JP2007064674A - クロマトグラフィー用チップ及びクロマトグラフィー用チップを用いた分離方法 - Google Patents

Abstract

【課題】 目的物質の損失を抑制しながら、所定量以下の試料についてクロマトグラフィーにより分離を行なう。
【解決手段】 基板２に流路３を形成してなるクロマトグラフィー用チップ１の流路３に、流路断面積を相対的に大きく形成され吸着剤を充填するためのプール部６と、プール部６に試料液を導入する導入流路部４，５と、プール部６から試料液を送出する送出流路部７，８と、プール部６内の送出流路部７，８よりも上流側に形成され吸着剤がプール部６から流出することを防止する流出防止部９とを設ける。
【選択図】 図１

Description

本発明は、クロマトグラフィー用チップ及びそれを用いた分離方法に関する。

従来、有機化学反応などにおいては、試験管やビーカー等の大容量の容器に所定の試料を収容し、この容器内で特定の条件下に試料を混合し、有機化学反応を行なわせていた。しかし、近年では、試薬の少量化などを目的として、マイクロリアクタ等の微小な反応流路を用いて化学反応を行なわせる技術が提案されている。

上記の微小な流路を用いて化学反応を行なう場合、その反応により生成する化合物の量は従来よりも小さくなる。したがって、所定量（例えば、５００μＬ）以下の微量の試料中から目的物質を分離・精製する場合には、流路を流通させる試料の量に応じた精製方法を用意することが望まれていた。

さらに、微小な反応流路を用いた化学反応によれば、反応装置の小型化という利点が得られる。したがって、この装置の小型化という利点を活かすためにも、従来よりも小さい規模での分離・精製方法が望まれていた。
このように小さい規模での分離・精製方法の一つとして、特許文献１には、マイクロチップ中に設けた微小流路内においてクロマトグラフィーにより化合物の分離・精製を行なう技術が提案されている。

特開２００２−３１１００８号公報

しかしながら、マイクロチップやチューブなどに形成された微小流路にイオン交換樹脂などの吸着剤粒子を均一に充填することは、従来、非常に困難であった。特に、微小流路の長さが長くなるにつれて吸着剤の均一充填は困難になる傾向があり、これに伴い、分離性能が低下しがちであった。したがって、従来の微小流路を用いたクロマトグラフィー用チップでは、分離精製の際に、目的物質の損失が多くなっていた。
本発明は上記の課題に鑑みて創案されたもので、目的物質の損失を抑制しながら、所定量以下の試料液についてクロマトグラフィーにより分離を行なうことができるクロマトグラフィー用チップを提供することを目的とする。

本発明の発明者は、上記課題を解決するべく鋭意検討した結果、吸着剤を充填する流路を形成されたクロマトグラフィー用チップにおいて、流路に、流路断面積を相対的に大きく形成された吸着剤を充填するためのプール部を形成し、そのプール部内の、プール部から試料液を送出するための送出流路部よりも上流側に、吸着剤がプール部から流出することを防止する流出防止部を設けることにより、また、吸着剤を充填するプール部の温度を精密に制御できるようにより、目的物質の損失を抑制しながら、所定量以下の試料液についてクロマトグラフィーにより分離を行なうことを可能にできることを見出し、本発明を完成させた。

即ち、本発明の要旨は、基板と、該基板に設けられた流路とを備え、該流路に試料液を流通させて上記試料液中の目的物質をクロマトグラフィーによって分離するために用いるクロマトグラフィー用チップであって、該流路が、流路断面積を相対的に大きく形成された、吸着剤を充填するためのプール部と、該プール部に上記試料液を導入する導入流路部と、該プール部から上記試料液を送出する送出流路部と、該プール部内の該送出流路部よりも上流側に形成され、該吸着剤が該プール部から流出することを防止する流出防止部とを備えることを特徴とする、クロマトグラフィー用チップに存する（請求項１）。これにより、目的物質の損失を抑制しながら、所定量以下の試料液についてクロマトグラフィーにより分離を行なうことができるようになる。

このとき、該プール部内には、該吸着剤を有するようにしておくことが好ましい（請求項２）。

また、該流出防止部は、該基板との間で該吸着剤の粒径よりも小さい隙間を形成するよう該プール部内面が凸に形成されたダム部を備えるように構成することが好ましい（請求項３）。これにより、吸着剤の流出を確実に防止することが可能となる。

さらに、該導入流路部は、該吸着剤の粒径よりも大きい径を有して形成することが好ましい（請求項４）。これにより、導入流路部を介してプール部に吸着剤を充填することが可能となり、容易に吸着剤の充填を行なうことができるようになる。

また、該プール部の幅は０．１ｍｍ以上３０ｍｍ以下であり、深さは１００μｍ以上５００μｍ以下であることが好ましい（請求項５）。

さらに、本発明の別の要旨は、上記のクロマトグラフィー用チップの流路に試料液を流通させる吸着工程と、上記流路に、溶出液を流通させる溶出工程とを有することを特徴とする、クロマトグラフィー用チップを用いた分離方法に存する（請求項６）。これにより、目的物質の損失を抑制しながら、所定量以下の試料液についてクロマトグラフィーにより分離を行なうことができるようになる。

本発明のクロマトグラフィー用チップ及びクロマトグラフィー用チップを用いた分離方法によれば、目的物質の損失を抑制しながら、所定量以下の試料液についてクロマトグラフィーにより分離を行なうことができるようになる。

以下、本発明の一実施形態を示して本発明について説明するが、本発明は以下の実施形態に限定されるものではなく、本発明の要旨を逸脱しない範囲において、任意に変形して実施することができる。

［Ｉ．構成］
図１〜図３は本発明の一実施形態について示すもので、図１はクロマトグラフィー用チップの模式的な上面図であり、図２はクロマトグラフィー用チップの模式的な斜視図であり、図３は流出防止部近傍の模式的な拡大図である。なお、図２において流路及び流出防止部の厚みを描画していないが、これらは厚みが非常に小さいために描画しなかったものであり、実際には厚み（或いは深さ）を有する３次元的な構造を有している。

図１、図２に示すように、本実施形態のクロマトグラフィー用チップ（以下適宜、「クロマト用チップ」という）１は、基板２に流路３が形成されたものである。また、流路３は、導入流路部４，５と、プール部６と、送出流路部７，８とを備えている。

［１．基板］
基板２は、本発明の効果を著しく損なわない限り任意の素材で形成することができる。例えば、ガラス等の無機材料や、合成樹脂等の有機材料で形成することができる。
また、基板２の形状も本発明の効果を著しく損なわない限り任意であるが、通常は、平板形状に形成される。

さらに、基板２の寸法についても制限は無く、目的に応じて任意に設定することができる。ただし、基板２内の流路３を流れる試料液や溶出液などの温度を精密に制御する観点、及び、流路３内で生じうる混合熱、溶解熱、吸着熱等の発熱を除熱する観点からは、基板２は上記温度制御及び除熱を適切に行なえる程度に薄い寸法で形成されることが好ましい。具体例を挙げると、基板２を平板形状に形成する場合には、その寸法は、縦７０ｍｍ×横３０ｍｍ×厚み１．４ｍｍの寸法に形成することができる。
本実施形態においては、基板２として、上記寸法で平板形状に形成された透明なガラス製の基板を用いているものとする。

また、基板２に流路３を形成する手法に制限は無く、公知の任意の方法により形成することができる。例えば一体に形成した基板２内に流路３を形成することも可能であるが、本実施形態では、流路３を凹部として形成した下板２ａに、流路３に蓋をするための上板２ｂを接着することにより基板２内に流路３を形成しているものとする。即ち、基板２は下板２ａと上板２ｂとにより形成され、下板２ａと上板２ｂとの接着面に沿って流路３が形成されているのである。なお、流路３を形成する際の具体的な流路形成方法も任意であるが、例えば、フォトレジスト、ウェットエッチング、ドライエッチング、射出成形、レーザー加工、ビーム加工などを任意に用いて形成することができる。

［２．流路］
流路３は、基板２の内部に形成されたもので、上記の通り、導入流路部４，５と、プール部６と、送出流路部７，８とを備えている。

［２−１．導入流路部］
導入流路部４，５は、クロマトグラフィーを用いて分離を行なう対象である試料液、目的物質の溶出に用いる溶出液、流路３内の洗浄に用いる洗浄液、吸着液の再生に用いる再生液などが流路３に入るための導入用の流路部であり、この導入流路部４，５を介して、プール部６に上記の試料液などが導入されるようになっている。
導入流路部４，５の具体的な構成に制限は無いが、通常は、導入流路部４，５はそれぞれ上流端部に導入口４ａ，５ａを有していて、この導入口４ａ，５ａを介して外部から対応する試料液を導入されるようになっている。

また、導入流路部４，５は少なくとも１本だけ形成されていれば良いが、流路３に導入する液体の種類、組成、目的などに応じて、２本以上形成するようにしても良い。本実施形態においては、導入流路部４，５は２本形成されているものとする。
さらに、本実施形態では、導入流路部４，５は、ブール部６よりも上流において合流しているものとする。これは、クロマトグラフィーによる分離の場となるプール部６よりも上流において、プール部６に流入する液体の種類や組成などを選択するためである。

また、導入流路部４，５のうちの少なくとも１本を、上記の試料液、溶出液、洗浄液、再生液などの液体を導入する他、プール部６に吸着剤を導入するための吸着剤導入路として用いることができるように形成しても良い。この場合、導入流路部４，５は、吸着剤の粒子が流通することができるような寸法に形成することが望ましい。具体的には、吸着剤の粒径（好ましくは最大粒径）よりも幅及び高さを大きく形成することが望ましい。

さらに、導入流路部４，５から吸着剤を導入するようにする場合には、吸着剤の導入に用いる導入流路部４，５は、導入流路部４，５を吸着剤が途中で留まることなく流通することができるよう、導入口４ａ，５ａからプール部６にかけて滑らかに形成することが好ましい。具体的には、導入流路部４，５の流路形状を、直線状、曲線状、或いは、直線と曲線とが滑らかに連続した形状などに形成することが好ましい。

また、プール部６内に吸着剤をより均一に充填する観点からは、導入流路部４，５の向きは、プール部６に直前において、プール部６の流れ方向と平行になっていることが望ましい。仮に、導入流路部４，５の向きがプール部６の直前においてプール部６の流れ方向と交差する向きとなっている場合には、導入流路部４，５からブール部６に流入する吸着剤がプール部６の横方向の片方に主として流入し、これによりプール部６内の吸着剤の分布が偏る虞があるためである。なお、本明細書では、流路３内において「前」とは、上流側のことを指すものとする。

本実施形態では、導入流路部４，５は同じ長さに形成された２本の流路部によって構成されていて、さらに、導入流路部４，５は、それぞれ円弧状の流路形状となるように形成されているものとする。また、導入流路部４，５は、その下流にはプール部６が接続されていて、導入流路部４と導入流路部５とはプール部６の直前で合流しているものとする。
さらに、本実施形態では、導入口４ａ，５ａは、それぞれ導入流路部４，５の上流端と基板２の外部とを連通する孔として上板２ｂに形成されているものとする。

また、導入流路部４，５の寸法に制限は無く、本発明の効果を著しく損なわない限り任意である。ただし、上記の通り、導入流路部４，５を介してプール部６に吸着剤を導入する場合には、吸着剤の粒子が導入流路部４，５を流通することができるよう、吸着剤の粒径よりも大きい径を有するよう、その寸法を設定することが望ましい。
具体的な寸法は、吸着剤の寸法に応じて適切に設定すれば良いが、例えば、導入流路部４，５の幅は、通常５０μｍ以上、好ましくは１００μｍ以上、より好ましくは２００μｍ以上、また、通常２０００μｍ以下、好ましくは１０００μｍ以下、より好ましくは８００μｍ以下とすることが望ましい。上記範囲の下限を下回ると吸着剤の充填が困難になる虞があり、上限を上回ると吸着剤が抜け出しやすくなる虞がある。

さらに、導入流路部４，５の深さは、通常５０μｍ以上、好ましくは１００μｍ以上、より好ましくは１５０μｍ以上、また、通常５００μｍ以下、好ましくは３００μｍ以下、より好ましくは２００μｍ以下とすることが望ましい。上記範囲の下限を下回ると吸着剤の充填が困難となる虞があり、上限を上回ると吸着剤が抜け出しやすくなる虞がある。

［２−２．プール部］
プール部６は、導入流路部４，５の下流に形成された、吸着剤を充填するための流路部であり、このプール部６において、クロマトグラフィーを用いた分離が行なわれるようになっている。

また、プール部６は、その流路断面積、具体的には、流れ方向に垂直な面でプール部６を切った断面積（以下適宜、「プール部断面積」という）を、流路３内の他の流路部よりも相対的に大きく形成されている。本実施形態では、プール部６は、流路３の中で最も大きい断面積を有している。これは、従来よりも短い流路長さで従来と同等以上程度の容積を確保し、これにより、吸着剤の均一な充填を可能としつつ従来と同等以上程度の量の吸着剤を充填できるようにするためである。即ち、６ｍｍ程度の径を有するチューブや流路に吸着剤を充填した従来の微小流路においては、流路長が長くなるにつれて流路内に吸着剤を均一に充填することが困難になる傾向があり、また、流路長を短くすると流路に充填できる吸着剤の量が不足して分離精製時に目的物質の損失が生じる虞があったが、本実施形態の構成により、上記の課題を解決し、目的物質の損失を抑制しながら、所定量以下の微小な試料についても、クロマトグラフィーにより高純度且つ高回収率で分離精製を行なうことができるようになるのである。

プール部６の具体的な寸法は、本発明の効果を著しく損なわない範囲で任意に設定することができるが、例えば、その幅は、通常０．１ｍｍ以上、好ましくは２ｍｍ以上、より好ましくは５ｍｍ以上、さらに好ましくは１０ｍｍ以上とすることが望ましい。これにより、プール部６の流路断面積を相対的に大きくし、分離精製時に目的物質の損失を抑制することが可能となる。また、上限は特に制限は無いが、通常３０ｍｍ以下とすることが望ましい。この上限を上回ると基板にたわみを生ずる可能性がある。

さらに、プール部６の深さは、通常１００μｍ以上、好ましくは２００μｍ以上とすることが望ましい。これによっても、プール部６の流路断面積を相対的に大きくし、分離精製時に目的物質の損失を抑制することが可能となる。また、上限は特に制限は無いが、通常５００μｍ以下、好ましくは３００μｍ以下とすることが望ましい。

さらに、プール部６の長さ（流れ方向の距離）は、通常６０ｍｍ以下とすることが望ましい。これにより、プール部６内に吸着剤を均一に平面上に充填することが可能となる。また、下限は特に制限は無いが、通常２ｍｍ以上、好ましくは５ｍｍ以上、より好ましくは１０ｍｍ以上が望ましい。この下限を上回ると吸着量が少なくなりすぎる虞がある。

さらに、プール部６は、その流れ方向の距離（本実施形態では、プール部６の長さ）に対する、その流れ方向に垂直な面で当該プール部６を切った断面形状のうち長い方の辺の距離（本実施形態では、プール部６の幅）の比が、通常１以上、好ましくは２以上であることが望ましい。この範囲の下限を下回ると壁側でも流速が遅くなる虞がある。なお、上限は特に限定されない。

また、プール部６の流路形状は、本発明の効果を著しく損なわない限り任意である。ただし、プール部６の上流側部分においては、プール部６と導入流路部４，５との接続地点から下流へ向けて、プール部６の流路形状が滑らかに形成されることが望ましい。例えば、プール部６と導入流路部４，５との接続地点から下流に行くにしたがってプール部６が滑らかに幅広になるように形成すれば、プール部６に流入した試料液や溶出液などの液体、及び、吸着剤などの粒子がプール部６の各部位に均一に流れ込むことができるようになり、分離精製の効率向上や、吸着剤の充填を均一にすることができるようになるなどの利点を得ることができるようになる。

一方、プール部６の下流側部分においても、プール部６と送出流路部７，８との接続地点へ向けて、プール部６の流路形状が滑らかに形成されることが望ましい。例えば、プール部６と送出流路部７，８との接続地点へ滑らかに傾斜するような流路形状にプール部６を形成すれば、プール部６の試料液や溶出液などの液体を効率よくプール部６から送出することができるようになる。また、流路３に液体を流通させた場合に、プール部６内に存在する気体が気泡としてプール部６に残留することを防止することも可能となる。

また、本実施形態のクロマト用チップ１においては、プール部６内の送出流路部７，８よりも上流側に、吸着剤がプール部６から流出することを防止する流出防止部９を設けるようにする。プール部６の下流には流路３から試料液や溶出液などの液体を外部に送出するための送出流路部７，８が形成されているため、なんら対処を講じていなければ、吸着剤はプール部６の外部、具体的には、送出流路部７，８及び流路３の外部に流出する虞がある。流出防止部９は、これを防止するべく設けられるものである。

流出防止部９の具体的な構成に制限は無く、吸着剤がプール部６から流出することを防止できれば任意の構成とすることができるが、通常は、基板２との間で吸着剤の粒径よりも小さい隙間（図３の隙間１１を参照）を形成するようプール部６の内面が凸に形成されたダム部９として構成することが望ましい。上記の隙間の具体的な大きさは吸着剤の寸法に応じて設定すればよいが、通常５μｍ以下、好ましくは３μｍ以下である。なお、本実施形態においては流出防止部９とダム部９とは同様のものを示すため、特に断らない限り、両者は同様の符号で示すものとする。

本実施形態においても、図１及び図２に示すように、プール部６の下流端部には流出防止部としてダム部９が形成されている。このように流出防止部をプール部６の下流端部に設けることで、プール部６内により多くの吸着剤を充填できるようになっている。
また、本実施形態のダム部９は、プール部６の横方向一方の内側面６ｂから他方の内側面６ｃにかけて延在する直方体形状の壁部として形成されたものである。

さらに、ダム部９は、図３に示すように、プール部６の底面６ａが凸に形成されたものである。また、ダム部９は、その高さがプール部６の深さよりも特定長さだけ小さくなるように形成されている。この特定長さが上記の隙間の大きさとなり、プール部６に吸着剤１０を充填した際に、その充填された吸着剤１０の粒径よりも小さい長さとなるようになっている。これにより、ダム部９の上端部９ａと基板２の内面（具体的には、プール部６の天井面）６ｄとの間で吸着剤１０の粒径よりも小さい隙間１１を形成するようになっている。したがって、プール部６内に充填された吸着材１０は、その粒子が隙間１１を通り抜けることができなくなるため、プール部６から流出しないようになっている。
なお、図３では、説明のため、プール部６に吸着剤１０を充填した様子を示してある。

［２−３．送出流路部］
送出流路部７，８は、プール部６の下流に設けられた流路部であり、プール部６から上記の試料液、溶出液、洗浄液、再生液などの液体を流路３の外部に送出するためのものである。

送出流路部７，８は少なくとも１本形成するようにすればよいが、２本以上形成するようにすると、流路３内の圧力損失を低下させることが可能となり、クロマト用チップ１の破損や、送出流路部７，８よりも上流においてチューブやコネクタ（図示省略）から液体が漏れることなどを防止することができるため、好ましい。

本実施形態においては、送出流路部７，８はプール部６の下流に２本形成されているものとする。また、この送出流路部７，８の下流端部には、それぞれ送出流路部７，８と基板２の外部とを連通する孔として、上板２ｂに送出口７ａ，８ａが形成されて、この送出口７ａ，８ａを介して流路３から外部へと液体が送出されるようになっているものとする。

［ＩＩ．分離方法］
上記のクロマト用チップ１を用いれば、クロマトグラフィーにより、試料液中の目的物質を分離し、精製することができる。この場合、流路３に試料液を流通させて吸着剤に目的物質を吸着させ（吸着工程）、流路３に目的物質を溶出させる溶出液を流通させて吸着剤に吸着している目的物質を溶出させ、その溶出液の分画をとるようにすればよい。

以下、上記のクロマト用チップ１を用いた分離方法の一実施形態として、α−メチルグルコシドのトシル体とジトシル体とを含む試料液から目的物質としてα−メチルグルコシドのトシル体を分離・精製する場合を例に挙げて、分離方法について説明する。

［１．吸着剤］
分離を行なう場合、クロマト用チップ１には、吸着剤（固定相）を充填しておく。
吸着剤の種類に制限はなく、目的物質の種類や試料液の組成などに応じて任意に設定することができるが、通常は、例えばポリマーやシリカ等からなる修飾剤基体に対し、官能基により修飾を行なったものを用いる。この修飾は、吸着剤をプール部６に充填する前にあらかじめ行なっておいてもよいが、プール部６に吸着剤を充填した後、流路３に修飾用の液を流通させ、充填後に修飾を行なうようにしてもよい。

吸着剤基体や修飾に用いる官能基の種類に制限はなく任意であるが、例えば、本実施形態のようなα−メチルグルコシドのトシル体をジトシル体と分離・精製する場合には、吸着剤としてオルガノ社製合成吸着剤「ＸＡＤ８」等を用いることができる。なお、本実施形態においても、吸着剤としてオルガノ社製合成吸着剤「ＸＡＤ８」を用いているものとする。

さらに、吸着剤の粒径にも制限はなく、本発明の効果を著しく損なわない範囲において任意に設定することができるが、平均粒径が、通常３μｍ以上、好ましくは５μｍ以上、より好ましくは５０μｍ以上、また、通常１００μｍ以下、好ましくは９０μｍ以下、より好ましくは８０μｍ以下である。この範囲の下限を下回ると吸着剤が送出口より流出する虞があり、上限を上回ると吸着剤の充填が困難となる虞がある。なお、吸着剤の粒径は、上記のように、ダム部９と基板２との間で形成される隙間１１より大きくなるようになっている。

また、吸着剤の充填方法も上記のように任意である。本実施形態においては、プール部６の下流端部でダム部９と基板２の上面６ｄとの間に形成された隙間１１を通過できない程度の粒径の吸着剤を、導入流路部４，５からプール部６内に導入して、吸着剤の充填を行なったものとする。

［２．試料液］
本実施形態のクロマト用チップ１を用いて分離・精製を行なう試料液に制限はなく、任意の液体を用いることができる。したがって、適切な吸着剤や溶出液などを選択して用いることにより、多様な試料液に対して分離・精製を行なうことが可能となり、その試料液に目的物質が含まれていた場合には、当該目的物質を高い純度及び回収率で得ることができるのである。
本実施形態では、５０％メタノール水溶液中に、目的物質であるα−メチルグルコシドのトシル体と、不純物であるα−メチルグルコシドのジトシル体とが共存した試料液を用いるものとして説明を行なう。なお、本明細書においては、単に「％」と言う場合、「重量％」のことを示すものとする。

［３．溶出液］
溶出液は、目的物質や吸着剤などの種類に応じて任意のものを用いることができる。通常、吸着剤に吸着した目的物質を脱着させるものを用いる。
本実施形態では、メタノール水溶液を溶出液として用い、そのメタノール濃度に応じて溶出する目的物質（即ち、α−メチルグルコシドのトシル体）を得るようになっているものとする。上記の吸着剤を用いた場合、α−メチルグルコシドは、そのトシル体は比較的メタノール濃度が低いメタノール水溶液により吸着剤から溶出され、一方、そのジトシル体は比較的メタノール濃度が高いメタノール水溶液により吸着剤から溶出される傾向がある。これを利用し、メタノール濃度を変化させて溶出液としてメタノール水溶液をクロマト用チップ１の流路３に流通させることにより、α−メチルグルコシドのトシル体とジトシル体とを分離することができるのである。

［４．分離装置］
上記のクロマト用チップ１を用いて分離・精製を行なう場合に用いる分離装置に制限はなく、目的物質の分離が可能である限り任意の構成の装置を用いることができる。ここでは、図４に示す分離装置を用いたものとして説明を行なう。なお、図４は本実施形態の分離装置の要部構成を模式的に示す概要図である。
この分離装置は、クロマト用チップ１と、試料液供給部３０と、溶出液供給部４０と、分画回収部５０と、再分離用還流部６０と、制御部７０とを備えている。

［４−１．クロマト用チップ］
本実施形態の分離装置は、クロマト用チップ１を備える。この際、クロマト用チップ１は着脱可能に構成することが好ましい。本実施形態においては、クロマト用チップ１は、チップホルダ２０に保持されているものとする。

図５は、チップホルダ２０について模式的に示す分解斜視図である。この図５に示すように、チップホルダ２０は、上記クロマト用チップ１を保持するためのものであり、下部ホルダ２１と上部ホルダ２２とから構成されていてクロマト用チップ１を下部ホルダ２１と上部ホルダ２２との間に介装することで、チップホルダ２０にクロマト用チップ１を保持できるようになっている。なお、図４においては、チップホルダ２０に装着したクロマト用チップ１を１点鎖線で示してある。

さらに、下部ホルダ２１及び上部ホルダ２２にはそれぞれ制御部７０の制御にしたがって温度の調整が可能な温度制御素子（図示省略）が形成されていて、この温度制御素子の温度を制御することで、クロマト用チップ１の流路３内の温度を調整することができるようになっている。

また、上部ホルダ２２には、試料液供給部３０からの試料液及び溶出液供給部４０からの溶出液をそれぞれクロマト用チップ１の導入口４ａ，５ａに案内するための案内流路（図示省略）が形成されている。さらに、上部ホルダ２２には、クロマト用チップ１の送出口７ａ，８ａから流出する液体を分画回収部５０に案内するための案内流路（図示省略）も形成されている。これらの案内流路はチューブやコネクタ等の配管を介してそれぞれ試料液供給部３０、溶出液供給部４０及び分画回収部５０に接続され、これにより、試料液供給部３０及び溶出液供給部４０から導入流路部４，５への試料液や溶出液等の液体の供給、並びに、送出流路部７，８から分画回収部５０への流路３流通後の上記液体の送出を行なうことができるようになっている。

［４−２．試料液供給部］
試料液供給部３０は、クロマト用チップ１に向けて試料液を供給する部分である。本実施形態では、試料液供給部３０は、貯水サンプルビン３１、貯水サンプルビン３１用の送液ポンプ３２、サンプルビン３３、サンプルビン３３用の送液ポンプ３４、制御弁３５、並びに、これらを接続するコネクタやチューブ等で構成された配管を備えて構成されているものとする。

貯水サンプルビン３１には水が貯蔵されていて、この貯水サンプルビン３１内の水は、サンプルビン３３から送出される試料液と混合されて、試料液のメタノール濃度を５０％とするためのものである。
また、送液ポンプ３２は、貯水サンプルビン３１に貯蔵されている水をクロマト用チップ１に向けて送出するためのものであり、貯水サンプルビン３１の下流に接続されている。この送液ポンプ３２は、制御部７０により稼動を制御されるようになっていて、制御部７０の制御にしたがって貯水サンプルビン３１から送出される水の送出量を調整できるようになっている。なお、図４において、制御部７０からの制御を破線の矢印で示す。

サンプルビン３３には分離する対象となる試料液が貯蔵されている。上記のとおり、本実施形態においてはクロマト用チップ１に対して試料液のメタノール濃度を５０％とすることになるが、貯水サンプルビン３１内の水を用いて濃度調整を行なうことができるため、サンプルビン３３内にある時点では試料液は必ずしもメタノール濃度が５０％でなくてもよい。ただし、本実施形態の場合には、分離装置の構成上、サンプルビン３３に貯蔵する試料液のメタノール濃度は５０％以上とすることになる。

また、送液ポンプ３４は、サンプルビン３３に貯蔵されている試料液をクロマト用チップ１に向けて送出するためのものであり、サンプルビン３３下流に接続されている。この送液ポンプ３４も、制御部７０により稼動を制御されるようになっていて、制御部７０の制御にしたがってサンプルビン３３から送出される試料液の送出量を調整できるようになっている。

さらに、制御弁３５は、送液ポンプ３２，３４の下流に接続されている。本実施形態の分離装置では、図４に示すように、送液ポンプ３２及び送液ポンプ３４の下流で配管は合流するようになっていて、この合流部で試料液と水とが混合することにより、試料液供給部３０は、試料液のメタノール濃度をクロマト用チップ１に供給するのに適した５０％に調整し、その試料液をクロマト用チップ１に供給できるようになっている。ここで、制御弁３５は、制御部７０によって制御され、メタノール濃度が５０％に調整された上記の試料液の流量を制御するようになっている。具体的には、制御部７０の制御にしたがってその開度を調整することなどにより、試料液を流すか否か、また、試料液をどれだけの速さで流すのかを制御できるようになっている。
そして、制御弁３５は配管を介してクロマト用チップ１の導入口４ａに接続され、試料液をクロマト用チップ１内の流路３に導入できるようになっている。

［４−３．溶出液供給部］
溶出液供給部４０は、クロマト用チップ１に向けて溶出液を供給する部分である。本実施形態では、溶出液供給部４０は、貯水サンプルビン４１、貯水サンプルビン４１用の送液ポンプ４２、メタノールサンプルビン４３、メタノールサンプルビン４３用の送液ポンプ４４、制御弁４５、並びに、これらを接続するコネクタやチューブ等で構成された配管を備えて構成されているものとする。

貯水サンプルビン４１には水が貯蔵されていて、この貯水サンプルビン４１内の水は、メタノールサンプルビン４３から送出されるメタノールと混合して、所望の濃度のメタノール水溶液を溶出液として調整するためのものである。
また、送液ポンプ４２は、貯水サンプルビン４１に貯蔵されている水をクロマト用チップ１に向けて送出するためのものであり、貯水サンプルビン４１の下流に接続されている。この送液ポンプ４２も、制御部７０により稼動を制御されるようになっていて、制御部７０の制御にしたがって貯水サンプルビン４１から送出される水の送出量を調整できるようになっている。

さらに、メタノールサンプルビン４３にはメタノールが貯蔵されている。本実施形態においては、溶出液として、メタノール濃度が５０％、６０％、７０％、８０％、９０％のメタノール溶液及び濃度１００％のメタノールを溶出液として用いることになる。したがって、溶出液供給部４０は、メタノールサンプルビン４３から送出されるメタノールを貯水サンプルビン４１から送出される水と混合することにより所望のメタノール濃度の溶出液を調製し、クロマト用チップ１に向けてその溶出液を供給できるようになっているのである。

また、送液ポンプ４４は、メタノールサンプルビン４３に貯蔵されているメタノールをクロマト用チップ１に向けて送出するためのものであり、メタノールサンプルビン４３の下流に接続されている。この送液ポンプ４４も、制御部７０により稼動を制御されるようになっていて、制御部７０の制御にしたがってメタノールサンプルビン４３から送出されるメタノールの送出量を調整できるようになっている。

さらに、制御弁４５は、送液ポンプ４２，４４の下流に接続されている。本実施形態の分離装置では、溶出液供給部４０でも試料液供給部３０と同様に、送液ポンプ４２及び送液ポンプ４４の下流で配管は合流するようになっていて、この合流部でメタノールと水とが混合することにより、溶出液供給部４０は、溶出液のメタノール濃度をクロマト用チップ１に供給するのに適した所望の濃度に調整し、その溶出液をクロマト用チップ１に供給できるようになっている。ここで、制御弁４５は、制御部７０によって制御され、メタノール濃度が所望の濃度に調整された上記の溶出液の流量を制御するようになっている。具体的には、制御部７０の制御にしたがってその開度を調整することなどにより、溶出液を流すか否か、また、溶出液をどれだけの速さで流すのかを制御できるようになっている。
そして、制御弁４５は配管を介してクロマト用チップ１の導入口５ａに接続され、溶出液をクロマト用チップ１内の流路３に導入できるようになっている。

［４−４．分画回収部］
分画回収部５０は、クロマト用チップ１内の流路３から流出する試料液や溶出液などを回収するものである。本実施形態では、分画回収部５０は、第１回収サンプルビン５１、第２回収サンプルビン５２、第３回収サンプルビン５３、切替弁５４、送液ポンプ５５、並びに、これらを接続するコネクタやチューブ等で構成された配管を備えて構成されているものとする。

第１回収サンプルビン５１、第２回収サンプルビン５２及び第３回収サンプルビン５３は、それぞれ、クロマト用チップ１から送出された液体を回収するためのタンクである。本実施形態では、メタノール濃度５０％〜７０％の溶出液を第１回収サンプルビン５１に回収し、メタノール濃度８０％又は９０％の溶出液を第２回収サンプルビン５２に回収し、メタノール濃度１００％の溶出液及び試料液を第３回収サンプルビン５３に回収するようになっている。

本実施形態の分離装置では、吸着剤に吸着した目的物質を溶出液によって溶出させる場合、目的物質であるα−メチルグルコシドのトシル体は、クロマト用チップ１の流路３を流通した溶出液の分画のうち、メタノール濃度が５０％〜９０％の溶出液に含有されることになる。一方、不純物であるα−メチルグルコシドのジトシル体は、メタノール濃度が８０％〜１００％の溶出液に含有されることになる。したがって、メタノール濃度５０％〜７０％の溶出液には目的物質であるα−メチルグルコシドのトシル体が含有され、メタノール濃度８０％又は９０％の溶出液にはα−メチルグルコシドのトシル体とジトシル体とがともに含有され、メタノール濃度１００％の溶出液にはα−メチルグルコシドのジトシル体が含有されることなる。このため、メタノール濃度５０％〜７０％の溶出液を回収することにより、α−メチルグルコシドのトシル体を高純度で回収することができるようになる。また、後述するように、再分離用還流部６０により、α−メチルグルコシドのトシル体とジトシル体とをともに含有するメタノール濃度８０％又は９０％の溶出液を再度分離精製するようにすることによって、目的物質の損失量を抑制することが可能となる。なお、第３回収サンプルビン５３に回収されたメタノール濃度１００％の溶出液は、クロマト用チップ１流通後の試料液とともに廃液として処理されるようになっている。

また、切替弁５４は、配管によって、クロマト用チップ１の送出口７ａ，８ａ、第１回収サンプルビン５１、第２回収サンプルビン５２及び第３回収サンプルビン５３にそれぞれ接続されていて、クロマト用チップ１の送出口７ａ，８ａから送出された液体を、第１回収サンプルビン５１、第２回収サンプルビン５２及び第３回収サンプルビン５３のうちのいずれかに送出することができるよう、配管同士の接続を切り替えることができるようになっている。
さらに、切替弁５４の切り替えは制御部７０の制御によって行なうことができるようになっている。

送液ポンプ５５は、第２回収サンプルビン５２に貯蔵されている溶出液を再分離用還流部６０へ向けて送出するためのものであり、第２回収サンプルビン５２の下流に接続されている。この送液ポンプ５５も、制御部７０により稼動を制御されるようになっていて、制御部７０の制御にしたがって第２回収サンプルビン５２から送出される溶出液の送出量を調整できるようになっている。なお、送液ポンプ５５によって送出された溶出液は、再分離用還流部６０へと送られるようになっている。

［４−５．再分離用還流部］
再分離用還流部６０は、分画回収部５０が回収した溶出液のうち、目的物質であるα−メチルグルコシドのトシル体と不純物であるα−メチルグルコシドのジトシル体とを共に含有する分画（即ち、第２回収サンプルビン５２で回収した溶出液）を、試料液として、再度、クロマト用チップ１を用いて分離精製するためのものである。本実施形態においては、再分離用還流部６０は、貯蔵サンプルビン６１、送液ポンプ６２、制御弁６３並びに、これらを接続するコネクタやチューブ等で構成された配管を備えている。

貯蔵サンプルビン６１は、送液ポンプ５５を介して第２回収サンプルビン５２から送られてきたメタノール濃度８０％又は９０％の溶出液を貯蔵するためのものである。また、貯蔵サンプルビン６１内には、貯蔵サンプルビン６１内の溶出液のメタノール濃度を検出するためのセンサ（例えば、Ｈ₂Ｏセンサ）６４が設置されていて、このセンサ６４での検出結果は、制御部７０に送られるようになっている。

また、送液ポンプ６２は、貯蔵サンプルビン６１に貯蔵されている溶出液を試料液供給部３０に向けて送出するためのものであり、貯蔵サンプルビン６１の下流に接続されている。この送液ポンプ６２も、制御部７０により稼動を制御されるようになっていて、制御部７０の制御にしたがって貯蔵サンプルビン６１から送出される溶出液の送出量を調整できるようになっている。

さらに、制御弁６３は、送液ポンプ６２の下流に接続されている。また、制御弁６３は制御部７０によって制御され、制御部７０の制御にしたがって、その開度を調整することなどにより、溶出液を流すか否か、また、溶出液をどれだけの速さで流すのかを制御できるようになっている。

［４−６．制御部］
制御部７０は、上述したように、チップホルダ２０に設けられた温度制御素子（図示省略）、送液ポンプ３２，３４，４２，４４，５５，６２、制御弁３５，４５，６３及び切替弁５４をそれぞれ制御するようになっている。したがって、制御部７０は、チップホルダ２０に設けられた温度制御素子を制御して流路３内の温度を調整する温度制御手段、試料液供給部３０からクロマト用チップ１の流路３に供給される試料液の流量や組成を制御する試料液制御手段、溶出液供給部４０からクロマト用チップ１の流路３に供給される溶出液の流量や組成を制御する溶出液制御手段、分画回収部５０がクロマト用チップ１から送出された液体を回収する際の操作を制御する分画回収制御手段、溶出液のうちの少なくとも一部を再度分離精製する操作を制御する再分離制御手段などとして機能するものである。

また、本実施形態において、制御部７０は、ハードウェア的にはＣＰＵ（Ｃｅｎｔｒａｌ Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ Ｕｎｉｔ）や、ＲＡＭ（Ｒａｎｄｏｍ Ａｃｃｅｓｓ Ｍｅｍｏｒｙ）、ＲＯＭ（Ｒｅａｄ Ｏｎｌｙ Ｍｅｍｏｒｙ）等のメモリ、更にはＡＤ変換部等のインターフェース部などから構成されていて、これらが上記の各手段としての機能を発揮するようになっている。

［５．分離精製要領］
以下、上記のような分離装置を用いて試料液の分離を行なう場合の要領について説明する。なお、最初の状態では、送液ポンプ３２，３４，４２，４４，５５，６２は停止しており、また、制御弁３５，４５，６３は閉状態となっているものとする。また、切替弁５４は、クロマト用チップ１の送出口７ａ，８ａと第３回収サンプルビン５３とが連通するように切り替わっているものとする。さらに、貯水サンプルビン３１，４１及びメタノールサンプルビン４３には、それぞれ十分な量の水及びメタノールが貯蔵されているものとする。

［５−１．準備］
本実施形態の分離装置を用いて試料液中の目的物質を分離生成する場合、プール部６に吸着剤を充填したクロマト用チップ１をチップホルダ２０に設置し、また、サンプルビン３３に試料液を入れる。その後、制御部７０に分離精製開始の指示を与えると、制御部７０の制御にしたがって、本分離装置は自動的に以下のようにして分離精製操作を行なう。
即ち、分離精製開始の指示を受けると、制御部７０は、チップホルダ２０の温度制御素子を制御して、流路３内の温度を目的物質の分離精製に適した温度に調整する。本実施形態では、０℃に調整したものとして説明を行なう。

［５−２．吸着工程］
次に、制御部７０は試料液供給部３０を制御して、クロマト用チップ１の流路３に試料液を流通させる吸着工程を行なわせる。
詳しくは、制御部７０は、送液ポンプ３４を稼動させてサンプルビン３３から試料液を送出すると共に、送液ポンプ３２を稼動させて貯水サンプルビン３１から水を送出する。この際、制御部７０は、試料液と水とが混合することによってクロマト用チップ１に供給される試料液のメタノール濃度が５０％となるよう、送液ポンプ３２，３４を制御して、試料液及び水の送出速度を調整する。

そして、制御部７０は、適切な流速でクロマト用チップ１に試料液を供給できる開度だけ制御弁３５を開き、クロマト用チップ１の流路３への試料液の供給を行なう。この際、流通させる試料液の量は任意であるが、本実施形態では、試料液はプール部６に充填された吸着剤の体積量だけ流通させるようになっているものとする。これにより、試料液の損失を防止できるという利点を得ることができる。

試料液供給部３０から送出された試料液は、クロマト用チップ１の導入口４ａ、導入流路部４を介してプール部６に進入する。プール部６内では、試料液中のα−メチルグルコシドのトシル体とジトシル体とが吸着剤に吸着し、その他の成分（主に、移動相である水とメタノール）は送出流路部７，８及び送出口７ａ，８ａを介して分画回収部５０に送出される。

分画回収部５０では、切替弁５４が送出口７ａ，８ａと第３回収サンプルビン５３とを連通させるように切り替わっているため、送出口７ａ，８ａから送出された試料液は第３回収サンプルビン５３に貯められる。
こうして、吸着工程により、プール部６内の吸着剤に目的物質が吸着する。
なお、吸着工程が完了したら、制御部７０は制御弁３５を制御して閉状態にさせるとともに、送液ポンプ３２，３４を停止する。

［５−３．溶出工程］
吸着工程の後、制御部７０は、クロマト用チップ１の流路３に溶出液を流通させる溶出工程を行なうよう制御をする。また、本実施形態では、溶出工程として、溶出液のメタノール濃度に応じて、５０％分画溶出工程、６０％分画溶出工程、７０％分画溶出工程、８０％分画溶出工程、９０％分画溶出工程及び１００％分画溶出工程を行なう。以下、それぞれの溶出工程について説明する。

［５−３−１．５０％分画溶出工程］
５０％分画溶出工程では、制御部７０は、送液ポンプ４２を稼動させて貯水タンク３２から水を送出すると共に、送液ポンプ４４を稼動させてメタノールサンプルビン４２からメタノールを送出する。この際、制御部７０は、試料液と水とが混合することによってクロマト用チップ１に供給される試料液のメタノール濃度が５０％となるよう、送液ポンプ４２，４４を制御して、水及びメタノールの送出速度を調整する。

そして、制御部７０は、切替部５４を制御して送出口７ａ，８ａと第１回収サンプルビン５１とを連通させるように切替部５４を切り替えると共に、適切な流速でクロマト用チップ１に溶出液を供給できる開度だけ制御弁４５を開き、クロマト用チップ１の流路３への溶出液の供給を行なう。この際、流通させる溶出液の量は任意であるが、本実施形態では、試料液はプール部６に充填された吸着剤の体積量だけ流通させるようになっているものとする。これにより、溶出液の損失を防止できるという利点を得ることができる。

溶出液供給部４０から送出されたメタノール濃度５０％の溶出液は、クロマト用チップ１の導入口５ａ、導入流路部５を介してプール部６に進入する。プール部６内では、吸着剤に吸着したα−メチルグルコシドのトシル体（目的物質）が吸着剤から脱着し、溶出液とともに送出流路部７，８及び送出口７ａ，８ａを介して分画回収部５０に送出される。

分画回収部５０では、切替弁５４が送出口７ａ，８ａと第１回収サンプルビン５１とを連通させるように切り替わっているため、送出口７ａ，８ａから送出された試料液は第１回収サンプルビン５１に貯められる。
メタノール濃度５０％の溶出液を流通させた場合には、目的物質であるα−メチルグルコシドのトシル体は吸着剤から脱着するが、不純物であるα−メチルグルコシドのジトシル体は吸着剤から脱着しないため、第１回収サンプルビン５１に貯められた溶出液は、目的物質を含むが不純物は含まない。
したがって、５０％分画溶出工程により、プール部６内の吸着剤に吸着していた目的物質を第１回収サンプルビン５１に回収することができる。

［５−３−２．６０％分画溶出工程］
６０％分画溶出工程では、制御部７０は、溶出液のメタノール濃度を６０％とする点、及び、切替弁５４が５０％分画溶出工程で既に送出口７ａ，８ａと第１回収サンプルビン５１とを連通させるように切り替わっているため切替弁５４を切り替える必要がない点の他は、５０％分画溶出工程と同様の制御を行ない、メタノール濃度６０％の溶出液を第１回収サンプルビン５１に回収する。

メタノール濃度６０％の溶出液を流通させた場合にも、目的物質であるα−メチルグルコシドのトシル体は吸着剤から脱着するが、不純物であるα−メチルグルコシドのジトシル体は吸着剤から脱着しないため、第１回収サンプルビン５１に貯められた溶出液は、目的物質を含むが不純物は含まない。
したがって、６０％分画溶出工程により、プール部６内の吸着剤に吸着していた目的物質を第１回収サンプルビン５１に回収することができる。

［５−３−３．７０％分画溶出工程］
７０％分画溶出工程では、制御部７０は、溶出液のメタノール濃度を７０％とする点、及び、切替弁５４が５０％分画溶出工程で既に送出口７ａ，８ａと第１回収サンプルビン５１とを連通させるように切り替わっているため切替弁５４を切り替える必要がない点の他は、５０％分画溶出工程と同様の制御を行ない、メタノール濃度７０％の溶出液を第１回収サンプルビン５１に回収する。

メタノール濃度７０％の溶出液を流通させた場合にも、目的物質であるα−メチルグルコシドのトシル体は吸着剤から脱着するが、不純物であるα−メチルグルコシドのジトシル体は吸着剤から脱着しないため、第１回収サンプルビン５１に貯められた溶出液は、目的物質を含むが不純物は含まない。
したがって、７０％分画溶出工程により、プール部６内の吸着剤に吸着していた目的物質を第１回収サンプルビン５１に回収することができる。

［５−３−４．８０％分画溶出工程］
８０％分画溶出工程では、制御部７０は、溶出液のメタノール濃度を８０％とする点、及び、切替弁５４を送出口７ａ，８ａと第２回収サンプルビン５２とを連通させるように切り替える点の他は、５０％分画溶出工程と同様の制御を行ない、プール部６内の吸着剤に吸着していた目的物質を第２回収サンプルビン５２に回収する。

メタノール濃度８０％の溶出液を流通させた場合には、目的物質であるα−メチルグルコシドのトシル体も、不純物であるα−メチルグルコシドのジトシル体も、ともに吸着剤から脱着するため、第２回収サンプルビン５２に貯められた溶出液は、目的物質も不純物も共に含むこととなる。

［５−３−５．９０％分画溶出工程］
９０％分画溶出工程では、制御部７０は、溶出液のメタノール濃度を９０％とする点、及び、切替弁５４が８０％分画溶出工程で既に送出口７ａ，８ａと第２回収サンプルビン５２とを連通させるように切り替わっているため切替弁５４を切り替える必要がない点の他は、５０％分画溶出工程と同様の制御を行ない、プール部６内の吸着剤に吸着していた目的物質を第２回収サンプルビン５２に回収する。

メタノール濃度９０％の溶出液を流通させた場合にも、目的物質であるα−メチルグルコシドのトシル体も、不純物であるα−メチルグルコシドのジトシル体も、ともに吸着剤から脱着するため、第２回収サンプルビン５２に貯められた溶出液は、目的物質も不純物も共に含むこととなる。

［５−３−６．１００％分画溶出工程］
１００％分画溶出工程では、制御部７０は、溶出液のメタノール濃度を１００％とする点（即ち、送液ポンプ４２を停止して水を供給しないようにする点）、及び、切替弁５４を送出口７ａ，８ａと第３回収サンプルビン５３とを連通させるように切り替える点の他は、５０％分画溶出工程と同様の制御を行ない、プール部６内の吸着剤に吸着していた目的物質を第３回収サンプルビン５３に回収する。

メタノール濃度１００％の溶出液を流通させた場合には、目的物質であるα−メチルグルコシドのトシル体は前出までの操作により全量脱着してしまい、不純物であるα−メチルグルコシドのジトシル体のみが吸着剤から脱着するため、第３回収サンプルビン５３に貯められた溶出液は、不純物を含むが目的物質は含まない。
したがって、第３回収サンプルビン５３に貯められた溶出液は、廃液として廃棄されることになる。

なお、溶出工程が完了したら、制御部７０は送液ポンプ４２，４４を停止し、制御弁４５を閉状態にする。

［５−４．その他の工程］
上記のようにして、第１回収サンプルビン５１に目的物質を含むが不純物を含まない溶出液を得ることができ、これにより、目的物質と不純物とを分離して目的物質の分離精製を行なうことができる。また、本実施形態によれば、目的物質を高純度で、かつ、高回収率で分離精製することができる。

また、本実施形態では、上記の工程に加え、適宜、その他の工程を行うようにしてもよい。
例えば、再分離工程を行なうようにしてもよい。再分離工程では、目的物質と不純物とを共に含む第２回収サンプルビン５２内の溶出液に対して、再度上記の吸着工程及び溶出工程を行なうことで、目的物質の損失量をより抑制しながら目的物質の分離精製を行なうものである。

本実施形態では、再分離工程を行なう場合、制御部７０が送液ポンプ５５を制御して第２回収サンプルビン５２内の溶出液を再分離用還流部６０の貯蔵サンプルビン６１に送る。貯蔵サンプルビン６１に送られた溶出液は、一度、貯蔵サンプルビン６１内に貯蔵される。
貯蔵サンプルビン６１では、センサ６４が貯蔵サンプルビン６１に貯められた溶出液中のメタノール濃度を検出しており、その濃度は、制御部７０に送られる。

第２回収サンプルビン５２内の溶出液を貯蔵サンプルビン６１内に送り終わると、制御部７０は、送液ポンプ６２を稼動させると共に制御弁６３を開き、貯蔵サンプルビン６１内の溶出液をサンプルビン３３に送る。サンプルビン３３に送られた溶出液は、上記のように目的物質を含むメタノール水溶液であるため、試料液として用いることができる。したがって、貯蔵サンプルビン６１から送られた溶出液を試料液に用いて、再度、上述した吸着工程及び溶出工程を行なうことにより、目的物質の損失量をより抑制しながら目的物質の分離精製を行なうことができる。ただし、最初に用いた試料液とは異なり、貯蔵サンプルビン６１から送られた溶出液を試料液に用いた場合にはその試料液のメタノール濃度をあらかじめ設定したり測定したりしておくことは難しい。そこで、制御部７０は、センサ６４が検出したメタノール濃度を用い、送液ポンプ３２，３４の制御を行なって、吸着工程においてクロマト用チップ１に供給する試料液のメタノール濃度を５０％にするようにする。

また、例えば、吸着工程の前、溶出工程の後などに、適宜、クロマト用チップ１に再生液を流通させて吸着剤を再生する再生工程や、クロマト用チップ１に洗浄液を流通させて吸着剤及びクロマト用チップ１内の流路３を洗浄する洗浄工程を行うようにしてもよい。

［６．その他］
上記の実施形態において、オートインジェクタなどの試料液供給装置を用いてサンプルビン３３や貯蔵サンプルビン６１への試料液の供給を自動的に行なうようにしてもよい。また、この試料液供給装置の制御は、制御部７０が行なうようにしてもよい。
さらに、上記のような分離装置においては、制御部７０が、上記の吸着工程、溶出工程、再分離工程、再生工程、洗浄工程などを周期的に行なうように構成することが好ましい。各工程を周期的に行なうようにすることにより、連続的に分離精製ができるという利点を得ることができる。

［ＩＩＩ．反応］
ところで、上記の本実施形態のクロマト用チップ１による分離精製の適用対象に制限はなく、公知の目的物質の分離精製に任意に用いることができる。
中でも、目的物質の損失を抑制しながら、所定量以下の試料についてクロマトグラフィーにより分離を行なうことができるという本発明の利点の一つを活用する観点からは、上記クロマト用チップ１は、例えば、試験管やビーカーなどを用いた大規模な合成が困難な反応を行ない、その生成物から目的生成物以外の副生成物を除去したい場合に用いて好適である。

例えば、上記の実施形態で例に挙げたα−メチルグルコシドのトシル体とジトシル体とを分離する場合は、上記の好適な場合に当たる。このようにα−メチルグルコシドのトシル体とジトシル体とを分離する具体的な反応としては、制癌剤であるラニムスチンの合成反応がある。
以下、本実施形態のクロマト用チップ１を用いて好適な反応の一例として、ラニムスチン合成反応について説明する。

このラニムスチン合成反応は、以下の反応式のようにして行なわれる。

即ち、上記の制癌剤ラニムスチンの合成反応では、α−メチルグルコシド｛以下適宜、「化合物（０）」という｝をｐ−トルエンスルホニルクロリド（以下適宜、「ＴｓＣｌ」という）と反応させることによりトシル化してα−メチルグルコシドのトシル体｛以下適宜、「化合物（１）」という。また、「Ｔｓ」はトシル基を表わす｝を合成し、この化合物（１）をアンモニアと反応させることでアミノ化してα−メチルグルコシドの１位アミノ体｛以下適宜、「化合物（２）」という｝を生成させる。一方、ｏ−ニトロフェノール｛以下適宜、「化合物（３）」という｝に２−エチルクロロイソシアネートを反応させてｏ−ニトロフェノールのカルバメート体｛以下適宜、「化合物（４）」という｝を合成し、この化合物（４）に亜硝酸ナトリウムを反応させることでニトロソ化してｏ−ニトロフェノールのニトロソカルバメート体｛以下適宜、「化合物（５）」という｝を生成させる。最後に、化合物（２）と化合物（５）とを反応させ、目的化合物（６）、即ち、制癌剤ラニムスチンを合成する。
以下、反応工程毎に説明する。

［１．化合物（０）からの化合物（１）の合成］
化合物（０）から化合物（１）を合成する反応工程においては、通常、原料として、化合物（０）の溶液とＴｓＣｌの溶液とを用いる。
化合物（０）を溶解させる溶媒に制限は無く、上記反応を進行させることができる限り任意の溶媒を用いることができるが、例えば、ピリジン、トリエチルアミンなどを用いることができる。なお、溶媒は１種を単独で用いても良く、２種以上を任意の組み合わせ及び比率で併用しても良い。

また、溶液中における化合物（０）の濃度も上記反応を進行させることができる限り任意であるが、通常１００ｇ／Ｌ以上、好ましくは２００ｇ／Ｌ以上、より好ましくは３００ｇ／Ｌ以上、また、通常１０００ｇ／Ｌ以下、好ましくは７００ｇ／Ｌ以下、より好ましくは５００ｇ／Ｌ以下である。上記範囲の下限を下回ると溶媒中の水分の影響を受ける虞があり、上限を上回ると化合物（０）の溶解が不十分となる虞がある。

一方、ＴｓＣｌを溶解させる溶媒にも制限は無く、上記反応を進行させることができる限り任意の溶媒を用いることができる。具体例としては、化合物（０）の溶媒として例示したものと同様のものが挙げられる。なお、溶媒は１種を単独で用いても良く、２種以上を任意の組み合わせ及び比率で併用しても良い。

また、溶液中におけるＴｓＣｌの濃度も上記反応を進行させることができる限り任意であるが、通常１００ｇ／Ｌ以上、好ましくは２００ｇ／Ｌ以上、より好ましくは３００ｇ／Ｌ以上、また、通常２０００ｇ／Ｌ以下、好ましくは１５００ｇ／Ｌ以下、より好ましくは１０００ｇ／Ｌ以下である。上記範囲の下限を下回ると溶媒中の水分の影響を受ける虞があり、上限を上回るとＴｓＣｌの溶解が不十分となる虞がある。

さらに、この反応を行なう場合の条件も上記反応を進行させることができる限り任意であるが、例えば温度条件については、通常−２０℃以上、好ましくは−１０℃以上、より好ましくは−５℃以上、また、通常２０℃以下、好ましくは１５℃以下、より好ましくは５℃以下が望ましい。上記範囲の下限を下回ると溶液が凍結する虞があり、上限を上回るとＴｓＣｌが分解する虞がある。

また、化合物（０）から化合物（１）を合成する反応において、化合物（１）の収率は、通常３０％以上、好ましくは４０％以上、より好ましくは５０％以上、また、通常６０％以下である。

［２．化合物（１）からの化合物（２）の合成］
化合物（１）から化合物（２）を合成する反応工程においては、通常、原料として、化合物（１）の溶液と気体状のアンモニアとを用いる。
化合物（１）を溶解させる溶媒に制限は無く、上記反応を進行させることができる限り任意の溶媒を用いることができるが、例えば、メタノールなどを用いることができる。なお、溶媒は１種を単独で用いても良く、２種以上を任意の組み合わせ及び比率で併用しても良い。

また、溶液中における化合物（１）の濃度も上記反応を進行させることができる限り任意であるが、通常３００ｇ／Ｌ以上、好ましくは４００ｇ／Ｌ以上、より好ましくは５００ｇ／Ｌ以上、また、通常１８００ｇ／Ｌ以下、好ましくは１５００ｇ／Ｌ以下、より好ましくは９００ｇ／Ｌ以下である。上記範囲の下限を下回ると溶媒中の水分の影響を受ける虞があり、上限を上回ると化合物（１）の溶解が不十分となる虞がある。

さらに、この反応工程においては原料としてアンモニアを供給することになるが、アンモニアに他の気体を併用し、他の気体との混合気体を原料とするようにしてもよい。
併用する気体に特に制限は無く、本発明の効果を著しく損なわない限り任意であるが、例えば窒素（Ｎ₂）を用いることができる。なお、併用する気体は１種を単独で用いても良く、２種以上を任意の組み合わせ及び比率で併用しても良い。

また、他の気体を併用する場合、原料としての気体全体に占めるアンモニアの濃度も本発明の効果を著しく損なわない限り任意であるが、通常３０体積％以上、好ましくは４０体積％以上、より好ましくは５０体積％以上が望ましい。上記範囲の下限を下回るとアミノ化反応が不十分となる虞がある。また、アンモニアの濃度は濃いほうが好ましく、上限は１００体積％である。

さらに、この反応を行なう場合の条件も上記反応を進行させることができる限り任意であるが、例えば温度条件については、通常６０℃以上、好ましくは７０℃以上、より好ましくは８０℃以上、また、通常１６０℃以下、好ましくは１４０℃以下、より好ましくは１２０℃以下が望ましい。上記範囲の下限を下回るとアミノ化反応が不十分となる虞があり、上限を上回ると化合物（１）が分解する虞がある。

ただし、化合物（１）からの化合物（２）の合成においては、原料である化合物（１）が分解発熱物質であるので、通常は、精密な温度制御が要求される。

また、化合物（１）から化合物（２）を合成する反応工程においては、化合物（２）の収率は、通常３０％以上、好ましくは４０％以上、より好ましくは５０％以上、また、通常８０％以下である。

［３．化合物（３）からの化合物（４）の合成］
化合物（３）から化合物（４）を合成する反応工程おいては、通常、原料として、化合物（３）の溶液と２−エチルクロロイソシアネートの溶液とを用いる。
化合物（３）を溶解させる溶媒に制限は無く、上記反応を進行させることができる限り任意の溶媒を用いることができるが、例えば、トルエン、キシレンなどを用いることができる。なお、溶媒は１種を単独で用いても良く、２種以上を任意の組み合わせ及び比率で併用しても良い。

また、溶液中における化合物（３）の濃度も上記反応を進行させることができる限り任意であるが、通常５０ｇ／Ｌ以上、好ましくは１００ｇ／Ｌ以上、より好ましくは２００ｇ／Ｌ以上、また、通常６００ｇ／Ｌ以下、好ましくは５００ｇ／Ｌ以下、より好ましくは３００ｇ／Ｌ以下である。上記範囲の下限を下回ると溶媒中の水分の影響を受ける虞があり、上限を上回ると化合物（３）の溶解が不十分となる虞がある。

一方、２−エチルクロロイソシアネートを溶解させる溶媒にも制限は無く、上記反応を進行させることができる限り任意の溶媒を用いることができる。具体例としては、化合物（３）の溶媒として例示したものと同様のものが挙げられる。なお、溶媒は１種を単独で用いても良く、２種以上を任意の組み合わせ及び比率で併用しても良い。

また、溶液中における２−エチルクロロイソシアネートの濃度も上記反応を進行させることができる限り任意であるが、通常５０ｇ／Ｌ以上、好ましくは１００ｇ／Ｌ以上、より好ましくは２００ｇ／Ｌ以上である。上記範囲の下限を下回ると溶媒中の水分の影響を受ける虞がある。

さらに、この反応を行なう場合の条件も上記反応を進行させることができる限り任意であるが、例えば温度条件については、通常−２０℃以上、好ましくは−１０℃以上、より好ましくは−５℃以上、また、通常２０℃以下、好ましくは１０℃以下、より好ましくは５℃以下が望ましい。上記範囲の下限を下回ると溶液が凍結する虞があり、上限を上回ると２−エチルクロロイソシアネートが分解する虞がある。

また、化合物（３）から化合物（４）を合成する反応工程においては、化合物（４）の収率は、通常６０％以上、好ましくは７０％以上、より好ましくは８０％以上、また、通常１００％以下である。

［４．化合物（４）からの化合物（５）の合成］
化合物（４）から化合物（５）を合成する反応工程においては、通常、原料として、化合物（４）の溶液と亜硝酸ナトリウムの溶液とを用いる。
化合物（４）を溶解させる溶媒に制限は無く、上記反応を進行させることができる限り任意の溶媒を用いることができるが、例えば、濃硝酸、希硝酸などを用いることができる。なお、溶媒は１種を単独で用いても良く、２種以上を任意の組み合わせ及び比率で併用しても良い。

また、溶液中における化合物（４）の濃度も上記反応を進行させることができる限り任意であるが、通常２０ｇ／Ｌ以上、好ましくは４０ｇ／Ｌ以上、より好ましくは８０ｇ／Ｌ以上、また、通常２００ｇ／Ｌ以下、好ましくは１５０ｇ／Ｌ以下、より好ましくは１００ｇ／Ｌ以下である。上記範囲の下限を下回ると溶媒中の不純物（例えば、濃硝酸中の不純物）の影響を受ける虞があり、上限を上回ると化合物（４）の溶解が不十分となる虞がある。

一方、亜硝酸ナトリウムを溶解させる溶媒にも制限は無く、上記反応を進行させることができる限り任意の溶媒を用いることができる。具体例としては、化合物（４）の溶媒として例示したものと同様のものが挙げられる。なお、溶媒は１種を単独で用いても良く、２種以上を任意の組み合わせ及び比率で併用しても良い。

また、溶液中における亜硝酸ナトリウムの濃度も上記反応を進行させることができる限り任意であるが、通常３００ｇ／Ｌ以上、好ましくは４００ｇ／Ｌ以上、より好ましくは５００ｇ／Ｌ以上、また、通常１４００ｇ／Ｌ以下、好ましくは１０００ｇ／Ｌ以下、より好ましくは７００ｇ／Ｌ以下である。上記範囲の下限を下回ると溶媒中の不純物（例えば、濃硝酸中の不純物）の影響を受ける虞があり、上限を上回ると亜硝酸ナトリウムの溶解が不十分となる虞がある。

さらに、この反応を行なう場合の条件も上記反応を進行させることができる限り任意であるが、例えば温度条件については、通常２０℃以上、好ましくは３０℃以上、より好ましくは４０℃以上、また、通常１００℃以下、好ましくは８０℃以下、より好ましくは６０℃以下が望ましい。上記範囲の下限を下回ると反応速度が低下する虞があり、上限を上回ると生成物の分解を招く虞がある。

また、化合物（４）から化合物（５）を合成する反応工程においては、化合物（５）の収率は、通常６０％以上、好ましくは７０％以上、より好ましくは８０％以上、また、通常１００％以下である。

［５．化合物（２）及び化合物（５）からの化合物（６）の合成］
化合物（２）及び化合物（５）から化合物（６）を合成する反応工程においては、通常、原料として、化合物（２）の溶液と化合物（５）の溶液とを用いる。
化合物（２）を溶解させる溶媒に制限は無く、上記反応を進行させることができる限り任意の溶媒を用いることができるが、例えば、テトラヒドロフラン、テトラヒドロピランなどを用いることができる。なお、溶媒は１種を単独で用いても良く、２種以上を任意の組み合わせ及び比率で併用しても良い。

また、溶液中における化合物（２）の濃度も上記反応を進行させることができる限り任意であるが、通常１００ｇ／Ｌ以上、好ましくは２００ｇ／Ｌ以上、より好ましくは３００ｇ／Ｌ以上、また、通常８００ｇ／Ｌ以下、好ましくは６００ｇ／Ｌ以下、より好ましくは４００ｇ／Ｌ以下である。上記範囲の下限を下回ると溶媒中の水分の影響を受ける虞があり、上限を上回ると化合物（２）の溶解が不十分となる虞がある。

一方、化合物（５）を溶解させる溶媒にも制限は無く、上記反応を進行させることができる限り任意の溶媒を用いることができる。具体例としては、メタノール、エタノール等を用いることができる。なお、溶媒は１種を単独で用いても良く、２種以上を任意の組み合わせ及び比率で併用しても良い。

また、溶液中における化合物（５）の濃度も上記反応を進行させることができる限り任意であるが、通常５０ｇ／Ｌ以上、好ましくは１００ｇ／Ｌ以上、より好ましくは２００ｇ／Ｌ以上、また、通常６００ｇ／Ｌ以下、好ましくは５００ｇ／Ｌ以下、より好ましくは３００ｇ／Ｌ以下である。上記範囲の下限を下回ると溶媒中の水分の影響を受ける虞があり、上限を上回ると化合物（５）の溶解が不十分となる虞がある。

さらに、この反応を行なう場合の条件も上記反応を進行させることができる限り任意であるが、例えば温度条件については、通常−２０℃以上、好ましくは−１０℃以上、より好ましくは−５℃以上、また、通常２０℃以下、好ましくは１０℃以下、より好ましくは５℃以下が望ましい。上記範囲の下限を下回ると溶液が凍結する虞があり、上限を上回ると生成物である化合物（６）が分解する虞がある。

また、化合物（２）及び化合物（５）から化合物（６）を合成する反応工程においては、化合物（６）の収率は、通常６０％以上、好ましくは７０％以上、より好ましくは８０％以上、また、通常１００％以下である。

［６．適用］
上述したクロマト用チップ１を用いた分離精製方法は、上記のラニムスチン合成の任意の工程において用いることができる。

中でも、上記の化合物（０）から化合物（１）を合成する反応工程においては、化合物（１）であるα−メチルグルコシドのトシル体のほか、α−メチルグルコシドのジトシル体も生成するが、クロマト用チップ１は、化合物（０）から化合物（１）を合成する反応工程で生成した生成物から目的物質である化合物（１）を分離精製する際に用いて好適である。

また、上記の化合物（１）から化合物（２）を合成する反応工程においては、通常、生成物である化合物（２）を原料である化合物（１）から分離精製するが、この際にも、上述したクロマト用チップ１を用いて化合物（２）を分離精製するようにすれば、目的物質の損失を抑制しながら分離を行なうことができるため、好ましい。

［ＩＶ．その他］
以上、本発明について一実施形態を示して説明したが、本発明は上記実施形態に限定されるものではなく、本発明の要旨を逸脱しない範囲において、任意に変形して実施することができる。

例えば、クロマト用チップ１の流路３は、上記実施形態のものに限定されず、変形して形成することもできる。具体例としては、上記実施形態のように基板２の接着面に沿った流路形状とせず、基板２の厚み方向にも流路３を設け３次元的な流路形状となるようにしてもよい。

さらに、例えば、クロマト用チップ１には、本発明の効果を著しく損なわない限り、上記の導入流路部４，５、プール部６及び送出流路部７，８以外の流路部を設けてもよい。
また、例えば、基板２に２本以上の流路３を設けるようにしてもよい。
さらに、流出防止部はダム部９以外の構成、例えば、格子や網目部により形成してもよく、ダム部９とその他の構成とを組み合わせて形成してもよい。
また、ダム部９は１個を単独でも受けてもよく、２個以上を設けてもよい。また、ダム部９はプール部６の底面６ａではなく、天井面６ｄが凸に形成されたものとして構成してもよい。

さらに、吸着剤は、導入流路部４，５を経由して充填する以外の方法で充填してもよく、例えば、流路３の内部で合成したり、基板２の下板２ａと上板２ｂとを張り合わせる前に充填したりしてもよい。
また、吸着剤はクロマト用チップ１にあらかじめ充填されていてもよく、使用の直前に充填するようにしてもよい。

さらに、上記分離装置の各構成要素は任意に組み合わせて実施することができる。さらに、上記の分離装置に別の機器を更に組み合わせて実施することも可能である。
また、上記クロマト用チップ１や分離装置は、所定量以下の微量な液体中の目的物質の分離精製に用いて好適であるが、それ以上の量の液体に対して用いても構わない。

さらに、上述した吸着工程及び溶出工程は、それぞれ独立に１回だけ行うようにしてもよく、２回以上行なうようにしてもよい。
また、上記クロマト用チップ１や分離装置は、適宜、分離精製以外に分析に用いてもよい。

以下、本発明について実施例を示して詳細に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではなく、本発明の要旨を逸脱しない範囲において任意に変形して実施することができる。

上記実施形態と同様のクロマト用チップを用意し、そのプール部に、オルガノ社製合成樹脂吸着剤ＸＡＤ８を３５０μＬ充填した。なお、用いたクロマト用チップにおいて、導入流路部の幅は１０００μｍ、深さは１００μｍとし、プール部の深さは１００μｍ、幅は２４μｍ、長さは５２μｍとした。また、ダム部と基板との間に形成された隙間の大きさは３μｍであり、用いた吸着剤の平均粒径は１００μｍであった。

上記のクロマト用チップを用いて、図６に示すような分離装置を構成した。なお、図６は、本実施例で用いた分離装置の要部構成を模式的に示す概要図であり、図４と実質的に同様の部分は、図４で用いた符号と同様の符号を付して示す。
この分離装置は、上記実施形態で説明したのと同様の、チップホルダ〔２０〕、試料液供給部〔３０〕、及び、溶出液供給部〔４０〕を備えていて、これらは上記実施形態と同様に、制御部〔７０′〕により制御されるようになっている。また、チップホルダ〔２０〕には上記クロマト用チップ〔１〕が装着され、その下流には、回収サンプルビン〔５０′〕が取り付けられている。ただし、上記実施形態とは異なり、本実施例の分離装置では、各分画を同一の回収サンプルビン〔５０′〕で回収されるようになっている。

上記の分離装置を用い、以下の手順で分離精製を行なった。
まず、制御部〔７０′〕によりチップホルダ〔２０〕の温度制御素子を制御して、クロマト用チップ〔１〕内の流路の温度（吸着温度）を０℃に調整した。
そして、制御部〔７０′〕の制御により、溶出液供給部〔３０〕から、α−メチルグルコシドのトシル体（目的物質）を２０ｍｇ／Ｌ、及び、α−メルグルコシドのジトシル体を１１ｍｇ／Ｌ含む試料液を３５０μＬ供給して、クロマト用チップ〔１〕内の流路に上記試料液を流通させ、α−メチルグルコシドのトシル体及びジトシル体を吸着剤に吸着させた（吸着工程）。

次いで、溶出液供給部〔４０〕から、溶出液として５０％メタノール水溶液を３５０μＬ供給して、クロマト用チップ〔１〕内の流路に溶出液を流通させ、この溶出液を回収サンプルビン〔５０′〕に回収し、メタノール濃度５０％溶出分画成分を捕集した（５０％分画溶出工程）。これにより、回収サンプルビン〔５０′〕内には、メタノール濃度５０％の溶出液で溶出された分画成分が捕集された。

次いで、溶出液のメタノール濃度を６０％とした他は、５０％メタノール水溶液を用いた上記溶出工程と同様にして、上記各メタノール濃度の溶出液を回収サンプルビンに回収し、メタノール濃度６０％分画成分を捕集した（６０％分画溶出工程）。これにより、回収サンプルビン〔５０′〕内には、メタノール濃度５０％及び６０％の溶出液で溶出された分画成分が捕集された。

次いで、溶出液のメタノール濃度を７０％とした他は、５０％メタノール水溶液を用いた上記溶出工程と同様にして、上記各メタノール濃度の溶出液を回収サンプルビンに回収し、メタノール濃度７０％分画成分を捕集した（７０％分画溶出工程）。これにより、回収サンプルビン〔５０′〕内には、メタノール濃度５０％〜７０％の溶出液で溶出された分画成分が捕集された。

次いで、溶出液のメタノール濃度を８０％とした他は、５０％メタノール水溶液を用いた上記溶出工程と同様にして、上記各メタノール濃度の溶出液を回収サンプルビンに回収し、メタノール濃度８０％分画成分を捕集した（８０％分画溶出工程）。これにより、回収サンプルビン〔５０′〕内には、メタノール濃度５０％〜８０％の溶出液で溶出された分画成分が捕集された。

次いで、溶出液のメタノール濃度を９０％とした他は、５０％メタノール水溶液を用いた上記溶出工程と同様にして、上記各メタノール濃度の溶出液を回収サンプルビンに回収し、メタノール濃度９０％分画成分を捕集した（９０％分画溶出工程）。これにより、回収サンプルビン〔５０′〕内には、メタノール濃度５０％〜９０％の溶出液で溶出された分画成分が捕集された。

さらに、溶出液のメタノール濃度を１００％とした他は、５０％メタノール水溶液を用いた上記溶出工程と同様にして、１００％メタノール濃度の溶出液を別の回収サンプルビンに回収する操作を５回行ない、メタノール濃度１００％の溶出分画成分を捕集した（１００％分画溶出工程）。これにより、回収サンプルビン〔５０′〕内には、メタノール濃度５０％〜１００％の溶出液で溶出された分画成分が捕集された。
なお、上記の一連の操作における試料液及び溶出液の供給速度はＳＶ＝１．０／ｈｒであった。ここで、「ＳＶ」は「液供給量（Ｌ／ｈｒ）／吸着材量（Ｌ）」で表される値である。

各溶出工程で得られた溶出液について、それぞれ、高速液体クロマトグラフィーで分析を行ない、各溶出液に含まれるα−メチルグルコシドのトシル体及びジトシル体の回収率と、各溶出液に含まれるα−メチルグルコシドのトシル体の純度とを測定した。結果を、図７及び表１に示す。

図７や表１から分かるように、メタノール濃度が５０％〜７０％の溶出液により、目的物質であるα−メチルグルコシドのトシル体を、高い純度で分離精製することができる。
また、メタノール濃度が５０％〜９０％の溶出液により、α−メチルグルコシドのトシル体をすべて回収することが可能であるため、メタノール濃度が８０％〜９０％の溶出液を用いて再度上記の分離精製を行なうことにより、α−メチルグルコシドのトシル体の回収率をさらに高め、その損失量を抑制することができることがわかる。

本発明は、産業上の任意の分野で用いることができるが、特に、制癌剤であるラニムスチンの製造等の、製薬分野において用いて好適である。

本発明の一実施形態としてのクロマトグラフィー用チップの模式的な上面図である。 本発明の一実施形態としてのクロマトグラフィー用チップの模式的な斜視図である。 本発明の一実施形態について示すもので、流出防止部近傍の模式的な拡大図である。 本発明の一実施形態にかかる分離装置の要部構成を模式的に示す概要図である。 本発明の一実施形態にかかるチップホルダについて模式的に示す分解斜視図である。 本発明の実施例で用いた分離装置の要部構成を模式的に示す概要図である。 本発明の実施例の結果として、各溶出工程で得られた各溶出液に含まれるα−メチルグルコシドのトシル体及びジトシル体の回収率と、各溶出液に含まれるα−メチルグルコシドのトシル体の純度とを表わすグラフである。

符号の説明

１ クロマトグラフィー用チップ
２ 基板
２ａ 下板
２ｂ 上板
３ 流路
４，５ 導入流路部
４ａ，５ａ 導入口
６ プール部
６ａ プール部の底面
６ｂ，６ｃ プール部の側面
６ｄ プール部の天井面
７，８ 送出流路部
７ａ，８ａ 送出口
９ ダム部（流出防止部）
１０ 吸着剤
１１ 隙間
２０ チップホルダ
２１ 下部ホルダ
２２ 上部ホルダ
３０ 試料液供給部
３１，４１ 貯水サンプルビン
３２，３４，４２，４４，５５，６２ 送液ポンプ
３３ サンプルビン
３５，４５，５５，６３ 制御弁
４０ 溶出液供給部
４３ メタノールサンプルビン
５０ 分画回収部
５０′ 回収サンプルビン
５１ 第１回収サンプルビン
５２ 第２回収サンプルビン
５３ 第３回収サンプルビン
５４ 切替弁
６０ 再分離用還流部
６１ 貯蔵サンプルビン
６４ センサ
７０ 制御部

Claims (6)

1. 基板と、該基板に設けられた流路とを備え、該流路に試料液を流通させて上記試料液中の目的物質をクロマトグラフィーによって分離するために用いるクロマトグラフィー用チップであって、
   該流路が、
   流路断面積を相対的に大きく形成された、吸着剤を充填するためのプール部と、
   該プール部に上記試料液を導入する導入流路部と、
   該プール部から上記試料液を送出する送出流路部と、
   該プール部内の該送出流路部よりも上流側に形成され、該吸着剤が該プール部から流出することを防止する流出防止部とを備える
   ことを特徴とする、クロマトグラフィー用チップ。
2. 該プール部内に、該吸着剤を有する
   ことを特徴とする、請求項１記載のクロマトグラフィー用チップ。
3. 該流出防止部が、該基板との間で該吸着剤の粒径よりも小さい隙間を形成するよう該プール部内面が凸に形成されたダム部を備える
   ことを特徴とする、請求項１又は請求項２に記載のクロマトグラフィー用チップ。
4. 該導入流路部が、該吸着剤の粒径よりも大きい径を有して形成されている
   ことを特徴とする、請求項１〜３のいずれか１項に記載のクロマトグラフィー用チップ。
5. 該プール部は、幅が０．１ｍｍ以上３０ｍｍ以下であり、深さが１００μｍ以上５００μｍ以下である
   ことを特徴とする、請求項１〜４のいずれか１項に記載のクロマトグラフィー用チップ。
6. 請求項１〜５のいずれか１項に記載のクロマトグラフィー用チップの流路に試料液を流通させる吸着工程と、
   上記流路に、溶出液を流通させる溶出工程とを有する
   ことを特徴とする、クロマトグラフィー用チップを用いた分離方法。

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