長を示す。
同様の試験を行った結果、ブリリアントブルーFCFは、吸収極大波長が629nmであり、励起極大波長619nm、蛍光極大波長650nmであった。ギネアグリーンBは、吸収極大波長が620nmであり、励起極大波長624nm、蛍光極大波長635nmであった。パテントブルーVFは、吸収極大波長が639nmであり、励起極大波長641nm、蛍光極大波長654nmであった。ライトグリーンSFは、吸収極大波長が635nmであり、励起極大波長633nm、蛍光極大波長652nmであった。アルファズリンFGは、吸収極大波長が630nmであり、励起極大波長633nm、蛍光極大波長643nmであった。従って、式(1)の化合物は赤色波長領域の光源により励起され、蛍光を発することが示された。
インドシアニングリーンの蛍光スペクトラムを図2に示す。ファストグリーンFCFに比べ、蛍光強度が低いことがわかる。
染色剤の染色特異性を知るためにファストグリーンFCF(和光純薬製)を0.1Mリン酸ナトリウム緩衝液(pH7)を用いて2.0mg/mLに希釈調製し、共焦点顕微鏡(ライカ社製、TCS−SP2)を使用し観察を行った。
試料はマウスを開腹し大腸を摘出し、1センチ角に切り染色剤に浸漬させたものを用いた。
共焦点顕微鏡の観察条件は、He−Neレーザーを633nmの波長で照射し、650〜750nmの波長範囲で蛍光観察した。共焦点ピンホール径は1.00airyで、63倍油浸レンズを使用した。
図3に共焦点顕微鏡により撮影した画像を示す。ファストグリーンFCFは大腸の粘膜上皮の細胞間隙を蛍光造影することが示された。
実施例2で染色したファストグリーンFCFの染色性の比較を従来から使用されているフルオレサイト(Alcon製)で比較染色した。
実施例2同様に浸漬にて染色し、488nmの波長で励起させ、蛍光像を観察した。
共焦点顕微鏡の照射レーザー波長以外の条件は同じである。
図4にフルオレサイトによる染色像を、図5に二重染色像を示す。図4及び図5から、ファストグリーンFCFの持つ蛍光染色剤としての特徴は、フルオレセインとは好染部位が異なっていることが示された。これら2種類の蛍光染色剤を同時に用いることで、組織を構成する細胞の構造をより明瞭に観察可能となることが示された。
ファストグリーンFCF(和光純薬製)の染色性により共焦点顕微鏡で得られる画像の観察能が変わるため、染色性の評価を行った。
ファストグリーンFCFを0.1Mリン酸ナトリウム緩衝液(pH6)を用いて1.0mg/mLに調製し、その染色液100μLをマウス(ddY、11週齢、オス)の大腸に注入した。満遍なく、且つ染色剤の流出を防止して大腸を染色するために、マウスを開腹し、取り出した大腸の上行結腸側と下行結腸側を止血クリップで留めて注入した。
大腸の内腔側を共焦点顕微鏡(ライカ社製、TCP SP2)により、組織の断面を観察した。
撮影条件は共焦点ピンホール径1.00airyとし、20倍レンズを使用した。
図6に表層より5.0μm毎に断面像を観察し撮影したものを示す。本実施例により、ファストグリーンFCFは大腸粘膜の上皮細胞下にある粘膜固有層を良好に蛍光造影する。
医療用造影剤であるインドシアニングリーン(生理食塩水で1mg/mLに調整)を用いて組織染色を行った。マウスの大腸を灌流による方法で染色し、その摘出した大腸片の共焦点顕微鏡(ライカ社製、TCP SP2)による観察を行った。組織内観察の結果、染色性の特徴においては、ファストグリーンFCFと類似していたが、蛍光強度が非常に低く、十分な観察を行うのは困難だった。
ファストグリーンFCF(ファストグリーンFCF、和光純薬製)の染色性と組織浸透性を組織切片の観察により確認した。
実施例3と同様に染色を行ったマウスの摘出大腸の組織片をOCTコンパウンド(サクラファインテック社製、Tissue-Tek O.C.T compound)で包埋し、ドライアイスで急冷する事により凍結させた。それを6μmで薄切し凍結切片を作成して蛍光観察を行った。蛍光観察は共焦点顕微鏡(ライカ社製、TCP SP2)で行った。(撮影条件:40倍レンズを使用し、ピンホール径171.3μm)結果を図8に示す。
同じくOCTコンパウンドで包埋した組織切片をHE染色して観察したものを比較例として、図9に示す。これにより、ファストグリーンFCFは大腸粘膜の上皮細胞下にある粘膜固有層を良好に蛍光造影することが示され、整合性も保たれた。
本発明の組織染色剤組成物染色剤の部位による染色性評価を行った。十二指腸、大腸及び肝臓を摘出し観察した。
ファストグリーンFCFをpH6.0の生理食塩水を用いて調製し、10mg/mLとした。調製したファストグリーンFCFをマウス(ddY、11週齢、オス)の尾静脈から100μL投与し、5分後に開腹した。目視での浸透性及び共焦点顕微鏡(ライカ社製、TCP SP2)による染色性と蛍光性を観察した。
十二指腸は、目視でわかる程度にはっきりと深緑色に染色されていた。
細胞質ではなく細胞膜や細胞間隙が強く染色され、細胞の形と大きさを観察することができた。
共焦点顕微鏡による観察条件は、共焦点ピンホール径1.00airyであり、63倍油浸レンズを使用した。図10に表層から40μm付近の共焦点顕微鏡像を示す。
表層付近の細胞間隙、及び粘膜固有層がよく染色されていた。
共焦点顕微鏡の観察条件は共焦点ピンホール径1.00airyとし、63倍油浸レンズを用いて撮影した表層から約10μm付近の断面像を図11に示す。
マウス(ddY、11週齢、オス)の食道部分を摘出し、ブリリアントブルーFCFを用いて染色し、共焦点顕微鏡(ライカ社製、TCP SP2)で観察した。
用いたブリリアントブルーFCFは0.1Mリン酸ナトリウム緩衝液(pH7)で10mg/mLに調製した。
撮影条件は共焦点ピンホール径を1.00airyとし、20倍レンズを使用した。
図13は表層から深部へ5.0μm毎に撮影した断面画像である。表層から100μm付近までの画像が鮮明に取得できた。
組織表層付近では角化扁平上皮細胞、組織内部では扁平上皮細胞が並んでいるのが確認できた。本実施例により、ブリリアントブルーFCFは食道上皮細胞の細胞間隙が蛍光造影されることが示された。
ラット(F344/DuCrj、15週齢、メス)の卵巣上部に生成された腫瘍組織を摘出し、共焦点顕微鏡(ライカ社製、TCP SP2)による組織内部の断面像の観察を行った。
ファストグリーンFCFを0.1Mリン酸ナトリウム緩衝液(pH7)を用いて1.0mg/mLに調製した。
ラットの腫瘍組織を摘出し、調製した染色剤に5分間浸漬して染色した。浸透しない余分なファストグリーンを0.1Mリン酸ナトリウム緩衝液(pH6)で洗い流し、共焦点顕微鏡により観察を行った。
観察条件は、ピンホール径を1.00airyとし、レンズは63倍油浸レンズを用いた。
共焦点顕微鏡の撮影画像を図14に示す。図14は表層から10μm付近より下方へ5.0μm毎に撮影された連続画像である。本実施例により、ファストグリーンFCFは腫瘍組織中の結合組織繊維を良好に蛍光造影することが示された。
腫瘍部分の染色性を確認するためにベニコウジ黄色素を用いて、ファストグリーンFCFと二重染色を行った。ベニコウジ黄色素は、0.1Mリン酸ナトリウム緩衝液(pH6)を用いて1.0mg/mLに調製したものである。
共焦点顕微鏡画像を図15に示す。
3画像は実施例7の図14に対応して撮影されたものであり、同一部位である。ベニコウジ黄色素は細胞全体(核を除く)を染色しているのに対し、ファストグリーンFCFは細胞も若干染色しているが、繊維状の部分がより強く染色されていることが比較画像より明らかである。本実施例により、ファストグリーンFCFはベニコウジ黄色素とは異なる染色性を持ち、ファストグリーンFCFをベニコウジ黄色素と併用することで組織を構成する細胞の構造をより明瞭に観察可能となることが示された。
パテントブルーを用いて染色及び共焦点顕微鏡による観察をいった。パテントブルー(シグマ−アルドリッチ社製、Patent Blue VF)を生理食塩水で10mg/mLに調製し、マウス(ddY、6週齢、オス)の心臓から灌流させて染色を行った。
使用したパテントブルー溶液は600μLであり、手や足が肉眼でもわかる程度に青みを帯びていた。マウスを開腹して大腸を摘出し、共焦点システム及び切片の観察を行った。
図16は組織の表層から60μmの断層像である。撮影条件は20倍レンズ使用、ピンホール径は1.00airyとした。共焦点顕微鏡はライカ社製、TCP SP2を使用した。図16から、パテントブルーにより粘膜固有層は明瞭に観察できることが判明した。
実施例9で染色したマウスの大腸をおよそ6μmにスライスした凍結切片を蛍光観察し、染色性を観察した。また、隣接する凍結切片を用いてHE染色を行い比較し、パテントブルー染色で蛍光観察が可能であった部位を特定した。
観察に使用したのは共焦点顕微鏡で、倍率は20、40、63倍で観察した。図17は20倍レンズ使用でピンホール径2.66airyのものである。
蛍光観察された大腸の切片は、内腔が強い蛍光を帯びているため観察能が高いといえる。
ギネアグリーンを用いて消化管内腔の染色を行い、その染色性を凍結切片の観察により確認した。
ギネアグリーン(シグマーアルドリッチ社製、Guinea Green B)を生理食塩水で10mg/mLに調製し、マウス(ddY、6週齢、オス)の心臓から600μLを灌流させた。
また、異なる凍結切片を用いてHE染色を行ったものと比較し、ギネアグリーン染色により蛍光観察が可能であった部位を特定した。
観察に使用したのは共焦点顕微鏡で、倍率20、40、63倍で観察した。図18は40倍レンズを使用しピンホール径1.00airyの条件で観察し、撮影されたものである。
図19にギネアグリーン染色とほぼ同一箇所の薄切切片をHE染色したものを示す。
この場合も実施例10と同様に内腔側が強い蛍光を帯びていた。この結果、ギネアグリーンを用いた共焦点システムの観察能は高いことが判明した。
Claims (3)
- 次式(1)
で表される化合物を含有する内視鏡用組織蛍光染色剤組成物。 - 式(1)で表される化合物が、ファストグリーンFCF、ブリリアントブルーFCF、ギネアグリーンB、パテントブルーVF、パテントブルーNA、パテントブルーCA、ライトグリーンSF及びアルファズリンFGから選ばれるものである請求項1記載の組織蛍光染色剤組成物。
- 内視鏡が、共焦点内視鏡である請求項1又は2記載の組織蛍光染色剤組成物。
Priority Applications (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2006156925A JP2007326789A (ja) | 2006-06-06 | 2006-06-06 | 内視鏡用組織蛍光染色剤組成物 |
US11/758,688 US20080045796A1 (en) | 2006-06-06 | 2007-06-06 | Histofluorescent stain composition for endoscopy |
DE102007026410A DE102007026410A1 (de) | 2006-06-06 | 2007-06-06 | Histofluoreszenzfarbstoff für die Endoskopie |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2006156925A JP2007326789A (ja) | 2006-06-06 | 2006-06-06 | 内視鏡用組織蛍光染色剤組成物 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2007326789A true JP2007326789A (ja) | 2007-12-20 |
Family
ID=38825428
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2006156925A Ceased JP2007326789A (ja) | 2006-06-06 | 2006-06-06 | 内視鏡用組織蛍光染色剤組成物 |
Country Status (3)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20080045796A1 (ja) |
JP (1) | JP2007326789A (ja) |
DE (1) | DE102007026410A1 (ja) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GB2441892A (en) * | 2006-09-14 | 2008-03-19 | Pentax Corp | Histofluorescent stain for endoscopy |
Families Citing this family (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2014157703A1 (ja) | 2013-03-29 | 2014-10-02 | 国立大学法人三重大学 | 生体染色剤 |
US10358567B2 (en) * | 2016-02-29 | 2019-07-23 | Canon Kabushiki Kaisha | Compound, ink, ink cartridge and ink jet recording method |
CN111698937A (zh) * | 2017-11-28 | 2020-09-22 | 国立大学法人三重大学 | 检测方法 |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2002104996A (ja) * | 2000-09-25 | 2002-04-10 | Mochida Pharmaceut Co Ltd | 色素含有止血用組成物 |
JP2005187387A (ja) * | 2003-12-25 | 2005-07-14 | Tokiwa Corp | 水系外用剤、水系外用剤組成物及びこれを用いたメイクアップリムーバ |
JP2006000484A (ja) * | 2004-06-18 | 2006-01-05 | Olympus Corp | 内視鏡撮像システム |
Family Cites Families (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20050027166A1 (en) * | 2003-06-17 | 2005-02-03 | Shinya Matsumoto | Endoscope system for fluorescent observation |
-
2006
- 2006-06-06 JP JP2006156925A patent/JP2007326789A/ja not_active Ceased
-
2007
- 2007-06-06 DE DE102007026410A patent/DE102007026410A1/de not_active Withdrawn
- 2007-06-06 US US11/758,688 patent/US20080045796A1/en not_active Abandoned
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2002104996A (ja) * | 2000-09-25 | 2002-04-10 | Mochida Pharmaceut Co Ltd | 色素含有止血用組成物 |
JP2005187387A (ja) * | 2003-12-25 | 2005-07-14 | Tokiwa Corp | 水系外用剤、水系外用剤組成物及びこれを用いたメイクアップリムーバ |
JP2006000484A (ja) * | 2004-06-18 | 2006-01-05 | Olympus Corp | 内視鏡撮像システム |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GB2441892A (en) * | 2006-09-14 | 2008-03-19 | Pentax Corp | Histofluorescent stain for endoscopy |
GB2441892B (en) * | 2006-09-14 | 2011-02-09 | Pentax Corp | Histofluorescent stain for endoscopy |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
DE102007026410A1 (de) | 2008-01-17 |
US20080045796A1 (en) | 2008-02-21 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN107076724B (zh) | 生物体染色剂 | |
JP6019500B2 (ja) | 蛍光標識されたl−グルコース誘導体を用いたがん細胞を検出するための方法及び該誘導体を含むがん細胞のイメージング剤 | |
US20060241499A1 (en) | Multifunctional fluorescence diagnosis system | |
JP3212997B2 (ja) | 酸素濃度の測定に使用する蛍光プローブ | |
BG65173B1 (bg) | Флуоресцентно контрастно средство за близка инфрачервена област на спектъра и флуоресцентно изобразяване | |
CN109414151B (zh) | 癌症检测装置、癌症检测方法和用于癌症检测的染色剂 | |
WO2008109832A2 (en) | Viable near-infrared fluorochrome labeled cells and methods of making and using same | |
JP2023107247A (ja) | 検出方法 | |
NO328630B1 (no) | Naer infrarodt, fluorescerende kontrastmiddel og fluorescensavbildning | |
US20070077202A1 (en) | Histostain composition for endoscope | |
JP2007326789A (ja) | 内視鏡用組織蛍光染色剤組成物 | |
Grosenick et al. | Fluorescence imaging of breast tumors and gastrointestinal cancer | |
US20080069776A1 (en) | Histofluorescent stain for endoscopy | |
JP4953761B2 (ja) | 内視鏡用組織染色剤組成物 | |
JP4847795B2 (ja) | 内視鏡用組織蛍光染色剤組成物 | |
Kuznetsov et al. | Multimodal imaging of vascular network and blood microcirculation by optical diagnostic techniques | |
KR101774345B1 (ko) | 석회화 표적 근적외선 형광 탐지자 | |
RU2622983C1 (ru) | Способ интраоперационной визуализации ишемически-реперфузионного повреждения миокарда | |
Ştefănescu et al. | Advanced endoscopic imaging techniques for the study of colonic mucosa in patients with inflammatory bowel disease | |
CN113358615B (zh) | 美兰和荧光素钠双染色法于活细胞成像中的应用 | |
JPWO2005061456A1 (ja) | 近赤外蛍光造影剤 | |
WO2022252104A1 (zh) | 一种用于活细胞成像的染色法 | |
WO2022252103A1 (zh) | 美兰和荧光素钠双染色法于活细胞成像中的应用 | |
US20100047173A1 (en) | Methods for Using Optical Agents | |
Tanaka et al. | Magnifying endoscopy in combination with narrow-band imaging and acetic acid instillation in the diagnosis of Barrett’s esophagus |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A711 | Notification of change in applicant |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A712 Effective date: 20080502 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20090406 |
|
A761 | Written withdrawal of application |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A761 Effective date: 20110912 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20110913 |
|
AA92 | Notification of invalidation |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971092 Effective date: 20110927 |