JP2006067889A5 - - Google Patents

Description

本発明の目的は、特に上記二本鎖核酸の生物学的環境下での不安定性を改善し、さらに動物細胞への効率的な取り込みを可能にする手段を提供することにある。二本鎖核酸のいずれか一方のオリゴ−もしくはポリヌクレオチドの末端にポリ（エチレンオキシド）鎖を有するセグメントを共有結合するように修飾し、こうして修飾した二本鎖核酸のコンジュゲートとポリカオチン化合物を水性媒体中で混合すると、自動的に会合してポリイオンコンプレックス（ＰＩＣ）ミセルを形成し、こうして得られたＰＩＣによって二本鎖核酸が生物学的環境下で安定化され、しかも動物細胞への取り込みも効率が高まることが見出された。

本発明のＰＩＣは水性媒体（例えば、生理食塩液、リン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ））中でミセルを形成しうるものであれば、成分Ａと成分Ｂの含有率は限定されるものでないが、成分Ａの二本鎖核酸におけるホスフェートに由来するアニオンと成分Ｂのポリカオチン化合物におけるアミン残基に由来するカオチンの比が０．５／１〜１／１０であるＰＩＣが好ましい態様のものとして提供される。ＰＩＣミセル全体が少しポジティブに荷電していると、該ミセルの動物細胞への取り込みの効率が高まることがよくある。

より具体的な態様の成分Ａとしては、上記の一般式（１）における−ＰＥＯが式（２）：
−（ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ）_n−Ｌ₃−Ｘ （２）
で表され、ここで、Ｌ₃は単結合、カルボニルもしくはＬ₁について定義したのと同様の連結基を表し、
Ｘは水素原子、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、ヒドロキシ−Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、カルボキシ−Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、アセタールもしくはケタール化ホルミル−Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、アミノ−Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、マレイミド−Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、カルボニルイミノフェニル、アリルおよびこれらの官能基を介してリガントが結合した部分からなる群より選ばれ、そして ｎが５〜５００の整数である、化合物を挙げることができる。

Claims (16)

1. （Ａ） 相補性を有する２種のオリゴ−もしくはポリヌクレオチドからなる二本鎖核酸であって、少なくとも１種のオリゴ−もしくはポリヌクレオチドの末端にポリ（エチレンオキシド）鎖を有するセグメントが共有結合している二本鎖核酸、および
   （Ｂ） ポリアミンを含んでなるポリカチオン化合物
   を含んでなるポリイオンコンプレックス。
2. ポリアミンを含んでなるポリカチオン化合物が、分子間で少なくとも１個のジスルフィド結合により架橋している請求項１記載のポリイオンコンプレックス。
3. 二本鎖核酸におけるホスフェートに由来するアニオンとポリアミンを含んでなるポリカチオン化合物におけるアミン残基に由来するカオチンの比が０．５／１〜１／１０である請求項１記載のポリイオンコンプレックス。
4. ポリイオンコンプレックスが水性 媒体中でミセルの形態で存在する請求項１記載のポリイオンコンプレックス。
5. 二本鎖核酸が、ＲＮＡ／ＲＮＡ、ＤＮＡ／ＲＮＡおよびＤＮＡ／ＤＮＡからなる群より選ばれる対合物である請求項１記載のポリイオンコンプレックス。
6. 二本鎖核酸がｓｉＲＮＡである請求項５記載のポリイオンコンプレックス。
7. オリゴ−もしくはポリヌクレオチドの末端にポリ（エチレンオキシド）鎖を有するセグメントが共有結合した化合物が、一般式（１）：
   ＮＴ−Ｌ₁−Ｌ₂−ＰＥＯ （１）
   （式中、ＮＴはリボースの３'もしくは５'末端においてリン酸エステル結合を介してＬ₁−Ｌ₂−ＰＥＯに結合したオリゴ−もしくはポリヌクレオチド残基を表し、
   Ｌ₁はＮＨ、酸素原子もしくは硫黄原子により１もしくは２以上の箇所で中断されていてもよい総原子数３〜３０のアルキレン基を表し、
   Ｌ₂は生理学的条件下で開裂しうる結合を有する連結基を表し、
   ＰＥＯはＬ₂の未結合末端に連結基を場合により介して、水素原子、アルキル基、アラルキル基、官能基もしくはリガンド残基を担持するポリ（エチレンオキシド）基を表す。）
   で表される請求項１記載のポリイオンコンプレックス。
8. −ＰＥＯが式（２）
   −（ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ）_n−Ｌ₃−Ｘ （２）
   （式中、Ｌ₃は単結合、カルボニルもしくはＬ₁について定義したのと同義の連結基を表し、 Ｘは水素原子、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、ヒドロキシ−Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、カルボキシ−Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、アセタールもしくはケタール化ホルミル−Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、アミノ−Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、マレイミド−Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、カルボニルイミノフェニル、アリルおよびこれらの官能基を介してリガンドが結合した部分からなる群より選ばれ、そして
   ｎが５〜５００の整数である）
   で表される請求項７記載のポリイオンコンプレックス。
9. オリゴ−もしくはポリヌクレオチド残基が１０〜５０のヌクレオチドからなるＲＮＡまたはＤＮＡに由来する請求項７記載のポリイオンコンプレックス。
10. ポリアミンを含んでなるポリカチオン化合物が、１または複数のＳＨ基が側鎖に導入されたポリリジン、ポリリジン、ポリエチレンイミン、ポリメタクリル酸ジメチルアミノエチル、オリゴアルギニン、ｔａｔおよびＫＡＬＡからなる群より選ばれる請求項１記載のポリイオンコンプレックス。
11. 一般式（１）
    ＮＴ−Ｌ₁−Ｌ₂−ＰＥＯ （１）
    （式中、ＮＴはリボースの３'もしくは５'末端においてリン酸エステル結合を介してＬ₁−Ｌ₂−ＰＥＯに結合したオリゴ−もしくはポリヌクレオチド残基を表し、
    Ｌ₁は酸素原子もしくは硫黄原子により１もしくは２以上の箇所で中断されていてもよい総原子数３〜３０のアルキレン基を表し、
    Ｌ₂は生理学的条件下で開裂しうる結合を有する連結基を表し、
    ＰＥＯはＬ₂の未結合末端に連結基を場合により介して、水素原子、アルキル基、アラルキル基、官能基もしくはリガンド残基を担持するポリ（エチレンオキシド）基を表す。）
    で表される化合物のＮＴ部に相補性のオリゴ−もしくはポリヌクレオチドがハイブリダイズして二本鎖核酸部を形成している核酸コンジュゲート。
12. −ＰＥＯが式（２）
    −（ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ）_n−Ｌ₃−Ｘ （２）
    （式中、Ｌ₃は単結合、カルボニルもしくはＬ₁について定義したのと同義の連結基を表し、
    Ｘは水素原子、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、ヒドロキシ−Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、カルボキシ−Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、アセタールもしくはケタール化ホルミル−Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、アミノ−Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、マレイミド−Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、およびカルボニルイミノフェニル基ならびにこれらの基における官能基を介してリガンドが結合した部分からなる群より選ばれ、
    ｎが５〜５００の整数である）
    で表される請求項１１記載の核酸コンジュゲート。
13. ＮＴが１５〜３０のリボヌクレオチドもしくはデオキシリボヌクレオチドからなる核酸からなる群より選ばれ、該ＮＴ部に相補性のオリゴヌクレオチドが１５〜３０のリボヌクレオチドであり、そしてＬ₂が−Ｏ（ＣＨ₂）_a−ＯＣＯ（ＣＨ₂）_bＳ（ＣＨ₂）_C−または−Ｏ（ＣＨ₂）_a−Ｓ−Ｓ（ＣＨ₂）_C−の連結基であって、ａ、ｂおよびｃは、相互に独立して２〜８の整数である請求項１１または１２記載の核酸コンジュゲート。
14. ＮＴとそれに相補性のオリゴヌクレオチドからなる二本鎖核酸部分がｓｉＲＮＡに由来する請求項１１〜１３のいずれか１記載の核酸コンジュゲート。
15. 式（２）におけるＸが、リガンドが結合した部分を有し、該リガンドが細胞表面に結合しうる糖もしくはペプチドである、請求項１２〜１４のいずれか１記載の核酸コンジュゲート。
16. リガンドがラクトースである、請求項１４記載の核酸コンジュゲート。