JP2006115826A - ナチュラルキラー細胞の増殖促進方法およびそれに用いる培養組成物 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】 本発明に係るナチュラルキラー細胞の増殖を促進する方法は、ナチュラルキラー細胞を含む細胞群を、CD56分子のリガンドを含む培地中で培養する工程を特徴とするものである。
Description
Rosenberg SA,Lotze MT,Muul LM,Leitman S,Chang AE,Ettinghausen SE,Matory YL,Skibber JM,Shiloni E,Vetto JT.,N Engl J Med.1985 Dec 5;313(23):1485−92. Takayama T,Sekine T,Makuuchi M,Yamasaki S,Kosuge T,Yamamoto J,Shimada K,Sakamoto M,Hirohashi S,Ohashi Y,Kakizoe T.,Lancet.2000 Sep 2;356(9232):802−7. Nestle FO,Alijagic S,Gilliet M,Sun Y,Grabbe S,Dummer R,Burg G,Schadendorf D.,Nat Med.1998 Mar;4(3):328−32. Rosenberg SA.,Semin Oncol.1986 Jun;13(2):200−6.
発明の一態様として、本発明は、ナチュラルキラー細胞を含む細胞群を培養する際に、CD56分子のリガンドの一つであるグリコサミノグリカン類を培地に添加することでナチュラルキラー細胞の増殖を顕著に促進する培養方法を提供するものである。
比較例として、ヘパリンを加えない条件で2週間培養したところ、NK細胞の比率は16.5%までしか増加せず、細胞数も16.6倍に留まった。
一方、CD56陽性T細胞は、末梢血リンパ球分画中に11.0%であり、ヘパリンを加えて培養した場合は32.5%(細胞数15.7倍)となり、ヘパリンを加えずに培養した場合は約44.7%(細胞数20.5倍)であった。
以上の結果から、ヘパリンはNK細胞の増殖を促進する作用を有するが、CD56陽性T細胞の増殖には逆に抑制的に機能する作用を有することが明らかとなった。
一方、末梢血リンパ球分画中に1.2%であったCD56陽性T細胞数は、グリコサミノグリカンを加えない条件で2週間培養することで、細胞数は420.8倍に増加し、その比率は約42.2%となった。一方、100μg/mLのコンドロイチン硫酸Aもしくはデルマタン硫酸存在下で2週間培養した場合も、CD56陽性T細胞の比率は各々36.9%および39.8%となり、また細胞数も各々培養開始時の458.3倍および521.8倍であり、CD56陽性T細胞数の増殖はグリコサミノグリカンを加えない場合とほぼ同程度であった。
以上の結果から、コンドロイチン硫酸Aもしくはデルマタン硫酸の添加によってNK細胞の増殖が選択的に促進されることが確認された。
以上の結果から、HuH2細胞との共培養によりNK細胞の増殖が選択的に促進されること、そしてそのNK細胞の増殖促進作用がHuH2細胞の発現するグリコサミノグリカンを介した作用であることが確認された。
Claims (10)
- ナチュラルキラー細胞の増殖を促進させる方法であって、
ナチュラルキラー細胞を含む細胞群を、CD56分子のリガンドを含む培地中で培養する工程を含む、方法。 - 前記細胞群が、血液から得た単核球細胞またはリンパ球分画である、請求項1に記載の方法。
- 前記培地が、さらにインターロイキン2を含む、請求項1または2に記載の方法。
- 前記CD56分子のリガンドが、グリコサミノグリカンである、請求項1から3のいずれか1項に記載の方法。
- 前記CD56分子のリガンドが、グリコサミノグリカンを構成成分とするプロテオグリカンである、請求項1から3のいずれか1項に記載の方法。
- 前記CD56分子のリガンドが、グリコサミノグリカンを構成成分とするプロテオグリカンを発現する細胞である、請求項1から3のいずれか1項に記載の方法。
- 前記グリコサミノグリカンを構成成分とするプロテオグリカンを発現する細胞が、ヘパリチナーゼ処理またはコンドロイチナーゼ処理によって、そのナチュラルキラー細胞の増殖促進能が低下する細胞である、請求項6に記載の方法。
- 前記グリコサミノグリカンが、ヘパリン、コンドロイチン硫酸、ヘパラン硫酸、デルマタン硫酸からなる群より選択される一以上の物質である、請求項4から7のいずれか1項に記載の方法。
- 以下(a)〜(c)の少なくとも一つを含むナチュラルキラー細胞の増殖を促進させる培養組成物:
(a)グリコサミノグリカン。
(b)グリコサミノグリカンを構成成分とするプロテオグリカン。
(c)グリコサミノグリカンを構成成分とするプロテオグリカンを発現する細胞。 - 前記グリコサミノグリカンが、ヘパリン、コンドロイチン硫酸、ヘパラン硫酸、デルマタン硫酸からなる群より選択される一以上の物質である、請求項9に記載の培養組成物。
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