JP2006141247A - コエンザイムq10を含有する細胞培養用の培地組成物 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】 水溶化されたコエンザイムQ10を含む組成物を細胞培養に必要な栄養成分を含む培地組成物に添加する。
【選択図】なし
Description
込むことが困難であった。
P. Navas等、Ceramide-dependent Caspase 3 Activation is Prevented by Coenzyme Q from Plasma Membrane in serum-derived Cells, Free Radical Research, 2002年、36巻4号、p.369-374
従って、本発明は、
[1]水溶化されたコエンザイムQ10を含有することを特徴とする細胞培養用の培地組成物;
[2]培地組成物が液体状である[1]記載の培地組成物;
[3]コエンザイムQ10が水性液体培地組成物中において、平均粒径3μm以下の粒子として存在する[1]または[2]記載の培地組成物;
[4]コエンザイムQ10の水性液体培地組成物中の含有量が、0.1〜1000μg/mLである、[1]〜[3]のいずれかに記載の培地組成物;
[5]培地組成物が粉末状であり、水と混合することによって水性液体培地組成物とすることができる[1]記載の培地組成物;および
[6]血清および血清由来の成分を含まない、[1]〜[5]のいずれかに記載の培地組成物に関する。
特定の2種の界面活性剤を用いて水中油型エマルジョンを形成させることにより可溶化されたコエンザイムQ10組成物である。詳しくは、(A)コエンザイムQ105〜40質量%、(B)平均重合度10のポリグリセリンとステアリン酸、オレイン酸またはリノール酸のモノエステル5〜30質量%、(C)平均重合度3〜6のポリグリセリンとステアリン酸、オレイン酸またはリノール酸のモノ、ジ、トリまたはペンタエステル1〜18質量%、および、(D)水からなるコエンザイムQ10含有水性液体組成物を高圧ホモジナイザーによって用いて分散・乳化させた水溶性コエンザイムQ10含有組成物である。コエンザイムQ10の平均粒子径は110nm以下である。
有機酸の存在下、アラビアガム、寒天、水溶性コーンファイバー、デンプン、ゼラチン、キサンタンガム、カゼイン、デキストリン、カルメロースナトリウム、ポリビニルピロリドンからなる群から選択される1つ以上の水溶性物質にコエンザイムQ10を分散・乳化した水溶性コエンザイムQ10含有組成物である。
コエンザイムQ10をショ糖酢酸イソ酪酸エステル等の中鎖脂肪酸エステル(油相成分)に溶解し、次いでこの溶液と多価アルコールに乳化剤を溶解した溶液を混合した後、乳化処理して得られる、コエンザイムQ10乳化組成物である。この乳化組成物は、0.1〜50質量%のコエンザイムQ10、0.1〜50質量%の油相成分、1〜90質量%の多価アルコールおよび0.1〜50質量%の乳化剤を含有する。
本発明中の培地に含有されるコエンザイムQ10は、培地の使用期限内に90%以上が安定に保存され、使用時おいては水性液体培地中に微細な分散粒子として存在するので、培養される細胞中に有効に利用されうるという利点を有する。
実施例で用いる水溶化コエンザイムQ10組成物および培地は次のものを用いた。
(1)水溶化Q10−1
日清ファルマ株式会社製の水溶化コエンザイムQ10「アクアQ10L10」(商品名)を用いた。これは、グリセリン脂肪酸エステルを用いてコエンザイムQ10を水溶化した液体製品であり、特開2004−196781号公報に記載される水溶化コエンザイムQ10である。
(2)水溶化Q10−2
アラビアガム(伊那食品工業製)800g、デキストリン(松谷化学工業製)340gおよびグリセリン60gを精製水4000gに加え、約60℃まで加温する。これにコエンザイムQ10(日清ファルマ製)800gを添加して混合し、さらに高圧ホモジナイザー(処理圧力700kg/cm2、3回)を通過させ、微細且つ均一なエマルジョンを得た。このエマルジョン中のコエンザイムQ10を含有する分散乳化粒子の粒径をレーザー回折・散乱法式粒度分布測定装置(MICROTRAC FRA;日機装社製)を用いて測定したところ、50%粒径は0.94μmであった。
次いで、このエマルジョンを180℃に加熱した熱気流中に噴出し、水分を除去して橙色の粉末組成物を得た。これは特許第3549197号に記載される水溶化コエンザイムQ10である。
(3)DMSO−Q10
比較例として、100倍量のDMSOで溶解したコエンザイムQ10(DMSO−Q10とする)を用いた。
(4)培地
細胞培養用培地として、コスモバイオ株式会社より入手した、ダルベッコ改変イーグル培地(カタログNo.P134500の液体培地、カタログNo.16103010の粉末培地)、RPMI1640培地(カタログNo.10−040−CMの液体培地、カタログNo.16105010の粉末培地)を用いた。
液体培地を調製する場合には、細胞培養用液体培地に、水溶化Q10−1、水溶化Q10−2およびDMSO−Q10を、コエンザイムQ10の濃度が10μg/mlおよび500μg/mlになるように液体培地に加えよく混和した。
粉末培地を調製する場合には、細胞培養用粉末培地に、水溶化Q10−1、水溶化Q10−2およびDMSO−Q10を、水に溶解したときのコエンザイムQ10の濃度が、10μg/mlおよび500μg/mlになるように、粉末培地に加えよく混和した。そして、水溶化Q10−2を添加したものはそのまま用いたが、水溶化Q10−1およびDMSO−Q10を添加したものは凍結乾燥して水分およびDMSOを除去することによりコエンザイムQ10含有粉末培地を調製した。
液体培地は、冷蔵(4℃)および冷凍(−20℃)、6ヶ月間保存し、保存中のコエンザイムQ10含量を確認した。また粉末培地は冷蔵(4℃)の条件で、12ヶ月間保存し、保存中のコエンザイムQ10含量を確認した。このとき、粉末培地は保存後のものを使用時の濃度を使用時の濃度(10μg/mlおよび500μg/ml)に溶解した後、コエンザイムQ10の含量を測定した。
その結果を表1および表2に示す。
表1、表2よりあらかじめ水溶化したコエンザイムQ10を用いることにより、安定なコエンザイムQ10含有細胞培養用液体培地および粉末培地を調製することができる。
Claims (4)
- 水溶化されたコエンザイムQ10を含有することを特徴とする細胞培養用の培地組成物。
- コエンザイムQ10が、液体培地としたときに平均粒径3μm以下の粒子として存在する、請求項1記載の培地組成物。
- 液体培地としたときのコエンザイムQ10の濃度が、0.1〜1000μg/mLである、請求項1または2記載の培地組成物。
- 血清および血清由来の成分を含まない、請求項1〜3のいずれか1項に記載の培地組成物。
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