JP2007222083A - 細胞培養カプセル - Google Patents

細胞培養カプセル Download PDF

Info

Publication number
JP2007222083A
JP2007222083A JP2006047605A JP2006047605A JP2007222083A JP 2007222083 A JP2007222083 A JP 2007222083A JP 2006047605 A JP2006047605 A JP 2006047605A JP 2006047605 A JP2006047605 A JP 2006047605A JP 2007222083 A JP2007222083 A JP 2007222083A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
capsule
cell culture
gas
tube
connector
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
JP2006047605A
Other languages
English (en)
Inventor
Satoshi Kaneko
智 兼子
Naoki Watanabe
直樹 渡辺
Kazuo Itakura
一生 板倉
Yosuke Otsuka
陽介 大塚
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Airtech Japan Ltd
Original Assignee
Airtech Japan Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Airtech Japan Ltd filed Critical Airtech Japan Ltd
Priority to JP2006047605A priority Critical patent/JP2007222083A/ja
Publication of JP2007222083A publication Critical patent/JP2007222083A/ja
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12MAPPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M37/00Means for sterilizing, maintaining sterile conditions or avoiding chemical or biological contamination
    • C12M37/04Seals
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12MAPPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M23/00Constructional details, e.g. recesses, hinges
    • C12M23/48Holding appliances; Racks; Supports
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12MAPPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M41/00Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation
    • C12M41/12Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation of temperature
    • C12M41/14Incubators; Climatic chambers
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12MAPPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M41/00Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation
    • C12M41/30Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation of concentration
    • C12M41/34Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation of concentration of gas
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12MAPPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M23/00Constructional details, e.g. recesses, hinges
    • C12M23/02Form or structure of the vessel
    • C12M23/10Petri dish

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Sustainable Development (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Thermal Sciences (AREA)
  • Clinical Laboratory Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)

Abstract

【課題】細胞培養を行う細胞培養カプセルをひとつのCO2インキュベーターに置き換えて省スペース,低コスト化を図り、かつ、細胞培養カプセル内の酸素濃度を常時所定濃度に保つことが出来るようにする。
【解決手段】細胞培養カプセルにおいて、シャーレ受を所定高さに保持してなるシャーレラックを収容した細胞培養カプセル本体に、気密に閉塞可能の蓋体を設け、該蓋体には、コネクタを中間部位に有するチューブの両端を、本体内と通気可能に取り付けた。また、シャーレラックにより培養カプセル本体内の所定高さに保持されているトレイ受け下部に、ガス平衡用培養液を封入した。そして、コネクター切断時、一方のチューブは混合ガス供給源に、他方のチューブはガス濃度モニター及び又はアラームに接続する事を可能にした。
【選択図】図1

Description

本発明は、不妊治療、再生医療、医薬創生の細胞及び組織培養等の分野で利用されてい
る細胞培養カプセルに関する。
細胞培養は、医薬品創生等の基礎研究のみならず、再生医療、不妊治療等の培養組織を
ヒトに移植することを目的とした臨床培養においても不可欠な技術である。従来、組織培
養技術は細胞増殖性を指標として評価されてきたが、再生医療、不妊治療等においては、
培養過程における細胞変異を可及的に防止し得る高精度培養環境の構築が望まれる。これ
らの組織培養に共通して求められることは体内、すなわち細胞、組織が生理的に存在する
環境を再現することにある。さらに細胞変異、特にDNA損傷を防止することが不可欠で
ある。
培養には培養液の最適化とともにガス環境(O2,CO2 濃度)、温度、湿度及び紫外線等を制御する必要がある。ヒトを始めとする哺乳動物細胞を体外で培養する機器としてCO2インキュベーターが汎用されるが、本機器はガス濃度、温度、湿度を制御して培養環境を構築する。しかし、扉の開閉に伴いガス濃度、温度、湿度等が変動しやすい欠点を有している。(特許文献1参照)。
組織培養の高精度化は、細胞増殖率の向上にとどまらず、細胞変異の防止、細胞DNA
の保護を目的とする。本発明はCO2インキュベーターに求められる3つの機能(ガス濃度、温度、湿度制御)を分離し、機器本体は温度制御に専念し、着脱可能なプラスチックボトルがガス濃度、湿度維持を担当する。これにより高精度な無菌環境維持、ガス濃度の変動の最小化、とくに従来困難であった低酸素培養が可能となる(例として2.0%O2)。これにより上述した目的を達成する。
特公平6−32640号公報
本発明は上記の点に鑑みて、細胞培養を行う細胞培養カプセルをひとつのCO2インキュベーターに置き換えて省スペース,低コスト化を図り、かつ、細胞培養カプセル内のO2,CO2濃度を常時所定濃度に保つことが出来るようにすることを目的とする。従来のCO2インキュベーターは非気密性であり、ガス環境を維持するため、センサーを用いてガスを連続して注入しながらセンサーによりガス濃度を制御する必要があった。培養環境を密閉可能なカプセル化することにより、ガスセンサーおよびガスの注入が不要となった。
請求項1記載の発明にあっては、細胞培養カプセルにおいて、シャーレ受を所定高さに
保持してなるシャーレラックを収容した培養カプセル本体に、気密に閉塞可能の蓋体を設
け、該蓋体には、コネクタを中間部位に有するチューブの両端を、本体内と通気可能に取
り付けた。
請求項2記載の発明にあっては、請求項1記載の発明にあって、シャーレラックにより
培養カプセル本体内の所定高さに保持されているトレイ受け下部に、ガス平衡用培養液(以下平衡液と云う)を封入した。
請求項3記載の発明にあっては、請求項1記載の発明にあって、コネクター切断時、一方のチューブは混合ガス供給源に、他方のチューブはガス濃度モニター及び又はアラームに接続する事を可能にした。
本発明培養カプセルは、シャーレ受を所定高さに保持してなるシャーレラックを収容した細胞培養カプセル本体に、気密に閉塞可能の蓋体を設け、該蓋体には、コネクタを中間部位に有するチューブの両端を、本体内と通気可能に取り付けているため、コネクタを解離しチューブ一端を混合ガス源に接続することにより、混合ガス源からの混合ガスをカプセル内のガス平衡用培養液に導入することが可能となる。平衡液に混合ガスが満たされた後は、前記コネクタを接合し密閉する。カプセル内にガスを適時放出しカプセル内のガス量の低下時は平衡液から補填出来る。また前記コネクタを解離した際一方のチューブをガス濃度モニター及び又はアラームに接続することで、充填時酸素量を検知することが可能である。
本発明の実施例を図面と共に次に説明する。
本発明細胞培養カプセルは、気密型カプセル内に培養シャーレを保管し、カプセル内部のみを所定環境に近づける方法を採用している。気密型の細胞培養カプセルが1台のCO2インキュベーターに相当する。
カプセル内に複数のシャーレが収納可能で、ガス濃度の維持のためにあらかじめCO2ガスを溶解した平衡液を入れてから密閉する。これによりCO2 濃度が減少すると平衡液内部のガスが放出されカプセル内のガス濃度を保つ。
この平衡液にはpH試薬が含まれており、溶解したCO2 が減少した場合には色が変化し視覚にてCO2 濃度の減少を確認可能である。また平衡液の自然蒸発により飽和湿度の維持も図ることが可能である。
図1及び図2に細胞培養カプセル1及び蓋体3の正面図を示す。
細胞培養カプセル1はカプセル本体2と蓋体3とより主としてなり、蓋体3はカプセル
本体2と螺合部4で螺じ合わされている。カプセル本体2の螺合部4の内周面下部にはテ
ーパー面5が設けられており、蓋体3の螺合部4の下部に設けた環状溝6に嵌合したOリ
ング7が前記テーパー面5と接し、カプセル本体2に蓋体3を螺じ込んだ際に、前記テー
パー面5とOリング7とが密接し、カプセル本体2の密封性を保っている。蓋体3とカプ
セル本体2とのそれぞれの外周縁には上目印8及び下目印9が設けられている。下目印9
は蓋体の締り程度を知るためにカプセル本体2の上部に3個所設けられている。
蓋体3には、細胞培養カプセル1の内部に連通する第1、第2のチューブ10,11を
設け、それらの端部を医療用コネクタ12で結合している。
カプセル本体2の内部にはシャーレラック15を挿入している。シャーレラック15は
図3に示す如く、3本の支柱16a,16b,16cを環状板状体よりなる下部枠材17
に起立し、支柱16a,16b,16cの中間部をシャーレ受18で固定している。前面
2本の支柱16a,16b間を広くし、シャーレ19をシャーレ受18に載置する際に障
害にならないようにしている。シャーレ受18は、板状対をなし、正面に切込20を有し
、シャーレ20をシャーレ受18に載置する際にシャーレ19を持ち易くしている。
シャーレ受18の高さは、後述するガス平衡用外部培養液G注入の関係で、同液Gを培
養カプセル1内に注入した際に浸漬されない程度の高さとする。
ガス平衡用外部培養液Gは、細胞培養カプセル1内を長時間かつ一定のガス環境(CO2、O2濃度)に保つために用いる。その組成は、目的により最適なものを使用するが、一例として、HEPES(ヒドロキシエチルピペラジンエタンスルホン酸)粉末4.77g/L,重曹(NaHCO3)粉末2.20g/L,フェノール レッド(pH指示薬)1〜3mgを1Lの超純水に溶かしたものにO2 :CO2 :N2=2:5:95混合ガスをバブリングし、ガス平衡にして使用する。この際、pHは7.4(液の色調は赤橙色となる)。細胞の観察の為カプセルを開放した後には、新規のガス平衡用外部培養液に入れ替えるか、再度ガスを溶解させても使用する。これは例えば200mlに小分けされ、別の培養槽で37℃に予熱しておく。
平衡用外部培養液のガス量に変化を生じた場合にカプセル内部で過剰な酸素の吸収と不
足なCO2 の放出を行う。
図4に作業ベンチ30の概略を示す。図4において細胞培養カプセル1は1個のみ記載
されているが、図示を省略した培養器の中に複数個例えば16個収容されている。そして
一方に混合ガスのボンベが2種設けられる。
例えばA混合ガスは、O2 :CO2 :N2の比が0:5:95でありB混合ガスはO2 :CO2 :N2の比が2:5:93でありそれぞれボンベ31,32に充填されている。そして、ボンベ31,32は切換弁33を介して外部導管34に連なっている。
一方、作業用ベンチ30には、O2 モニター及び又はアラーム35が設けられている。細胞培養カプセル1の第1のチューブ10のコネクタ12aとガスボンベ外部導管34のコネクタ34aとを接続し、細胞培養カプセル1の第2のチューブ11のコネクタ12bとO2 モニター35の外部導管36のコネクタ36aを接続する。そして、最初に自動切換弁33を切換えてA混合ガスボンベ31の混合ガスを細胞培養カプセル1内に吹き込んで、カプセル内部酸素濃度をに急速低減させる。次に自動切換弁33を切換えてB混合ガスを供給し、酸素濃度を例えば2%の所定濃度とする。これは流量計(図示せず)と電磁弁を自動で制御することにより行なわれる。
ガス供給時の接続が容易かつ、間違いの無いように、チューブ同士はカプラーにて接合
する。これは医療用であり、容易に入手可能かつ安価である。また密閉性も良い。カプラ
ーの一方はガス供給口と接続し、もう一方はオプションの酸素濃度計へ接続し、カプセル
からの排気ガス中の酸素濃度の監視に使用可能である。各々カプラー接続のため、配管を
間違えることはない。
本発明細胞培養カプセルの正面図。 本発明細胞培養カプセルを70°旋回した状態の左側面図。 シャーレラックを示し、Aは正面図、Bは平面図、CはAのC−C線断面図、DはAのD−D線断面図。 作業ベンチを示す概要説明図。
符号の説明
1 細胞培養カプセル
2 カプセル本体
3 蓋体
4 螺合部
5 テーパー面
6 環状溝
7 Oリング
8 上目印
9 下目印
10 第1のチューブ
11 第2のチューブ
12 コネクタ
15 シャーレラック
16a,16b,16c 柱
17 下部枠材
18 シャーレ受
19 シャーレ
20 切込
30 作業用ベンチ
31,32 ボンベ
33 切換弁
34,36 外部導管
34a,36a コネクタ
35 ガス濃度モニター

Claims (3)

  1. シャーレ受を所定高さに保持してなるシャーレラックを収容した細胞培養カプセル本体に、気密に閉塞可能の蓋体を設け、該蓋体には、コネクタを中間部位に有するチューブの両端を、本体内と通気可能に取り付けてなる、細胞培養カプセル。
  2. シャーレラックにより培養カプセル本体内の所定高さに保持されているトレイ受け下部に、ガス平衡用培養液を封入してなる請求項1記載の細胞培養カプセル。
  3. コネクター切断時、一方のチューブは混合ガス供給源に、他方のチューブはガス濃度モニター及び又はアラームに接続する事を可能にしている請求項1記載の細胞培養カプセル。
JP2006047605A 2006-02-24 2006-02-24 細胞培養カプセル Pending JP2007222083A (ja)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2006047605A JP2007222083A (ja) 2006-02-24 2006-02-24 細胞培養カプセル

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2006047605A JP2007222083A (ja) 2006-02-24 2006-02-24 細胞培養カプセル

Publications (1)

Publication Number Publication Date
JP2007222083A true JP2007222083A (ja) 2007-09-06

Family

ID=38544472

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2006047605A Pending JP2007222083A (ja) 2006-02-24 2006-02-24 細胞培養カプセル

Country Status (1)

Country Link
JP (1) JP2007222083A (ja)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2015165797A (ja) * 2014-02-14 2015-09-24 株式会社Regene Pharm 培養皿収納容器
JP2018113951A (ja) * 2017-01-20 2018-07-26 日本光電工業株式会社 細胞培養システム、細胞培養環境評価装置、及びプログラム
CN113088450A (zh) * 2021-04-20 2021-07-09 蓝莲(杭州)生物科技有限公司 用于干细胞的低温生化培养装置

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2015165797A (ja) * 2014-02-14 2015-09-24 株式会社Regene Pharm 培養皿収納容器
JP2018113951A (ja) * 2017-01-20 2018-07-26 日本光電工業株式会社 細胞培養システム、細胞培養環境評価装置、及びプログラム
US11312935B2 (en) 2017-01-20 2022-04-26 Nihon Kohden Corporation Cell culture system, cell culture environment evaluation device, and program
CN113088450A (zh) * 2021-04-20 2021-07-09 蓝莲(杭州)生物科技有限公司 用于干细胞的低温生化培养装置

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US9909090B2 (en) Cell culture kit, and method of using cell culture kit
US20200087605A1 (en) Bag assembly for cultivation of cells
US11773361B2 (en) Bioreactors
US6403369B1 (en) Cell culture vessel
EP3196287B1 (en) Cell culture apparatus
US6670175B2 (en) Cryopreservation bag assembly for mammalian cell lines
US20170253847A1 (en) Liquid delivery method for cell culture system, and cell culture system
JP2012200239A (ja) 細胞培養装置
Yazdani Technical aspects of oxygen level regulation in primary cell cultures: A review
JP2006204263A (ja) 培養容器および培養方法
JP2007222083A (ja) 細胞培養カプセル
CN107267385A (zh) 小容积反应器中二氧化碳水平和pH的控制
CN205420436U (zh) 一种细胞培养袋
CN108387701B (zh) 一种测定氧气产生速率的方法
CN103146578B (zh) 转基因细胞培养装置
ES2611958A1 (es) Biorreactor tipo columna de burbujeo para cultivo de células vegetales en suspensión
CN205590714U (zh) 一种用于细胞灌注培养的气体供给装置
JPH1189561A (ja) 細胞培養方法および装置
US20240052281A1 (en) Air bubble removal device for removing air bubbles from medium and medium circulating cell cultivation system including the same
CN2689223Y (zh) 血液培养瓶
CN213739526U (zh) 一种细胞基因工程用干细胞培养瓶
CN205676480U (zh) 一种体外受精三通管式培养皿
CN211005430U (zh) 一种细胞培养装置
CN207948732U (zh) 适用于细胞储存用的冻存袋
CN202730135U (zh) 一种培养基培养装置

Legal Events

Date Code Title Description
A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20090225

A02 Decision of refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02

Effective date: 20090624