JP2007014256A - 微生物数迅速測定用食品試料の前処理方法 - Google Patents
微生物数迅速測定用食品試料の前処理方法 Download PDFInfo
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Abstract
【解決手段】 食品中の微生物数の迅速測定に供する食品試料を、下記(1)〜(5)の工程により前処理する。
(1)液状の食品試料を孔径3.0μm〜5.0μmの多孔性フィルムからなるフィルタに通す工程
(2)上記工程(1)で得られる濾過液を孔径0.8μm〜2.0μmの多孔性フィルムからなるフィルタに通す工程
(3)上記工程(2)で得られる濾過液を孔径0.2μm〜0.6μmの多孔性フィルムからなるフィルタに通す工程
(4)上記工程(2)および(3)で得られる残渣を回収する工程
(5)上記工程(4)で回収した残渣を食品試料として迅速測定に供する工程
【選択図】 なし
Description
生菌総数の測定法は、一般的には、平板法と呼ばれる、標準寒天培地を用いて35℃、48〜72時間、有酸素 (好気性) の条件で培養して得られる微生物の総集落数をもって把握する方法が用いられている。
しかし、この方法は、微生物の増殖をモニターする試験であるため、検査に要する時間が長く、惣菜などの腐敗し易く、製造直後に出荷する食品については、汚染が発生した場合に迅速な対応が取れないと言う欠点があった。
ルシフェールHSセット(キッコーマン株式会社製)パンフレット
(1)液状の食品試料を孔径3.0μm〜5.0μmの多孔性フィルムからなるフィルタに通す工程
(2)上記工程(1)で得られる濾過液を孔径0.8μm〜2.0μmの多孔性フィルムからなるフィルタに通す工程
(3)上記工程(2)で得られる濾過液を孔径0.2μm〜0.6μmの多孔性フィルムからなるフィルタに通す工程
(4)上記工程(2)および(3)で得られる残渣を回収する工程
(5)上記工程(4)で回収した残渣を食品試料として迅速測定に供する工程
本発明において微生物数の測定対象の食品としては、その種類が制限されるものではないが、本発明で前処理される食品試料は、液状である必要がある。固形食品においては、該食品試料として、例えば、固形食品に滅菌蒸留水などを添加した後、ストマッカー(登録商標、宝産業株式会社製の均質化機)やホモジナイザーなどでホモジナイズした懸濁液を調製する。該懸濁液中の固形物濃度は、1〜50質量%程度とするとよく、より好ましくは5〜20質量%である。
液状食品においては、そのまま上記食品試料として用いてもよく、必要に応じて適宜希釈して用いてもよい。
上記工程(1)で用いられるフィルタは、孔径3.0μm〜5.0μmの多孔性フィルムからなるフィルタであり、上記工程(2)で用いられるフィルタは、孔径0.8μm〜2.0μmの多孔性フィルムからなるフィルタであり、上記工程(3)で用いられるフィルタは、孔径0.2μm〜0.6μmの多孔性フィルムからなるフィルタである。
これらの多孔性フィルムの材質は特に制限されないが、厚みは、好ましくは6μm〜11μmである。
斯かる多孔性フィルムからなるフィルタとしては、市販のトラックエッチドメンブレンフィルタ(以下、TEフィルタと称する)を用いることができ、例えば、日本ミリポア社製のアイソポア(登録商標)TEフィルタを好適に用いることができる。
濾過方法としては、加圧法、吸引法、遠心濾過法などが用いられるが、特に制限はない。
上記工程(4)における上記残渣の回収は、フィルタ上の残渣に微生物溶解液を注入し、微生物中のATPを溶出させ、ATP抽出液として残渣を回収することが好ましい。
ほうれん草白和え10gに90mlの0.1%ペプトン水を加え、ストマッカー(登録商標、宝産業株式会社製の均質化機)により処理し、10%懸濁液を調製した。該懸濁液を、4℃で表1に示す期間保管し、 微生物を増殖せしめたものを試料液として用いた。各試料液を滅菌蒸留水で10倍に希釈し、 この希釈液10mlを孔径3μmの市販のTEフィルタ(日本ミリポア社製 ISOPORE(R) TSTPフィルタ)に通し、 その濾過液全量を孔径1.2μmの市販のTEフィルタ(日本ミリポア社製 ISOPORE(R) RTTPフィルタ)に通した。さらにその濾過液全量を孔径0.2μmの市販のTEフィルタ(日本ミリポア社製 ISOPORE(R) GTTPフィルタ)に通した。これらのTEフィルタによる濾過方法は加圧法による。
上記試料液を通した孔径1.2μmのTEフィルタおよび孔径0.2μmのTEフィルタの上部にルシフェール250 プラスキット(キッコーマン株式会杜製) のATP消去酵素液1mlを無加圧で注入し、30分間室温で処理した後、上部より注射筒で空気を送り込みATP消去酵素液を除去した。次に、同様の操作で上記キット付属のATP抽出液1mlを上記TEフィルタの上部に注入し、20秒間攪拌処理後、同様に注射筒で空気を送り込みATP抽出液を試験管に回収した。回収したATP抽出液は、上記キット付属の発光試薬を用いルミテスターC-100 (キッコーマン株式会社製)にてATP発光量を測定した。また、TEフィルタに通す前の試料液の生菌数を平板培養法にて測定した。
これらの測定結果を表1に示す。また、それぞれの生菌数と発光量の相関を評価した結果を図1に示す。
Claims (3)
- 食品中の微生物数の迅速測定に供する食品試料の前処理方法であって、下記(1)〜(5)の工程を有することを特徴とする、微生物数迅速測定用食品試料の前処理方法。
(1)液状の食品試料を孔径3.0μm〜5.0μmの多孔性フィルムからなるフィルタに通す工程
(2)上記工程(1)で得られる濾過液を孔径0.8μm〜2.0μmの多孔性フィルムからなるフィルタに通す工程
(3)上記工程(2)で得られる濾過液を孔径0.2μm〜0.6μmの多孔性フィルムからなるフィルタに通す工程
(4)上記工程(2)および(3)で得られる残渣を回収する工程
(5)上記工程(4)で回収した残渣を食品試料として迅速測定に供する工程 - 微生物数の迅速測定方法が、ATP法である、請求項1に記載の前処理方法。
- 上記工程(4)において、フィルタ上の残渣に微生物溶解液を注入し、微生物中のATPを溶出させ、ATP抽出液として残渣を回収する、請求項1または2に記載の前処理方法。
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