JP2006520318A - 3量体サイトカイン用の3量体結合タンパク質 - Google Patents
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Abstract
Description
トリップE.coli発現プラスミド及び3量体サイトカイン結合剤の産生のためのファージミドの設計と構築
ファージミド
ファージミドpsktripBは、標準的な手順を用いてアマーシャム・ファルマシア・バイオテック(Amersham Pharmacia Biotech)により供給されたSfiI及びNotIプレカットベクター、pCANTAB5E(コード番号:27−9401−01)へと、オリゴヌクレオチドプライマC−sfikpn−TRI(配列番号1)及びN−sfikpn−TRI(配列番号2)を用いて発現プラスミドpTtripbから増幅されたSfiI及びNotI制限DNAフラグメントsktripBを連結させることによって構築された。SktripBインサートのヌクレオチド配列は、配列番号3として示されている。
発現プラスミドpT7H6−bktripBは、標準的な手順を用いて、BamHI及びHindI制限プラスミドpT7H6へと、オリゴヌクレオチドプライマC−bamkpn−TRI(配列番号6)及びN−bamkpn−TRI(配列番号7)を用いて発現プラスミドpTtripbから増幅されたBamHI及びHindI制限DNAフラグメントbktripBを連結させることによって構築された。bktripBのヌクレオチド配列は、配列番号8として示されている。
TNFRIIフラグメントを用いた3量体TNF結合剤の設計と構築
テトラネクチンから誘導された3量体化ドメインTripBに基づく3量体TNF結合剤の構築のためには、TNFレセプタTNFRSF1B(TNFRII)のフラグメント及びサブユニットが使用された。設計及びクローニングは以下で概略的と説明されている。
ファージミドベクターpD1D2tripBは、標準的な手順を用いてSfiI及びKpnIカットベクターpsktripBへと、(オリゴヌクレオチドプライマD1−rev(配列番号11)及びD2kpn−fo(配列番号12)を用いて)ヒト骨髄及びヒト白血球(クローンテック・ラボラトリーズ・インク(Clontech Laboratories,Inc)、カタログ番号7181−1及び7182−1)の混合物から単離された、cDNAから増幅されたSfiI及びKpnI制限DNAフラグメントD1D2を連結させることによって構築される。D1D2の結果として得られたヌクレオチド配列の概要は、配列番号13として示されている。
発現ベクターpT7H6FXD1D2tripBは、標準的な手順を用いて、BamHI及びKpnIカットベクター、PT7H6−bktripBへと、(オリゴヌクレオチドプライマbamD1−rev(配列番号31)及びD2kpn−fo(配列番号12)を用いて)ヒト骨髄及びヒト白血球(クローンテック・ラボラトリーズ・インク(Clontech Laboratories,Inc)、カタログ番号7181−1及び7182−1)の混合物から単離された、cDNAから増幅されたBamHI及びKpnI制限DNAフラグメントFXD1D2を連結させることによって構築される。FXD1D2の結果として得られたヌクレオチド配列の概要は、配列番号32として示されている。
3量体化TNFRIIフラグメントAD1D4−GSS−I10−TripBの産生、再折畳み及び精製
(TNFRII誘導体AD1D4−GSS−I10−TripBを発現する)T7 RNAポリメラーゼ依存性発現プラスミドpT7D1D4GSSl10の構築については、上記実施例2の中で記述されている。
3量体化されたTNFRIIフラグメントAD1D4−GSS−l10の生物活性
実施例3中に記述されている通りに産生された3量体化されたTNFRIIフラグメントAD1D4−GSS−110の生物活性を、TNFアルファ媒介細胞毒性の阻害を決定するためL929細胞検定において測定した。
D2E7抗体フラグメントを用いた3量体TNF結合剤の設計、構築及び産生
ヒト化抗体D2E7の1本鎖抗体可変領域フラグメント(scFv)が、TNFを結合する能力を有する3量体ポリペプチドの構築における結合剤として選択される。3量体結合剤は、米国特許第6,090,382号明細書中に開示された配列に基づいて、D2E7のVH及びVLドメインを増幅することによって構築可能である。
発現ベクターpT7H6FXD2E7tripBは、2工程で構築される。第1工程は、pT7H6FX(D2E7VH)tripBの構築である。このベクターは、BamHIKpnIでカットされたpT7H6bktripBベクターへと、(オリゴヌクレオチドプライマFXVH(配列番号45)及びVHBamKpn(配列番号46)を用いて)D2E7の配列を含むDNAから増幅されたBglII及びKpnI制限DNAフラグメントFX(D7E2VH)を連結させることによって構築される。第2工程は、BamHIKpnIでカットされたpT7H6FX(D2E7VH)tripBへと、(オリゴヌクレオチドプライマG4SVL(配列番号47)及びVLkpn(配列番号48)を用いて)D2E7の配列を含むDNAから増幅されたBamHIKpnI制限DNAフラグメントG4SVLを連結させることによるpT7H6FXD2E7tripBの構築である。FXD2E7のヌクレオチド配列は配列番号49として示されている。
発現ベクターpT7H6FXD2E7G4StripBは、2工程で構築される。第1工程は、BamHIKpnIでカットされたpT7H6bktripBベクターへと、(オリゴヌクレオチドプライマFXVH(配列番号45)及びVHBamKpn(配列番号46)を用いて)D2E7の配列を含むDNAから増幅されたBglII及びKpnI制限DNAフラグメントFX(D7E2VH)を連結させることによるpT7H6FX(D2E7VH)tripBの構築である。第2工程は、BamHIKpnIでカットされたpT7H6FX(D2E7VH)tripBへと、(オリゴヌクレオチドプライマG4SVL(配列番号47)及びVLG4Skpn(配列番号50)を用いて)D2E7の配列を含むDNAから増幅されたBamHIKpnI制限DNAフラグメントG4SVLを連結させることによるpT7H6FXD2E7tripBの構築である。結果として得られるFXD2E7G4Sのヌクレオチド配列は配列番号51として示されている。
発現ベクターpT76HFXTripAGSD2E7は、標準的な手順を用いてBamHI及びHindIIIでカットされたベクター、pT76HFXtripa(ローレントセン、RH(Lorentsen,RH.)ら、Biochem J.;347:83−87、2000)へと、(オリゴヌクレオチドプライマbclVH(配列番号52)及びVLhind(配列番号53)を用いて)pT7H6FXD2E7G4StripBから増幅されたBclI及びHindIII制限DNAフラグメントを連結することによって構築される。結果として得られるGSD2E7のヌクレオチド配列は、配列番号54として示されている。
発現ベクターpT76HFXTripAG4SD2E7は、標準的な手順を用いてBamHI及びHindIIIでカットされたベクター、pT76HFXtripa(ローレントセン、RH(Lorentsen,RH.)ら、Biochem J.;347:83−87、2000)へと、(オリゴヌクレオチドプライマbclGASVH(配列番号55)及びVLhind(配列番号53)を用いて)pT7H6FXD2E7G4StripBから増幅されたBclI及びHindIII制限DNAフラグメントを連結することによって構築される。結果として得られるG4SD2E7のヌクレオチド配列は、配列番号56として示されている。
TNFRSF13Bレセプタフラグメントを用いた3量体APRIL結合剤の設計及び構築
APRILレセプタTNFRSF13Bは、3量体サイトカインAPRILに対する3量体結合剤の構築のために使用され、テトラネクチンから誘導された3量体化ドメインTripBに基づいている。異なるリンカーでのこのような結合剤の設計及びクローニングを以下で概略説明する。
発現ベクターpT7H6FXTNFRS13B6tripBは、2工程で構築される。第1工程は、標準的な手順を用いてBamHI及びKpnIでカットされたベクターpT7H6−bktripBへと、(オリゴヌクレオチドプライマbgliiFX?TNFRSF13B(配列番号57)及び?TNFRSF13Bkpn(配列番号58)を用いて)ヒト骨髄及びヒト白血球(クローンテック・ラボラトリーズ・インク(Clontech Laboratories,Inc)、カタログ番号7181−1及び7182−1)の混合物から単離された、cDNAから増幅されたBglII及びKpnI制限DNAフラグメントFX?TNFRSF13Bを連結させることによって、pT7H6FX?TNFSF13Bを構築することから成る。第2工程は、標準的な手順を用いて、KpnIでカットされたpT7H6FX?TNFSF13Bベクターへと、(オリゴヌクレオチドプライマkpn?TNFSF13B(配列番号59)及び?TNFSF13B6kpn(配列番号60)を用いて)ヒト骨髄及びヒト白血球(クローンテック・ラボラトリーズ・インク(Clontech Laboratories,Inc)、カタログ番号7181−1及び7182−1)の混合物から単離された、cDNAから増幅されたKpnI制限DNAフラグメント?TNFRSF13B6を連結させることによって、最終的発現ベクター、pT7H6FXTNFRSF13B6tripBを構築することから成る。FXTNFRSF13B6の結果として得られたヌクレオチド配列は、配列番号61として示されている。
発現ベクターpT7H6FXTNFRS13B10tripBは、2工程で構築される。第1工程は、標準的な手順を用いてBamHI及びKpnIでカットされたベクターpT7H6−bktripBへと、(オリゴヌクレオチドプライマbgliiFX?TNFRSF13B(配列番号57)及び?TNFRSF13Bkpn(配列番号58)を用いて)ヒト骨髄及びヒト白血球(クローンテック・ラボラトリーズ・インク(Clontech Laboratories,Inc)、カタログ番号7181−1及び7182−1)の混合物から単離された、cDNAから増幅されたBglII及びKpnI制限DNAフラグメントFX?TNFRSF13Bを連結させることによって、pT7H6FX?TNFRSF13Bを構築することから成る。第2工程は、標準的な手順を用いて、KpnIでカットされたpT7H6FX?TNFRSF13Bベクターへと、(オリゴヌクレオチドプライマkpn?TNFSF13B(配列番号59)及び?TNFRSF13B10kpn(配列番号62)を用いて)ヒト骨髄及びヒト白血球(クローンテック・ラボラトリーズ・インク(Clontech Laboratories,Inc)、カタログ番号7181−1及び7182−1)の混合物から単離された、cDNAから増幅されたKpnI制限DNAフラグメント?TNFSF13B10を連結させることによって、最終的発現ベクター、pT7H6FXTNFRSF13B10tripBを構築することから成る。FXTNFRSF13B10の結果として得られたヌクレオチド配列は、配列番号63として示されている。
発現ベクターpT7H6FXTNFRS13B20tripBは、2工程で構築される。第1工程は、標準的な手順を用いてBamHI及びKpnIでカットされたベクターpT7H6−bktripBへと、(オリゴヌクレオチドプライマbgliiFX?TNFRSF13B(配列番号57)及び?TNFRSF13Bkpn(配列番号58)を用いて)ヒト骨髄及びヒト白血球(クローンテック・ラボラトリーズ・インク(Clontech Laboratories,Inc)、カタログ番号7181−1及び7182−1)の混合物から単離された、cDNAから増幅されたBglII及びKpnI制限DNAフラグメントFX?TNFSF13Bを連結させることによって、pT7H6FX?TNFRSFR13Bを構築することから成る。第2工程は、標準的な手順を用いて、KpnIでカットされたpT7H6FX?TNFRSFR13Bベクターへと、(オリゴヌクレオチドプライマkpn?TNFRSF13B(配列番号59)及び?TNFRSF13B20kpn(配列番号64)を用いて)ヒト骨髄及びヒト白血球(クローンテック・ラボラトリーズ・インク(Clontech Laboratories,Inc)、カタログ番号7181−1及び7182−1)の混合物から単離された、cDNAから増幅されたKpnI制限DNAフラグメント?TNFSF13B20を連結させることによって、最終的発現ベクター、pT7H6FXTNFRSF13B20tripBを構築することから成る。FXTNFRSF13B20の結果として得られたヌクレオチド配列は、配列番号65として示されている。
発現ベクターpT7H6FXTNFRS13B30tripBは、2工程で構築される。第1工程は、標準的な手順を用いてBamHI及びKpnIでカットされたベクターPT7H6−bktripBへと、(オリゴヌクレオチドプライマbgliiFX?TNFRSF13B(配列番号57)及び?TNFRSF13Bkpn(配列番号58)を用いて)ヒト骨髄及びヒト白血球(クローンテック・ラボラトリーズ・インク(Clontech Laboratories,Inc)、カタログ番号7181−1及び7182−1)の混合物から単離された、cDNAから増幅されたBglII及びKpnI制限DNAフラグメントFX?TNFRSF13Bを連結させることによって、pT7H6FX?TNFRSF13Bを構築することから成る。第2工程は、標準的な手順を用いて、KpnIでカットされたpT7H6FX?TNFRSF13Bベクターへと、(オリゴヌクレオチドプライマkpn?TNFRSF13B(配列番号59)及び?TNFRSF13B30kpn(配列番号66)を用いて)ヒト骨髄及びヒト白血球(クローンテック・ラボラトリーズ・インク(Clontech Laboratories,Inc)、カタログ番号7181−1及び7182−1)の混合物から単離された、cDNAから増幅されたKpnI制限DNAフラグメント?TNFRSF13B30を連結させることによって、最終的発現ベクター、pT7H6FXTNFRSF13B30tripBを構築することから成る。FXTNFRSF13B30の結果として得られたヌクレオチド配列は、配列番号67として示されている。
発現ベクターpT7H6FXTNFRS13B61tripBは、2工程で構築される。第1工程は、標準的な手順を用いてBamHI及びKpnIでカットされたベクターPT7H6−bktripBへと、(オリゴヌクレオチドプライマbgliiFX?TNFRSF13B(配列番号57)及び?TNFRSF13Bkpn(配列番号58)を用いて)ヒト骨髄及びヒト白血球(クローンテック・ラボラトリーズ・インク(Clontech Laboratories,Inc)、カタログ番号7181−1及び7182−1)の混合物から単離された、cDNAから増幅されたBglII及びKpnI制限DNAフラグメントFX?TNFRSF13Bを連結させることによって、pT7H6FX?TNFRSF13Bを構築することから成る。第2工程は、標準的な手順を用いて、KpnIでカットされたpT7H6FX?TNFRSF13Bベクターへと、(オリゴヌクレオチドプライマkpn?TNFRSF13B(配列番号59)及び?TNFRSF13B61kpn(配列番号68)を用いて)ヒト骨髄及びヒト白血球(クローンテック・ラボラトリーズ・インク(Clontech Laboratories,Inc)、カタログ番号7181−1及び7182−1)の混合物から単離された、cDNAから増幅されたKpnI制限DNAフラグメント?TNFRSF13B61を連結させることによって、最終的発現ベクター、pT7H6FXTNFRSF13B61tripBを構築することから成る。FXTNFRSF13B61の結果として得られたヌクレオチド配列は、配列番号69として示されている。
TNFRSFFn14レセプタフラグメントを用いた3量体TWEAK結合剤の設計及び構築
TWEAKレセプタTNFRSFFn14は、3量体サイトカインTWEAKに対する3量体結合剤の構築のために使用され、テトラネクチンから誘導された3量体化ドメインTripBに基づいている。該結合剤の設計及びクローニングを以下で概略説明する。
TNFRSF13Cレセプタフラグメントを用いた3量体BAFF結合剤の設計及び構築
BAFFレセプタTNFRSF13Bは、3量体サイトカインBAFFに対する3量体結合剤の構築のために使用され、テトラネクチンから誘導された3量体化ドメインTripBに基づいている。該結合剤の設計及びクローニングを以下で概略説明する。
発現ベクターpT7H6FXTNFSF13CtripBは、標準的な手順を用いてBamHI及びKpnIでカットされたベクターPT7H6−bktripBへと、(オリゴヌクレオチドプライマbam13C−rev(配列番号73)及び13Ckpn−fo(配列番号74)を用いて)ヒトのリンパ節(クローンテック・ラボラトリーズ・インク(Clontech Laboratories,Inc)、カタログ番号7164−1)から単離された、cDNAから増幅されたBamHI及びKpnI制限DNAフラグメントFXTNFRSF13Cを連結させることによって構築される。FXTNFRSF13Cの結果として得られるヌクレオチド配列の概要は、配列番号75として示されている。
TNFのための3量体化されたCTLD結合剤の単離及び構築
国際公開第0248189号パンフレット中で以前に開示されているようなテトラネクチン(配列番号96)C型レクチン様ドメイン(CTLD)の足場構造は、3量体サイトカインTNF(TNFアルファ)のための3量体結合単位の単離及び構築のために使用された。結合単位の設計及びクローニングについて以下で概略説明されている。
TNF CTLD結合剤を単離するために、ファージ提示法を使用した。使用したファージ提示ライブラリは、テトラネクチンの1価のCTLDフォーマット(配列番号97)であった。組合せライブラリPhtCTLD−Ib003(国際公開第0248189号パンフレット、実施例5)及び、PhtCTLD−Ib003として必須とされたもののループ1のための2つの付加的なランダム化されたオリゴヌクレオチドすなわち、テトラネクチン(配列番号98)アミノ酸残基位置116−122でランダム化されたTN−lib3−tprev及びTN−1ib2−tprev(配列番号99)及びループ4のための2つの付加的なオリゴヌクレオチドすなわち位置146−149でランダム化されたTN−lib3−tpfo(配列番号100)及び組立て反応内のTN−1ib2−tpfo(配列番号101)を含む。前記ライブラリの変異体、インプットとして約1×1012のファージをそして第1回パニングラウンド内で10μg/ml、第2ラウンドで1μg/mlのビオチニル化TNFを用いて、2回の選択ラウンドを実施した。
TN3−2に対し新しい配列変動を導入することによってTN3−2のTNF親和力を改善できるか否かを調査した。TN3−2突然変異体のライブラリの構築のためには、鋳型としてTN3−2クローンを使用し、オリゴヌクレオチドTN−lib2−tpfo(配列番号101)及びTN−lib3−tpfo(配列番号100)(Lib.TN3−2loop4r)を用いてループ4内で新しいランダム化に付した。該ライブラリ構築は基本的に国際公開第0248189号パンフレット内で記述されている通りに行なった。
親クローンTN3−2の配列は、ループ1(テトラネクチンアミノ酸番号116−122)及びループ4(テトラネクチンアミノ酸番号146〜149)内のテトラネクチンとは異なっていた。TN3−2loop4rライブラリに対する3回の親和力による選択の後、陽性クローンをELISA分析により同定し、48のクローンのうちの45個がTNFアルファに結合することが示された。同定されたTNFアルファ結合クローンとその対応する配列番号のセレクションのうちループ1及びループ4が表4で示されている(TN3−2−B、TN3−2−C、TN3−2−D)。
TNFについての3量体化CTLD結合剤の親和力測定
実施例7に記述されている通りに単離された単量体CTLDTNFアルファ結合剤をコードするDNAインサートを、E.coli pBAD発現ベクター(インビトロゲン社(Invitrogen Co.)USA)内にサブクローニングした。E.coli内で組換え型単量体TNFアルファ結合剤を発現させ、メーカーの指示事項に従って周辺質からこれを精製した。精製された単量体を10mMのトリスpH8.0、150mMのNaCl、2mMのCaCl2の中に透析し後、バイアコア(BiaCore)上で分析した。
スチュディア(Studier)及びモファット(Moffat)、(1986)、Journal of Molecular Biology、189:113−130
ホチュリ、E(Hochuli,E.)、バンワース、W(Bannwarth,W.)、ドベリ、H(Doebeli,H.)、ゲンツ、R(Gentz,R.)及びスチューバ、D(Stueber,D.)、(1988)、Bio/Technology、6:1321−1325
ローレントセン、RH(Lorentsen,RH.)ら、(2000)、Biochemical Journal、347:83−87
Claims (31)
- 3量体サイトカインを結合する能力を有する特異的結合成員を各々含み、かつ3量体化ドメインを各々含む3つの単量体を含む3量体ポリペプチド。
- 前記3量体サイトカインが腫瘍壊死因子リガンドスーパーファミリーの一員である、請求項1に記載の3量体ポリペプチド。
- 前記腫瘍壊死因子リガンドスーパーファミリーの前記成員が、LTA;TNF;LTB;TNFSF4;TNFSF5;TNFSF6;TNFSF7;TNFSF8;TNFSF9;TNFSF10;TNFSF11;TNFSF12;TNFSF13;TNFSF13B;TNFSF14;TNFSF15;及びTNFSF18から成る群の中から選択されている、請求項2に記載の3量体ポリペプチド。
- 前記特異的結合成員が腫瘍壊死因子レセプタスーパーファミリーの一員から誘導されたポリペプチドである、請求項2に記載の3量体ポリペプチド。
- 前記腫瘍壊死因子レセプタスーパーファミリーの前記成員が、TNFRSF1A、TNFRSF1B、LTBR、TNFRSF4、TNFRSF5、TNFRSF6、TNFRSF6B、TNFRSF7、TNFRSF8、TNFRSF9、TNFRSF10A、TNFRSF10B、TNFRSF10C、TNFRSF10D、TNFRSF11A、TNFRSF11B、TNFRSF12、TNFRSF12L、TNFRSF13B、TNFRSF13C、TNFRSF14、TNFRSF Fn14、NGFR、TNFRSF17、TNFRSF18、TNFRSF19、TNFRSF19L、TNFRSF21、TNFRSF22、及びTNFRSF23から成る群の中から選択されている、請求項2に記載の3量体ポリペプチド。
- 前記特異的結合成員がTNFRSF1A(p55TNFレセプタ)から誘導されている、請求項1に記載の3量体ポリペプチド。
- 前記特異的結合成員がTNFRSF1B(p75TNFレセプタ)から誘導されている、請求項1に記載の3量体ポリペプチド。
- 前記特異的結合成員が、TNFRSF1B 1−235(配列番号76)、TNFRSF1B 1−185(配列番号77)、TNFRSF1B 1−163(配列番号78)及びTNFRSF1B 1−142(配列番号79)から成る群の中から選択されたアミノ酸配列を含むポリペプチドである、請求項7に記載の3量体ポリペプチド。
- 前記特異的結合成員が、TNFRSF1B D1D2(配列番号13)、TNFRSF1B D1D2、1/6(配列番号15)、TNFRSF1B D1D2 1/4(配列番号17)、TNFRSF1B D1D2、1/3(配列番号19)、TNFRSF1B D1D2、1/2(配列番号21)、TNFRSF1B D1D4(配列番号23)、TNFRSF1B D2(配列番号25)、TNFRSF1B D2、1/6(配列番号26)、TNFRSF1B D2、1/4(配列番号27)、TNFRSF1B D2、1/3(配列番号28)、TNFRSF1B D2、1/2(配列番号29)及びTNFRSF1B D2D4(配列番号30)から成る群の中から選択されたDNA配列によってコードされたアミノ酸配列を含むポリペプチドである、請求項7に記載の3量体ポリペプチド。
- 前記特異的結合成員が、抗体又は抗体フラグメントである、請求項1に記載の3量体ポリペプチド。
- 前記抗体又は抗体フラグメントが、アミノ酸残基1−18、1−20、1−26、1−30、12−22、22−31、22−40、36−45、49−97、49−98、56−79、58−65、69−97、70−87、76−90、96−105、105−128、108−128、110−127、115−125、117−128、132−157、135−155、136−153、138−149、141−153及び146−157から成る領域の中から選択された少なくとも1つの領域内でヒトTNF(配列番号80)に結合する、請求項10に記載の3量体ポリペプチド。
- 前記抗体又は抗体フラグメントが、MAb 1(ECACC 89080301)、MAb 21(ECACC 90012432)、MAb 25(ECACC 89121401)、MAb 32(ECACC 89080302)、MAb 37(ECACC 89080303)、MAb 42(ECACC 89080304)、MAb 47(ECACC 89121402)、MAb 53(ECACC 90012433)及びMAb 54(ECACC 89083103)又はそのフラグメントの中から選択されている、請求項11に記載の3量体ポリペプチド。
- 前記抗体がD2E7又はそのフラグメントである、請求項10に記載の3量体ポリペプチド。
- 前記抗体がCDP 870又はそのフラグメントである、請求項9に記載の3量体ポリペプチド。
- 前記特異的結合成員が、C型レクチン様ドメイン(CTLD)の足場構造を有するタンパク質である、請求項1に記載の3量体ポリペプチド。
- C型レクチン様ドメインの前記足場構造を有する前記特異的結合成員が、TN3−2−B(配列番号103)、TN3−2−C(配列番号104)、及びTN3−2−D(配列番号105)から成る群の中から選択されている、請求項15に記載の3量体ポリペプチド。
- 前記3量体化ドメインが、テトラネクチンから誘導されている、請求項1に記載の3量体ポリペプチド。
- テトラネクチンから誘導された前記3量体ドメインが、配列番号81の配列と少なくとも68%のアミノ酸配列同一性を有する配列を含む、請求項17に記載の3量体ポリペプチド。
- 前記アミノ酸配列同一性が、少なくとも75%、例えば少なくとも92%を含め少なくとも87%である、請求項18に記載の3量体ポリペプチド。
- テトラネクチンから誘導された前記3量体ドメインが、アミノ配列番号81を含む、請求項17に記載の3量体ポリペプチド。
- TN−2−B(配列番号106)、TN−2−C(配列番号108)、TN−2−D(配列番号107)及びAD1D4−GSS−I10(配列番号109)から成る群の中から選択された、請求項17に記載の3量体ポリペプチド。
- 前記特異的結合成員と前記3量体ドメインの間のリンカーをさらに含む、請求項1に記載の3量体ポリペプチド。
- 請求項1〜22のいずれか1項に記載の前記3量体ポリペプチドを含んで成る医薬組成物。
- 請求項1〜22のいずれか1項に記載の前記3量体ポリペプチド又は請求項23に記載の前記組成物を有効量だけ、腫瘍壊死因子といったような3量体サイトカインにより媒介される病理を有する患者に対し投与することを含む、前記患者の治療方法。
- 前記腫瘍壊死因子により媒介される病理が、関節リウマチ、乾癬、及びクローン病から成る群の中から選択される、請求項24に記載の方法。
- 3量体ポリペプチドサイトカインを結合する能力を有する特異的結合成員を各々含み、かつ3量体化ドメインを各々含む3つの単量体を含む3量体ポリペプチドの調製方法であって、(i)前記3量体ポリペプチドが発現されるような条件下で前記3量体ポリペプチドをコードするベクターで形質転換された宿主を培養する工程、及び(ii)前記3量体ポリペプチドを単離する工程を含む方法。
- 前記特異的結合成員が、TNFRSF1B 1−235(配列番号76)、TNFRSF1B 1−185(配列番号77)、TNFRSF1B 1−163(配列番号78)及びTNFRSF1B 1−142(配列番号79)から成る群の中から選択される1つのアミノ酸配列を含む、請求項26に記載の方法。
- 前記特異的結合成員が、TNFRSF1B D1D2(配列番号13)、TNFRSF1B D1D2、1/6(配列番号15)、TNFRSF1B D1D2 1/4(配列番号17)、TNFRSF1B D1D2、1/3(配列番号19)、TNFRSF1B D1D2、1/2(配列番号21)、TNFRSF1B D1D4(配列番号23)、TNFRSF1B D2(配列番号25)、TNFRSF1B D2、1/6(配列番号26)、TNFRSF1B D2、1/4(配列番号27)、TNFRSF1B D2、1/3(配列番号28)、TNFRSF1B D2、1/2(配列番号29)及びTNFRSF1B D2D4(配列番号30)から成る群の中から選択されたDNA配列によりコードされたアミノ酸配列を含むポリペプチドである、請求項26に記載の方法。
- 請求項1〜22のいずれか1項に記載の3量体ポリペプチドの使用。
- 医薬組成物の調製のための請求項1〜22のいずれか1項に記載の3量体ポリペプチドの使用。
- (i)請求項1に記載の3量体ポリペプチドと試料を接触させる工程、及び(ii)3量体サイトカインに対する前記3量体ポリペプチドの前記結合を検出する工程を含む、前記試料中の前記3量体サイトカインを検出するための検定方法。
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Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
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WO1998056906A1 (en) * | 1997-06-11 | 1998-12-17 | Thoegersen Hans Christian | Trimerising module |
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JPN6009039594, Protein Sci., vol. 6, pages 1511−1515 (1997) * |
JPN6009039595, Oncogene, vol. 21, pages 4257−4265 (Jun. 2002) * |
JPN6009039596, J. Virol. vol. 73, pages 5098−5109 (1999) * |
JPN6010011639, J. Immunol., vol. 151, pages 1548−1561 (1993) * |
JPN6010011641, Cell, vol. 73, pages 431−445 (1993) * |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2011526891A (ja) * | 2008-06-30 | 2011-10-20 | ユニバーシティ オブ ペンシルベニア | Fn14/TRAIL融合タンパク質 |
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