JP2006522930A - 焦電または圧電変換器を備えた光化学感知装置 - Google Patents
焦電または圧電変換器を備えた光化学感知装置 Download PDFInfo
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Abstract
Description
図4は(a)圧電膜に付着した標識抗体および(b)溶液中の標識抗体の存在を検出する、2回の原理検証実験の結果を示している。2回の実験をポリスチレン被覆圧電膜の表面上に存在する反応ウェルで行った。第一実験(a)では、リン酸緩衝液(pH7.2、100mM)中金標識抗西洋ワサビペルオキシダーゼ(HRP)溶液(5μg/mL、全250ng)50μLを反応ウェルへ加えて、1時間インキュベートし、次いですすぎ、乾燥させた。第二実験(b)では、ポリスチレン膜の表面を牛血清アルブミン(1%)およびTween(RTM)20(0.5%)の溶液でインキュベートにより遮蔽し、次いですすぎ、乾燥させた。
ウサギ抗西洋ワサビペルオキシダーゼ(HRP)免疫グロブリンG(Sigma cat.No.P7899)(IgG)のpH7.2 100mMリン酸緩衝液中1:30希釈液30μLを反応ウェル中室温で1時間インキュベートし、ポリスチレンの表面に抗体を吸着させた。次いで溶液をすすぎ、リン酸緩衝液(30μL)中牛血清アルブミン(1%)およびTween(RTM)20(0.05%)で処理して、ポリスチレン表面上の残留吸着部位を遮蔽した。ウェルを脱イオン水ですすぎ、乾燥させた。次いで、西洋ワサビペルオキシダーゼ溶液(100mMリン酸緩衝液中125μg/mL)30μLを反応ウェルへ加え、1時間インキュベートし、次いですすいだ。金標識ヤギ(Fab′)2抗西洋ワサビペルオキシダーゼ(British Biocell)(100mMリン酸緩衝液中1:10希釈)30μLを室温で1時間かけて加えた。次いで、ウェルを脱イオン水ですすいだ。次いで、銀エンハンサー溶液(使用直前に前混合された溶液A20μLおよび溶液B20μLからなるSigma SE-100)を反応ウェルへ加え、センサーの表面上における金属銀染色の展開を、高エネルギー青色LED(470nmで発光する)からの断続光(10Hz)を用いたセンサー膜の照射によりモニターした。センサーに生じた電圧をロックイン増幅器を用いて測定し、次いで任意のデジタルシグナルへ変換し、PCに保管する。
上記例2で記載されたとおりに反応を行ったが、但しセンサーの表面にウサギ抗HRPを吸着させる初期ステップは省略した。
上記例2で記載されたとおりに反応を行ったが、但し西洋ワサビペルオキシダーゼとのインキュベートステップは省略した。
上記例2で記載されたとおりに反応を行ったが、但し金標識ヤギ(Fab′)2抗西洋ワサビペルオキシダーゼ抗体とのインキュベートステップは省略した。
ウサギ抗西洋ワサビペルオキシダーゼ(HRP)免疫グロブリンG(Sigma cat.No.P7899)(IgG)(pH7.2 100mMリン酸緩衝液中1:30希釈液30μL)を2個の反応ウェル中室温で1時間インキュベートし、ポリスチレンの表面に抗体を吸着させた。次いで溶液をすすぎ、リン酸緩衝液(30μL)中牛血清アルブミン(1%)およびTween(RTM)20(0.05%)で処理して、ポリスチレン表面上の残留吸着部位を遮蔽した。ウェルを脱イオン水ですすぎ、乾燥させた。次いで、西洋ワサビペルオキシダーゼ溶液(100mMリン酸緩衝液中125μg/mL)10μLを反応ウェル1へ加え、一方リン酸緩衝液単独10μLを反応ウェル2へ加えた。これらを15分間インキュベートし、次いで金標識ヤギ(Fab′)2抗西洋ワサビペルオキシダーゼ(British Biocell)(100mMリン酸緩衝液中1:10希釈)30μLを室温で15分間かけてウェル1および2の双方へ加えた。次いで、銀エンハンサー溶液(使用直前に前混合された溶液A20μLおよび溶液B20μLからなるSigma SE-100)を双方の反応ウェルへ加え、センサーの表面上における金属銀染色の展開を、前記技術を用いてモニターした。
捕捉抗体として変換器の表面に吸着されたウサギ抗HRP IgG、標的被検体としてHRPおよびリポーター抗体として金標識ヤギ抗HRP IgGを用いて、一連の実験を例2で記載されたとおりに行った。5つの異なるHRP濃度(100ng/mL、10ng/mL、1ng/mL、100pg/mLおよび1pg/mL)を用いた。これは、3ng、300pg、30pg、3pgおよび30fgに当たるHRPの総量に相当する。銀増強ステップを上記のように行った。図6は、反応に用いられた被検体の量にシグナルが依存していることを示している。
この例では、変換器をシリコーン層で被覆する。変換器で検出されたシグナルは、シリコーン層の厚さおよび弾性の双方に依存している。シリコーン層を様々な厚さで調製し、Sudan Black B色素のスポットをピペットで(エタノール中)色素溶液の添加によりシリコーン層上に置いた。3つの異なる層厚(200、133および79μm)および3つの異なる全色素量(10mmol dm−3色素溶液0.1、1.0または2.5μLの添加による)を用いて、全部で9回の測定を行った。図7は、相関遅れが10msのとき(全部で3つの色素量について)層厚が薄くなると、シグナルが有意に上昇することを示している。
Claims (29)
- 一連の電磁線パルスを生じるように適合された線源と、
物質により生じたエネルギーを電気シグナルへ変換可能な焦電または圧電素子および電極を有した変換器と、
変換器により生じた電気シグナルを検出可能な検出器とを備えてなり、
該検出器が、線源からの電磁線の各パルスと電気シグナルの発生との時間遅れを測定するように適合されている、電磁線の照射で物質の非放射性崩壊により生じたエネルギーを検出するための装置。 - 物質が被検体または被検体の複合体もしくは誘導体であり、装置がサンプル中の被検体を検出するために用いられ、装置が更に変換器の近くに少なくとも1種の試薬を含んでなり、被検体または被検体の複合体もしくは誘導体と結合可能な結合部位を試薬が有し、被検体または被検体の複合体もしくは誘導体が線源で生じた電磁線を吸収してエネルギーを発生でき、使用時に、エネルギーが変換器で電気シグナルへ変換されて、検出器で検出され、電磁線の各パルスと電気シグナルの発生との時間遅れが、変換器の表面から異なる距離で1箇所以上に存在する被検体の位置に対応している、請求項1に記載の装置。
- 試薬が抗体であり、被検体が抗原である、請求項2に記載の装置。
- 被検体の複合体または誘導体が、標識抗体との複合体である、請求項3に記載の装置。
- 被検体が標識抗原であり、検出器で検出される電気シグナルがサンプル中未標識抗原の存在に反比例する、請求項3に記載の装置。
- 標識抗体または抗原が、色素分子、金粒子、着色ポリマー粒子、蛍光分子、酵素、赤血球、ヘモグロビン分子、磁気粒子および炭素粒子から選択される標識で標識されている、請求項4または5に記載の装置。
- 試薬が第一核酸であり、被検体が第二核酸であり、第一および第二核酸が相補的である、請求項2に記載の装置。
- 試薬がアビジンまたはその誘導体を含有し、被検体がビオチンまたはその誘導体を含有しているか、またはその逆である、請求項2に記載の装置。
- 更に、変換器の近くに少なくとも1種の物質を含んでなり、該物質が線源で生じた電磁線を吸収してエネルギーを発生可能なものであって、使用時に、発生したエネルギーが変換器で電気シグナルへ変換されて、検出器で検出され、電磁線の各パルスと電気シグナルの発生との時間遅れ、および/または一定時間遅れにおけるシグナルの大きさが、反応の進行につれて変化することからなる、反応体間における反応の進行をモニターするために適した、請求項1に記載の装置。
- 反応が重合または解重合反応である、請求項9に記載の装置。
- 時間遅れが少なくとも5ミリ秒、好ましくは少なくとも10ミリ秒である、請求項1〜10のいずれか一項に記載の装置。
- 時間遅れが500ミリ秒以下、好ましくは250ミリ秒以下、更に好ましくは150ミリ秒以下である、請求項1〜11のいずれか一項に記載の装置。
- 電磁線が光、好ましくは可視光である、請求項1〜12のいずれか一項に記載の装置。
- 試薬が変換器に吸着されている、請求項1〜13のいずれか一項に記載の装置。
- 請求項2〜8のいずれか一項に記載された被検体あるいは請求項9または10に記載された反応体が、液体中に溶解または懸濁されている、請求項2〜13のいずれか一項に記載の装置。
- 変換器と接触させて液体を入れるためのウェルを更に含んでなる、請求項14に記載の装置。
- 1種以上の追加試薬を貯蔵するためのチャンバーを更に含んでなる、請求項1〜16のいずれか一項に記載の装置。
- 追加試薬が、後で形成される被検体の複合体または誘導体を産生するための標識抗体である、請求項16に記載の装置。
- 一連の電磁線パルスで物質を照射してエネルギーを発生させ、
エネルギーの変化を電気シグナルへ変換可能な焦電または圧電素子および電極を有した変換器を用いて、エネルギーの変化を電気シグナルへ変換させ、
変換器により生じた電気シグナルを検出し、および
線源からの電磁線の各パルスと電気シグナルの発生との時間遅れを測定する
工程を含んでなる、電磁線の照射で物質の非放射性崩壊により生じたエネルギーを検出するための方法。 - エネルギーの変化を電気シグナルへ変換可能な焦電または圧電素子および電極を有した変換器へサンプルを曝し、変換器がその近くに少なくとも1種の試薬を有し、被検体または被検体の複合体もしくは誘導体と結合可能な結合部位を試薬が有し、被検体または被検体の複合体もしくは誘導体が線源で生じた電磁線を吸収して、非放射性崩壊によるエネルギーを発生可能なものであって、
一連の電磁線パルスで試薬を照射し、
生じたエネルギーを電気シグナルへ変換し、
電気シグナルおよび線源からの電磁線の各パルスと電気シグナルの発生との時間遅れを検出する工程を含んでなり、
電磁線の各パルスと電気シグナルの発生との時間遅れが、変換器の表面から異なる距離で1箇所以上に存在する被検体の位置に対応している、サンプル中の被検体を検出するための方法。 - 試薬が抗体であり、被検体が抗原である、請求項20に記載の方法。
- 被検体の複合体または誘導体が、標識抗体との複合体である、請求項21に記載の方法。
- 被検体が標識抗原であり、検出器で検出される電気シグナルがサンプル中の未標識抗原の存在に反比例する、請求項21に記載の方法。
- 標識抗体または抗原が、色素分子、金粒子、着色ポリマー粒子、蛍光分子、酵素、赤血球、ヘモグロビン分子、磁気粒子および炭素粒子から選択される標識で標識されている、請求項22または23に記載の方法。
- 試薬が第一核酸であり、被検体が第二核酸であり、第一および第二核酸が相補的である、請求項20に記載の方法。
- 試薬がアビジンまたはその誘導体を含有し、被検体がビオチンまたはその誘導体を含有しているか、またはその逆である、請求項20に記載の方法。
- サンプルを変換器へ曝す工程と試薬を照射する工程との間、前記方法が、変換器からサンプルを除去することなく行われる、請求項20〜26のいずれか一項に記載の方法。
- エネルギーの変化を電気シグナルへ変換可能な焦電または圧電素子および電極を有した変換器へ反応媒体中の反応体を曝し、変換器が該変換器の近くに少なくとも1種の物質を有し、該物質が線源で生じた電磁線を吸収して非放射性崩壊によるエネルギーを発生可能なものであって、
一連の電磁線パルスで該物質を照射し、
生じたエネルギーを電気シグナルへ変換し、
電気シグナルおよび線源からの電磁線の各パルスと電気シグナルの発生との時間遅れを検出する工程を含んでなり、
電磁線の各パルスと電気シグナルの発生との時間遅れ、および/または一定時間遅れにおけるシグナルの大きさが、反応の進行につれて変化することからなる、反応の進行をモニターするための方法。 - 反応が重合または解重合反応である、請求項28に記載の方法。
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