JP2006317220A - 成人t細胞白血病の診断器具 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】TSLC1に対する抗体を有する成人T細胞白血病の診断器具。ここでTSLC1に対する抗体がモノクローナル抗体又はポリクローナル抗体であることが好ましい。これらモノクローナル抗体又はポリクローナル抗体は、反応膜又は不溶性粒子に固相化されていることが好ましい。
【選択図】図1
Description
(1)TSLC1に対する抗体を有する成人T細胞白血病の診断器具。
(2)TSLC1に対応する抗体がモノクローナル抗体又はポリクローナル抗体であることを特徴とする(1)記載の診断器具。
(3)上記モノクローナル抗体又はポリクローナル抗体は、反応膜又は不溶性粒子に固相化されていることを特徴とする(2)記載の診断器具。
(4)上記抗体は、ハイブリドーマ1-10C-6G(受領番号:FERM AP-20529)、3-10C-4D(受領番号:FERM AP-20530)及び4-5F-6F(受領番号:FERM AP-20531)からなる群から選ばれる少なくとも1種のハイブリドーマにより産生されたものであることを特徴とする(1)記載の診断器具。
本発明に使用できる抗体は、TSLC1タンパク質を特異的に認識する抗体(以下、TSLC1抗体と呼ぶ)であれば特に限定されない。なお、TSLC1抗体は、モノクローナル抗体であっても、ポリクローナル抗体であっても良い。TSLC1抗体は、従来公知の手法を用いて作製することができる。TSLC1抗体は、免疫用抗原としてTSLC1タンパク質もしくは、組換えDNA法又は化学合成により調製したTSLC1タンパク質のアミノ酸配列の全部若しくは1〜373番目のアミノ酸配列からなる部分ペプチドを用いて作製することができる。なお、TSLC1タンパク質のアミノ酸配列を配列番号1に示す。
本発明に係る診断器具は、上述したように調整された抗TSLC1モノクローナル抗体又は抗TSLC1ポリクローナル抗体(以下まとめて抗TSLC1抗体と称する)を備え、検体中に含まれるTSLC1タンパク質を測定するものである。TSLC1タンパク質を簡易かつ迅速に測定する方法としては、イムノクロマト法や粒子免疫凝集法を用いることができる。例えば、イムノクロマト法では、抗TSLC1抗体を固相化する反応膜としては、ニトロセルロースが好適に用いられるがタンパク質を吸着する能力を有する担体であれば、膜の種類や材質は問わない。さらに、そのままでは吸着能を有さない反応膜については、アミノ基やカルボキシル基を導入し、化学的に抗TSLC1抗体を結合せしめることにより反応膜として使用することも可能である。また、ラテックス等の微粒子に吸着又は反応せしめた抗体結合粒子を反応膜に封入することも可能である。
先ず、TSLC1の調製は組換えDNA法によりTSLC1タンパク質のアミノ酸配列の1番目から373番目までのアミノ酸をコードした遺伝子を組み込み込んだプラスミド(pET28b/TSLC1)を以下のように調整した。
TSLC1モノクローナル抗体の調整は、実施例1で調製したTSLC1タンパク質溶液を抗原として使用した。マウス腹腔内にTSLC1タンパク質溶液を注射し、2週間間隔で追加免疫した。最終の免疫日から2〜3日後に脾臓細胞とミエローマ細胞P3(P3x63Ag8. 653)とを融合させた。細胞融合処理後の細胞から目的とするハイブリドーマを選択するため、ELISA(酵素連結免疫測定)法により、抗体産生細胞を選抜した。これらの細胞より抗TSLC1抗体産生能が高いクローンとして1-10C-6G、3-10C-4D及び4-5F-6Fを取得した。取得したハイブリドーマ1-10C-6G、3-10C-4D及び4-5F-6Fは、独立行政法人産業技術総合研究所 特許生物寄託センター(〒305-8566 茨城県つくば市東1-1-1 中央第6)に平成17年5月9日付けで、それぞれ受領番号:FERM AP-20529、受領番号:FERM AP-20530及び受領番号:FERM AP-20531として寄託した。
抗TSLC1モノクローナル抗体(クローンNo.1-10C-6Gと4-5F-6F由来)産生ハイブリドーマから得られた培養上清、又は腹水液をそれぞれリン酸緩衝液(0.1mo1e/1、pH7.0)に透析後、プロテインAに吸着せしめ、クエン酸液(50mmole/l,pH2.0)により溶出し、精製抗体液とした。
実施例3で作製した4種類の診断器具を用いて、組み換え大腸菌(pET28b/TSLC1)より調製したTSLC1タンパク質の検出を試みた。その結果を表1に示した。表1から分かるように、実施例3で作製した全ての診断器具において、特異的にTSLC1のみを検出することができ、ベクタープラスミドや、緩衝液、マウス血清とは反応しない事が確認された。
*1:リン酸緩衝食塩液(pH7.2)
*2:プラスミド(pET28b)含有大腸菌(BL21)培養抽出物 1mg/mL
*3:プラスミド(pET28b)含有大腸菌(BL21)培養抽出物 キレートカラム吸着溶離物 1mg/mL
*4:正常マウス IgG 1mg/mL
*5:TSLC1 2μg/mL
実施例3で作製した診断器具を用いてATL患者血清中のTSLC1の有無を測定した。比較対照として、健常者及び、発症前でHTLV-1キャリアの血清も測定した。その結果、表2に示したように健常者は陰性であったが、HTLV-1キャリア及びATL患者はTSLC1タンパク質が陽性反応を示した。また、その検査結果を図2に示した。
実施例6では、実施例5に使用した血清を用いたウエスタンブロッティング法により、TSLC1タンパク質の存在を検討した。
Claims (4)
- TSLC1に対する抗体を有する成人T細胞白血病の診断器具。
- TSLC1に対応する抗体がモノクローナル抗体又はポリクローナル抗体であることを特徴とする請求項1記載の診断器具。
- 上記モノクローナル抗体又はポリクローナル抗体は、反応膜又は不溶性粒子に固相化されていることを特徴とする請求項2記載の診断器具。
- 上記抗体は、ハイブリドーマ1-10C-6G(受領番号:FERM AP-20529)、3-10C-4D(受領番号:FERM AP-20530)及び4-5F-6F(受領番号:FERM AP-20531)からなる群から選ばれる少なくとも1種のハイブリドーマにより産生されたものであることを特徴とする請求項1記載の診断器具。
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