JP2007244250A - 細胞動態の観察装置 - Google Patents
細胞動態の観察装置 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2007244250A JP2007244250A JP2006069789A JP2006069789A JP2007244250A JP 2007244250 A JP2007244250 A JP 2007244250A JP 2006069789 A JP2006069789 A JP 2006069789A JP 2006069789 A JP2006069789 A JP 2006069789A JP 2007244250 A JP2007244250 A JP 2007244250A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- chamber
- substrate
- opening
- medium
- flow path
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M41/00—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation
- C12M41/30—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation of concentration
- C12M41/36—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation of concentration of biomass, e.g. colony counters or by turbidity measurements
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M41/00—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation
- C12M41/46—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation of cellular or enzymatic activity or functionality, e.g. cell viability
Landscapes
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
【解決手段】細胞を収容するチャンバー4を有し、チャンバー4内での細胞を観察するための装置である。熱伝導性の基板2と、基板2に設けられたチャンバー4と、チャンバー4に培地を供給するための培地貯留部6とを有する。チャンバー4は、基板2に形成された開口部8の壁部と、開口部8の上端開口を閉塞し得る透明板12と、開口部8の下端開口を閉塞し得るカバーガラス14とによって形成される。培地貯留部6からチャンバー4へ培地を供給し得る流路18を有し、チャンバー4内に供給された培地を排出する排出流路20を有する。
【選択図】図1
Description
(1)細胞を培養したカバーガラスを装着するので、高倍率・高分解能の対物レンズによる観察に対応することができる。特に、周囲にシリコーンコート施したカバーガラスを用いる方が望ましい。
(2)装置のカバーガラス接着面にシリコーングリースを塗布するだけで、細胞を培養したカバーガラスとの密着性が保たれ、装置の基材の材質がアルミニウム製であるために温度伝導性がよく、一定温度に速やかに達し、その後の温度管理も極めて良好である。
(3)厳密な温度制御と培地の恒常的な交換により、培地のpHを保つことが可能なため、簡便な装置でありながら、細胞を良好な状態に維持した長時間観察が可能である。
(4)培地貯留部が装置の基板上に装着されているので、この培地貯留部に培地を満たした場合、培地を補充することなく継続観察が可能である。例えば、以下に示す実施例の装置では約40分の継続観察が可能であった。
(5)チャンバー内で対角線方向の緩慢な(流速20μl/min)流れを作り出し、常に新鮮な培地を供給することにより、培地のpHなどを保ち、細胞を良好な状態に維持した長時間観察が可能である。
(6)培地貯留部からチャンバーへ培地を供給する流路を形成しているので、この流路を利用して、細胞へ薬剤を投与したり、あるいは洗浄液を供給することができる。それによって、微量の薬剤の添加による細胞動態の高解像度観察が可能である。特に、チャンバー内での対角線上の液体の流速を上げることにより、投与した薬剤を速やかに洗浄し、薬剤投与に対する細胞動態を高解像度で観察することが可能である。
(7)本発明の細胞動態を観察するための方法では、投与する薬剤を満たした注射シリンジに装着した注射針を流路の入り口からチャンバー内へ挿入し、チャンバー内における観察視野の目的箇所に薬剤を添加する工程、を包含するので、チャンバー内における観察視野の目的箇所に少量の薬剤を確実に添加することができる。
本発明の細胞動態の観察装置のチャンバー内の温度安定性
温度制御用プレート(20℃設定から38℃設定へシフト)に、本発明の細胞動態の観察装置を設置し、カバーガラス14面の温度変化を追跡した。
生きた動物培養細胞の油浸対物レンズによる高解像度撮影
動物の細胞レベルでの研究に一般的に用いられているチャイニーズハムスターの卵巣由来の培養細胞(CHO−K1,Riken Cell Bank)を用いて、顕微鏡上で細胞の生理条件を維持したまま、油浸対物レンズを用いて生細胞の高解像度顕微鏡撮影を行った。
A.装置の作製
細胞を顕微鏡上の小さな密閉容器内で生きたまま長時間保持するためには、温度を37℃程度に保つことが必要である他に、酸性老廃物の細胞外排出による培地の酸性化などを防ぐため、培地を逐次新鮮なものに交換する必要がある。
B.カバーガラスのチャンバーへの装着
チャンバー内に培地を満たした後、周囲をシリコーンコート処理をしたカバーガラス上に培養したCHO細胞が接着しているカバーガラス14を細胞が培地に接するように開口部に被せ、その周縁部を基板側に押し付けることによりカバーガラス14の装着が完了した。カバーガラス14を装着することにより、培地の流動も可能となる。
実施例2で示したのと同じ装置を用いて、変性LDLを認識する受容体を発現している細胞に、蛍光標識した変性LDL(DiD-AcLDL:リガンド)を添加した後、過剰のリガンドを除去し、その取り込み過程を観察した。
実施例2で示した装置を用いて、シリコーンコート処理をしていないカバーガラス14で培養した細胞を装置の開口部下面に装着し、100倍の油浸レンズにより観察した。
4 チャンバー
6 培地貯留部
8 開口部
10 壁部
12 透明板
14 カバーガラス
Claims (14)
- 細胞を収容するチャンバーを有し、該チャンバー内での細胞動態を観察するための装置であって、
熱伝導性の基板と、該基板に設けられた該チャンバーと、該基板に設けられ、該チャンバーに培地を供給するための培地貯留部と、を有し、
該チャンバーは、該基板に形成された開口部の壁部と、該開口部の上端開口を閉塞する透明板と、該開口部の下端開口を閉塞し得るカバーガラスと、によって形成され、該培地貯留部から該チャンバーへ培地を供給し得る流路を有し、該チャンバー内に供給された培地を排出する排出流路を有する、チャンバー内での細胞動態を観察する装置。 - 前記カバーガラス上に細胞が培養され、該カバーガラスは、前記開口部の周囲下面に取外し可能に取り付けられている、請求項1に記載の装置。
- 前記カバーガラスは、シリコーン系のグリースまたは両面粘着テープによって、前記開口部の周囲下面に取外し可能に接着されている、請求項1に記載の装置。
- 前記カバーガラスの周囲にシリコーン系の処理剤が塗布されている、請求項1に記載の装置。
- 前記カバーガラスの周囲にフッ素樹脂系テープが貼り付けられている、請求項1に記載の装置。
- 前記透明板が基板の開口部の上部の周囲に固定されている、請求項1に記載の装置。
- 前記透明板が、ガラス板またはアクリル板である、請求項1に記載の装置。
- 前記培地貯留部は、基板の上面に配置された枠材にて形成されている、請求項1に記載の装置。
- 前記流路が基板を貫通して形成され、前記培地貯留部とチャンバーとが該流路によって連通されている、請求項1に記載の装置。
- 前記チャンバーにおける前記流路の入口と前記排出流路の出口が対角線上に位置する、請求項1に記載の装置。
- 前記細胞が、生細胞、固定化細胞、微生物、または動植物の組織である、請求項1に記載の装置。
- 前記基板が温度を制御可能な装置上に装着可能である、請求項1に記載の装置。
- 細胞を収容するチャンバーを有する装置を用いたチャンバー内での細胞動態を観察するための方法であって、
該装置は、基板と、該基板に設けられた該チャンバーと、該チャンバーに培地を供給するための培地貯留部と、を有し、
該チャンバーは、該基板に形成された開口部の壁部と、該開口部の上端開口を閉塞する透明板と、該開口部の下端開口を閉塞し得るカバーガラスと、によって形成され、該培地貯留部から該チャンバーへ培地を供給し得る流路を有し、該チャンバー内に供給された培地を排出する排出流路を有し、
薬剤を入れた注射シリンジに装着した注射針を該流路の入り口からチャンバー内へ挿入し、該チャンバー内における観察視野の目的箇所に薬剤を添加する工程、を包含する細胞動態の観察方法。 - さらに、洗浄用の培地の入った瓶の先につけたノズルを流路の入り口からチャンバー内へ挿入し、該ノズルからチャンバー内へ培地を噴射すると同時に排出流路における培地の流速を上げる工程、を包含する請求項13に記載の方法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2006069789A JP5024777B2 (ja) | 2006-03-14 | 2006-03-14 | 細胞動態の観察装置 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2006069789A JP5024777B2 (ja) | 2006-03-14 | 2006-03-14 | 細胞動態の観察装置 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2007244250A true JP2007244250A (ja) | 2007-09-27 |
JP5024777B2 JP5024777B2 (ja) | 2012-09-12 |
Family
ID=38589197
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2006069789A Active JP5024777B2 (ja) | 2006-03-14 | 2006-03-14 | 細胞動態の観察装置 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP5024777B2 (ja) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2014502146A (ja) * | 2010-10-25 | 2014-01-30 | 政彦 佐藤 | 弁別的細胞イベントの定量的な識別を行う装置及び方法 |
JP2019534000A (ja) * | 2016-10-14 | 2019-11-28 | ウェイク・フォレスト・ユニヴァーシティ・ヘルス・サイエンシズ | 一般的な培地を活用する、多臓器「生体機能チップ」装置 |
Citations (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS5571310U (ja) * | 1978-11-10 | 1980-05-16 | ||
JPS62113698U (ja) * | 1986-01-09 | 1987-07-20 | ||
JPH0463583A (ja) * | 1990-06-29 | 1992-02-28 | P C C Technol:Kk | 顕微鏡観察用無菌チャンバー |
JPH05312697A (ja) * | 1992-05-07 | 1993-11-22 | Pola Chem Ind Inc | 標本の作製装置 |
JPH08336382A (ja) * | 1994-12-01 | 1996-12-24 | Will Minuth | 顕微鏡チャンバなどの細胞の培養チャンバ |
JP2004229548A (ja) * | 2003-01-29 | 2004-08-19 | National Food Research Institute | 顕微鏡プレパラートおよびその作製方法 |
JP2004318017A (ja) * | 2003-04-21 | 2004-11-11 | Olympus Corp | 培養観察方法及びそれに用いる倒立顕微鏡 |
JP2005245288A (ja) * | 2004-03-03 | 2005-09-15 | Olympus Corp | 培養観察方法および倒立顕微鏡 |
JP2005323509A (ja) * | 2004-05-12 | 2005-11-24 | Inoue Keisuke | 遺伝子発現計測用細胞培養観察装置 |
-
2006
- 2006-03-14 JP JP2006069789A patent/JP5024777B2/ja active Active
Patent Citations (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS5571310U (ja) * | 1978-11-10 | 1980-05-16 | ||
JPS62113698U (ja) * | 1986-01-09 | 1987-07-20 | ||
JPH0463583A (ja) * | 1990-06-29 | 1992-02-28 | P C C Technol:Kk | 顕微鏡観察用無菌チャンバー |
JPH05312697A (ja) * | 1992-05-07 | 1993-11-22 | Pola Chem Ind Inc | 標本の作製装置 |
JPH08336382A (ja) * | 1994-12-01 | 1996-12-24 | Will Minuth | 顕微鏡チャンバなどの細胞の培養チャンバ |
JP2004229548A (ja) * | 2003-01-29 | 2004-08-19 | National Food Research Institute | 顕微鏡プレパラートおよびその作製方法 |
JP2004318017A (ja) * | 2003-04-21 | 2004-11-11 | Olympus Corp | 培養観察方法及びそれに用いる倒立顕微鏡 |
JP2005245288A (ja) * | 2004-03-03 | 2005-09-15 | Olympus Corp | 培養観察方法および倒立顕微鏡 |
JP2005323509A (ja) * | 2004-05-12 | 2005-11-24 | Inoue Keisuke | 遺伝子発現計測用細胞培養観察装置 |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2014502146A (ja) * | 2010-10-25 | 2014-01-30 | 政彦 佐藤 | 弁別的細胞イベントの定量的な識別を行う装置及び方法 |
JP2016165274A (ja) * | 2010-10-25 | 2016-09-15 | 政彦 佐藤 | 弁別的細胞イベントの定量的な識別を行う装置及び方法 |
JP2019534000A (ja) * | 2016-10-14 | 2019-11-28 | ウェイク・フォレスト・ユニヴァーシティ・ヘルス・サイエンシズ | 一般的な培地を活用する、多臓器「生体機能チップ」装置 |
JP7323932B2 (ja) | 2016-10-14 | 2023-08-09 | ウェイク・フォレスト・ユニヴァーシティ・ヘルス・サイエンシズ | 共通の培地を活用する、多臓器「生体機能チップ」装置 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP5024777B2 (ja) | 2012-09-12 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US20040241832A1 (en) | Cell culture detection apparatus, cell culture observation apparatus, and cell culture observation method | |
JP4562165B2 (ja) | 顕微鏡観察用培養器 | |
US20100009335A1 (en) | Temperature-regulated culture plates | |
CA2842023C (en) | Method and cell culture apparatus for long-term cell culture | |
US20090253163A1 (en) | Iterative staining of biological samples | |
US20110229961A1 (en) | Active microfluidic system for in vitro culture | |
WO2008118500A1 (en) | Nutrient perfusion plate with heater & gas exchange for high content screening | |
RU2010154493A (ru) | Устройство "орган на интегральной схеме" | |
JP5062587B2 (ja) | ワンタッチ式細胞動態観察装置 | |
Krajniak et al. | CLIP–continuous live imaging platform for direct observation of C. elegans physiological processes | |
JP2008086264A (ja) | 細胞培養液供給排出装置 | |
JP2018512171A (ja) | 流体装置と共に使用するための方法および関連システム | |
JP2007166983A (ja) | 培養容器用蓋及び生体試料培養システム | |
JP5024777B2 (ja) | 細胞動態の観察装置 | |
CN106885807A (zh) | 基于微流控技术的大规模活生物体筛选系统 | |
Song et al. | A microfluidic device for efficient chemical testing using Caenorhabditis elegans | |
KR101706153B1 (ko) | 미세유체칩 기반 세포 배양 시스템 | |
WO2024109896A1 (zh) | 一种基于微流控芯片细胞培养的快速控温装置 | |
US20160334388A1 (en) | Basket for use with a fluidics device | |
US20050032199A1 (en) | Cell culture apparatus | |
JP2005323509A (ja) | 遺伝子発現計測用細胞培養観察装置 | |
KR100704384B1 (ko) | 생물체 분석용 프레파라트 | |
KR100662710B1 (ko) | 생물체 경시적 분석용 촬영장치 | |
JP2004357523A (ja) | 細胞培養検出装置 | |
CN219490028U (zh) | 一种便携式可观测自动换液细胞培养装置 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20090202 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20090202 |
|
RD02 | Notification of acceptance of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7422 Effective date: 20090202 |
|
A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20110104 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20110818 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20111006 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20120210 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20120507 |
|
A911 | Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20120515 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20120605 |
|
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20120612 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20150629 Year of fee payment: 3 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 5024777 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
S533 | Written request for registration of change of name |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313533 |
|
R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |