JP2006117552A - 光老化防止用皮膚外用剤 - Google Patents

Abstract

【課題】 本発明は、皮膚の光老化防止用皮膚外用剤を提供することを課題とする。
【解決手段】インターフェロン−γを配合してなる光老化防止用皮膚外用剤を提供することによって課題を解決する。
【選択図】なし

Description

本発明は、光老化防止用皮膚外用剤に関するものであり、とりわけ、インターフェロン−γを配合してなる光老化防止用皮膚外用剤に関するものである。

皮膚は生体の最も外側を構成し、外界からの刺激、例えば、乾燥、紫外線、物理的刺激、化学的刺激に最も暴露されやすい。特に、紫外線は、皮膚に有害であり、皮膚表面の黒色化、しみ、しわ、肌荒れなどを誘発するだけでなく、皮膚癌の誘発因子になるほか、コラーゲン線維、エラスチンやヒアルロン酸などの物質の減少により、皮膚の弾力性が低下し可塑化を促進する、いわゆる光老化を引き起こすことが知られている。また、紫外線による光老化は、加齢とともに深刻化するため、高齢となっても若い皮膚を保つためには、若年時からの紫外線への対策が重要である。

ところで、地上に降り注がれる太陽光線には、皮膚にとって有害な中波長紫外線とともに、比較的安全な長波長紫外線が含まれている。近年、非特許文献１において、長波長紫外線は、皮膚においてＴｈ１タイプのサイトカインを誘導し、中波長紫外線によるダメージ回復を促す効果を発揮することが報告されている。しかしながら、地球的規模でオゾン層での破壊により、次第に太陽光線における中波長紫外線の割合が増加しつつあり、ますます紫外線対策が重要視されている。

紫外線対策としては、通常、紫外線吸収剤、抗酸化剤、コラーゲン、ヒアルロン酸などを配合した皮膚外用剤を皮膚に塗布する方法がある。しかしながら、これらの方法は一時凌ぎであり、美容を重視しているため、紫外線による光老化を根本的に防止する効果に乏しい。また、真皮におけるコラーゲン合成促進効果を有する物質やコラーゲン架橋を防止する物質などが配合された皮膚外用剤が市販されているが、十分な効果を発揮しているとはいえない。

リーブ・ブイ・イー（Ｒｅｅｖｅ ＶＥ）、ボスニック・エム（Ｂｏｓｎｉｃ Ｍ）、ニシムラ・エヌ、ジャーナル・オブ・インベストメンタル・ダーマトロジー（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｎｖｅｓｔｍｅｎｔａｌ Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ）、インターフェロン−ガンマ・イズ・インボルブド・イン・フォトイムノプロテクション・バイ・ユーブイエー（３２０−４００ｎｍ）・ラジエーション・イン・マイス（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−ｇａｍｍａ ｉｓ ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ ｐｈｏｔｏｉｍｍｕｎｏｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ ｂｙ ＵＶＡ（３２０−４００ｎｍ） ｒａｄｉａｔｉｏｎ ｉｎ ｍｉｃｅ）、第１１２巻、第６号、１９９９年

本発明は、光老化防止用皮膚外用剤を提供することを課題とする。

上記課題を解決すべく、本発明者等が鋭意研究を行った結果、サイトカインの一種のインターフェロン−γ（以下、「ＩＦＮ−γ」と略記する。）が、紫外線によるコラーゲン線維のダメージを防ぐとともに、紫外線によりダメージを受けた皮膚のコラーゲン線維の回復を良好に促し、皮膚の可塑化を抑制し、さらには、皮膚の過度の新陳代謝を抑えることにより光老化を防止する効果を有することを発見し、本発明を完成するに至った。

すなわち、本発明は、ＩＦＮ−γを配合してなる光老化防止用皮膚外用剤を提供することによって前記課題を解決するものである。

本発明の皮膚外用剤は、それを皮膚に塗布することにより、皮膚組織、とりわけ、コラーゲン線維を紫外線によるダメージから防護するとともに、ダメージを受けたコラーゲン線維の回復を促進することができる。さらに、皮膚の過度の新陳代謝を抑えるので、皮膚の光老化を抑制することができる。

本発明でいう皮膚の光老化とは、皮膚への紫外線照射を原因とする、皮膚において惹起される老化現象を意味し、具体的には、しみ、しわの発生、乾燥、炎症、皮膚深部のコラーゲン線維、ヒアルロン酸などの減少による皮膚の弾力性の低下による皮膚の可塑化現象をいう。本発明の光老化防止剤は、後記実験に示されるとおり、皮膚の可塑化を抑制する作用を有している。

本発明の光老化防止用皮膚外用剤の有効成分として用いられるＩＦＮ−γは、血液細胞などから産生される天然型ＩＦＮ−γであっても、ＩＦＮ−γ遺伝子を適宜なベクターに組み込んで、大腸菌、動植物細胞などに導入し、培養して得られる組換え型ＩＦＮ−γであってもよい。天然型ＩＦＮ−γとしては、商品名『オーガンマ１００』（大塚製薬株式会社販売）、遺伝子組換型ＩＦＮ−γとしては、商品名『ビオガンマ』（サントリー株式会社、マルホ株式会社販売）または商品名『イムノマックス−γ』（塩野義製薬株式会社販売）などの市販品を用いることもできる。また、ＩＦＮ−γの安定化、他の分子との結合、ＩＦＮ−γ活性の増強または減弱などを目的としたアミノ酸残基を一部置換、欠失、付加などを施して得られるＩＦＮ−γ変異体タンパク質を用いることもできる。さらに、ＩＦＮ−γの適当な部位に、ポリエチレングリコール、プルランなどの水溶性物質を結合して、安定性を高めることも随意である。これらのＩＦＮ−γは、液状、乾燥粉末、またはペースト状に調製することができる。

本発明の光老化防止用皮膚外用剤に配合されるＩＦＮ−γは、適用方法、剤型、併用される他の成分の種類を勘案し、その配合量を適宜決定すれば良い。通常、皮膚外用剤１ｇあたり、１００乃至１００，０００，０００ＩＵ、好ましくは１，０００乃至１０，０００，０００ＩＵ、さらに好ましくは１０，０００乃至１，０００，０００ＩＵ配合すればよい。なお、ＩＦＮ−γの活性の単位の「ＩＵ」は「国際単位」であり、国際標準物質を用いた常法のバイオアッセイ（抗ウイルス活性）により算出されるＩＦＮ−γの活性量を意味する。

本発明の皮膚外用剤には、ＩＦＮ−γの光老化防止効果を増強する目的で、他の光老化防止作用を示す物質、例えば、ビタミンＡ油、レチノール、酢酸レチノール等のビタミンＡ類、リボフラビン、酪酸リボフラビン、フラビンアデニンヌクレオチド等のビタミンＢ₂ 類、ピリドキシン塩酸塩、ピリドキシンジオクタノエート等のビタミンＢ₆ 類、Ｌ−アスコルビン酸、Ｌ−アスコルビン酸ジパルミチン酸エステル、Ｌ−アスコルビン酸−２−硫酸ナトリウム、Ｌ−アスコルビン酸リン酸エステル、ＤＬ−トコフェロール−Ｌ−アスコルビン酸リン酸ジエステルジカリウム等のビタミンＣ類、パントテン酸カルシウム、Ｄ−パントテニルアルコール、パントテニルエチルエーテル、アセチルパントテニルエチルエーテル等のパントテン酸類、エルゴカルシフェロール、コレカルシフェロール等のビタミンＤ類、ニコチン酸、ニコチン酸アミド、ニコチン酸ベンジル等のニコチン酸類、トコフェロール、酢酸トコフェロール、ニコチン酸ＤＬ−トコフェロール、コハク酸ＤＬ−トコフェロール等のビタミンＥ類、ビタミンＰ、ビオチン等のその他のビタミン類、マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）阻害剤、コラーゲン合成促進剤、又はコラーゲン架橋形成阻害剤などの１種または2種以上を配合することができ、特に、ビタミンＣ類、例えば、Ｌ−アスコルビン酸２−グルコシドなどのＬ−アスコルビン酸グリコシド、Ｌ−アスコルビン酸２−グルコシドのアシル化誘導体、テトラヘキシルデカン酸アスコルビン酸、アスコルビン酸−トコフェロールリン酸ジエステル、Ｌ−アスコルビン酸硫酸エステル、ジパルミチン酸アスコルビル、パルミチン酸アスコルビル、Ｌ−アスコルビン酸ステアリル、リン酸Ｌ−アスコルビル、Ｌ−アスコルビン酸エチルなどのＬ−アスコルビン酸、その糖質誘導体又はアシル化誘導体を配合するのが好ましい。

本発明の光老化防止方法には、有効成分のＩＦＮ−γ以外に、他の皮膚外用剤に用いられる成分、例えば、紫外線吸収剤、紫外線遮断剤、保湿剤、美白剤、抗炎症剤、抗酸化剤、抗しわ剤、細胞賦活化剤、経皮吸収促進剤、皮膚軟化剤などの１種または２種以上を併用することができる。とりわけ、本発明の光老化防止方法を日焼け防止に適用する場合、紫外線吸収剤、紫外線遮断剤、抗炎症剤、抗酸化剤などを併用するのが望ましい。

紫外線吸収剤としては、通常、中波長紫外線吸収剤を用いることが望ましく、場合によっては、長波長紫外線吸収剤を適宜用いることができる。中波長紫外線吸収剤としては、例えば、パラアミノ安息香酸 （以下、「ＰＡＢＡ」と略す。）、ＰＡＢＡモノグリセリンエステル、Ｎ，Ｎ−ジプロポキシＰＡＢＡエチルエステル、Ｎ，Ｎ−ジエトキシＰＡＢＡエチルエステル、Ｎ，Ｎ−ジメチルＰＡＢＡエチルエステル、Ｎ，Ｎ−ジメチルＰＡＢＡブチルエステル、Ｎ，Ｎ−ジメチルＰＡＢＡアミルエステル等の安息香酸系紫外線吸収剤、ジプロピレングリコールサリシレート、エチレングリコールサリシレート、ミリスチルサリシレート、メチルサリシレート、アミルサリシレート、メンチルサリシレート、ホモメンチルサリシレート、オクチルサリシレート、フェニルサリシレート、ベンジルサリシレート、ｐ−イソプロパノールフェニルサリシレート等のサリチル酸系紫外線吸収剤、オクチルシンナメート、エチル−４−イソプロピルシンナメート、メチル−２，５−ジイソプロピルシンナメート、エチル−２，４−ジイソプロピルシンナメート、メチル−２，４−ジイソプロピルシンナメート、プロピル−ｐ−メトキシシンナメート、イソプロピル−ｐ−メトキシシンナメート、イソアミル−ｐ−メトキシシンナメート、オクチル−ｐ−メトキシシンナメート（２−エチルヘキシル−ｐ−メトキシシンナメート）、２−エトキシエチル−ｐ−メトキシシンナメート、シクロヘキシル−ｐ−メトキシシンナメート、グリセリルモノ−２−エチルヘキサノイル−ジパラメトキシシンナメート、メトキシケイ皮酸オクチル、３，４，５−トリメトキシケイ皮酸−３−メチル−４−［メチルビス（トリメチルシロキシ）シリル］ブチル、ｐ−ジメトキシケイ皮酸モノエチルエステル等のケイ皮酸系紫外線吸収剤、３−（４´−メチルベンジリデン）−ｄ，１−カンファー、３−ベンジリデン−ｄ，１−カンファー、５−（３，３−ジメチル−２−ノルボルニリデン）−３−ペンテン−２−オン等のカンファー誘導体、ウロカニン酸、ウロカニン酸エチルエステル、２−フェニル−５−メチルベンゾオキサゾール、ジベンザラジン等を挙げることができる。長波長紫外線吸収剤としては、メチルアントラニレート、ホモメンチル−N−アセチルアントラニレート等のアントラニル酸系紫外線吸収剤、２，４−ジヒドロキシベンゾフェノン、２，２´−ジヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン等のベンゾフェノン系紫外線吸収剤、２，２´−ヒドロキシ−５−メチルフェニルベンゾトリアゾール、２−（２´−ヒドロキシ−５´−ｔ−オクチルフェニル）ベンゾトリアゾール等のベンゾトリアゾール系紫外線吸収剤、ジアニソイルメタン、４−メトキシ−４´−ｔ−ブチルジベンゾイルメタン等を挙げることができる。

紫外線遮断剤として、酸化チタン、タルク、カルミン、ベントナイト、カオリン、酸化亜鉛等を挙げることができる。

保湿剤としては、ヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸、デルマタン硫酸、ヘパラン硫酸、へパリンなどのムコ多糖及びその誘導体やそれらの塩類、コラーゲン、エラスチン、フィブロネクチン、ケラチン、ゼラチン、カゼインなどから選ばれるタンパク質及びそれらの部分ペプチド、グリシン、アラニン、バリン、セリン、スレオニン、メチオニン、フェニルアラニン、ロイシン、チロシン、プロリン、イソロイシン、トリプトファン、ヒドロキシプロリン、テアニン、オルニンチン、シトルリン、アスパラギン、アスパラギン酸、グルタミン、グルタミン酸、アルギニン、ヒスチジン、リジン、ヒドロキシリジン、システイン、シスチン、アシルグルタミン酸、γ−ポリグルタミン酸などから選ばれるアミノ酸及びそれらの誘導体、キシロース、グルコース、フラクトース、マルトース、蔗糖、ラクトース、パラチノース、トレハロース、α−グリコシルトレハロース、環状四糖、異性化糖、マルトオリゴ糖、デキストリン、イソマルトオリゴ糖、ガラクトオリゴ糖、フラクトオリゴ糖、ニゲロオリゴ糖、ガラクトシルグルコシド、ラクトスクロース、澱粉などの糖質、エリスリトール、ペンタエリスリトール、ソルビトール、キシリトール、マルチトール、イソマルチトール、ラクチトール、パニトールなどの糖アルコール、プルラン、アルギン酸ナトリウム、寒天、アラビアガム、グアガム、トラガカントガム、キサンタンガム、カラギーナン、ローカストビーンガムなどのガム、ペクチン、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ポリビニールアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリデキストロース、ポリアクリル酸などの水溶性高分子、ショ糖エステル、デキストリン誘導体、グリセリン、１，３−ブチレングリコール、１，４−ブチレングリコール、ジプロピレングリコール、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、アミレングリコールなどの多価アルコール、Ｎ−（ω−アシルオキシ）アシルスフィンゴシン、Ｎ−アシルスフィンゴシン、Ｎ−アシルフィトスフィンゴシンなどのセラミド、ホスファチジド酸、ホスファチジルセリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジル−Ｎ−メチルエタノールアミン、ホスファチジルコリン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジル−Ｏ−アミノアシルグリセロール、３´−Ｏ−リシルホスファチジルグリセロール、ホスファチジルグリセロリン酸、ジホスファチジルグリセロール、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルイノシトール一リン酸、ホスファチジルイノシトール二リン酸、モノアルキルモノアシルグリセロリン脂質、ジアルキルグリセロリン脂質、モノアルケニルモノアシルグリセロリン脂質、ジアルケニルグリセロリン脂質、セラミドリン酸、スフィンゴミエリン、セラミドホスホリルエタノールアミン、セラミドホスホリルグリセロール、セラミドシリアチン、セラミド−Ｎ−メチルシリアチンなどのリン脂質、モノグリコシルジグリセリド、ポリグリコシルジグリセリド、モノガラクトシルジグリセリド、ポリガラクトシルジグリセリド、ガラクトシルグルコシルジグリセリド、セレブロシド、セラミドラクトシド、セラミドヘキソシド、グロボシド、ヘマトシド、ガングリオシド、ステロール配糖体、カルデノリド配糖体、サポニン、ステロイドアルカロイド配糖体、ラムノリピド、ソホロリピド、ミコシド、トリアシルグルコース、ジアシルトレハロース、リピドＡなどの糖脂質、ホスファチジルグルコサミニルグリセロール、ホスファチジルイノシトールポリマンノシド、グリセロホスホリルジグルコシルジグリセリド、ＣＤＰ−ジグリセリド、フィトグリコリピドなどのリン糖脂質、コンブ、サンゴモ、ワカメなどの海藻、アロエ、ローズマリーなどの保湿効果のある植物又は植物由来の成分などを挙げることができる。

美白剤としては、例えば、乳酸、エラグ酸、トラネキサム酸、フィチン酸、グルタチオン、ハイドロキノン、アルブチン、カモミラＥＴ、ルシノール、ビタミンＣまたはそれらの誘導体、カミツレエキスまたはモラシズエキスなどの美白効果を持つ植物又は植物由来成分、イオウなどの無機物などが挙げられる。

抗炎症剤としては、例えば、アラントインアセチル−ｄｌ−メチオニン、アラントインクロルヒドロキシアルミニウム、アラントインジヒドロキシアルミニウム、アラントインポリガラクツロン酸などのアラントイン又はその誘導体、グリチルレチン酸、グリチルリチン酸、グリチルレチン酸アラントイン、グリチルレチン酸グリセリン、グリチルレチン酸ステアリル、ステアリン酸グリチルレチニル、３−サクシニルオキシグリチルレチン酸二ナトリウム、グリチルリチン酸ジカリウム、グリチルリチン酸モノアンモニウムなどのグリチルレチン又はその誘導体、パントテニルアルコール、パントテニルエチルエーテル、アセチルパントテニルエチルエーテル、ベンゾイルパントテニルエチルエーテル、パントテン酸カルシウム、パントテン酸ナトリウム、アセチルパントテニルエチルエーテル、安息香酸パントテニルエチルエーテルエステル、パンテチンなどのパントテン酸又はその誘導体、ビタミンＥ又はその誘導体、塩酸ピリドキシン、メントール、ビオチン、カンフル、テレピン油、酸化亜鉛、アズレン、グアイアズレン及びその誘導体、メフェナム酸及びその誘導体、フェニルブタゾン及びその誘導体、インドメタシン及びその誘導体、イブプロフェン及びその誘導体、ケトプロフェン及びその誘導体、ε−アミノカプロン酸、ジクロフェナクナトリウム、ジフェンヒドラミン、トラネキサム酸及びその誘導体、デキサメタゾン、コルチゾン及びそのエステル、ヒドロコルチゾン及びそのエステル、プレドニゾン、プレドニゾロンなどの副腎皮質ホルモン、抗ヒスタミン剤、カンゾウエキス、カミツレエキス、藍などの植物抽出物が挙げられる。

抗酸化剤としては、ビタミンＡ及びそれらの誘導体、ビタミンＢ及びそれらの誘導体、ビタミンＣ及びそれらの誘導体、ビタミンＤ及びそれらの誘導体、ビタミンＥ及びそれらの誘導体、ジブチルヒドロキシトルエン、ブチルヒドロキシアニソール、スーパーオキシドディスムターゼ、カロチノイド、アスタキサンチン及びその誘導体、ルチン、ヘスペリジン、ケルセチン、カテキン、エピカテキン、エピガロカテキン及びそれらの配糖体をはじめとする各種誘導体、没食子酸及びその誘導体、グルタチオン及びその誘導体、β−カロチン及びその誘導体、ユビキノール、フラボノイド、ポリフェノール、ビリルビン、コレステロール、トリプトファン、ヒスチジン、チオタウリン、ヒポタウリンなどが挙げられる。

抗しわ剤としては、例えば、レチノール、レチノイン酸、レチナールなどのレチノイド、パンガミン酸、カイネチン、ウルソール酸、ウコンエキス、スフィンゴシン誘導体、ケイ素、ケイ酸、Ｎ−メチル−Ｌ−セリン、メバロノラクトンなどが挙げられる。

細胞賦活化剤としては、例えば、γ−アミノ酪酸、ε−アミノプロン酸などのアミノ酸類、レチノール、チアミン、リボフラビン、塩酸ピリドキシン、パントテン酸類などのビタミン類、グリコール酸、乳酸などのα−ヒドロキシ酸類、タンニン、フラボノイド、サポニン、アラントイン、感光素１０１号、感光素３０１号などが挙げられる。

経皮吸収促進剤としては、例えば、尿素、乳酸、フルーツ酸、グリコール酸などのα−ヒドロキシ酸、サリチル酸などのβ−ヒドロキシ酸、オレイン酸、ウンデカノイン酸、オクタノール、ノナノール、メントール、チモール、リモネン、ジメチルスルホキシド、ドデシルメチルスルホキシド、ジメチルアセトアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ラウリル硫酸ナトリウム、Ｎ，Ｎ−ビス（２ヒドロキシエチル）オレイルアミン、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレート、ドデシルジメチルアンモニオプロパンスルホン酸、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、ｎ，ｎ−ジメチル−ｍ−トルアミド、ジエチル−ｍ−トルアミド、ラウロカプラム、１−ドデシルアザシクロヘプタン−２−オン、イソプロピルミリステート、イソプロピルパルミテート、Ｎ−モノ又はジ置換−ｐ−メンタン−３−カルボキシアミド、２−（２−メトキシ−１−メチルエチル）−５−メチルシクロヘキサノ−ル、アザシクロアルカン誘導体、シクロデキストリンなどが挙げられる。

さらに、本発明の皮膚外用剤には上記の成分に加えて、必要に応じて、通常皮膚外用剤に用いられる成分、例えば、エデト酸、エデト酸二ナトリウム、エデト酸三ナトリウム、エデト酸四ナトリウム、クエン酸ナトリウム、メタリン酸ナトリウム、メタリン酸ナトリウムなどの金属イオン封鎖剤、エタノール、イソプロパノールなどの低級アルコール類、流動パラフィン、ワセリン、マイクロクリスタリンワックス、スクワラン、アーモンド油、オリーブ油、硬化油、ヒマシ油、モクロウ、ヤシ油、ミツロウ、ラノリン、カルナバロウ、パーム油などの油分、フィトステロールなどのステロール類、ラノリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、イソステアリン酸、オレイン酸などの脂肪酸類やこれらのトリグリセリド、ラウリルアルコール、セタノール、ステアリルアルコール、オレイルアルコール、コレステロールなどの高級アルコール類、ミリスチン酸イソプロピル、ミリスチン酸ミリスチル、パルミチン酸イソプロピルなどのエステル類、クエン酸、リンゴ酸、酒石酸、乳酸、コハク酸、酢酸などの有機酸、リン酸などの無機酸、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、トリエタノールアミンなどの無機或いは有機のアルカリ剤、フラーレン及びその誘導体、黄酸化鉄、チタンイエロー、カーサミンなどの着色料、感光素２０１号、感光素４０１号、プラルミンなどの感光素、赤色１０４号、黄色４号、緑色３号、青色１号、橙色２０６号などのタール色素、タルク、カオリン、セリサイト、白雲母、合成雲母、紅雲母、黒雲母、リチア雲母、バーミキュライト、炭酸マグネシウム、炭酸カルシウム、ケイソウ土、ケイ酸マグネシウム、ケイ酸カルシウム、ケイ酸アルミニウム、ケイ酸バリウム、ケイ酸ストロンチウム、タングステン酸金属塩、α−酸化鉄、水和酸化鉄、シリカ、ヒドロキシアパタイトなどの無機粉末、ナイロンパウダー、ポリエチレンパウダー、ベンゾグアナミンパウダー、四弗化エチレンパウダー、ジスチレンベンゼンピンホールポリマーパウダー、微結晶性セルロースなどの有機粉体、水等を本発明の皮膚外用剤に配合することができる。

また、その他の薬効成分として、ローヤルゼリー、プロポリス、蜂蜜、幼牛血液抽出物、ノニル酸ワレニルアミド、ニコチン酸ベンジルエステル、カプサイシン、ジンゲロン、カンタリスチンキ、イクタモール、カフェイン、タンニン酸、ニコチン酸トコフェロール、イノシトールヘキサニコチネート、シクランデレート、シンナリジン、トラゾリン、アセチルコリン、ベラパミル、セファランチン、チアントール等を本発明の皮膚外用剤に配合することができる。

さらに、本発明の皮膚外用剤に、本発明の目的を逸脱しない範囲で、インターフェロンα、インターフェロンβ、エンドセリン、マクロファージ遊走阻止因子、コロニー刺激因子、トランスファーファクター、インターロイキン−２などのリンホカイン、インシュリン、成長ホルモン、プロラクチン、エリスロポエチン、卵細胞刺激ホルモン、ステロイドなどのホルモン、ペニシリン、エリスロマイシン、クロラムフェニコール、テトラサイクリン、ストレプトマイシン、硫酸カナマイシンなどの抗生物質、リパーゼ、エラスターゼ、ウロキナーゼ、プロテアーゼ、β−アミラーゼ、イソアミラーゼ、グルカナーゼ、ラクターゼなどの酵素から選ばれる１種又は２種以上を配合することも随意である。

本発明の皮膚外用剤は、通常、医薬部外品又は化粧品に利用可能な剤型にすることができる。例えば、リニメント剤、スプレー剤、ローション剤、軟膏、クリーム、乳液、化粧水、美容液、パック剤、アンダーメークアップ、ファンデーション、ゼリー剤等の製品形態として用いることができる。また、有効成分でとしてのＩＦＮ−γに安定性又は徐放性を付与するために、リポソームやマイクロカプセルに封入することも随意である。

本発明の光老化防止用皮膚外用剤は、紫外線が照射されることが予測される皮膚、あるいは、紫外線が照射された皮膚に直接適用される。適用方法としては、手指、刷毛、スプレー、霧吹などにより皮膚に塗布する方法、適宜の布、ガーゼ、フィルムなどに塗布又は浸漬した後にそれを皮膚に貼付する方法、イオントフォレーシス法などにより電気的に経皮吸収させる方法、浴槽、バットなどに充填して皮膚を浸漬する方法、手袋、シャツ、タオルなどに付着させておき、それを着用する方法などが挙げられる。ＩＦＮ−γ適用量は、適用方法、剤型、併用される他の成分、その配合量、皮膚の状態、年齢、性別により変動するも、通常、皮膚１ｃｍ^２当たり、１乃至１，０００，０００ＩＵ、好ましくは、１０乃至１００，０００ＩＵ、さらに好ましくは１００乃至１０，０００ＩＵを皮膚に適用すればよい。

以下、実験で本発明を詳細に説明する。

＜実験１：マウスＩＦＮ−γの調製＞
常法にしたがって、摘出したＢＡＬＢ／ｃマウスの脾臓からｍＲＮＡを調製し、これを鋳型として逆転写酵素によりｃＤＮＡを合成した。次に、ＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号Ｋ０００８３に開示されるマウスＩＦＮ−γ塩基配列（配列表における配列番号１）を参考にして、成熟型ＩＦＮ−γのＮ末端の２０番目のシステインから発現させるために、配列番号１に示される塩基配列の５８番目の塩基から発現させることを試みた。すなわち、配列表における配列番号２（制限酵素ＮｄｅＩ切断部位、開始コドン、及び成熟型マウスＩＦＮ−γの５´末端付近の塩基配列を有する）ＴＴＣＣＡＴＡＴＧＴＧＴＴＡＣＴＧＣＣＡＣＧＧＣＡＣＡ、及び、配列番号３（制限酵素ＢａｍＨＩ切断部位、終止コドン、及び成熟型マウスＩＦＮ−γの３´末端付近の塩基配列を有する）ＴＣＴＣＣＴＡＧＧＴＣＡＧＣＡＧＣＧＡＣＴＣＣＴＴＴＴＣＣで表されるオリゴヌクレオチドプライマーを作製し、上記のｃＤＮＡを鋳型にして、常法のＰＣＲ法により、プライマー配列に特異的なＤＮＡを増幅した。得られたＤＮＡを制限酵素ＮｄｅＩ及びＢａｍＨＩにより消化し、Ｔ７プロモーター領域、Ｔ７ターミネーター領域、アンピシリン耐性遺伝子領域及びＣｏｌＥ１・Ｏｒｉ領域を有するプラスミドベクター（商品名『ｐＥＴ−３ａ』、ノバジェン社製）に導入した。このプラスミドを大腸菌ＢＬ２１ＤＥ３株へ導入し、成熟型マウスＩＦＮ−γ産生用の大腸菌を得た。これを常法により、Ｔ−ブロス培地で培養し、遠心分離により菌体を回収した。得られた菌体を、ＴＥＳ緩衝液（ｐＨ８．０）にて２回洗浄後、０．２ｍｇ／ｍｌリゾチームを含むＴＥＳ緩衝液（ｐＨ８．０）（２０ｍＭトリス塩酸、１０ｍＭエチレンジアミン４酢酸、及び０．５Ｍ塩化ナトリウム）に加え、常法にしたがい超音波処理し、遠心分離し、成熟型ＩＦＮ−γを含む残さを回収した。これを１％（ｗ／ｖ）トリトンエックス−１００を含むＴＥＳ緩衝液に加え、攪拌後に遠心分離して上清を除く操作を３回行い、得られた沈澱物を８Ｍグアニジン塩酸塩及び５０ｍＭジチオスレイトールを含む、５０ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．０）に加え、遮光下室温で１６時間攪拌し、遠心分離して、上清を回収した。これに１００倍量の１Ｍトリス、０．９（ｗ／ｖ）％塩化ナトリウム、０．４ＭＬ−アルギニン塩酸塩、２．５ｍＭ還元型グルタチオン、０．５ｍＭ酸化型グルタチオン、０．０５（ｗ／ｖ）％ツイーン２０に少量ずつ徐々に攪拌しつつ加えた後、４℃で１６時間静置した。これを４倍量の０．１（ｗ／ｖ）％ウシ血清アルブミンを含むリン酸食塩緩衝液（ｐＨ７．２）に加え、ｐＨを６．５乃至７．５に調整した後、常法にしたがって、抗マウスＩＦＮ−γ抗体カラムクロマトグラフィーによりマウスＩＦＮ−γ活性を有するフラクションを採取した。これをさらに、ゲル濾過クロマトグラフィー（商品名『Ｓｕｐｅｒｄｅｘ７５』、アマシャムバイオサイエンス社製造）により脱塩処理を行い、成熟型マウスＩＦＮ−γを得た。

＜実験２：ヘアレスマウスによる紫外線照射実験＞
一群４匹の４週齢雌性アルビノへアレスマウス（Ｈｏｓ：ＨＲ−１）（株式会社星野実験動物飼育所販売）の背部皮膚に、ＦＬ２０ＳＥランプ（株式会社東芝製造）を装着した実用光源装置（ＮＳ−８Ｆ型、三和メディカル株式会社製造）を用いて、長波長紫外線と中波長紫外線の比率が３：５である紫外線を中波長紫外線換算で６０ｍＪ／ｃｍ^２（０．５ｍＷ／ｃｍ^２で１２０秒）照射した。その後、１２０ｍＪ／ｃｍ^２になるまで、１週ごとに１０ｍＪ／ｃｍ^２（２０秒）ずつ照射量を増加して、週５回１０週間照射した。紫外線照射後、毎回、直ちに実施例１で得た成熟型マウスＩＦＮ−γ３．８×１０^５ＩＵ／ｍｌ及びウシ血清アルブミン０．１％（ｗ／ｖ）を含む０．１Ｍリン酸緩衝液を照射面積１ｃｍ^２当たり０．１ｍｌの割合で照射部位に塗布した。紫外線照射終了後、マウスを屠殺し、背部皮膚の片側を切り取り、２０％（ｖ／ｖ）ホルムアルデヒド含む０．１Ｍリン酸緩衝液に浸漬した後、これを適量のパラフィンに包埋し、マイクロトームにより２μｍの厚さの組織切片を作製した。作製した組織切片を、常法にしたがい、ヘマトキシリン・エオジン染色（細胞核、細胞質及び細胞間質を染色）、アザン染色（コラーゲン繊維を染色）、エラスチカワンギーソン染色（弾性繊維及びコラーゲン線維を染色）のいずれかにより処理した。染色切片は光学顕微鏡（商品名『デジタルHFマイクロスコープ』、株式会社キーエンス製造）で倍率１００倍で観察し、表皮、真皮、皮下織の厚さを計測した。皮膚嚢胞については、直径を計測して断面積を算出し、皮下織内の占有率を求めた。なお、陰性対照として、紫外線照射するものの、ＩＦＮ−γを含まないウシ血清アルブミン０．１％を含むリン酸緩衝液を塗布する群（紫外線照射ＩＦＮ−γ非塗布群）、及び、紫外線照射及びＩＦＮ−γ塗布をしない群（紫外線非照射ＩＦＮ−γ非塗布群）を設け、上記と同様に処理した。
また、表皮基底細胞におけるＰＣＮＡ陽性率（増殖中の細胞比率）は、まず、常法の抗ＰＣＮＡ抗体を用いた免疫染色法（『リキッドＤＡＢ−ブラックサブストレートキット』、ザイメドラボラトリーズ社販売）により、組織切片におけるＰＣＮＡ陽性細胞を染色し、続いて、その組織切片をメチルグリーン染色によりＰＣＮＡ陰性細胞を染色し、これらの染色面積を比較して算出した。
それらの結果を図１乃至３及び表１に示す。

表１の結果のとおり、紫外線照射ＩＦＮ−γ非塗布群の光学顕微鏡下で撮影した皮膚組織の断面の写真を示す図２における、表皮１、真皮２及び皮下組織３の厚さは、紫外線非照射ＩＦＮ−γ非塗布群の光学顕微鏡下で撮影した皮膚組織の断面の写真を示す図１におけるそれらの厚さに比べてどれも増加した。一方、紫外線照射ＩＦＮ−γ塗布群の光学顕微鏡下で撮影した皮膚組織の断面の写真を示す図３においては、紫外線による表皮、真皮及び皮下組織の肥厚が抑制された。また、表皮基底細胞の増殖の程度を示すＰＣＮＡ陽性率については、紫外線非照射ＩＦＮ−γ非塗布群のレベルにまで低下した。この結果は、ＩＦＮ−γ塗布は紫外線老化の代表的な現象として知られる皮膚組織の肥厚を防止する作用を有することを示している。
また、ＩＦＮ−γは、皮下組織における嚢胞占有率を増加させた。ところで、ヘアレスマウスの実験系において、上記のような嚢胞占有率の増加は、皮膚の新陳代謝が低下している場合に起こることが知られている。したがって、上記のＰＣＮＡ陽性率のデータを合わせて考えると、ＩＦＮ−γは、皮膚の深部にまで作用し、皮膚の過度の新陳代謝を抑え、皮膚の光老化を抑制する効果を発揮するものと考えられる。

＜実験３：ヘアレスマウスの紫外線照射実験＞
以下の実験は、幼若コラーゲン量測定用の『シルコールコラーゲンアッセイキット』（バイオカラー社販売）を用いて行われた。すなわち、実験２において、紫外線照射及びマウスＩＦＮ−γを塗布した群、及び、対照の２群のマウスから、それぞれ背部皮膚（表皮、真皮、皮下織を含む）１ｃｍ^２分を切り取り、その重量を測定した後、１０ｍｌの０．５Ｍ酢酸水溶液に浸漬して粉砕混合し、遠心分離により、上清部と沈澱部に分離しそれぞれ採取した。上清部は「酸可溶性コラーゲン画分」とし、その一部を採取し、キットに付属の塩可溶性コラーゲンに結合して沈澱する試薬を等量加え、３０分間混ぜ合わせた後、遠心分離して得られた沈澱を、キット付属のアルカリ試薬１ｍｌにより再溶解し、「塩可溶性コラーゲン画分」を調製した。一方、沈澱部は、１０ｍｇに対して１０ｍｌの１ｍｇペプシンを含む０．５Ｍ酢酸水溶液を加え、攪拌しつつ４℃で２４時間反応させ、遠心分離後、上清を採取し、「ペプシン可溶性コラーゲン画分」とした。これら３画分は、標準スペクトロメーターを用いて５４０ｎｍでの吸光度を測定し、皮膚組織１ｇ当たりのコラーゲン量を算出した。
また、常法にしたがって、それぞれの群のマウス皮膚を電子顕微鏡観察用のプレパラートに調製し、電子顕微鏡下でコラーゲン線維の直径を測定し、平均線維直径を求めた。
これらの結果を表２に示す。

表２に示すとおり、紫外線照射ＩＦＮ−γ非塗布群のヘアレスマウスの組織重量当たりの酸可溶性コラーゲン画分、塩可溶性コラーゲン画分及びペプシン可溶性コラーゲン画分の量が増加したことから、紫外線照射により、コラーゲン線維を再構築するために必要な幼若なコラーゲンの合成が促進された。一方、紫外線照射ＩＦＮ−γ塗布群のヘアレスマウスにおいては、幼若コラーゲン量はさらに増加していた。とりわけ、分子量が比較的大きいペプシン可溶性コラーゲン量が５．３ｍｇから８．０ｍｇに著増したことは、コラーゲン再合成が、紫外線照射ＩＦＮ−γ非塗布群よりも、より促進されることを示していると考えられる。
また、紫外線照射により、平均線維直径は減少したことから、コラーゲン線維の分解が促進されることが示された。しかしながら、ＩＦＮ−γを皮膚に適用することにより、コラーゲン線維の分解をやや抑制することが示された。

以下、実施例で本発明の光老化防止用皮膚外用剤の具体例を示す。

＜ヒトＩＦＮ−γの調製＞
市販の天然型ＩＦＮ−γ製剤（商品名『オーガンマ１００』、大塚製薬株式会社販売）を添付の溶解液により溶解し、常法にしたがい、抗ＩＦＮ−γ抗体カラムにより添加剤を排除してヒトＩＦＮ−γを精製した。これを常法のバイオアッセイで活性を測定した後、０．１Ｍリン酸緩衝液で希釈して、濃度１０，０００ＩＵ／ｍｌの水溶液に調製した。

＜クリーム＞
モノステアリン酸ポリオキシエチレングリコール２質量部、自己乳化型モノステアリン酸グリセリン５質量部、ベヘニルアルコール３質量部、エイコサテトラエン酸２質量部、流動パラフィン５質量部、トリオクタン酸グリセリル１０質量部および防腐剤の適量を常法に従って加熱溶解し、トレハロース１質量部、Ｌ−アスコルビン酸２−グルコシド（株式会社林原生物化学研究所販売）２質量部、ヒアルロン酸ナトリウム０．１質量部、グリチルリチン酸ジカリウム０．１質量部、アロエベラエキス０．１質量部、メリッサエキス０．０５質量部、カミツレエキス０．０５質量部、糖転移ヘスペリジン（株式会社林原生物化学研究所販売）０．５質量部、藍のエタノール抽出物１質量部、ｄｌ−乳酸ナトリウム５質量部、１，３−ブチレングリコール５質量部および精製水６６質量部を加え、ホモゲナイザーにかけて乳化し、更に香料の適量を加えて撹拌混合しクリームを製造した。これに、実施例１で得たヒトＩＦＮ−γをクリーム１ｇ当たり１００ＩＵ混ぜ込み、本発明の光老化防止用クリームを得た。
本品は、ＩＦＮ−γの効果により、皮膚の光老化の治療又は予防に利用できるうえ、Ｌ−アスコルビン酸２−グルコシドのコラーゲン合成促進作用、グリチルリチン酸ジカリウム、アロエベラエキスなどの抗炎症作用、糖転移ヘスペリジンの血管拡張作用が発揮される。

＜日焼け止めクリーム＞
セトステアリルアルコール３．５質量部、スクワラン４０質量部、ミツロウ３質量部、還元ラノリン５質量部、２, ４−ジヒドロキシベンゾフェノン２質量部、エチレングリコールサリシレート２質量部、酸化チタン５質量部、１，３−ブチレングリコール６質量部、ペンチレングリコール２．５質量部、グリチルリチン酸ジカリウム０．１質量部、トレハロース２質量部、濃グリセリン５質量部、精製水１０質量部にアスコルビン酸２−グルコシド２質量部、水酸化ナトリウム（１０％水溶液）２．３３質量部、クエン酸ナトリウム（１０％水溶液）１質量部を溶解した溶液１５．６３質量部、精製水３７．６２質量部からなるクリームを常法により調製した。乳化は、ホモミキサーを使用して、加熱しながら４０００ｒｐｍで５分間撹拌し、その後、撹拌しながら冷却してクリームを調製した。これに、実施例１で得たヒトＩＦＮ−γをクリーム１ｇ当たり１，０００ＩＵ混ぜ込み、本発明の光老化防止用日焼け止めクリームを得た。
本品は、ＩＦＮ−γの効果により、皮膚の光老化治療又は予防に利用できるうえ、グリチルリチン酸ジカリウムの抗炎症作用、アスコルビン酸２−グルコシドのコラーゲン生産促進作用などが発揮される。また、紫外線照射される前に皮膚に適量を塗布して使用されれば、エチレングリコールサリシレートの中波長紫外線吸収作用、酸化チタンの紫外線遮断作用により、皮膚に照射される紫外線量が低減するので、皮膚の光老化の防止及び日焼け防止に有利に利用できる。

＜ハンドクリーム＞
トレハロース１０質量部、尿素２質量部、ポリオキシエチレン（６０）イソステアリン酸グリセリド２．５質量部、ステアリン酸モノグリセリド１．５質量部、セタノール４質量部、ワセリン２質量部、流動パラフィン１０質量部、パラオキシケイ皮酸２−エチルヘキシル−４−テトラ−ブチル−４−メトキシベンゾイルメタン０．０１質量部、酢酸ｄｌ−α−トコフェロール０．２質量部、ビタミンＤ０．１質量部に精製水を適量加えて、常法により１００質量部のハンドクリームを調製した。これに、実施例１で得たヒトＩＦＮ−γをクリーム１ｇ当たり１００ＩＵ混ぜ込み、本発明の光老化防止用ハンドクリームを得た。
本品は、ＩＦＮ−γの効果により、皮膚の光老化の治療又は予防に利用することができるうえに、酢酸ｄｌ−α−トコフェロールの血行促進作用及び抗炎症作用が発揮される。

＜乳液＞
ステアリン酸２．５質量部、セタノール１．５質量部、ワセリン５質量部、流動パラフィン１０質量部、ポリオキシエチレンオレエート２質量部、グリチルリチン酸ジカリウム０．２質量部、ポリエチレングリコール（１５００）３質量部、Ｌ−アスコルビン酸エチル３質量部、藍の水抽出物３質量部、アルブチン２質量部、糖転移ルチン（株式会社林原生物化学研究所販売）１質量部、トリエタノールアミン１質量部、トレハロース１質量部、精製水６６質量部、プロピルパラベン０．１質量部を混合し、水酸化カリウムでｐＨを６．７に調節した後、更に適量の香料を加えて、常法により、乳液を製造した。これに、実施例１で得たヒトＩＦＮ−γを乳液１ｍｌ当たり１００ＩＵ加え、本発明の光老化防止用乳液を得た。
本品は、ＩＦＮ−γの効果により、皮膚の光老化の治療又は予防に使用できるうえに、藍の水抽出物及びグリチルリチン酸ジカリウムの抗炎症作用、アスコルビン酸エチルのコラーゲン生産促進作用、アルブチンの美白作用が発揮される。

＜乳液＞
ステアリン酸２．５質量部、セタノール１．５質量部、ワセリン５質量部、流動パラフィン１０質量部、ポリオキシエチレン（１０）レエート２質量部、プロピルパラベン０．１質量部、酢酸ｄｌ−α−トコフェロール０．５質量部、香料０．２質量部、ポリエチレングリコール（１５００）３質量部、トリエタノールアミン１質量部、Ｌ−アスコルビン酸２−グルコシド（株式会社林原生物化学研究所販売）２質量部、トレハロース１質量部、脱イオン水を適量加え、常法により１００質量部の乳液を調製した。これに、実施例１で得たヒトＩＦＮ−γを乳液１ｍｌ当たり１００ＩＵ混ぜ込み、本発明の光老化防止用乳液を得た。
本品は、ＩＦＮ−γの効果により、皮膚の光老化の治療又は予防に有利に利用できるうえに、酢酸ｄｌ−α−トコフェロールの血行促進作用及びＬ−アスコルビン酸２−グルコシドのコラーゲン合成促進作用が発揮される。

＜化粧水＞
グリチルリチン酸ジカリウム０．２質量部、クエン酸０．１質量部、クエン酸ナトリウム０．３質量部、トレハロース２質量部、エタノール５質量部、感光素２０１号０．０００１質量部、エチルパラベン０．１質量部、水を加えて総量を１００質量部とし、混合溶解し、化粧水を調製した。これに、実施例１で得たヒトＩＦＮ−γを化粧水１ｍｌ当たり１００ＩＵ混ぜ込み、本発明の光老化防止用化粧水を得た。
本品は、ＩＦＮ−γの効果により、皮膚の光老化の治療又は予防に利用できるうえに、グリチルリチン酸ジカリウムの抗炎症作用が発揮される。

＜美容液＞
テトラオレイン酸ポリオキシエチレンソルビトール０．５質量部、スクワラン１質量部、キサンタンガム０．３質量部、ヒドロキシエチルセルロース０．２質量部、トレハロース３質量部、ヒアルロン酸ナトリウム０．０５質量部、エデト酸２ナトリウム０．１質量部、藍の水抽出物０．５質量部、エチルパラベン０．１質量部、水を加えて総量を１００質量部とし、混合溶解し、常法により、美容液を調製した。これに、実施例１で得たヒトＩＦＮ−γを美容液１ｍｌ当たり１００ＩＵ混ぜ込み、本発明の老化防止用美容液を得た。
本品は、ＩＦＮ−γの効果により、皮膚の光老化の治療又は予防に利用できるうえに、藍の水抽出物の抗炎症作用が発揮される。

＜美容液＞
テトラオレイン酸ポリオキシエチレンソルビトール０．５質量部、スクワラン１質量部、キサンタンガム０．３質量部、ヒドロキシエチルセルロース０．２質量部、トレハロース３質量部、Ｌ−アスコルビン酸２質量部、ヒアルロン酸ナトリウム０．０５質量部、糖転移ルチン（株式会社林原生物化学研究所販売）、１質量部、糖転移ヘスペリジン（株式会社林原生物化学研究所販売）、１質量部、エデト酸２ナトリウム０．１質量部、エチルパラベン０．１質量部、水を加えて総量を１００質量部として混合溶解し、水酸化カリウムによりｐＨを約６．８に調製し、常法により、美容液を調製した。これに、実施例１で得たヒトＩＦＮ−γを美容液１ｍｌ当たり１００ＩＵ混ぜ込み、本発明の老化防止用美容液を得た。
本品は、ＩＦＮ−γの効果により、皮膚の光老化の治療又は予防に利用できるうえに、Ｌ−アスコルビン酸のコラーゲン生産促進作用及び糖転移ルチンと糖転移ヘスペリジンの血行促進作用が発揮される。

＜ローション＞
ヒアルロン酸ナトリウム（１％水溶液）２０質量部、ソルビトール液（６０％水溶液）２．１質量部、カンゾウエキス０．５質量部、カミツレエキス０．０５質量部、セージエキス１質量部、アロエ液汁末０．００１質量部、クエン酸０．０２質量部、クエン酸ナトリウム０．１８質量部、パラオキシ安息香酸メチル０．０５質量部に精製水を加えて、全量を１００質量部として、ローションを調製した。これに、実施例１で得たヒトＩＦＮ−γをローション１ｍｌ当たり１００ＩＵ混ぜ込み、本発明の光老化防止用ローションを得た。
本品は、ＩＦＮ−γの効果により、皮膚の光老化の治療又は予防に利用できるうえに、カンゾウエキスやカミツレエキスなどの抗炎症作用が発揮される。

叙述のとおり、本発明の光老化防止用皮膚外用剤は、紫外線照射によるコラーゲン線維の分解を抑制し、かつ、分解したコラーゲン線維の再合成を促進するので、皮膚の弾力性を保持することにより、皮膚の可塑化を抑制し、さらには、皮膚の過剰な新陳代謝を抑えることにより、皮膚の光老化を防止することができる。

紫外線非照射ＩＦＮ−γ非塗布群のへアレスマウスにつき、光学顕微鏡下で撮影した皮膚組織の断面の写真のデイスプレー上に表示した中間調画像である。 紫外線照射ＩＦＮ−γ非塗布群のへアレスマウスにつき、光学顕微鏡下で撮影した皮膚組織の断面の写真のデイスプレー上に表示した中間調画像である。 紫外線照射ＩＦＮ−γ塗布群のへアレスマウスにつき、光学顕微鏡下で撮影した皮膚組織の断面の写真のデイスプレー上に表示した中間調画像である。

符号の説明

１ 表皮層
２ 真皮層
３ 皮下組織層
４ 皮下嚢胞

Claims (2)

1. インターフェロン−γを有効成分として配合してなる光老化防止用皮膚外用剤。
2. インターフェロン−γの配合量が１ｇ当たり１００乃至１００，０００，０００ＩＵであることを特徴とする請求項１に記載の皮膚外用剤。
   

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