JP2007075119A - C型肝炎ウイルス5及び6型 - Google Patents
C型肝炎ウイルス5及び6型 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2007075119A JP2007075119A JP2006289124A JP2006289124A JP2007075119A JP 2007075119 A JP2007075119 A JP 2007075119A JP 2006289124 A JP2006289124 A JP 2006289124A JP 2006289124 A JP2006289124 A JP 2006289124A JP 2007075119 A JP2007075119 A JP 2007075119A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- hcv
- peptide
- antigenic
- mixture
- type
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 241001466982 Hepatitis C virus genotype 5 Species 0.000 title abstract description 21
- 241000143279 Hepatitis C virus genotype 6 Species 0.000 title abstract 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 216
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 claims abstract description 42
- 101710159910 Movement protein Proteins 0.000 claims abstract description 23
- 101710144117 Non-structural protein 4 Proteins 0.000 claims abstract description 23
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 claims abstract description 17
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 claims abstract description 4
- 238000012217 deletion Methods 0.000 claims abstract description 3
- 230000037430 deletion Effects 0.000 claims abstract description 3
- 238000003780 insertion Methods 0.000 claims abstract description 3
- 230000037431 insertion Effects 0.000 claims abstract description 3
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 claims abstract description 3
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 81
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 52
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 44
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 43
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 39
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 33
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 claims description 21
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 19
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims description 16
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims description 16
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims description 16
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 16
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims description 16
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 claims description 13
- 230000004927 fusion Effects 0.000 claims description 12
- 238000012216 screening Methods 0.000 claims description 11
- 238000009472 formulation Methods 0.000 claims description 9
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims description 4
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 claims description 3
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims description 3
- 230000003321 amplification Effects 0.000 claims description 3
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims description 3
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 claims description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 3
- 101710182846 Polyhedrin Proteins 0.000 claims description 2
- 101150044170 trpE gene Proteins 0.000 claims description 2
- 102100026189 Beta-galactosidase Human genes 0.000 claims 1
- 108010070675 Glutathione transferase Proteins 0.000 claims 1
- 102100029100 Hematopoietic prostaglandin D synthase Human genes 0.000 claims 1
- 101100408135 Pseudomonas aeruginosa (strain ATCC 15692 / DSM 22644 / CIP 104116 / JCM 14847 / LMG 12228 / 1C / PRS 101 / PAO1) phnA gene Proteins 0.000 claims 1
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 claims 1
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 claims 1
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 abstract description 10
- 241000711549 Hepacivirus C Species 0.000 description 99
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 46
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 46
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 41
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 28
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 25
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 24
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 23
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 19
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 19
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 17
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 17
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 17
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 15
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 15
- 239000000047 product Substances 0.000 description 14
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 14
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 14
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 13
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 13
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 13
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 12
- 239000013615 primer Substances 0.000 description 12
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 10
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 10
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 10
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 8
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 8
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 8
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 8
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 7
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 7
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 7
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 7
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 6
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 6
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 6
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 6
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 6
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 6
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 6
- 108010038807 Oligopeptides Proteins 0.000 description 5
- 102000015636 Oligopeptides Human genes 0.000 description 5
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 5
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 5
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 5
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 5
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 5
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 5
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 5
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 5
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 4
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 4
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 4
- 108020000999 Viral RNA Proteins 0.000 description 4
- -1 aminohydroxyl Chemical group 0.000 description 4
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 4
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 4
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 4
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 4
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 4
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 4
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 4
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 4
- OPIFSICVWOWJMJ-AEOCFKNESA-N 5-bromo-4-chloro-3-indolyl beta-D-galactoside Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CNC2=CC=C(Br)C(Cl)=C12 OPIFSICVWOWJMJ-AEOCFKNESA-N 0.000 description 3
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 3
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 3
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 3
- 101710144111 Non-structural protein 3 Proteins 0.000 description 3
- 108010021757 Polynucleotide 5'-Hydroxyl-Kinase Proteins 0.000 description 3
- 102000008422 Polynucleotide 5'-hydroxyl-kinase Human genes 0.000 description 3
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 3
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 3
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 3
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 3
- BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside Chemical compound CC(C)S[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N 0.000 description 3
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 3
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 3
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 3
- 230000004044 response Effects 0.000 description 3
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 3
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 108010042407 Endonucleases Proteins 0.000 description 2
- 102000004533 Endonucleases Human genes 0.000 description 2
- 208000005176 Hepatitis C Diseases 0.000 description 2
- 206010019786 Hepatitis non-A non-B Diseases 0.000 description 2
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 2
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000003960 Ligases Human genes 0.000 description 2
- 108090000364 Ligases Proteins 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 2
- 108010076039 Polyproteins Proteins 0.000 description 2
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 2
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 2
- 101710172711 Structural protein Proteins 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000019197 Superoxide Dismutase Human genes 0.000 description 2
- 108010012715 Superoxide dismutase Proteins 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 2
- 239000000538 analytical sample Substances 0.000 description 2
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 2
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 2
- 210000000628 antibody-producing cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000002820 assay format Methods 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- UCMIRNVEIXFBKS-UHFFFAOYSA-N beta-alanine Chemical compound NCCC(O)=O UCMIRNVEIXFBKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 2
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 239000013626 chemical specie Substances 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 2
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 2
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 2
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 2
- 238000012869 ethanol precipitation Methods 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 239000011491 glass wool Substances 0.000 description 2
- 229940098197 human immunoglobulin g Drugs 0.000 description 2
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 2
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 2
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 2
- 238000001114 immunoprecipitation Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 2
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 2
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 2
- 238000013081 phylogenetic analysis Methods 0.000 description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 2
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 2
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 2
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 2
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 2
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 1
- DHBXNPKRAUYBTH-UHFFFAOYSA-N 1,1-ethanedithiol Chemical compound CC(S)S DHBXNPKRAUYBTH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VUCNQOPCYRJCGQ-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(hydroxymethyl)phenoxy]acetic acid Chemical compound OCC1=CC=C(OCC(O)=O)C=C1 VUCNQOPCYRJCGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NKDFYOWSKOHCCO-YPVLXUMRSA-N 20-hydroxyecdysone Chemical compound C1[C@@H](O)[C@@H](O)C[C@]2(C)[C@@H](CC[C@@]3([C@@H]([C@@](C)(O)[C@H](O)CCC(C)(O)C)CC[C@]33O)C)C3=CC(=O)[C@@H]21 NKDFYOWSKOHCCO-YPVLXUMRSA-N 0.000 description 1
- UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 3,3',5,5'-tetramethylbenzidine Chemical compound CC1=C(N)C(C)=CC(C=2C=C(C)C(N)=C(C)C=2)=C1 UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 102100036475 Alanine aminotransferase 1 Human genes 0.000 description 1
- 108010082126 Alanine transaminase Proteins 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 101000942941 Arabidopsis thaliana DNA ligase 6 Proteins 0.000 description 1
- 108010003415 Aspartate Aminotransferases Proteins 0.000 description 1
- 102000004625 Aspartate Aminotransferases Human genes 0.000 description 1
- 101710132601 Capsid protein Proteins 0.000 description 1
- 206010008909 Chronic Hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 1
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 1
- 102000012410 DNA Ligases Human genes 0.000 description 1
- 108010061982 DNA Ligases Proteins 0.000 description 1
- 108020001019 DNA Primers Proteins 0.000 description 1
- 239000003155 DNA primer Substances 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108060002716 Exonuclease Proteins 0.000 description 1
- 206010019705 Hepatic pain Diseases 0.000 description 1
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 description 1
- 241000134307 Hepatitis C virus genotype 1 Species 0.000 description 1
- 206010019799 Hepatitis viral Diseases 0.000 description 1
- 241000709721 Hepatovirus A Species 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 241000701044 Human gammaherpesvirus 4 Species 0.000 description 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- 206010023126 Jaundice Diseases 0.000 description 1
- 241000235058 Komagataella pastoris Species 0.000 description 1
- 206010067125 Liver injury Diseases 0.000 description 1
- 238000007476 Maximum Likelihood Methods 0.000 description 1
- BZLVMXJERCGZMT-UHFFFAOYSA-N Methyl tert-butyl ether Chemical compound COC(C)(C)C BZLVMXJERCGZMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 101100005280 Neurospora crassa (strain ATCC 24698 / 74-OR23-1A / CBS 708.71 / DSM 1257 / FGSC 987) cat-3 gene Proteins 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 1
- 108010039918 Polylysine Proteins 0.000 description 1
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 241000256251 Spodoptera frugiperda Species 0.000 description 1
- 101710120037 Toxin CcdB Proteins 0.000 description 1
- 108020005202 Viral DNA Proteins 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 description 1
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K aluminium phosphate Chemical compound O1[Al]2OP1(=O)O2 ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 230000010310 bacterial transformation Effects 0.000 description 1
- 108010058966 bacteriophage T7 induced DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 229940000635 beta-alanine Drugs 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 125000002915 carbonyl group Chemical group [*:2]C([*:1])=O 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 229920002301 cellulose acetate Polymers 0.000 description 1
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 description 1
- 230000003196 chaotropic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000084 colloidal system Substances 0.000 description 1
- 230000009137 competitive binding Effects 0.000 description 1
- 230000001010 compromised effect Effects 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003145 cytotoxic factor Substances 0.000 description 1
- 230000030609 dephosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006209 dephosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 125000000664 diazo group Chemical group [N-]=[N+]=[*] 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 238000001952 enzyme assay Methods 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 102000013165 exonuclease Human genes 0.000 description 1
- 210000000416 exudates and transudate Anatomy 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000010419 fine particle Substances 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 230000005021 gait Effects 0.000 description 1
- 230000007274 generation of a signal involved in cell-cell signaling Effects 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 150000004820 halides Chemical class 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 231100000234 hepatic damage Toxicity 0.000 description 1
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 description 1
- 208000010710 hepatitis C virus infection Diseases 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 1
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000014726 immortalization of host cell Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 239000007972 injectable composition Substances 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 229910010272 inorganic material Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011147 inorganic material Substances 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 238000012317 liver biopsy Methods 0.000 description 1
- 230000008818 liver damage Effects 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 230000005389 magnetism Effects 0.000 description 1
- 125000005439 maleimidyl group Chemical group C1(C=CC(N1*)=O)=O 0.000 description 1
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 150000002739 metals Chemical class 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 230000036963 noncompetitive effect Effects 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 238000013492 plasmid preparation Methods 0.000 description 1
- 229920000656 polylysine Polymers 0.000 description 1
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 1
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- MXRGZXBFSKSZPH-UHFFFAOYSA-N protheobromine Chemical compound O=C1N(CC(O)C)C(=O)N(C)C2=C1N(C)C=N2 MXRGZXBFSKSZPH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 1
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 1
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 210000004243 sweat Anatomy 0.000 description 1
- 210000001138 tear Anatomy 0.000 description 1
- HNKJADCVZUBCPG-UHFFFAOYSA-N thioanisole Chemical compound CSC1=CC=CC=C1 HNKJADCVZUBCPG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 1
- 230000005030 transcription termination Effects 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 230000014621 translational initiation Effects 0.000 description 1
- PIEPQKCYPFFYMG-UHFFFAOYSA-N tris acetate Chemical compound CC(O)=O.OCC(N)(CO)CO PIEPQKCYPFFYMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 201000001862 viral hepatitis Diseases 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/29—Hepatitis virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/70—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving virus or bacteriophage
- C12Q1/701—Specific hybridization probes
- C12Q1/706—Specific hybridization probes for hepatitis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/70—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving virus or bacteriophage
- C12Q1/701—Specific hybridization probes
- C12Q1/706—Specific hybridization probes for hepatitis
- C12Q1/707—Specific hybridization probes for hepatitis non-A, non-B Hepatitis, excluding hepatitis D
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56983—Viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
- C12N2770/00011—Details
- C12N2770/24011—Flaviviridae
- C12N2770/24211—Hepacivirus, e.g. hepatitis C virus, hepatitis G virus
- C12N2770/24222—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
- C12N2770/00011—Details
- C12N2770/24011—Flaviviridae
- C12N2770/24211—Hepacivirus, e.g. hepatitis C virus, hepatitis G virus
- C12N2770/24234—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/005—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from viruses
- G01N2333/08—RNA viruses
- G01N2333/18—Togaviridae; Flaviviridae
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2469/00—Immunoassays for the detection of microorganisms
- G01N2469/20—Detection of antibodies in sample from host which are directed against antigens from microorganisms
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/811—Test for named disease, body condition or organ function
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/82—Hepatitis associated antigens and antibodies
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/825—Pretreatment for removal of interfering factors from sample
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/806—Antigenic peptides or proteins
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/81—Carrier - bound or immobilized peptides or proteins and the preparation thereof, e.g. biological cell or cell fragment as carrier
- Y10S530/811—Peptides or proteins is immobilized on, or in, an inorganic carrier
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/82—Proteins from microorganisms
- Y10S530/826—Viruses
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Virology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Mycology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
Abstract
【解決手段】以下のアミノ酸配列からなる群から選択される抗原性NS4配列を有するHCVペプチド。
HCV5型 RPAI I PDREVLYQQFDKM、
HCV6型 KPAVVPDREILYQQFDEM、
生物試料における対応するHCV-5及びHCV-6抗体を検出するための免疫分析に有用な、抗原性NS4ペプチドを付与するように続いている欠失、挿入又は置換を有するその配列変異体。
【選択図】なし
Description
臨床的には、黄疸、肝痛覚及び血清レベルのアラニンアミノトランスフェラーゼ及びアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼの上昇を含む患者の一組の明瞭な症状によって診断される。血清学的免疫分析は、通常、特定の種類のウイルス作因を診断するために行われる。歴史的には、肝炎の症状を示しかつA型肝炎ウイルス、B型肝炎ウイルス又、エプスタイン・バールウイルス又はサイトメガロウイルスによって感染されていない患者は、怠慢により臨床的には非A非B型肝炎(NANBH)として診断された。
C及びE領域は、各々ヌクレオキャプシド構造タンパク質とエンベロープ構造タンパク質をコードする。更に、まだはっきりしない機能を有する非構造(NS)タンパク質をコードする少なくとも5つの領域が続いている。その体制は、次の通りであると考えられている(A.Alberti,Journal of Hepatology,1991; 12;279-282)。
5' 3'
NCR:C:E1:E2:NS1:NS2:NS3:NS4:NS5
欧州特許出願第 0445423号には、HCV抗体を検出するために改良された免疫分析法であることが明記されているものが開示されている。
英国の血液銀行は、供血者のHCV成分に対する抗体の通常の試験を実施している。1世代分析は、C100−3ポリペプチドに対するHCV抗体の検出を含むものであった。そのC100−3抗体は、ウイルスの非構造領域内の複合ポリタンパク質抗原を認識し、HCV感染の一致したマーカーである。しかしながら、急性感染症においては、この抗体は、露出後のセロコンバージョンが遅い(典型的には22週間)ために信頼性がない。更に、そのC100−3抗体試験は、C型肝炎ウイルスに対する特異性がない。
最近、配列がかなり異なる別の種類のHCVが発見され、これらはHCV−2、3及び4と呼ばれた。我々の国際出願第93/10239号(1993年5月27日に公開された)には、HCV−2、3及び4の特定の抗原配列が記載されている。HCV−4として開示された配列は、5′NCR及びコア領域にのみある。前者は、HCVの免疫分析に用いられるタンパク質をコードしないが、コア領域は保存される傾向がある。
本発明の1態様は、肝炎ウイルス4、5又は6型にユニークなヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドを提供するものである。
その配列は、他のHCV型によって共有されないのでHCV型をユニークに検出するために用いることができる意味で関係しているHCV型にユニークである。
HCV4、5及び6間の配列変動性は、NS4、NS5及びコア領域に特に見られるので、特に型特異的ポリヌクレオチド及びペプチドが得られるのはこれらの領域からである。型特異的とは、そのHCV型にユニークな配列を含むことを意味する。更に、各HCV型の中に多数のサブタイプが存在し、小さな配列変動がある。
本発明は、NS5領域からの抗原HCV−4又はHCV−6特異的ポリペプチド又はNS4領域からの抗原HCV−4、HCV−5又はHCV−6特異的ポリペプチド;又はこれらの抗原を含むポリペプチドを含むものである。このペプチドの複数のコピーが多抗原ペプチドコアに結合される。
本ペプチドは、検出を容易にするために標識され、例えば、対応する抗体を検出する免疫分析に有用な、NS5領域からの標識抗原HCV−4又はHCV−6特異的ポリペプチド又はNS4領域からの標識抗原HCV−4、HCV−5又はHCV−6特異的ポリペプチド;(又はその混合物)であってもよい。
これらのポリペプチドは、NS4又はNS5全領域を必ずしも含まないが、HCVの具体的な型にユニークなその特徴的部分(通常特徴的エピトープ)が用いられることは理解されねばならない。
本発明の別の態様は、免疫原性ペプチド、特にHCV−4又はHCV−6NS5ペプチド又は免疫原性HCV−4、HCV−5又はHCV−6NS4ポリペプチドを含むワクチンを提供するものである。
本発明の別の態様は、試験管内HCV型別方法であって、制限断片を得るHCV含有試料のエンドヌクレアーゼ消化を行い、その制限パターンがHCV−4、HCV−5又はHCV−6の特徴を示すことを含む方法を提供するものである。
更に、本発明は、HCV−4、HCV−5又はHCV−6抗原エピトープ(又はそれに対する抗体)を少なくとも1種含むポリペプチド並びに必要な分取用試薬、洗浄試薬、検出試薬及びシグナル発生試薬を含む分析キットを包含する。
HCV−4、HCV−5又はHCV−6特異的ポリヌクレオチド配列は、ハイブリッド形成法によりHCVウイルス自体(通常はPCRによって増幅される)の同定に用いられる。
また、本発明は、本明細書で定義されたDNA配列を含む発現ベクターであって、適切な宿主中で本明細書で定義されたペプチドを産生するDNA配列を発現させることができる発現ベクターを提供するものである。
その発現ベクターは、通常、適切な宿主中でDNA配列を発現させるDNAの制御要素を含む。これらの要素は、宿主によって異なるが、通常、プロモーター、リボソーム結合部位、翻訳開始及び停止部位及び転写終結部位が含まれる。かかるベクターの例としては、プラスミド及びウイルスが挙げられる。本発明の発現ベクターは、染色体外ベクター及び宿主細胞の染色体に組込まれるベクターの双方を包含する。E.coliに使用する場合、発現ベクターは、本発明のDNA配列を任意により、例えばB−ガラクトシダーゼをコードするDNA配列の5′端あるいは3′端又は例えばtrpE遺伝子をコードするDNA配列の3′端に結合した融合体として含んでもよい。昆虫バキュロウイルス(AcNPV)系に使用する場合、DNA配列はポリヘドリンコーディング配列に任意に融合されてもよい。
本発明は、また、本明細書で定義された発現ベクターで形質転換された宿主細胞を提供するものである。
本発明は、また、本明細書で定義されたペプチドの調製方法であって、本明細書で定義されたDNA配列をHCVゲノムから分離するか又は本明細書で定義されたペプチドをコードするDNA配列を合成するか又は該ペプチドをコードするDNA配列を作成する工程、適切な宿主中で発現することができるように発現ベクターに該DNA配列を挿入する工程、該発現ベクターで宿主細胞を形質転換する工程、その形質転換宿主細胞を培養する工程及び該ペプチドを単離する工程を含む方法を提供するものである。
該ペプチドをコードするDNA配列は、標準方法を用いて合成される(Gait, Olligonucleotide Synthesis:A Practical Approach,1984,Oxford,IRLPress)。
宿主細胞の形質転換は、標準手法を用いて行われる。ある表現型マーカーは、通常、発現ベクターを巧く挿入する形質転換細胞と巧く挿入しないものを区別するために用いられる。その形質転換宿主細胞の培養と要求されたペプチドの分離も標準手法を用いて行われる。
即ち、本発明のペプチドは、組換えDNA技術によって調製されるか又は、例えば自動シンセサイザーを用いて合成される。
本明細書で用いられる“ペプチド”(及び“ポリペプチド”)なる語は、抗原性として最低数のアミノ酸残基を有するエピトープペプチドをオリゴペプチドを介してタンパク質まで含むものである。このペプチドは、形質転換細胞から発現された組換えペプチドであってもよいし、化学合成によって生産された合成ペプチドであってもよい。
本発明のペプチドに特異的な抗体は、そのペプチドを用いて産生させることができる。その抗体は、そのペプチドのバッチ品質制御試験に;ペプチド又はウイルス溶菌液の精製に;エピトープマッピングに;標識された場合、抗体検出用競合的型分析における複合体として;及び抗原検出分析に用いられる。
本発明のペプチドに対するモノクローナル抗体は、不死化細胞系の細胞をトポグラフィー的に関連したペプチドのウイルスに対して抗体を産生する細胞と融合し、その融合不死化細胞系を培養することにより得られる。典型的には、マウス又はラットのような非ヒト哺乳動物宿主に該ペプチドを接種する。該宿主が抗体応答を開始するのに十分な時間が経過した後、脾細胞のような抗体産生細胞を取り出す。マウス又はラット骨髄腫細胞系のような不死化細胞系の細胞を抗体産生細胞と融合し、所望のモノクローナル抗体を分泌するハイブリドーマのような細胞系を同定するために得られた融合物をスクリーンする。その融合細胞系を培養し、該モノクローナル抗体がポリクローナル抗体の精製と同様の哺乳動物で培養基から精製される。
ウイルス感染の診断用分析においては、ウイルス核酸、ウイルス抗原又はウイルス抗体の検出を各々含む基本的に3種類の異なった方法が採用される。ウイルス核酸は、一般にはウイルス自体の存在の最良の指標と見なされ、感染しているらしい材料を同定する。しかしながら、核酸の検出は、通常、標的レベルが非常に低いので抗原又は抗体の検出ほど端的でない。ウイルス抗原は、ウイルスの存在のマーカーとして及び感染の指標として用いられる。ウイルスによっては、試料中に存在する抗原の量が少なく検出が難しいことがある。抗体検出は、実際には、宿主免疫系が多量の循環抗体を産生することにより感染に対する応答を増幅することから比較的端的である。抗体応答の種類は、たいてい臨床上有効であり、例えば、IgGクラスよりEgMクラス抗体が最近の感染を示し、具体的なウイルス抗原に対する応答はウイルスのクリアランスと関連がある。即ち、ウイルス感染の診断に採用される正確な方法は、具体的な状況及び探究された情報に左右される。HCVの場合、診断分析はこれらの3種類の方法のいずれを具体化してもよい。
ウイルス抗原又は抗体の検出を含むHCV診断用分析においては、本方法は、試験試料を本発明のペプチド又は該ペプチドに対するポリクローナル又はモノクローナル抗体と接触させる工程及び該試験試料中に抗原−抗体結合が含まれているかを決定する工程を含むものである。このために、本明細書で定義されたペプチド又はそれに対するポリクローナル又はモノクローナル抗体及び試験試料中に抗体又は抗原との結合が各々含まれて免疫複合体を生成しているかを決定する手段を含む試験キットが提供される。試験試料は、適切な組織又は生理的液体、例えば、血液(血清又は血漿)、唾液、尿、脳脊髄液、汗、涙又は組織浸出液のいずれかから採取される。生理的液体が得られる場合には、存在するウイルス抗原又は抗体が任意に濃縮されてもよい。
本ペプチドが溶液から抗体を捕捉するために用いられる分析のタイプは、本ペプチドを固体表面上に固定化することを含む。この表面は、いくつかの方法で洗浄できなければならない。適切な表面の例としては、種々のタイプの(マイクロタイターウェル;ビーズ、種々のタイプのディップスティック;吸引チップ;電極;及び光学装置に成形された)ポリマー、粒子(例えば、ラテックス;安定化赤血球;細菌又は真菌細胞;胞子;金又は他の金属又は金属含有ゾル;及びタンパク質コロイド)(通常、粒径は0.02〜5ミクロンである)、膜(例えば、ニトロセルロース;ろ紙;酢酸セルロース;及び有機又は無機材料の高多孔性/高表面積膜)が挙げられる。
ペプチドを担持する表面を試験試料(場合によっては阻止混合液の存在下)とを接触させ、反応させ、必要な場合には種々の手段(例えば、洗浄、遠心、ろ過、磁性又は毛細管現象)によって余分な試料を除去した後、検出可能なシグナルを与える手段によって捕捉された抗体が検出される。例えば、これは、捕捉された抗体と反応する上記の標識分子又は粒子(例えば、プロテインA又はプロテインG等;抗化学種又は抗免疫グロブリンサブタイプ;リウマチ因子;又は競合又は阻止方法で用いられたペプチドに対する抗体)又はペプチド内に含まれるエピトープを含む分子を使用することにより達成される。本発明においては、ホースラディッシュペルオキシダーゼに結合した抗ヒトIgGを加え、次いで呈色する基質と反応させることにより結合した酵素を検出することが好ましい。
ペプチド自体が既に捕捉された抗体を標識するために用いられる分析には、検出を可能にするそのペプチドのある標識化形態が必要である。その標識化は、ペプチドに、例えば、放射能標識、磁気共鳴化学種、粒子又は酵素標識を化学的又は受動的に結合することによる直接のもの;又は標識形態をペプチドと反応する分子に結合することによる間接のものである。標識をペプチドに結合する化学は、アミノ基のようなペプチドに既に存在する部分を直接介するか又はマレイミド基のような中間部分を介することができる。抗体の捕捉は、結合される特定の抗体又は免疫複合体を生じる受動又は活性吸着を含む試薬として既に言及された表面に対するものである。特に、抗体の捕捉は、抗化学種又は抗免疫グロブリンサブタイプ、リウマチ因子、プロテインA、G等又はペプチドに含まれたエピトープを含む分子によるものである。
たいてい均質分析においては、ペプチドと抗体は別々に標識されるので、抗体が遊離溶液中で組換えペプチドと反応する場合、その2つの標識は相互に作用して、例えば、一方の標識によって捕捉されたエネルギーをもう一方の標識へ非放射移動することを可能にし、励起した第2標識又は消光した第1標識を適切に検出する(例えば、蛍光定量法、磁気共鳴法又は酵素測定法により)。試料中のウイルスペプチドあるいは抗体を添加すると、標識した一組の相互作用を制限するので検出器において異なったレベルのシグナルを生じる。
更に、HCV抗体を検出するのに可能な分析方式は、直接サンドイッチ酵素免疫分析(EIA)方式である。抗原ペプチドは、マイクロタイターウェルに被覆される。酵素が結合される試験試料及びペプチドが同時に添加される。試験試料中に存在するHCV抗体は、ウェルを被覆するペプチド及び酵素結合ペプチドの双方に結合する。典型的には、同じペプチドがサンドイッチの両側に用いられる。洗浄後、色の変化を含む特定の基質を用いて結合した酵素が検出される。
これにより、本発明のペプチドが多くの方式において、即ち遊離ペプチドとして、古典的ELISA、競合ELISA、b膜結合EIA及び免疫沈降を含む分析においてHCV感染の検出に用いられることがわかる。ペプチド複合体は、増幅した分析及びIgG/IgM抗体捕捉ELISAにおいて用いられる。
本発明の分析は、例えば、供与した血液のスクリーニングに又は臨床用に、例えば、HCV感染症の検出、型別及びモニターに用いられる。スクリーニング用の場合、好適な分析方式は、自動化することができるもの、特に、マクロタイタープレート方式及びビーズ方式である。臨床用の場合、そのような方式に加えて、小規模な又は単一の使用に適するもの、例えば、ラテックス分析が用いられる。スクリーニング手順における確認分析の場合、ウエスタン又は他の免疫ブロッティング試験の使用に適したストリップに抗原を存在させることができる。
特に、本発明は、従来の分析(HCV1型をコードした抗原を用いる)による供血者スクリーニングを、例えばHCV−4又はHCV−6のNS5配列又はHCV−4、HCV−5又はHCV−6のNS4配列に見出される抗原領域に対応するオリゴペプチドを含む第2試験で補足することを可能する。
遺伝子型スペクトルを試験するために、HCVの1つの遺伝子型から1種以上の抗原ペプチドを各々含む一連の分析手段、例えば、マイクロタイタープレートの一連のウェル又はビーズ方式を用いる等価なものが提供される。かかる分析方式は、試料中に存在するHCV型を決定するために用いられる。またあるいは更に、分析手段は、1以上の型からの抗原ペプチドを含んでもよく、例えば、マイクロウェル又はビーズは1以上の型からのペプチドで被覆される。
試験用HCV抗原を1種以上、特に、ゲノムの構造領域由来の抗原ペプチドを少なくとも1種及び非構造領域由来の抗原ペプチドを少なくとも1種含む組合わせ、特に、コア抗原とNS3、NS4及びNS5領域より選ばれた抗原少なくとも1種の組合わせを使用することが有利である。ウェル又はビーズは、別個に抗原で被覆される。しかしながら、2種以上の抗原ペプチドを単一ポリペプチドとして、好ましくは組換え融合ポリペプチドとして融合することが有利である。かかる方法の利点は、個々の抗原が所定の一定比率(通常等モル)で混合することができること及び単一ポリペプチドのみが生産、精製及び確認するのに必要であることである。1種以上のかかる融合ポリペプチドが、場合によっては1種以上の非融合ペプチドに加えて分析において用いられる。融合ポリペプチドにおいて抗原の多くの組合わせが可能であり、例えば、融合ポリペプチドが1つの型のみからの抗原の所望の範囲を含んでもよいし、1以上の型からの抗原を含んでもよいことが理解されるであろう。
本発明のペプチドは、人においてHCVに対する免疫を誘導するワクチン製剤に混合される。そのワクチンは、HCV1〜6型の抗原を含めてもよい。この目的のために、本ペプチドは薬学的に許容しうるキャリヤと共に存在させる。
また、本ペプチドは、リポソーム又はISCOMSのような微粒子構造に任意に結合させてもよい。
ワクチン用の薬学的に許容しうるキャリヤとしては、本ペプチドを患者に導入するために賦形剤として使用するのに適した液体媒体が含まれる。かかる液体媒体の例は、生理的食塩水である。本ペプチドは、キャリヤ中に溶解あるいは固体として懸濁される。
また、ワクチン製剤は、免疫応答を刺激するためのアジュバントを含めてもよく、もって、ワクチンの効果が高められる。アジュバントの例としては、水酸化アルミニウム及びリン酸アルミニウムが挙げられる。
ワクチン製剤は、最終ペプチド濃度が0.01〜5mg/ml、好ましくは0.03〜2mg/mlの範囲で含まれる。ワクチン製剤は、滅菌容器に取込まれ、次いで密閉され、低温、例えば4℃で貯蔵されるか又は凍結乾燥される。
人においてHCVに対する免疫を誘導するために、1回以上のワクチン製剤用量が投与される。各投与量は、0.1〜2ml、好ましくは0.2〜1mlとする。人においてHCVに対する免疫を誘導する方法は、上記で定義されたワクチン製剤の有効量を投与することを含むものである。
本発明のワクチンは、経口及び非経口(例えば、静脈内、皮下又は筋肉内)注射を含むワクチン投与に便利な方法により投与される。治療は、1回のワクチン用量か又は時間をかけて複数回用量からなるものである。
試料。 スコットランド、エジプト及び香港の合計16人のHCV感染供血者及びレバノンの慢性肝炎をもつ患者からの血漿を4及び6型のNS5配列の分析に用いた。
ヌクレオチド配列の分析。NS5領域の配列を得るために、ウイルスRNAを逆転写し、HCVの種々の変異型の中で高度に保存されると考えられる以前に発表されたプライマーとの単独反応のポリメラーゼ連鎖反応(PCR)により増幅させた(Enomotoら,1990)。いくつかの配列の場合、新しい2つのプライマー、122(センス配向;5′CTC AAC CGT CAC TGA GAG AGA CAT3′)及び123(アンチセンス;5′GCT CTC AGG TTC CGC TCG TCC TCC3′)と組み合わせたプライマー554及び555(Chanら,1992b)を用いて第2PCRを行った。産物DNAをSimmonds & Chan,1993に記載されている手順に従ってリン酸化し、精製し、pUC19のSmaI部位にクローン化した(Yanisch-Perronら,1985)。また、増幅したDNAを精製し、Simmondsら,1990及びChaら,1992に記載されているように直接配列決定した。これらの方法は、始原型ウイルスの位置7975〜8196(Chooら,1991での番号)に相同なDNAの222bp断片の比較を可能にした。結果を図1及び図2に示す。
GDE配列分析パッケージで実施されるようにCLUSTAL V プログラム(Higginsら,1992)を用いてヌクレオチド配列を並べた。配列対間の距離は、トランジションとトランスバージョンの種々の割合及び4つのヌクレオチドの種々の頻度を可能にするモデル(Felsenstein,1991)を用いて、Dr.J.Felsensteinの好意で提供されたPHYLIPパッケージ(バージョン3、4)の DNADISTプログラム(Felsenstein,1991)を用いて算出した。系統発生図表は、PHYLIPプログラム,NEIGHBORを用いる以前の対方向距離セットで隣接結合演算法(Saitouら,1987)を用いて作った。図3に示された系統発生図表は根がない。また、等価な系統発生関係は、最大可能性分析(PHYLIPプログラムDNAMI; データは図示せず)及び隣接結合図表の200ブートストラップ複製物(PHYLIPプログラムSEQBOCT及びCONSENSE)にも見出された。
PCR増幅を用いてC型肝炎ウイルス(HCV)4、5及び6型のNS4領域からDNA配列を単離することを試みた。制限部位を含むプライマーを用いることを決定し、もって、付着末端クローニングによりPCR産物のクローニングを可能にした。また、新しいプライマーをHCVNS4遺伝子の比較的に保存された領域から設計した。クローニング戦略は、次のように特定の数工程を含んだ。
(i)クレノウ修復。 増幅したDNAの末端をクレノウDNAポリメラーゼで修復して制限部位を含む末端が完全であることを確実にした。
(ii)末端のキナーゼ化。 T4ポリヌクレオチドキナーゼを用いてPCR産物末端をリン酸化した。これは、コンカテマー化工程における産物の自己連結反応を可能にした。
(iii)PCR産物のカコンカテマー化。 長いコンカテマー配列を形成するためにDNA断片を一緒に結合した。この工程により、切断工程の効率を著しく高めるプライマー末端にコードされた制限部位が取込まれた。
(iv)制限消化。 PCR産物を要求した制限酵素で一晩消化して付着末端を露出させた。
(v)プラスミドベクターへの連結反応。
a)NS4配列のPCR増幅
プライマー007を用いてcDNAを合成した後、PCR増幅を3ラウンド行った。007と435を用いて1ラウンド、次いで5351と5943(共にBamHI制限部位をコードする)を用いて2ラウンドにより4及び5型を増幅した。007と253、281及び221を用いて1ラウンド、次いで5351及び5943を用いて2ラウンドにより6型配列を増幅した。5つの第3ラウンド反応の最低限の産物をクローニングエ程用にプールした。ベクターへの最後の連結反応の効率は、増幅したDNAの高濃度に依存すると考えられた。プライマー反応を図4に示す。
b)クローニング
慣用のアガロースゲル(0.5×トリス酢酸塩EDTA(TAE))からの切除によりPCR産物を単離した。ガラスウールを介して遠心することによりそのアガロースからDNAを再生利用した。DNAの合計量を増加させるために溶出液をプールした。エタノール沈降によりTAE溶出液からDNAを回収した。(沈降したDNAはアガロースから化学的に不活性なデブリをいくらか含んだが、これはベクターに結合する前の次の工程を妨害しなかった。マジックプレプカラム(Promega)を用いることができるが、多量のTAE溶出液を取り扱う場合にはエタノール沈降が簡便で安価で効率がよい。)
沈澱したDNA沈降物を下記のものを含むクレノウ反応混合液50μlに再び懸濁した。
ポリヌクレオチドキナーゼバッファー(10×) 5μl、
3.3mMdNTPs(最終濃度33μM) 0.5μl、
少なくとも100ngの精製PCR断片、
蒸留水 50μlまで、及び
クレノウDNAポリメラーゼ 5単位。
(10×は、試薬を反応混合液中所望の最終濃度を10倍で加えたことを意味する) 37℃で30分間インキュベートし、次いで75℃で10分間加熱不活性化した。
クレノウ反応は、BamHI制限部位が位置する末端を修復する。T4DNAポリメラーゼは、そのエキソヌクレアーゼ活性によりそれらの部位を除去するのでこの反応に用いてはならない。
上記反応混合液に下記のものを加えた。
100mMrATP 5μl、及び
T4ポリヌクレオチドキナーゼ 10単位。
この反応混合液を37℃で30〜60分間インキュベートし、前のように加熱不活性化した。
e)コンカテマー化
次いで、多量のマルチマー中にBamHI制限部位を取込むために、PCR産物をコンカテマー化した。
リン酸化反応のために、下記のものを加えた。
10×リガーゼバッファー 6μl、及び
T4DNAリガーゼ 5単位。
連結反応物を15℃で一晩インキュベートした。コンカテマー化反応物を前述のように加熱不活性化した。
コンカテマー化PCR産物をモノマーにBamHI制限酵素を用いて消化し、付着末端を同時に露出させた。加熱不活性化連結反応混合液に下記のものを加えた。
10×Bバッファー(Boehringer) 6μl、及び
BamHI 10〜20単位。
消化混合液を37℃で一晩インキュベートした。酵素は加熱により全く不活性化されないが、反応混合液をとにかく前のように熱処理した。
この点で、DNAをマジックプレプカラムで精製して切断した末端を除去した。可能な限り濃縮するために、10μlのマジックプレプカラムからDNAを溶離した。
g)ベクターへの連結反応
連結反応に100ngの細菌プラスミドベクターpUC18を用いた。プラスミドベクターDNAをBamHI切断し、“Geneclean”(Bio 101)を用いて精製したが、脱リン酸化しなかった。(脱リン酸化反応は、ベクターの連結反応効率を非常に低下させることが判明した。)後述されるように青−白色の選択がコロニーを同定するのに十分であることが計画された。連結反応混合液は下記のものを含有した。
上記のように産生された精製挿入DNA 10μl、
プラスミドベクターDNA 5μl、
10×リガーゼバッファー 1.5μl、及び
リガーゼ 1単位。
反応混合液を15℃で一晩インキュベートした。
細胞株、XL-1 Blue(Stratagene)を用いて細菌形質転換を行った。細胞を、塩化カルシウム標準法で形質転換用コンピテントにし、200μlずつグリセロール/塩化カルシウム懸濁液で急速凍結して貯蔵した。3μlの連結反応産物を用いて100μlの急速解凍コンピテントXL-1 Blue細胞を形質転換した(1mlのLブイヨンを添加した後、振盪しながら氷上で10分、42℃で2分、37℃で1時間)。細胞を200μl ずつX−Gal(20μg/ml)、IPTG(0.1mM)、Ap(50μg/ml)及びTet(12.5μg/ml)を含むL寒天プレート上で平板培養した。培地中に化学薬品IPTG(イソプロピルーβ−D−チオガラクトピラノシド)及びX−gal(5−ブロモ−4−クロロ−3−インドリルーβ−D−ガラクトピラノシド)が存在するので、1acZ酵素ペプチドをコードするpUC系のようなプラスミドを含むコロニー中に青色が生じる。これらのプラスミドのポリリンカー領域にクローン化DNAを挿入すると、1acZペプチド配列が中断され、もって、プラスミドの酵素産生能が破壊される。従って、組換えプラスミドを含む細菌コロニーは白色である。
青−白色選択により、組換えペプチドを含む細胞コロニーが同定された。これらのコロニーを集め、それらからミニプラスミド調製物によりDNAを調製した。そのDNAをBamHIで消化すると、プラスミドがクローン化挿入断片を含むことが確認された。そのプラスミドDNAをガラスミルクで精製し、M13前進及び逆向プライマーを有するUSBシークエナーゼキットを用いて配列決定した。
j)検討
このプロトコールは多数の工程を含むが、実施することは簡単である。更に、実験により、本方法は程度の高い再現性を有することが判明した。理論的には、このクローニング戦略は、PCR産物が内部BamHI部位を含む場合には実験してはならない。しかしながら、6型の場合に得られたNS4配列はそのような内部部位を含み、短縮した6型配列が実際にクローニング実験の主な産物でなかった明白な理由はない。
図5は、HCV1〜3型(比較として)及び4〜6型に関する2つのNS4領域のDNA及びアミノ酸配列を示すものである。
HCV1〜6型のNS領域内の下記ペプチドを合成した。4〜6型は本発明による新規な配列であるが、1〜3型は比較のため及び完全なHCV血清型別分析おける使用のために存在させる。
合成後、完全に保護されたペプチド樹脂を50ml容量の三角ポリプロピレン管に移し、チオアニソール(0.15ml)、エタンジチオール(0.15ml)及びトリフルオロ酢酸(TFA;2.7ml)で処理した。混合液を室温で3時間攪拌し、次いでパスツールピペットのガラスウールでろ過し、ろ液をネジ蓋付ガラスビンに入った20mlの tert-ブチルメチルエーテル(TMBE)に滴下するとペプチドが沈澱した。試験管を遠心し、液を吸引すると試験管にペプチド沈降物が残った。ペプチドをTEBEで20mlずつ3回洗浄し、へらを用いて沈降物を分離し、遠心してペプチドを回収した。最後にペプチドを減圧下室温で乾燥した。
ペプチドの純度を分析するために、少量の試料を精製水に溶解し、逆相高性能液体クロマトグラフィー(HPLC)による分析にかけた。逆相カラムは、C4マトリックスを含む250×4.6mmとした。3.5%アセトニトリルから70%アセトニトリルまでの勾配を用いて流速1.5ml min-1で30分かけてペプチドを溶離した。溶離液を214nmでモニターしてペプチドを検出した。
我々は、生体試料中に存在する抗体を産生したHCV血清型を区別することができる選択競合に基づく分析を開発した。典型的には、試料はC型肝炎感染が確認されたヒトからの血清又は血漿である。
分析は、C型肝炎ウイルス1、2、3、4、5及び6型のNS4タンパク質中の可変配列を含む17種の異なった合成ペプチドの選択性によるものである。HCV血清型のNS4に対する抗血清と他の血清型の相同領域間に交差反応性があるが、これは真の反応性を完全に除去することなしに、交差反応性を阻止することができる。これを考慮して、我々は、同量の17ペプチドを全て有するマイクロタイタープレートのコーティングウェルを含む分析方式を開発した。各ウェルに異なる阻止ペプチド混合液を入れた8個の重複実験ウェルで試料を試験する。分析プロトコールの終わりに1つの試験試料と不完全な対照ウェルのみが呈色し、もって、感染しているC型肝炎ウイルスの血清型を同定する。
100μlのペプチド混合液をプレートの各ウェルに加え4℃で一晩インキュベートすることにより、ペプチドをプレートに結合させた。
種々の血清型間の十分な区別を得るためには、試験試料に競合する異種ペプチドを加えることが必要である。競合溶液を分析試料希釈剤に溶解してコーティング濃度に対して100倍過剰量の競合ペプチドを得る。阻止する血清型に従って種々の競合溶液が分類される、即ち、競合溶液1は2〜5型のペプチドを含む。競合溶液は、10μl 中必要とされる過剰量を有するようにする。競合溶液は次の通りである。
1)希釈剤試料180μlを各ウェルに加える。
2)阻止ペプチド10μlを適切なウェルに加える。
3)試料10μlを6ウェルの各々に加える。
4)プレートを混合し、37℃で1時間インキュベートする。
5)ウェルを3回洗浄する。
6)複合体100μlを各ウェルに加える。
7)37℃で1時間インキュベートする。
8)ウェルを3回洗浄する。
9)TMB溶液(3,3',5,5'-テトラメチルベンジジン、過酸化水素、バッファー等を含む)100μlを加える。
10)37℃で30分間インキュベートする。
11)硫酸で反応を停止させる。
12)450nm/690nmの光学濃度を読み取る。
実施例4の分析方式と別のものを開発した。本分析は、4、5及び6型のペプチドのみを使用する範囲に更に限定される。ある試料の場合、1型ペプチドとの交差反応性がより大きいために誤った結果を生じることがある。より限定された分析を行うためのプロトコールは、実施例4に示したものと同じである。
実施例4に記載されたようにHCV4〜6型分析用プレートを調製し、違いは使用ペプチドの数を減らしたことだけである。ペプチドを精製水に溶解し、混合液を下記濃度にした。
MDL028 )
MDL024 ) 50 ng/ml
MDL029 )
MDL025 )
MDL022 )
種々の血清型間の十分な区別を得るためには、競合する異種ペプチドを試験試料に加えることが必要である。競合溶液を分析試料希釈剤に溶解してコーティング濃度に対して100倍過剰量の競合ペプチドを得る。阻止する血清型に従って種々の競合溶液が分類される、即ち、競合溶液4は5及び6型のペプチドを含む。
競合溶液は、10μl中必要とされる過剰量を有するようにする。競合溶液は次の通りである。
Claims (31)
- 下記のアミノ酸残基配列からなる群から選ばれた抗原性NS4配列を有することを特徴とするHCVペプチド。
HCV5型 RPAI I PDREVLYQQFDKM、
HCV6型 KPAVVPDREILYQQFDEM、及び
生物試料における対応するHCV-5及びHCV-6抗体を検出するための免疫分析に有用な、抗原性NS4ペプチドを付与するように続いている欠失、挿入又は置換を有するその配列変異体。 - 多抗原ペプチドコアに結合している請求項1記載のペプチド。
- 下記のアミノ酸残基配列からなる群から選ばれた配列を有する請求項2記載のペプチド。
HCV5型 [H2N-RPAI I PDREVLYQQFDKM] 8K4K2K-COOH、
HCV6型 [H2N-KPAVVPDREILYQQFDEM]8K4K2K-COOH、及び
(但し、K4K2Kは、多抗原ペプチドコアである。) - 他のペプチドに融合して融合ペプチドを形成する請求項1に記載のペプチド。
- β−ガラクトシダーゼ、グルタチオン−S−トランスフェラーゼ、trpE 又はポリヘドリンコーディング配列からなる群より選ばれた他のペプチドに融合した請求項4記載のペプチド。
- 標識された請求項1〜5のいずれか1項に記載のペプチド。
- 請求項1〜6のいずれか1項に記載の抗原性ペプチドに対する抗体。
- 請求項1〜6のいずれか1項に記載の抗原性ペプチドを含むワクチン製剤。
- 請求項1〜6のいずれか1項に記載の抗原性ペプチドを固定された固体基質を含む免疫分析装置。
- HCV4型、HCV5型又はHCV6型の抗原性ペプチドの混合物が、前記固体基質に固定されている請求項9に記載の装置。
- HCV4型、HCV5型及びHCV6型の抗原性ペプチドの混合物が、前記固体基質に固定されている請求項9に記載の装置。
- 前記混合物が、HCV1〜3型の1以上の抗原性NS4ペプチドを更に含む、請求項9〜11のいずれかに記載の装置。
- 前記混合物が、HCV1〜6型の抗原性ペプチドの混合物である、請求項12に記載の装置。
- HCV−4、HCV−5及びHCV−6抗原性ペプチドを各々含む一連の位置を有する固体基質を含む、HCV型別用の請求項9記載の装置。
- 前記固体基質が、一連の位置を有し、各位置には、前記抗原性ペプチド又は抗原性ペプチドの混合物が、固定されている請求項9〜14のいずれかに記載の装置。
- 各位置が、固定されていない抗原性阻止HCVペプチド混合液を更に含み、各位置における該混合液が、位置により検出しようとするHCV型のペプチドを除外している請求項15記載の装置。
- HCV1〜6型の検出用の請求項14〜16のいずれかに記載の装置。
- 一連の溶液とともに、請求項15に記載の免疫分析装置を有する免疫分析キットであって、前記各溶液が、抗原性阻止HCVペプチドの混合物を含有し、かつ該混合物が、いずれかの特定の位置により、検出しようとするHCV型のペプチドを除外する免疫分析キット。
- 前記免疫分析装置が、一連の位置を有する固体基質を有し、各位置には、一連の6種類の溶液とともに、HCV1〜6型の抗原性ペプチドの混合物が固定され、各溶液が、HCV1〜6型の抗原性ペプチドから選択される異る抗原性阻止HCVペプチドの混合物を含み、かつ前記6種類の溶液が、該溶液が適用される特定の位置により、検出しようとする型の抗原性ペプチドを除外する、請求項18に記載の免疫分析キット。
- 請求項7記載の抗体を結合した固体基質を含む免疫分析装置。
- HCV抗体について試料を試験管内でスクリーニングする方法であって、 請求項1〜6のいずれか1項に記載の抗原性ペプチドを使用する免疫分析を行う工程、及び形成した抗体−抗原複合体を検出する工程、を含む方法。
- 前記抗原性ペプチドが、固体基質に固定され、該試料中に存在するかもしれない、検出すべきHCV抗体が、該ペプチドに結合される請求項21記載の方法。
- 抗原性ペプチドの混合物が、前記固体基質に固定されている請求項22に記載の方法。
- 前記混合物が、HCV1型〜6型の抗原性ペプチドの混合物である請求項23に記載の方法。
- 前記試料及び抗原性阻止HCVペプチド混合液が、該基質に固定された抗原性ペプチドに適用され、該阻止ペプチドの混合液が、検出しようとするHCV型のペプチドを除外する請求項22〜24のいずれかに記載の方法。
- 前記固体基質が、一連の位置を有し、各位置には、抗原性ペプチドの混合物が固定化され、該固体基質に適用される該抗原性阻止HCVペプチドの混合物が、特定のいずれかの位置によって、検出しようとするHCV型のペプチドを除外する請求項25に記載の方法。
- 前記固体基質が、一連の6つの位置を有し、各位置において、HCV1型〜6型の抗原性ペプチドの混合物が固定され、各位置に適用される抗原性阻止HCVペプチドの混合物が、その位置によって、検出しようとするHCV型の抗原性ペプチドを除外する請求項26に記載の方法。
- 前記試料中に存在するHCV抗体が、前記固体基質に捕捉され、次いで請求項6に記載の抗原性ペプチドが、それに適用されて、捕捉されたHCV抗体が検出される請求項21記載の方法。
- 下記の塩基配列からなる群から選ばれたNS4配列を有する単離されたHCVポリヌクレオチド。
AGACCTGCCATCATTCCCGATAGAGAGGTGTTGTACCAGCAATTTGATAAGATG、及び
AAGCCTGCTGTTGTCCCTGATCGCGAGATCTTATACCAGCAGTTTGACGAGATG - 請求項1記載のペプチドをコードするポリヌクレオチド。
- HCVについて試料を試験管内で試験する方法であって、該試料中に存在するHCVポリヌクレオチドを逆転写する工程、ポリメラーゼ連鎖反応によって増幅する工程、及び請求項29及び30のいずれか1項に記載のポリヌクレオチドをプローブとして使用することによりその増幅したHCVポリヌクレオチドを検出する工程、を含む方法。
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
GB939309237A GB9309237D0 (en) | 1993-05-05 | 1993-05-05 | Hepatitis-c virus type 4 and 6 |
GB9400263A GB9400263D0 (en) | 1994-01-07 | 1994-01-07 | Hepatitis-C virus type 4,5 & 6 |
Related Parent Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2005018491A Division JP3895747B2 (ja) | 1993-05-05 | 2005-01-26 | C型肝炎ウイルス4、5及び6型 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2007075119A true JP2007075119A (ja) | 2007-03-29 |
JP4171508B2 JP4171508B2 (ja) | 2008-10-22 |
Family
ID=26302858
Family Applications (3)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP52406894A Expired - Lifetime JP3751315B2 (ja) | 1993-05-05 | 1994-05-05 | C型肝炎ウイルス4、5及び6型 |
JP2005018491A Expired - Lifetime JP3895747B2 (ja) | 1993-05-05 | 2005-01-26 | C型肝炎ウイルス4、5及び6型 |
JP2006289124A Expired - Lifetime JP4171508B2 (ja) | 1993-05-05 | 2006-10-24 | C型肝炎ウイルス5及び6型 |
Family Applications Before (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP52406894A Expired - Lifetime JP3751315B2 (ja) | 1993-05-05 | 1994-05-05 | C型肝炎ウイルス4、5及び6型 |
JP2005018491A Expired - Lifetime JP3895747B2 (ja) | 1993-05-05 | 2005-01-26 | C型肝炎ウイルス4、5及び6型 |
Country Status (9)
Country | Link |
---|---|
US (4) | US6881821B2 (ja) |
EP (1) | EP0698101B1 (ja) |
JP (3) | JP3751315B2 (ja) |
AT (1) | ATE281526T1 (ja) |
AU (1) | AU695259B2 (ja) |
DE (1) | DE69434116T2 (ja) |
ES (1) | ES2231773T3 (ja) |
FI (1) | FI118688B (ja) |
WO (1) | WO1994025602A1 (ja) |
Families Citing this family (22)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
ATE281526T1 (de) * | 1993-05-05 | 2004-11-15 | Common Services Agency | Hepatitis-c virus typ 4,5 und 6 |
PL175342B1 (pl) | 1993-05-10 | 1998-12-31 | Chiron Corp | Sposób klasyfikowania jednego lub większej liczby typów wirusa zapalenia wątroby typu C |
GB2294690B (en) * | 1994-11-01 | 1998-10-28 | United Biomedical Inc | Peptides effective for diagnosis and detection of hepatitis C infection |
US6838237B2 (en) | 1996-04-19 | 2005-01-04 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Antigenically reactive regions of the hepatitis a virus polyprotein |
US6391540B1 (en) * | 1997-09-22 | 2002-05-21 | Chiron Corporation | Method for detecting antibodies in a sample |
JP5084984B2 (ja) | 1999-02-17 | 2012-11-28 | シーエスエル、リミテッド | 免疫原複合体およびそれに関する方法 |
AU772617B2 (en) * | 1999-11-19 | 2004-05-06 | Csl Limited | Vaccine compositions |
AU2002259130A1 (en) * | 2001-05-03 | 2002-11-18 | Eli Lilly And Company | Agents for treatment of hcv and methods of use |
DK1490383T3 (da) * | 2002-03-11 | 2009-06-08 | Lab 21 Ltd | Fremgangsmåde og sammensætning til identifikation og karakterisering af hepatitis C |
WO2005067643A2 (en) | 2004-01-07 | 2005-07-28 | Third Wave Technologies, Inc. | Determination of hepatitis c virus genotype |
WO2005118626A2 (en) * | 2004-06-01 | 2005-12-15 | Innogenetics N.V. | Peptides for inducing a ctl and/or htl response to hepatitis c virus |
EP2121991A2 (en) * | 2006-10-20 | 2009-11-25 | Innogenetics N.V. | Methodology for analysis of sequence variations within the hcv ns3/4a genomic region |
CA2580589C (en) * | 2006-12-19 | 2016-08-09 | Fio Corporation | Microfluidic detection system |
CA2682826C (en) | 2007-04-02 | 2013-08-13 | Fio Corporation | System and method of deconvolving multiplexed fluorescence spectral signals generated by quantum dot optical coding technology |
US8597729B2 (en) | 2007-06-22 | 2013-12-03 | Fio Corporation | Systems and methods for manufacturing quantum dot-doped polymer microbeads |
CN101809433A (zh) * | 2007-07-09 | 2010-08-18 | Fio公司 | 用于增强试样中靶分子荧光检测的系统和方法 |
CN101809577B (zh) * | 2007-07-23 | 2013-04-17 | Fio公司 | 用于整理、存储、分析和支持访问与生物和环境检查对象有关的所收集和分析的数据的方法和系统 |
CA2702367C (en) | 2007-10-12 | 2012-08-21 | Fio Corporation | Flow focusing method and system for forming concentrated volumes of microbeads, and microbeads formed further thereto |
EP2321810A4 (en) | 2008-06-25 | 2014-09-17 | Fio Corp | BIOLOGICAL THREAT WARNING SYSTEM |
US9459200B2 (en) | 2008-08-29 | 2016-10-04 | Fio Corporation | Single-use handheld diagnostic test device, and an associated system and method for testing biological and environmental test samples |
EP2387721A4 (en) | 2009-01-13 | 2014-05-14 | Fio Corp | PORTABLE DIAGNOSTIC TEST DEVICE AND METHOD FOR USE WITH AN ELECTRONIC DEVICE AND TEST CARTRIDGE FOR QUICK DIAGNOSTIC TESTS |
JP2015534821A (ja) * | 2012-11-07 | 2015-12-07 | ギリアード サイエンシーズ, インコーポレイテッド | Hcv遺伝子型6レプリコン |
Family Cites Families (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1074422C (zh) * | 1987-11-18 | 2001-11-07 | 希龙股份有限公司 | 制备含有hcv表位的分离多肽的方法 |
US6027729A (en) * | 1989-04-20 | 2000-02-22 | Chiron Corporation | NANBV Diagnostics and vaccines |
JP3114731B2 (ja) * | 1990-08-14 | 2000-12-04 | 国立感染症研究所長 | C型肝炎ウイルス抗体検出用ペプチド抗原及びその使用方法 |
CA2070952A1 (en) * | 1991-06-11 | 1992-12-12 | Makoto Seki | Gene of hepatitis c virus or fragment thereof, polypeptide encoded by the same |
DE4209215A1 (de) | 1991-07-04 | 1993-01-07 | Boehringer Mannheim Gmbh | Hcv peptidantigene und verfahren zur bestimmung von hcv |
AU671967B2 (en) * | 1991-11-21 | 1996-09-19 | Common Services Agency | Hepatitis-C virus testing |
ATE552340T1 (de) * | 1993-04-27 | 2012-04-15 | Innogenetics Nv | Hepatitis c virus genotypsequenzen sowie ihre verwendung als behandlungs- und nachweismitteln |
ATE281526T1 (de) * | 1993-05-05 | 2004-11-15 | Common Services Agency | Hepatitis-c virus typ 4,5 und 6 |
AU8003894A (en) * | 1993-10-29 | 1995-05-22 | Srl Inc. | Antigen peptide compound and immunoassay method |
-
1994
- 1994-05-05 AT AT94913769T patent/ATE281526T1/de not_active IP Right Cessation
- 1994-05-05 DE DE69434116T patent/DE69434116T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1994-05-05 AU AU65797/94A patent/AU695259B2/en not_active Expired
- 1994-05-05 EP EP94913769A patent/EP0698101B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1994-05-05 WO PCT/GB1994/000957 patent/WO1994025602A1/en active IP Right Grant
- 1994-05-05 ES ES94913769T patent/ES2231773T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1994-05-05 US US08/537,802 patent/US6881821B2/en not_active Expired - Lifetime
- 1994-05-05 JP JP52406894A patent/JP3751315B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
1995
- 1995-11-01 FI FI955224A patent/FI118688B/fi not_active IP Right Cessation
-
2005
- 2005-01-26 JP JP2005018491A patent/JP3895747B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 2005-03-25 US US11/090,952 patent/US7198892B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2006
- 2006-10-24 JP JP2006289124A patent/JP4171508B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
2007
- 2007-02-20 US US11/676,842 patent/US7402315B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2007-11-01 US US11/933,672 patent/US7728121B2/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
US7198892B2 (en) | 2007-04-03 |
US20050032047A1 (en) | 2005-02-10 |
EP0698101A1 (en) | 1996-02-28 |
ES2231773T3 (es) | 2005-05-16 |
US20080262211A1 (en) | 2008-10-23 |
JPH09500009A (ja) | 1997-01-07 |
US20050221296A1 (en) | 2005-10-06 |
DE69434116T2 (de) | 2005-10-27 |
FI118688B (fi) | 2008-02-15 |
DE69434116D1 (en) | 2004-12-09 |
EP0698101B1 (en) | 2004-11-03 |
JP2005124585A (ja) | 2005-05-19 |
FI955224A (fi) | 1995-12-20 |
US6881821B2 (en) | 2005-04-19 |
US20070160630A1 (en) | 2007-07-12 |
JP4171508B2 (ja) | 2008-10-22 |
JP3751315B2 (ja) | 2006-03-01 |
WO1994025602A1 (en) | 1994-11-10 |
US7728121B2 (en) | 2010-06-01 |
ATE281526T1 (de) | 2004-11-15 |
AU695259B2 (en) | 1998-08-13 |
AU6579794A (en) | 1994-11-21 |
US7402315B2 (en) | 2008-07-22 |
FI955224A0 (fi) | 1995-11-01 |
JP3895747B2 (ja) | 2007-03-22 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP3895747B2 (ja) | C型肝炎ウイルス4、5及び6型 | |
US5683864A (en) | Combinations of hepatitis C virus (HCV) antigens for use in immunoassays for anti-HCV antibodies | |
EP0693687B1 (en) | Combinations of hepatitis C virus (HCV) antigens for use in immunoassays for anti-HCV antibodies | |
US5712087A (en) | Immunoassays for anti-HCV antibodies employing combinations of hepatitis C virus (HCV) antigens | |
EP0610436B9 (en) | Hepatitis-c virus testing | |
JP3354579B2 (ja) | 組換え抗原を用いるc型肝炎アッセイ | |
EP0741787B1 (en) | Mammalian expression systems for hepatitis c virus envelope genes | |
EP0642666B1 (en) | Hepatitis c assay | |
US5843450A (en) | Hepatitis GB Virus synthetic peptides and uses thereof | |
JP3022954B2 (ja) | タイプ特異的抗原を使用する血清学的タイプ分け方法 | |
CA2162134C (en) | Hepatitis-c virus type 4,5 and 6 | |
CZ206894A3 (en) | Peptides active against virus hepatitis c | |
US7166287B1 (en) | Viral agent | |
US20020150990A1 (en) | Hepatitis C virus peptides | |
PL167059B1 (pl) | Sposób wytwarzania wirusowego polipeptydu PT-NANBH |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20070305 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20070605 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20070608 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20070905 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20080804 |
|
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20080808 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20110815 Year of fee payment: 3 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20110815 Year of fee payment: 3 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120815 Year of fee payment: 4 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130815 Year of fee payment: 5 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
EXPY | Cancellation because of completion of term |