JP2007125009A

JP2007125009A - 固定化酵素を用いた有用物質の製造方法

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Publication number: JP2007125009A
Application number: JP2006259909A
Authority: JP
Inventors: Atsushi Saito; 淳斉藤; Yoshitaka Senda; 良孝仙田; Toshiteru Komatsu; 利照小松
Original assignee: Kao Corp
Current assignee: Kao Corp
Priority date: 2005-10-05
Filing date: 2006-09-26
Publication date: 2007-05-24
Anticipated expiration: 2026-09-26
Also published as: JP5080771B2

Abstract

【課題】固定化酵素を充填した固定床型反応塔に、２液相を形成する液体混合物を流通させる反応方法において、反応液全体の流れを均一化し、効率的に有用物質を製造する方法の提供。
【解決手段】固定化酵素を充填した固定床型反応塔に２液相を形成する液体混合物を供給し、同一方向に並流させて反応を行う有用物質の製造方法において、一の管の断面が直径１００ｍｍ以下の円形又は対角線長１００ｍｍ以下の多角形である複数の管状構造が形成されるように内装物又は配管を装填した固定床型反応塔を用い、該管状構造内に固定化酵素を充填し、該管状構造内に前記液体混合物を供給する有用物質の製造方法。
【選択図】なし

Description

本発明は、固定化酵素を充填した固定床型反応塔を用いた反応による有用物質の製造方法に関する。

液体を固定床型反応塔に通液して行う反応として、Ｌ−アスパラギン酸生成、エステル交換油脂生成、乳糖加水分解、油脂類の加水分解等に利用されている固定化酵素を用いた反応が知られている。これらの反応は、いずれも発熱量が比較的小さい為、通常、最も単純なドラム型反応器が使用されている。

固定化酵素を用いた反応のうち、油脂類の加水分解のように２種類以上の液を反応器に流通させる場合には、反応効率向上の観点から、反応液を均一に混合した状態で通液することが好ましい。この場合、加水分解に用いる油相基質と水相基質は、本来混合しても一相にならないものであるため、エマルションとするのが一般的である。一方で、エマルション粒子は担体の細孔内に吸着した酵素に到達し難いため、通液速度を、反応液が乳化しない範囲とした技術もある（特許文献１参照）。

また、固定床に油相基質と水相基質を流通させる方法としては、向流で流通させる方法（特許文献１、２参照）、及び並流で流通させる方法（特許文献３参照）があるが、前者は特殊な仕組みと運転方法が必要となるため、一般的には並流で流通させる方法が採られている。
特開昭６１−８５１９５号公報特開平１−９８４９４号公報特開２０００−１６０１８８号公報

前記固定化酵素を充填した固定床型反応塔に、２液相を形成する液体混合物を流通させて反応を行う方法においては、特に当該液体混合物を乳化させずに流通させる場合、反応塔の径が大きくなるに従って、塔内における反応液の流れが不均一となり、効率的に反応が進まない部分が生じ、結果として反応性が低下するという問題があることを見出した。この場合、反応性を高めるために、単に固定化酵素と反応液の接触時間を長くしようとすると、生産性（流量）が低下するという問題もある。

従って、本発明は、固定化酵素を充填した固定床型反応塔に、２液相を形成する液体混合物を流通させて反応を行う有用物質の製造方法において、流量を低下させずに反応性を高め、生産性を向上させることにより、より効率的に有用物質を製造する方法を提供するものである。

そこで本発明者は、固定化酵素を充填した固定床型反応塔における反応液の流通の特徴を解析した結果、流路の断面積が小さい程反応液の流れが均一化し、反応性が向上することを見出した。そこで、固定化酵素を充填した断面積の大きい固定床型反応塔の内部に、一の管の断面がある程度小さい円形又は多角形である管状構造が形成されるように内装物又は配管を装填し、その断面積の小さいそれぞれの管状構造内で酵素反応を行わせることにより、高い反応性を維持したまま生産性を向上させることができることを見出した。

本発明は、固定化酵素を充填した固定床型反応塔に２液相を形成する液体混合物を供給し、同一方向に並流させて反応を行う有用物質の製造方法において、一の管の断面が直径１００ｍｍ以下の円形又は対角線長１００ｍｍ以下の多角形である複数の管状構造が形成されるように内装物又は配管を装填した固定床型反応塔を用い、該管状構造内に固定化酵素を充填し、該管状構造内に前記液体混合物を供給する有用物質の製造方法を提供するものである。

本発明によれば、固定化酵素を充填した固定床型反応塔へ２液相を形成する液体混合物を供給して行う反応において、塔内の反応液全体の流れを均一化する事ができ、その結果、反応性と生産性を向上する事ができる。特に、油脂類の加水分解においては、酵素活性を有効に発現させ、脂肪酸類を効率的に製造することができる。

本発明においては、固定化酵素を充填した固定床型反応塔に２液相を形成する液体混合物を供給することが必要である。固定床型反応塔（以下「酵素塔」ともいう）とは、固定化酵素をカラム等に充填し、固定化担体間の空隙及び固定化担体の細孔に反応液を流通させ得るようにしたものをいう。２液相とは、２種類の液体が混合後にも１相にならない状態をいい、分相しているものから、均一であっても乳化状態となっているものも含む。

本発明の態様としては、固定化酵素として油脂分解酵素を固定化担体に吸着させたものを用い、これを充填した反応塔に、２液相として油相基質と水相基質を流通させることによる油脂類の加水分解反応により、有用物質として脂肪酸類を製造する方法であることが好ましい。

本発明においては、２液相を同一方向に並流させることが必要である。この場合、２液相を予め混合して乳化状態として供給しても良く、分相したまま供給しても良い。また、２液相を一定時間毎に交互に供給しても良い。酵素塔への各基質の供給は、塔頂から塔底へ下方流で行っても、塔底から塔頂へ上方流で行っても良い。

本発明で用いる固定化酵素は、固定化担体に酵素を吸着等により担持させたものである。固定化担体としては、セライト、ケイソウ土、カオリナイト、シリカゲル、モレキュラーシーブス、多孔質ガラス、活性炭、炭酸カルシウム、セラミックス等の無機担体、セラミックスパウダー、ポリビニルアルコール、ポリプロピレン、キトサン、イオン交換樹脂、疎水吸着樹脂、キレート樹脂、合成吸着樹脂等の有機高分子等が挙げられるが、特に保水力が高い点からイオン交換樹脂が好ましい。また、イオン交換樹脂の中でも、大きな表面積を有することにより酵素の吸着量を高くできるという点から、多孔質であることが好ましい。

固定化担体として用いる樹脂の粒子径は１００〜１０００μｍが好ましく、更に２５０〜７５０μｍが好ましい。細孔径は１０〜１５０ｎｍが好ましく、更に１０〜１００ｎｍが好ましい。材質としては、フェノールホルムアルデヒド系、ポリスチレン系、アクリルアミド系、ジビニルベンゼン系等が挙げられ、特にフェノールホルムアルデヒド系樹脂（例えば、ＲｏｈｍａｎｄＨａｓｓ社製ＤｕｏｌｉｔｅＡ−５６８）が酵素吸着性向上の点から好ましい。

本発明の固定化酵素に使用する酵素は特に限定はされないが、生産性の向上効果が大きい点から、油脂類分解用酵素としてのリパーゼが好ましい。リパーゼは、動物由来、植物由来のものはもとより、微生物由来の市販リパーゼを使用することもできる。微生物由来リパーゼとしては、リゾプス（Ｒｉｚｏｐｕｓ）属、アスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）属、ムコール（Ｍｕｃｏｒ）属、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）属、ジオトリケム（Ｇｅｏｔｒｉｃｈｕｍ）属、ペニシリウム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）属、キャンディダ（Ｃａｎｄｉｄａ）属等の起源のものが挙げられる。

酵素の固定化を行う温度は、酵素の特性によって決定することができるが、酵素の失活が起きない０〜６０℃、特に５〜４０℃が好ましい。また固定化時に使用する酵素溶液のｐＨは、酵素の変性が起きない範囲であればよく、温度同様酵素の特性によって決定することができるが、ｐＨ３〜９が好ましい。このｐＨを維持するためには緩衝液を使用するが、緩衝液としては、酢酸緩衝液、リン酸緩衝液、トリス塩酸緩衝液等が挙げられる。上記酵素溶液中の酵素濃度は、固定化効率の点から酵素の飽和溶解度以下で、かつ十分な濃度であることが好ましい。また酵素溶液は、必要に応じて不溶部を遠心分離で除去した上澄や、限外濾過等によって精製したものを使用することもできる。また用いる酵素質量はその酵素活性によっても異なるが、担体質量に対して５〜１０００質量％、特に１０〜５００質量％が好ましい。

酵素を固定化する場合、担体と酵素を直接吸着してもよいが、高活性を発現するような吸着状態にするため、酵素吸着前に予め担体を脂溶性脂肪酸又はその誘導体で処理することが好ましい。脂溶性脂肪酸又はその誘導体と担体の接触法としては、水又は有機溶剤中にこれらを直接加えてもよいが、分散性を良くするため、有機溶剤に脂溶性脂肪酸又はその誘導体を一旦分散、溶解させた後、水に分散させた担体に加えてもよい。この有機溶剤としては、クロロホルム、ヘキサン、エタノール等が挙げられる。脂溶性脂肪酸又はその誘導体の使用質量は、担体質量に対して１〜５００質量％、特に１０〜２００質量％が好ましい。接触温度は０〜１００℃、特に２０〜６０℃が好ましく、接触時間は５分〜５時間程度が好ましい。この処理を終えた担体は、ろ過して回収するが、乾燥してもよい。乾燥温度は室温〜１００℃が好ましく、減圧乾燥を行ってもよい。

予め担体を処理する脂溶性脂肪酸又はその誘導体のうち、脂溶性脂肪酸としては、炭素数４〜２４、好ましくは炭素数８〜１８の飽和又は不飽和の、直鎖又は分岐鎖の、水酸基を有していてもよい脂肪酸が挙げられる。具体的には、カプリン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、オレイン酸、リノール酸、α−リノレン酸、リシノール酸、イソステアリン酸等が挙げられる。また前記脂溶性脂肪酸の誘導体としては、これらの脂溶性脂肪酸と一価若しくは多価アルコール又は糖類とのエステル、リン脂質、及びこれらのエステルにエチレンオキサイドを付加したもの等が挙げられる。具体的には、上記脂肪酸のメチルエステル、エチルエステル、モノグリセライド、ジグリセライド、それらのエチレンオキサイド付加体、ポリグリセリンエステル、ソルビタンエステル、ショ糖エステル等が挙げられる。これら脂溶性脂肪酸及びその誘導体はいずれも常温で液状であることが酵素を担体に固定化する工程上好ましい。これら脂溶性脂肪酸又はその誘導体としては、上記２種以上を併用してもよく、菜種脂肪酸、大豆脂肪酸等の天然由来の脂肪酸を用いることもできる。

固定化酵素の加水分解活性は２０Ｕ／ｇ以上、更に１００〜１００００Ｕ／ｇ、特に５００〜５０００Ｕ／ｇの範囲であることが好ましい。ここで酵素の１Ｕは、４０℃において、油脂類：水＝１００：２５（質量比）の混合液を攪拌混合しながら３０分間加水分解をさせたとき、１分間に１μｍｏｌの遊離脂肪酸を生成する酵素の分解能を示す。

油脂類の単位質量当りに付与した固定化酵素の加水分解活性（Ｕ／ｇ−ｏｉｌ）と、ある加水分解率に到達するまでの所要時間は、略反比例の関係にある。固定化酵素を充填した充填層（酵素塔）を用いて加水分解を行う場合、送液条件（通液速度、温度等）により分解速度は異なるが、加水分解所要時間（充填層内の滞留時間）と充填層内に存在する油脂類の重量（ｇ−ｏｉｌ）及び固定化酵素の充填重量（ｇ）から固定化酵素の見かけ活性（発現活性）（Ｕ／ｇ）が求められる。

本発明に使用する油相基質とは主に油脂類をいうが、油脂類とはトリアシルグリセロールの他、ジアシルグリセロール、モノアシルグリセロール、又は脂肪酸類を含んでいても良く、加水分解の結果得られる脂肪酸を含んでいても良い。油相基質の具体例としては、菜種油、大豆油、ヒマワリ油、パーム油及びアマニ油等の植物油、牛脂、豚脂及び魚油等の動物油等、又はこれらの組み合わせの油脂類が挙げられる。これら油脂類は、脱臭油の他、予め脱臭されていない未脱臭油脂を用いることができるが、これら油脂類の一部又は全部に未脱臭油脂を使用することが、トランス不飽和脂肪酸、共役不飽和脂肪酸を低減し、原料油脂由来の植物ステロール、植物ステロール脂肪酸エステル、トコフェロールを残存させることができる点から好ましい。油相基質中には、前記油脂類の他に脂肪酸等の油溶性成分が混合されていても良い。脂肪酸類とは、加水分解の結果得られる脂肪酸の他、上記グリセリドの１種以上を含むものも指す。

本発明に使用する水相基質は水であるが、加水分解の結果得られるグリセリン等、その他の水溶性成分が混合されていても良い。

本発明において使用する固定床型反応塔（酵素塔）は、その形状は使用するポンプの押し込み圧に耐えられるものであれば良い。また、酵素塔の周囲にジャケットを設け、酵素塔内に流通する反応液を酵素反応に適した温度に調整できるものであることが好ましい。酵素塔内の温度は、固定化酵素の活性をより有効に引き出すために、０〜６０℃、更に２０〜４０℃とすることが好ましい。酵素塔の長さは、所望の分解率を得るのに必要な長さとすれば良いが、反応性、塔内圧力損失等の点から０．０１〜１０ｍ、好ましくは０．１〜５ｍの範囲とすることが好ましい。

本発明においては、酵素塔に、一の管の断面が直径１００ｍｍ以下の円形又は対角線長１００ｍｍ以下の多角形である複数の管状構造が形成されるように内装物又は配管を装填し、該管状構造内に固定化酵素を充填し、該管状構造内に前記液体混合物を供給して反応を行う。このような小さな断面積を有する複数の管状構造内で反応を行わせることにより、酵素塔内の流路の断面積が小さくなり、２液相となっている反応液の流れを均一にすることができる。なお、この際、該管状構造が形成された内装物又は配管と酵素塔内壁との間に間隙がある場合には、この間隙にも固定化酵素を充填することが、反応液の流れを均一にする点から好ましい。内装物又は配管は、酵素塔内に前記断面積を有する複数の管状構造を形成できればよく、該内装物には、例えば円柱状のもの（図１）、角柱状のもの（図２）、板状のもの（仕切板）（図３）が挙げられる。すなわち、内装物又は配管は、上下方向に装填され、好ましくは柱状に装填される。より具体的には、配管を装填して多管式とする方法、酵素塔内部に上下方向の仕切板（平板、コルゲート板等）を装填する方法、円形や多角形の断面を有する内装物を装填する方法などが挙げられる。このうち、内装物を装填する場合には、内装物の装填効率の観点から、断面の形状は正三角形、正方形、正六角形が好ましい。内装物としては、例えば角パイプを束ねた形態のものが使用できる。

配管又は内装物により形成される複数の管状構造の一の管（一流路）の断面の直径又は対角線長は１００ｍｍ以下であることが必要であるが、反応性向上の観点から、好ましくは７５ｍｍ以下、更に５０ｍｍ以下、特に３５ｍｍ以下とすることが好ましい。

酵素塔への配管又は内装物の装填により形成された複数の管状構造物に、固定化酵素が充填され、該管状構造物内に２液相の液体混合物（反応液）が供給される（図４参照）。
かくすることにより、２液相の液体混合物（反応液）の酵素塔内の流れが均一になる。

固定化酵素を充填する際、該配管又は内装物と酵素塔内壁との間に間隙があり、その間隙が極端に狭いと、固定化酵素が充填し難くなる。この間隙への充填が不十分であると、酵素塔全体として充填が不均一となり、嵩密度の低下が生じる場合がある。この場合、反応液の流れが不均一となり、反応効率低下を招く原因となり得る。従って、該配管又は内装物と酵素塔内壁との間隙を一定以上とすることが好ましい。固定化酵素等の充填物の種類や粒径、更に配管又は内装物の大きさにもよるが、該配管又は内装物と酵素塔内壁との間隙の最も狭い部分を１ｍｍ以上とすることが好ましく、更に５ｍｍ以上とすることが、固定化酵素を均一に充填する点から好ましい。当該間隔の上限は、配管又は内装物の管状構造の一の管の断面の直径又は対角線長以下とすることが、反応液の流れを均一にする点から好ましく、更に７０ｍｍ以下、特に５０ｍｍ以下とすることが好ましい。

酵素塔内における配管又は内装物の長さは、固定化酵素の充填厚み以上であることが、塔内の反応液全体の流れを均一化する点から好ましいが、充填厚みより短くても充填厚みの５０％以上、更に７５％以上の範囲であれば同様の効果が得られる。

また、配管又は内装物は、その全長に渡って切れ目がなくても良いが、充填した固定化酵素の交換し易さ等の作業性の点から、上下方向に複数段に分割されていることが好ましい。段数としては、酵素塔の全長にもよるが、２〜３０分割、更に２〜１０分割であることが好ましい。また、更に、各段の配管又は内装物は、酵素塔内への装填し易さ等の点から、それぞれ横方向に複数部分に分割されていても良い。

反応液の通液線速度は、好ましくは１〜４００ｍｍ／分、更に５〜２００ｍｍ／分であるのが好ましい。この通液線速度（ｍｍ／分）は、１分間当りの送液量（ｍｍ³／分）（又は送液速度（１０^-3ｍＬ／分）ともいう）を充填層断面積（ｍｍ²）で除した商で表わされる値をいう。通液線速度を上げることによる充填塔内圧力の増大に伴ない、通液が困難となり、耐圧性の高い酵素充填塔が必要となる他に、固定化酵素が塔内圧力増加により破砕される場合が生じることもあるため、通液線速度は４００ｍｍ／分以下とすることが好ましい。また、生産性の点から通液線速度は１ｍｍ／分以上とすることが好ましい。固定化酵素の発現活性は、通液線速度により変化するため、最適な通液線速度を選定して反応条件を決定することで、所望の生産能力、製造コストに見合った反応を行うことができる。

酵素塔内の反応液の滞留時間は、加水分解反応の平衡状態を回避し、固定化酵素の活性をより有効に引き出し、生産性を向上させる点から３０秒〜６０分、更に１分〜４０分とすることが好ましい。滞留時間（分）とは、充填層の厚み（ｍｍ）に空隙率を乗じ、これを通液線速度（ｍｍ／分）で除した値で表わされる。

本発明においては、反応性、生産性等の兼ね合いから、酵素塔を通過した反応液をそのまま反応終了物としても良く、また、反応液を一旦油水分離し、油相を分取した後に新しい水を加えて上記と同様の方法で再度同一の酵素塔へ供給し、所望の反応率が得られるまで繰り返し通過させても良い。また、反応液を一旦油水分離し、油相を分取した後に新しい水を加えて上記と同様の方法で再度、別の酵素塔へ供給して連続反応を行っても良い。また、複数の酵素塔を用いて反応液の油水分離を行いながら、油相を次の酵素塔へ、水相を前の酵素塔へ供給する事により、より分解率の高い油相を新鮮な水相と反応させる擬似向流法で行っても良い。反応液の油水分離法としては、自然沈降型、遠心分離型等の油水分離器が一般に使用されるが、特に限定されない。

〔固定化リパーゼの調製〕
ＤｕｏｌｉｔｅＡ−５６８（ダイヤモンドシャムロック社製、粒径分布１００〜１０００μｍ）１重量部をＮ／１０のＮａＯＨ溶液１０質量部中で１時間攪拌した。ろ過した後１０質量部のイオン交換水で洗浄し５００ｍＭの酢酸緩衝液（ｐＨ７）１０質量部でｐＨの平衡化を行なった。その後５０ｍＭの酢酸緩衝液（ｐＨ７）１０質量部で２時間づつ２回ｐＨの平衡化を行なった。この後ろ過を行ない担体を回収した後、エタノール５質量部でエタノール置換を３０分行なった。ろ過した後、リシノール酸を１質量部含むエタノール５質量部を加え３０分間、リシノール酸を担体に吸着させた。ろ過によって担体を回収した後、５０ｍＭの酢酸緩衝液（ｐＨ７）５質量部で３０分づつ４回洗浄し、エタノールを除去し、ろ過して担体を回収した。その後市販のリパーゼ（リパーゼＡＹ、アマノ天野製薬（株））１質量部を５０ｍＭの酢酸緩衝液（ｐＨ７）９質量部に溶解した酵素液と５時間接触させ、固定化を行なった。ろ過し、固定化酵素を回収して５０ｍＭの酢酸緩衝液（ｐＨ７）１０質量部で洗浄を行なうことにより、固定化していない酵素やタンパクを除去した。その後実際に分解を行なう大豆油を４質量部加え１２時間攪拌した。以上の操作はいずれも２０℃で行なった。その後ろ過して油脂と分離し、固定化酵素とした。その結果、２７００Ｕ／ｇ（乾燥重量）の加水分解活性（発現すべき活性）を示す固定化リパーゼが得られた。固定化酵素の重量基準の平均粒子径は４５１μｍであった。

＜実施例１＞
断面が２４ｍｍ×２４ｍｍの正方形（肉厚１．５ｍｍ）で、高さ３００ｍｍの角パイプ４０本を束ねた内装物（段数５、合計高さ１５００ｍｍ）を装填したジャケット付きのステンレス製カラム（内径２００ｍｍ、高さ１６００ｍｍ）に、前記固定化リパーゼ１０．５ｋｇ（乾燥重量）を充填し（充填高さ１５００ｍｍ）、ジャケットにて３５℃に保温した。カラム上部より菜種油と蒸留水を重量比１０：６で混合した液を３０ｋｇ／Ｈｒで送液し、加水分解反応を行った。その結果を表１に示す。なお、表中の分解率は、分析により求めた酸価をケン化価で除することにより算出した。なお、酸価は、ＡｍｅｒｉｃａｎＯｉｌＣｈｅｍｉｓｔｓ．ＳｏｃｉｅｔｙＯｆｆｉｃｉａｌＭｅｔｈｏｄＣａ５ａ−４０に記載の方法により、またケン化価はＡｍｅｒｉｃａｎＯｉｌＣｈｅｍｉｓｔｓ．ＳｏｃｉｅｔｙＯｆｆｉｃｉａｌＭｅｔｈｏｄＣｄ３ａ−９４に記載の方法により測定した。

＜実施例２＞
断面が３５ｍｍ×３５ｍｍの正方形（肉厚１．５ｍｍ）で、高さ３００ｍｍの角パイプを１６本束ねた内装物（段数５、合計高さ１５００ｍｍ）を装填したジャケット付きのステンレス製カラム（内径２００ｍｍ、高さ１６００ｍｍ）に、前記固定化リパーゼを乾燥ベースで１１．４ｋｇ充填（充填高さ１５００ｍｍ）した以外は、実施例１と同様の手順で加水分解反応を行った。結果を表１に示す。

＜実施例３＞
断面が５２ｍｍ×５２ｍｍの正方形（肉厚１．５ｍｍ）で、高さ３００ｍｍの角パイプを７本束ねた内装物（段数５、合計高さ１５００ｍｍ）を装填したジャケット付きのステンレス製カラム（内径２００ｍｍ、高さ１６００ｍｍ）に、前記固定化リパーゼを乾燥ベースで１１．９ｋｇ充填（充填高さ１５００ｍｍ）した以外は、実施例１と同様の手順で加水分解反応を行った。結果を表１に示す。

＜実施例４＞
断面が７０ｍｍ×７０ｍｍの正方形（肉厚１．５ｍｍ）で、高さ３００ｍｍの角パイプを４本束ねた内装物（段数５、合計高さ１５００ｍｍ）を装填したジャケット付きのステンレス製カラム（内径２００ｍｍ、高さ１６００ｍｍ）に、前記固定化リパーゼを乾燥ベースで１２．１ｋｇ充填（充填高さ１５００ｍｍ）した以外は、実施例１と同様の手順で加水分解反応を行った。結果を表１に示す。

＜実施例５＞
断面が３７ｍｍ×３７ｍｍの正方形（肉厚１．５ｍｍ）で、高さ３００ｍｍの角パイプを１６本束ねた内装物（段数５、合計高さ１５００ｍｍ）を装填したジャケット付きのステンレス製カラム（内径２００ｍｍ、高さ１６００ｍｍ）に、前記固定化リパーゼを乾燥ベースで１０．７ｋｇ充填（充填高さ１５００ｍｍ）した以外は、実施例１と同様の手順で加水分解反応を行った。このとき、内装物とカラム内壁との間隙は最も狭い部分で０．３５ｍｍであった。結果を表１に示す。

＜比較例１＞
ステンレス製カラムに角パイプを装填せず、また前記固定化リパーゼを乾燥ベースで１２．７ｋｇ充填（充填高さ１５００ｍｍ）した以外は実施例１と同様の手順で加水分解反応を行った。結果を表１に示す。

表１に示した結果から、固定床型反応塔内部に、一定の断面有する複数の管状構造を形成するように内装物を装填した状態で、菜種油及び蒸留水を供給して加水分解する事により、分解率が向上し、固定化酵素の（見掛け）活性が有効に発現することが明らかとなった。また、固定床型反応塔の内壁と内装物との間隙に狭い部分がある場合には、固定化酵素充填時の空隙率が若干高めとなり、分解率が低下傾向となるが、該間隙を１ｍｍ以上とする事で解消される事が明らかとなった。

円柱状内装物が装填された酵素塔の断面を示す図である。角柱状内装物が装填された酵素塔の断面を示す図である。板状（仕切板）内装物が装填された酵素塔の断面を示す図である。酵素塔における反応液の流れを示す概念図である。

Claims

固定化酵素を充填した固定床型反応塔に２液相を形成する液体混合物を供給し、同一方向に並流させて反応を行う有用物質の製造方法において、一の管の断面が直径１００ｍｍ以下の円形又は対角線長１００ｍｍ以下の多角形である複数の管状構造が形成されるように内装物又は配管を装填した固定床型反応塔を用い、該管状構造内に固定化酵素を充填し、該管状構造内に前記液体混合物を供給する有用物質の製造方法。
前記液体混合物のうち一種が植物油、動物油又はこれらを組み合わせた油脂類である請求項１記載の有用物質の製造方法。
前記反応が固定化リパーゼを用いた油脂類の加水分解反応である請求項１又は２記載の有用物質の製造方法。
有用物質が脂肪酸類である請求項１〜３のいずれか１項に記載の有用物質の製造方法。
内装物又は配管が、上下方向に複数段に分割されているものである請求項１〜４のいずれか１項に記載の有用物質の製造方法。
内装物又は配管が、横方向に複数部分に分割されているものである請求項１〜５のいずれか１項に記載の有用物質の製造方法。
内装物又は配管と固定床型反応塔内壁との間隙の最も狭い部分が１ｍｍ以上である請求項１〜６のいずれか１項に記載の有用物質の製造方法。