JP2006265115A - IgE抗体産生抑制剤、及びIgE抗体産生抑制方法 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】 杉(Cryptomeria japonica D.Don)の葉抽出物を有効成分とするIgE抗体産生抑制剤である。該IgE抗体産生抑制剤を経口投与するIgE抗体産生抑制方法である。
【選択図】 なし
Description
即ち、本発明は、安全性が高く、経口摂取が容易で、摂取することによりIgE抗体産生のみを特異的に抑制し、炎症やアレルギー疾患の治療又は予防に好適なIgE抗体産生抑制剤、及び該IgE抗体産生抑制方法を提供することを目的とする。
杉の葉抽出物は、例えば、杉の葉茶等の食品が、花粉症予防等に有効であることが知られている(例えば、特開平9−20671号公報、及び特開2001−141号公報等)。しかし、杉の葉抽出物が、IgE抗体産生を特異的に抑制することについては全く知られておらず、本発明者らの新たな知見である。
<1> 杉(Cryptomeria japonica D.Don)の葉抽出物を有効成分とするIgE抗体産生抑制剤である。
<2> 投与後、被投与個体のIgE抗体産生を抑制し、かつIgG抗体産生を抑制しない前記<1>に記載のIgE抗体産生抑制剤である。
<3> I型アレルギー疾患の被投与個体の血清中のIgE抗体価を〔(投与後の抗体価)/(投与前の抗体価)〕≦0.5とし、かつ血清中のIgG抗体価を〔(投与後の抗体価)/(投与前の抗体価)〕≧1.0とする作用を有する前記<2>に記載のIgE抗体産生抑制剤である。
<4> 投与後、被投与個体の炎症組織におけるIL−5の産生量を抑制乃至促進しない前記<1>から<3>のいずれかに記載のIgE抗体産生抑制剤である。
<5> I型アレルギー疾患の被投与個体の炎症組織におけるIL−5量産生量を〔(投与後の量)/(投与前の量)〕=0.9〜1.0とする作用を有する前記<1>から<4>に記載のIgE抗体産生抑制剤である。
<6> 投与後、被投与個体の炎症組織における好酸球の浸潤を抑制する前記<1>から<5>のいずれかに記載のIgE抗体産生抑制剤である。
<7> I型アレルギー疾患の被投与個体の肺胞腔への好酸球の浸潤量を〔(投与後の浸潤量)/(投与前の浸潤量)〕≦0.1とする作用を有する前記<6>に記載のIgE抗体産生抑制剤である。
<11> 前記<1>から<8>のいずれかに記載のIgE産生抑制剤を含むことを特徴とする抗アレルギー剤である。
<12> 喘息の治療及び予防のいずれかに使用される前記<11>に記載の抗アレルギー剤である。
<13> 花粉症の治療及び予防のいずれかに使用される前記<11>に記載の抗アレルギー剤である。
<15> 茶飲料である前記<14>に記載のIgE抗体産生抑制用飲食物である。
本発明のIgE抗体産生抑制剤は、杉(Cryptomeria japonica D.Don)の葉抽出物を有効成分として含んでなる。該IgE抗体産生抑制剤は、必要に応じて適宜選択したその他の成分と併用してもよい。
前記杉の葉抽出物の原料となる杉の葉としては、杉から伐採された葉部であれば、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、例えば、9月から12月の間に杉から伐採された葉部が好適に挙げられる。
前記水系溶媒としては、例えば、水、親水性有機溶媒、およびこれらの混合液が挙げられるが、これらの中でも水が好ましい。
前記水としては、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水等の他、これらに各種処理を施したものが含まれる。水に施す処理としては、例えば、精製、加熱、殺菌、滅菌、ろ過、イオン交換、浸透圧の調整、緩衝化等が含まれる。従って、本発明において抽出溶媒として使用し得る水には、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等も含まれ、これらの中でも熱水が好ましい。
また、前記杉の葉抽出物の抽出時間としては、10分以上が好ましく、40〜60分がより好ましい。
前記IgE抗体産生抑制剤としては、前記杉の葉抽出物を有効成分として含む限り、特に制限は無く、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、前記杉の葉を熱水抽出して得た抽出液の茶飲料であってもよく、前記杉の葉抽出物の濃縮物や乾燥物等であってもよく、前記杉の葉抽出物を公知の方法により製剤化したものであってもよい。
前記杉の葉抽出物を製剤化してなる前記IgE抗体産生抑制剤の剤型としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、固形剤、液剤などが挙げられる。
前記液剤としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、例えば、前記杉の葉抽出物を濃縮したもの、乳化剤を用いて水に溶解乃至分散させたもの、エチルアルコール等の可溶性溶媒に溶解させた後水に溶解させたもの、などが挙げられる。
その他の成分としては、例えば、ポリフェノール、DHA(ドコサヘキサエン酸)、EPA(エイコサペンタン酸)、プロポリス、アガリクス抽出物、クロレラ原末、スピルリナ原末、ビフィズス菌、乳酸菌、アミノ酸、ビタミン類、ミネラル類(亜鉛、カルシウム、マグネシウム等)などが挙げられる。
前記血清中の抗体価を測定する方法としては、例えば、ELISA法等が挙げられ、前記抗体価としては、OD値(光学濃度)等が挙げられる。
前記IL−5産生量を測定する方法としては、例えば、炎症組織を生理食塩水等で洗浄して得た洗浄液中のIL−5量を、ELISA法等により定量する方法が挙げられる。
前記好酸球浸潤量としては、例えば、炎症組織の洗浄液中の好酸球をギムザ液等で染色し、光学顕微鏡下で観察し計測することができる。
また、必要に応じて他の成分を配合してなる後述の抗炎症剤、及び抗アレルギー剤の成分として使用することができる。
さらに、前記杉の葉の熱水抽出物を、茶飲料として使用することにより、また、一般食品や一般飲料に含有させることにより、後述するIgE抗体産生抑制用飲食物の成分として好適に使用することができる。
本発明のIgE抗体産生抑制方法は、前記本発明の本発明のIgE抗体産生抑制剤を経口投与することにより、IgE抗体の産生量を抑制する方法である。
前記IgE抗体の産生量の摂取量としては、アレルギー症状等のレベルに応じて適宜選択することができるが、前記杉の葉抽出物の原料である前記杉の葉の乾燥物重量として、被投与個体の体重1kgあたり0.05g/日以上が好ましく、0.08g/日以上がより好ましい。
本発明の抗炎症剤は、本発明の前記IgE抗体産生抑制剤を含有してなり、必要に応じて適宜選択したその他の成分を含有してなる。
本発明の抗アレルギー剤は、本発明の前記IgE抗体産生抑制剤を含有してなり、必要に応じて適宜選択したその他の成分を含有してなる。
本発明のIgE抗体産生抑制用飲食物は、前記IgE抗体産生抑制剤を含有してなる飲食物である。
前記IgE抗体産生抑制用飲食物としては、前記IgE抗体産生抑制剤である前記杉の葉の熱水抽出物からなる茶飲料が好ましい。
−喘息モデルマウスの調製−
7週齢の雌性BALB/cマウス6匹に、卵白アルブミン(OVA)0.1mgと、水酸化アルミニウム1.6mgとの混合物を、試験開始0日目及び7日目に皮下投与し、さらに、前記卵白アルブミン0.01mgを、14、15、及び16日目に点鼻投与して喘息モデルマウスを調製した。
前記喘息モデルマウスは、試験開始0日目からIgE抗体産生抑制剤(実施例1)又は水(比較例1)を投与して飼育した。
杉の葉茶(株式会社金子園製)25gを1Lの熱水中で加熱しながら40分間抽出して得た抽出液を凍結乾燥し、得られた乾燥物8.27gを1Lの水に懸濁して、IgE抗体産生抑制剤とした。
前記喘息モデルマウスへの投与量は、前記乾燥物4.14mg/日(前記杉の葉の乾燥重量として12.5mg/日)とし、毎日投与した。
前記喘息モデルマウスを、18日目に解剖し、血清および肺洗浄液を採取し、血清中のIgE抗体価及びIgG抗体価、肺胞洗浄液中の全白血球数及び肺胞腔への好酸球浸潤量、並びに、サイトカイン産生量(IL−5)を以下の方法により測定した。結果を図1〜7、及び表1に示す。
卵白アルブミン(OVA)をコートした96穴プレートに、段階希釈した血清を添加し、AP標識抗マウスIgG抗体(ZYMED社製)、AP標識抗マウスIgG1抗体(ICN社製)、及びAP標識抗マウスIgG2a抗体(ZYMED社製)、並びにAP標識streptavidin(43−4822、ZYMED製)を用いてIgG抗体、IgG1抗体、及びIgG2a抗体を検出した。p‐nitrophenyl phosphateを基質として発色させ、3N NaOHで反応を停止した後、マイクロプレートリーダーで405/540nmの吸光度を測定し、得られたOD値をそれぞれの抗体価とした。なお、前記IgG抗体及び前記IgG1抗体の抗体価は、100倍希釈で測定して得られたOD値であり、前記IgG2a抗体の抗体価は、10倍希釈して測定して得られたOD値である。
IgE抗体価は、ラット抗マウスIgE heavy chain(日本ベクトンディッキンソン株式会社製)をコートし、段階希釈した血清を添加し、biotin標識OVAと、streptavidin標識HPRTとを用いて検出し、TMB Microwell Peroxidase(フナコシ株式会社製)で発色させ、2N H2SO4で反応停止後、450/540nmの吸光度を測定し、得られたOD値をIgE抗体価とした。なお、前記IgE抗体価は、10倍希釈で測定して得られたOD値である。
肺胞洗浄液は、肺を1mLの生理食塩水で洗浄し、回収して調製した。前記肺胞洗浄液中の全白血球数及び好酸球数を測定した。全白血球数はチュルク液(和光純薬工業製)で染色し、血球計算板を用いて計測し、好酸球はギムザ液(メルク株式会社製)で染色し、光学顕微鏡下で観察して細胞数を計測した。
IL−5量は、前記肺胞洗浄液を試料として、OptEIA(登録商標)Set(日本ベクトン・ディッキソン株式会製)を用いて、ELISA法により測定した。
花粉症の自覚症状を持っている人で、いずれも医師による投薬を受けていない被験者8名に、下記の方法で調製したIgE抗体産生抑制飲食物(茶飲料)600〜1000mLを毎日摂取してもらい、摂取開始から30日目に、症状の変化について下記の評価基準に基づき評価してもらった。結果を表2に示す。
1Lの水道水を入れた薬缶を直火にかけ、沸騰したところで、杉の葉茶(株式会社金子園製)5gを投入し、弱火で40分間煮て、茶飲料を調製した。
○:症状が改善した
△:症状がやや改善した
×:変化なし
実施例1と同様にして飼育した喘息モデルマウスに、杉の葉茶(株式会社金子園製)を5倍量使用した以外は、実施例1と同様にしてIgE抗体産生抑制剤を調製し、投与して、肺胞洗浄液中の全白血球数、及び肺胞腔への好酸球浸潤量を測定した。結果を図8及び9に示す。
Claims (7)
- 杉(Cryptomeria japonica D.Don)の葉抽出物を有効成分とするIgE抗体産生抑制剤。
- 投与後、被投与個体のIgE抗体産生を抑制し、かつIgG抗体産生を抑制しない請求項1に記載のIgE抗体産生抑制剤。
- I型アレルギー疾患の被投与個体の血清中のIgE抗体価を〔(投与後の抗体価)/(投与前の抗体価)〕≦0.5とし、かつ血清中のIgG抗体価を〔(投与後の抗体価)/(投与前の抗体価)〕≧1.0とする作用を有する請求項2に記載のIgE抗体産生抑制剤。
- I型アレルギー疾患の被投与個体の炎症組織におけるIL−5産生量を〔(投与後の量)/(投与前の量)〕=0.9〜1.0とする作用を有する請求項1から3に記載のIgE抗体産生抑制剤。
- 杉の葉抽出物が、杉の葉の熱水抽出物である請求項1から4のいずれかに記載のIgE抗体産生抑制剤。
- 請求項1から5のいずれかに記載のIgE産生抑制剤を経口投与することを特徴とするIgE抗体産生抑制方法。
- 請求項1から5のいずれかに記載のIgE産生抑制剤を含むことを特徴とするIgE抗体産生抑制用飲食物。
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