JP2007057246A - 蛋白質の安定化方法、蛋白質安定化剤および蛋白質含有溶液 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】 蛋白質の安定化方法にもちいるペプチドまたはその塩は、N末端からβ−アラニン、オルニチンの順、もしくはN末端からオルニチン、オルニチンの順でペプチド結合した配列を有するペプチドまたはその塩であり、そのいずれかを、蛋白質もしくは蛋白質結合担体の少なくともいずれか一方を含む試薬組成物に共存させることにより、蛋白質の安定化作用を得る。たとえばβ−アラニン、オルニチンの順でペプチド結合したジペプチド、もしくはオルニチン、オルニチンの順でペプチド結合したジペプチドもしくはそれらの塩、または、β−アラニン、オルニチン、オルニチンの順でペプチド結合したトリペプチドもしくはその塩を、いずれも好適に用いることができる。
【選択図】 なし
Description
(2) N末端からβ−アラニン、オルニチンの順、もしくはN末端からオルニチン、オルニチンの順でペプチド結合した配列を有するペプチドまたはその塩からなる、蛋白質安定化剤。
(3) β−アラニン、オルニチンの順でペプチド結合したジペプチド、もしくはオルニチン、オルニチンの順でペプチド結合したジペプチドまたはその塩からなる、蛋白質安定化剤。
(4) N末端からβ−アラニン、オルニチンの順、もしくはN末端からオルニチン、オルニチンの順でペプチド結合した配列を有するペプチドまたはその塩を、蛋白質もしくは蛋白質結合担体の少なくともいずれか一方を含む試薬組成物に共存させてなることを特徴とする、蛋白質含有溶液。
(5) (4)に記載の蛋白質含有溶液を用いてなる、生体成分測定用試薬。
(6) (4)に記載の蛋白質含有溶液を用いてなる、生体成分測定のために用いる標準液。
まず、本発明の蛋白質の安定化方法にもちいるペプチドまたはその塩は、N末端からβ−アラニン、オルニチンの順、もしくはN末端からオルニチン、オルニチンの順でペプチド結合した配列を有するペプチドまたはその塩であり、そのいずれかを、蛋白質もしくは蛋白質結合担体の少なくともいずれか一方を含む試薬組成物に共存させることにより、蛋白質の安定化作用を得るものである。
実施例1.蛋白質の凝集抑制効果(トリペプチド)
50mMリン酸緩衝液(pH7.1)にニワトリリゾチーム(Sigma社)を溶解し、1mg/mlの蛋白質溶液を調製した。この溶液に、上記特許文献4で最も高い凝集抑制効果を示したアルギニンエチルエステルと、本発明に係るN末端からβ−アラニン、オルニチン、オルニチンの順でペプチド結合したトリペプチド(以下β-Ala-Orn-Ornと略す)を、それぞれの濃度が20mMあるいは60mMになるように添加し、98℃で10分、20分、30分加熱処理した。上記試料を添加しない蛋白質溶液も同様に加熱処理し無添加区分とした。加熱処理後15,000rpmで20分間遠心分離(HIMAC CR15T:日立製作所)し、得られた上清を蒸留水で10倍希釈した溶液について、分光光度計(U-3310:日立製作所)を用い、波長280nmでの吸光度を測定し、溶液中に残存する蛋白質量を求めた。
50mMリン酸緩衝液(pH7.1)にニワトリリゾチーム(Sigma社)を溶解し、1mg/mlの蛋白質溶液を調製した。この溶液に、アルギニンエチルエステルと、本発明に係るβ-Ala-Orn-Ornを、それぞれの濃度が20mMあるいは60mMになるように添加し、98℃で10分、20分、30分加熱処理した。上記試料を添加しない蛋白質溶液も同様に加熱処理し無添加区分とした。次に0.5mg/mlのMicrococcus lysodeikticus(Sigma社)溶液(100mMリン酸緩衝液、pH6.5)2mlに、加熱処理後の蛋白質溶液10mlをそれぞれ添加し、分光光度計(U-3310:日立製作所)を用い、波長600nmの吸光度にてリゾチーム活性を測定した。
さらに、比較のために、ポリアミンの1種であるスペルミンと、トリペプチド(β-Ala-Orn-Orn)の一部を構成するジペプチド(β-Ala-Orn、Orn-Orn)について同様に凝集変性率および残存酵素活性を検討した。
表4に、実施例3における蛋白質の加熱処理による残存酵素活性の変化を示す。残存酵素活性の変化は、加熱前の蛋白質溶液の酵素活性を100%として示したものである。
Claims (6)
- N末端からβ−アラニン、オルニチンの順、もしくはN末端からオルニチン、オルニチンの順でペプチド結合した配列を有するペプチドまたはその塩を、蛋白質もしくは蛋白質結合担体の少なくともいずれか一方を含む試薬組成物に共存させることを特徴とする、蛋白質の安定化方法。
- N末端からβ−アラニン、オルニチンの順、もしくはN末端からオルニチン、オルニチンの順でペプチド結合した配列を有するペプチドまたはその塩からなる、蛋白質安定化剤。
- β−アラニン、オルニチンの順でペプチド結合したジペプチド、もしくはオルニチン、オルニチンの順でペプチド結合したジペプチドまたはその塩からなる、蛋白質安定化剤。
- N末端からβ−アラニン、オルニチンの順、もしくはN末端からオルニチン、オルニチンの順でペプチド結合した配列を有するペプチドまたはその塩を、蛋白質もしくは蛋白質結合担体の少なくともいずれか一方を含む試薬組成物に共存させてなることを特徴とする、蛋白質含有溶液。
- 請求項4に記載の蛋白質含有溶液を用いてなる、生体成分測定用試薬。
- 請求項4に記載の蛋白質含有溶液を用いてなる、生体成分測定のために用いる標準液。
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